グルコースユニットへの変換法

糖鎖分析メソッド集
グルコースユニットへの変換法
Ver. 20131129
Written by S. Natsuka
方法の概要
Size-fractionation HPLC の溶出位置を標準化する方法。HPLC の溶出時間を
比較することで同定を行う場合、実験間でのばらつきを少なくすればそれだけ
正確な解析が可能になる。しかし、溶離液組成のわずかな違いやカラムの劣化な
ど様々な要因により溶出時間は変動する。そこで基準物質を用いた標準化が行
われる。Size-fractionation HPLC では分子サイズが異なるイソマルトオリゴ糖
混合物を用いて PA 糖鎖の標準化を行う。
この方法を使った時に引用すべき論文
Shunji Natsuka, Sumihiro Hase. Analysis of N- and O-glycans by
pyridylamination. In Method in Molecular Biology,Vol. 76: Glycoanalysis
Protocols (Hounsell,E.F. ed) Humana Press Inc. pp101-113 (1998).
ピリジルアミノ化イソマルトオリゴ糖（PA-IMO）の調製
標識物の市販品（タカラバイオ）もあるが、自ら調製する際には市販のデキ
ストラン（1,6 グルカン）を部分酸加水分解して得られたオリゴ糖をピリジル
アミノ化して作る。あるいは市販のイソマルトオリゴ糖混合物（低重合度のも
のが主）をゲルろ過などで分け、重合度の高いものが濃縮されるように再混合
した後、ピリジルアミノ化して作る。
Size-fractionation HPLC での分離
分離条件は「HPLC 条件」を参照。
PA-IMO の size-fractionation HPLC
標準曲線の作成とグルコースユニットの算出
1. PA-IMO を size-fractionation HPLC で展開する。
2. Excel を用いて、溶出時間を横軸、重合度を縦軸にとりプロットする。
3. 五次の多項式近似曲線を作成する。係数は 6 桁必要。
4. PA-糖鎖の溶出時間を近似曲線の数式に代入し相当する重合度（グルコース
ユニット）を小数点以下 2 桁まで求める。
備考：グルコースユニットを求めるための Excel ワークシートが HP からダウ
ンロード可能である。