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フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号
funakoshi 2015年 5月15日号 No.588 エピジェネティクス特集 メチル化DNAや修飾ヒストン研究用の定番製品をはじめ， 次世代シークエンサーにより全ゲノム・ゲノムワイドなメチル化解析を 行うためのライブラリー作製キットなどをご紹介します。 P.4 神経／イオンチャネル 1∼2週間で浸透処理を行える ゴルジ-コックス染色キット superGolgi Kit P.24 タンパク質／酵素 代謝産物の同定・産生に有用なヒトCYPと P450オキシドレダクターゼ CypExpress P.31 ペトラ （ヨルダン） 研究室の フナコさん p.19 © 樹庵じゅあん フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news C ONTENTS 特 集 エピジェネティクス DNA/RNA のメチル化 NEW ............................................................................................4 DNA をバイサルファイト処理し精製するキット EZ DNA Methylation Kit（ZYR 社） ..............................................................................................................5 5-hmC シークエンシング用試料調製キット 5hmC TAB-Seq Kit（WIS 社） ..........................................................6 メチル化 DNA／ヒドロキシメチル化 DNA 定量キット DNA Methylation Quantification Kit（EPG 社） ..................................................................................6 RNA のバイサルファイト処理キット Methylamp RNA Bisulfite Conversion Kit（EPG 社） .......................................7 メチル化 DNA シークエンス用ライブラリー作製キット EpiNext Bisulfite DNA Library Preparation Kit（EPG 社） . .................................................................................................8 5-hmC 解析用ライブラリー作製キット RRHP 5-hmC Library Prep Kit（ZYR 社） ......................................................................................................8 TET 活性の測定キット Epigenase TET Activity / Inhibition Assay Kit（EPG 社） DNA メチル化関連受託サービス（各社） 受託 .....................................................................................................................................................................9 .............................................................................................................................................. 32 Elite TET Family, 5-mC, 5-hmC 抗体パネル（GNT 社） クロマチンの処理・ChIP（クロマチン免疫沈降） NEW . ...........................................................................................................................................................10 クロマチン免疫沈降（ChIP）関連製品（EPG 社） ................................ 11 ChIP アッセイ過程の反応液から DNA を精製・濃縮するキット ChIP DNA Clean and Concentration Kit（ZYR 社） .............................................. 11 哺乳動物の細胞／植物試料からのクロマチン抽出キット ChromaFlash Chromatin Extraction Kit（EPG 社） ........................................12 ChIP から次世代シークエンス用の試料調製まで行えるキット EpiNext ChIP-Seq High-Sensitivity Kit（EPG 社） NEW . .........................................................................12 NGS 用のクロマチン／DNA せん断などに最適な超音波破砕装置 EpiSonic 2000（EPG 社） ヒストン ...............................13 修飾ヒストン H3/H4 を同時に検出するキット EpiQuik Histone H3/H4 Modification Multiplex Assay Kit（EPG 社） . .................................................................13 Sirtuin の阻害／活性化物質をスクリーニングできるキット SIRT Screening Assay Kit（CAY 社） ......................................................................................................14 蛍光により HDAC 活性を測定するキット HDAC Activity Assay Kit（CAY 社） ............................14 ヒストンアセチルトランスフェラーゼ阻害物質のスクリーニングキット HAT Inhibitor Screening Assay Kit（CAY 社） ....................................................... 15 ブロモドメイン阻害物質スクリーニングキット Bromodomain Inhibitor Screening Assay Kit（BPS 社） 2 .................................................................16 核抽出物中の HMT 活性を測定するキット EpiQuik HMT Activity / Inhibition Assay Kit（EPG 社） ................................................................................16 リン酸化ヒストン検出用キット EpiQuik Histone H3 Phosphorylation Assay Kit（EPG 社） ヒストン修飾関連化合物スクリーニング／プロファイリングサービス（BPS 社） 受託 ...........................................................................................17 ヒストン修飾モジュレータースクリーニングサービス（EPG 社） 受託 . .......................................................................................................................17 ■遺伝子工学 NEW 簡便・高効率なウイルス濃縮試薬 . ................................. 18 P EG-it Virus Precipitation Solution（SBI 社） 蛍光により内在性タンパク質をリアルタイムで観察できます ...................................................... 20 C hromobody Plasmid（CHT 社） 組換え体タンパク質発現系の検討・産生受託コーディネート （フナコシ （株） ） 受託 ............................................................................... 30 NEW siRNA 混合物を大量作製するキット .............................................. 21 D icer siRNA Generation Kit（GTS 社） NEW 破砕・溶解が難しい土壌試料から微生物由来 DNA を 抽出・精製するキット ................... 23 P owerLyzer PowerSoil DNA Isolation Kit（MBL 社） ■タンパク質／酵素 着色済みのタンパク質分子量マーカー .............................. 19 P rotein MultiColor, StableDynaMarker®（BDL 社） NEW ヘモグロビン測定キット ............................. 22 D etectX Hemoglobin Detection Kit（ARB 社） NEW 肺腺がんマーカー候補分子 AGR2 の定量キット .......................... 26 A nterior Gradient 2（AGR2）ELISA Kit（ADP 社） 尿中微量アルブミン定量キット .................................................. 28 U rine Albumin ELISA Kit（EXO 社） NEW 高感度なメンブレン抗体アレイキット . ........................................... 29 P roteome Profiler Array Kit（RSD 社） 可溶性・不可溶性コラーゲンの定量キット ............. 29 S ircol Soluble / Insoluble Collagen Assay Kit（QBS 社） 代謝産物の同定・産生に有用なヒト CYP と P450 オキシドレダクターゼ ......................................................................... 31 C ypExpress（OBR 社） ■サイトカイン／増殖因子／ホルモン 唾液中成分の DHEA-Sulfate 定量キット ................................ 21 D HEA-S Salivary Immunoassay Kit（SAL 社） ■生化学用一般試薬 NEW グルコース／ガラクトース定量キット . .............. 22 D etectX Glucose / Galactose Detection Kit（ARB 社） NEW 糖尿病の研究に有用な細胞内脂質 ................................................................................... 22 F AHFA（CAY 社） ■免疫化学 NEW 迅速・高感度にヒト Ig のアイソタイプを同定・定量できる 抗体アレイ ........................................ 23 H uman Ig Isotyping Array Q1（RAY 社） フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news NEW NEW ■細胞培養 1～2 週間で浸透処理を行えるゴルジ-コックス染色キット . ...................................................................... 24 s uperGolgi Kit（BIE 社） NEW 浮遊切片でゴルジ染色を行うキット 培養細胞のマイコプラズマ汚染検出キット .......................................................................... 25 s liceGolgi Kit（BIE 社） . ..................... 27 M ycoProbe Mycoplasma Detection Kit（RSD 社） NEW ■細胞情報伝達 .............. 25 ヒト由来骨代謝マーカー測定 ELISA キット（BMC 社） ■抗体 NEW 培養細胞のリソソーム活性を蛍光検出するキット ..................................... 27 V IVAprobe Lysosome Assay Kit（VIA 社） ヒト多能性幹細胞を心筋細胞へ分化させるキット ......... 28 S temXVivo Cardiomyocyte Differentiation Kit（RSD 社） ............................................... 31 幹細胞関連低分子化合物（AXN 社） ■その他 生殖細胞の腫瘍や肝臓がんの研究に有用な抗体 ..................................... 26 抗 α-1-Fetoprotein（AFP）抗体（BCM 社） 展示会出展のお知らせ. ...................................................................... 17 研究室のフナコさん............................................................................ 19 ......................................... 26 抗ヒトオステオカルシン抗体（HYL 社） キャンペーン・モニター情報 http://www.funakoshi.co.jp/campaign_monitors 30％ OFF C ONTENTS ■神経／イオンチャネル シグナル伝達因子関連抗体 平成 27 年 EnoGene Biotech 社 5月 キャンペーン期間 6月 7月 ～5/29 ラック プレゼント バイオベルデ製品ご購入で J-Rack プレゼント 20％ OFF ビーズ式組織・細胞破砕装置 FastPrep-24 5G さらに Nespresso コーヒーメーカーをプレゼント MP-Biomedicals 社 抗体 プレゼント 一次抗体 2 本購入で二次抗体 1 本プレゼント Bioss 社 ～6/30 GeneTex 社 ～6/30 Arigo Biolaboratories 社 ～6/30 フナコシ （株） Chromotek 社 ～7/28 GeneTex 社 ～7/31 GeneTex 社 ～7/31 MO BIO Laboratories 社 ～7/31 Bioss 社 好評実施中！ 好評実施中！ オートファジー・低酸素症関連抗体 抗体 プレゼント 小包装サンプルプレゼント プレゼント 製品ご購入でキュートなオリジナルペン 1 本 キャンペーン プレゼント 15～50％ 機器・消耗品 OFF 春のフレッシュ・リフレッシュキャンペーン GFP-Trap などタグ付タンパク質精製関連製品 20％ OFF ➡ p.20 20％ OFF エピジェネティクス・がん・ニューロサイエンス キャンペーン 研究用抗体 20％ OFF 免疫沈降用抗体のウェスタンブロットへの干渉を キャンペーン 抑えるキット EasyBlot 30％ OFF 血液試料／FFPE 組織からの核酸抽出キット キャンペーン モニター 抗体サンプル（10 μl） キャンペーン （株） バイオベルデ RNA／タンパク質分子量マーカー無償サンプル モニター （株） バイオダイナミクス研究所 キャンペーン ➡ p.19 NOTE ※本紙に記載されている価格は，2015 年 5 月 15 日現在です。 ※本紙に掲載されている製品は，すべて研究目的用にのみ販売しています。医薬品，診断用医薬品， 食品，食品検査等の用途には使用できません。 ※ 印の製品は，「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律 （通称：カルタヘナ法）」使用規制対象となりますので，ご使用に際しては規制に則し，適切にお取 り扱い下さい。 ※ 印の製品は，取り扱いに厳重な注意を要する製品であり，ご購入時に「使用目的確約書」が必 要になります。ご注文の際は，「使用目的確約書」に直筆でご記入の上，販売店経由で当社までお 送り下さい。確約書受領後に製品を発送させていただきます。また，これらの製品をご購入後は， 鍵の掛かる場所での保管をお願いいたします。 ※ 印の製品は,「毒物及び劇物取締法」に基づく医薬用外毒劇物です。法規制に従って，保管，廃 棄等して下さい。 ※ 印の製品は，毒性があるため，取り扱いに注意または厳重な注意が必要です。 製品は，鍵の掛かる場所に保管して下さい。添付されているデータシートや商品ラベルをよくお読 み下さい。 ※ 印の製品には安全にご利用いただくための警告ラベルが貼られています。表示に従って安全対策 を実施して下さい。 ※ 印は，液体窒素中での保存を要する製品です。ドライアイス包装で配送していますが，製品到 着後，直ちに液体窒素中で保存して下さい。 ※ 印は，－80℃ での保存を要する製品です。ドライアイス包装で配送していますが，製品到着 後，直ちに－80℃ のフリーザー等に保存して下さい。 ※品名中の〈 〉は，別名を表します。（例 Anti - EGF〈Anti - Epidermal Growth Factor〉） ～5/31 ～5/31 3 ～7/15 ※説明文中の［ ］の数字は，Chemical Abstracts Service Registry Number（CAS番号）です。 ※略号：Mono : Monoclonal, Poly : Polyclonal, AAPu : Antigen Affinity Purified, PAPu : Protein A/G Affinity Purified, APu : Affinity Purified, Pu : Purified, AP : Alkaline Phosphatase, FAM : Mono - 5（and - 6）- Carboxyfluorescein, HRP : Horseradish Peroxidase, PE : Phycoerythrin, ChIP : Chromatin Immunoprecipitation, Dot : Dot Blotting, ELISA : Enzyme - linked Immunosorbent Assay, EMSA : Electrophoretic Mobility Shift Assay（Gel Shift Assay）, FCM : Flow Cytometry, IC : Immunocytochemistry, IF : Immunofluorescence, IHC : Immunohistochemistry, IP : Immunoprecipitation, Neut : Neutralization, RIA : Radio Immuno Assay, West : Western Blotting ※外観・仕様は改善のため，予告なく変更することがあります。 ※R&D Systems はテクネ コーポレイションの登録商標です。 ※ライフサイエンス関連分野におけるPCR用酵素およびPCR用酵素を含む製品やTaqManなどの検出 用プローブは，Life Technologies 社が特許を有しています。 使用に当たっては同社の許可が必要な場合があります。 ※記載されている会社および商品名は，各社の商標または登録商標です。 ※本紙には各メーカーから提供された画像・図表が掲載されています。なお，画像・図表の著作権は 各メーカーが保有しています。 ※表示価格に，消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので， あらかじめご了承下さい。 ※ご注文の際は， ［品名，メーカー，商品コード，包装，数量］をお知らせ下さい。 エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news DNA をバイサルファイト処理し精製するキット EZ DNA Methylation Kit メチル化されていないシトシンを化学的にウラシルに変換するキットです。本製品で処理した DNA をテンプレートにして PCR を行った後，制限酵素処理，シークエンシング，マイクロアレイ などによりメチル化 DNA を検出できます。用途に応じた 4 種類の製品を取り揃えています。 出発試料：DNA EZ DNA Methylation Kit DNA の変性 （試薬処理） 出発試料：DNA／細胞／組織 EZ DNA Methylation Gold Kit DNA の変性 （加熱処理）＆ バイサルファイト 処理 EZ DNA Methylation Lightning Kit DNA の変性 （加熱処理）＆ バイサルファイト 処理 2.5 時間インキュベーション Proteinase K 処理 ～1 時間インキュベーション バイサルファイト 処理 3.5 時間 インキュベーション バイサルファ イト処理 12～16 時間 インキュベーション 4 EZ DNA Methylation Direct Kit 脱スルホン化 ＆ DNA 精製 脱スルホン化 ＆ DNA 精製 ［メーカー：ZYR］ 品 名 EZ DNA Methylation Kit 特 長 操作時間 精製フォーマット 必要試料量 変換効率 回収率 DNA 溶出量 反応回数 商品コード 包 装 価格（￥） スタンダードキット・Illumina 社 Infinium に適合 12～16 時間 スピンカラム 96 ウェルプレート 500 pg～2 μg ＞99％ ＞80％ ≧10 μl ≧30 μl ≧15 μl 50 200 2×96 2×96 D5001 D5002 D5003 D5004 1 kit 26,000 88,000 71,000 71,000 品 名 EZ DNA Methylation- Gold Kit 優れたコストパフォーマンス・使用文献多数！ 3 時間 スピンカラム 96 ウェルプレート 500 pg～2 μg ＞99％ ＞75％ ≧10 μl ≧30 μl ≧15 μl 50 200 2×96 2×96 D5005 D5006 D5007 D5008 1 kit 27,000 92,000 73,000 73,000 EZ DNA Methylation Lightning Kit 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です 特 長 操作時間 精製フォーマット 必要試料量 変換効率 回収率 DNA 溶出量 反応回数 商品コード 包 装 価格（￥） Conversion reagent が調製済みで操作が簡便！ 1.5 時間 スピンカラム 96 ウェルプレート 100 pg～2 μg ＞99.5％ ＞80％ ≧10 μl ≧30 μl ≧15 μl 50 200 2×96 2×96 D5030 D5031 D5032 D5033 1 kit 36,000 102,000 82,000 82,000 EZ DNA Methylation Direct Kit 出発試料として細胞や組織を直接使用可能 3.5 時間 スピンカラム 96 ウェルプレート 50 pg～2 μg DNA，103～105 細胞 ＞99.5％ ＞80％ ≧10 μl ≧30 μl ≧15 μl 50 200 2×96 2×96 D5020 D5021 D5022 D5023 1 kit 36,000 102,000 82,000 82,000 無償サンプル品モニター マークの製品は，無償サンプル品をご用意しています。お申し込み方法の詳細は，フナコシホームページ（製品ページ番号：7845）を ご覧下さい。 お問い合わせ先：〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 遺伝子工学 NEW エピジェネティクス メチル化 5-hmC シークエンシング用 試料調製キット 5hmC TAB-Seq Kit 関連製品 TAB-Array Kit TAB-Array は，TAB 法で処理した試料と Illumina 社 Infinium Methylation 450K などのアレイを組み合わせ，5-mC/5-hmC を解析する方法です。バイサルファイト法と TAB 法で処理した 2 種類の試料を用意してアレイ解析を行い，それらの結果を比較す ることで，5-mC，5-hmC を区別します。 特 長 製品ページ番号：7153 本製品で処理した DNA をバイサルファイト処理するこ とで，非メチル化シトシンと 5-mC のみをウラシルに変 換することができます。 ［製品ページ番号：63400］ ● 調製した DNA 試料は，Illumina 社の Infinium Methylation ● シークエンス解析に比べ低価格かつ簡単にデータ解析を行えます。 ● キットには 10 反応分の試薬が含まれています。 450K array などのアレイ解析に使用できます。 エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news ※キットにグルコシル化処理後の DNA 精製用試薬およびバイサルファ Memo イト処理用試薬は含まれていません。別途ご用意下さい。 Tet-Assisted Bisulfite（TAB）法とは ※ロットにより酵素の活性値が異なる場合がありますので，実験の際に 従来の Bisulfite（バイサルファイト）法では，ゲノム DNA をバイサル ファイト処理し，非メチル化シトシンをウラシルに変換した後にメチル 化 DNA を検出しますが，この方法では mC と hmC を区別することが できませんでした。 TAB 法は，バイサルファイト処理を行う前に hmC のグルコシル化処理 を行い，Tet1 によるカルボキシル化から保護します。そのため，Tet1 により mC のみがカルボキシルシトシン（caC）に変換されます。この 反応の後にバイサルファイト処理を行うと，非メチル化シトシンと caC はウラシルに変換されますが，グルコシル化 hmC（Glu-hmC）は影響 を受けません。この試料を用いることで，ゲノム DNA 中の，hmC の 位置を知ることができます。 従来の Bisulfite シークエンシング法 C mC hmC Tet-Assisted Bisulfite シークエンシング法 C mC hmC C mC Glu-hmC C caC Glu-hmC U caU Glu-hmC hmC のグルコシル化 バイサルファイト 処理 Tet1 による酸化 mC hmC C 5hmC と 5mC の識別不能 T C 5hmC と 5mC の識別可能 ■5mC Tet1 Oxidation Kit Tet1 により，ゲノム DNA 中の 5-mC を 5-caC に変換するキッ トです。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） 5mC Tet1 Oxidation Kit WIS K003 1 kit / 198,000 5-メチル化シトシンのカルボキシルシトシンへの変換を行うことができるキット。 5mC Tet1 Oxidation Kit, for the PacBio RS Instrument 1 kit / 198,000 WIS K004 5 PacBio RS instrument（Pacific Biosciences 社）でのシークエンシングに最適化した，5メチル化シトシンのカルボキシルシトシンへの変換を行うことができるキット。 ■5mC/5hmC DNA Standard して最適です。 包装 / 価格（￥） 5mC DNA Standard WIS S001 5hmC DNA Standard WIS S002 1 vial / 8,000 1 vial / 8,000 製品ページ番号について 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） 1 kit / 246,000 ※受注発注品 ※キットにグルコシル化処理後の DNA 精製用試薬およびバイサルファ フナコシホームページで各製品の詳細をご覧いただけます。 検索 http://www.funakoshi.co.jp/contents/ 製品ページ番号を入力 プルダウンで 「製品ページ検索」を選択 イト処理用試薬は含まれていません。別途ご用意下さい。 ※ロットにより酵素の活性値が異なる場合がありますので，実験の際に は製品添付のプロトコルをご確認下さい。 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です 5hmC TAB-Seq Kit WIS K001 1 kit / 231,000 品 名 シークエンシング T C 包装 / 価格（￥） メーカー 商品コード シークエンシング T メーカー 商品コード 5hmC/5mC TAB-Array Kit NEW WIS K002 TAB キットや，そのほか DNA メチル化解析時のスタンダードと バイサルファイト処理 U は製品添付のプロトコルをご確認下さい。 品 名 エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 遺伝子工学 DNA 遺伝子工学 定量 エピジェネティクス メチル化 DNA／ヒドロキシメチル化 DNA 定量キット RNA のバイサルファイト処理キット Methylamp RNA Bisulfite Conversion Kit DNA Methylation Quantification Kit ● ● プレートに DNA 試料を捕捉後，5-mC/5-hmC に特異的抗体 RNA のメチル化について と発色または蛍光基質を用いて検出します。 RNA のメチル化は mRNA，tRNA，miRNA などの様々な RNA 種で起 HPLC 法などと比較して簡便かつ低コストで，ハイスループッ こると考えられており，N6-メチルアデノシトシン（m6A）が最も共有 トアッセイが可能です。 した豊富なメチル化修飾として知られています。また，5-mC も様々な 哺乳動物，植物，菌類，バクテリア，ウイルスなど幅広い生物 種および，培養細胞，新鮮・凍結組織，パラフィン包埋組織， 血液，体液など幅広い試料由来の DNA を測定できます。 ● 製品ページ番号：8629 Memo 特 長 ● RNA 種 に 共 通 し て 見 ら れ ま す。 最 近 の 研 究 で は，m6A や 5-mC が RNA の安定性や mRNA の翻訳などに影響を与えていることや，RNA のメチル化の異常が疾患の原因となっていることが示唆されています。 測定波長：450 nm（比色） 特 長 励起 530 nm／蛍光 590 nm（蛍光） メチル化 DNA 定量キット ［製品ページ番号：4728］ ［メーカー：EPG］ 6 メチル化 品 名 出発試料 測定法 必要試料量 標準曲線範囲 操作時間 Assay 数 商品コード 包 装 価格（￥） MethylFlash Methylated DNA Quantification Kit 精製 DNA 比色 蛍光 50～200 ng 20～200 ng 0.5～10 ng 0.2～10 4 時間 4 時間 48 96 48 96 P-1034-48 P-1034-96 P-1035-48 P-1035-96 1 kit 51,000 92,000 53,000 95,000 尿試料中メチル化 DNA 定量キット ［製品ページ番号：5916］ ［メーカー：EPG］ 品 名 MethylFlash Urine Methylated DNA Quantification Kit 出発試料 尿 測定法 比色 蛍光 必要試料量 0.5～5 μl 0.5～5 μl 標準曲線範囲 0.05～1 ng 0.05～1 ng 操作時間 4 時間 4 時間 Assay 数 48 96 48 96 商品コード P-1039-48 P-1039-96 P-1040-48 P-1040-96 包 装 1 kit 価格（￥） 44,000 80,000 44,000 80,000 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です ヒドロキシメチル化 DNA 定量キット ［製品ページ番号：4727］ ［メーカー：EPG］ 品 名 MethylFlash Hydroxymethylated DNA Quantification Kit 出発試料 精製 DNA 測定法 比色 蛍光 必要試料量 50～200 ng 20～200 ng 標準曲線範囲 0.5～10 ng 0.2～5 ng 操作時間 3.5 時間 3.5 時間 Assay 数 48 96 48 96 商品コード P-1036-48 P-1036-96 P-1037-48 P-1037-96 包 装 1 kit 価格（￥） 53,000 95,000 58,000 101,000 ● 様々な組織，細胞由来の RNA を出発試料として使用できます。 ● 操作は約 3 時間で行えます。 ● シトシンのウラシルへの変換効率は 99.9％ 以上です。 ● キットに含まれるプライマーは，バイサルファイト処理した RNA に特異的にアニーリングするよう設計されており，試料の 変換を確認することができます。 ● 精製した変換 RNA は，メチル化特異的 RT-PCR やメチル化感 受性高解像能融解曲線分析（MS-HRM），バイサルファイト シークエンスに使用できます。 ● 試料：5 ng～1 μg RNA（200～500 ng を推奨） ● RNA 回収率：＞90％ ※バイサルファイト処理を行った RNA は不安定なため，cDNA の合成 を行って下さい。cDNA の合成には，EpiNext Hi-Fi cDNA Synthesis Kit（下記 Check it out! 参照）をお勧めします。 品 名 メーカー 商品コード Methylamp RNA Bisulfite Conversion Kit EPG P-9003-050 Check it out! 包装 / 価格（￥） 1 kit / 28,000 ［メーカー：EPG］ バイサルファイト処理 RNA や total RNA から高効率で cDNA を合成できます EpiNext Hi-Fi cDNA Synthesis Kit ［製品ページ番号：8895］ 細胞／組織から抽出した RNA やバイサルファイト処理 RNA を用い， PCR や cDNA ライブラリー構築などに使用可能な cDNA を合成す るキットです。 ● キットに含まれる RT enzyme により，正確かつ効率的に cDNA への逆転写反応が行われます。 ● 必要試料量：0.1 ng～2 μg RNA お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 遺伝子工学 エピジェネティクス メチル化 メチル化 DNA シークエンス用 ライブラリー作製キット EpiNext Bisulfite DNA Library Preparation Kit バイサルファイトシークエンシング用 DNA ライブラ リーを作製するキットです。作製したライブラリーは， Illumina 社の次世代シークエンサーによる WGBS や， oxBs-seq，RRBS などに使用できます。 WGBS：Whole Genome Bisulfite Sequencing ■DNA のバイサルファイト処理からライブラリー作製まで行 えるキット［製品ページ番号：8462］ ● ます。 ● RRBS：Reduced Representative Bisulfite Sequencing ※解析には Illumina 社の次世代シークエンサーが必要です。 ※別途マグネチックスタンド（96 ウェル PCR プレート用）が必要です。 DNA フラグメントのサイズ分画，精製は MQ beads を用いる ため，試料のロスがなく，迅速に操作できます。 ● 非メチル化シトシンをウラシルに高効率に変換（99.9％）し， メチル化シトシンをチミンに変換するエラー反応を抑えます （＜0.1％）。 ● 試料：凍結組織，培養細胞，ホルマリン固定パラフィン包埋組 織，胚細胞，血漿，血清などから単離したゲノム DNA ChIP，MeDIP/hMeDIP，エクソンキャプチャを行った DNA ● oxBs-seq：Oxidative Bisulfite Sequencing バイサルファイト処理から PCR までをおよそ 6.5 時間で行え 試料量：0.2～200 ng DNA（最適量：10～50 ng） 操作方法概略 Input DNA ■あらかじめバイサルファイト処理した DNA を用いてライブ ラリーを作製するキット［製品ページ番号：8120］ ● バイサルファイト処理後の一本鎖 DNA を二本鎖にし，End- エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news Amplification/ Index Addition NGS（Illumina） Bisulfite Conversion repair により平滑末端化します。その後，DNA フラグメント に直接シークエンス解析用アダプターをライゲーションするた ● め，フラグメントのロスが低減できます。 dsDNA Synthesis/ Adaptor Ligation DNA フラグメントのサイズ分画，精製は MQ beads を用いる 品 名 メーカー 商品コード ため，試料のロスがなく，迅速に操作できます。 ● わずか 5 時間でライブラリーの構築が可能です。 ● 試料：バイサルファイト処理 DNA（100～200 ng） Bisulfite-Seq High Sensitivity Kit, Illumina, EpiNext EPG P-1056A-12 12 reactions EPG P-1056A-24 24 reactions 包装 / 価格（￥） 7 1 kit / 83,000 1 kit / 158,000 ※本キットにはバイサルファイト処理用試薬は含まれていません。別途 ご用意下さい。 Check it out! 操作方法概略 次世代シークエンシング用 DNA ライブラリー作製キット Bisulfite DNA dsDNA Conversion Adaptor Ligation EpiNext DNA Library Preparation Kit for Illumina ［製品ページ番号：9034］ Size Selection ● 細胞・組織由来の断片化 dsDNA や，ChIP 反応，MeDIP/hMeDIP 反応，exon capture で得られた dsDNA を用います。 ● Amplification/ Purification High-Sensitivity Kit（#P-1053）は，平滑末端化と dA tail の付 加をワンステップで行えます（End Polishing） 。標準キット（#P- End Repair 1051）より少量の DNA 試料（0.2 ng）からライブラリーを構築 できます。 NGS（Illumina） dA Tailing ● キットには，Illumina 社の次世代シークエンサー解析用アダプ 包装 / 価格（￥） Post-Bisulfite DNA Library Preparation Kit, Illumina, EpiNext EPG P-1055-12 12 reactions 1 kit / 75,000 EPG P-1055-24 24 reactions 1 kit / 132,000 （Singleplexed）と含むライブラリー（Multiplexed）のいずれ も構築可能です。 ● 試料量： 5 ng～1 μg DNA（最適量：100～200 ng） （#P-1051） 0.2～100 ng（最適量：10～50 ng） （High-Sensitivity Kit：#P1053） お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です ターが含まれており，バーコード配列を含まないライブラリー 品 名 メーカー 商品コード ［メーカー：EPG］ エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 遺伝子機能解析 細胞情報伝達 メチル化 エピジェネティクス 5-hmC 解析用ライブラリー作製キット TET 活性の測定キット RRHP 5-hmC Library Prep Kit Epigenase TET Activity / Inhibition Assay Kit 製品ページ番号：9033 バイサルファイト処理を行わず，ゲノムワイドに次世代 シークエンサーで 5-hmC を解析するためのライブラ リーを作製できるキットです。 ※解析には Illumina 社の次世代シークエンサー（TruSeq chemistries for HiSeq, MiSeq）が必要です。 活性測定 製品ページ番号：6680 5-mC の水酸化酵素 TET の活性を，比色または蛍光に より測定するキットです。核抽出物中の酵素活性および 精製酵素の活性を測定できます。 Memo Memo TET とは RRHP について RRHP（Reduced Representation Hydroxymethylcytosine Profiling）は，5-hmC のグリコシル化と制限酵素 Msp Ⅰを利用し，5-hmC を含む配列のみを特異的に解析する方法です。Msp Ⅰは，CCGG 配列 を認識し 5-mC および 5-hmC のいずれも切断しますが，グリコシル化 された 5-hmC は切断されません。この特性を利用し，DNA にアダプ TET（Ten-Eleven Translocation） は，5－ メ チ ル 化 シ ト シ ン（5mC）を 5－ヒドロキシメチル化シトシン（5-hmC） ，5－ホルミル化シ トシン（5-fC） ，5－カルボキシル化シトシン（5-caC）へと酸化するす べてのステップを触媒し，5-mC の脱メチル化に関与すると考えられて います。 ター配列を付加してグリコシル化処理を行った後に Msp Ⅰで処理する 特 長 ことで，アダプター配列が付加された 5-hmC を含む断片のみを得るこ とができます。 ● 基質が結合したプレートに TET を含む試料を添加し，生成した ヒドロキシメチル化物に特異的な抗体を用いて，酵素活性を測 定します。 MspⅠ digestion 8 ● 培養細胞や，哺乳動物，植物，真菌，細菌など幅広い生物種の 新鮮／凍結組織由来の核抽出物中の酵素活性および精製酵素の 活性を測定できます。 Adapterization Glucosylation ● 少量の試料でも活性を測定できます。 ● TET の活性を測定できるだけでなく，TET 阻害物質の評価にも 適しています。 ● 測定に要する時間は約 5 時間です。 ※核 抽 出 物 の 調 製 に は EpiQuik Nuclear Extraction Kit Ⅰ（#OP- MspⅠ digestion 0002-1）のご使用をお勧めします。詳細はフナコシホームページ （製品ページ番号：2214）をご覧下さい。 キット名 核抽出物の使用量 精製酵素の使用量 測定波長 only glucosylated fragments can be amplified 特 長 品 名 ● 試料のバイサルファイト処理は不要です。 ● キットには，RRHP に必要な酵素やバッファー，ライブラリー 構築用の試薬が全て含まれています。 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です ● 必要試料量：≧100 ng（ニューロン由来 DNA） ≧500 ng（その他の細胞，組織由来 DNA） 品 名 メーカー 商品コード Colorimetric Kit Fluorometric Kit 2～20 μg（至適範囲：5～10 μg） 20 ng～1 μg 10～500 ng 450 nm 励起 530 nm／蛍光 590 nm メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） RRHP 5-hmC Library Prep Kit ZYR D5450 12 preps ZYR D5451 25 preps 包装 / 価格（￥） TET Activity/Inhibition Assay Kit, Colorimetric, Epigenase 1 kit / EPG P-3086-48 48 assays EPG P-3086-96 96 assays 1 kit / TET Activity/Inhibition Assay Kit, Fluorometric, Epigenase 1 kit / EPG P-3087-48 48 assays EPG P-3087-96 96 assays 1 kit / 1 kit / 187,000 1 kit / 312,000 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 53,000 92,000 53,000 92,000 遺伝子工学 受託 エピジェネティクス 解析受託 DNA メチル化関連受託サービス 製品ページ番号：7316 メーカー：各社 お客様とご相談のうえ，ご要望の内容に最適のサービスを提案いたします。まずは当社受託・特注品業務担当までお 気軽にお問い合わせ下さい。 メチル化 DNA 解析受託サービス ● 下記のチャートにおいてお客様のテーマがどの段階か確認します。 ● 各手法に応じて最適な実施先を選定し，明細書を作成してご提案します。 ● ご注文内容に基づき実験を開始します。 エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 解析フローチャート 全ゲノムの網羅的解析 定性解析 特定遺伝子に絞った解析 転写開始点の確認 次世代シークエンシング （RRBS，RRHP） 電気泳動法 サブクローニング法 定量解析 次世代シークエンシング パイロシークエンス法 （＜40 bp 程度） 次世代シークエンシング （PCR 併用） 9 RRBS：Reduced Representative Bisulfite Sequencing RRHP：Reduced Representative Hydroxymethylcytosine Profiling 解析手法 対応 5-mC 次世代シークエンシング（NGS） 5-mC/5-hmC パイロシークエンシング 5-mC 電気泳動（制限酵素切断パターン） 5-mC/5-hmC Bisulfite PCR（コロニー PCR） 5-mC/5-hmC Targeted Bisulfite Sequencing（PCR＋NGS） 5-mC パイロシークエンシングプライマー設計サービス 読み取り規模 全ゲノムリード メチル化領域特異的 指定箇所（40 bp/run） 指定箇所 指定箇所 指定箇所 備考 全ゲノムリード 5-hmC にも正式対応 指定箇所（40 bp/run） プライマー設計必要 プライマー設計必要 プライマー設計必要 DNMT 阻害物質スクリーニングサービス 3 種類の DNMT（DNMT1，DNMT3A/3L，DNMT3B/3L）で構 の確定までトータルパッケージを素早く提供します。 成されたパネルから任意の因子を選択して頂き，アッセイを行い ■サービス内容 ます。 ● 指定配列，箇所に対する最適な cDNA template 取得用 PCR Primer の設計 ● PCR 条件の最適化 ● Pyrosequencing Primer の設計 ● Pyrosequencing 条件の最適化 モジュレータースクリーニングサービス モジュレーターによる酵素やコファクターの阻害によって，DNA メチル化状態が変化し，転写制御などに影響を及ぼします。DNA 修飾に影響を及ぼすモジュレーターが探索されれば，遺伝子機能 活性化の直接的な調節が期待できます。 お問い合わせ先： 〈受託〉TEL：03-5684-1645 ／ FAX：03-5684-6539 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です PCR Primer および Pyrosequencing Primer の設計，分析条件 エピジェネティクス特集 クロマチン免疫沈降（ChIP）関連製品 ストリップウェルフォーマットで少ない試料数からハイスループット解析まで，幅広く 対応します。 クロマチン免疫沈降キット ● 溶出した DNA 試料は，ChIP-PCR，ChIP-on-chip，ChIP-seq などに使用できます。 品 名 目 的 出発試料 試料量 操作時間 ポジコン vs ネガコン の濃縮効率 prep 数 商品コード 包 装 価格（￥） EpiQuik Tissue ChIP Kit 組織からの ChIP 組織 10～30 mg 組織 5 時間 EpiQuik Plant ChIP Kit 植物試料からの ChIP 植物組織（花，葉，稚苗） 0.8～1 g 組織 6 時間 100～200 100～200 100～200 24 P-2002-1 48 P-2002-2 1 kit 63,000 39,000 96 P-2002-3 24 P-2003-1 95,000 39,000 ChromaFlash High Sensitivity ChIP Kit 目 的 出発試料 少量の細胞／組織からの ChIP 細胞／組織 2×103～1×106 細胞 0.5～50 mg 組織 5 時間 操作時間 ポジコン vs ネガコン の濃縮効率 prep 数 商品コード 包 装 価格（￥） ［メーカー：EPG］ EpiQuik ChIP Kit 細胞からの ChIP 細胞 1×106～2×106 細胞 5 時間 品 名 試料量 10 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 96 P-2003-3 95,000 24 48 P-2014-24 P-2014-48 1 kit 51,000 83,000 ChromaFlash One-Step Magnetic ChIP Kit クロマチンの断片化・免疫沈降 単離したクロマチン 0.1～15 µg クロマチン 4 時間 ＞500 24 P-2027-24 48 P-2003-2 1 kit 63,000 100～200 48 P-2027-48 48 P-2026-48 69,000 54,000 1 kit 96 P-2026-96 1 kit 43,000 92,000 MeDIP/hMeDIP（メチル化／ヒドロキシメチル化 DNA 特異的免疫沈降）用キット ● 溶出した DNA は，PCR（MeDIP-PCR）やマイクロアレイ（MeDIP-chip）などに使用できます。 用 途 出発試料 Methylamp Methylated DNA Capture Kit MeDIP 精製 DNA 必要試料量 0.5～1 μg DNA 50～500 ng/well 濃縮効率 操作時間 商品コード Prep 数 包 装 価格（￥） ＞98％ 3 時間 ＞99％ 3 時間 P-1015-24 24 品 名 用 途 出発試料 必要試料量 濃縮効率 操作時間 商品コード Prep 数 包 装 価格（￥） EpiQuik Tissue MeDIP Kit 組織からの MeDIP 組織 20 mg ＞95％ 3.5 時間 P-2020-24 P-2020-48 24 48 1 kit 54,000 92,000 品 名 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です EpiQuik MeDIP Ultra Kit EpiQuik MeDIP Kit 少量の試料からの MeDIP 精製 DNA 細胞からの MeDIP 細胞 1×105 細胞（単層／接着細胞） 2～5×105 細胞（浮遊細胞） ＞95％ 4 時間 P-2019-24 P-2019-48 24 48 1 kit 54,000 92,000 P-1015-48 48 P-1052-24 24 88,000 58,000 1 kit 53,000 ［メーカー：EPG］ P-1052-48 48 1 kit 101,000 EpiQuik hMeDIP Kit hMeDIP 精製 DNA 100 ng～1 μg ＞1000（Positive vs Negative Control） 3 時間 P-1038-24 P-1038-48 P-1038-96 24 48 96 1 kit 54,000 98,000 170,000 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 細胞情報伝達 エピジェネティクス 遺伝子工学 クロマチン 精製 ChIP アッセイ過程の反応液から DNA を精製・濃縮するキット 哺乳動物の細胞／植物試料からの クロマチン抽出キット 製品ページ番号：3177 製品ページ番号：5355 ChIP DNA Clean and Concentration Kit ChromaFlash Chromatin Extraction Kit ChIP アッセイ過程の反応液から，カラムを使用して DNA を精製・濃縮するキットです。 クロマチンおよび DNA－タンパク質複合体を迅速かつ 簡便に抽出するキットです。 共通の特長 特 長 ● わずか 2 分間で高純度の DNA を精製できます。 ● ● 少量（≧6 μl）の溶出液で高濃度の DNA 溶液を得ることがで ● 溶出した DNA は，PCR，DNA アレイ，定量，サザンブロッ 得られたクロマチンは，ChIP，in vitro での DNA－タンパク ChromaFlash Chromatin Extraction Kit ティングなどの用途に使用できます。 ● 有機溶媒による抽出やエタノール沈殿を省略できます。 ● 界面活性剤＊，抗体，Proteinase 存在下でも効率良く DNA を ● カラムに結合できます。 ● クロスリンク処理に関らずクロマチンを抽出できます。 質相互作用や核内酵素を用いたアッセイなどに使用できます。 きます。 ● 試料調製 エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news での実験操作に使用可能なクロマチンを抽出できます。 ● 1×106 個の細胞または 50 mg の組織を出発試料とした場合， 4 μg のクロマチンを抽出できます。 細 胞 ラ イ セ ー ト，Proteinase K 反 応 液，PCR 溶 液， キ ナ ー ゼ・ホスファターゼ反応液のような酵素反応液からの DNA 精 哺乳動物の培養細胞および新鮮・凍結組織から 60 分で，下流 ● 試料量：培養細胞：1×105～5×106 個 製にも使用できます。 （最適範囲：1×106～5×106 個） ● DNA 試料から塩や界面活性剤の除去にも有用です。 新鮮・凍結組織：10～200 mg ● 精製 DNA のサイズ：50 bp～23 kb （最適範囲：50～200 mg） ● DNA 収量：最大 5 μg（6 μl elution buffer） 品 名 ● 収率：50 bp～10 kb：70～90％，11 kb～23 kb：50～70％ ＊界面活性剤許容濃度：SDS（≦1％），NP-40（≦5％）， Triton X-100（≦5％），Tween-20（≦5％） ， 11 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Chromatin Extraction Kit, ChromaFlash（100 extractions） 1 kit / EPG P-2001-100 Sarkosyl（≦5％） 24,000 ChromaFlash Plant Chromatin Extraction Kit ● 植物試料からおよそ 2 時間で，下流での実験操作に使用可能な クロマチンを抽出できます。 ● 200 mg の植物試料から，0.5～2 μg のクロマチンを抽出でき ます。 ガラクトース誘導 ● ChIP アッセイ後の PCR 解析 ガラクトースにより GAL 遺伝子を誘導した酵母（＋），誘導しなかった酵母（－）からラ イセートを調製し，抗 RNA ポリメラーゼⅡ抗体を用いて ChIP アッセイを行った。本製 品により溶出した DNA をテンプレートにして，GAL 遺伝子特異的プライマーを用いて PCR を行い，増幅産物を電気泳動した。 試料量：0.1～1 g の植物組織（花，葉，稚苗） 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Chromatin Extraction Kit, Plant, ChromaFlash（50 extractions） 1 kit / 25,000 EPG P-2022-50 品 名 包装 / 価格（￥） 1 kit / 1 kit / 19,000 18,000 製品ページ番号について フナコシホームページで各製品の詳細をご覧いただけます。 検索 http://www.funakoshi.co.jp/contents/ 製品ページ番号を入力 プルダウンで 「製品ページ検索」を選択 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です メーカー 商品コード ChIP DNA Clean and Concentrator Kit（50 preps） ZYR D5205 with Capped Column ZYR D5201 with Uncapped Column エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 遺伝子工学 NEW クロマチン 機器 NEW 試料調製 ChIP から次世代シークエンス用の 試料調製まで行えるキット EpiNext ChIP-Seq High-Sensitivity Kit 製品ページ番号：51927 少量の試料で，低バックグラウンドの ChIP を行うこと ができます。作製したライブラリーは Illumina 社の次 世代シークエンサーに使用できます。 ChIP 破砕装置 NGS 用のクロマチン／DNA せん断などに 最適な超音波破砕装置 EpiSonic 2000 製品ページ番号：63428 次世代 ChIP アッセイ，次世代シークエンシング用のク ロマチン／DNA せん断などの幅広い用途に使用できる 破砕装置です。 Memo ChIP-Seq について ChIP-Seq は， ク ロ マ チ ン 免 疫 沈 降（ChIP） と 次 世 代 シ ー ク エ ン ス （NGS）を組み合わせた技術で，タンパク質-DNA 相互作用の解析に有 用なツールです。例えば，ChIP-Seq によるゲノムワイドな転写因子の 結合領域の解析は，特に注目を集めています。その一方で，ChIP-Seq は下記のような欠点があります。 1.十分な量の DNA ライブラリーを得るために，大量の細胞／組織が必 要。そのため，腫瘍検体や胚組織などに適していない。 2.ChIP DNA のバックグラウンドが高い。 15 μl の試料量で，最大 12 種類の試料を同時に処理できます。 この課題に対し Epigentek 社は，少量の試料から迅速かつ簡便に低バッ ● 150 bp～20 kbp のサイズにせん断できます。 クグラウンドの ChIP DNA を得られ，次世代シークエンス用ライブラ ● 0.2 ml または 1.5 ml チューブを使用できます＊。 リーの構築まで行えるキットを開発しました。 ● 密閉したチューブでの破砕処理が可能であるため，コンタミ 3.作業が煩雑かつ時間がかかる。 12 特 長 ● ネーションの心配がありません。 特 長 ● ● 様々な生物種の細胞・組織から単離したクロマチンを用いるこ とができます。 ● モノクローナル，ポリクローナル抗体のいずれも適用できま 冷却装置により反応液の温度上昇を抑え，均一な破砕を可能に します。 ● 超音波コンバーターを消音ボックスに収容した消音設計です。 ＊EpiSonic 専用チューブ（0.2 ml，1,000 本）が付属しています。 す＊。 ● 細胞／組織 DNA の単離からライブラリー構築まで，およそ 7 時間で行うことができます。 ● バーコード配列を付加したマルチプレックス解析にも最適です。 ● 適用試料：培養細胞，新鮮・凍結組織など ● 必 要 試 料 量：1×105～1×106 細 胞（4×105～5×105 を 推 奨），5～50 mg 組織（20～30 mg を推奨） ＊使用できる抗体のクラスは IgG のみです。また，ChIP に使用する抗 体の適合性を予め検証することをお勧めします。 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） ChIP-Seq High-Sensitivity Kit, Illumina, EpiNext NEW EPG P-2030-12 12 reactions 1 kit / 90,000 EPG P-2030-24 24 reactions 1 kit / 168,000 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 EpiSonic により 12 種類の試料を一度に処理した結果，全ての試料で同様なサイズにせ ん断された DNA が得られた。 仕様と価格 ［メーカー：EPG］ 電 源 100～120 V AC，50/60 Hz コントローラーサイズ 20.3W×38.7D×21.6H cm（7.3 kg） 消音ボックスサイズ 25.5W×25.5D×42H cm（11.1 kg） （発振ユニットを含む） 出 力 750 W（最大） 出力周波数 20 kHz（平均） 動作環境 温度：4～35℃，相対湿度：20～90％（結露厳禁） 商品コード EQC-2000 NEW 包 装 1 unit 価格（￥） 2,765,000 お問い合わせ先：〈機器〉TEL：03-5684-1619 ／ FAX：03-5684-5643 細胞情報伝達 エピジェネティクス ヒストン 修飾ヒストン H3/H4 を同時に 検出するキット 品 名 メーカー 商品コード 細胞情報伝達 EpiQuik Histone H3/H4 Modification Multiplex Assay Kit HDAC 製品ページ番号：8795（Histone H4） SIRT Screening Assay Kit 試料中に存在する修飾ヒストン H3/H4 を，比色法によ り検出・定量するキットです。 特 長 マニュアルおよびハイスループット解析に対応しています。 ● プレートには各種修飾ヒストンに対する抗体があらかじめコー トされています。 製品ページ番号：5990 Memo SIRT とは Sirtuin（SIRT， サ ー チ ュ イ ン） は， ヒ ス ト ン 脱 ア セ チ ル 化 酵 素 （HDAC）のクラスⅢに属するトリコスタチン A 非感受性のリジン脱ア ● 操作は 2.5 時間で完了します。 ● 試 料 量：20～500 ng/well（ ヒ ス ト ン 抽 出 物） ，1～25 ng/ well（精製ヒストン） ● 測定生物種：ヒト，マウス，ラット，植物＊，菌類＊，バクテリア＊ ● 測定波長：450 nm（補正波長：655 nm） セチル化酵素です。酵母から哺乳動物に至るまで高度に保存されてお り，NAD＋依存的にタンパク質のリジン残基を脱アセチル化します。 特 長 ● ＊ヒストン H3/H4 の相同性が高い場合。 測定可能な修飾ヒストン #P-3100-96 H3K27me1 H3K27me2 H3K27me3 H3K36me1 H3K36me2 H3K36me3 H3K79me1 H3K79me2 H3K79me3 H3K9ac H3K14ac H3K18ac 96 ウェルフォーマットで，全ての操作は同一のウェル内で行え ます。 ※測定にはマイクロプレートリーダーが必要です。 H3K4me1 H3K4me2 H3K4me3 H3K9me1 H3K9me2 H3K9me3 H3K56ac H3Kser10P H3Kser28P Total H3 ● 測定波長：励起 350～360 nm／蛍光 450～465 nm ● 生じた蛍光は約 30 分間安定です。 H4K16ac H4R3m2a H4R3m2s H4K20m1 H4K20m2 H4K20m3 基質が p53 の配列の一部で構成されており，脱アセチル化後に Developer による切断を受けることで蛍光を生じます。 Ac-Arg-His-Lys-Lys(Ac)- AMC NAD＋ H4ser1 Total H4 SIRT1 Nicotinamide+O-Ac-ADP-ribose Ac-Arg-His-Lys-Lys-AMC 使用例 Developer Ac-Arg-His-Lys-Lys 1.2 1.1 1 0.9 MCF-7 MDA-231 + AMC SIRT 1 Kit（#10010401）の反応 ※測定には蛍光プレートリーダーが必要です。 品 名 0.8 メーカー 商品コード 0.7 SIRT Direct Fluorescent Screening Assay Kit SIRT1 CAY 10010401 CAY 700280 SIRT2 CAY 10011566 SIRT3 0.6 0.5 0.4 0.3 包装 / 96 tests / 96 tests / 96 tests / 0.2 0.1 B To lan ta k H lH 3K 3 H 4m 3K 1 H 4m 3K 2 H 4m 3K 3 H 9m 3K 1 H 9m 3K 2 H 9m 3K 3 H 27 3K m H 27 1 3K m H 27m2 3K 3 H 36 3K m H 36 1 3K m H 36 2 3K m H 79 3 3K m H 79 1 3K m H 79m2 3K H 9a 3 3K c H 14a 3K c H 18 3K a c H 56 3s ac H er1 3s 0 er P 28 P 0 Histon modifications MCF-7 細胞または MDA-231 細胞由来のヒストン抽出物を精製し，本製品（#P-310096）を用いて各種修飾ヒストンを測定した。 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 価格（￥） 52,500 52,500 52,500 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です OD450 nm 13 測定原理 #P-3102-96 H4K5ac H4K8ac H4K12ac 活性測定 Sirtuin の阻害／活性化物質を スクリーニングできるキット 製品ページ番号：8074（Histone H3） ● 包装 / 価格（￥） Histone Modification Multiplex Assay Kit, Colorimetric, EpiQuik 1 kit / 119,000 EPG P-3100-96 H3 EPG P-3102-96 H4 1 kit / 102,000 エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 細胞情報伝達 HDAC 細胞情報伝達 活性測定 ヒストン 蛍光により HDAC 活性を測定するキット ヒストンアセチルトランスフェラーゼ 阻害物質のスクリーニングキット HDAC Activity Assay Kit HAT Inhibitor Screening Assay Kit 製品ページ番号：6367 ヒストン脱アセチル化酵素（HDAC）の活性を，蛍光に より簡便かつ迅速に測定するキットです。核抽出物と， 培養細胞用のキットがあります。 特 長 ● pCAF（p300/CBP-Associated Factor）の HAT 活性 阻害物質を蛍光で迅速にスクリーニングするキットです。 pCAF とは pCAF はヒストンアセチルトランスフェラーゼの一種で，ヒストン H3， コントロールとしてヒト HDAC1 組換え体が，HDAC 阻害物質 H4 の特定リジン残基をアセチル化します。がん抑制因子である p53， として Trichostatin A が含まれています。 ● 製品ページ番号：2194 Memo 阻害物質や活性化因子の HDAC に対するプロファイリングに有 用です。 ● PTEN をアセチル化することも報告されています。 測定波長：励起 340～360 nm／蛍光 440～465 nm ■Activity Assay Kit（#10011563） ● 特 長 核抽出物中の HDAC Class 1，Class 2 の活性測定に使用でき ● ます。 ● 同一のマイクロプレートでわずか 2 ステップでアッセイできます。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） HDAC Activity Assay Kit, Fluorometric CAY 10011563 14 96 tests / 49,000 ■Cell-Based Kit（#600150） ● 生細胞中の HDAC 活性を測定することができます。 ● 細胞透過性の HDAC 蛍光基質を用いて測定します。 アセチル化 3 ステップの操作で簡単かつ迅速に pCAF 阻害物質をスクリー ニングできます。 ● 96 ウェルフォーマットで，全ての操作は同一ウェル内で行えます。 ● 測定波長：励起 360～390 nm／蛍光 450～470 nm ※測定には蛍光プレートリーダーが必要です。 操作法概略 1.ヒストン H3 基質ペプチドおよびアセチル-CoA を pCAF とイ ンキュベートすることにより，アセチル化 H3 基質ペプチドと CoASH が生成される。 ※測定には蛍光プレートリーダーが必要です。 2.イソプロパノールを加え，酵素反応を停止する。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） HDAC Cell-Based Activity Assay Kit CAY 600150 96 tests / 44,500 3.CPM（7-diethylamino-3-（ 4'-maleimidylphenyl）-4methylcoumarin）と CoASH を反応させ，蛍光を測定する。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） HAT Inhibitor Screening Assay Kit CAY 10006515 製品情報や技術情報が満載！！ 96 tests / 52,500 詳細は フナコシ エピジェネ 検索 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です エピジェネティクス オンラインカタログ ～CONTENTS～ ● メチル化 DNA／メチル化 RNA ● ヒストン修飾（メチル化／アセチル化／リン酸化） ● タンパク質-DNA 相互作用・クロマチン ● エピジェネティクス関連抗体 ● エピジェネティクス受託サービス キャンペーン情報や文献情報サイトもご紹介しています。 最新情報 実施中のキャンペーンや，新製品についてご紹介しています。 PDF 版カタログ ダウンロードや印刷が可能です。 用語解説 お役立ち情報 阻害物質などの情報もご用意しています。 文献情報サイトなどへのリンクをご用意しています。 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 細胞情報伝達 ヒストン 阻害物質 ブロモドメイン阻害物質 スクリーニングキット Bromodomain Inhibitor Screening Assay Kit ブロモドメインと基質の結合を阻害する物質を，スク リーニングするキットです。384 ウェルフォーマット のため，カイネティクス解析やハイスループットスク リーニングに適しています。 Memo BAZ2B とは BAZ2B（Bromodomain adjacent to zinc finger domainprotein 2B）は，ブロモドメインファミリー BAZ に属するタンパク質です。 BAZ2B は ZB2 モチーフ，LH モチーフ，BAZ1/2，WAKZ モチーフ， 品 名 メーカー 商品コード 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 193,000 193,000 193,000 96,000 96,000 96,000 96,000 96,000 96,000 96,000 193,000 193,000 193,000 193,000 193,000 193,000 193,000 193,000 193,000 96,000 ※測定には AlphaScreen microplate reader および専用の試薬と専用 のプレートが別途必要です。詳細は当社テクニカルサポート（試薬担 PHD フィンガーそしてブロモドメインから構成されています。BAZ2B 当）までお問い合わせ下さい。 は，クロマチン構築因子である ACF を構成する ISWI のヒトホモログと 相互作用することで，クロマチンの再構築に関与する可能性が示唆され ています。 包装 / 価格（￥） BRD Inhibitor Screening Assay Kit（384 reactions） ATAD2A BPS 32601 BPS 32605 ATAD2B BPS 32600 BAZ2B BPS 32521 BRD1 BPS 32522 BRD2（BD2） BPS 32513 BRD3（BD1） BPS 32523 BRD3（BD2） BPS 32514 BRD4（BD1） BPS 32524 BRD4（BD2） BPS 32519 BRD9（BD1） BPS 32609 BRG1 BPS 32608 BRFP3 BPS 32611 CECR2 BPS 32607 CREBBP BPS 32624 TAF1（BD2） BPS 32604 TAF1（BD1＋BD2） BPS 32603 TAF1L（BD1＋BD2） BPS 32602 TAF1L（BD2） BPS 32606 TRIM24 BPS 32610 SMARCA2 エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news TR-FRET 法によるスクリーニングキット［製品ページ番号：8740］ ブロモドメイン（BRD）と基質の結合を阻害する物質の阻害活性 BRD3 とは BRD3 は，アセチル化ヒストンと特異的に結合し転写を制御するタンパ ク質です。また，アセチル化された転写因子 GATA1 とも結合すること が報告されており，赤血球細胞における GATA1 とクロマチンの相互作 用や，赤血球の成熟に関与している可能性が示唆されています。 BRD4 とは BRD4 は，アセチル化ヒストンに特異的に結合し，有糸分裂後の転写再 活性化を促進することによってエピジェネティックな情報を伝達するク ロマチンアダプターです。また，パピローマウイルス感染細胞における 細胞分裂では，ウイルスの E2 タンパク質と宿主の BRD4 の相互作用を 介してウイルスゲノムが宿主の有糸分裂染色体につなぎとめられている ことが示されており，BRD4 がウイルスゲノムの分配に関与することが 示唆されています。 AlphaLISA によるスクリーニングキット［製品ページ番号：6055］ AlphaLISA を使用したビーズベースの発光アッセイシステムによ を，TR-FRET（Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer）法により簡便かつ迅速に測定できるキットです。 ● BRD 阻害物質のスクリーニングや創薬研究に有用です。 ● 測定波長：励起 340 nm／蛍光 620 nm（Td donor）および 15 665 nm（Dye acceptor） ※測定には TR-FRET 法に対応した蛍光プレートリーダーが別途必要です。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） TR-FRET BRD Assay Kit（384 reactions） BRD2（BD1＋BD2） BPS 32614 BPS 32615 BRD3（BD1＋BD2） BPS 32613 BRD4（BD1） BPS 32612 BRD4（BD1＋BD2） BPS 32616 BRDT（BD1＋BD2） 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 96,000 96,000 96,000 96,000 96,000 フナコシニュースの送付について り，ブロモドメインを有するタンパク質の阻害物質のスクリーニ ングを行うキットです。 ブロモドメインの，アセチル化ヒストン基質に対する非常に特 新規募集 変更・停止 異的な結合を利用した，阻害物質のスクリーニングキットです。 ※AlphaLISA および AlphaScreen は PerkinElmer 社の登録商標です。 ※アクセプター／ドナービーズは本キットには含まれていません。別途 ご用意下さい。 毎月 2 回，フナコシニュースは最新の情報をお届けします。定期送付 の新規お申し込み（無料） ・送付先の変更など下記までご連絡下さい。 e-mail：[email protected] Fax：03-5684-1634 フナコシホームページ （http://www.funakoshi.co.jp） からオンラインで行うこともできます。 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です ● エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 細胞情報伝達 ヒストン 細胞情報伝達 メチル化 ヒストン 核抽出物中の HMT 活性を測定するキット リン酸化ヒストン検出用キット EpiQuik HMT Activity / Inhibition Assay Kit EpiQuik Histone H3 Phosphorylation Assay Kit ヒストンメチルトランスフェラーゼ（HMT）活性測定 のほか，HMT 活性阻害物質の評価にも最適です。 ヒストン H3 の Ser10 または Ser28 のリン酸化を，比 色法または蛍光法により検出するキットです。 製品ページ番号：2205 製品ページ番号：4090 特 長 ● 特 長 ラジオアイソトープを用いた従来の方法では，操作時間が長い， ● 3 時間以内に操作が終了します。 ハイスループット化が困難，廃棄物処理が煩雑などの様々な問 ● ストリップマイクロプレートを使用するため，ハイスループッ 題がありました。本製品は，ラジオアイソトープを使用せずに， ヒストンメチルトランスフェラーゼ（HMT）活性を測定できます。 操作は 3 時間で完了します。 ● ラジオアイソトープの測定，抽出，クロマトグラフィーなどの ラジオアイソトープの測定，電気泳動，クロマトグラフィーな ● 測定波長：450 nm（比色法） 操作は必要ありません。 励起 530 nm／蛍光 590 nm（蛍光法） ストリップウェルプレートを使用するため，マニュアル操作と ■Global Histone H3 Phosphorylation Assay Kit 自動化処理のいずれにも適しています。 ● ト解析にも適しています。 ● どの操作が必要ありません。 ● ● ● 適用動物種：ヒト，マウス，ラット ※核 抽 出 物 の 調 製 に は，EpiQuik Nuclear Extraction Kit Ⅰ（#OP0002-1）のご使用をお勧めします。 16 リン酸化 ヒト，マウスなどの哺乳動物由来の細胞（接着／浮遊），組織 （新鮮／凍結）から抽出したヒストンを使用します＊。 ● 検出感度：2 ng ＊本製品に Lysis Buffer やヒストン抽出用の試薬は含まれていません。 別途ご用意下さい。 操作法概略 1.核抽出物にビオチン標識された基質を加え，1 時間インキュ ベートする。 ※Fluorometric Kit での検出には，蛍光マイクロプレートリーダーが必 要です。 品 名 2.捕捉抗体と反応後，洗浄する。 メーカー 商品コード 3.検出用抗体と反応後，洗浄する。 4.Developing solution で発色させた後，測定する。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） HMT, H3-K4, Activity/Inhibition Assay Kit, EpiQuik EPG P-3002-1 48 assays EPG P-3002-2 96 assays HMT, H3-K9, Activity/Inhibition Assay Kit, EpiQuik EPG P-3003-1 48 assays EPG P-3003-2 96 assays HMT, H3-K27, Activity/Inhibition Assay Kit, EpiQuik EPG P-3005-48 48 assays EPG P-3005-96 96 assays 1 kit / 1 kit / 54,000 92,000 1 kit / 1 kit / 54,000 92,000 1 kit / 1 kit / 54,000 92,000 包装 / 価格（￥） Global Histone H3 Phosphorylation（Ser10）Assay Kit, EpiQuik 1 kit / 44,000 EPG P-7002-48 Colorimetric（48 assays） EPG P-7002-96 Colorimetric（96 assays） 1 kit / 79,000 EPG P-7003-48 Fluorometric（48 assays） 1 kit / 44,000 EPG P-7003-96 Fluorometric（96 assays） 1 kit / 79,000 Global Histone H3 Phosphorylation（Ser28）Assay Kit, EpiQuik 1 kit / 44,000 EPG P-7004-48 Colorimetric（48 assays） EPG P-7004-96 Colorimetric（96 assays） 1 kit / 79,000 EPG P-7005-48 Fluorometric（48 assays） 1 kit / 44,000 EPG P-7005-96 Fluorometric（96 assays） 1 kit / 79,000 ■In situ Histone H3 Phosphorylation（Ser10）Assay Kit ● 比色法により検出するキットです。 ● 96 ウェルプレートに培養した細胞を直接アッセイできます。 ● ヒストン H3 のリン酸化に対する促進および抑制物質のハイス 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です ループット解析に有用です。 ● 試料：接着細胞 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） In Situ Histone H3 Phosphorylation（Ser10）Assay Kit, EpiQuik 1 kit 72,000 EPG P-7001-96 96 assays お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 細胞情報伝達 受託 ヒストン 細胞情報伝達 受託 スクリーニング ヒストン 解析受託 ヒストン修飾関連化合物スクリーニング／ プロファイリングサービス ヒストン修飾モジュレーター スクリーニングサービス ヒストン修飾関連酵素を用いて，化合物の阻害活性測定 を行います。エピジェネティクス創薬研究における候補 化合物のスクリーニング，プロファイリングを総合的に 承ります。 ヒストン修飾（アセチル化，メチル化，リン酸化）に対 するモジュレーターをハイスループットかつ迅速にスク リーニングする受託サービスです。 製品ページ番号：7501 メーカー：BPS ※本サービスは研究用です。臨床用途には利用できません。 サービスの概要 ● 薬剤候補などの化合物をご送付いただき，お選び頂いたヒスト ン修飾酵素パネルの酵素活性に対する阻害能を測定します。 ● 第 1 ステップでは単一濃度で被験物質の阻害活性を評価（スク リーニング）します。 ● 第 2 ステップでは，第 1 ステップで絞り込んだ被験物質を用い 製品ページ番号：1214 メーカー：EPG Memo エピジェネティクス分野におけるモジュレーター探索の 重要性について DNA やヒストンの修飾に影響を及ぼすモジュレーターが探索されれば， 遺伝子機能活性化の直接的な調節が期待できます。このようなモジュ レーターの探索は，がんなどに対する創薬研究のみならず，幹細胞分 化，老化，植物での遺伝子発現などの研究分野でも行われています。 て，10 種類程度の異なる濃度で IC50 値を決定します。 ● ご要望に応じて測定条件を変更できます。 ● 被験物質に対し，ご希望のコントロール物質がある場合は予め ご 指 定 下 さ い。 通 常 は コ ン ト ロ ー ル 無 し， ま た は BPS Bioscience 社の標準コントロール物質を採用します。 ※コントロール物質の試験にも料金が発生します。 サービス体系 1.初期スクリーニング 2.IC50 決定試験（容量反応試験） 3.構造評価試験（抽出ヒストンを用いた in situ 試験） 4.パスウェイ依存的メチル化／脱メチル化評価試験 Bromodomain ● HDAC Histone Demethylase ● Histone Methyltransferase ● Sirtuin ● 部位特異的なヒストン修飾の評価 固定／透過処理 ⇒ ● 17 解析対象 パネルの種類 ● 細胞 など エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news モジュレーター ※パネル内容をまとめたリストを用意しています。ご希望の方は，当社 標識抗体 受託・特注品業務担当までお問い合わせ下さい。 ※パネルを構成する酵素の数は，活性型組換え体の産生状況により増減 する場合があります。 比色／蛍光測定 ご注文方法／価格 阻害物質 の場合 詳細は当社受託・特注品業務担当までお問い合わせ下さい。 ※価格，納期などについては，ご依頼内容に応じて個別にお見積りいた モジュレーター 無しの場合 活性化物質 の場合 します。 展示会出展のお知らせ 中 高 ご注文方法／価格 展示会担当（下記参照）までお問い合わせください。 詳細は当社受託・特注品業務担当までお問い合わせ下さい。 当社展示会担当：[email protected] ※化合物数，標的因子数，および各スクリーニングステップにより価格 名 称 出展期間 第 9 回 日本エピジェネティクス 5 月 25 日～26 日 研究会 展示会場 学術総合センター 一橋講堂（東京） が異なります。 ※受託内容の秘密保持に関する契約も可能です。 お問い合わせ先： 〈受託〉TEL：03-5684-1645 ／ FAX：03-5684-6539 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です 会場にて皆様のご来場をお待ちしております。詳細については，当社 低 ウイルス （B） 1.00E+10 1.00E+09 濃縮 1.00E+08 簡便・高効率なウイルス濃縮試薬 PEG-it Virus Precipitation Solution IFU/ml 遺伝子工学 HEPG2 遺伝子工学 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 1.00E+07 1.00E+06 1.00E+05 1.00E+04 1.00E+03 1.00E+02 1.00E+01 1.00E+00 製品ページ番号：3160 Titer レンチウイルスやレトロウイルスのポリエチレングリ コール（PEG）沈殿による濃縮を簡便に行える試薬で す。濃縮したレンチウイルスを，凍結融解ダメージから 保護する作用もあります。 ウイルス産生 細胞 ウイルス粒子を含む 培養上清 5x PEG-it Solution HepG2 1st thaw（0.2） HepG2 2nd thaw（0.2） HepG2 3rd thaw（0.2） HEpG2 4th thaw（0.2） 1.74E+09 1.76E+09 1.13E+09 1.04E+09 Infection Titering Data for LV605VA-1 Virus Stabilized by PEG-it 本 製 品 を 用 い，MSCV-GFP-T2A-RFP 発 現 カ セ ッ ト を パ ッ ケ ー ジ ン グ し た ウ イ ル ス （#LV605VA-1）を濃縮した。濃縮したウイルス粒子を 1～4 回凍結融解し，HepG2 細 胞に導入した。 （A）ウイルス導入細胞の蛍光観察像 （B）ウイルス力価の測定結果 本製品を用いて濃縮したウイルス粒子は，複数回の凍結融解を行っても，細胞への導入効 率に大きな影響を与えていないことが分かる。 品 名 メーカー 商品コード Virus Precipitation Solution, PEG-it SBI LV810A-1 SBI LV825A-1 細胞に導入可能な 濃縮されたウイルス 包装 / 価格（￥） 100 ml / 54,000 250 ml / 117,000 特 長 ● ほとんどのレンチウイルスまたはレトロウイルスを 10～100 豊富な使用実績を持つノックアウト酵母 倍に濃縮可能です。 18 ● Yeast Knockout Clone 本製品 100 ml で，400 ml のウイルス産生細胞の培養上清か らレンチウイルスを濃縮できます。スケールアップも容易に行 えます。 ● 濃縮操作に超遠心機などの特殊な機器設備は不要です。 ● 滅菌済みで毒性を示す物質を含んでいないため，濃縮したレンチ ウイルスは ES 細胞をはじめとする様々な細胞に適用できます。 ● in vivo での感染実験に使用する高力価レンチウイルスの調製 にも最適です。 個別の遺伝子をノックアウトした酵母クローンと，クローンコレクシ ョン（5,916 遺伝子に対する 20,000 以上のノックアウト酵母が含 まれる）があります。 特 長 ● ターゲット遺伝子の開始コドンから終止コドンまで薬剤耐性マーカ ー（KanMX）カセットと相同組換えにより置き換えられています。 ウイルス濃縮液の凍結融解の例 （A） 製品ページ番号：63638（Single Strain），7968（Collection） 1st Thaw 2nd Thaw 3rd Thaw ● 固有のバーコード配列（UPTAG，DNTAG）を持ち，マイクロアレ イや次世代シークエンシングによりゲノムのハイスループット解析 が可能です。 4th Thaw GFP ● 4 種類の系統（一倍体の a 型および α 型，ヘテロ接合の二倍体，お よびホモ接合の二倍体）があります。また，ヘテロ接合の二倍体よ り必須遺伝子 1159 種のノックアウトを集めたコレクションがあり ます。 RFP ノックアウト酵母クローンの対象遺伝子の検索方法 クス（FETCH my gene）にターゲットのキーワードを入力し，検 Phase 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です ①transOMIC technologies 社ホームページにアクセスし，検索ボッ 索して下さい。 HepG2 Cells transduced with LV605VA-1 after several freeze-thaw cycles ②フナコシホームページに掲載の専用注文書に Catalog Number また は Clone ID，必要事項をご記入の上，販売店担当者にお渡し下さい。 ※クローンコレクションの内容・ご注文方法についてはフナコシホー ムページ（製品ページ番号：7968）をご覧下さい。 ※詳細は当社受託・特注品業務担当（TEL：03-5684-1645 ／ FAX： 03-5684-6539）までお問い合わせ下さい。 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] タンパク質／酵素 サンプル 電気泳動 マーカー 着色済みのタンパク質分子量マーカー Protein MultiColor, StableDynaMarker® タンパク質／酵素 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 製品ページ番号：5167 あらかじめサンプルバッファーに溶解してあり，希釈や 変性処理をせずに，そのままアプライできます（5 μl / lane） 。 ※ロット毎の正確な分子量は製品添付のデータシートをご覧下さい。 特 長 ● 天然タンパク質由来の着色済みタンパク質分子量ラダーマー カーです。 ● 電気泳動やエレクトロブロッティングのモニターに適していま す。 タンパク質安定性の検証 37℃で 3 週間インキュベート 0 日後 21 日後 Myosin カラフル β-Galactosidase Phosphorylase-b BSA Ovalbumin Carbonic Anhydrase Trypsin Inhibitor 19 Lysozyme 品 名 メーカー 商品コード © 樹庵じゅあん 包装 / 価格（￥） Protein MultiColor, StableDynaMarker BDL DM660S BDL DM660 BDL DM660L 300 μl / 600 μl / 5×600 μl / 12,000 18,000 78,500 RNA／タンパク質分子量マーカー無償サンプルモニター 上記サンプルマークで示した製品および BDL 社着色済み RNA マーカー 2 点について，無償サンプル品をご提供しています。 Prestain Marker for Small RNA PlusDynaMarker ※ご使用後，簡単なアンケートにご協力をお願いします。 無償サンプル対象製品 Protein MultiColor, StableDynaMarker（#DM660, 25 μl） ● Prestain Marker for Small RNA PlusDynaMarker（#DM253, 25 μl） ● DynaMarker Prestain Marker for RNA High （#DM260, 30 μl） base base 100 75 8,000 50 40 30 20 ※RNA マーカーの詳細はフナコシホームページ（製品ページ番号：3921）をご覧下さい。 ※お申込み方法についてはフナコシホームページ（製品ページ番号：80118）をご覧下さい。 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 4,000 2,000 1,000 500 200 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です ● Prestain Marker for RNA HighDynaMarker 遺伝子工学 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 遺伝子工学 発現ベクター 蛍光測定 蛍光により内在性タンパク質を リアルタイムで観察できます Chromobody Plasmid 製品ページ番号：7406 品 名 特 長 ・細胞骨格の可視化による，細胞の形態や運動の検 出に有用。 ・Proliferating cell nuclear antigen（PCNA） を認識するタンパク質を発現する。 Cell Cycle ・ドラッグディスカバリーの初期段階における，目 Chromobody 的物質の細胞周期への影響のスクリーニングに有用。 ・内在性 Dnmt1 の可視化に有用。 Dnmt1 Chromobody ・Dnmt1 のインヒビターやアクチベーターの検出 にも使用できる。 ・核ラミナの可視化による，核の形態の観察に有用。 Lamin Chromobody ・有糸分裂やアポトーシスの検出にも使用できる。 Actin Chromobody 目的分子に特異的に結合するラクダ科動物抗体由来タン パク質と蛍光タンパク質の融合タンパク質「Chromobody」を発現するプラスミドです。目的タンパク質の 局在や挙動をリアルタイムで観察することができます。 0 min 645 min 0 min 645 min Memo ラクダ科動物抗体とは ラクダ科の動物が産生する抗体は軽鎖を欠き，重鎖のみで構成されてい ます。そのため，1 つの可変領域（VHH）のみで抗原を認識することが でき，そのサイズはわずか約 13 kDa です。 品 名 VHH フラグメント （約 13 kDa） Nano-Trap 通常の抗体 （150 kDa） 20 VL CL ラクダ科抗体 メーカー 商品コード Booster Chromobody （本製品） VH CH1 CH2 CH3 immobilizing fluorescent matrix dye fluorescent protein Chromobody Plasmid とは Chromobody Plasmid は，標的タンパク質に特異的に結合するラクダ 抗 体 VHH 領 域 の 遺 伝 子 配 列 と 蛍 光 タ ン パ ク 質（TagGFP ま た は TagRFP）をベクターにクローニングしたプラスミドです。Chromobody Plasmid を細胞へ導入すると，目的タンパク質に対する蛍光標識 VHH 抗体が発現し，細胞内在性の目的タンパク質を蛍光標識することが 可能になります。従来難しかった内在性の細胞周期関連タンパク質を蛍 光標識でき，リアルタイムで観察することが可能になりました。また， Chromobody は内在性タンパク質の機能は阻害しません。 特 長 ● 細胞に導入することにより，目的分子の存在，局在，翻訳後修 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です 飾，相互作用などを非侵襲的かつ動的に測定することができます。 ● 細胞の機能や生存性に影響を与えません。 ● 蛍光タンパク質は，TagGFP および TagRFP から選択できます。 ※TagGFP および TagRFP は，Evrogen 社の技術です。 Lamin Chromobody を用いて，アポトーシスの検出を行った。未処理（上段）および 5 μM Staurosporine（STS）で処理した細胞（下段）を経時的に観察した。 包装 / 価格（￥） Actin Chromobody Plasmid CHT acg TagGFP CHT acr TagRFP Cell Cycle Chromobody Plasmid CHT ccg TagGFP CHT ccr TagRFP Dnmt1 Chromobody Plasmid CHT dcg TagGFP CHT dcr TagRFP Lamin Chromobody Plasmid CHT lcg TagGFP CHT lcr TagRFP 20 μg / 179,000 20 μg / 179,000 20 μg / 179,000 20 μg / 179,000 20 μg / 179,000 20 μg / 179,000 20 μg / 179,000 20 μg / 179,000 ※Chromobody Plasmid は，下記キャンペーンの対象外です。 ！ Chromobody Plasmid ご購入時のご注意 ● 本製品は，ご購入にあたり Chromotek 社とライセンス契約が必要 な製品です。お客様のご所属が大学・官公庁の研究所（Academic） の場合と営利団体・企業（Commercial Entity）の場合とで，手続 きが異なりますのでご注意下さい。また，in vivo での使用は研究目 的でも認められません。 ※詳細はお問い合わせ下さい。 20％ OFF キャンペーン GFP-Trap などの製品 GFP 融合タンパク質単離キット GFP-Trap など Chromotek 社製品 113 点がキャンペーン対象です！ ［製品ページ番号：80204］ 期間：～平成 27 年 7 月 28 日 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 遺伝子工学 siRNA サイトカイン／増殖因子／ホルモン 合成 siRNA 混合物を大量作製するキット Dicer siRNA Generation Kit 定量 唾液中成分の DHEA-Sulfate 定量キット DHEA-S Salivary Immunoassay Kit 製品ページ番号：2587（Dicer Kit） 製品ページ番号：2408（Turbo Dicer Kit） 標的遺伝子の全長に対する二本鎖 RNA を in vitro 転写 反応で合成し，これを dsRNA 特異的なエンドヌクレ アーゼ Dicer で切断し，大量の siRNA 混合物を作製で きるキットです。 製品ページ番号：8643 唾液を試料とした測定は，採取が簡単なこと，採取時に苦痛やス トレスを伴わないこと，汚染の危険性が低いことなどの特長か ら，ストレス研究，スポーツ科学，小児科学などの分野で注目さ れています。 特 長 ● 1 種類の標的遺伝子に対し配列の異なる siRNA の混合物を作製 できるので，siRNA 発現ベクターや化学合成した単一配列の siRNA よりも，効率良く遺伝子発現を抑制できます。 ● 従来と比べて 10～50 倍量の RNA を合成できる TurboScript T7 Transcription Kit で転写反応を行い，ヒト組換え体 Dicer で dsRNA を断片化します。 ● キットには，siRNA の導入に最適化されたトランスフェクショ ン試薬＊1 が含まれています。 ＊1 詳細はフナコシホームページ（製品ページ番号：2401）をご覧下 さい。 操作方法概略 ホルモン 特 長 ● 96 ウェルプレートフォーマットです。 ● キットには，ポジティブコントロールが 2 種類（高濃度・低濃度） 含まれています。 ● 唾液試料からの抽出分離操作は必要ありません。唾液採取は， 流涎＊または唾液採取用器具（下記参照）で行って下さい。 ● 必要試料量：100 μl ● 測定可能試料数：78（1 試料に 1 ウェル使用した場合） ● インキュベーション時間：1.5 時間 ● 測定波長：450 nm ● 血中濃度との相関性：N/A ＊流涎（りゅうぜん）とは，保存用チューブ内に挿入したストローを口 1.T7 プロモーター配列を含むプライマーで目的遺伝子の配列の PCR を行い，全長 RNA 転写用のテンプレート DNA を作製する。 2.T7 RNA polymerase で in vitro 転写反応を行い，センス鎖， アンチセンス鎖 RNA を合成する。 3.2. をアニールさせ，dsRNA を作製する。 に含み，唾液を垂れ流すことにより採取する方法です。 品 名 メーカー 商品コード DHEA-S, EIA Kit, Salivary SAL 1-1252 SAL 1-1252-5 1 kit / 64,000 1 kit / 292,000 5packs ■関連製品 5.4. の siRNA 混合物を培養細胞へ導入する。 唾液採取器具 Saliva Collection Aid <SCA> 商品コード 包 装 価格（￥） 5016.02 50 pieces 15,000 唾液保存チューブ Cryovial, 2 ml, Blue 商品コード 包 装 価格（￥） 5002.02 50 pieces 9,000 冷凍保存ボックス 2 ml Cryovial 保存用 ボックス 商品コード 5023.05 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Dicer siRNA Generation Kit GTS T510001 1 kit / 179,000 ■Turbo Dicer siRNA Generation Kit 21 包装 / 価格（￥） 4.Dicer で切断し，siRNA 混合物を精製する。 ※キットに PCR 用プライマーは含まれていません。 遺 伝 子 工 学 －サ イ ト カ イ ン ／ 増 殖 因 子 ／ ホ ル モ ン フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news ［メーカー：SAL］ 包 装 1 piece 価格（￥） 2,000 Turbo Dicer siRNA Generation Kit では，極めて活性の高いヒ ト組換え体 Dicer「Turbo Dicer enzyme」を使用します＊2。最 ＊2 500～1,000 bp の dsRNA でのご使用をお勧めします。300 bp 未 満の dsRNA の切断には適していません。 包装 / 価格（￥） Turbo Dicer siRNA Generation Kit GTS T520001 フナコシホームページで各製品の詳細をご覧いただけます。 検索 品 名 メーカー 商品コード 製品ページ番号について http://www.funakoshi.co.jp/contents/ 製品ページ番号を入力 プルダウンで 「製品ページ検索」を選択 1 kit / 208,000 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です 適反応条件下では dsRNA を 2 時間以内に 95％ 以上切断します （通常の Dicer では 12～18 時間の切断処理が必要） 。 生 化 学 用 一 般 試 薬 －タ ン パ ク 質 ／ 酵 素 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 生化学用一般試薬 NEW 糖代謝 生化学用一般試薬 NEW アッセイキット グルコース／ガラクトース定量キット DetectX Glucose / Galactose Detection Kit 脂質 糖尿病の研究に有用な細胞内脂質 FAHFA 製品ページ番号：64008 製品ページ番号：7769（Glucose Kit） 製品ページ番号：7764（Galactose Kit） 生体試料中のグルコースまたはガラクトースを定量する キットです。 ［メーカー：ARB］ 測定対象 グルコース 測定試料 血清，血漿，尿，脳脊髄液，ライセート 測定法 測定範囲 比色 0.5～32 mg/dl 測定波長 560 nm 商品コード K039-H1 NEW 包 装 価格（￥） 54,000 蛍光 0.156～10 mg/dl 励起 570～580 nm／ 蛍光 580～590 nm K039-F1 NEW 1 kit（2×96 well） 54,000 ガラクトース 血清，血漿，尿， 組織培養液 比色 0.781～25 mg/dl 560 nm K042-H1 NEW 74,000 ※本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。 Memo FAHFA とは FAHFA（Fatty Acid esters of Hydroxy Fatty Acid）は血糖値の改善， 糖尿病の防止および抗炎症の効果が期待されている生理活性脂質群で す。Beth Israel Deaconess Medical Center および Salk Institute の 研究者らにより，FAHFA は脂肪細胞に存在し，インスリン感受性に関 与することが報告されました。パルミチン酸とヒドロキシステアリン酸 の組み合わせからなる PAHSA は糖尿病抵抗性マウスの脂肪から多く見 つかっており，ヒトにおいては糖尿病の初期ステージで顕著に減少する ことが報告されています。肥満糖尿病マウスが摂食する際，9-PAHSA タンパク質／酵素 NEW 22 血液学 アッセイキット ヘモグロビン測定キット DetectX Hemoglobin Detection Kit 製品ページ番号：63423 はグルコース-インスリン恒常性に寄与し，抗炎症効果を誘引するといわ れています。 FAHFA は食物には少量しか含まれていないため体内で合成されている のではないかと考えられており，血中に存在する微量の FAHFA を検出 できれば糖尿病の初期ステージに対する信頼性の高い，新しいバイオ マーカーになると考えられています。また，FAHFA の合成系に対する 新規治療法の開発も期待されています。しかし，未解明の点が多く，糖 尿病の進行リスクの軽減や疾病予防にどのように関与しているか今後の 研究が望まれます。 生体試料中のヘモグロビンを比色法により測定するキット です。 参考文献 Yore, M.M., Syed, I., Moraes-Vieira, P.M., et al. Cell 159 （2） , 318～ 332（2014） . ［メーカー：ARB］ 検出フォーマット 測定試料 測定範囲 測定波長 商品コード 包 装 価格（￥） Regular High Sensitivity 全血，赤血球 血清，血漿 0.25～16 g/dl 0.313～20 mg/ml 560～580 nm K013-H1 NEW 1 kit 43,000 Arbor Assays 社 アッセイキットミニカタログ 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です A5 変形版，12～20 ページ，英語カタログ 各研究分野で使用される アッセイキットをご紹介しています。 カタログラインナップ ●Inflammation ●Oxidative Stress ●Kidney injury ●Cell Signaling ●Stress and Reproductive ●Volume & Normalization ※ご希望の方は，フナコシホームページのオンライン請求か， 当社営業担当（Fax 03-5684-1634）までお申し込み下さい。 NEW ［メーカー：CAY］ 品 名 5-PAHSA 5-POHSA 5-OAHSA 5-SAHSA 9-PAHSA 9-POHSA 9-OAHSA 9-SAHSA 12-PAHSA 12-POHSA 12-OAHSA 12-SAHSA 13-POHSA 13-OAHSA 13-SAHSA 12-OAHSA-d17 12-PAHSA-d31 5-OAHSA-d17 5-PAHSA-d31 5-POHSA-d14 CAS No. 1481636-41-2 － － － 1481636-31-0 1481636-43-4 154086-90-5 － － － 101901-73-9 51350-61-9 － － － － － － － － 商品コード 17043 17114 17115 17113 17037 17040 17039 17109 17107 17105 17108 17106 17111 17112 17110 17195 17194 17198 17197 17196 包 装 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 1 mg 100 μg 100 μg 100 μg 100 μg 100 μg 性状：酢酸メチル溶液 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 価格（￥） 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 8,600 11,400 11,400 11,400 11,400 11,400 免疫化学 遺伝子工学 NEW イムノグロブリン 迅速・高感度にヒト Ig のアイソタイプ を同定・定量できる抗体アレイ Human Ig Isotyping Array Q1 NEW PowerLyzer PowerSoil DNA Isolation Kit 製品ページ番号：63414 免疫グロブリンのアイソタイピングのほか，複数タンパ ク質の同時定量，バイオマーカーのスクリーニングなど に有用です。 特 長 ● ● 一枚のアレイスライドに 16 個のサブアレイが配置されていま 抽出・精製できます。 ● す。各サブアレイにはそれぞれ各種のサブクラスに対する抗体 （8 種）とポジティブコントロール，ネガティブコントロールが スポットされています。 ● 通常の ELISA 法よりも低コストで測定できます。 ● 高感度（ng レンジ）で特異性が高く，再現性に優れています （CV＜20％）。 ● 別売の Q Analyzer ソフトウェアにより，定量データがワンス テップで得られます。 ● 約 6 時間で操作が完了します。 ● ハイスループットアッセイに適しています。 ● 腐植酸（フミン酸）を多く含む堆肥，堆積物，肥料などから， PCR 阻害物質の混入を抑えた高品質なゲノム DNA を高収量で 特 長 ● ビーズ式組織・細胞破砕装置と組み合わせ，微生物由来ゲノム DNA を抽出します。 をお持ちでない方は，アレイ測定受託サービス（製品ページ番号： 56137）をご利用下さい。 抽出 破砕・溶解が難しい土壌試料から微生物由来 DNA を抽出・精製するキット 製品ページ番号：63604 ※検出には Cy3 に対応した蛍光スキャナーが必要です。蛍光スキャナー DNA 免 疫 化 学 －遺 伝 子 工 学 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news グラム陽性・陰性菌，酵母，菌類，藻類，放線菌，線虫などの 微生物から抽出できます。 ● 遠心法，バキューム法で精製を行えます。 ● 約 30 分で DNA の抽出・精製操作を行えます。抽出・精製した ゲノム DNA は，PCR，定量的 PCR などに使用できます。 ● 最大 250 mg の試料から抽出・精製できます。 ● DNA 結合量：～20 μg ※ビーズ式組織・細胞破砕装置，バキュームマニフォールド，遠心分離 機などが別途必要です。 品 名 メーカー 商品コード 測 定 可 能 な Ig ア イ ソ タ イ プ：IgA，IgD，IgE，IgM，IgG1， IgG2，IgG3，IgG4 ● 測定試料：ヒト血清，血漿（1：40,000～1：200,000 希釈） ● 試料容量：50～100 μl PowerLyzer PowerSoil DNA Isolation Kit MBL 12855-50 50 preps MBL 12855-100 100 preps 包装 / 価格（￥） 23 NEW 1 kit / 1 kit / 47,000 87,000 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Ig Isotype Array, for Human, Quantibody, RayBio RAY QAH-ISO-1-1 1 slide RAY QAH-ISO-1-2 2 slides RAY QAH-ISO-1-4 4 slides NEW 1 kit / 31,000 1 kit / 55,000 1 kit / 101,000 ■解析ソフトウェア 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Software for Ig Isotype Array, for Human, Q Analyzer, RayBio RAY QAH-ISO-1-SW 1 piece / 29,000 フナコシ（株）では，研究分野における更なる発展を目指して新製品 を探しております。 研究者にとって有益で付加価値の高い研究成果品がございましたら， 販売のお手伝いをさせて頂きます。 今月の表紙 ペトラ ペトラは，ヨルダンにあるアラビア古代王朝の 遺跡で，その姿から岩の芸術と称されていま す。19 世紀にヨーロッパの探検家に発見され てから注目され始め，遺跡に関連する映画の舞 台にもなったことから，多くの旅行者が訪れる ようになりました。 ペトラはギリシャ語で岩や崖を意味し，その名 の通り建造物の多くが岩壁を削って造られてい ます。 中でも有名なのは，宝物殿として知られる エル・カズネです。非常に巨大な建造物で，光 の加減によって岩盤の色の見え方が変わり，訪 れる時間帯によって様々な彩りを見せてくれま す。 詳細については，是非当社までお問い合わせ下さい。 Tel. 03-5684-1653 Fax 03-5684-1654 e-mail：[email protected] お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です 研究成果の製品化をお考えの方へ！ 世界遺産 神経／イオンチャネル フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 神経／イオンチャネル NEW 神経科学 使用例 染色 1～2 週間で浸透処理を行える ゴルジ-コックス染色キット superGolgi Kit 製品ページ番号：63802 NEW メーカー名： Bioenno Tech LLC. Bioenno Tech 社は，米国カリフォルニア州に本拠を置くメーカーで，ゴルジ染色 キットなどを取り扱っています。 URL: http://www.bioenno.com/ ゴルジ-コックス染色を改良し，脳組織ブロックの樹状 突起および樹状突起スパインを迅速に染色できるキット です。 Memo ゴルジ-コックス染色法とは ゴルジ染色法は，神経細胞の樹状突起から伸長し，軸索とシナプス形成 するスパインを染色する手法です。個々の樹状突起の分岐が美しく可視 化されるほか，安価，簡便で，トランスジェニック動物や特別な実験器 具を必要としないなどの長所があります。ゴルジ染色法の原理は，クロ ム酸銀の結晶化ですが，選択的に個々の細胞に浸透する詳細なメカニズ ムは未だに明らかになっていません。 24 1873 年に Camillo Golgi が発表して以来，ゴルジ染色法には様々な改 良が施されています。1891 年に Cox が開発した Golgi-Cox（ゴルジコックス）法は，硝酸銀の代わりに二クロム酸カリウムと塩化水銀の混 合物を用いる染色法で，樹状突起分岐のトレースや樹状突起スパインの 定量に特に有用な手法です。 ● ● 操作方法概略 1.新鮮な脳組織を Impregnation solution に浸す。1～2 日後 に一度 Solution を交換し，浸透を続ける。 浸透時間の目安 対象動物 P2 rat P6 rat P10 rat P24 rat P24 rat 試 料 Whole brain together skull Hemisphere Hemisphere Hemisphere Hippocampus block including cortex Hippocampus block including cortex 特 長 3-4 month rat 従来のゴルジ-コックス法では浸透に通常 2～4 週間かかります P6 mouse が，本製品ではわずか 1～2 週間で浸透します。 2-3 month mouse Whole brain ラット，マウス，ネコ，ウサギ，サルやヒトの脳組織で染色を 確認しています。 ● 高い染色コントラストが得られます。 ● 染色プロトコルが単純化されています。 ● ゴルジ-コックス溶液は改良されており，安定です。 ● 新鮮な脳組織の染色に適しています。 ● 本製品を用いて，樹状突起の分岐およびスパインを染色した。 （A）5 か月齢の C57BL マウス海馬（倍率：4x）。 （B）2 か月齢の Wistar ラットの背側尾状核から採取した線条体神経（左：20x，右： 63x，矢印：樹状突起スパイン）。 （C）3 週齢の CD1 マウス皮質から採取した錐体神経（左：斜め方向の分枝（oblique branch）の樹状突起スパイン（100x），中央：20x，右：主要樹状突起（100x））。 この週齢では，未成熟な樹状突起スパインである樹状突起フィロポディアが頻繁に観察さ れる（矢頭）。 1 キットに脳組織 10～12 ブロック（1×1×2 cm）分の試薬 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です が含まれています。 使用文献 5 month mouse Whole brain Hemisphere 浸透時間 No perfusion, 9 days Saline perfused, 7 days Saline perfused, 9 days Saline perfused, 10 days Saline perfused, 10 days Saline perfused, 11 day No perfusion, 8 days; Saline perfused, 7 days Saline perfused, 10 days No perfusion, 11-12 days; Saline perfused, 11 days 2.組織を洗浄後，Post-impregnation buffer 中に 2 日間浸漬す る。浸漬 1 日後に一度 buffer を交換する。 ※組織ブロックは Post-impregnation buffer 中で，4℃ で 1 ヶ月間 保存できます。 3.厚さ 100～200 μm の切片を作製する。切片は Collection & mounting buffer 中に集める。 4.切片をスライドガラスに貼り付け，乾燥させる。 5.Staining Solution にスライドを 20 分前後浸漬し，染色する。 Parihar VK, et al. Antioxid. Redox Signal , 22（1）: 78-91 （2015）. 6.Post-staining buffer に 20 分前後浸漬する。洗浄し，乾燥さ せる。 Chabrier MA, et al., Neurobiol. Dis. , 64: 107-17（2014）. 7.脱水，透徹，封入する。 品 名 メーカー 商品コード superGolgi Kit NEW BIE 003010 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 包装 / 価格（￥） 1 kit / 70,000 神経／イオンチャネル NEW 神経科学 染色 浮遊切片でゴルジ染色を行うキット sliceGolgi Kit 製品ページ番号：63803 厚さ 50～400 μm の浮遊切片を，迅速にゴルジ染色す るキットです。本製品で固定した切片は，ゴルジ染色と 免疫染色の二重染色が可能です。 特 長 ● 操作方法概略 1.固定液＊を作製し，切片を 3～4 時間浸漬固定する。固定液は浸 漬開始 30 分後に一度交換する。 ＊キットに含まれる専用の固定液をご使用下さい。別売品もあります。 ※固定した切片は 0.1M PB（pH 7.4）中で， 4℃ で 1 週間保存できます。 2.切片を洗浄し，希釈した Impregnation solution に 3～7 日 間浸漬する。Impregnation solution は浸透開始 1 日後に一 度交換する。 3.切片を洗浄し，Staining solution および Post-staining solution を用いて染色する。 4.切片をスライドガラスに貼り付け，乾燥させる。 5.脱水，透徹，封入する。 様々なラットおよびマウス脳切片について染色を確認しています。 ・ティッシュチョッパーを用いて作製した急性スライス標本な どの新鮮な切片 ・海馬スライスや皮質スライスなど，器官型スライス培養標本 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） sliceGolgi Kit NEW BIE 003760 ・2～7 日間で浸透します。 ■別売品 ● 高い染色コントラストが得られます。 ● 脳切片 1,000 枚の染色に十分な試薬が含まれています。 Fixative Kit NEW BIE 003780 1 kit / 70,000 1 kit / 18,000 神 経 ／ イ オ ン チ ャ ネ ル －細 胞 情 報 伝 達 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news ホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドから成る固定液の調製セット。2,000 ml 分の固定液 を調製可能。 ※凍結切片の染色はできません。 ※superGolgi Kit とは併用できません。 使用文献 Naydenov AV, et al., Neurobiol. Dis. , 71: 140-50（2014）. 細胞情報伝達 使用例 代謝 ELISA ヒト由来骨代謝マーカー測定 ELISA キット 25 製品ページ番号：8393 sliceGolgi Kit を 用 い，12 日 齢（P12） C57BL マウスの，厚さ 100～200 μm の 切片を浸透・染色した。 （A）視床下部外側野。 矢頭：樹状突起フィロポディア （B）前頭皮質。矢印：成熟スパイン 矢頭：フィロポディア （C）前頭頭頂皮質運動野の錐体神経。 ヒト血清試料などから骨代謝マーカーをサンドイッチ法 により比色定量する ELISA キットです。 特 長 ● 精度の高いコントロールが添付されています。 ● 多くの文献で使用されています。 ［メーカー：BMC］ 商品コード 50～100 μm の切片に対し，最初にゴルジ 染色を行い，続いて免疫染色を行った。ゴ ルジ染色の浸透は室温で 2～4 日行った。 （D）4 月齢の C57/BL マウスの鉤状回 （E）2 月齢の C57/BL マウスの前頭頭頂皮 質（体性感覚野） E1：63x E2：矢印：樹状突起スパイン 矢頭：免疫染色で標識された神経細胞 測定マーカー Sclerostin DKK-1 OPG sRANKL Cathepsin K 測定法 サンドイッチ法 血 清 ○ ○ ○ ○ ○ 血 漿 ○（E, H） － ○（C, E, H） ○（H） － 測定 試料 細胞培養上清 － － － － ○ 尿 ○ － － － － 必要試料量（μl） 20 20 20 150 50 検出限界（pmol/L） 2.6 1.7 0.07 0.01 1.1 測定波長 450 nm 包 装 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 価格（￥） 96,000 71,000 88,000 104,000 88,000 C：クエン酸処理 E：EDTA 処理 H：ヘパリン処理 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です 本製品を用いたゴルジ染色と免疫 染色の二重染色像 BI-20492 BI-20413 BI-20403 BI-20462 BI-20432 抗 体－タ ン パ ク 質 ／ 酵 素 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 抗体 NEW 抗体 がん 骨代謝 生殖細胞の腫瘍や肝臓がんの研究に 有用な抗体 抗 α-1-Fetoprotein（AFP）抗体 製品ページ番号：62969 抗ヒトオステオカルシン抗体 製品ページ番号：6962 ※本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。 Memo ※本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。 オステオカルシンとは オステオカルシンの大部分は骨のヒドロキシアパタイトに結合していま すが，一部は血中に放出されます。血中オステオカルシン値は疾患状態 や薬剤の使用により変動し，骨代謝回転のマーカーとなります。オステ オカルシンの構造は，多くの脊椎動物で保存されています。 各抗体の特異性 抗 α-1-Fetoprotein 抗体（#ACR028A）による肝臓がん組織の免疫染色像 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Anti-Alpha-Fetoprotein, Rabbit-Poly〈Anti-AFP〉 NEW BCM ACR028A 0.1 ml / BCM APR028AA 6 ml / 12,000 18,000 交差性：Human，適用：IHC ※#APR028AA は免疫染色用に希釈済み。 ヒトオステオカルシン ウシ オステオ aa aa aa aa 1～19 7～19 15～31 20～43 カルシン ＋ － － ＋ ＋ ＋ ＋ － － ＋ ＋ ＋ ウシ由来 ＋ － － ＋ ＋ ＋ （＋）＊ － － － － （＋）＊ ＋ － － ＋ ＋ ＋ ヒト由来 GST 融合 ＋ ＋ ＋ ＋ － － 組換え体 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ 抗原とした クローン オステオカ intact ルシン 3G7 1C4 1C7 3G8 2H9 6F9 8H12 各抗体は蛍光標識した各抗原との結合アッセイにより，特異性を 26 確認しています。 AVISCERA BIOSCIENCE NEW タンパク質／酵素 ＊3G8 のみ，未標識抗原との結合アッセイにより結合能を確認しています。 がん 品 名 マーカー 肺腺がんマーカー候補分子 AGR2 の 定量キット Anterior Gradient 2（AGR2） ELISA Kit 製品ページ番号：9582 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Anti-Human osteocalcin, Mouse-Mono HYL 4OC8-3G7 Clone：3G7 HYL 4OC8-1C4 Clone：1C4 HYL 4OC8-1C7 Clone：1C7 HYL 4OC8-3G8 Clone：3G8 HYL 4OC8-2H9 Clone：2H9 HYL 4OC8-6F9 Clone：6F9 HYL 4OC8-8H12 Clone：8H12 1 mg / 1 mg / 1 mg / 1 mg / 1 mg / 1 mg / 1 mg / 109,000 109,000 109,000 109,000 84,000 84,000 109,000 性状：PAPu，クラス：IgG，適用：ELISA ［メーカー：ADP］ 商品コード 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です SK00529-01 NEW SK00529-06 NEW SK00529-02 NEW 血清，血漿 測定試料 （EDTA，クエン酸， 血清，血漿，細胞培養上清 ヘパリン処理） 必要試料量 100 μl 標準曲線範囲 15.6～1,000 pg/ml 39～2,500 pg/ml 1.56～10 ng/ml 感 度 3 pg/ml 15 pg/ml 50 pg/ml 交差性 Human 450 nm 測定波長 450 nm （補正波長 540 nm または 570 nm） 包 装 1 kit 1 kit 1 kit 価格（￥） 92,000 92,000 92,000 ※抗ヒトオステオカルシン抗体の標識も承っています。詳細は，当社テ クニカルサポート（試薬担当）までお問い合わせ下さい。 フナコシニュース専用バインダー サイズ：25.5W × 5.0D × 27.0H cm ほぼ 1 年分のフナコシニュースをまとめ て保存することができます。研究に有用な 情報源として，ぜひご活用下さい。 気になった記事や情報には，バインダーに 添付のフセンで Check ！ ここ ☞ 重要 ★ 好評 配布中 ! ※ご希望の方は，フナコシホームページのオンライン請求か，当社 営業担当（Fax 03-5684-1634）までお申し込み下さい。 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 細胞培養 NEW 蛍光染色 細胞培養 標識試薬 培養細胞 培養細胞のリソソーム活性を 蛍光検出するキット 培養細胞のマイコプラズマ汚染検出キット 製品ページ番号：63588 製品ページ番号：2405 MycoProbe Mycoplasma Detection Kit VIVAprobe Lysosome Assay Kit リソソームの主要マーカーであるカテプシン B の活性を 測定し，生細胞中のリソソームの検出と活性測定を簡単 に行うキットです。 マイコプラズマの 16S rRNA 配列内で高度に保存され た領域とハイブリダイズする検出プローブを使用して， マイクロプレート上で比色により検出します。 特 長 ● 汚染 特 長 カテプシン B 活性をリアルタイムにモニターでき，リソソーム ● 機能に対する影響の検討に有用です。 15 μl の細胞培養上清，または 4.7×103～1.9×104 個の細胞 から検出できます。 ● 細胞毒性はなく，培地に添加するだけの簡便な操作です。 ● PCR を行わないため，偽陽性はありません。 ● 細胞透過性の蛍光色素（Cresyl violet）修飾アルギニンジペプ ● PCR と同等の検出感度が得られます。 チドを用います。 ● 培養液から抗生物質を除去する必要はありません。 アルギニンジペプチドがカテプシン B で切断され，遊離した ● 約 4.5 時間で検出できます。 Cresyl violet の赤色蛍光を観察します。 ● 測定波長：490 nm 蛍光顕微鏡，マイクロプレートリーダー，フローサイトメー ● ● ● ● 細胞培養 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news マイコプラズマ 8 種を検出できます。 ターにより蛍光強度を観察できます（励起 540～560 nm／蛍 M. hyorhinis , M. arginini , M. fermentans , M. orale , 光 610 nm）。 M. pirum , M. hominis , M. salivarium , A. laidlawii キットには，DNA 染色用の Hoechst 33342（励起 365／蛍 光 480 nm）と，リソソームとオルガネラ染色用の Acridine 操作方法概略 orange（励起 480／蛍光 540 nm）が含まれています。 27 ハイブリダイゼーション ビオチン標識 ジゴキシゲニン標識 プローブ プローブ ※測定には，それぞれの試薬の励起波長／蛍光波長に対応した，蛍光顕 微鏡，プレートリーダー，フローサイトメーターなどの機器が必要です。 16S rRNA 使用例 Hybridization plate 捕捉 ストレプトアビジン 検出 VIVAprobe cathepsin B substrate を 用いた浮遊細胞におけるリソソーム活性 の検出 Streptavidin plate アルカリホスファターゼ標識 抗ジゴキシゲニン抗体 VIVAprobe cathepsin B substrate （赤），Hoechst 33342（淡青）を用い た二重染色像 Streptavidin plate シグナルの増強 NADPH Alkaline Phosphatase P1 NADH Alcohol Dehydrogenase Ethanol 付着細胞を用いたリソソームのリアルタイム観察像。 測定開始 1 時間後（左），9 時間 50 分後（中央），13 時間 10 分後（右） INT-Violet Diaphorase NAD+ Formazan colored end product 品 名 品 名 メーカー 商品コード メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Lysosome Assay Kit, VIVAprobe NEW VIA VB3270 1 kit / 48,000 Mycoplasma Detection Kit, MycoProbe（96 well） RSD CUL001B お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 包装 / 価格（￥） 1 kit / 74,000 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です Acetaldehyde 100 細胞培養 NEW 幹細胞 分化 ヒト多能性幹細胞を心筋細胞へ 分化させるキット StemXVivo Cardiomyocyte Differentiation Kit ヒト多能性幹細胞から心筋細胞への分化に有用な培地添 加物や基質などのセットです。 60 40 20 0 101 100 50μm 製品ページ番号：53138 特 長 102 103 104 Cardiac Troponin T 免疫染色像 フローサイトメトリー結果 赤：NorthernLight 557 標識ヤギ抗マウス 二次抗体（#NL007） 青：DAPI 青：PE 標識抗マウス二次抗体（#F0102B） 茶：アイソタイプコントロール 品 名 ● 最適化された組成により，高密度の心筋細胞が得られます。 ● 再現性の高い分化方法により，時間とコストを削減できます。 ● 心筋細胞分化を標準化することで，高い作業効率が得られます。 ● 分化効率確認用の抗体が含まれています。 ● 薬物毒性と低分子スクリーニングに有用です。 ● 24 ウェルプレート 2 枚分相当の試薬が含まれています。 ● 別売りの StemXVivo Cardiomyocyte Maintenance Media Supplement の使用により，ヒト多能性幹細胞由来の心筋細胞 の培養の延長や，健全な心筋細胞の長期間保持が可能です。 操作方法概略 28 80 Relative Cell Number 細 胞 培 養－タ ン パ ク 質 ／ 酵 素 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news （例）BG01V ヒ ト 幹 細 胞（hES） （ 培 養：MEF Conditioned メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） StemXVivo Cardiomyocyte Differentiation Kit NEW RSD SC032 1 kit / 103,000 ■StemXVivo Cardiomyocyte Maintenance Media Supplement ● 多能性幹細胞から分化させた心筋細胞の長時間培養に最適化さ れています。 ● 健全な心筋細胞を 200 日以上保持します。 ● 栄養豊富な無血清の添加剤です。 ● ロット間差が少ないため，実験誤差を低減します。 StemXVivo Cardiomyocyte Maintenance Media Supplement （50X） NEW RSD AR011 10 ml / 27,000 Media（#AR005） ，24 ウェルプレート使用時） ※細胞種や培養条件が異なる場合には，別途条件検討が必要となりま す。ご留意下さい。 ① タンパク質／酵素 1. Stem Cell Qualified RGF BME, Pathclear（RGF BME）でプレートをコートし，室温で 1～2 時間 培養する。 ② タンパク質 尿中微量アルブミン定量キット 2. FGF basic 含有 MEF 培地に懸濁したヒト多能性幹 細胞を播種し，細胞密度が 80～90％ になるまで 培養する。 ⑤ Urine Albumin ELISA Kit 3. 氷冷した RGF BME（1：60 希釈）を含む新しい幹 細胞培養用培地に交換し，37℃，5％ CO2 で 18～ 24 時間培養する。 ③ 4. 分 化 0 日 目： 氷 冷 し た RGF BME（1：60 希 釈） を含む新しい幹細胞培養用培地に交換し，37℃， 5％ CO2 で 24 時間培養する。 ⑥ 5. 分化 1 日目：培地を Day 1 分化用培地に交換し， 37℃，5％ CO2 で 4 日間培地交換せず培養する。 ④ 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です 7. 分化 7 日目：培地を Cardiomyocyte Differentiation Base Media Ⅱに交換し，37℃，5％ CO2 で培養し，必要に応じて 1～2 日毎に培地を交換す る。 使用例（右上） BG01V ヒト胚性幹細胞を本製品を用いて心筋細胞に分化させた。 収縮細胞の目視による比較とは別に，本製品に含まれる抗ヒト心 臓トロポニン T 抗体でラベルすることで心筋細胞との評価を行 なった。 製品ページ番号：2449 尿中微量アルブミンを競合法により測定する ELISA キッ トです。 ※本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。 6. 分化 5 日目：培地を Day 5 分化用培地に交換し， 37℃，5％ CO2 で 2 日間培地交換せず培養する。 ⑦ ELISA 特 長 ● 必要な試薬がすべて含まれる Ready-to-use なキットです。 ● 1 キットあたり 192 試料を測定できます（96 well×2 Plates）。 ● 測定波長：450 nm 品 名 Albuwell Ⅱ Albuwell M Nephrat Ⅱ 対 象 測定範囲 必要試料量 測定時間 ヒト 0.15～2,560 μg/ml 10～100 μl 45 分以内 マウス 0.3～10 μg/ml 10 μl 2.5 時間以内 ラット 1.0～100 μg/ml 10 μl 45 分以内 品 名 メーカー 商品コード Albumin, Urine, ELISA Kit EXO 1004 Albuwell II（Human） EXO 1011 Albuwell M（Mouse） EXO NR002 Nephrat II（Rat） お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 包装 / 価格（￥） 1 kit / 108,000 1 kit / 108,000 1 kit / 108,000 タンパク質／酵素 NEW タンパク質 タンパク質／酵素 NEW 細胞外マトリックス アレイ 高感度なメンブレン抗体アレイキット Proteome Profiler Array Kit 可溶性・不可溶性コラーゲンの定量キット Sircol Soluble / Insoluble Collagen Assay Kit 製品ページ番号：8846 試料中に存在する複数の因子の相対的な発現レベルを， 短時間で同時に検出できる抗体アレイキットです。 特 長 ● 製品ページ番号：2295 コラーゲンとシリウスレッドの特異的結合を利用して， 可溶性または不可溶性コラーゲンの定量を行うキットです。 特 長 キットには，特異性の高い抗体をスポットした 4 枚のニトロセ ルロースメンブレンアレイ，各種バッファーおよび検出抗体な ● どが含まれています。 ● メンブレンには各因子に特異的な抗体とコントロールが 2 重に 別に測定できます。 ● 発光で検出します。 に含まれる）を用いることで温和な条件で変性し，Sircol Dye 8846）をご覧下さい。 測定 因子数 25 111 35 102 32 58 ケモカイン サイトカイン プロテアーゼ サイトカイン プロテアーゼ アディポカイン 測定 動物種 商品 コード ARY020 血清，細胞培養上清， マウス 細胞・組織ライセート，尿＊ ARY028 ARY021B 血清，血漿，細胞培養上清， ARY022 ヒト 細胞・組織ライセート，尿， ARY023 唾液，母乳 ARY024 測定試料 Soluble Collagen Assay Kit の希酸－ペプシン処理の残査中 の不溶性コラーゲンは，Fragmentation Reagent（#S2000 ※測定対象因子については，フナコシホームページ（製品ページ番号： 測定因子 Soluble Collagen Assay Kit は，細胞培養上清または軟骨な どの組織中の希酸および希酸－ペプシン可溶性コラーゲンを個 試料とビオチン標識抗体カクテルをインキュベートした後，メ ンブレンと反応させ，HRP 標識ストレプトアビジンによる化学 プロテオグリカン，トロポエラスチン，その他可溶性細胞外マ トリックス（ECM）物質存在下でも測定できます。 ● スポットされています。 ● Reagent によって定量を行うことができます。 ● 測定結果から試料中の可溶性・不溶コラーゲンの含有比および 全コラーゲン量が算出できます。 ● 濃酸や濃アルカリの処理は不要です。 ● 可溶性コラーゲン測定は約 1.5 時間，不溶性コラーゲン分析は 約 4 時間，また天然の不溶性コラーゲンから可溶性コラーゲン への変性は 1 日以内で行えます。 ＊ARY028 のみ 使用例 3T3-L1 Untreated vs. LPS Treated Untreated 60000 2 55000 3 Untreated 6 LPS Treated 9 LPS Treated 1 2 3 4 Mean Pixel Density 50000 9 6 7 8 感度（μg） 測定時間（hours） 測定波長（nm） 29 Sircol Insoluble Collagen Assay Kit （#S2000） 10 4 550～555 9 45000 8 4 40000 操作方法概略 35000 30000 25000 20000 15000 5 Sircol Soluble Collagen Assay Kit （#S1000，#S1111） 1 1.5 550～555 キット名 A タンパク質／酵素 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 7 1 5 10000 SDF-1 MIP-2 RANTES MCP-2 MIP-1γ KC LIX IP-10 0 JE/MCP-1 5000 Proteome Profiler Mouse Chemokine Array Kit（#ARY020） を 用 い，LPS（100 ng/ml）処理した 3T3-L1 細胞におけるケモカイン量を測定した。 1.Dye reagent と 試料／スタンダー ドを混合する。 品 名 包装 / 価格（￥） 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 1 kit / 103,000 167,000 104,000 167,000 104,000 104,000 3.Alkali reagent を加え，555 nm の吸 光度を測定する。 品 名 メーカー 商品コード Sircol Collagen Assay Kit QBS S1000 120 assays QBS S1111 120 assays Sircol Insoluble Collagen Assay Kit NEW QBS S2000 100 assays 包装 / 価格（￥） 1 kit / 1 kit / 63,000 63,000 1 kit / 59,000 ※#S1000 には Bovine Standard が，#S1111 には Rat Standard が 含まれます。 お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です メーカー 商品コード Proteome Profiler Array Kit NEW RSD ARY020 Mouse Chemokine RSD ARY028 Mouse Cytokine RSD ARY021B Human Protease RSD ARY022 Human Cytokine RSD ARY023 Human Protease Inhibitor RSD ARY024 Human Adipokine 2.遠心し，dye と 結合しなかった 試料（上清）を 除去する。 タンパク質／酵素 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news タンパク質／酵素 受託 組換え体 タンパク質発現 組換え体タンパク質発現系の検討・産生受託コーディネート 製品ページ番号：5110 メーカー：FUN 利用目的やタンパク質の性質，ご予算まで検討に入れて最適な発現系をご提案します。発現系の選択は産生タンパク 質の用途，必要量，納期，コストの順に検討し，ご要望に合致したプランをご提案いたします。 ※ご注文方法，お見積りなどの詳細は当社受託・特注品業務担当までお問い合わせ下さい。 ■検討項目の一例 目的・用途 ● タンパク質に関する検討 ● 高次構造への期待 ● 遺伝子合成の必要性 ● 発現形態（細胞質，膜，分泌） ウェスタンブロッティング， ● 活性保持 ● 目的遺伝子の宿主適合性 ● 封入体化，融合タンパク質付加 in vivo など） ● 翻訳後修飾 ● お手持ちのプラスミド情報 ● 糖鎖修飾 ● 抽出条件 ● 作業期間（納期） ● 可溶性，不溶性 ● 精製の必要性 ● ご予算 ● 精製方法の事前検討 ● リフォールディング条件 ● 分子量 発現スケールに関する検討 ● 発現方法に関する検討 作業に関する検討 実験手法，用途（抗原， 必要量の判断 研究環境の検討 取り扱いサービスおよび製品 30 発現系 ＊ 無細胞（3 種類） E. coli （2 種類） B. megaterium L. lactis B. brevis 酵母（応相談） カイコ細胞（プラスミドベクター系） Sf 系昆虫細胞（ウイルス系） 蚕（ウイルス系）（家蚕，野蚕） 原虫（Lexsy） 哺乳動物（細胞 3 種～） 哺乳動物（HumanZyme 社） 発現量 △ ◎ ◎ ○ ◎ ◎ △ △ △ ○ △ ○ 精 製 △ ○ ○ ○ ◎ ○ ○ ○ △ △ △ － 初期コスト ◎ ○ ○ ○ ○ ○ ◎ △ ◎ ◎ △ － 大量コスト △ ○ △ ○ ◎ ○ △ ○ ◎ ○ △ － 期 間 ◎ ○ ○ ○ ○ ○ △ △ △ ○ △ － 糖鎖修飾 オプション × × × × △ △ △ △ ○ ◎ ◎ 宿主由来のエンドトキシン あり（E. coli ） あり なし なし なし なし なし なし なし なし なし なし ＊大腸菌無細胞翻訳系を利用してタンパク質の特定の残基に蛍光色素／ビオチン標識アミノ酸を導入するサービスもあります（製品ページ番号：3895）。 ※バキュロウイルスを用いて発現させた納品タンパク質は，精製を行っていません。そのため「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律 （通称：カルタヘナ法）」該当となりますので，納品タンパク質のご使用に際しては規制に則し，適切にお取り扱い下さい。 リポタンパク質脂質量解析受託サービス LipoSEARCH 製品ページ番号：654 ［メーカー：SLB］ 試料中のリポタンパク質の主要 4 画分（カイロミクロン，VLDL，LDL，HDL）に含まれるコレステロール とトリグリセリドの量を測定する受託サービスです。主用 4 画分を，粒子サイズを基準に 20 に分画してトー タルプロファイルを得られます。 適用例 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です ●糖尿病や高脂血症，肥満などの生活習慣病の研究 ●脂質代謝を改善する薬物や機能性食品の研究 ●マウスなどの小動物による，同一個体の脂質代謝の経時的解析 ●トランスジェニックやノックアウトマウスの表現型解析 ●細胞培養上清・脳脊髄液など低濃度試料のリポタンパク質測定 ■関連サービス【肝臓機能研究のためのデータ取得】 【肝臓組織中の脂質量測定】 実験動物の肝臓・その他組織（要相談）中の脂質を抽 出し，含有脂質量を測定する受託サービスです。 【肝臓組織中の総胆汁酸量測定】 実験動物の肝臓組織中の胆汁酸を抽出し，含有胆汁酸 量を測定する受託サービスです。 ※各サービスの詳細は，当社受託・特注品業務担当までお問い合わせ下さい。 お問い合わせ先： 〈受託〉TEL：03-5684-1645 ／ FAX：03-5684-6539 ／ e-mail：[email protected] パイロットスケールでの反応 タンパク質／酵素 NEW 代謝 スクリーニング 代謝産物の同定・産生に有用な ヒト CYP と P450 オキシドレダクターゼ CypExpress 製品ページ番号：63397 ヒト CYP（シトクロム P450）と P450 オキシドレダ クターゼを共発現させたピキア属酵母の乾燥粉末です。 哺乳動物のミクロソームや他の発現システムよりも長時 間活性を維持し，多くの代謝産物が得られます。 特 長 ● 薬物代謝産物のスクリーニング・同定，MIST（metabolite in safety test）用薬物代謝物の産生，および P450 阻害物質のス クリーニングを迅速，かつ安価に行うことできます。 ● ヒト CYP と P450 オキシドレダクターゼを共発現させた酵母 を不活性化・透過処理し，乾燥粉末にしています。 ● 本製品を添加し一晩混合するだけで代謝反応は進行します。 ● 室温でも安定で，数時間～一晩でも触媒活性を維持し，また再 利用も可能です。 ● トリスまたはリン酸緩衝溶液で反応します。 ● Glucose-6-Posphate や NADP の添加によって反応を促進す 20 g の CypExpress を，NaG6P（12 mM）と基質（250～500 μM）が含まれた 50 mM の KPi バッファー（pH 7.5）に懸濁した。混合液を 30℃ で所定の時間インキュベー トし，HPLC により反応産物量を測定した。 CypExpress サイクル数 基質／反応 産物／収量 Isoform Diclofenac 1×1.5 4'-hydroxydiclofenac 2C9 hour /59.2 mg in 400 ml /53.6 mg（90.5％） 2×3 Dextromethorphan Dextrorphan 2D6 hour /27 mg in 200 ml /7.5 mg（27.8％） 2×3 Testosterone 6β-Testosterone 3A4 hour /14.4 mg in 200 ml /7.01 mg（48.7％） 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） CypExpress 1A2 NEW OBR CE1A2.1 OBR CE1A2.10 CypExpress 2C9 NEW OBR CE2C9.1 OBR CE2C9.10 CypExpress 2D6 NEW OBR CE2D6.1 OBR CE2D6.10 CypExpress 3A4 NEW OBR CE3A4.1 OBR CE3A4.10 CypExpress 2C19 NEW OBR CE2C19.1 OBR CE2C19.10 1 g / 49,000 10 g / 403,000 1 g / 49,000 10 g / 403,000 1 g / 49,000 10 g / 403,000 1 g / 49,000 10 g / 403,000 1 g / 49,000 10 g / 403,000 ることも可能です。 細胞培養 低分子化合物 ● G6PDH の添加は必要ありません。 ● 夾雑物が少なく，HPLC による代謝産物同定や精製が容易です。 ● 基質濃度が高い場合でも高効率に酵素基質反応が起こります。 タ ン パ ク 質 ／ 酵 素－細 胞 培 養 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news 幹細胞 幹細胞関連低分子化合物 31 製品ページ番号：5330 使用例 Memo CypExpress 3A4 阻害物質による ES 細胞の未分化状態の維持 ES 細胞を CHIR99021，PD184352 および SU5402 で同時処理を行 Liver Microsomes う と， 未 分 化 状 態 を 維 持 で き る こ と が 報 告 さ れ て い ま す。 ま た， PD0325901 と CHIR99021 の同時処理でも未分化状態を維持できる Cyp3A4, E.coli ことが明らかにされています。 参考文献：Ying, Q. L., et al., Nature , 453（7194）, 519～523（2008）. 170 170 140 140 120 120 100 100 80 170 80 6βHydroxytestosterone 100 80 60 40 40 20 20 20 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 CypExpress 8.8 10.0 12.0 −4 0.0 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 8.8 10.0 12.0 Liver Microsomes −4 0.0 6βHydroxytestosterone 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 8.8 10.0 12.0 Cyp3A4, E.coli パフォーマンスの比較 Testosterone（500 μM）を，CypExpress3A4，ラット肝臓ミクロソーム，または組 換え体ヒト CYP3A4 を含む E.coli 膜とリン酸バッファー中で 5 時間（Cycle 1）インキュ ベートした。反応後，HPLC により反応産物 6β-Hydroxytestosterone の量を測定した。 商品コード CT99021〈CHIR99021〉 Axon1386 非常に強力な選択的 GSK-3 阻害物質。［252917-069］，M.W.：465.34，純度：99.1％ 包 装 価格（￥） 2 mg 24,000 5 mg 35,000 25 mg 139,000 5 mg 27,000 PD 184352〈CI-1040〉 Axon1368 強力かつ非競合的な選択的 MEK1（MKK1）阻害物質。 MKK1 単独，または MKK1/MKK5 の阻害実験に有用。 25 mg ［212631-79-3］，M.W.：478.66，純度：99％ 1 mg SU5402 Axon1667 FGF レセプター阻害物質。［215543-92-3］，M.W.： 2 mg 296.32，純度：99％ 5 mg 2 mg PD 0325901 Axon1408 強力かつ ATP 非競合的な MEK 阻害物質。［3912105 mg 10-9］，M.W.：482.19，純度：99.0％ 25 mg お問い合わせ先： 〈試薬〉TEL：03-5684-1620 ／ FAX：03-5684-1775 ／ e-mail：[email protected] 88,000 21,000 30,000 41,000 21,000 30,000 91,000 本誌に掲載されている製品はすべて研究用です 60 0 0.0 品名および説明 120 40 60 ［メーカー：AXN］ 140 6βHydroxytestosterone エピジェネティクス特集 フナコシニュース 2015 年 5 月 15 日号（No.588） funakoshi news Elite TET Family, 5-mC, 5-hmC 抗体パネル TET（ten-eleven translocation）は，TET1～3 からなるファミリーを 構成しています。TET は 5-mC を 5-hmC，5-fC，5-caC へと酸化する すべてのステップを触媒し，5-mC の脱メチル化を促すと考えられてい ます。さらに，5-mC からエピジェネティックな作用が異なる 3 つの誘 導体（5-hmC，5-fC，5-caC）を産生することにより，遺伝子発現の制 御に重要な役割を果たしていると考えられています。 32 品 名：TET Family, 5-mC and 5-hmC Antibody Panel 商品コード：GTX300099 NEW メーカー：GNT 包 装：1 kit 価格（￥）：69,000 抗 TET1 抗体を用いた TET1 発現 293T 細胞の免疫蛍光染色像 ■パネルの内容 抗 TET2 抗体を用いた ウェスタンブロッティング像 （A）293T （B）A431 （C）HeLA （D）HepG2 抗 体 Anti-TET1 Anti-TET2, N-terminal 免疫動物（クローン） Mouse-Mono（GT1462） Rabbit-Poly 適 用 ChIP, IC, IF, IHC, IP, West ChIP, IC, IF, IHC, IP, West クラス IgG IgG Anti-TET3, C-terminal Rabbit-Poly IC, IF, IHC, IP, West IgG Anti-5-hmC Anti-5-mC Anti-Mouse IgG-HRP Mouse-Mono（GT513） Mouse-Mono（GT4111） Goat-Poly Dot, MeDIP Dot, IHC, MeDIP ELISA, IHC, West IgG IgG IgG 抗 TET3 抗体を用いた ウェスタンブロッティング像 （A）293T （B）TET3 発現 293T 交差性 Human Human Bovine/Human/Mouse/ Xenopus Laevis － － Mouse 性 状 PAPu AAPu AAPu PAPu PAPu AAPu 容 量 25 μl ※各抗体は個別にお求め頂くこともできます。フナコシホームページの製品検索をご利用下さい。 販売店 フナコシ株式会社 〒113-0033 東京都文京区本郷2丁目9番7号 印刷用の紙にリサイ クルできます 不要となった際は， 古紙回収・リサイク ルに出してください http://www.funakoshi.co.jp/ e-mail : info＠funakoshi.co.jp 試薬に関して : Tel.03-5684-1620 Fax.03-5684-1775 e-mail : reagent＠funakoshi.co.jp 機器に関して : Tel.03-5684-1619 Fax.03-5684-5643 e-mail : kiki＠funakoshi.co.jp ※本紙に記載されている価格は，2015 年 5 月 15 日現在です。 Z6-Y05N-02（ 2015.5, № 588 ）