蛋白質核酸酵素:核酸のキャピラリー電気泳動

特集 キャピラリー電気泳動
核 酸 の キャピラリー 電 気 泳 動
馬場嘉信
内 径100、μm以
下 の 溶融 シ リカ キ ャ ピラ リー 内 で電 気 泳 動 を 行 な うキ ャ ピ ラ リー一電 気 泳
動 は ， 従 来 の ゲル 電気 泳 動 やHPLCと
比 較 して 非 常 に 高 い分 離 能 を有 す る 方 法 と して，
分 子生 物 学 の分 野 にお い て も 注 目を 集 め て い る新 しい 分 離 法 で あ る 。特 に ， キ ャ ピ ラ リー
中 に ゲル あ る い は ポ リマー 溶 液 を 満 た した キ ャ ピラ リー 電 気 泳 動 は ，DNAを
Database Center for Life Science Online Service
分 解 能 で分 離 で き る と こ ろ か ら， 次世 代 の ヒ ト ・ゲ ノムDNA解
高速かつ高
析 装 置 の有 力 な 候 補 と し
て期 待 され て い る。 本 稿 で は， 核 酸 の新 しい 分 離 法 で あ る キ ャ ピ ラ リー 電 気 泳 動 の 基 礎 を
中 心 に，DNAシ
ー ク エ ン シ ング な ど ヒ ト ・ゲ ノ ム 解析 へ の応 用 に つ い ての 最 新 の 研 究 動
向 を 紹 介 した い 。
は じめ に 核 酸 の分 離 に は， 従 来 ， ゲ ル 電 気 泳 動 と
HPLCが
広 く用 い られ て きた が ，最 近 は， キ ャ ピラ リー
に 有 効 で あ る こ と が 明 ら か と な っ て き た8,23 29;）
。こ れ ら
の 方 法 は ， ヒ ト ・ ゲ ノ ム 解 析 に お け るDNAの
高速
電 気 泳 動 （capillary electrophoresis） が そ の分 離 能 力 の
シ ー ク エ ン シ ン グ30∼40）
，DNAの
高 さ か ら注 目を 集 め て い る1 7)。種 々 の分 子 量 の 核 酸 を
merase 緩衝 液 の みを 満 た した キ ャ ピラ リー中 で電 気 泳 動 させ る
グ ，DNA診
と，サ イ ズ の小 さい 核 酸 も大 き い核 酸 も同 じ程 度 の移 動
るま で に発 展 して きて い る。 本 稿 で は ， 筆 者 らの試 み を
度 で 泳動 し， 核 酸 を 分 離 す る こ と は で き な い8）
。 しか
し， キ ャ ピラ リー中 に ゲル を 充 填 した キ ャ ピ ラ リー ゲル
chain reaction）
多 型 解 析25），PCR（poly-
解 析 ， サ ザ ン プ ロ ッテ ィ ン
断 ・鑑 定 へ の 応 用 お よ び 装 置 化 が 検 討 さ れ
中 心 に キ ャ ピ ラ リ ー 電 気 泳 動 に よ るDNA解
析 の 基礎
と応 用 に つ い て 概 説 し た い 。
電 気 泳 動 （capillary gel electrophoresis）5∼7，9∼221を
用い
る と， 幅 広 い分 子量 範 囲 の核 酸 を 非常 に高 い分 解 能 で分
Ⅰ
． 核 酸 の 分 離 に 用 い られ るキ ャピ ラ リ一
離 す る こ とが で きる。 これ は ， ゲル マ トリ ッ クス の分 子
ふ るい効 果 に よ り，す ば ら しい分 別能 力 を 発 揮 す る こ と
キ ャ ピ ラ リー電 気 泳 動 の装 置 は ， キ ャ ピラ リー以外 に
に起 因 して い る。 た とえば ， キ ャ ピラ リー ゲ ル電 気 泳動
は ， 高電 圧 装 置 と 検 出器 だ け の 簡 単 な もの で あ る1 4）
。
は ，500塩 基 （b） ま で の1本 鎖DNAを
キ ャ ピ ラ リー は ， キ ャ ピラ リー 電 気 泳 動 の心 臓 部 とも い
違 い で わず か30分
，1bの
みの
か ら1時 間 以 内 に分 離 す る こ とが で
え る部 分 で あ り，高 純 度 シ リカ か らで きて お り， 内径 が
きる ほ どの性 能 を 有 して い る。 また ， 同 じ方 法 に よ り，
50∼100μm，
50塩
基 対 （bp）か ら20，000bpのDNA断
れ る。 また ，そ の外 側 を ポ リイ ミ ドで コ ーテ ィ ン グす る
bp程
度 の違 い で30分
片 を10
外 径 が150∼400μm程
度 の もの が用 い ら
以 内 に分 離 可 能 で あ る。 さ ら
こ とで ， キ ャ ピラ リーが 折 れ に くい よ うに 工 夫 され て い
に ，分 子 ふ るい 効 果 を 有 す る ポ リマ ー溶 液 を 利 用 した キ
る。 核 酸 を 分 離 す る場 合に は ， キ ャ ピ ラ リー ゲル電 気 泳
ャ ピラ リー電 気 泳 動 が ，2本 鎖DNA断
動 に お い ては ， キ ャ ピ ラ リー中 に ポ リア ク リル ア ミ ドな
Yoshinobu College
Capillary
Baba,神
of
片 の 高速分離
戸 女 子 薬 科 大 学 薬 学 部
（〒658神
戸 市 東 灘 区 本 山 北 町4-19-1）
Pharmacy，Motoyama，Kitamachi，Higashinada-ku，Kobe
Electrophoresis of Nucleic
［Department
of Chemistry，Kobe
Womett’s
658，Japanコ
Acids
【キ ャ ビ ラ リー 電 気 泳 動 】 【DNA解
析 】 【ヒ ト ・ゲ ノム解 析 】
2243
20
蛋 白 質 核 酸 酵 素 Vol38No.13（1993）
どの ゲル を充 填 した ， ゲ ル充 填 キ ャ ピ ラ リー が 用 い ら
れ9 22)，ポ リマ ー溶 液 を 利 用 した キ ャ ピ ラ リー 電 気 泳 動
で は ， 内壁 を化 学 修 飾 した キ ャ ピラ リー が お も に用 い ら
れ る8,23 29）。
ゲル充 填 キ ャ ピ ラ リー に は ， ポ リア ク リル ア ミ ドゲル
が お もに用 い られ て お り， ポ リア ク リル ア ミ ドゲル充 唄
キ ャ ピ ラ リー の調 製 は， お も に2種 類 の方 法 で行 なわ れ
て い る。 これ ら は ，① キ ャ ピラ リー 内壁 を前 処 理 した の
ち ， ア ク リル ア ミ ドを キ ャ ピラ リー 内 で ゲル化 し， キ ャ
ピ ラ リー 内壁 の シ ラノ ー ル基 とゲ ル化 した ポ リア ク リル
ア ミ ドの一 部 を化 学 結 合 させ る 方 法9，10）
， ② キ ャ ピラ リ
ー 内 壁 を未 処 理 の ま ま ア ク リル ア ミ ドを キ ャ ピ ラ リー 内
で ゲル化 す る方 法11,12)，
で あ る。 これ ら の方 法 は ， キ ャ
ピ ラ リー 内壁 の前 処 理 を 行 な うか 否 か の違 い のみ で， ほ
とん どは共 通 の操 作 を 行 な う。
Database Center for Life Science Online Service
方 法 ① では ， 以 下 の手 順 で， ゲ ル充 填 キ ャ ピ ラ リーを
図1．
キ ャ ピ ラ リー中 に 溶 液 を 通 す 装 置
（文 献11よ
調 製 す る。 方 法 ② で は，以 下 の 手 順 の うち，（2） を省 略
り引 用 ）
す れ ば よい。
（1） 内径50∼100μmの
10∼100cmに
キ ャ ピ ラ リー を適 当 な長 さ
切 る。キ ャ ピラ リー の外 側 に コー テ ィ ン
キ ャ ピ ラ リー 中 に安 定 に存 在 で き る。 し た が っ て ，1
本 の ゲル充 填 キ ャ ピ ラ リー で100回
程度 く り返 し て
グ して あ る ポ リイ ミ ドを は が して ，適 切 な位 置 に検 出用
DNAを
の 窓 を あ け る。
か か るな どの欠 点 が あ る。 ② の方 法 は 非 常 に簡 便 で あ る
（2） キ ャ ピラ リ ー に0．1MNaOH水
分離 す る こ とが で き る。 しか し， 調 製 に 時間 が
溶液を通す。
が ， キ ャ ピ ラ リー 中 で ゲル が 安 定 に存 在 で き ない の で ，
さ らに ，二 官 能 基 を 有 す る試 薬 ［3-メタ ク リ ロキ シ プ ロ
20回 程 度 の く り返 し測 定 しか 行 な うこ とが で きな い。
ピル トリメ トキ シ シ ラ ン ：
キ ャ ピ ラ リー ゲル電 気 泳動 の 場 合 は ， キ ャ ピラ リー 内壁
CH2＝C（CH3）−OCO−
（CH2）3−Si（OCH3）3]
溶液 を キ ャ ピラ リー に通 し， 数 時 間 放 置 す る。 そ の後 ，
の化 学 修飾 は ， ゲ ル充 填 キ ャ ピ ラ リー の安 定 性 に は影 響
す るが ，核 酸 の分 離 に は ほ とん ど影 響 を 与 え な い。
メ タ ノー ルお よび 水 でキ ャ ピラ リー 内 を洗 浄 す る。
ポ リマ ー溶 液 を利 用 した キ ャ ピラ リー電 気 泳 動 で は ，
（3） ア ク リル ア ミ ド の 保 存 溶 液 （40％T,0∼5%
内 壁 の シ ラ ノー ル基 を非 架 橋 ポ リア ク リル ァ ミ ドな どで
C） お よび緩 衝 液 を調 製 す る。
（4） ア ク リル ア ミ ド溶 液 を緩 衝 液 で 希 釈 し，DNA
の サ イ ズ に あわ せ て適 当 な ゲ ル濃 度 に調 節 す る。
（5）
この溶 液 を超 音 波 で よ く脱 気 した 後 ，過 硫 酸 ア
化 学 修 飾 した キ ャ ピ ラ リー が 用 い られ る8，2329)。
キ ャ ピ
ラ リー内壁 を化 学 修 飾 す る際 に は ， 図2に 示 す よ うに ，
二 官 能 基 を有 す る試 薬 （3-メタ ク リ ロキ シ プ ロ ピル トリ
メ トキ シ シ ラ ン） を介 して， 非 架 橋 ポ リア ク リル ア ミ ド
ンモ ニ ウム とテ トラメ チ ル エ チ レ ン ジア ミン （TEMED）
とシ ラ ノ ール基 を化 学 結 合 さ せ る41)。ま た ， 市 販 の化 学
を 加 え て， キ ャ ピ ラ リー中 に通 す 。
修 飾 キ ャ ピ ラ リー を使 用 す る こ と も で き る。 化 学 修 飾 し
（6） ゲ ル化 が 終 了 す る ま で 数 時 間 か ら一 夜 放置 す
る。
キ ャ ピラ リーに 溶 液 を 通 す 場 合 に は ，図1に 示 す よ う
な ，簡 単 な 装 置 を 用 い る。 こ の装 置 の三 角 フ ラ ス コを ア
てい な い キ ャ ピ ラ リー を用 い て ， 核 酸 の分 離 を行 な う こ
と も可 能 で あ るが ，化 学 修 飾 した キ ャ ピラ リーを用 いた
場 合 と比較 して核 酸 の分 離 能 が 低 下 して しま う8)。
これ らの キ ャ ピラ リー に よ り核 酸 を 分 離 す る際 に は ，
ス ピ レー タで 減圧 す れ ば ， キ ャ ピ ラ リー に溶 液 を満 た す
緩 衝液 と して，100mM程
こ とが で きる。 以 上 の よ うな方 法 で ， ゲ ル充 填 キ ャ ピラ
液 （pH8程
リーを 調製 す る こ とが で きる。 方 法 ① で は ， 用 い た 二 官
剤 と して尿 素 ， ホ ル ム ア ミ ドな どが 用 い られ る。 ゲル充
能 基 を 有 す る試 薬 を介 して ポ リア ク リル ア ミ ドゲ ルの 一
填 キ ャ ピラ リー の場 合 のサ ン プル 注 入 の際 には ， キ ャ ピ
部 とキ ャ ピラ リー の 内壁 が化 学 結 合 す るた め に ， ゲル が
ラ リー の一 端 と陰 極 側 の電 極 を サ ン プル チ ュ ー ブに両 方
2244
度 の トリスーホ ウ酸-EDTA溶
度 ） が お もに用 い られ ， 必 要 な らば， 変 性
21
核 酸 の キ ャ ピ ラ リー 電 気 泳 動
Database Center for Life Science Online Service
図2．
入 れ ，5∼10kVの
電圧 を1∼10秒
非 架 橋 ポ リア ク リル ア ミ ドに よ る キ ャ ピ ラ リー内 壁 の 化 学 修 飾
間 印 加 して，電 気 泳
動的 に行 な う。 ポ リマ ー溶 液 を利 用 した キ ャ ピ ラ リー 電
気 泳 動 で は ， サ ン プル注 入 は ，電 気 泳 動 法 以 外 に 加 圧 法
あ るい は 吸 引 法 に よ り行 な う こ とも で き る。 核 酸 の検 出
は ，HPLCと
同様 のUV検
出 器 に よ り， 泳 動 して きた
DNAの260nm付
近 の 吸収 を モ ニ タ ーす る。UV検
器 は ，DNAの
マ ー カ ー な どの標 準 試 料 を 検 出 す るに は
充 分 で あ るが ， ヒ ト ・ゲ ノムDNAを
出
解 析 す るた め に
は検 出 感 度 が低 す ぎる の で ， レー ザ ー蛍 光 検 出 器 な ど の
高 感 度 検 出法 を 採用 した キ ャ ピ ラ リー電 気 泳 動 の 装 置 化
が検 討 さ れ て い る。
Ⅱ
． ゲ ル お よび ポ リマ ー 溶液 中 で の泳 動
ゲル電 気 泳 動 に お け る核 酸 の分 離 は ， 分 子 ふ るい 効 果
に よ り達 成 され る。 そ の メカ ニ ズ ムは ， 核 酸 のサ イ ズ と
ゲル マ ト リッ クス の ボ ア の大 き さ の関 係 に よ りい くつ か
の領 域 に分 類 さ れ る こ とが知 られ てい る42 46)。
そ れ らの
うち ， キ ャ ピ ラ リー ゲル電 気 泳動 に関 連 して い る のは ，
図3に 示 す2つ の 領域 ：オ グス トン領 域42 44)と レプ テ
ーシ
ョン領域45,46）
であ る。
オ グス トン領 域 （図3a）
に お いて ， 核 酸 は， 球 状 に
近 似 す る こ とが で き， レプ テ ー シ ョン領 域 （図3b）
の
よ うに ，核 酸 と ゲル マ ト リヅ クスが 絡 み 合 うよ うな 現 象
図3．2つ
の領 域 （a： オ グ ス トソ領 域 ，b： レプ テ
ー シ ョン領 域 ） で の ゲル マ トリ ッ クス 中 （
細 線）
にお け るDNA（
太線） の挙動
は起 こ らな い。 オ グス トン領 域 で の核 酸 のサ イ ズ （N）
と電 気 泳 動 の移 動 度 （μ） との関 係 は ， 式 （1） で表 わ
こ こで， μ0は 自由 溶液 中 （ゲル が 存在 しな い場 合 ） で
の核 酸 の移 動 度 ，Cは 比 例 定 数 ，Tは ゲ ル濃度 で あ る。
され る36）
。
Inμ=1nμ0-CNT(1)
図4に 示 す よ うに，DNAの
サ イ ズ が 小 さい とき は， 核
2245
22
蛋 白 質 核 酸 酵 素 図4．DNAフ
Vo138No.13（1993）
ラ グ メ ン トの サ イ ズ と 電 気 泳 動 移 動 度
と の 関 係
電 場
：■ ：50， ▲ ：100.◆
Database Center for Life Science Online Service
（文 献36よ
：150，
● ：200，
□ ：400V／cm
り引 用 ）
酸 の 泳動 挙 動 は ， オ グス トンモ デル に よ く一 致 して い る
こ とがわ か る。 しか し，DNAの
サ イ ズが 大 き くな るに
つ れて ，移 動 度 は ，式 （1） の 直 線 か らの ず れ が 大 き く
な り， しか も， 泳 動 挙 動 の電 場 依 存 性 が み られ る よ うに
図5．DNAフ
ラグ メ ン トの フ ァ ー ガ ソン プRッ
数 字 は 塩 基 数 （文献19よ
り引 用 ）
ト
な る。 こ の よ うな 領 域 が ， レプテ ー シ ョン 領 域 と よ ぼ
れ ，DNAの
泳 動挙 動 は， 式 （2） で表 わ され る46）
。
る。 これ らの直 線 の傾 きか ら，KRの
で き る。 以上 よ り， 比較 的 サ イ ズ の小 さ いDNAフ
(2)
μ＝a（1／N＋bE2）
値 を求 め る こ とが
ラ
グ メ ン トの キ ャ ピラ リー 中 で の泳 動 挙 動 は ， オ グス トン
こ こで ，aお よ びbは 定 数 ，Eは 電 場 で あ る。 キ ャ ピ
モ デ ル に従 うこ とか ら， そ れ ぞれ の フ ラ グ メ ン トのKR
ラ リー電 気 泳動 を用 いた 場 合 の ， レプ テ ー シ ョ ン領 域 で
の 値 か ら泳 動 時間 を 予測 す る こ とが 可 能 で あ る。 た だ
の 核酸 の 泳 動挙 動 に つ い て は ， あ ま り検 討 され て い な い
し， フ ラ グ メ ン トの サ イ ズ とKRの
の で ， こ こで は ， オ グス トン領 域 に焦 点 を絞 る こ とにす
だ ほ とん ど検 討 され て い な い 。
る。
関係 につ いて は ま
同様 の分 子 ふ るい 効 果 は ， ポ リマ ー溶 液 を利 用 した キ
お く と，Ferguson47）
ャ ピラ リー電 気 泳 動 にお い て も期 待 さ れ る 。 ポ リマ ー溶
に よ り実験 的 に 見 い だ され て い る 関 係式 に対 応 させ る こ
式 （1） に お け るCNをKRと
液 を用 い て， 分 子 ふ る い効 果 を得 る に は ， ポ リマ ー ど う
とが で き る。
しが溶 液 中 で絡 み 合 うよ うな 条 件 を設 定 す る 必 要 が あ
る26）
。 図6Aに
(3)
lnμ=lnμ0-KRT
示 す よ うに， ポ リマ ー の濃 度 が希 薄 な 溶
液 で は ， ポ リマ ー間 の相 互 作 用 が ほ とん ど起 こらな い 。
こ こ で ，KRは
あ る。 式
遅延係数
（retardation
coefficient）
で
（3） を キ ャ ピ ラ リー 電 気 泳 動 で よ く 用 い ら れ
る泳 動 時 間
（の
で 表 わ す と， 式
（4） が 得 ら れ る 。
(4)
l nt=lnt0+KRT
こ こで ，t0は
自由 溶液 中 で の 核 酸 の 泳 動 時 間 で あ る。
キ ャ ピ ラ リー ゲル 電 気 泳 動 に お け る1本 鎖DNAフ
ラ グ メ ン トの フ ァ ー ガ ソ ン プ ロ ッ トを 行 な った 例 を 図5
に示 す 。10bの
サ イ ズ のDNAか
これ に対 して， 図6Cに
越 えた ポ リマ ー溶 液 で は ， ポ リマ ー問 の 絡 み合 いが 起 こ
り， ゲル の場 合 と同様 の分 子 ふ るい 効 果 を 示 す よ うにな
る。 ポ リマ ー の絡 み 合 いが 起 こる 条 件 を 決 定 す る 因 子
は ， ポ リマ ー のサ イ ズ と濃 度 であ る。 ポ リマ ーのサ イ ズ
をn， 絡 み 合 い が起 こ り始 め る ポ リマ ー の体 積 分 率 の 閾
値 を φ＊とす る と， そ の 関 係 は， 式 （5） の よ う に な
る26）
。
ら200bのDNAま
φ ＊・=n-0・8
で そ れ ぞれ ， 良好 な直 線 関 係 が得 られ て い る こ とがわ か
2246
示 す よ うに，あ る一定 の濃 度 を
(5)
核酸の キャピラ リー電気泳動
23
で あ る。 キ ャ ピ ラ リーを 用 い た 場 合 の最 大 の利 点 は ，従
来 法 に比 べ て高 い電 圧 が 印加 で きる の で ，核 酸 の分 離 能
が 増 大 しか つ 分 析 時 間 が短 縮 で き る とこ ろ に あ る。 た と
え ば ，キ ャ ピ ラ リー電 気 泳 動 で は，10,000∼30，000Vも
の 電 圧 を か け る のに 対 して， 従 来 の ゲ ル電 気 泳 動 では ，
100∼1,000V程
度 の 電圧 で泳 動 を 行 な う。これ は， キ ャ
ピ ラ リー電 気 泳 動 で は ，高 電 圧 の下 で発 生 す る ジュー ル
熱 を 効 果 的 に放 熱 す る こ とが で き る こ と に起 因 し て い
る。
Ⅲ
． 核 酸 の 分 離 条件 設 定 の ガ イ ドラ イ ン
ポ リア ク リル ア ミ ドゲルを 充 填 した キ ャ ピラ リーは ，
Database Center for Life Science Online Service
1本 鎖 お よび2本 鎖DNAの
分離 に用 い られ る。DNA
の分 離 に 影 響 を 与え る主 要 な 因 子 と し て は， ゲル 組
図6．
ポ リマ ーが 溶 液 中 で絡 み 合 う条 件
A： 閾 値 よ り低 い濃 度 ，B： 閾 値 と同 程度 の濃 度 ，
C： 閾 値 よ り高 い濃 度 。
成9 13,19）
， 電 圧9 13,18,19）
キ ャ ピラ リーの長 さ9,10）
， キャ
ピ ラ リーの 温 度15，21）
， 緩衝 液 組 成17,22）
，DNAの
こ の式 に よ り，分 子 量192，000の
ハ イ ドロキ シ エ チ ル
セ ル ロー ス の閾 値 を計 算 す る と，n＝1026と
φ＊＝0．39%と
な る の で，
な る26）
。 これ は，次節 で述 べ る，分 離 条 件
塩基組
成16，20）
な どが あげ られ る。 図7に キ ャ ピ ラ リー ゲル 電 気
泳 動 に よるDNAの1本
7の
鎖 断 片 の分 離 の例 を 示 す11）
。図
分 離 条 件 は ， ゲ ル 組成 （5%T,1．5%C）
，電圧
と よ く一 致 して い る。 ポ リマ ー の絡 み合 いが 起 こる濃 度
（200v／cm，10kv） ， キ ャ ピ ラ リ ー の 長 さ （全 長50
に お け る核 酸 の 泳 動 の メカ ニ ズ ムは ， キ ャ ピラ リーゲ ル
cm， サ ンプ ル注 入側 か ら検 出 器 ま で30cm）
電 気 泳動 の場 合 と同様 に ， オ グス トン領 域 と レプ テ ー シ
リー 温 度 （30℃） で あ る。 こ の 条 件 下 で は ， オ リゴ
ョ ン領 域 に分 類 さ れ26）
， 核 酸 の泳 動 挙 動 はそ れ ぞ れ の理
DNAか
論 式 に従 う。
に分 離 され て い る。
キ ャ ピ ラ リー 中 を泳 動 す る核 酸 の バ ン ド の 広 が り
（σ2T）
は ， 式 （6） で表 わ され る36）
。 この広 が りを効 果
的 に抑 えー
こ とが
とか
きれば ，高 分 解 能 の分 離 を達 成 す る
き る。
(6)
こ こ で，σ2Injは サ ン プル 注 入 時 の 広 が り，σDetは
検 出部 分 を サ ンプ ルパ ン ドが通 る とき に生 じる広 が り， ．
σ2Thermは キ ャ ピラ リー 中 の温 度 勾配 に よ る 広 が り，
2Diffは サ ン プル の拡 散 に よ る広 が りであ る
σ
。 これ ら の
パ ラ メ ー タ の うち， 電 場 が 低 い 場 合 （200V／cm以
下）
は， σ2Injお よび σ2Diffが 核 酸 のバ ン ドの 広 が りを 決
定 す る重 要 な因 子 で あ る。 電 場 が 高 くな る と （200v／cm
項 が 重要 に な る。 これ に 対
でが ，100分
以 内 に 完全
次 に ， 図8の 例 で は ， ゲ ル濃 度 を3%Tに
300v／cmへ
と変 化 させ て，DNAの
る19)。こ の例 に 示 す よ う に，10b程
350bのDNAま
σ2T＝ σ21＋et＋σ2Therm＋σ2Diff
以 上 ）， 相 対 的 にσ2Thermの
ら450bのDNAま
， キ ャピラ
でが ，1bの
， 電圧 を
分 離 を 行 な って い
度 のDNAか
ら
み の 違 い で完 全 に分 離 さ
れ て い る。 さ らに ，分 析 は， わ ず か24分
で終 了 して お
り， 図7の 例 に比 べ て， よ り高 速 化 を 達成 して い る 。 こ
れ らの例 で は ，理 論 段 数 が，1000∼2000万
段 に も達 して
い る。 この こ とは ， キ ャ ピ ラ リ ー 電 気 泳 動 がHPLC
（
数 十 万 段 ） お よび ス ラ ブ ゲル 電 気 泳 動 （500万 段 ）に 比
較 して ，著 し く高 い分 離 能 を もつ こ とを 示 して い る。 さ
らに ， ゲル濃 度 を適 切 に設 定 す れ ば ，1bの
分 離 を1秒
以 内 に行 な う こ とも可 能 であ る19）
。
これ らの例 にみ られ る よ うに ， ゲル 濃 度 と電圧 は分 離
条 件 を検 討 す る際 の最 も重 要 な 因 子 とな る。 これ らの条
して， いず れ の場 合 も σ2Detは 無 視 で き る ほ ど に 小 さ
件 とDNAの
い 。 これ ら の こ とを 考 慮 に いれ て， で き るだ け 高 い分 離
が な され て お り，条 件 選 択 の ガイ ドライ ンが提 唱 され て
能 を 得 る こ とが で き る実 験 条 件 を 設定 す る必 要 が あ る。
こ の よ うに， キ ャ ピラ リー ゲ ル電気 泳動 にお け る核 酸
の分 離 の メカ ニ ズ ムは ，従 来 の ゲル電 気 泳 動 とほ ぼ 同 様
分 離 に 関 しては ， す で に い くつ か の 報 告
い る6,7）
。 そ れ に よる と，1本 鎖DNAを
合 ， ゲル 濃 度 が3％
分 離 す る場
の とき50∼1，000bのDNAが
分
離 可 能 であ り，5％ で20∼500b，8%0で10∼300bの
2247
Database Center for Life Science Online Service
24
蛋 白 質 核 酸 酵 素 図7．
キ ャ ピ ラ リー ゲ ル 電 気 泳 動 に よ る1本 鎖DNAフ
ピ ー クの 上 の 数 字 は 塩 基 数 。 条 件 は本 文 参 照 。
（
文 献11よ
図8．
ラ グ メ ン トの 分離
り引用 ）
キ ャ ピ ラ リー ゲ ル 電 気 泳 動 に よ る1本 鎖DNAフ
ピー クの上 の 数 字 は塩 基 数 。 条 件 は 本 文 参 照 。
（文 献19よ
2248
Vol38No.13（1993）
り引 用 ）
ラ グ メ ン トの分 離
25
核 酸 の キ ャ ピ ラ リー 電 気 泳 動
表1．
2本 鎖DNAの
各 ポ リア ク リル ア ミ ド濃 度 にお け る分 離 可 能 な
1本 鎖DNAの
塩 基 数 （b） お よび2本 鎖DNA
分 離 条 件 選 択 の際 の ガイ ドライ ン に つ
い て は，1本 鎖DNAの
の塩 基 対 数 （bp）
DNAを
場 合 とほぼ 同 様 で あ る。2本 鎖
分 離 す る場 合 の キ ャ ピ ラ リーゲ ル 電気 泳動 の 分
離 条 件 は以 下 の よ う に な る 。 ゲル濃 度 が3%の
100∼10，000bpのDNAが
50∼5，000bp，8％
で10∼1，000bpが
分離 可能 なDNA
のサ イ ズ で あ る。 そ の他 は ，1本 鎖DNAの
であ る。 表1に2本
DNAが
cmの
分離 可 能 で あ る。 電 場 の 強 度 は，200∼400V／
100cm程
塩 基 対 数 と 一 般 的 に用
こ の よ うに， ポ リア ク リル ア ミ ドゲル を用 いた キ ャ ピ
度 の も のを 用 い る。 キ ャ ピ ラ リ ー の 内径 は
範 囲 で あれ ば 分 離 には影 響 しな い。 キ ャ
ラ リー ゲ ル電 気 泳 動 は ，核 酸 の 分 離 に きわ め て有 効 で あ
るが ， さ ら に， ヒ トゲ ノ ムの よ うに巨 大 なDNAを
解析
ピ ラ リー温 度 が 高 い ほ ど，分 析 時 間 は短 くな る15,21）
。表
す るた め に， よ り分 離 性 能 の 高 い ゲル の開 発に 興 味 が も
1に1本
た れ て い る。 しか し， 現 状 で は ， ポ リア ク リル ア ミ ドゲ
鎖DNAの
塩 基 数 と一 般 的 に用 い られ る ポ リ
ア ク リル ア ミ ド濃 度 との関 係 を示 す 。
Database Center for Life Science Online Service
鎖DNAの
場 合 と同様
い られ る ポ リア ク リルア ミ ド濃 度 との 関係 を示 す 。
範 囲が 適 当 で あ り， キ ャ ピラ リー の 長 さは10∼
50∼100μmの
とき
分 離 可 能 で あ り，5%0で
ル以 外 に は， ア ガロー ス ゲル14）
あ るい は非 架橋 ポ リア ク
次 に ， キ ャ ピ ラ リー ゲ ル電 気 泳動 に よるDNAの2
リル ァ ミ ド13,38,39）
な どが 検 討 さ れ て い るの み で あ る。 ア
本鎖 断 片分 離 の 例 を 図9に 示す13）
。 図9は ，500bpの
ガ ロー ス ゲ ル は あ ま り有 効 性 は 見 い だ せ て い な い が ，非
PCR生
架 橋 ポ リア ク リル ア ミ ドは ， ゲ ル充 填 キ ャ ピ ラ リー を調
成 物 と1kbpDNAラ
ダ ーサ ンプ ル の混 合 物 を
分 離 した例 で あ る。 分 離 条 件 は，fr`ル組成 （3%T,0．5
）， 電 圧 （200V／cm，10kV）
（
全 長50cm，
製 す る のが 容 易 でか つ 分 離 能 も良 い こ とか ら，最 近 は ，
， キ ャピラ
%Cリー の長 さ
サ ンプ ル注 入側 か ら検 出器 ま で30cm）
，
キ ャ ピ ラ リー温 度 （25℃） で あ る。 こ の 例 で は，75bp
か ら12，216bpま
に20分
で のDNA断
片 の 混合 物 が ほぼ 完 全
程 度 で分 離 され て い る。 しか も， ス ラ ブ ゲ ル電
気 泳 動 で は 分 離 困難 な500，506お
DNAで
よ び517bpの
ポ リア ク リル ア ミ ドゲ ル の代 わ りに 非 架 橋 ポ リア ク リル
ア ミ ドを 使 用 す る こ とが 多 くな って きて い る。 さ らに 高
い分 離 能 を 得 るた め に， ポ リア ク リル ア ミ ドゲル あ る い
は非 架 橋 ポ リア ク リル ア ミ ドに 代 わ る新 規 ゲル の 開発 が
待 た れ る と ころ であ る。
キ ャ ピラ リー ゲ ル電 気 泳 動 は ， 核 酸 を 高 い 分解 能 で分
さえ も 完全 に分 離 され て い る。 この例 で も 明 ら
離 す る こ とが で き るが ， ゲル 充 填 キ ャ ピラ リーを 調製 す
か な よ うに， キ ャ ピ ラ リ ー ゲ ル 電 気 泳動 は，2本 鎖
る のが 煩 雑 で あ る。 最 近 は ，ゲ ル の代 わ りに誘 導体 化 セ
DNAの
ル ロー ス な どの ポ リマ ー溶 液 を 用 いた キ ャ ピラ リー電 気
分 離 に お い て も非 常 に 高 い分 解 能 を もち ， か つ
分 析 時 間 も きわ め て短 くてす む。 した が っ て，PCR生
泳 動 で も，分 子 ふ る い効 果 に よ る2本 鎖DNA断
成 物 のサ イ ズを 正 確 にか つ 速 く決 定 す る こ とが で き る。
分 離 が可 能 で あ る こ とが わ か り， ゲ ル充 填 キ ャ ピ ラ リー
片 の
を調 製 す る手 間 が省 け る の で， さか ん に
行 な わ れ る よ う に な っ た8,23 29)。
ポ リマ ー 溶 液 を 利 用 した キ ャ ピ ラ リ ー
電 気 泳 動 に よ るDNAの2本
の 例 を 図10に
DNAラ
鎖断片分離
示 す29）。 図10は1kbp
ダ ー を 分 離 した 例 で あ る 。 分 離
条 件 は ，0．5%0メ
チ ル セ ル ロー ス， 電 圧
（200V／cm，10kV）
， キ ャ ピラ リーの 長
さ （全 長50cm,サ
出 器 ま で30cm）
ンプ ル注 入 側 か ら検
， キ ャ ピ ラ リ ー 温 度 （室
温 ） で あ る 。 キ ャ ピ ラ リー の 内 壁 は 非 架
橋 ポ リア ク リ ル ア ミ ドで 化 学 修 飾 し て あ
図9．
キ ャ ピ ラ リー ゲ ル 電 気 泳 動に よ るPCR生
成 物 （500bp） と
2本 鎖DNA分
子 量 マ ー カ ーの 分 離
ピー クの 上 の 数 字 は 塩 基 対数 。 条件 は 本 文 参 照 。
る 。 こ の 例 で は ，75bpか
ま で のDNAの
ら10，180bp
混 合 物 が18分
以 内 で完
2249
26
蛋 白 質 核 酸 酵 素 Vol38No.13（1993）
ヤ ピ ラ リーの 内 径 は50∼100,μm程
度 の も のを 用 い る
が ， この 範 囲 で あれ ば分 離 に ほ とん ど影 響 しな い。 表2
に2本 鎖DNAの
塩 基 対 数 と一 般 的 に用 い られ る 誘 導
体 化 セ ル ロ ース濃 度 との関 係 を 示 す 。
Ⅳ
． ヒ ト・ゲ ノ ム 解 析 計 画 に お け る
キ ャピ ラ リー電 気 泳 動 の応 用
ヒ ト ・ゲ ノ ム解 析 は ，医 学 ，生 命 科 学 の分 野 に とど ま
らず ， 有 用 物 質 の発 見 や 新 薬 の開 発 な ど科 学 ・産 業 ・社
会 へ の 膨 大 な波 及 効 果 が 期 待 され て い る。 しか し， こ の
計 画 の達 成 に は ，30億bpあ
図10．0．5％
DNAフ
DNAを
メチ ル セ ル ロ ース 溶 液 を 利 用 した2本 鎖
ラ グ メ ン トの 分 離
か って い る。 この情 報 量 は， 約20年
ピー クの 上 の 数 字 は 塩 基 対 数 条 件 は本 文 参 照。
Database Center for Life Science Online Service
（文 献29よ
る といわ れ て い る ヒ トの
す べ て正 確 に解 読 す る とい う難 事 業 が立 ち はだ
に 匹 敵 し， 最新 のDNA解
り引用 ）
分 の新 聞 の文 字 数
析 装 置 を も って して も ，解 読
に は 数 十 年 要 す る といわ れ て い る。 した が っ て ， ヒ ト ・
全に 分 離 され て い る。また ，10，000bp以 上 のDNAの
分
離 も不 完 全 で は あ るが 達 成 され て い る。 この例 で も明 ら
ゲ ノム解 析 計画 の 成 否 を 握 る鍵 と して， 新 し いDNA
解 析 装 置 の 開発 が待 ち望 まれ て い る。
か な よ うに， ポ リマ ー溶 液 を 利 用 した方 法 は キ ャ ピ ラ リ
キ ャ ピ ラ リー電 気 泳 動 は ， 今 ま で の分 離 法 に なか った
ー ゲ ル電 気 泳 動 よ り分 離 能 力 は 若 干 劣 る もの の ，10，000
ほ ど高 い 分 解 能 で核 酸 の分 離 を行 な う こ とが で き る こ と
bp程
度 ま で の2本 鎖DNAに
つ い て は 高 い分 解 能 を も
が 明 らか とな った。 した が っ て， 従 来 ， ス ラ ブ ゲ ル 電
ち ，か つ 分 析 時 間 も きわ め て 短 くて す む こ とがわ か る。
気 泳 動 が利 用 され て いた ，DNAシ
しか も ， ゲ ル充 填 キ ャピ ラ リーを調 製 す る必要 が な い の
RFLP解
で， 今後 ，2本 鎖DNAの
ピ ラ リー電 気 泳 動 が応 用 され 始 め た ◎ キ ャ ピ ラ リ ー 電
高 速 分離 法 と して普 及す る も
の と思 わ れ る。
ー ク ェ ン シ ン グ，
析 ，サ ザ ンプ ロ ッテ ィ ン グな どの分 野 で も キ ャ
気 泳 動 の 応 用 と して現 在 最 も重 要 視 さ れ て い る の は，
この方 法 で使 用 され る ポ リマ ー と して は ， メチ ル セ ル
DNAの
高 速 シ ー クエ ンシ ン グ法 の開 発 で あ る。 従 来 法
ロー ス ， ヒ ドロキ シ プ ロ ピル メチ ルセ ル ロ ース ， ヒ ドロ
で のDNAシ
キ シエ チ ル セ ル ロー ス， ア ガ ロー スな どが あ る。 ポ リマ
に よ るDNAの
ー溶 液 を利 用 した キ ャ ピラ リー電 気 泳 動 で は ， ポ リマ ー
が あ った。 特 に ， ヒ ト ・ゲ ノ ム解 析 計 画 で検 討 され て い
ー クエ ンシ ン グは， ス ラ ブ ゲ ル 電 気 泳 動
分 離 に時 間 が か か りす ぎ る とい う 欠 点
の種 類 と濃 度 が 分 離 条 件 を 検 討 す る際 の 最 も重 要 な 因 子
る， ヒ トDNAの
とな る。2本 鎖DNAを
時 間 の うち に解 析す る に は， 従 来 法 は適 して い な い。 そ
分 離 す る場 合 には ，分 離 条 件選
択 の際 の ガ イ ドラ イ ンは ，以 下 の よ うに な る。 誘 導 体化
セ ルロー ス で は， ポ リマ ー濃 度 が0．2∼0．5%の
50∼10，000bpのDNAが
で は1∼2％
とき ，
分 離 可 能 であ り，ア ガ ロー ス
で50∼1，000bpのDNAが
る。 電 圧 は200∼400V／cmの
ピラ リー の長 さは20∼100cmの
分 離 可能 で あ
範 囲が 適 当 で あ り， キ ャ
範 囲 が 適 当 であ る。 キ
こで ， キ ャ ピ ラ リ ー 電 気 泳 動 の 高 速 性 をDNAシ
ー
クエ ン シ ン グに活 か そ うと さ ま ざ ま な試 み が な され て い
図11にDNAシ
ー クェ ン シ ン グの一 例 を示 す35》
。シ
ー クエ ン シ ン グの際 には ，DNAを
検 出 す るた め に，
．レ
ー ザ ー蛍 光 法 が 適 用 され て い る
。 しか も，DNAのA，
類 の塩 基 は ， そ れ ぞれ4種 類 の蛍 光 波
長 の異 な る 試 薬 に よ る ラベ ル 化 され て い る の で ， そ の
4色 の 蛍 光 を 同 時 に 検 出 で き る 装 置 が 開 発 さ れ て い
る82,34・35）
。 図11に
示 す よ うに， キ ャ ピ ラ リー 電 気 泳
動 を 用 い れ ば ，500bま
で のDNAの
分 以 内 に解 読 で き る。 図11の
（6%T,5%C）
2250
を短
る30 40)。
G，C，Tの4種
表2． 各誘導体化 セルロー ス濃度におけ る分離可能な
2本 鎖DNAの
塩 基対数 （bp）
よ うに 巨大 なDNA（30億bp）
遺 伝 情 報 を100
分離条件 は， ゲ ル 組成
， 電 圧 （150v／cm，6kv）
， キ ャピラ リ
27
Database Center for Life Science Online Service
核 酸 の キ ャ ピ ラ リー電 気 泳 動
図11．
一の 長 さ （
全 長41cm
キ ャ ピ ラ リー ゲル 電 気 泳 動 に よ るDNAシ
ー クエ ン シ ン グ
条件は本文参照。 （
文 献35よ
り引 用 ）
のDNAサ
ン プ ルを シ ー クエ ン シ ン
27cm） ， キ ャ ピ ラ リー温 度 （
室 温 ） で あ る。 これ と同 じ
グで き る シス テ ム （図12）
が 最 近 開 発 され た37 40)。こ
シー クエ ンシ ン グを従 来 法 で行 な う と，8∼10時
の装 置 を 用 いれ ば ，超 高 速DNAシ
，サ ン プル注 入 側 か ら検 出器 ま で
間必要
て， 同 時 に100個
ー クエ ンシ ン グ を
で あ り， キ ャ ピラ リー電 気 泳 動 に よ り， 数 倍 の高 速 化 が
実 現 で き る こ とが示 さ れ て い る 。 近 い将 来 こ の よ うな シ
達 成 で き る こ とが 明 らか と な った。 さ ら に， ゲ ル濃 度 を
ス テ ム が装 置 化 され る よ うに な れ ば ， ヒ ト ・ゲ ノム解 析
3%Tに
計 画 の実 現 に 向か っ て はず み が つ くこ とは 疑 い の 余地 の
，電 場 を300v／cmへ
と変 化 させ る と シ ー クエ
ンシ ン グの速 度 を さ ら に増 す こ とが で き る32 35)。DNA
シ ー クエ ンシ ング の際 の 理 論 段 数 は，1000∼2000万
に も達 して い る。DNAシ
な い とこ ろ で あ る。
段
ー クエ ンシ ング の分 離 条 件 の
最 適 化 の際 に も， 前 述 の1本
鎖DNAの
分離条件選択
お わ りに
以 上 述 べ て き た よ うに， キ ャ ピラ リー電 気
の ガ イ ドラ イ ンを ほ ぼ そ の ま ま適 用 す る こ とが 可 能 であ
泳 動 は ，核 酸 を きわ め て高 い 分 解 能 で分 離 す る こ とが で
る。
き る。 この 特性 を 活 か して ， ヒ トゲ ノムDNAの
こ の よ うに ， キ ャ ピ ラ リー電 気 泳 動 はDNAシ
高速
ー クエ
シ ー クエ ン シ ン グへ の 応用 が 試 み られ て お り，装 置 化 も
ンシ ング の高 速 化 に 応 用 で き る こ とが 明 らか とな った 。
間 近 とな って い る。 した が って ， 近 い将 来 ， ス ラ ブ ゲル
しか し， こ の方 法 で は ，1回 に1個 のDNAサ
ン プル し
電 気 泳 動 で行 なわ れ て い る 実験 の全 部 で は な い に しろ ，
か シ ー クエ ン シ ン グが で き な い の で効 率 が 悪 い。 した が
あ る一 定 の部 分 は キ ャ ピ ラ リー 電 気 泳動 に置 き換 わ って
っ て， 多 数 のサ ン プル を 同 時 に シ ー クエ ン シ ン グで き る
い く もの と予 想 され る。 さ らに ，遣 伝 子 診 断 や 遺 伝 子 鑑
装 置 を 開 発 す る こ とが で きれ ば ， さ らにDNAシ
定 な どキ ャ ピ ラ リー電 気 泳 動 法 を利 用 した新 しいDNA
ーク
エ ンシ ン グの ス ル ー プ ッ トを 増 加 させ る こ とが 可 能 とな
る。 そ のた め に ，キ ャ ピ ラ リーを100本
の 解 析 法 が 開 発 さ れ る こ とを期 待 した い。
程 度並列に並べ
2251
28
Database Center for Life Science Online Service
蛋 白 質 核 酸 酵 素 図12．
Vol38No.13（1993）
マル チ シ ー ス フ ロー キ ャ ピ ラ リー ア レイ 電 気 泳動 に よ る超 高 速DNA
シ ー クエ ソ シ ン グ装 置
（
文 献40よ
り引 用 ）
献
文
9)Cohen,A.S.,Najarian,D.R.,Paulus,A.,Guttman,A.,Smith,J.A.,Karger,B.L.:Proc.
Natl.Acad.Sci.USA,85,9660-9663(1988)
10)Guttman,A.,Cohen,A.S.,Heiger,D.N.,Kar-
1）Li，S．F．Y．
：Capillary
Electrophoresis，Else・
ger,B.L.:Anal.Chem.,62,137-141(1990)
vier,Amsterdam(1992)
11)Baba,Y.,Matsuura,T.,Wakamoto,K.,Mori-
2)Gordon,M.J.,Huang,X.,Pentoney,S.L.,
ta,Y.,Nishitsu,Y.,Tsuhako,M.:Anal.
Zare,R.N.:Science,242,224-228(1988)
3）
寺 部
茂
：ぶ ん せ
Chem.,64,1221-1225(1992)
き ，No．8，599-606（1991）
生 化 学 ，64，111-115（1992）
4）
馬 場 嘉 信
・津 波 古 充 朝
8-15(1992)
14)Motsch,S.R.,Kleemiss,M.H.,Schomburg,
Anal.Chem.,
11,280-287(1992)
：ぶ ん せ き ， 印 刷 中
8)Strege,M.,Lagu,A.:Anal.Chem.,63,12331236(1991)
2252
13)Heiger,D.N.,Cohen,A.S.,Karger,B.L.:J.
Chromatogr.,516,33-48(1990)
6)Baba,Y.,Tsuhako,M.:Trends
馬 場 嘉 信
12)Baba,Y.,Matsuura,T.,Wakamoto,K.,Tsuhako,M.:J.Chromatogr.,558,273-284(1991)
：化 学 と 薬 学 の 教 室 ，105，
5)Karger,B.L.:Nature,339,641-642(1989)
7）
；
G.:J.HighResolut.Chromatogr.,14,629632(1991)
（1993）
15）Guttman，A．
，Cooke，N．
285-294(1991)
16)Guttman,A.,Nelson,R.J.,Cooke,N.:J.Chro-
：J．Chroｻzatogr．
，559，
29
核酸 の キ ャ ピ ラ リー電 気 泳 動
32）Luckey，J．A．
matogr.,593,297-303(1992)
，Drossman，H．
2038-2042(1991)
，
L.M.:NucleicAcidsRes.,18,4417-4421
18)Guttman,A.,Wanders,B.,Cooke,N.:Anal.
(1990)
Chem.,64,2348-2351(1992)
33)Cohen,A.S.,Najarian,D.R.,Karger,B.L.:J.
Chromatogr.,516,49-60(1990)
19)Baba,Y.,Matsuura,T.,Wakamoto,K.,Hide,
K.,Tanaka,A.,Tsuhako,M.:Anal.Chem.,
34)Swerdlow,H.,Gesteland,R.:Nucleic Acids
Res.,18,1415-1419(1990)
投 稿 中
20)Baba,Y.,Tsuhako,M.,Sawa,T.,Yashirna,E.,
35)Swerdlow,H.,Zhang,J.Z.,Chen,D.Y.,Harke,
Akashi,M.:Anal.Chem.,64,1920-1925
H：．R．，Grey，R．
(1992)
Chem.,63,2835-2841(1991)
21)Baba,Y.,Tsuhako,M.,Sawa,T.,Akashi,M.:J.
Chromatogr.,
，Kostichka,A．J．
Mead,D.A.,D'Cunha,7.,Norris,T.B.,Smith,
17)Guttman,A.,Cooke,N.:Anal.Chern.,63,
36）Luckey，J．A．
，Wu，S．
632，137-142（1993）
，Dovichi，N．J．
，Norris，T．B．
Phys．Chem．
：Anal．
，Smith，L．M．
：J，
，投 稿 中
37)Mathies,R.A.,Huang,X.C.:Nature,359,
167-169(1992)
38)Huang,X.C.,Quesada,M.A.,Mathies,R.A.
Anal.Chem.,64,967-972(1992)
39)Huang,X.C.,Quesada,M.A.,Mathies,R.A.:
Anal.Chem.,64,2149-2154(1992)
40)Kambara,H.,Takahashi,S.:Nature,361,
565-566(1993)
Database Center for Life Science Online Service
22)Baba,Y.,Tsuhako,M.,Sawa,T.,Akashi,M.:
41)Hjert？n,S.:J.Chromatogr.,347,191-198
(1985)
42)Ogston,A.G.:Trans.FaradaySoc.,54,
1754-1757(1958).
43)Rodbard,D.,Chrambach,A.:Proc.
Acad.Sci.USA,65,970-977(1970)
44)Tiez,D.:Adv.Electrophoresis,2,109-169
Natl.
(1988)
45)Noolandi,J.:Adv.Electrophoresis,5,1-57
(1992)
46)Lumpkin,O.J.,Dejardin,P.,Zimm,B.H.:Biopolvmers,24,1573-1593(1985)
47)Ferguson,A.O.:Metabolism,13,985-1002
(1964)
お 知 ら せ
ノ ボ ノルデ ィスク 酵素 シンポジウム1993
「ニ コ ー フ ロ ン テ ィア か ら の メ ッセ ー ジ」
日時 ：平 成5年11月26日
会
（金 ）13：00∼17：00
場 ：銀 座 ガ スホ 一ル （東 京都 中 央 区 銀 座7-9-15 Te1．03-3573-1871）
1． 好 冷 性 細 菌 とそ の 酵 素
2．
3．Achromobacterプ
4．
浜本 哲郎 （
理化 学研 究所 ）
高橋和彦 （
北海道大学薬学部 ）
正木武 治 （
茨城大学農学 部）
セ レ ソ含 有 抗 酸 化 酵 素 グル タ チ オ ンペ ル オキ シ タ ーゼ の 構 造 と 機 能
ロテ ア ー ゼ1の 特 性 と食 品 蛋 白 質 の 機 能 改 善
糸状 菌 の 新 規 酵 素 ラ ク トノ ヒ ドロ ラ ーゼ ：パ ソ トラ ク トン の 光 学 分割 へ の利 用
5． 耐 熱 性 リ ンゴ 酸脱 水素 酵 素 の蛋 白質 工 学
清水 昌 （
京都大学農学部 ）
西山 真 （
東京大学農学部）
6． 細 菌 の チ ロシ ンフ ェ ノ ール リア ーゼ ＝反 応 機 講 とL一 ドー・
パ生産
熊谷英 彦 （
京都大学農学部 ）
7． 微 生 物 の リパ ー ゼ
トムB．
ニ ール セ ン （ノボ ノル デ ィ ス ク バ イ オ イ ン ダス ト リー社 ， 日本 ）
8． バ イ オ テ ク ノ ロジ ー の基 盤 と展 望
ウル リッ クV．
ラ ッセ ン （ノボ ノル デ ィ ス ク社 ， デ ン マ ー ク）
シ ンポ ジ ウ ム聴 講 参 加 ご希 望 の 方 は ， 官製 葉 書 に ， 住 所 ， 氏 名 ， 年 齢 ， 職 業 また は 学 校 名 （専 攻 ） を 明 記 の うえ ，11月10
日 まで に 下 記 事 務 局 まで お 申 込 み くだ さ い。 参 加 は 無 料 で す 。 （定 員300名
に な りしだ い 締 め 切 らせ て い た だ きま す ）
〒261-01千
葉 市 美 浜 区 中瀬1-3幕
張 テ ク ノガ ー デ ンCB-6
ノ ポ ノル デ ィス ク バ イ オ イン ダ ス ト リー（株 ）内 酵 素 シ ンポ ジ ウ ム事 務 局Te1．043-296-6770
2253