RT―nested PCR法によるニンジン種子からのニンジン黄化ウイルス核酸

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植 物 防 疫 第 66 巻 第 8 号 （2012 年）
RT―nested PCR 法によるニンジン種子からの
ニンジン黄化ウイルス核酸の検出
大阪府立大学生命環境科学研究科
望月 知史・岡 久美子＊・岡村 有佳子・大木 理 による伝染（汁液伝染や接ぎ木伝染，媒介生物による伝
は じ め に
搬等）が認められないユニークな特徴を持つ。一方で，
植物ウイルス病の多くは媒介生物（主として昆虫類）
種子伝染しないウイルスでも未熟種子や登熟種子の種皮
により伝搬され，その感染を拡大させる。一方で，植物
や胚への存在が認められる場合がある。これらウイルス
ウイルスの中には種子を経由して子孫植物に伝染するも
は種子の成熟過程や貯蔵期間中に感染性が失活するため
のがあり，約 20％の植物ウイルスが種子伝染するとさ
に，子孫植物に全身感染を成立させることができない。
れ て い る（J OHANSEN et al., 1994 ; A GAR WAL and S INCLAIR ,
以上のように，植物ウイルスの種子伝染性は，①ウイル
1997）
。我が国では種子伝染するウイルス病として 50 種
スの胚への侵入，および②種子の成熟・貯蔵・発芽生育
の病気がリストアップされている（大畑ら，1999）。種
期間におけるウイルス感染性の維持，の二つの要因によ
子伝染性ウイルスは多属多種にわたるが，その多くは
って決定される（JOHANSEN et al., 1994）。
Nepovirus 属，Comovirus 属，Ilarvirus 属，Potyvirus 属
ニンジン黄化ウイルス（Carrot red leaf virus, CtRLV）
に含まれる。植物ウイルスの種子伝染には大きく二つの
は Luteovirus 科 Polerovirus 属 に 属 し（H UANG et al.,
経路，すなわち，種子中の胚を経由する種子伝染と胚以
2005）
，世界各地で発生が認められている植物ウイルス
外 の 組 織 を 経 由 す る 種 子 伝 染 が あ る（JOHANSEN et al.,
。CtRLV ゲ ノ ム
で あ る（WATERHOUSE and MURANT, 1982）
1994；大畑ら，1999）
。胚以外の組織を経由する様式で
は約 5,800 塩基の＋鎖一本鎖 RNA で，少なくとも六つ
植物防疫
は，種皮に感染あるいは付着したウイルスが発芽後幼苗
のタンパク質をコードしている（図―1 A；HUANG et al.,
の茎葉や根に物理的傷害により感染すると考えられてい
2005）
。CtRLV により引き起こされるニンジン黄化病は，
る。この経路により種子伝染するウイルスは，粒子の物
生育初期では植物体が激しく矮化して叢生症状を呈し，
理的安定性が高いキュウリ緑斑モザイクウイルスやトウ
。我が国
古い葉では赤みを帯びた黄色になる（図―1 B）
ガラシマイルドモットルウイルス等の Tobamovirus 属ウ
でのニンジン黄化病の発生は 1956 年に報告されている
イルスに限られる。また，メロンえそ斑点ウイルスのよ
（小室・山下，1956）。CtRLV はニンジンアブラムシと
うに，種子に付着したウイルス粒子が土壌中の媒介菌に
ニンジンフタオアブラムシによって永続的に伝搬され，
より幼植物根へ媒介されるという伝染経路もある。一方
汁液伝染や種子伝染はしないとされている（WATERHOUSE
で，ほとんどの種子伝染性ウイルスは胚を経由する様式
。
and MURANT, 1982）
をとる。この場合，ウイルスはまず植物の胚のうあるい
植物ウイルスの種子伝染性は，農作物種子の輸出入で
は花粉に感染し，そこから種子の胚にまで侵入する。多
問題となる場合がある。CtRLV は種子伝染しないとさ
くの場合胚への侵入はウイルスが開花期までに全身感染
れているにもかかわらず，近年，海外のニンジン種子輸
していることが必要で，開花後の感染ではウイルスは胚
入 検 疫 に お い て CtRLV 汚 染 の 検 査 項 目 が 含 ま れ た。
にまで侵入できないという報告が多い。胚で生存したウ
CtRLV がニンジン種子から検出されるとそのロットの
イルスは発芽後に生育した子孫植物に全身感染し，発病
ニンジン種子すべての輸入が許可されないため，検疫前
させる。このほかに，植物に無病徴感染して病気を引き
に CtRLV 汚染の有無をチェックする必要がある。LEE et
起こさない種子伝染性潜伏ウイルスもある。種子伝染性
al.（2004）は精製したニンジン種子 RNA に罹病ニンジ
潜伏ウイルスは高頻度で種子伝染するが，その他の様式
ンから調製した CtRLV―RNA を混合した溶液を試験的に
Detection of Carrot Red Leaf Virus―RNA in Carrot Seeds by RT―
Nested PCR. By Tomofumi M OCHIZUKI , Kumiko O KA , Yukako
OKAMURA and Satoshi T. OHKI
を検出できる方法を確立したとの報告を行っている。し
（キ ー ワ ー ド：ニ ン ジ ン 黄 化 ウ イ ル ス，ニ ン ジ ン 種 子，RT―
nested PCR，種子汚染，内在コントロール）
＊
究所
大阪府立大学 21 世紀科学研究機構，現：（独）
農業生物資源研
用い，RT―PCR 法によりニンジン種子から CtRLV 核酸
かしながら，私たちが 2010 年ころから研究を開始する
まで，ニンジン種子から CtRLV が検出されたという学
術報告はなかった。実際に LEE らの方法では市販ニンジ
ン種子から CtRLV 核酸を検出することは難しく，した
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