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O - 住友ベークライト株式会社
® BRINGING GLYCOMICS TO LIFE ® O型糖鎖サンプル調製キットBlotGlyco®のご紹介 住友ベークライト株式会社 S-バイオ事業部 -1- SUMITOMO BAKELITE CO.,LTD. ® O型糖鎖サンプル調製キットBlotGlyco® 簡単にO型糖鎖のサンプル調製ができます。 O型糖鎖遊離試薬 プロトコル クリーンアップカラム (過剰標識試薬除去用カラム) BlotGlyco®ビーズ (糖鎖回収用ビーズ) 反応用チューブ (BlotGlyco®反応用) -2- 2 mLサンプルチューブ (廃液回収用) SUMITOMO BAKELITE CO.,LTD. ® 本キットによるサンプル調製法 Step1. アンモニウム塩を使用して穏和な条件で O型糖鎖をタンパク質から遊離させる O型糖鎖 従来法ではO型糖鎖の ピーリングが起こり易い N型糖鎖 O型糖鎖 セリン・ スレオニン アスパラギン O型糖鎖 遊離試薬 糖タンパク質 分解 (ピーリング) 遊離後の糖鎖の分解を低減できる N型糖鎖は遊離されない 従来法と比較して安全かつ簡単な操作 セリン・ スレオニン アスパラギン Step2. BlotGlycoビーズを用いてO型糖鎖を精製、 2-ABで標識化する -3- SUMITOMO BAKELITE CO.,LTD. ® 従来法(ヒドラジン分解法)との比較 糖タンパク質の一種であるフェツイン(ウシ由来)を試料とし、本キット を用いてO型糖鎖サンプルを調製、HPLCで分析した。 ※ 1mg/mLのウシフェツインを 20μL使用 O型糖鎖 サンプル 調製キット LCクロマトグラム -2AB -2AB -2AB -2AB ヒドラジン分解法 ・ヒドラジン分解法と同様にO型糖鎖を回収できる。 -4- SUMITOMO BAKELITE CO.,LTD. ® 従来法(ヒドラジン分解法)との比較 ■ O型糖鎖サンプル調製キットBlotGlyco® □ ヒドラジン分解法 ・ヒドラジン分解法よりもマイルド条件かつ反応時間、温度等を 最適化しているため、分解が抑制できる。 -5- SUMITOMO BAKELITE CO.,LTD. ® ピークパターン再現性 ※ n=12 50.0 面積% 40.0 30.0 20.0 10.0 0.0 (Hex1)(NeuAc1) 分解物 (Hex1)(HexNAc1)(NeuAc1) (Hex1)(HexNAc1)(NeuAc2) (Hex2)(HexNAc2)(NeuAc2) ・繰り返し再現よくO型糖鎖の分析が可能 (C.V. 20%以下) -6- SUMITOMO BAKELITE CO.,LTD. ® ウシムチン由来O型糖鎖の2AB標識糖鎖のLC分析例 ※ 1mg/mLのウシムチン(BSM)を 20μL使用 6.0 mV(x100) (HexNAc)(NeuAc) ヒドラジン分解 5.0 (HexNAc)(NeuGc) 4.0 3.0 * 2.0 (HexNAc)2(NeuAc) (HexNAc)2(NeuGc) 1.0 0.0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 (x10) 2.50mV 40.0 42.5 45.0 47.5 min O型糖鎖サンプル調製キット (HexNAc)(NeuAc) 2.25 37.5 2.00 1.75 (HexNAc)(NeuGc) 1.50 1.25 1.00 0.75 (HexNAc)2(NeuAc) * 0.50 (HexNAc)2(NeuGc) 0.25 0.00 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 32.5 35.0 37.5 40.0 42.5 45.0 47.5 min ※ 糖鎖組成はMSスペクトルにて確認 *ピーリング産物 ・ヒドラジン分解と同様にO型糖鎖が回収できる ・他にもブタのムチン(PSM)でも同様に糖鎖のシグナルを検出できている。 -7- SUMITOMO BAKELITE CO.,LTD. ® ご注文情報 品名: O型糖鎖サンプル調製キットBlotGlyco® 品番: BS-45450 容量: 10 tests 価格: 85,000円(予価、税別) ☆ 5月下旬発売予定 ☆ お問い合わせ、ご要望等 S-バイオ事業部 マーケティング・営業部 Tel: 03-5462-4831 Fax: 03-5462-4835 E-mail: [email protected] URL: http://www.sumibe.co.jp/product/s-bio -8- SUMITOMO BAKELITE CO.,LTD.