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食品医薬品部 - 大阪府立公衆衛生研究所
平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 食品添加物等に関する衛生学的研究 食品医薬品部 食品化学課 尾花裕孝、池辺克彦、北川幹也 吉光真人、野村千枝、粟津 薫 ■研究目的 1) 通常検査業務については分析法の精度・効率性を高め ることを目的とし、実験操作を見直し必要な改善を行う。 3) ヒスタミン分析では迅速化を試みるため、酵素による ヒスタミンの分解を利用した市販キット（酵素法） 、酵 素 免 疫 学 的 方 法 を 利 用 し た 市 販 キ ッ ト（ELISA 法 ）、 2) 化学物質による中毒事例など、緊急性を要する業務の HPLC 法を比較検討した。その結果、いずれの方法も中 迅速・高精度化について検討する。加熱不十分なインゲ 毒量のヒスタミンの定量が可能であり、酵素法でヒスタ ン豆摂取による中毒事例では、目視によるレクチン活性 ミンを定量後、HPLC 法でピークを確認する方法が中毒 評価（赤血球凝集試験：HA 試験）に代わり酵素免疫学 発生時の迅速分析に有用であることがわかった。 的手法による数量化を試みる。また、ヒスタミン測定で は市販キット類と HPLC 法を比較検討する。 ■研究実施状況 1) 着色料検査での薄層クロマト（TLC）用試験液を HPLC ■誌上発表 1) 野村千枝 , 北川幹也 , 吉田政晴 , 田中之雄：固相抽出お よび HPLC を用いた食品中のポリソルベートの分析法 , 食衛誌 , 48, 64-68, (2007) 測定に使用できることを確認し、TLC において明確な 2) 粟津 薫 , 北川幹也 , 尾花裕孝 , 田中之雄：ジアゾ化法 スポット検出が困難な場合や違反の確認など追加的検査 による食品中の亜硝酸根定量法の検討 , 大阪府立公衆衛 の精度や効率を高められるようになった。 生研究所所報 , 45, 47-52, (2007) 2) 平成 18 年 5 月、白インゲンによる健康被害が全国的 ■平成 20 年度の研究実施計画 に発生した。原因となるレクチンの残存は、HA 試験に 1) 容器包装の規格検査について、精度・効率性を高める より確認するが、HA 試験は条件により値が変動する可 ことを目的として、前処理操作の簡便化と高周波プラズ 能性がある。レクチン活性の変化を、HA 試験により測 マ発光分光分析装置（ICP-AES）の導入を進める。 定すると同時に、ウエスタンブロット (WB) 法を用いて 2) 健康危機管理事例に対応するために、食品中の重金属 中毒の主因とされるフィトヘマグルチニン（PHA）の を網羅的に迅速分析する簡便な分析法を開発する。本研 挙動を調べた。さらに、ELISA 法による PHA の定量に 究の一部は、厚生労働科学研究の一環として行う。 ついて検討した。その結果、PHA の確認には NativePAGE 後 WB 法、定量には ELISA 法が有効であった。 3)HPLC 法によるヒスタミン分析について、低濃度域にお ける測定が可能で、かつ現行法よりも簡便な精製方法を 検討する。 18 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 食品中の残留農薬に関する研究 食品医薬品部 食品化学課 住本建夫、村田 弘、高取 聡 北川陽子、柿本幸子、岡本 葉 ■研究目的 ■誌上発表 食品衛生法の改正により、平成 18 年 5 月から「農薬等 1) 高取 聡 , 岡本 葉 , 北川陽子 , 柿本幸子 , 村田 弘 , のポジティブリスト制」が施行され、基準が設定されてい 住本建夫 , 起橋雅浩 , 田中之雄：農産物中の残留農薬に ない農薬等が一定量以上含まれる食品の流通を禁止される 用いる新規一斉分析法 , 大阪府立公衆衛生研究所所報 , ことになった。それに伴い各種の食品について、数多くの 45, 67-75(2007) 農薬の残留検査が要求されることとなった。また、輸入農 2) 北川陽子 , 起橋雅浩 , 尾花裕孝 , 阿久津和彦 , 柿本幸子 , 作物の多様化に伴い消費者の農薬に対する意識の高まりも 岡本 葉 , 高取 聡 , 小西良昌 , 村田 弘 , 住本建夫 , あり、食品中に残留する農薬の安全対策は重要な課題と 堀伸二郎 , 田中之雄：輸入農産物中の残留農薬の調査結 なっている。消費者の安全・安心の要求に応えるため、食 果 ー平成 11 年度〜平成 18 年度ー , 大阪府立公衆衛生 品中の残留農薬の多成分一斉分析法等の検討をさらに進め 研究所所報 , 45, 29-36(2007) ていく。 ■研究実施状況 3) 柿本幸子 , 高取 聡 , 北川幹也 , 吉光真人 , 北川陽子 , 岡本 葉 , 起橋雅浩 , 小西良昌 , 尾花裕孝 , 福島成彦 , 厚生労働科学研究費補助金（食品の安心・安全確保推進 村田 弘 , 住本建夫 , 堀伸二郎 , 田中之雄：国産野菜 研究事業）の分担研究として、「農薬等のポジティブリス および果実中の残留農薬の汚染実態調 ー平成 13 年度 ト化に伴う検査の精度管理に関する研究」を企画し、農薬 〜平成 18 年度ー , 大阪府立公衆衛生研究所所報 , 45, 検査の信頼性を確保するために、当研究所の他 8 地方衛 37-42(2007) 生研究所の参加協力を得て外部精度管理調査を行った。本 4) 岡本 葉 , 高取 聡 , 起橋雅浩 , 柿本幸子 , 阿久津和彦 , 年度は、正確な分析値を得るための要因として内部標準物 北川陽子 , 尾花裕孝 , 村田 弘 , 住本建夫 , 田中之雄： 質として安定同位体を添加し、誤差の補正について検討し 1993-2006 年度に実施した柑橘類中における防かび剤 た。また、クライテリア試料を提供し分析機器の良好さに の残留実態調査 , 大阪府立公衆衛生研究所所報 , 45, ついて考察した。添加濃度として、一律基準（0.01ppm） 23-28(2007) 程度の微量な農薬添加を行い、正確な分析値を得るための ■平成 20 年度の研究実施計画 要因について、昨年度と同様に検討を行った。分析方法に 平成 18 年 5 月から「農薬等のポジティブリスト制」が ついては各地研独自の標準作業書に従い行ったが、添加農 施行され、当研究所では従来、76 種類の農薬の一斉分析 薬名を誤認した機関はなく、その濃度も大部分の機関が正 を行っていたが、平成 19 年 2 月からポジティブリスト制 しく報告した。 の対応として、検査農薬の種類を 132 種類に増やして検 昨年 2 月より残留農薬の検査を試料採取量を 10g、抽 査を実施している。これらの検査は野菜や果実等の農作物 出溶媒をアセトニトリル 20ml とサイズダウンし、50ml について行っているが、中国製の冷凍餃子からメタミドホ 使い捨て遠心管容器内で抽出、脱水、遠心分離を行って分 スやジクロルボス等の農薬混入事件があり、加工食品につ 析時間を短縮した検査方法（QuEChERS 法変法）により いても残留農薬の検査が望まれている。加工食品類は脂質 実施した。その結果、実試料でも支障なく測定できること が多いこともあり、 従来の分析法は適用できない。そこで、 が確認された。測定は GC-FPD、GC-MS、LC/MS/MS を 前処理法として固相カラム等を使用した迅速で正確な試験 使用したが、本年度はさらに GC/MS/MS での検討も行っ 法の検討を行い、 加工食品の残留試験法を確立する。また、 ている。今後、加工食品等も含め分析対象農薬数を現在の 現在野菜果実等の農作物の 132 農薬から、さらに分析農 132 農薬から 200 農薬に増やすべく検討を重ねている。 薬数を増やすべく一斉分析法（QuEChERS 法変法）によ り測定の可否について検討を行う。 19 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 食品中及び母乳に残留する微量有害物質に関する研究 食品医薬品部 食品化学課 田口修三、小西良昌、起橋雅浩、阿久津和彦 小阪田正和、柿本健作、藤田瑞香 ■ 研究目的 食品中に残留する微量有害物質（有機ハロゲン化合物や 動物用医薬品等）について、分析法の開発・改良並びに実 有機塩素系農薬の測定に S-421 を加えて実施し、その残 留実態を同委員会に報告した。 ■誌上発表 態調査等を行い、食品を介した微量有害物質の摂取による 1) Kakimoto. K., Akutsu. K., Konishi. Y., Tanaka. Y., 府民へのリスクアナリシスを行う。また、大阪府母乳栄養 Evaluation of hexabromocyclododecane in fish and 推進事業に基づく母乳中の環境汚染物質を測定する。これ sea mammal oil supplements, Food Chemistry, 107, らの調査研究により、汚染物からのリスクを低下させ、府 1724-1727(2008) 民の健康増進に寄与することを目的とする。 ■研究実施状況 （１）食品汚染物質 臭素系難燃剤ポリ臭化ジフェニルエーテル (PBDEs) の 食餌由来の一日摂取量を調査し、成人の 3 ～ 6 臭素化物 2) 藤田瑞香 , 柿本健作 , 田口修三 , 田中之雄：LC/MS/ MS による食品中のテトラサイクリン系抗生物質の分 析法の検討 , 大阪府立公衆衛生研究所研究報告 , 45, 77-81(2007) 3) Okihashi. M., Takatori. S., Kitagawa. Y., Tanaka. Y., の一日摂取量は 0.04 ～ 0.6μg 程度と推定された。また、 Simultaneous Analysis of 260 Pesticide Residues in 母乳、食品及びハウスダストの分析結果から、PBDEs の Agricultural Products by Gas Chromatography/Triple 人体曝露量を推定した。その結果、平均的な成人・乳幼児 Quadrupole Mass Spectrometry, The Journal of の曝露量はいずれも一日、数十 ng のオーダーであった。 AOAC Int, 90, 1165-1179(2007) 一方、臭素系難燃剤ヘキサブロモシクロドデカン (HBCDs) 4) Okihashi. M., Kitagawa. Y., Obana. H., Tanaka. の水産油脂食品中濃度を測定した。その結果、深海鮫肝油、 Y., et. al., Rapid Multiresidue Method for the いわし油等から HBCDs を検出した。PBDEs 、HBCDs に Determination of more than 300 Pesticide Residues よる汚染は現時点において府民の健康影響上の問題となる in Food, Food, 1, 101-110(2007) レベルではないと推定された。 ■平成 20 年度の研究実施計画 （２）残留動物用医薬品 1) 食品汚染物質については引き続き分析方法の改良・開 食品中のサルファ剤の分析について検討した。多段連 発を行い、また臭素系難燃剤を中心にその汚染実態を明 結カラムによる固相抽出法を用いた抽出・精製を検討し、 らかにする。 LC/MS/MS の測定条件を精査して 25 種類のサルファ剤の 同時分析法を確立した。 （３）大阪府母乳栄養推進事業 大阪府母乳栄養推進事業に基づき、母乳中の PCBs 及び 20 2) 残留動物用医薬品については引き続き分析方法の開発 を行う。 3) 大阪府母乳栄養推進事業に基づく環境汚染物質等の分 析を引き続き行う。 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 母乳中の残留性有機汚染物質（POPs）とその代謝物に関する研究 食品医薬品部 食品化学課 小西良昌、北川幹也、阿久津和彦、柿本健作 ■研究目的 3) 母乳中水酸化 PCB は、現在分析中である。 近年、環境汚染物質による内分泌かく乱作用が問題と 4) 母乳中の臭素系難燃剤 HBCD 濃度の経年変化を検証し なっている。ポリ塩素化ビフェニール (PCB) および難燃剤 た。HBCD は 1988 年より以前の試料では検出されな として使用されたポリ臭素化ジフェニルエーテル（PBDE） かったが、それ以降の試料からは検出された。最近の濃 は生体への蓄積性が高い環境汚染物質であるが、これらの 度レベル（2000 年以降）はこれまでに海外で報告され 代謝物である水酸化体は、強い内分泌かく乱作用を有する。 ているものと大きな差はなかった。また、その濃度レベ 本研究の目的は、PCB、PBDE の個々のアイソマー代謝物 ルは、健康影響上直ちに問題となるレベルではないと思 （水酸化体）の母乳中濃度を測定し、汚染状況の推移を明 らかにする。加えて、PBDE の代替品として使用されてい われる。 ■誌上発表 るヘキサブロモシクロドデカン（HBCD）についても母乳 Kakimoto K.,Akutsu K.,Konishi Y., Time ternd 汚染実態を把握する。 of hexabromocyclododecane in the breast milk of ■研究実施状況 当研究の基礎となる母乳中の POPs 濃度の測定は 1972 年より継続調査しており、その母乳試料（乳脂肪）の一部 Japanese women,Chemosphere,71,1110-1114(2008). ■平成 20 年度の研究実施計画 1) 母乳中水酸化 PCB を測定する。特にサイロキシン様作 を冷凍保存している。 用の疑われる 4-OH-PCB をはじめとする水酸化 PCB の 1) 平成 13-15 年度の科学研究費補助金による研究により、 同族体・異性体組成を分析し、経年的推移を考察する。 母乳中の PCB 同族体・異性体別の濃度を明らかにし、 2) 水酸化 PBDE については、標準品が市販され次第、分 その化合物別の母乳中濃度の経年推移を明らかにした。 その結果、塩素数、塩素置換位置により、生体内蓄積性 が大きく異なり、人体内動態の特徴を見いだした。また、 析法の検討を行う。 3)LC/MS/MS により母乳中 HBCD を異性体別に分析し、 経年的推移を考察する。 母乳中に存在する主な異性体と摂取食事との関係から、 試料である冷凍保存乳脂肪 （1973 年〜 2007 年、 34 年間） 異性体別の吸収および代謝に関する推測を得ることが出 の使用は、インフォームド・コンセントを行い、当所倫理 来た。 審査委員会により条件付（母乳提供者の承諾を受け、上記 2) PBDE については、母乳中同族体・異性体別の濃度を 研究にのみ使用可）承認済である。 測定し、経年推移を明らかにした。 21 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 遺伝子組換え食品に関する研究 食品医薬品部 食品化学課 吉光真人、北川幹也、野村千枝、粟津 薫 ■研究目的 菓子抽出 DNA 溶液を FUJIFILM QuickGene DNA tissue 食品として認可されていない遺伝子組換え食品の流通防 kit S、QuickGene-Mini80 を用いて精製したところ、ト 止、また消費者への食品情報提示の観点から、2001 年 4 ウモロコシ由来遺伝子を検出することができた。通常の 月より遺伝子組換え食品を規制する法律が施行された。当 DNA 抽出法として用いた場合でも、短時間で DNA が抽 研究所でも現在、法律に基づいた遺伝子組換え食品の検査 出可能な有用な方法であった。 を実施している。しかしながら、現在の検査法ではすべて 3) パパイヤ由来遺伝子の検出 の遺伝子組換え食品を検査することは不可能である。そこ パパイヤ由来遺伝子検出用プライマーを新たに設計し、 で、本研究では遺伝子組換え食品の新たな検査法を開発、 今まで検出が困難であった缶詰パパイヤ抽出 DNA 溶液中 または現在の検査法を改良して測定可能な遺伝子組換え食 のパパイヤ由来遺伝子が検出可能となった。 品を増やし、府民の食の安全に寄与することを目的とする。 ■研究実施状況 1) 遺伝子組換え米検出法の検討 ■誌上発表 なし ■平成 20 年度の研究実施計画 未承認遺伝子組換え米の流通を防止するため、米加工 1) 定性 PCR 法での増幅産物の簡便な確認法の検討 品からの DNA 抽出法を検討した。通知法記載のニッポ 現在、定性 PCR 法ではゲル電気泳動により増幅産物の ンジーン GM quicker 2、およびキアゲン QIAamp DNA 有無を確認している。この操作を簡便にするため、Syber Stool Mini Kit、キアゲン Genomic-tip を用いて 8 種の米 Green 試薬とリアルタイム PCR 装置を用いて PCR 結果 加工品からの DNA 抽出を検討したところ、米由来遺伝子 を解析する方法を検討する。 の検出率に差はみられなかった。検討した米加工品 ( 輸入 2) 食品への亜硫酸処理の影響の確認 品 ) から遺伝子組換え米は検出されなかった。粉砕困難な 実際に食品に対して亜硫酸処理をおこない、食品中の 試料 ( ビーフン、はるさめなど ) については滅菌水で十分 DNA 塩基配列に対する亜硫酸の影響を確認する。 に水を吸わせてから粉砕すると容易に均質化された。 また、 3) 食品からの DNA 抽出法の検討 α - アミラーゼの添加も試料を均質化する点で有効であっ 現段階で DNA 抽出が困難なトウモロコシ、米加工品等 た。 に対し、新規 DNA 抽出法および現 DNA 抽出法の改良な 2)PCR 反応増幅阻害物質を含む DNA 溶液精製法の検討 どの検討をおこなう。対象食品として酒、酢、油等を予定 トウモロコシ由来遺伝子が検出されなかったスナック している。 22 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 内分泌かく乱化学物質に関する研究 食品医薬品部 食品化学課 高取 聡、北川陽子、岡本 葉 ■研究目的 く、乳児特有のハイハイ等の行動様式によって、ハウス 内分泌系及び神経系の発育または恒常性の維持に悪影響 ダストの曝露量は、大人を上回ることが明らかにされて を及ぼすことが懸念される化学物質の作用の評価を行うと いる。このためハウスダストを介した化学物質の曝露が 共に当該化学物質の高精度分析法を開発する。更に生体試 危惧される。現在、ボランティアから採取したハウスダ 料及び食品中等の実試料中の濃度を明らかにし、その汚染 スト中の殺虫剤の分析法の開発を行っている。 実態からヒトに対する曝露量を考察・評価する。 ■誌上発表 ■研究実施状況 1) Takatori, S., Okamoto, Y., Kitagawa, Y. et al., １）フタル酸モノエステル類 (MPEs) について：フタル酸 Simulated neonatal exposure to DEHP and MEHP ジエステル類は、生活環境中に多用されており、食品や from PVC enteral nutrition products, Int. J. Pharm, 空気を介して日常的な曝露が危惧される。胎児に対して 352, 139-145 (2008) 毒性を示すことから、母体の曝露状況を調べることは重 2) 高取聡ら：高速液体クロマトグラフィー / タンデム型 要である。そこで尿中 MPEs の高精度分析法を開発し、 質量分析法によるヒト母乳中のフタル酸モノエステル類 妊婦 (n = 51) の尿中 MPEs を分析することにより、フ の分析 , 分析化学 , 56, 1025-31 (2007) タル酸ジエステル類の推定一日曝露量を解析した。その ■平成 20 年度の研究実施計画 結果、耐容一日摂取量 (TDI) を超える事例は認められ フタル酸エステル類、イソフラボン類及び殺虫剤の乳幼 なかった。また、母乳中 MPEs の高精度分析法を開発し、 児への曝露評価について重点的に行う。 母乳中 MPEs を分析することにより、乳児の母乳に由 1） フ タ ル 酸 エ ス テ ル 類 に つ い て： 周 産 期 の 生 体 試 来するフタル酸ジエステル類の推定一日曝露量を解析し 料（ 母 体 血、 臍 帯 血、 母 乳、 胎 脂 及 び 尿 ） 中 の た。当該母乳を摂取することで TDI を超えることが危 当該化学物質の分析を行い、妊娠期間及び乳児期の当該 惧される事例は認められなかった。 化学物質の曝露評価を行う。 ２）イソフラボン類について：育児粉乳の一部には、大豆 2）イソフラボン類について：大豆を多用した育児粉乳及 を原材料に含むものがある。大豆中には、女性ホルモン び離乳食中について分析を行い、乳児食からのイソフラ 様作用を有するイソフラボン類が含まれる。そこで育児 ボン類の曝露評価を行う。 粉乳及び離乳食に含まれるイソフラボン類濃度を測定す るため、LC/MS/MS を用いた高精度分析法を開発した。 3）殺虫剤について：日常的な曝露が危惧される化学物質 のひとつに殺虫剤があげられる。 本法を用いて市場に流通する大豆を主原料とする育児粉 とりわけ、神経系に作用点を有するものについては、子 乳を分析し、当該製品を摂取した乳児のイソフラボン類 どもの曝露評価が必要である。ハウスダスト、血清 また の推定一日曝露量を解析している。 は尿中の代謝物を含めた当該化学物質の高精度分析法を開 ３）殺虫剤について：乳児の生活域は、大人よりも床に近 発する。 23 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 加工食品中の特定原材料の分析法開発および実態調査 食品医薬品部 食品化学課 北川幹也、吉光真人、野村千枝、粟津 薫 ■研究目的 Profilin の検出を目的として、ELISA 系の開発を検討した。 食品アレルギーの原因である特定原材料 5 品目につい 植物間での種特異性は低くかつ、動物には反応しない抗体 て平成 14 年より表示が義務づけられ、厚生労働省より分 が必要であるため、植物で保存性が高くかつ特異的なアミ 析法が通知されている。しかしこの分析法は通知（食発 ノ酸配列を特定し、 これをもとにペプチド抗体 2 種を設計・ 1106001）にもあるように、抽出効率や擬陽性 / 擬陰性 作成した。これらの抗体が果実類の ELISA に適用できる などについて検討する必要がある。さらに、特定原材料 5 可能性があることを確認した。 品目（そば、小麦、落花生、卵、乳）以外に、大豆や甲殻類、 果実類などもアレルギーをひきおこすことが認められ、食 品中の混入実態を明らかにすることが求められているが、 ■誌上発表 なし ■平成 20 年度の研究実施計画 分析法は未だ確立されていない。 1)Profilin の ELISA 系の開発 本研究では、これら特定原材料の分析法を開発し、大阪 前年度に作成した抗体を用いて、ELISA 系およびウエ 府下に流通する食品などへの混入実態を明らかにすること スタンブロッティング系の開発を行う。また、この抗体が により、大阪府民の食の安全に寄与することを目的とする。 シラカバ花粉の抗原についても認識すると予測されること ■研究実施状況 から、実際にシラカバ花粉と反応するか確認する。 1) 調査品目の追加 2) 調査品目の追加 昨年度まで、そば、小麦、乳、卵についての実態調査を 本年度中に、特定原材料として「えび、かに」が追加さ 行ってきたが、今年度より落花生を追加した。その結果、 れることが決まっている。そこで、これらを調査品目とし 予備実験において 1 品目（アーモンドプードル入りケーキ） て追加可能かを検討する。 から基準値未満の落花生を検出した。本品について製造者 3) 分析法の改良 に確認したところ、使用実態はなく混入経路を調査中であ 現在、小麦、そばの確認法として定性 PCR 法を用いて る。 いる。これを SyberGreen を用いたリアルタイム PCR 法 2)Profilin の ELISA 系の開発 果実・ラテックスアレルギーの原因タンパクである 24 （可能であれば FastPCR）とすることにより、分析時間の 迅速化について検討する。 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 食品の放射線照射に関する研究 食品医薬品部 食品化学課 尾花裕孝 共同：古田雅一 ( 大阪府立大学 ) ■研究目的 の検討が必要である。しかし、農薬分析など検査業務で 本研究では放射線照射された食品を、化学分析により検 の LC/MS/MS の使用頻度が高く、現状では 2 ヶ月に 1 週 出することを目指した。 間程度しか利用できず、分析法の改善や多種類の食品での 前半は脂肪を含む食品の放射線照射を、アルキルシクロ 照射検知など LC/MS/MS 測定を頻繁に行うことは困難で ブタノンを指標にした新規分析法を開発し、調理後、長期 あった。 保存後でも照射履歴を検知することを目標とした。 ■結 論 後半は既存の検知法は食品種ごとに手法が大きく異なる アルキルシクロブタノンを指標にした照射検知では、生 ので、食品に共通して含まれる DNA の照射変性成分（5,6- の畜肉食品だけでなく加熱調理した畜肉食品や、長期冷凍 ジヒドロチミジン：ジヒドロチミジン）を指標にし、植物 保存した畜肉食品でも実用レベルの照射履歴を検知できる 性と動物性食品の照射履歴を共通の指標で検知する分析法 ことを示した。しかし、脂肪含有量の少ない植物性食品に の開発を試みた。 ついては適用が困難であった。 ■研究実施状況 植物性だけでなく動物性の食品についても適用できる照 前半部のアルキルシクロブタノンを指標にした分析手法 射指標としてジヒドロチミジンの可能性を検討した。照射 は、同指標のヨーロッパ公定法に比べ操作時間がほぼ半減 線量の大きい黒胡椒や DNA 抽出が容易な食肉類などの検 され、分析精度は同等かそれ以上であった。検出感度にお 知は可能と思われる結果が得られたが、研究の発展的な展 いても、米国などで実施されている 1-2kGy 程度の照射を 開は LC/MS/MS の継続使用が困難であり進捗できなかっ 検知できる感度であった。この手法を用いて、照射検知が た。 照射直後の生の食肉類だけでなく、一年間の冷凍保存後や ジヒドロチミジンが、幅広い食品を対象にした検知指標 ソーセージや牛丼の具など加熱調理後の原材料でも可能あ である可能性を示せたことを一定の成果と考え、本研究を ることを示した。 終了する。 後半はジヒドロチミジンの食品照射検知指標としての可 ■成果の活用 能性について検討した。試料から DNA を抽出し、ヌクレ 現在日本では食品照射は基本的には許可されていない。 オシドへ分解、固相精製などを経て LC/MS/MS によりジ 本研究の成果を活用すれば、食肉類については諸外国で照 ヒドロチミジンを測定した。γ線照射線量に応じて、チミ 射された履歴を検出することが可能となった。 ジンからジヒドロチミジンが生成し、照射した黒胡椒、エ 世界で最も多く放射線照射されている食品は胡椒などの ビ、牛肉など植物性および動物性食品においてジヒドロチ 香辛料である。照射された香辛料の一般的な検出法は、食 ミジンを検出した。黒胡椒の検出感度は諸外国で香辛料に 品に付着する鉱物質が保持する照射エネルギーを加熱発光 適用されている 7-10kGy の照射を検知できる感度であっ させる方法である。この方法は食品そのものの検査ではな たが、日本で照射が許可されているジャガイモでは実用レ いので、発光法において陽性結果が得られた場合他の手法 ベルの照射（0.1-0.5kGy）でのジヒドロチミジンを検出 による確認分析が必要な場合がある。ジヒドロチミジンを できなかった。 指標にする検知法は、そのような場合の選択肢の一つとし ジヒドロチミジンの検出感度を上げるにはさらに分析法 て活用が可能と思われる。 25 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 生薬・漢方製剤の品質評価に関する研究 ―固相抽出を用いた生薬・漢方製剤中のセンノシド類の迅速分析法の開発― 食品医薬品部 薬事指導課 山崎勝弘 ■研究目的 タノール / 水 / ギ酸混液（70：30：2）で溶出させ、2 ml センナ、センナジツ及びダイオウを配合した製剤では指 とした。 標成分であるセンノシド類（センノシドＡ及びＢ）の定量 3)HPLC 分析条件 分析が難しいとされている。そこで、種々の生薬・漢方製 検 出 器：PDA 検 出 器 ( 定 量 測 定 波 長 は 380 nm） ，カ 剤について固相抽出法を検討し、HPLC でセンノシドＡ及 ラ ム：TSKgel 80 TS, 4.6 mm × 15 cm，5 μm， カ ラ ム びＢの両方を定量する迅速分析法を検討する。 温度：40℃，移動相：水 / アセトニトリル / リン酸混液 ■研究実施状況 （800:200:1） ，流量：1 ml/min で行った。 1) 試料の調製 4) 今までの結果 一般用医薬品の瀉下薬数品目を購入した。また、ダイオ この固相抽出法によって、従来から分析の妨害となるほ ウを配合処方した漢方製剤を得るため、防風通聖散などの とんどの夾雑物質が除去できた。さらに検出波長を 380 ダイオウ配合漢方エキスとそれらの処方からダイオウだけ nm とすることで、各製剤中のセンノシドＡ及びＢ付近の を除いた漢方ブランクエキスを調製した。 夾雑ピークが消滅し、良好な定量分析が可能となった。 2) 固相抽出の操作法 試料粉末 1 g をメタノール /0.1% 炭酸水素ナトリウム 混液（7：3）に溶かし 50 ml とし、この液 2 ml を Oasis ■誌上発表 なし ■平成 20 年度の研究実施計画 MAX（強陰イオン交換と逆相系の性質を持つ）に負荷させ、 今回検討した分析方法について、 上記の操作手法もとに、 カートリッジを 1% 酢酸含有メタノール 5 ml、次いで水 各製剤ごとで分析法の真度と精度を検証する。 / メタノール / ギ酸混液（75：25：2）2 ml で洗浄し、メ 26 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 生体試料中の薬物の迅速定量法に関する研究 – バルビツール酸系薬物を対象として – 食品医薬品部 薬事指導課 岡村俊男 ■研究目的 いるアモバルビタール、ペントバルビタール、バルビター 1999 年、日本中毒学会の「分析のあり方検討委員会（現 ル、フェノバルビタールなどを対象薬物とした。前処理は 分析委員会）」は薬物と毒物分析の指針に関する国への提 ポリマー充填剤を充填した Oasis MCX を用いた固相抽出 言（中毒研究 ,12,437-447,1999.）の中で①死亡例の多い 法により行った。HPLC の分析条件として、逆相系のカラ 中毒、②分析が治療に直結する中毒、③臨床医からの分析 ムを用い、移動相としてギ酸・アセトニトリル混液を使用 依頼が多い中毒起因物質、それらの観点から分析が有用と した。検出器はフォトダイオードアレイを用いることによ される中毒起因物質 15 品目を掲げている。これらの中に り、多波長で分析を行った。市販の人血清を用いた添加実 は、催眠薬として用いられるバルビツール酸系薬物があり、 験により、アモバルビタール、ペントバルビタール、バル 主な中毒症状としては血圧低下、ショック、呼吸抑制、 昏睡、 ビタール、フェノバルビタールナトリウムにおいて、良好 体温低下などがある。健康危機管理において中毒起因物質 な回収率が得られた。 となった成分を迅速に分析することは、健康被害拡大防止 を図るうえで重要である。そこで、医療機関等に一刻でも 速く中毒原因物質に関する情報を提供できるように、迅速 ■誌上発表 なし ■来年度の研究実施計画 定量法を開発する。 今回開発したバルビツール酸系薬物と他の中毒起因物質 ■研究実施状況 （アセトアミノフェン、ジアゼパムなど）について一斉分 日本中毒学会が提案した治療に直結するため分析すべき 析法を開発していく予定である。 15 物質を対象に研究を行った。催眠薬として用いられて 27 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 無承認無許可医薬品のスクリーニング検査法の開発 食品医薬品部 薬事指導課 沢辺善之 ■研究目的 の特徴を見い出した。 健康食品等に含まれる化学物質が、 健康食品等に含まれる違法薬物を検索する分析法を開発 この特徴を示した場合、標準物質を測定しなくても同系 する。 の薬物であることを推定することができる。 1)GC-MS を用いた同時多成分のスクリーニング法を検討 し、医薬品のマススペクトルのライブラリーを作成する。 2) 違法薬物のうち生理活性の強いフェネチルアミン系薬 物のスクリーニング法を開発する。 ■研究実施状況 1) 薬物 63 成分につき原体と TMS 誘導体を GC-MS で測 また、フェネチルアミン系薬物を蛍光ラベル化し HPLC により分析することにより、同系の薬物の存在を 推定することが可能であることがわかった。 ■誌上発表 なし ■平成 20 年度の研究実施計画 定し、そのうち 57 成分のマススペクトルをライブラリー 1)GC-MS のマススペクトルのライブラリーを整備する。 化した。ライブラリーを整備することで標準物質を測定 2) 化学構造の系統を推定できる分析法を検討する。 （例え しなくても健康食品等に含まれる薬物の推定が可能とな ば、ED 治療薬であるシルデナフィルは摘発逃れのため る。 に構造を一部変化させた複数の化合物が発見されてい 2)GC-MS を用い、エフェドリン等の数種のフェネチルア ミン系薬物を題材に同系薬物に共通するマススペクトル 28 る。 ） 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 香粧品に配合されるドナー型防腐剤から遊離する ホルムアルデヒドに関する研究 食品医薬品部 薬事指導課 梶村計志、田上貴臣 ■研究目的 製し、60℃の水浴中に 90 分間放置したとき、FA 濃度は 香粧品に配合される防腐剤の中に、分解等によりホルム 約 50ppm に達した。 アルデヒド（FA）を遊離するものの存在が知られており、 3）pH による影響 通称、ドナー型防腐剤と呼ばれている。FA は近年、社会 ブロノポールの分解により遊離する FA 含量は、溶解液 的に大きな問題となっているシックハウス症候群を引きお の pH の影響を大きく受けた。溶解液の pH がアルカリ性 こす原因物質のひとつとして注目をあつめており、一度感 になるほど遊離する FA 量は顕著に増加した。 作すると低濃度の暴露により、自律神経系を中心とした多 4）長期保存試験 彩な症状を呈することが報告されている。さらに、接触性 0.1% 溶液を調製し 25℃で保存したとき、pH8 の溶解 皮膚炎を引きおこすことや、発癌性があることも明らかと 液では、3 日後に FA 含量が約 35ppm に達した。これと なっている。 比較して、pH2 の溶解液では、50 日間保存後も FA はほ 我が国では現在、イミダゾリジニルウレア及び DMDM とんど遊離しなかった。 ヒダントイン以外のドナー型防腐剤の香粧品への配合は、 禁止されている。しかし、欧米では当該防腐剤が一般的に ■誌上発表 1)K. kajimura , T.Tagami,T.Yamamoto and S. 使用されており、香粧品に配合される防腐剤全体の中で、 Iwagami, The release of formaldehyde upon 占める割合もかなり高い。近年、インターネット等の普及 2-bromo-2-nitropropan-1,3-diol(Bronopol) により欧米から個人輸入される香粧品の数が飛躍的に増加 decomposition, J. Health Sci., submitted to しているが、その中にはドナー型防腐剤が配合されたもの ■平成 20 年度の研究実施計画 も多数含まれている。香粧品は、ほぼ毎日使用され且つ人 我が国で化粧品への使用が認められているイミダゾリジ 体に直接接触することから、安全性に関して多大なる配慮 ニルウレアを対象として検討を行う。 が必要である。本研究では、ドナー型防腐剤から遊離する 1）分析法の検討 FA の挙動を明らかにし、そのリスク評価を行うことを目 ホルムアルデヒド（FA）の分析法として、アセチルア 的とする。 セトン法、2,4-DNP 法、アセト酢酸エチル法等が報告さ ■研究実施状況 れているが、イミダゾリジニルウレアの分解により遊離す 欧米で化粧品の防腐剤として使用される頻度が高いブロ る FA を分析するために最適な方法を検討する。 ノポールを対象として検討を行った。 2）FA の遊離に影響を及ぼす基礎的条件の検討 1) 分析法の検討 イミダゾリジニルウレアの試験溶液を作製し、FA の遊 種々の分析法を比較し、迅速性及び特異性に優れていた 離に影響を及ぼす基礎的条件（pH、光、温度、塩濃度等） HPLC を用いた 2,4-DNP 誘導体化法を分析法として選択 について検討する。 した。 3）長期保存試験 2) 温度による影響 イミダゾリジニルウレアの試験溶液を作製し、50 日間 ブロノポールの分解により遊離するホルムアルデヒド にわたり、経時的に遊離してくる FA 含量の測定を行う。 （FA）は温度による影響を大きく受けた。0.1% 溶液を調 なお、保存条件は、上記（基礎的条件）検討結果をふまえ、 設定する。 29 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 蛍光染色法を用いた化粧品中の微生物検出に関する研究 食品医薬品部 薬事指導課 皐月由香 ■研究目的 各条にも収載されており、超ろ過、イオン交換、蒸留又は 消費者の安全に対する配慮から、防腐剤の使用量を低減 それらの組み合わせにより精製した水とある。そこで、精 した化粧品が市場に出回っている。化粧品の製造において、 製水の範疇であるイオン交換水、逆浸透膜とイオン交換の 化粧品基準の範囲内であれば様々な原料を用いることがで 組み合わせによる水及び常水を用いて化粧品を作成し、マ きるため、防腐効果を十分に確認しないで新規原料を使用 イクロコロニー法によりぞれぞれの微生物数の比較をおこ したり、防腐剤の使用量を低減することによって、製品の なった。また、防腐剤の影響を検討するため、防腐剤を配 品質への影響が懸念される。そこで、化粧品の微生物汚染 合していない化粧品と防腐剤を配合した化粧品について、 について、蛍光染色法を用いて調査する。また、医薬品の 一定期間保存後の微生物数の比較をおこなった。しかし、 製造用水において、微生物の存在が報告されているため、 現在のところ明確な差は認められていない。 化粧品を製造する際の製造用水の品質により、防腐剤の使 用量に影響するかどうか検討する。 ■研究実施状況 ■誌上発表 なし ■平成 20 年度の研究実施計画 化粧品を製造する際に使用される水として、「精製水」 化粧品中の自家蛍光物質の影響を減らすため、前処理方 が多いと考えられる。この精製水は、日本薬局方の医薬品 法の検討をおこない、防腐剤を低減することによる製品へ の影響調査に取り組む。 30 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 研究終了 生薬の残留農薬による汚染の実態に関する研究 食品医薬品部 薬事指導課 梶村計志、田上貴臣、皐月由香、中村暁彦 ■研究目的 生薬は、各種疾患の予防および治療に繁用されているが、 長期間にわたり連用される可能性が高いことから、安全性 実態調査を行い、特定の生薬から有機リン系あるいはピレ スロイド系農薬が検出されることを見出した。 ■結 論 に関して多大なる配慮が必要であると考えられる。 しかし、 1990 年代半ばまでの実態調査では、高濃度の有機塩素 生薬中に残留する農薬の実態に関しては不明な部分が数多 系農薬に汚染された試料も多数認められた。しかし、その く残されており、1997 年まで、我が国はもとより、諸外 汚染レベルは経年的に低下し、90 年代後半以後の調査で 国においても残留基準が設定されていなかった。我が国で は、高濃度の塩素系農薬に汚染された試料は確認されなく は現在でもわずか 2 種類の農薬について残留基準が定め なった。近年の調査では、有機リン系あるいはピレスロイ られているだけである。大阪府において医薬品産業は地場 ド系農薬の残留が認められる試料も散見される様になって 産業としての位置付けをなされているが、なかでも生薬は きている。 全国取り引き量の約 80％が道修町を中心とする大阪市場 ■成果の活用 で取り引きされている。従って、本府の薬務行政において 本研究における成果は、1997 年 に公布された第 13 改 も、生薬の安全性、品質に関する問題は重要である。本研 正日本薬局方第一追補において、ニンジン及びセンナに 究では、生薬中に残留する農薬の実態を明らかにし、薬務 BHC, DDT の残留基準値を設定するための基礎データー 監視行政の基礎資料とすることを目的とする。 となった。また、我が国最大の生薬取引市場をかかえる本 ■研究実施状況 1) 有機塩素系農薬を対象とした分析法の開発 有機塩素系農薬（10 種類）を対象とし、GC-ECD およ 府の薬務行政を側面から支える有益な資料となった。 1) 梶村ら , センナ中に残留する有機塩素系農薬の実態調 査 -1991 〜 2005 年における経年変化に び GC-MS による一斉分析法を開発した。 ついて -, 医薬品研究、37, 671（2006）. 2) 生薬中に残留する有機塩素系農薬 2)T.Tagami et al., Simultaneous Analysis of 10 生薬中に残留する有機塩素系農薬について実態調査を行 い、BHC が多くの種類の生薬から検出されることを見出 した。DDT 系農薬は、BHC と比較し、その汚染レベルが 低かった。 3) ニンジン、センナを対象とした有機塩素系農薬の経年 的な実態調査 Pyrethroid Pesticides in Natural Medicines by GC/MS with Negative Chemical Ionization, YAKUGAKU ZASSHI, 126, 991 (2006). 3) 梶村ら , 1990 〜 2005 年に実施した人参・紅参に対す る有機塩素系農薬の実態調査 , 大阪府立公衛研所報 , 44, 61（2006）. 1990 年代当初において、有機塩素系農薬による汚染が 4) 梶村ら , 人参・紅参中に残留する有機塩素系農薬の実態 特に著しかったニンジン、センナを対象とし、経年的に実 調査 -1990 〜 1999 年における残留値の推移について -, 態調査を行い、その汚染レベルが経年的に低下してきてい 医薬品研究 , 32, 567（2001）. ることを確認した。 4) 有機リン系およびピレスロイド系農薬を対象とした分 析法の開発 有機リン系農薬（12 種類）を対象とし、GC-MS（EI） による一斉分析法を開発した。また、ピレスロイド系農薬 （10 種類）を対象とし、GC-MS（NCl）による一斉分析法 を開発した。 5) 有機リン系およびピレスロイド系農薬を対象とした実 態調査 有機リン系農薬およびピレスロイド系農薬を対象とした 5) 梶村ら , 生薬中の化学的異物 ( 有機塩素系残留農薬 ) の 分析法と現状 , 防菌防黴 , 24, 609(1996）. 6) 梶村ら , 薬用人参中に残留する有機塩素系農薬の GCMS を用いた分析について , 大阪府立公衛研所報 , 29, 21（1995）. 7) 梶村ら , 精油含有生薬中に残留する有機塩素系農薬の 分析法 , 大阪府立公衛研所報 , 28,63（1994） 8) 梶村ら , 生薬中に残留する有機塩素系農薬の分析法に ついて（第１報）, 大阪府立公衛研所報 , 27, 21（1993）. 他 2 編 31 平成 19 年度 研究実施 / 終了報告書 開発研究 研究終了 生薬に残留する農薬の一斉分析法の開発 及びその実態調査 食品医薬品部 薬事指導課 田上貴臣、梶村計志 ■研究目的 2）直線性の検討 漢方薬（生薬を原料として製造される）は、各種疾患の 56 種類の農薬について、検量線を作成したところ 50 予防及び治療に使用されており、長期にわたり連用される － 500ppb の範囲において良好な直線性を示した。 可能性が高いことから、食品と同様、その安全性に関して 3）添加回収試験 配慮が必要である。近年、輸入食品から検出される残留農 輸入量の多い生薬のうちダイオウ、カッコン、ケツメイ 薬が、食に対する安全性の問題として取り上げられている シを対象として添加回収試験を行ったところ、回収率は が、我が国で使用されている生薬も大部分が輸入品である。 70 － 111％であり、良好な結果が得られた。 現在、わが国においては、ポジティブリスト制の導入によ 4）特異性の検討 り、農産物には約 800 種類の農薬についての残留基準が ダイオウ、カッコン、ケツメイシにおいては、56 種類 定められているにもかかわらず、医薬品原料である生薬は、 の農薬のピークの付近に夾雑ピークが認められなかった。 食品衛生法による残留農薬の規制を受けず、日本薬局方の ■結 論 規定により、一部の生薬（13 種類）について、わずか 2 今回確立した分析法は、良好な直線性を有するもので 種類の農薬（Total BHC，Total DDT）の残留基準が定め あった。また、生薬に対する添加回収試験では、良好な結 られているに過ぎない。また、生薬中の残留農薬の分析法 果が得られた。加えて、迅速性に優れることから、今回確 及びその実態調査についての報告は、農産物に比べて極め 立した分析法は、生薬中の残留農薬の分析に有用であると て少なく、生薬中の残留農薬の実態には不明な部分が多い。 考えられた。 漢方薬の安全性を確保するために、生薬中の残留農薬の実 ■成果の活用 態を解明することを目的として、生薬中の残留農薬の一斉 今回確立した分析法は、56 種類の農薬を同時に分析す 分析法を開発し、実態調査を行う。 ることができ、市場に流通する生薬中の残留農薬の分析に ■研究実施状況 生薬中の 56 種類の残留農薬（有機塩素系農薬 17 種類、 活用できるものと考えられる。 1）Tagami T, Kajimura K, Satsuki Y, Nakamura A, 有機リン系農薬 30 種類、ピレスロイド系農薬 9 種類）の Okihashi M, Takatori S, Kakimoto K, Obana H, 一斉分析法を確立するために、以下の検討を行った。 Kitagawa M: Rapid analysis of 56 pesticide residues 1）昇温条件の検討 in natural medicines by GC/MS with negative GC/MS の昇温条件を検討し、56 種類の農薬が分析可能 chemical ionization.J Nat Med,62,126-129(2008) な昇温条件を設定した。 32