トリ白血病ウイルス遺伝子の混入に関して

表
題
：ニワトリ胚細胞由来黄熱ワクチンにおけるニワトリレトロウイルスの同定と性状：ワクチ
ン接種者への感染状況調査
日本語要旨：現行黄熱ワクチンはニワトリ胚細胞で増殖させている。ニワトリ胚細胞由来の麻疹とお
たふく風邪ワクチンの研究が、ニワトリ胚繊維芽細胞基質に由来する内在性ニワトリレ
トロウイルス(EAV)と内在性ニワトリ白血病ウイルス(ALV-E)のレトロウイルス粒子の存
在 を 示 し た 。 我 々 は 、 YF-vax(Connaught Laboratories), Stamaril(Aventis),
YF-FIOCRUZ(FIOCRUZ-Bio-Manguinhos)の 3 社の製造する黄熱ワクチンにおける混
入の有無を検査した。逆転写酵素活性検査は阻害物質のため不可能であった。しかしな
がら、ウイルス沈査を抗 ALV 血清で反応させたウエスタンブロット検査で、3 社のワク
チンすべてに３種類の逆転写酵素蛋白を検出した。それは、混入源が一つ以上の可能性
を示すものであった。黄熱ワクチンからの二つのニワトリ基質 DNA と粒子関連 RNA の
PCR 解析では、外因性 ALV サブグループ A から D の外因性 LTR 遺伝子配列の証拠を認
められなかった。一方、ALV-E と EAV 粒子関連 RNA は RT-PCR により、それぞれのワ
クチンで同等の力価で検出された。定量的リアルタイム PCR では ALV-E RNA が１ドー
ズあたり 61,600 コピー（Stamaril）、348,000 コピー（YF-FIOCRUZ）、1,665,000 コピ
ー(YF-vax)であることが明らかになった。ワクチン関連ニワトリ基質 DNA の ev-locus
特異的 PCR で 2 社のワクチンで非欠損 ev-12 locus に関して陽性、欠損 ev-1 locus に関
しては 3 社のワクチンで陽性であった。インタクトと ev-1 pol の両方が、粒子関連 RNA
で同定された。感染の危険性を究明するために、43 人の黄熱ワクチン接種者の血清を検
査した。ウエスタンブロットで ALV-E 抗体は検出されず、RT-PCR で EAV ないし ALV-E
の遺伝子も検出できなかった。3 社が製造する黄熱ワクチンにはすべて EAV 遺伝子、種々
のレベルで欠損、非欠損 ALV-E 遺伝子配列を含んだ粒子が入っている。43 人の黄熱ワク
チン接種者において ALV-E あるいは EAV に感染した痕跡がなかったことは、これらの
ウイルスの感染の危険性は低いことが示唆されたが、より安全なワクチンにする必要が
ある。
著者１：Althaf I. Hussain
著者２：Jeffrey A. Johnson
著者３：Marcos da Silva Freire
著者４：Freire, Walid Heneinel
その他著者：
出版年月日 2003 年 1 月
巻数:77
号数:2
ページ番号:1105-1111
雑誌・出版物名: J. of Vilol.
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原文タイトル：Identification and Characterization of Avian Retroviruses in Chicken Embryo-Derived
Yellow Fever Vaccines: Investigation of Transmission to Vaccine Recipients
Althaf I. Hussain, Jeffrey A. Johnson, Marcos da Silva Freire, Walid Heneinel*
HIV and Retrovirology Blanch. Division of AIDS. STD, and TB Laboratory Research, centers for
Disease control
and Prevention. Atlanta, Georgia 30333, I and Fundacao Oswaldo cruz/Bio-Manguinhos.,
Rio de Janeiro, Braztt 21045-900
All currently licensed yellow fever CYF) vaccines are propagated in chicken embryos. Recent studies
of chick cell-derived measles and mumps vaccines show evidence of two types of retrovirus particles, the
endogenous avian retrovirus (EAV) and the endogenous avian leukosis virus (ALV-E), which originate
from the chicken embryonic fibroblast substrates. In this study, we investigated substrate-derived
avian retrovirus contamination in YF vaccines currently produced by three manufacturers (YF-vax
[Connaught Laboratories], Stamaril [Aventis], and YF-FIOCRUZ [FIOCRUZ-Bio-Manguinhos]).
Testing for reverse transcriptase (RT) activity) was not possible because of assay inhibition. However,
Western blot analysis of virus pellets with anti-ALV RT antiserum detected three distinct RT proteins
in all vaccines, indicating that more than one source is responsible for the RTs present in the vaccines.
PCR analysis of both chicken substrate DNA and particle-associated RNA from the YF vaccines showed
no evidence of the long terminal repeat sequences of exogenous ALV subgroups A to D in any of the
vaccines. In contrast, both ALV-E and EAV particle-associated RNA were detected at equivalent titers
in each vaccine by RT-PCR. Quantitative real-time RT-PCR revealed 61,600, 348 OOO and 1,665 OOO
ALV-E RNA copies per dose of Stamaril, YF-FIOCRUZ, and YF-vax vaccines, respectively. ev
locus-specific PCR testing of the vaccine-associated chicken substrate DNA was positive both for the
nondefective ev-12 Iocus in two vaccines and for the defective ev-1 Iocus in all three vaccines. Both
intact and ev-1 pol sequences were also identified in the particle-associated RNA. To investigate the
risks of transmission, serum samples from 43 YF vaccine recipients were studied. None of the samples
were seropositive by an ALV E based W t blot assay or had detectable EAV or ALV-E RNA sequences by
RT-PCR. YF vaccines produced by the three manufacturers all have particles containing EAV genomes
and various levels of defective or nondefective ALV-E sequences. The absence of evidence of infection
with ALV-E or EAV in 43 YF vaccine recipients suggests low risks for transmission of these viruses,
further supporting the safety of these vaccines.
論文種類: Article
言語: English
出版地:アメリカ合衆国