GlobalFiler Express PCR Amplification Kit

クイックリファレンス
GlobalFiler™ PCR Amplification Kit – PCR
Amplification and CE
Pub. No. 4482114 Rev. A
参考： 安全およびバイオハザードのガイドラインについては、『GlobalFiler™ PCR Amplification Kit User Guide（Pub. no. 4477604）』
の「Safety」のセクションをご参照ください。各薬品については、安全性データシート（SDS）をよく読み、取扱い上の指示に従っ
てください。使用時には、適切な保護めがね、保護服、保護手袋を着用してください。
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製品の概要 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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前提条件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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PCR の実施 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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アレルラダー要件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
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電気泳動装置要件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
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データ解析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
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限定製品保証 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
製品の概要
GlobalFiler™ Kit（200 reaction Part no. 4476135 または 1000 reaction Part no. 4482815）は、21 の常染色体 STR 座位、アメロゲニ
ン、1 つの Y STR 座位、および 1 つの Y 挿入／欠失（Y インデル）座位を増幅する 6 色素ショートタンデムリピート（STR）マル
チプレックスアッセイです。
前提条件
• PCR 後の手順を実施する領域に本書を置きます。
• サンプルをセットアップします（『Quick Reference Pub. no. 4477594』で説明）。
PCR の実施
重要！ GlobalFiler™ Kit は、Veriti® Thermal Cycler、金めっきサンプルブロック（Part no. 4375786）または銀サンプルブロック
（Part no. N8050001）付きの GeneAmp® PCR System 9700 との併用に関して検証済みです。
1. サーマルサイクリング条件をプログラムします。
重要！ GeneAmp PCR System 9700 を使用する場合には、Max ランプモードを選択します。Veriti® Thermal Cycler を使用す
る場合には、100% のランプ速度を選択します。9600 emulation mode は絶対に使用しないでください。
初期インキュベーション
ステップ
サイクル（29 サイクル）
変性
ホールド
95 ℃
1分
最終伸長
最終ホールド
ホールド
ホールド
60 ℃
10 分
4℃
最長 24 時間
アニール／伸長
サイクル
94 ℃
10 秒
59 ℃
90 秒
2. プレートをサーマルサイクラーに装填し、加熱カバーを閉じます。
重要！ 銀または金めっき銀ブロック付きの 9700 サーマルサイクラーを使用する場合は、サーマルサイクリング中に蒸発する
のをさらに防ぐため、プレートの上部に MicroAmp® Compression Pad（Part no. 4312639）を置き
ます。Veriti® Thermal Cycler には、圧縮パッドは必要ありません。
法医学または親子鑑定用にのみ使用できます。
3. 測定を開始します。
4. 測定が完了したら、増幅された DNA を保管します。
DNA の保管が下記の場合 ...
下記の場所に保管 ...
<2 週間
2～8℃
>2 週間
-25 ～ -15 ℃
重要！ 増幅された産生物は遮光してください。
アレルラダー要件
サンプルを正確にジェノタイピングするため、未知のサンプルと共にアレルラダーサンプルを増幅する必要があります。
装置
測定するアレルラダーの数
1 回のインジェク
ション＝
アレルラダーあたりのサンプルの数
3130
4 回のインジェクションあたり 1
4 サンプル
15 サンプル + 1 アレルラダー
3130xl
1 回のインジェクションあたり 1
16 サンプル
15 サンプル + 1 アレルラダー
3500
3 回のインジェクションあたり 1
8 サンプル
23 サンプル + 1 アレルラダー
3500xL
1 回のインジェクションあたり 1
24 サンプル
23 サンプル + 1 アレルラダー
重要！ 検査室の温度の変動は、フラグメント遊走速度の変化と測定間のサイジングの変動を引き起こすことがあります。測定速
度の通常の変動に対応できる、上記のアレルラダーインジェクションの頻度をお勧めします。ただし、内部バリデーション試験中
に、検査室環境での全サンプルの正確なジェノタイピングを確保するのに必要なアレルラダーインジェクションの頻度をご確認く
ださい。
同じサンプルについて得られるサイズ値は、ポリマーマトリックスや電気泳動条件が異なるために装置プラットフォームの間で異
なることがあるため、サンプルと同じ条件下で測定したアレルラダーを用いてジェノタイピングすることが不可欠です。
電気泳動装置要件
3130 Series 装置要件（使用する前に、ユーザーガイドの説明に従って 6 色素ライセンスを有効化します）
遺伝子ア
ナライ
ザー
オペレー
ティングシ
ステム
データ収
集ソフト
ウェア
3130
Windows® 7
Data
Collection
Software 4
3130xl†
その他のソフト
ウェア
3130/3730 DC v4
6-Dye Module v1
（Life Technologies
までお問い合わ
せください）
ランモジュールおよび条件
参考資料
• HIDFragmentAnalysis36_POP4_1
Applied Biosystems 3130 Series
Data Collection Software 4
Getting Started Guide
(Pub. no. 4477796)
インジェクション条件：3 kV/5 秒
測定条件：15 kV/1500 秒
• 色素セット J6
• HIDFragmentAnalysis36_POP4xl_1
インジェクション条件：3 kV/10 秒
測定条件：15 kV/1500 秒
• 色素セット J6
†
2
GlobalFiler™
Kit に関するバリデーション試験は、3130xl、3500 または 3500xL 構成を用いて実施しました。
GlobalFiler™ PCR Amplification Kit – PCR Amplification and CE クイックリファレンス
3500 Series 装置要件（使用する前に、ユーザーガイドの説明に従って HID Updater を実行します）
遺伝子アナ
ライザー
3500†
オペレー
ティングシ
ステム
データ収
集ソフト
ウェア
Windows
Vista®
3500 Data
Collection
Software v1
その他のソ
フトウェア
HID Updater
3500 DC v2
(Part no.
4480670)
ランモジュールおよび条件
参考資料
• プレートテンプレート：6dye_36_POP4
Applied Biosystems 3500/
3500xL Genetic Analyzer User
Guide (Pub. no. 4401661)
• アッセイ：GF+Norm_POP4 および
GF_POP4、下記の条件を使用する装置プ
ロトコル HID36_POP4_J6_NT3200 が含
まれているもの：
– ランモジュール：HID36_POP4
HID Updater 3500 Data
Collection Software v2 Release
Notes
– インジェクション条件：1.2 kV/15 秒
– 測定条件：13 kV/1550 秒
– 色素セット J6
3500xL†
• プレートテンプレート：
6dye_36_POP4_xl
• アッセイ：GF+Norm_POP4_xl および
GF_POP4_xl、下記の条件を使用する装
置プロトコル HID36_POP4xl_J6_NT3200
が含まれているもの：
– ランモジュール：HID36_POP4xl
– インジェクション条件：1.2 kV/24 秒
– 測定条件：13 kV/1550 秒
– 色素セット J6
3500†
Windows® 7
3500xL†
3500 Data
Collection
Software v2
HID Updater
3500 DC v2
(Part no.
4480670)
上記の 3500 Data Collection Software v1 と同
じ
3500/3500xL Genetic Analyzer
User Guide (Pub. no. 4476988)
HID Updater 3500 Data
Collection Software v2 Release
Notes
† GlobalFiler™ Kit に関するバリデーション試験は、3130xl、3500 または 3500xL 構成を用いて実施しました。
電気泳動の実施
電気泳動のサンプルは、搭載直前に準備します。
1. サンプルの準備に必要な Hi-Di™ Formamide とサイズスタンダードの容量を計算します。
試薬
反応 1 回あたりの容量
GeneScan™
Hi-Di™
600
LIZ®
Formamide
Size Standard v2.0
0.4 µL
9.6 µL
参考： 試薬分注の際に発生するロスを考慮して多めの容量を準備するため、計算に追加のサンプルを含めてください。
重要！ 表に示したサイズスタンダードの容量は推奨量です。ご希望の実験と結果に基づいて適切なサイズスタンダードの量を
特定してください。
2. 適切なサイズのポリプロピレンチューブに、必要な容量のコンポーネントをピペットで分注します。
3. チューブをボルテックスにかけてから、短時間遠心機にかけます。
GlobalFiler™ PCR Amplification Kit – PCR Amplification and CE クイックリファレンス
3
4. MicroAmp® Optical 96-Well Reaction Plate の各ウェルに、以下を加えます。
• 10 µL のホルムアミド：サイズスタンダード混合物
• 1 µL の PCR 産物またはアレルラダー
参考： ブランクのウェルについては、10 µL の Hi-Di™ Formamide を添加します。
5. 適切なセプタで反応プレートをシールし、プレートを短時間ボルテックスして遠心機にかけ、各ウェルの内容物が混合され、底
に集まったことを確認します。
6. 95 ℃のサーマルサイクラーで反応プレートを 3 分間加熱します。
7. プレートをすばやく氷上に移し、3 分間冷却します。
8. プレートアセンブリをオートサンプラーで準備します。
9. 電気泳動測定を開始します。
データ解析
データ解析用に GeneMapper® ID-X ソフトウェアをセットアップするには、『GlobalFiler™ PCR Amplification Kit User Guide
』
、
（Pub. no. 4477604）』、『GeneMapper® ID-X Software v1.4 New Features and Installation Procedures User Bulletin（Pub. no. 4477684）
または『GeneMapper® ID-X SoftwareVersion 1.0 Getting Started Guide（Pub. no. 4375574）
』
）をご参照ください。
限定製品保証
Life Technologies Corporation またはその関連会社は、Life Technologies のウェブサイト（www.lifetechnologies.com/
termsandconditions）に記載されている Life Technologies の General Terms and Conditions of Sale（販売に関する一般的な条件）
の定めに従って製品を保証します。ご質問のある方は、www.lifetechnologies.com/support で Life Technologies までお問い合わ
せください。
Translated from English Pub. no. 4477593 Rev. A
法医学または親子鑑定用にのみ使用できます。
本書に含まれている情報は、予告なく変更されることがあります。
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BUT NOT LIMITED TO THOSE OF MERCHANTABILITY, FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE, OR NON-INFRINGEMENT. TO THE EXTENT ALLOWED BY LAW, IN NO EVENT SHALL LIFE
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June 2013