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Instructions for use Title ナガズカ卵巣の毒性物質:第3報
Title Author(s) Citation Issue Date ナガズカ卵巣の毒性物質:第3報 毒性リポ蛋白質 Lipostichaerinの分離と性状 羽田野, 六男 北海道大學水産學部研究彙報 = BULLETIN OF THE FACULTY OF FISHERIES HOKKAIDO UNIVERSITY, 20(4): 329-338 1970-02 DOI Doc URL http://hdl.handle.net/2115/23408 Right Type bulletin Additional Information File Information 20(4)_P329-338.pdf Instructions for use Hokkaido University Collection of Scholarly and Academic Papers : HUSCAP ナガズカ卵巣の毒性物質 第 3報 毒性リポ蛋白質 Lipostichaerin の分離と性状本 羽田野六男料 To 玄i cSubs 句n ceof出 RoeofNo 凶h ernB l enny 1 1 1 .I s o 1 a ゐionandcharac ぬr lZ抗i onof旬玄i cl i p o p r o ぬi n ,lipo白 色i c h a e r i n . 。 MutsuoHATANO Abstract Th e色o x i cl i p o p r o ' 勧i nf r a . c t i o nw倒 p r e p a . r e d品目 f o l l o W8: T hen o r ぬ. e r nb l e n n y r o ewa . se x t r a 伽 dw i ぬ 10%Na . C l,pH7 . 0 . Th e色o x i ol i p o p r o も e i nf r a c t i o ni n ぬe C le 訪問。旬 W 鋪 p r e c i p i t a 事e di nもhep r e 防 n c eof30%目的u r 泊i o nwi ぬs o l i da . mmoNa nium目u l f a.句抗 pH6 . 8a . ndi 色w as1 1 .r e l 抗 ,i v e l yh i g h 色o x i c i t y . The m, 抗e r i a . lwω ぽ も ,h e rr e p r e o i p i t 晶 旬da . d d i n gも050%日錦町幼i o nwi 仏日錦町晶旬dammoniums u l f 8 i 初 f 日 o l u も i o n抗 pH7 . 0 . Th er e p r e c i p i 色刷 w asp目泊。dbyp r e pa . r 抗i v eu l t r a c e n 甘i f u g a . t i o nu s i n gs e v e r a . ld e n s i も ' ys o l v e n 旬 , i . e .1 . 0 1 6,1 . 0 6 3a . nd1 .2 1,a .c ω, r d 泊g色0 色 he me も hodo fH, 晶v e la . nd c o w o r k e r s . Ah i g hもo x i c i t ywωrecognizedi no n l yh i g h 抑 制n f r a c t i o n ( 1 .0 6 3くdく1.2 1 ), na . mOO 1 ヤo凶ich帥 血 T h e d e n s i t y l i p o l i p o s t i c h a . e r i nwashomogeneousw i t he l e c t r o p h o r e t i c副総,r i o na . ndg e lf i l 佐 幼i o non 0 0,andi もg a . vea . nu l t r a . v i o l 的 s p e c 加 unw i 色 h1 1 .p e a . ko f m日 imum SephadexG・1 a . b問中もi o n的 279mμ a . nda . ni n 企 ' a . r e ds p e的rumwi 也 c h a ; r 副 総 ,r i 呂 志i oa b ω ' r p t i o n綿 1 7 3 0,1 6 7 5a . nd1 5 3 0cm-1 • 日制脇yed N,12.16%;P,0.88%;a . ndα [] 2 6,3 6 . 7 . D Asshowni nTa . b l e9, もhea . mino剖 idωmpositiono fl i p o s 色i o h 拍 ,r i ni sv e r y 8 1 i p o s t i c h 紛 r 国企a.c t i o nd e s c r i b O ObyA s a . noa . nd1 も oh ,e x ω酔 f o rぬe s i m i l a r事o, a . moUI 陶 o fs e r i n e ,va . l i n e ,me色~hionine, i s o l e u c i n e,1 , 戸i n ea . nd色r y p も oph a . n e . Th eもo x i c i t yo fl i p o 的i c h ω l r i nw品目晶,pproxim 蜘,l y0 . 9mg.p e rg .o fbodyweigh 色 o fa .m ouse, bu 色t h eもo x i cpr 泊。i p l eh a sno 色yωbeen0 1 宿 泊. 0 0 . 緒 雷 。 前報。においてナガズカ卵巣の毒性物質は脂質性以外に蛋白性のものも存在しそれがリポ蛋白質で a b e z o n,S c o r p a e n i c h t h y smarmoratus ( カヲカの ある乙とを報告したが,最近 F吋umanらのは C 1種)卵巣を 0.14M食塩水で抽出を行ない L D o o1 5 0mg/kgの毒性を示す区分(分析値 C 5 7 . 5 7 9 6, H8 . 2 79 6,N 6 . 7 09 6, P0 . 8 59 6 ) を分離し, また 0 . 5 9 6食塩水抽出では L D o o2 0 0mg ! k gの毒性を 9 . 39 6,H 7 . 4 9 6,N 1 1 .69 6,P0 . 6 19 6 )を得ているが, いずれもリポ蛋白質 示す区分(分析値 C4 であると報告している。 1 9 6 7年 8月 17日Th e蜘 hJ a . p a n e s eC o n f e r e n c eo fもheB i o c h e m i 前' r yo fL i p i d s . ( T o k y o )で講演発表 本木研究は 榊 北海道大学水産学部食品化学第一講座 ( L a b o r a t o r y0 1Fω ,d0.",抑制ry,F側 ,t l t y0 1F i 8 h e r i e 8,H o k l c a i d oU叫 i v e r 8 i t y ) -3 2 9ー [ 玄X, 4 北大水産業報 著者は前報同様ナガズカ卵巣を 1 0 9 6食塩水抽出を行ない毒性リポ蛋白質区分を得たが, ζ れを硫 o s t i c h a e r i nを分離しその性状 酸アンモニウム分画,さらに調製超遠心法によって毒性リポ蛋白質Lip について検討を行役ったので報告する。 実験および結果 実験方法: 分析法および毒性試験法は前報同様であるが, リポ蛋白質の分離は種々の密度の均一 溶媒を用いる超遠心法めのによって行ない目立 55P形超遠心機を使用した。電気泳動は日立 HTB-2 チセリウス電気泳動装置,比旋光度測定は柳本自記旋光計 OR-lを使用した。アミノ酸分析は試料を Roe ( 2 0 0 g ) ‘ Mix3t i m e sw i t h2 0 0mlo f1 0%NaCla q . (pH7 . 0 )a n dh o m o g e n i z e . F i l t e rt h r o u g hh y f l o s u p e r c el . F i l t r a t e ( I n i t i a le x t s . ) S u r f a c ef a t t yl a y e r ( D i s c a r d ) P r e c i p i t a t ea t30% s a t u r a t i o n tpH6 . 8 w i t hs o l i d (NH.)2S a a n dt h e nc e n t r i f u g e1 0 0 0 0r . p . m . f o r1 5m i n . o . S u p e r n a t a n t S u p e r n a t a n t P r e c i p i t a t ea t9 0% s a t u r a t i o n w i t hs o l i d(NH.)2S0. a tpH6 . 8 a n dt h e nc e n t r i f u g e1 0 0 0 0r . p . m . f o r1 5m i n . SuperI la t a n t ( D i s c a r d ) 団 側ep r e c i p i ぬ胸 w ere必鎚o l v e di nd i s ; 1 i l l e dw蜘 ra . n dt h e nd i a . l y z e d a . ga . i n 的 d i 白 色i l l e dw晶飴rωn ぬi n i n g0.01%EDTA F i g .1 . E訪問白色i o nandf r a c t i o n 抗i o no fもo x i cl i p o p r o ' 句泊, l i p o 的i c h 回 l r i n ,金om色h eno 凶h e r n b l e n n yr o e -3 加ー ‘ J 1 9 7 0 ] 羽田野:ナガズカ卵巣の毒性物質 1 1 1 6NHClとともに封管内で 1 1 00C,3 6時間, 2 2時間加水分解を行ない目立アミノ酸分析計 KLA-2 型 6時間, 2 2時間両加水分 で測定した。なお加水分解における個々のアミノ酸の分解に対する補正は 3 6時間定量値を採用した。 トリプリファンの測定は紫外部吸収 解物の定量値から外婦法であるいは 3 法的を併用した。 官史料: 前報同様のものを供した。 F i g .11乙示すごとく卵巣 200gを 1096食塩水 (pH7 . 0 )200ml 毒性リポ蛋白質の抽出とその毒性 塩水を加えて 2回抽出を行なった。 ζ れら抽出液を合せ ζ れに国型硫酸アンモニウムを添加し 3096 m 凹一 1 111 9a9a@h-oaA 凶吊 U ↑ 一 EAEU4bmml一 ピ 闘 い 畑 一 一 mmmm 伽 Lm- MmuMumu iE 胤一 ゆ一 M &巾,z 一加一 一 1 .4 1 1 .4 1 ljill 3 5 .3 O .5 3 5 .3 O .5 h 1 .3 6 1 . 2 8 0 . 8 5 0 . 9 0 0 . 2 1 0 . 1 7 跡、﹄一一 ゐ 加一一寸一 M m均 一 祁 UMMmm凶回一 UUU山 ukr恥配一 仙一↑畑一一山山一 ♀ 山町一一一川一 ~ 0 叫一仁峨一一一 ♀ 一 一 s ♀ s 5 一4 4 2 2 5 5 0 一0 0 0 0 0 0 ♀ ﹁ 0 . 5 0 . 5 0 . 3 0 . 3 0 . 5 0 . 5 3 1 . 4 3 1 . 4 1 8 . 9 1 8 . 9 6 . 2 6 . 2 3 旬一 α 一 l 一5 回 一 一 D 一m 0 μ μ m 一 一 Z7427335555 一 一 は一一叫一一 U U U引U U 一 J 脚 一 - 一 一 oaoa 一 ququ'A'A illl 一 一 ﹁ 0 0 000050 ll 山一一一一一 J 一一 一鉱山脇一払紘一肌飢紘枇 l 2 3 . 0 2 4 . 5 2 2 . 0 21 .0 2 8 . 5 3 6 . 0 2 5 .0 " ' . . . . v 2 5 . 0 PP1'. 3 凶一一﹂ b 副一机)一 町 一 吻hw 一百四一 一川町 一 一 h 昭一回 PP1'2 1 a 一l E 一一一 制一一 u 日一 t 也三町一 一 制一一山旬一司 b 。 ; 一 世 ﹀1守 とホモラナイズしたのちハイフロスパーセルを用いて吸引瀦過を行ない, 抽出残溢にさらに 1 096食 Wi ぬi n2 1 ぬi n2 1 Wi S u r v i v e d S u r v i v e d S u r v i v e d S u r v i v e d IS u r v i v e d IS u r v i 刊 d *Rou句:In色,ra.periωnealinjeotion … … … 凶川*%山山い T a b l e2 . Pr ope 凶 ,i e so fi 凶 恥1e x t r a o t sande a o hf r a c t i o n 十 「 t . A IRJI_ I -)C'" I p z t TlN,% l,% !同m~?9 I p 剖叫 g i 刷帥叫1 1 m 前.) I 1 ,削 同 μ ) ト 1一}一一 悩 T 低 o 釦x 亙i 尚 拘 o i 均 i 勿 一 -1 I Pe 時晶 P 倒 kbPeakoPe 晶kdI 2 6 . 4 1 I1 1 . 4 5 10 ・6 9 18 .1 1O .7 1 0 .8 7 9 .7 1 6 . 0 2 I1 1 . 4 7 0 . 7 3 I1 3 . 0 6 . 5 3 I1 0 . 8 8 I 0 . 6 2 I 7 . 6 0 . 7 5 I9 . 0 8 I1 . 1 4 3 4 .伊 3 .5 I3 . 4 1 9 . 8 4 .6 8 長. 4 7 . 5 1 9 . 9 6 3 . 6 1 3 . 1 1 幻 5 4 . 3 1 3 . 6 *抗 件 e 1<自由o pho 揃 i o ω b 8 .8 I * I 257mμ s e eFig.5inpreviousrepo抗 日 Tー:non色oxio,土:weaklyもoxio,+ :moderaωly七oxio, 十+:8 色r o n g l yもo x i o -3 3 1ー + 土 [ X 玄 , 4 北大水産象報 4 0 3 0 .~ 2 0 ~ ' ‘ 1 0 。 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 W a v e l e n g t h(mμ) 3 2 0 Ea . c hf r a o色i o nw鍋 d i 脚 l 刊,di n5%Na . α 'a . q ., pH7 . 0 F i g .2 . Ul t r a . v i o l e ω, r a .ofi n i t i a . le 対1" 1 1 0 0 旬a. nde a .c hf r a . ωion 色 " 。 飽手枕殿 (PPTl ),5 09 6飽和沈殿 (PPTヨ). 9 09 6飽干蹴殿 (PPT-3) の 3区分に分画した。 ζ れらの結果はそれぞれ T a b l e1 ,2,F i g . 2K示すとおりである。 禽性リポ蛋白質の宿敵アンモニウム分画とその毒性: 前述の毒性の認められた PPT-1と PPT-2を それぞれ 0 . 0 1 9 6EDTAを含む水に透析し凍結乾燥後. 396食塩水 K再溶解 ζ れに硫酸アンモニウム Ta . b l e3 .T o x i o i t y句 的 o fe a . ohr e p r e o i p i 句句 F r 品 。 もi o n PPT-l・30%r e p 酔 PPT-l.50%repp 色 PPT ・ 1・70%r e p p 色 e p p t P凹 ・2・50%r P目 -2.70%r e p p t PPT ・ 2・90%repp 色 B o d ( y g ) w ι S e x 2 3 . 5 2 4 . 5 s 2 2 . 0 2 1 . 0 s 2 3 . 0 2 3 . 5 s 2 5 . 5 2 3 . 0 s 2 2 . 5 2 6 . 0 s 2 2 . 5 2 2 . 5 s 平 ♀ ♀ ♀ ♀ ♀ Do 飴 l M m 且.w. mg ml mg/g b圃. 2 2 . 30 . 7 2 5 . 40 . 8 0 . 9 5 1 .0 3 1 2 0 1 2 0 2 2 . 50 . 5 2 2 . 50 . 5 1 .0 2 1 .0 7 Within21 Wi ぬi n2 1 2 1 . 50 . 5 2 1 .5 0 . 5 0 . 9 3 0 . 9 3 Within24 S n r v i v e d 2 5 . 10 . 8 2 2 . 00 . 7 0 . 9 8 0 . 9 8 1 2 0 1 2 0 2 1 .5 0 . 7 2 4 . 50 . 8 0 . 9 5 0 . 9 8 2 2 . 50 . 7 2 5 . 60 . 8 1 . c 1 .C - 332- S n r v i v e d S u r v i v e d l S吋 ed Su r v i A ed 。 1 9 7 0 J I I T 一均一 0 4刷 ↑ J出 一 十件土 一 L ア一 一 揃 伽 一 he刷 協 一 h '一 a d 一 焔t m m m一 一朗 一凶剛一 h a 一倒伸一札問一 岬}一 mm 一時川町一 士一 4ma 3 . 32 1 . 77 0 . 0 5 . 0 3 . 2 9 . 28 5 . 0 2 . 6 1 . 6 0 . 08 1 . 21 7 . 2 知 一 宏一 一一一一 一机 町川配! ι ι │ 一2 EA ぽ 一噌 川口“一m lL dpdp 酔一円 一帯 w . m m 一P OOO %%%て m 一 一 dhw 一 224 阿 。 " 円町凹一 ppp i ; j i i l i i l i i i 一畑町一け 一 ↑%一 阿i 血*一 m- ︽円-一 OJHLM-o 一 M 一 i 一 一 T a b l e4 . P r o p e r t yo feachr e p r e c i p i ぬもe P円 -1.30%r e p p t . 1 6 . 4 P円 -1.50%repp 色 . 1 8 0 . 0 P円 4・70%repp 色 . I 1 0 . 6 イ 草 }L 一 一 m? 一 一 下 羽岡野:ナガズカ卵巣の毒性物質 飽和水溶液を加え pH7 . 0I L調整,分画を行なった。生成した各沈殿は遠心分離によって集め水 I L溶 . 0 19 6EDT A を含む水に透析したのち凍結乾燥し毒性試験と分析に供した。 ζ れらの結果は 解 , 0 Table3,4I L示すとおりである。 毒性リポ蛋白質(Li postichaerin)の綱雌超遠心法による分離とその毒性 Table3,4の結果毒性 の比較的強い PPT-l・5096r e p p t区分 7 . 6gを 0 . 1 5 4M NaCl ( d苫1.0 0 6 )1 0 0mlI L溶解し,同液 に 3時間透析後 d=I.085溶媒を計算量加えて d=1 .0 1 9の試料溶液を調製した。 ζ のものを T able5 4 0, 0 0 0rpm,1 2 1 50C ) を行ない,低密度リポ蛋白質 (LDL ,LDL2),高密 I L示すごとく超遠心分離 ( 1 度リポ蛋白質 (HDL1,HDL2),超遠心沈法 (UR) とに分別した。それぞれの区分は 0 . 0 5 9 6EDTA を含む水に透析,凍結乾燥し試料とした。毒性試験 ( T a b l e6 ) とセルローズアセテ{ト電気泳動 ( T a b l e7 )の結果 HDL2区分が L i p o s t i c h a e r i n区分に相当する乙とが認められた。 postichaerinの性状 z 分離したLip o s t i c h a e r i nは高密度リポ蛋白質(1.0 6 3<d<I.21)であ Li F i g .3 ),SephadexG-I00によるゲル鴻過 ( F i g .4 ), るが,純度を検討するためチセリウス電気泳動 ( と超遠心分析を行なったが超遠心分析においては溶媒密度と蛋白濃度の欠陥によって鋭いシュリレー ンパターンは得られず均一性を検討する ζ とは不成功であった。しかし電気泳動とゲル鴻過では均一 Table 5 . Scheme o fs e p a r a t i o no fもo x i cl i p o p r o おi n by 佐i f u g 抗i o n p r e p a r a t i v eu l t r a c e n Lipopo 陶 i n Abbre 時 三 五 回 目 ---îí~-;; 句 与 Lo w den 日i 色 y Low d e n s I 色y High 色 y d e n s i High 田 i t y de ー i l l t r a c e n もr i f u g 晶l r e s i d u e 哨 y l hesmitzz-IDensibY│ -IDn r a n g e c o l l e d f~~~. <!~ め i . I ω ¥medium! 蜘 ~ VV~~ L D L l ω 1 91 均 LDL. 1 .0 19-1 .0 6 3 : i Top HDLl 1 1 . 0 6 3 1 . 2 1 1 Top HDL. 1 .0 63-1 .2 1I I n f r a n a t ・ 1 且 1+ 制問 │ 6 7 , 9 1 0I 1ωNaαI 2 2 6 7 , 9 1 0 I 1 . 0 6 3 I Na C l -NaBri 2 2 6 7, 9 1 01 1 .2 1 I Na C l N a B r ; 3 6 1 0 5 , 4 0 01 1 .2 1 1 Na C l N a B r : 3 6 1 . 2 1 3 6 n色 晶 UR 1 .21<d 色ω m bo Ro 色o rm o d e l :4 0 . 0 - 333ー 1 4 4 . 7 0 0 [XX, 4 : 北大水産実報 Ta . b l e6 . T o x i o . i t yぬ的 o fe 晶 . o hf r 晶o t i o nbyP 玲 ' p a . r ωiveu l t r . ao e r r 耐f u g 抗i o n D086 L112Ui [ LDLa HDL 1 HDLa h r a . 0 . 5 0 . 5 1 .ω 1 . ω S u r v i v e d S u r v i v e d 2 5 . 0 2 5 . 0 0 . 5 0 . 5 0 . 9 6 1 . 0 0 S u r v i v e d S町 v i v e d 2Mls 2 7 . 8 2 7 . 8 0 . 5 0 . 5 4 1 .0 1 . 0 4 1 5 1 1 1 2 8 . 0 2 6 . 5 2 7 . 5 2 2 . 0 3 0 . 2 2 7 . 0 2 6 . 6 2 0 . 7 0 . 6 0 . 5 0 . 7 0 . 5 1 . 0 7 1 . 0 1 0 . 9 6 0 . 9 4 1 8 1 5 Wi ぬ. i n24 悩n24 Wit 2 7 . 0 2 1 . 0 2 8 . 6 2 6 . 0 0 . 6 0 . 1 1 1 . 0 5 3 1 .2 8町 v i v e d 2 4 s 2 6 . 0 2 5 . 0 ♀ --,-----IJR 時一則制 印 D帥 白 色ime, m1 mg/g.B.W. . p . o r a . 白 色i 色r 色r T. a b l e7 . P p e r t yo f伺 o nbyp r e . a r o p a . r 抗i v eu l . ao e r r i f u g t i o n hf 一一一一 t r o . 叫.0 C e l l e o . 86晶ωぬ旬。l tI [ a ]哲 LDL 1 LDL. HDL 1 HDLs*申 UR 0 . 9 1 1 . 5 6 . 2 2 0 . 0 5 . 3 2 1 3 . 4 6 1 2 . 1 6 1 2 .4 : 4 1 . 5 7 3 . 6 1 .0 8 1 1 . 3 0 . 8 8 1 1 . 7 0 . 1 1 4 1 0 . 5 3 6 . 6 3 6 . 7 3 6 . 1 1 向 山 佐 川 P曲 k晶 Pe . a k. e kbPe . a 0P a . kd 1 4 . 2 1 4 . 2 7 0 . 3 1 7 . 1 1 0 . 0 8 0 . 3 0 . 0 0 . 0 1 0 0 . 0 3 . 0 0 . 0 9 5 . 2 0 . 0 1 .7 0 . 0 1 .8 十 + * 土 弘前. n PPT.l・50% r e p p *i L i p O B t i o . h晶e r i nf r . ao t i o n , 色i O l u o no f5 . C l , pH7 . 2 fω 晶 B 9 6Na 紳 ~ . . Descending 泊 W凶 d L i p o B 色i 鈎 r o h nv i s ω l v e di e r o n . a lb u f f e r ,pH8 . 8 2, 伽n μ=0.1岨 dω町 i e doutω10 o r1 5 m. mAf F i g . 3 E蜘 回' . a g r a . mo fl i p o B t i o . h帥,rm p h o r e t i od i 性を示したので ζ のものの性状について検討を行なった。それらの結果は F i g .5 ,6,T ,8f a b l e7 C 示すとおりである。 -3 3 4 : ー 1 9 7 0 ] 羽田野:ナガズカ卵巣の毒性物質 m 0 . 2 0 E ミ 0 . 1 5 C 。 e 。 q D 制 .. 0 . 0 5 。 。 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 E l u t i o nv o l u m e( m l ) 嗣,r i nwase l u 旬 dぬ r o u g ha .ω, lumn ,2x65.5cm,using L i p o s t i c h 2.5%N,品。1a q .,pH7.0品目 e l u e 凶 姐d ω11eo 旬 de 帥 h2m l F i g .4 . Ge lf i l もr 抗i o no fl i p o 的i c h 帥 r i nonSeph a . d exG・1 0 0 2 5 2 0 "0 1 5 同 1 0 巴 5 。 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 W a v e l e n g t h( m μ ) 鈴i c r u 岡 山 wa . sd i 蜘 l v e d泊 5%Na C l 晶q ., pH7.0 L i p o F i g .5 . Ul t r a . v i o l e 事晶b s o r p t i o ns p e 柑 umo fl i p o 白 紙 必 a . e r i 且 - 335- T晶,b l e8 . Am i n oa c i dcomposi 色 i o no fl i p o 前i c h a e r i n Ami n o Amino a c i d , mM!100g I mM!lOOg 加i n I pro 句i n p r o Z253 2 4 . 1 号 〉 1 0 0 0 Waven u m b e r( c m ・ ' ) Th ei r p e l l 的 w asp r e p a r e dfrom4 . 0mgo fl i p oB t i c h 嗣,r i n mixedwith600mgo fKBr 朗 I r i n F i g .6 . I n f r a r e ds p e c t r u mo fl i p o s t i c h →一一 唱 且 。 A U O A U 一 80 一 7 5 a a 一弘一 u一 4宮' ioa ao 一a , t一 、 区 U一 一 ﹁│一叫 111111 一一 f 一一 O 0 2川町一 1 一 噌 ゆ一創 8 55 11 37 3一 一民一@ ﹂ 1一 lili--│1 叶一一側 刈一 a J f 一日叫 一 v u h e w 開 畑山 h ﹁一宮内山 ι 品 日 日 一ω 日一回初日目白品目 九 円 附 0 1 1 0 0 5 3 - 3 6 3 0 8 1 0 8 8。研一 7 一 ωω 白ω ω 一 VU 一一 一 一N 吋 % 一 品 88551379594051321 一一旬開酌問一払紘鈍肱払鉱紘一一札払必肱江川品乱払比抗抱一回一引吋銅 6 一回ぬぱ AmE 一(一 一 γIll--一│││Illi----------ーーーーーーーーー﹁ー一色ぽ咽 一一 mMM 一 一 , MAua h 一恥剛 M 一一 r忠一 一一 一一 一一 叫竺関一岱忠 ω 1 6 2 0 4 8 2 5 5。 289630 一行同一一 mGIo-aMMMMMM 一 --bJ Jad---- ・一・一d 帥 m ぬ A 晶.6F一5 3 2 U 3 2 6 4 2 5 7 3 3 4 5 1 4卯 一 回 一A E O T 一一一事件 TR Z向 # ・ 一 凶 一 キ*一副一 一E キE キ‘ mト町一誌均一品い印刷 h'Mmmhmzdm均畑一一町一 一均m 考察および総括 ナガズカ卵巣を 1 096食塩水で抽出し抽出液に閲型硫酸アンモニウムを加えて粗分画を行ない 3 0 9 6 J UJIl--lIlili---7 Zh ρ。 J2113JJAJJι3 ・5 J J A 犯O 2 2 . 6 4 8 . 2 2 0 . 6 2 3 . 3 228 3 0 . 2 5 3 . 2 1 5 . 3 凶2 5 6 . 7 3 6 . 5 4 2 . 8 5 5 . 7 4 4 . 4 4 0 . 5 4 0 . 3 1 0 . 2 3 8 . 9 m 口 一 mほ 叩 叫 一 j j A 1 0 4 J J 一ρ A J J J J j j J j 一 一 J 7 m m吐 Mmdmr一5 3 2 m 3 1 5 4 2 4 6 2 3 3 5 1 4 一間一刊1mmm 一Illi--Lilli---lil--一││一 b d金 提 州 一 f hぷ一 m 4 7 . 9 3 4 . 3 5 6 . 5 6 3 . 8 2 5 . 7 3 3 . 9 7 0 . 6 6 . 7 3 2 . 7 E 一以一 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 01 1 一t J山 h M 一 m 一例即 h J 一一 二 地 一 け つ ー lili----Illi--Illi--Ilili--l一 山 由 旬 白 一一回&印刷 一一﹁ 一関・叩↑血孔附陶 OH-m 。 品id, 一浪ム J F 一・ト円↑ ・ o -md一 - 336- かl i p o 前i - I y・l i p o 白 色i 。 品rin3 c h ω ' r i n町 I ch Mm ζ の区分をさらに精密に硫酸アンモニウム飽和溶液を加えて分 飽和沈殿 (PPT-l) Ie毒性を認めた。 6 0 0 2 0 0 0 4 0 0 0 [XX ,4 北大水産業報 1 9 7 0 ] 羽田野:ナガズカ卵巣の毒性物質 m 画し毒性の強い 5096飽和再沈殿 (PPT-1・5 09 6r e p pt .)を得た。 乙の区分は前報の結果よりリポ 蛋白質と考えられるので,最近よく行なわれる分離法である調製超遠心法によって毒性リポ蛋白質の く1.2 1 )区分の HDL21<:強い毒性を認めた。 分離を試みた結果,高密度リポ蛋白質(1.063<d 分を A鈍 noらのに従ってLip o s t i c h a e r i n と名づげた。 ζ の区 o s t i c h a e r i nの性状はチセリウス電気泳動,セルロ{ズアセテ{ト電気泳動 ( P e a kc1 < :相当)では L ip 均一性を示し,また S ephadexG-1 ∞のゲル濃過でも均一性を示した。しかし超遠心分析によってその 均一性と F l o t a t i o nr a t e(S/) を測定したが種々の欠陥により均一性の検討はできなかった。しかしめ 2である の値は 1 ζ とが推定された。 UVスペクトルでは入max 2 7 9r o μ,Ef~ 1 1・ 7, E瑚 / E : 捌の 比は 1 却であり. IR スペクトルではそれぞれペプタイドと脂質に帰属される vg:1650cm-1(ア ミドー1). 1 5 2 5c r o1 (アミドーII), 1 7 3 0c r o1 (ヱステル)の吸収を有しておりとのものがリポ蛋白 ζ とが認められる。構成アミノ組成は A laと Gluの含量が比較的多いほか, Asano らの βl i p o s t i c h a e r i nのそれと比較すると S e r ,V al,Met ,I 1e u ,L ysおよび Try以外はほぼ同じ傾向を有 している。なお分際したLip o s t i c h a e r i nは Youngら7),Be r n a r d i ら句の卵黄リポ蛋白質電気泳動図 i p o v i t e l l i n1 < :相当するものと考えられる。 より l able9 1 < :示すが, Pawlowsk y9) が E u r o p e a n 魚卵毒性物質について化学的検討がなされたものは T s t u 弔 問n (ダリチョウザメ属あるいはチョウザメ属)の卵より A c i p e n s e r i nと称する毒性物質を分離 し,ブロタミンであると述べているが,卵黄にプロタミンが存在するとは考えられず, また ζ の卵は C a v i e rとして賞味される乙とより非常に疑わしい。 McCrudden10) は P i k e(カワカマス属)とBar b e l (ニゴイの近縁種)卵より水溶性の有毒アルブミンを分離しているがいずれも毒性リポ蛋白質とは異 っている。今回著者が分離したLip o s t i c h a e r i n はリポ蛋白質であり A組 no らの β・l i p o s t i c h a e r i n , F u h r r o a n らの Cabezonr o et o x i nI Iともよく類似している。 質である 令 Ta . b l e9 . I o h t y o o もo x 泊 80f曲 刊 ,r a . lf i s h e o l一一山坐.otoxin 時 No 曲 e r n b l e n n y G蜘 叩n I l 竺 竺 山 由d ILipostichaerin* Highd e n o i t y Lowde 四 i 色y Highd e n s i t y Highd e n s i t y 1 α lipostichaerin刷 ・ ・ 的i c h 朗由削 P l i p o 的i o h a e r i n y l i p o Toxin1剖 Toxin1 1剖 I18%Naαsatn.ppt. 1 一 M~I- Tox~lbuminlOl A A To 豆 島 ,l bumin 制 . 8 8 !1 2 . 1 6I0 1 3.56 0.75 . 2 5 I1 1 .3 7 1 I11.47 I6 .7 0 0 . 6 9 2 9 . 8 8 凶l Elu 蜘 f romB i o g e lP-2川 1 . 6 European I Acipe 醐由削 o t u r g 問n P i k e IN,%型竺 0 . 8 5 0 . 6 1 Coroponen 色 ぬi n L i p o p r o L i p o p r o もe i n L L i i p p o o p p m m 句 加i h n 附 o p p m m 総 加i i n n L L i i p E P r o t a 凶 m e x ' 抱. A 1 bumin ex 旬. A 1 bumin *pn 猫車叫色呂志u dy なお産地では“ナガズカの卵は捨てておいてもカラス色寄らない。"といわれ乙の乙とは周知の事 実とされているが, Pi l 1 s b u r y11) も B r i t i s hCo l u r o b i aの海岸でやはりCa b e z o nの卵 K カモメやカラ スも寄らないととを観察しており, ζ の点でも共通性がみられた。 - 337- [XX, 4 北大水産業報 謝 辞 本研究において本学部五十嵐久尚教授,坂井稔教授,座間宏一助教授に種々の御指導をいただき, 超遠心機,チセリウス電気泳動装置の使用の御好意をいただいた斎藤恒行教授, アミノ酸分析に御援 助下さった農学部坂村貞雄教授,動物試験に微生物学講座絵面良男修士,試料の調製I L生物化学講座 故牛山寛修士の御援助を,試料入手 1 1:木古内保健所林功課長の御好意によったととを ζ とに記し厚く 感謝の意を表す。 なお本研究の費用の一部は科学研究費補助金によった。 文 献 1 ) 羽田野六男 ( 1 9 7 0 ) .本 総 20,3 2 0 3 2 8 . 2 ) F u h r m 晶n,F.A.,Fuhrman,G . J .,DuH,D . L .& Mosher,H . S .( 1 9 6 9 ) .J .A g r .FoodOhem. 1 7,4174 2 4 . avel,R.J .,Eder ,H .A.& Bragdon,J . H .( 1 9 5 5 ) .J .O l i 叫./0叫v e s t .34,1 3 4 5 1 3 5 3 . 3 )H ragdon ,J . H .,Ha v e , lR . J .& Bo y l e,E .( 1 9 5 6 ) .J .La b .& O l i 叫 . Me d .48,364 2 . 4 )B odwin,T.W.& Mo 的o n,R . A .( 1 9 4 6 ) . Bめc h e 冊 .J .40,628-632. 5 ) Go 咽 0, M.& I ω, h M.( 1 9 6 6 ) . TohokuJ .A g r .R e s .1 6 ,299-316. 6 ) As ,E . G .& Ph 泊n ey,J . I .( 1 9 5 1 ) .J .B i o l .O h e m .1 9 3,7 3 8 0 . 7 ) Young r n a r d i,G .& Cook ,W.H.( 1 9 6 0 ) . B i o c h i m .B i o p h y s .A c t a .44,8 6 9 6 . 8 ) Be ,E.N.(1928). Gi f t t i e r e 叫 叫d i h r eG i f t i g k e i t . 515p .J e n a ; Gus 旬vF i s o h e r . 9 ) Pawlowsky ( n o 色 目 前nb ya u t h o r )(豆油旬晶dB . W.( 1 9 6 4 ) . O l i 叫 .P 加 問ω0 1 .T" h e r a p .5, 6 1 5 6 2 7 . より 引用) 1 0 )Mo 仕u dden ,F.H.( 1 9 2 1 ) . A r c h .e x p t l .P a t h .Pharm.9 1,4 6 8 0 . i l l s b u r y ,R.W.(1957).σ叩 e i a( 3 ),2 5 1 2 5 2 . 1 1 )P - 338 匂