蛋白質核酸酵素:サイトカイン-受容体間の新しい分子認識機構

サイトカイン-受容体間の新しい分子認識機構
顆粒球コロニー刺激因子とその受容体の複合体のX線 結晶構造解析 一
有富正治 ・国島直樹 ・森川臥右
顆粒球コロニー刺激因子 （G-CSF）は，白血球の一種である好中球の分化増殖を誘導す
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るサイ トカインである．G-CSFと その受容体間の分子認識機構を明らかにするため，複合
体の三次元構造をX線 結晶構造解析によって決定した．その結果，G-CSFは ，L型 に配置
された受容体の2つ の ドメインに挟まれる形で1:1の 複合体を形成し，さらに2つの1:1
の複合体が会合して2：2の 複合体を形成することが判明した．したがって，G-CSFと そ
の受容体においては，クラス1の サイトカンで一般的と考えられてきた1:2複 合体とは異
なり，2:2複 合体の形成によってシグナルが伝達されると推測される．
【顆粒 球 コ ロ ニ ー 刺 激 因 子 （G-CSF） 】 【サ イ トカ イ ン 】 【
受 容体 】
【
分 子認 識 】 【X線結 晶構 造解析 】
は じめ に
体 の 中 を流 れ る血 液 は， 赤 血 球 ， 白 血 球 ， 血
ら 白血 球 の 一 つ で あ る好 中 球 へ ， それ ぞ れ 分 化 増 殖 を
小 板 と い っ た 血 液 細 胞 を含 ん で い る． これ らの細 胞 は ，
促 進 す る． し か し， 造 血 幹 細 胞 か ら末 梢 の血 液 細 胞 に
造 血 幹 細 胞 ” と よ ば れ る血 液 細 胞 の 元 の 細 胞 か ら，
“
至 る分 化 増 殖 の 過 程 や ， そ こ に 関 与 す る サ イ トカ イ ン
種 々 の 前 駆 細 胞 とい う途 中段 階 の 細 胞 を 経 て ， 分 化 ＊1
の種 類 と作 用 は 非 常 に 複 雑 で あ る ． す なわ ち，1種 類 の
し増 殖 し た も の で あ る ． この 造 血 幹 細 胞 は お も に 骨 髄
サ イ トカ イ ンが 複 数 種 の細 胞 に 働 きか け， 異 な っ た 作
に存 在 し て お り， こ こ で 自分 自 身 と同 じ造 血 幹 細 胞 を
用 を 発 揮 した り， 複 数 種 の サ イ トカ イ ンが 同 じ働 き を
複 製 す る と考 え ら れ て い る． つ ま り生 体 は， 造 血 幹 細
し た り， 実 に複 雑 な ネ ッ トワー ク を形 成 して い る1)．サ
胞 の 分 化 増 殖 と自 己 複 製 とい う2つ の性 質 に よって ， 血
イ トカ イ ン は ， 標 的 細 胞 上 に発 現 され て い る そ れ ぞ れ
液 細 胞 の 恒 常 性 を維 持 す る こ とが で き る ． この 血 液 細
に特 異 的 な受 容 体 と よ ば れ る膜 蛋 白 質 に 結 合 す る こ と
胞 の 恒 常 性 維 持 に ， さ ま ざ ま な サ イ トカ イ ン が 関 与 し
で 生 理 活 性 を発 現 す る． つ ま り， 受 容 体 の 細 胞 外 領 域
て い る ． サ イ トカ イ ン と は， 細 胞 ど う しが 互 い に 影 響
に サ イ トカ イ ン分 子 が 結 合 す る と， そ の 細 胞 内 領 域 に
を 及 ぼ しあ うた め に分 泌 され る蛋 白 質 の 総 称 で あ る． た
も何 ら か の 変 化 が 生 じ， そ の 情 報 が さ ら に細 胞 内 の 分
と え ば， サ イ トカ イ ン の 一 つ で あ る エ リス ロ ポ エ チ ン
子 に 伝 達 さ れ る． そ の 情 報 は ， 最 終 的 に核 内 の 遺 伝 子
（EPO） は ， あ る種 の 前 駆 細 胞 か ら赤 血 球 へ ， そ して顆
まで 伝 わ り， 分 化 増 殖 と い っ た 生 理 活 性 を誘 導 す る．
粒 球 コ ロ ニ ー 刺 激 因 子 （G-CSF）
Masaharu Aritomi＊
cular Engineering
富 士 市 鮫 島2-1）
Shizuoka
A
New
，Naoki Research
［Present
は，別 の前駆 細胞 か
Kunishima，Kosuke Morikawa.，
サ イ トカ イ ン お よ び そ の 受 容 体 は ， と くに そ の受 容
生 物 分 子 工 学 研 究 所
Institute，Furuedai,Suita,Osaka,565-0874，Japan］
Address：Central
Technology
Laboratory，Asahi
＊現
（〒565-0874吹
田 市 古 江 台6-2-3）
：旭 化 成 工 業 ㈱ 中 央 技 術 研 究 所
Chemical
Industry
［Biomole（〒416-8501
Co． ，Ltd． ，Samejima，Fuji-city，
416-8501,Japan]E-mail:[email protected]
Cytokine-receptor
Recognition
Scheme
Revealed
by
The
Complex
Structure
of
G-CSF
and
Its Receptor
1713
20
蛋白質
核酸
酵素
Vol.45No.10(2000)
体 側 の ア ミノ 酸 配 列 の 相 同 性
や 三 次 元 構 造 の 類 似 性 か ら，
い くつ か の ク ラ ス に 分 類 さ れ
る ． ク ラ ス1の
サ イ トカ イ ン
受 容 体 フ ァ ミ リー は ， 細 胞 外
領 域 に トリプ トフ ァ ン-セ リンX-ト
リプ トフ ァ ン-セ リン （X
は任 意 の ア ミ ノ 酸 残 基 ） と い
う特 徴 的 な ア ミノ酸 配 列
（WSXWSモ
チー フ）と， 完 全
に保 存 さ れ た4つ
の シス テ イ
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ン残 基 を 含 む領 域 を共 通 し て
もつ （
図1） ． こ の 領 域 は， サ
イ トカ イ ン 受 容 体 相 同 領 域
（CRH） と よ ば れ る． ク ラ ス1
の サ イ トカ イ ン は ， イ ン タ ー
図1 ロ イ キ ン （IL）や コ ロ ニ ー 刺
受 容 体 の ア ミノ酸 一 次 配 列 に基 づ い て 予 想 され る ドメ イ ン構 造 を模 式 的 に示 す ． サ イ トカ イ ン
激 因 子 な ど， お もに 造 血 系 や
免疫 系の細 胞 に作 用 す るサイ
トカ イ ン か ら構 成 され る． こ
ク ラ ス1の
サ イ トカ イ ン 受 容 体 フ ァ ミ リー の ドメ イ ン 構 造
受 容 体 相 同 領 域 （CRH）は， さ ら に2つ
フ ァ ミ リー で保 存 され て い る4つ
お よ びWSXWSモ
の ドメ イ ン に分 け ら れ， そ れ ぞ れ ， サ イ トカ イ ン 受 容 体
の シ ス テ イ ン残 基 （ジ ス ル フ ィ ド結 合 ：2本 の 二 重 線 で 示 す ）
チ ー フ （1本の 太 線 で 示 す ）を 共 通 して もつ ．G-CSF受
2つ の ドメ イ ンをBNド
メ イ ン，BCド
容 体 に お い て， こ れ ら
メ イ ン と名 づ け た ．
れ ら の サ イ トカ イ ン の ア ミ ノ
酸配列 にお ける相 同性 は ほ と
ん ど認 め られ な い． しか し ， 三 次 元 構 造 解 析 の研 究 結
果 か ら， そ れ ら は共 通 して4本
総 説3,4)を 参 照 さ れ た い ．
α ヘ リ ッ ク スバ ン ドル
構 造 を も つ こ とが 明 ら か に され て お り， 進 化 的 に類 縁
1． 受容体によるサイ トカインの 認識
の 蛋 白 質 で あ る と考 え られ る． この 構 造 的 特 徴 を もつ
こ と か らヘ リ カ ル サ イ トカ イ ン と も よ ば れ る． ク ラ ス
サ イ トカ イ ン とそ の 受 容 体 の 分 子 認 識 機 構 の 研 究 と
2に は ， イ ンタ ー フ ェ ロ ンお よび イ ン ター フ ェ ロ ン受 容
して は ， 成 長 因 子 （GH） とそ の 受 容 体 の細 胞 外 領 域 と
体 を含 む 一 群 が 含 まれ る ． ク ラ ス2の
の 複 合 体 のX線
サ イ トカ イ ン も
お も に α ヘ リ ッ ク ス か ら構 成 さ れ て お り， ヘ リカ ル サ
イ トカ イ ン の 仲 間 で あ る が ， α ヘ リ ッ クス の 空 間 的 な
結 晶 構 造 解 析 が 有 名 で あ る5）
． この研 究
か ら， 受 容 体 の細 胞 外 領 域 が ，4本
ドか ら構 成 さ れ る2枚
と3本 の β ス トラ ン
の β シ ー ト を サ ン ドイ ッ チ状 に
配 置 は 少 し 異 な る． ま た ， そ の ほ か の ク ラ ス と し て ，
重 ね た β サ ン ドイ ッ チ 構 造 の ドメ イ ン を2つ
TNF／NGF受
れ らがL型
容 体 フ ァ ミ リー や チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ 受 容
体 フ ァ ミ リー な どが 存 在 す る ．
本 稿 で は， お も に 血 液 細 胞 に 関 与 す る サ イ トカ イ ン
が 帰 属 され る ク ラ ス1の
サ イ トカ イ ン とそ の 受 容 体 の
もち ， そ
に 連 結 す る よ う に配 置 して い る こ と と，4本
α ヘ リ ッ ク スバ ン ドル 構 造 を もつGHの1分
の 受 容 体 が2分
子 をL型
子 で挟 む よ うに 会 合 し，1：2複
形 成 し て い る こ と （図2a）
合体 を
な どが明 らかに な った． ま
分 子 認 識 機 構 に つ い て ， 焦 点 を絞 り記 述 す る ． し た が
た ， この1：2複
っ て ， 以 降 の 記 述 に お い て ，“サ イ トカ イ ン ” は す べ て
順 番 も明 らか に され た ． さ ら に，EPOと
ク ラ ス1の
の 複 合 体 の 結 晶 構 造 解 析 の 結 果 か ら も， や は り1：2複
サ イ トカ イ ン を意 味 す る ． ク ラ ス 分 け の詳
細 や ， 各 ク ラ ス の構 造 解 析 の報 告 につ い て は， 成 書2)や
＊1 幹 細 胞
1714
合体 の生理 学 的重 要性や複 合体 形 成の
その受 容体 と
合 体 形 成 とい う類 似 した 認 識 機 構 の 存 在 が 示 され た （
図
（また は受 精 卵 ） が ， 細胞 分 裂 を重 ね て 特 殊 な 機 能 を も つ さ ま ざ まな 細 胞 に な る こ と．
Ⅱ
21
サイ トカイン-受容体間の新 しい分子認識機構
分 子 か ら構 成 さ れ る が ， そ の 他 の サ イ トカ イ ン の 受 容
体 で は，2種 類 以 上 の 異 な る 分 子 か ら構 成 され る （
図1） ．
また ，gp130の
よ う に複 数 の サ イ トカイ ンの受 容 体 と し
て 共 有 され る 場 合 もあ る ． し た が っ て ， これ らの 受 容
体 に 関 して は ，GHやEPOの
場 合 の よ う な1：2複
合
体 モ デ ル で は 説 明 で き な い． また ， 生 化 学 的 な 実 験 か
ら，G-CSFと
そ の受 容 体 の 複 合 体 は，2：27） あ る い は
4：48）の 化 学 量 論 比 で形 成 され る こ とが報 告 され てお り，
さ ら に，gp130を
6：IL-6-R-α
含 むIL-6と
そ の受 容 体 に お いて ，IL-
：gp130＝2：2：2の
三 者 複 合体 の存 在
も示 唆 さ れ て い る ． これ ら の 詳 細 に つ い て は， 筆 者 ら
の 総 説9）を 参 照 し て い た だ き た い ．
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以上 の ような生 化 学的 な実 験 的結 果が あ るに もかか
わ らず ，GHと
そ の受 容 体 に よ る三 次 元構 造 解 析 が，
"目 に 見 え る” わ か りや す い結 果 で あ るた め に
，1：2複
合 体 が サ イ トカ イ ン と そ の 受 容 体 の 分 子 認 識 様 式 と し
て 一 般 に 受 け 入 れ ら れ て い る の で あ る． な お ， 受 容 体
分 子 に 認 識 さ れ た の ち ， そ の シ グ ナ ル が どの よ う に し
て細 胞 内 に伝 わ る か につ い て は ， 本 稿 で はふれ な い ． こ
の 問 題 に 関 し て は ， 成 書10）や 総 説11）を 参 照 さ れ た い ．
図2
GH：GH受
容 体
（a） お よ びEPO:EPO受
容 体
（b）の
複 合 体 の 結 晶 構 造
そ れ ぞ れ の 構 造 座 標 を プ ロ テ イ ンデ ー タ バ ン ク
（http：//www.rcsb.
org／pdb）
の フ リー ソ フ トウ ェ
か ら 入 手 し，MsviewerLite（MSI社
ア ，http：//www．msi．com）
イ トカ イ ン 分 子
容 体 お よ びEOP受
（GHお
を 用 い て リボ ン 図 を 作 成 し た ， 赤 が サ
よ びEPO）
， 青 および水 色が 受 容 体
（GH受
容 体 ） を 示 す ．
，1986年
に ク ロー ニ ング され た 約180ア
ミ
化 ， 増 殖 を 促 進 す る の で ， こ れ らの 血 液 細 胞 が 減 少 し
た 患 者 に投 与 す る 医 薬 品 と し て す で に 実 用 化 され て い
2b）6）
． これ ら の研 究 か ら， 「サ イ トカ イ ン1分 子 の結 合
に伴 っ た 受 容 体 分 子 の2量
G-CSFは
ノ酸 残 基 か らな るサ イ トカ イ ン で あ る12,13)．
好 中 球 の分
体 化 が ， 細 胞 外 か ら細 胞 内
る ． この 分 子 は ，X線
結 晶 構 造 解 析 に よ り， 他 の サ イ
トカ イ ン と同 様 に4本
α ヘ リ ッ ク スバ ン ドル 構 造 を も
つ こ とが 明 ら か にな っ て い る14)．G-CSF受
容 体 は， 分
へ の シ グ ナ ル 伝 達 の 本 質 で あ る 」 とい う概 念 が ， 広 く
子 量 約90Kの
受 け 入 れ られ る よ う に な っ た ＊2．した が っ て， さ ま ざ ま
免 疫 グ ロ ブ リ ン様 （lg様 ） ド メ イ ン ，CRH領
な文 献 に お い て， サ イ トカ イ ン 関 連 の シ グ ナ ル 伝 達 の
の フ ィ プ ロ ネ ク チ ン タ イ プⅢ
第 一 段 階 と し て ，l:2複
か ら構 成 され る （
図1）I5)．CRH領
合 体 形 成 を模 式 的 に 記 載 す る
膜 蛋 白質 で ， 細 胞 外 領 域 は，N末
様 （FNⅢ
端か ら
域 ，3つ
様 ） ドメ イ ン
域 は， さ らにBNと
場 合 が 非 常 に 多 い ． しか し， 実際 ， こ の モ デ ル は す べ
BCの2つ
て の サ イ トカ イ ン に 共 通 す るの で あ ろ うか ． た とえ ば ，
ドメ イ ン単 独 でG-CSFと
GH，EPOそ
メ イ ン は サ イ トカ イ ン 受 容 体 フ ァ ミ リー で 保 存 され て
＊2
ク ラ ス2の
してG-CSFの
受 容 体 は，1種 類 の 蛋 白 質
の ドメ イ ンに 分 け る こ とが で き， そ れ ぞ れ の
サ イ トカ イ ン と そ の 受 容 体 に お い て は ， イ ン タ ー フ ェ ロ ン γ と そ の 受 容 体 のX線
M．R．etal.：Nature，376,230-235（1995）
］． イ ン タ ー フ ェ ロ ン γ 受 容 体 は ， α と β の2種
結 合 す る能 力 を もつ ．BNド
結 晶 構 造 解 析 が な され てい る
受 容 体 の 細 胞 外 ド メ イ ン と イ ン タ ー フ ェ ロ ン γ の 複 合 体 で あ る ． イ ン タ ー フ ェ ロ ン γ は も と も と2量
と の 複 合 体 の 分 子 認 識 は2：2で
合 体 のX線
あ る ． ま た ， 他 の ク ラ ス の サ イ ト カ イ ン に 分 類 さ れ るTNFと
結 晶 構 造 解 析 も報 告 さ れ て い る
［Banner，D．W．et al.：Cell，73，431-445（1993）
し て お り， 受 容 体 と の 複 合 体 の 分 子 認 識 も3：3で
［Walter,
類 の 受 容 体 が あ るが ， この 解 析 は α
体 で 存 在 し て お り， α 受 容 体
そ の 受 容 体 の 細 胞 外 ドメ イ ン との 複
］．TNFは
も と も と3量
体 で 存 在
あ る．
1715
Ⅲ
22
蛋 白 質 核 酸 酵素 Vol．45No.10（2000）
とその 受 容 体 の1：2複
合体 と
は異 な る様 式で 認識 され る こ
と， つ ま り， 結 晶 中 に お い て
も， 生 化 学 的 な 実 験 か ら示 唆
さ れ て い た2：2複
合 体 と して
存 在 す る こ とが 明 ら か に な っ
た16)．以 下 の 節 で ， この 研 究
に よ っ て 明 ら か に さ れ たGCSFと
そ の 受 容 体 の分 子 認 識
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機 構 に つ い て 記 述 す る．
X線 結 晶 構 造 解 析 に よ っ て
得 ら れ たG-CSFとgs-CRH
との 複 合 体 の 三 次 元 構 造 を 図
3に 示 す ． まずBNお
よびBC
ドメ イ ン は ， そ れ ぞ れ7本
の
β ス トラ ン ドか ら構 成 され る β
サ ン ドイ ッチ 構 造 を とっ て い
る． そ し て ，gs-CRHは
の2つ
，そ
の β サ ン ドイ ッチ 構 造
が， 全体 として折 れ曲 が るよ
図3
G-CSF：gs-CRH複
G-CSFとgs-CRF複
う につ な が っ てL字
合 体 の結 晶 構造
合体 の 結 晶 構 造解 析 か ら求 め ら れ た三 次元 構 造 を， （a）は 偽2回
た 方 向 か ら見 た状 態 ， （b）は偽2回
示 す ． 本 図 はQUANTA（MSI社
軸に沿っ
軸 に 垂 直 な 方 向 か ら 見 た 状 態 で ， そ れ ぞ れ リボ ンモ デ ル で
）を 用 い て 描 い た ． （c）は， 各 ドメ イ ン の配 置 を模 式 的 に 示 す ．
な お ， 今 回 の 構 造 解 析 に は 含 まれ て い な いIg様
す ． ［文 献16（Nature，401.713-717，1999）
ドメ イ ン とFNⅢ
様 ドメ イ ンの 一 部 を点 線 で示
型 の構 造
を形 成 して い る．G-CSFは4
本 α ヘ リ ック スバ ン ドル構 造
を とっ て お り， 受 容 体 の 結 合
してい ない遊 離型 とほぼ同一
よ り許 可 を得 て 転 載 ］
の構 造 を もつ． そ して，BNと
BCド
い る4つ
の シ ス テ イ ン 残 基 を 含 み ，BCド
wSXWSモ
CRH領
チ ー フ を 含 む ． ま た ，G-CSF受
域 （
以 下gs-CRHと
メ インは
容 体 の
記 す ）は， シ グ ナ ル 伝 達 に
合 して1：1の
主結 合領 域
メ イ ン に挟 まれ る形 で 会
複 合 体 を 形 成 して い る ． この会 合 領 域 を
（メ ジ ャ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス ） と名 づ け た
（図4， 赤 色 部 分 ）． さ ら に ，2つ の1：1複
合 体 が， 偽
必 要 な最 小 の 単 位 で あ る こ とが 示 されて い る15)．筆 者 ら
2回 軸 ＊3で関 係 づ け ら れ る よ う に 会 合 し，2：2複
は ， このgs-CRHに
を形 成 して い る． こ の 会 合 領 域 を 副 結 合 領 域
つ い て ， 昆 虫 細 胞 に よ る組 換 え体
の生 産 系 を構 築 し， 得 られたgs-CRHと
組 換 えG-CSF
ー イ ン タ ー フ ェ イ ス ）と名 づ けた （図4
， 青 色 部 分 ）． マ
との複 合 体 を調 製 した ． さ らに この 複 合 体 を 結 晶 化 し，
イナ ー イ ン ター フ ェ イ ス で は，一 方 の1：1複
X線
CSFのN末
結 晶 構 造 解 析 に よって，2．8?分 解 能 で 三 次 元 構 造
を決 定 した ． その 結 果 ，G-CSFの
＊3
180度 の 回転 操 作 に よ り元 の図 形 と重 な る対 称 軸 の こ とを2回
ある．
1716
場 合 は，GHやEPO
端 領 域 と， 別 の1：1複
ン に お け る β ス トラ ン ドの1つ
軸 と い う。 偽2回
軸 は ，180度
合体
（マ イ ナ
合 体 のG-
合 体 のBCド
メイ
が 分 子 間 β シ ー トを 形
回転 した 場 合 に大 部 分 が 重 な る軸 で
Ⅳ
サイ トカインー受容体間の新 しい分子認識機構
23
体 の 構 造 解 析 に お い て は認 め られ ず ， 今 回 初 め て 観 測
され た もの で あ る． また ，2：2複
っ て ， 約10?の
合 体 の偽2回
軸 に沿
直 径 を も つ チ ャ ン ネ ル が あ り， そ の チ
ャ ン ネ ル の 内 部 に は ， 水 分 子 が 水 素 結 合 ネ ッ ト ワー ク
を形成 す る よ うに多数存 在 す る．結 晶 内で は， メ ジ ャ
ー
， マ イ ナ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス 以 外 に も分 子 が 接 触 す
る領 域 が 存 在 す る が ， これ ら2つ
は，MOL1とMOL2の
のイ ンター フェ イス
両 方 に お い て共 通 に存 在 して お
り， 機 能 的 に 意 味 を も っ た 相 互 作 用 で あ る と推 定 され
Database Center for Life Science Online Service
る．
メ ジ ャー イ ン タ ー フ ェ イ ス は ，G-CSFの2つ
ッ クス と，BNとBCド
のヘ リ
メ イ ン に よっ て形 成 され るL型
の 角 の リ ン カ ー 領 域 に よ っ て 構 成 され る （
図4， 赤 色 部
分 ）． メ ジ ャ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス の 中 心 部 分 に は 水 素 結
合 の ネ ッ トワー クが 形 成 され て お り， た とえ ば，G-CSF
の グ ル タ ミ ン19は
，BNド
メ イ ンの チ ロ シ ン172とBC
ドメ イ ン の ア ル ギ ニ ン287の
両 方 と水 素 結 合 して い る．
また ， イ ン タ ー フ ェ イ ス 間 の 水 素 結 合 を直 接 仲 介 して
い る水 分 子 は 少 な いが ， す で に 水 素 結 合 を し て い る 分
子 に隣 接 し て 付 加 的 に 水 素 結 合 を形 成 す る 水 分 子 が い
くつ か み られ る． こ の よ う な 水 素 結 合 は ， 複 合 体 形 成
時 の 熱 力 学 的 な エ ネ ル ギ ー を減 少 させ る の に 貢 献 して
い る と思 わ れ る． さ ら に， チ ロ シ ン， ア ル ギ ニ ン， リ
シ ン， グ ル タ ミ ン ， そ し て グ ル タ ミ ン酸 とい っ た 側 鎖
が 大 きな ア ミ ノ酸 残 基 に お い て ， そ の 側 鎖 が 重 な りあ
図4 G-CSF：gs-CRH複
G-CSFとgs-CRH複
合 体 の 各 部分 の 構 造
合 体 の 各 部 分 の 三 次 元 構 造 を リボ ンモ デル 図
で示 す ． 各 図 に お いて ピン ク はG-CSFを
， 水 色 は受 容 体 分 子 を示
す． ま た， 赤 の 部分 は メ ジ ャ ー イ ン ター フ ェイ ス， 青 の部 分 はマ
イ ナ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス に関 与 して い るア ミノ酸 残 基 を示 す ， 黄
色 の 部分 は， 受容 体 に お け る保 存 され た4つ の シス テイ ン残 基 と，
WSXWSモ
チ ー フに対 応 す る ， 緑 の 棒 状 モ デルは， 受 容 体 に結 合 し
て い る ア スパ ラ ギ ン 結 合 糖 鎖 を 示 す ． （a）は ，MOL2の
リ出 しG一CSFの4本
〔b）は ，MOL2の
部 分 を取
受 容 体 部 分 を取 り出 し， メ ジ ャ ー イ ン ター フ ェ
イス が手 前 に見 える 方 向 か ら， （c）は，MOL2のG-CSFの
の 受 容 体 の複 合 体 で も共 通 に 観 察 され る ． した が っ て ，
こ の よ う な相 互 作 用 は， サ イ トカ イ ン と受 容 体 間 の 認
識 に お い て 本 質 的 に 重 要 で あ る と思 わ れ る．
MOL1とMOL2の
三 次 元 構 造 は， 同 型 を なす よ うに
部分 を
り許 可 を 得 て転 載 ］
み られ る が ， 詳 細 に 検 証 す る と分 子 の 配 向 が 互 い に 異
な っ て い る こ とが わ か る． す な わ ち ，MOL1とMOL2
を，G-CSF分
合 ，BNド
子 が 最 も一 致 す る よ うに 重 ね 合 わ せ た場
メ イ ンに お い て は チ ロ シ ン172を
よ う に し て 約10度
成 し て い る ． 以 下 ，2つ
MOL1，MOL2と
そ
α ヘ リッ クスバ ン ドル構 造 に沿 った 方 向か ら，
取 り出 し， メ ジ ャ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス が 手 前 に 見 え る方 向か ら示
す ． ［文 献16よ
う よう にフ ァ ンデル ワー ルス相 互作 用 を して いる部分
が 多 くみ られ る． 同 様 の 相 互 作 用 は，GHやEPOと
の1：1複
合 体 を そ れ ぞ れ
よ ぶ こ と に す る （図3） ． マ イ ナ ー イ
ン タ ー フ ェ イ ス は ， 他 の サ イ トカ イ ン と受 容 体 の 複 合
，BCド
290を 中 心 とす る よ う に して 約8度
， 回 転 す る よ うに配
向 が変化 して い る （
図5） ． と くにBNド
て は，MOL1とMOL2で
中 心 とす る
メイ ンにお いて はロイシン
メイ ンにお い
ア ミノ酸 残 基 問 に形 成 され る
1717
Ⅵ
24
蛋 白質 核 酸 酵 素 Vol．45No．10（2000）
相 互作 用， さ らに中央 の チ ャ ンネル にお いて形 成 され
る水 分 子 の 水 素 結 合 ネ ッ トワ ー ク に よ っ て， この2：2
複 合 体 の 構 造 が 安 定 化 され て い る と考 え られ る ．
マ イ ナ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス は ， 以 下 の 知 見 か ら も生
理 学 的 に意 味 が あ る もの と考 え られ る ． まず ， 溶 液 中
に お け るBCド
BCド
CSFの
メ イ ン のNMRに
よ る研 究17）に おい て ，
メ イ ン の ロ イ シ ン261のNMRシ
グ ナ ル が ，G-
添 加 に よ り変 化 す る 事 実 が報 告 さ れ て い る． こ
の ア ミ ノ酸 残 基 は マ イ ナ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス に属 す る ．
この 結 果 は ，・マ イ ナ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス が ， 結 晶 中 だ
け で な く溶 液 中 に お い て も実 在 す る こ とを 示 し て い る ．
さ ら に ，G-CSFに
お け るア ラ ニ ンス キ ャ ン ニ ング 変 異
Database Center for Life Science Online Service
体 解 析 ＊4にお い て ， ロ イ シ ン124が
図5 MOL1とMOL2に
［文 献16よ
お け るG-CSFと
受容 体 間 の 配 向
生 理 活 性 に影響 を
及 ぼ す こ とが 報 告 さ れ て い るが18）
， 実 際 ， この ア ミノ酸
残基 は，マ イ ナー イ ンター フェイ スで受 容体 との結合
り許 可 を得 て 転 載 ］
に 関 与 して い る． ま た ， 詳 細 は 省 くが ， 結 晶 系 が 異 な
水 素 結 合 な どの相 互 作 用 に違 い が み られ る． ま た，
る複 合 体 結 晶 の構 造 解 析 結 果16)も ， ドメ イ ン間 の 配 向
MOL1お
に若 干 の 差 が 見 られ る もの の ， マ イ ナ ー イ ン タ ー フ ェ
BCド
よ びMOL2の
受 容 体 分 子 に お い て ，BNと
メ イ ンが なす 角 度 も約3度
異 な る．MOL1の
ャ ー イ ンタ ー フ ェ イ ス は ，G-CSFの6残
7残 基 の 問 に 形 成 さ れ る10個
CSFの15残
基 と受 容 体 の15残
メジ
イ ス は 同 様 の 結 合 状 態 を保 持 し てい る． した が って ， マ
基 と受 容 体 の
イ ナ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス は単 な る結 晶 学 的 な 接 触 と は
の 極 性 相 互 作 用 と，G−
考 え に く く， シ グ ナ ル 伝 達 の 分 子 認 識 に お い て 重 要 な
基 が 形 成 す る フ ァ ンデ
相 互 作 用 で あ る と考 え られ る ．
ル ワール ス相 互 作 用 を含 んで お り， その 面 積 は約840AZ
で あ る． な お ，MOL2の
メ ジャー イ ンター フェイスの
相 互 作 用 面 積 も約800?2で
ほぼ 同等で あ る．
G-CSF受
Ⅴ
.マ
イ ナー イ ン ター フ ェイ ス
容 体 は， ア ミノ 酸 配 列 にお いて ，IL-6受
体 の 一 つ で あ るgp130に
次 元 構 造 に お い て も，BNとBCド
マ イ ナ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス は ，1：1複
2：2複
合 体 を束 ね て
合体 の形 成 を実 現 す る重 要 な相互 作 用 で あ る．
そ の 面 積 は 約350Azで
ド メ イ ン の1つ
，G-CSFのN末
端 領 域 とBC
の β ス トラ ン ドが 擬 似 的 な 逆 平 行 の 分
子 間 β シ ー トを形 成 し て い る． 遊 離 型G-CSFのX線
結 晶 解 析 の 結 果 で は ，N末
端 か ら セ リン8に 至 る領 域
応 す るgp130の
容
最 も顕 著 な相 同性 が あ る． 三
メ イ ン はそれ ぞ れ 対
ドメ イ ン と非 常 に 似 て い るが ，2つ の ド
メ イ ン間 の 配 向 につ い て は， お よそ25度
2つ の 受 容 体 分 子 につ い て ， そ のBCド
も違 って い る．
メ イ ン部 分 が―
致 す る よ うに重 ね合 わ せ た場 合 ， その 配 向 の違 い は，
WSXWSモ
チ ー フ の 部 分 か ら始 ま っ て い る よ うに み え
る （図6） ．gp130に
お ける ドメイ ン間の 角度 は， お も
に お い て 一 定 の 構 造 を もっ て い ない が14）
， 筆 者 らの 複 合
にWSXWSモ
体 の 結 果 で は ， グ リ シ ン4以 降 の 構 造 が 明 確 に観 察 さ
色 ） と名 づ け られ た 部 分 の 相 互 作 用 で 制 御 さ れ て い る
れ る． す なわ ち ，G-CSFのN末
が ， そ の様 式 がgs-CRHで
端 領 域 の グ リシ ン4か
らセ リ ン8の 領 域 は ， 受 容 体 の 結 合 に よ っ て 初 め て 一
チ ー フの 部 分 とLス
シ ン284と
鎖 が 関 与 す る水 素 結 合 ， 約10個
れ ぞ れ ロ イ シ ン290と
＊4
遺 伝 子 工 学 の 手 法 を 用 い て ， 蛋 白 質 分 子 内 の ア ミノ酸 残 基 を1つ
リ シ ン285の
青
は 異 な る． この 他 に， ドメ
イ ン 間 の 配 向 を決 め て い る と考 え ら れ るgp130の
定 の 構 造 を も つ よ うに な る と推 定 さ れ る ． そ の ほ か 側
の フ ァ ン デ ル ワー ル ス
トラ ン ド （
図6の
部 分 は，gs-CRHの
プ ロ リ ン291で
グリ
場 合， そ
あ る （図6の
赤
ず つ ア ラニ ン残 基 に置 換 した 変 異 体 蛋 白質 を多 数 調 製 し， それ ら
の機 能 を野 生 型 の 蛋 白 質 と比 較 す る解析 手 法 で あ る。 この 手 法 に よ って ， 機 能 発 現 に重 要 なア ミノ酸 残 基 を同 定 す る こ とが で きる．
1718
Ⅶ
サイ トカイン-受容体間の新しい分子 認識機構
25
り
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、
図7
活 性 に 影 響 を 与 え る ア ミノ 酸 残 基 の 三 次 元 構 造 上 の 位
置
G−CSFの
ア ラ ニ ンス キ ャ ンニ ン グ変 異 体 解 析18)か ら同 定 され た 生
理 活 性 に影 響 を与 え るア ミノ酸 残 基
2） を ，G-CSF（
図6
G-CSFと
受 容 体 の 複 合 体 とgpl30と
gp130とgs-CRHに
お い て ，BCド
（黄 色 ：サイ ト1.緑
：サ イ ト
赤 と紫 ） と受 容 体 （緑 と青 ） の複 合 体 の リボ ン モ
デ ル 上 に， 球 状 モ デ ル で 示 す ．
の 比 較
メ インが 最 も良 く一 致 す る よ う
に 重 ね 合 わ せ ， そ の 主 鎖 部 分 を ワ イ ヤ ー モ デ ル で 示 す ． 緑 ：gp130，
水 色
：gs-CRH,桃
色
：G-CSF,黄
ス トラ ン ド （gp130） ， 赤
と グ リ シ ン284一
色
：WSXWSモ
：ロ イ シ ン290-プ
リ シ ン285（gpl30）
チ ー フ， 青
：L
ロ リ ン291（gs-CRH）
， ［文 献16よ
り許 可 を 得 て転
在 し て い るIL-4に お け る α 受 容 体 との 複 合 体 の イ ン タ
ー フ ェ イ ス に類 似 し て い る
．
載 ］
色 ）． も しgs-CRHがgp130と
同 じ構 造 を とった 場 合 に
は ， この 部 分 に 大 き な立 体 障 害 が 起 こ る ． また ， この
G-CSFや
そ の受 容 体 に お い て ， 活 性 に 関 与 す るア ミ
2つ の ア ミノ酸 残 基 は， そ れ ぞ れ の 分 子 に お い て生 物 種
ノ酸 残 基 の 特 定 の た め に ， 遺 伝 子 工 学 的 な 手 法 に よっ
間 で 保 存 さ れ て い る． した が って ，WSXWSモ
とそ のN末
チー フ
て任 意 の ア ミノ酸 残 基 を置 換 させ た 変 異 体 を作 製 し， そ
ー プ と名 づ
の 活 性 を調 べ た 研 究 が い くつ か報 告 され て い る18,20)．こ
域 の ドメ イ ン の 配 向 を決 め る の に 重
れ ら の 結 果 か ら得 られ た 活 性 に 関 与 す る ア ミ ノ 酸 残 基
端 側 の ル ー プ 部 分 （WSXWSル
け た ）は ，CRH領
要 な 役 割 を 担 っ て い る もの と推 測 さ れ る ．
を， 筆 者 らが 明 らか に したG-CSF複
メ ジ ャー イ ン タ ー フ ェ イ ス は， 最 近 報 告 され たIL−4
とそ の 受 容 体 の1：1複
合 体19)に お け る イ ンタ ー フ ェイ
ス と一 致 す る． 一 方 ，GHと
その 受 容 体 の1：2複
合体
合 体 の三 次 元 構 造
上 に あ て は め る と， 興 味 深 い 知 見 が 得 られ た ． 受 容 体
側 で は， ア ラニ ンス キャ ンニ ング変 異体 解析 にお いて
活 性 に 影 響 を与 え る ア ミ ノ酸 残 基 は ， や は り メ ジ ャ ー
に お け る2つ の イ ン タ ー フ ェ イ ス の う ち ， 相 互 作 用 が
イ ン タ ー フ ェ イ ス に属 す る． また ，G-CSF側
弱 い ほ うに一致 す る． また， メ ジャー イ ンター フ ェイ
性 に 変 化 を与 えた ア ミノ酸 残 基 はサ イ ト1と サ イ ト2と
ス に は， 疎 水 的 お よ び 極 性 的 な 相 互 作 用 が ほ ぼ 同 程 度
い う2つ の 領 域 に 分 類 され る こ とが 報 告 され て い る． 図
存 在 す る ． この 結 合 様 式 は，IL-4複
7に 示 す よ うに， サ イ ト2は ， メ ジ ャ ー イ ン ター フ ェ イ
合 体 で み られ る相
で は， 活
互 作 用 と似 て い る が ， 疎 水 性 相 互 作 用 が コ ア を形 成 し，
ス と マ イ ナ ー イ ン タ ー フ ェ イ ス に属 して い る． しか し，
そ の 周 囲 に極 性 相 互 作 用 が 存 在 す るGH複
合 体 の相互
サ イ ト1に 分 類 さ れ た ア ミ ノ酸 残 基 は， 筆 者 ら の 結 晶
作 用 とは異 な る． す な わ ち，G-CSF複
合 体 のメ ジャー
構 造 上 で は ま っ た く相 互 作 用 に 関 与 し て い な い ． し た
イ ン タ ー フ ェ イ ス は， 受 容 体 が1種 類 か ら構 成 さ れ る
が っ て ， 今 回 の 三 次 元 構 造 解 析 か ら は， サ イ ト1の 領
GH複
域 が な ぜ 活 性 に 関 与 す る の か 説 明 す る こ とが で きな い ．
合 体 の イ ンタ ー フ ェイ ス よ り， 受 容 体 が複 数 種 存
1719
26
蛋 白質
核酸
酵素
Vol．45No．10（2000）
そ こで ， これ ま で 報 告 さ れ て
い る生 理 ・生 化 学 的 な 機 能 解
析 を 見 直 して み る と，G-CSF
受 容 体 に お い て，Ig様
ン，FNⅢ
ドメ イ
様 ドメ イ ン も， あ
る程 度 ， 活 性 に 関 与 し て い る
こ とが わ か る15）
． さ ら に ，Ig
様-BN-BCの3つ
の ドメ イ ン
か らな る受 容 体 は，G-CSFと
4：4の 複 合 体 を形 成 す る とい
う報 告8)や ，Ig様-BNド
メイ
ン ，gs-CRHとG-CSFの
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者 は ，1：1：1で
三
複 合 体 を形
成 す る と い う報 告21）も あ る ．
した が っ て，Ig様
FNⅢ
ドメ イ ン，
様 ドメイ ンが加 わ る こ と
で ， サ イ トカ イ ン分 子 の 結 合
図8G℃SFと
そ の受 容 体 に よ る分子 認 識 機 構 の 予 想 図
後 ， 受 容 体 分 子 に もっ と大 き
サ イ ト1も 相 互 作 用 す る よ
文
う に な る こ とが 十 分 考 え られ る． これ らの 事 実 と， 今
1）
中 内 啓 光 ・中 畑 龍 俊 編 ：実 験 医 学 ，17,1024-1178
2）
宮 園 浩 平 ・菅 村 和 夫 編 ：BioScience用
な 変 化 が 起 こ り，G-CSFの
回 の2：2複
献
(1999)
合 体 の 形 成 を考 慮 し， 図8に 現 在 考 え られ
る分 子 認 識 の 様 子 を 模 式 的 に示 し た ．
リー
サ イ ト カ イ ン ・増 殖 因 子
語 ライブ ラ
（改 訂 版 ）， 羊 土 社
(1998)
3)千
お わ りに これ ま で ， サ イ トカ イ ンに よ る シ グ ナ ル 伝
達 は，GHやEPOと
そ れ らの 受 容 体 の細 胞 外 ドメ イ ン
4）
5)de
田 俊 哉:蛋
白質 核 酸
酵 素 ，44,318-324（1999）
神 田 大 輔:蛋
白質 核酸
酵 素 ，44，338-346（1999）
Vos,A.M.,Ultsch,M.,Kossiakoff,A.A.:
Science,255,306-312(1992)
との 複 合 体 の 結 晶 構 造 か ら ， サ イ トカ イ ン の1分 子 に
6)Syed,R.S.et
よ る受 容 体 の2量
7)Horan,T.,Wen,J.,Narhi,L.,Parker,V.,Garcia,
体 化 が 引 き金 と な っ て 起 こ る と考 え
られ て きた ． 今 回 の構 造 解 析 の 結 果 か ら，G-CSFに
い て は， こ れ らの サ イ トカ イ ン と は異 な る2：2複
A.,Arakawa,T.,Philo,J.:Biochemistry,35,4886-
お
合体
4896(1996)
8)Hiraoka,O.,Anaguchi,H.,Ota,Y.:FEBS
の形 成 が 示 され ， 多様 な複 合 体 の 存 在 が 示 唆 された ． し
か し， 筆 者 ら も， こ の2：2複
合 体 が，G-CSFの
受容
外 の 細 胞 外 ドメ イ ン を含 めた 解
析 や ， 膜 通 過 ドメ イ ン ， 細 胞 内 ド メ イ ン を 含 め た 三 次
元 構 造 解 析 が 望 ま れ る ． 筆 者 ら は ， よ り高 次 の 複 合 体
が 形 成 され る と して も， 今 回 得 られ た2：2複
合 体 の構
造 単 位 が 部 分 構 造 と し て含 まれ て い る と推 測 して い る．
Lett.,
356,255-260(1994)
9）
国 島 直 樹 ・森 川 取 右 ：細 胞 工 学,18,1467-1473
10）
平 野 俊 夫 監 修 ：細 胞 工 学 ，14,1113-1174（1995）
11）
清 水 敏
(1999)
体 に よ る 分 子 認 識 の 全 体 像 を 示 す もの と は 考 え て い な
い ． 今 後 ，gs-CRH以
al.:Nature,395,511-516(1998)
之
・藤 井 佳
史
・箱
嶋 敏
雄
：細
胞 工 学 ，18,
1474-1480(1999)
12)Nagata,S.,Tsuchiya,M.,AsanqS.,Kaziro,Y.,
Yamazaki,T,Yamamoto,O.,Hirata,Y.,Kubota,
N.,Oheda,M.,Nomura,H.et
al.:Nature,319,
415-418(1986)
し か し， ま っ た く予 想 も つ か な い よ う な 構 造 変 化 が 観
13)Souza,L.M.,Boone,T.C.,Gabrilove,J.,Lai,P.
測 さ れ る可 能 性 も否 定 で き な い ． さ ら な る解 析 が 期 待
H.,Zsebo,K.M.,Murdock,D.C.,Chazin,V.R.,
され る．
Bruszewski,J.,Lu,H.,Chen,K.K.etal.:Science,
232,61-65(1986)
1720
27
サイ トカインー
受容体間の新 しい分子認識機構
14)Hill,C.P.,Osslund,T.D.,Eisenberg,D.:Proc.
有 富正 治
Natl.Acad.Sci.USA,90,5167-5171(1993)
15）
福 永 理 己 郎
略 歴 ：1986年 大 阪 大 学 大 学 院 理 学 研 究科 博 ± 前 期 課 程
：生 化 学 ，67，265-278（1995）
修 了， 同 年 旭 化 成 工 業 ㈱ 入社 ，1994∼98年
16)Aritomi,M.,Kunishima,N.,Okamoto,T.,Kuro-
生物分子 工
ki,R.,Ota,Y.,Morikawa,K.:Nature,401,713-
学 研 究 所 ，現 在 ：旭 化 成 工業 ㈱ 中 央技 術 研 究所 主 幹 研 究
717(1999)
員 （
理 学 博士 ）．
17)Yamasaki,K.,Naito,S.,Anaguchi,H.,Ohkubo,
国島 直樹
T.,Ota,Y.:Nature.Struct.Biol.,4,498-504(1997)
略 歴 ：1994年 大 阪 大 学 大 学 院 理 学研 究科 †
専士 課 程 修 了，
18)Reidhaar-Olson,J.F.,DeSouza-Hart,J.A.,
理 学 博 士， 同 年 よ り生物 分 子 工 学研 究 所 ．
Selick,H.E.:Biochemistry,35,9034-9041(1996)
19)Hage,T.,Sebald,W.,Reinemer,P.:Cell,97,271-
森 川耿 右
281(1999)
略 歴 ：1972年
20)Layton,J.E.,Iaria,J.,Smith,D.K.,Treutlein,H.
21)Hiraoka,O.,Anaguchi,H.,Asakura,A.,Ota,Y.:
Database Center for Life Science Online Service
J.
Biol.Chem．
東 京 大学 大 学 院 薬学 研 究 科 博 士 課 程 修 了 ，
薬 学 博 士 ，1973∼79年
同 大 学 助 手 ，1975∼80年
デ ンマ
ー ク ・オ ル フ ス 大
， 英 国 ケ ン ブ リ ッ ジMRC分
子生 物 学 研
R.:J.Biol.Chem.,272,29735-29741(1997)
究 所 リサ ー チ フ ェ ロ ー ，1980∼86年
，270，25928-25934（1995）
1986∼96年
京都 大 学 理 学部 助 手 ，
蛋 白 工 学 研 究 所 ， 第 一 研 究 部 長 ，1996年
∼現 在 生 物分 子 工 学 研 究所 構 造 解 析 部門 長 ．
第30回 新 潟 神 経 学 夏 期 セ ミナ ー
日 時 ：7月27日
（
木）
∼29日 （
土）
場 所 ：新 潟大 学 医 学部 第1講 義 室 （
新 潟 市旭 町）
◆7月27日
（
木 ）13：00∼19：00
ジス トロフ ィ ン と その 結合 蛋 白質
小澤 鋲 二郎 （
国 立精 神 ・神 経 セ）
ヒ トゲ ノ ム計 画 の 最 前線 榊 佳 之 （
東 大 ・医科 研 ）
星 細 胞腫 悪 性 化 とp53変 異 多 田光 宏 （
北 大 ・遺 制 研 ）
脳 の可塑 性 と神 経 栄 養 因子 津本忠治 （
阪 大院 ・医 ）
◆7月28日
（
金 ）13：00∼19：00
神 経 幹細 胞 ：基礎 か ら応 用 司 会 ：岡 野栄 之
神 経 幹細 胞 の 分 子 生物 学 中福 雅人 （
東 大院 ・医 ）
bHLH因
子 に よ る神 経分 化 制 御
影 山龍 一郎 （
京大 ・ウイ ル ス研 ）
神 経 幹細 胞 の 分 離 と分 化 制 御 機構
岡野 栄之 （
阪大 院 ・医 ）
網 膜疾 患 へ の 応 用 高 橋政 代 （
京大 院 ・医 ）
神 経疾 患 に対 す る細 胞 移 植 療 法 中尾直 之 （
和歌 山医 大 ）
◆7月29日
（
土 ）10：00∼16：00
機 能 的MRIの
基 礎 と実 践 司 会 ：中 田 力
MRの 基 本 原理 MR解 剖 fMRIの 実 践 中 田 力 （
新 潟大 ・脳 研 ）
岡本 浩一 郎 （
新潟 大 ・医 ）
藤 井 幸彦 （
新 潟大 ・脳研 ）
信 号 処 理 鈴 木 清隆 （
新 潟大 ・脳研 ）
もう一 つ のfMRI：Diffusion anisotropy
松 澤 等 （
新 潟大 ・脳研 ）
対 象 ：学 部卒 後 の若 い研究 者 ・医 師 ・学 生 等
受 講 申 込 方 法 ：受 講 料 （
一 般10，000円
院 生5，000円
学 生2，000円 ）を現 金書 留 で お 送 り くだ さい． その 際，
1日 の みの受 講 希 望者 は日を指 定 し， 上記 の半 額 をそえ
て申 し込 み くだ さい ．部 門 見 学 の希 望 者 は希 望 部 門名
と見 学 日を お知 らせ くだ さい （
先着 順 ）．
申込 先 ：〒951-8585新 潟 市 旭 町
新 潟 大 学脳 研 究 所 神経 学 夏 期 セ ミナー 事務 局 佐藤
Tel.025-227-0606FAX025-227-0814
※本 セ ミナー は日本 脳神 経外 科学 会生 涯教育 ク レジッ ト，及
び 日本 神 経 学 会 認定 医更 新取 得単 位 の対 象 とな ります．
◆ 部 門見 学 プ ログ ラ ム
27日
分子神経生物学
細胞神経生物学
システム脳生理学
病
理
学
分子神経病理学
脳神 経 外 科 学
神 経 内 科 学
脳機 能 解 析 学
28日
シンドビスベクターを用いた神経細胞への遺伝子導入（イントロ）
（10名 ）
神 経伝 達 物質 放 出 機構
1日 目 の 続 き
（
実 験 見 学 ） （10名 ）
Brain Cutting：
自分 の 目で 病 変 を見 る ！（10名 ）
PCR法
に よ るDNA合
成 実 習 （10名 ）
遺 伝 子 改 変 動物 の作 成 と解 析 （5名）
大脳 聴 覚 野 機能 の動 的 変化 （Ⅱ） （8名 ）
組 織 検 討 会 ：“
病 理 を考 えよ う” （10名）
PCR法 に よるDNA合
成実習 （
続 ） （10名）
手 術 見 学 （5名 ）
病 棟 回 診 （白 衣 持 参 ） （10名 ）
FunctionalMRIの
実 践 （10名 ）
256-Channel脳
（15名 ）
大脳 聴 覚 野機 能 の 動的 変 化
（Ⅰ） （8名 ）
｝神 緻
射線 カ ンフ ・ レ ンス （15名）
波 の実 際
（5名 ）
1721