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免疫学関連製品ガイド(価格表記無し) - Thermo Fisher Scientific
免疫学 免疫学関連製品ガイド 免疫学 免疫学的研究を最適化 → 細胞の分離─ポジティブセレクションまたはネガティブセレクショ ンによってリンパ球サブセットを精製します → 最適化された培養系─機能性細胞群を維持・増殖させます。 我々はウイルス、細菌や寄生虫のいる厳しい環境で生きています。 免疫系は複雑な生体構造の中で機能しますが、免疫応答に関する 我々の免疫系はウイルス、細菌、寄生虫の攻撃や新生物形成に対 我々の理解の多くは単純化（複雑な生体の一部において部分的な する防御線となり、免疫記憶応答によってその後の暴露に速やか 免疫系を刺激して、in vivoでの機能を模倣する応答を引き起こす に応答します。免疫応答は高度に制御されていますが、時に免疫 こと）によって得られたものです。このアプローチには、鍵となる 応答が我々に病理学的異常をもたらし、アレルギー反応、炎症反 細胞のタイプを特定するためのツール、免疫応答の構成細胞を物 応や細胞障害性反応を引き起こす可能性もあります。 理的に分離するためのツール、研究またはin vivoへの再導入を目 細胞間相互作用とその絶妙な制御が免疫応答の中心となっていま 的としてin vitroで細胞機能を維持するためのツールが必要です。 す。免疫系がどのように機能するかをよりよく理解するためには、 このパンフレットでは、実験に役立ついろいろなツールを紹介しま このような無数の相互作用を深く理解することが重要です。リンパ す。細胞選択ツールの使用により、ポジティブセレクションまたは 球は自由に循環する細胞であると考えられていますが、分化、循 ネガティブセレクションによるリンパ球サブセットの精製が可能と 環、移動、抗原応答や最終的な細胞死には他の細胞を必要としま なります。最適化された培養系により、機能性細胞群を維持・増 す。白血球は、限局環境内における表面タンパク質との直接的な 殖させることができます。インビトロジェンは技術革新によって、 接触やサイトカインとケモカインシグナルを介して、リンパ組織お 免疫学的研究を迅速かつ再現可能な方法で行なうために必要な よび間質組織と相互作用します。この結果として、造血性前駆細胞 ツールを提供し続けています（表1）。これらのツールを利用してい から発生したリンパ系細胞は、自己と非自己の区別を学習し、特異 ただくことにより、お客様は技術的な問題点で苦労されることな 的なヘルパー機能およびエフェクター機能に関与し、生体が受け く、自然の神秘を解明することに専念できるのです（図1）。 た攻撃を記憶し、変化し続ける一連の攻撃に対する多面的な防御 機構を整えます。 2 11365D 11344D PBL（末梢血リン ✓ ✓ CD3 CD2 11365D 11344D Treg（調節 T 細 ✓ ✓ CD4 CD25 11363D 11346D CD4細胞（例： HIV患者由来） ✓ ✓ CD3 CD4 11361D 11346D TIL（腫瘍浸潤性リ ✓ ✓ CD3 CD45RO 11365D 遺伝子改変 T 細胞 ✓ ✓ CD3 CD2 11061D 臍帯血T 細胞 ✓ ✓ CD3 γδ T 細胞 ✓ ✓ γδ CD4 CD45RA CD8 CD3 CD3陽性NK T 細胞 ✓ ✓ CD3 CD56 11365D 11344D NK 細胞 ✓ ✓ CD3 CD56 (negative) 11364D 11349D 樹状細胞 ✓ HLA-DR 11061D 11308D 11047 造血幹細胞CD34 + ✓ CD80 CD83 CD86 CD34 CD117 11301D 単球／マクロフ ァージ ✓ CD11b CD14 11061D パ球） 胞） ンパ球） ✓ ✓ マーカー2 CD2 マーカー1 CD3 Macrophage SFM ✓ StemPro®-34 ✓ AIM V® （ヒト血清添加） ポリクローナル T 細胞 T 細胞のタイプ 清含有） Dynabeads® Untouched™ Dynabeads® 抗体 生存性 死細胞識別 マーカー Dynabeads® FlowComp™ OpTmizer™ w/ （0∼2％ヒト血 GIBCO® 培地 分析用抗体 表1 さまざまな細胞の研究用ツール. MHCD0301 and CD0204 MHCD0301 and CD0204 MHCD0401 and MHCD2504 MHCD0301 and MHCD0404 MHCD0301 SYTOX® Red S34859 SYTOX® Red S34859 SYTOX® Red S34859 SYTOX® Red S34859 SYTOX® Red S34859 サイトカイン IL-2, IL-7, IL-15 IL-2, IL-7, IL-15 IL-2 IL-2, IL-7, IL-15 IL-2, IL-7, IL-15 IL-2, IL-7, IL-15 IL-2, IL-7, IL-15 IL-2 11350D MHCD0301 SYTOX® and Red CD0204 S34859 IL-2 IL-2 MHCD8304 and MHLDR01 CD3458101 and CD11704 CD11b01 and MHCD1404 SYTOX® Red S34859 SYTOX® Red S34859 SYTOX® Red S34859 IL-4, GM-CrF, TNF-α, IFN-γ M-CSF, GM-CSF, IL-1, IL-6, IL-11, IL-12 SCF M-CSF, IL3, IL-4, IL-10, IL-13 IFN-γ, TGFβ, TNF-α, GM-CSF ✓ = 推奨 3 www.invitrogen.jp 免疫学 Myeloid stem cell 骨髄性幹細胞 CD33 CD34 CD68 CD117 GM-CSF IL-3 Self renewal 自己複製 GM-CSF IL-3 IL-11 EPO IL-24 GM-CSF IL-3 EPO Megakaryocyte 巨核球 CD41 CD42b CD61 CD103 GM-CSF IL-3 Erythroblast 赤芽球 CD36 CD235a E-Cadherin GM-CSF IL-6 EPO CD13 CD15 CD33 CD116 CD123 EPO Platelets 血小板 Basophil 好塩基球 CFU-M CFU-G (myeloblast) （骨髄芽球） GM-CSF IL-3 GM-CSF G-CSF Eosinophil 好酸球 Mast cell 肥満細胞 GM-CSF IL-5 (monoblast) （単芽球） CD11c CD13 CD15 CD33 CD115 CD116 CD123 Monocyte 単球 IL-9 CD11a CD33 CD35 CD44 CD55 CD59 CD235a Platelets Figure 1. Invitrogen tools help you pave the way to immunology discoveries. 図 1 インビトロジェンのツールが免疫学的研究の道を切り開きます。 4 CD13 CD33 CD68 CD117 Neutrophil 好中球 Erythrocyte 赤血球 CD9 CD23 CD31 CD32 CD41 CD42B CD61 CD62P CD63 CD69 CD102 GM-CSF IL-6 GM-CSF IL-4 CD9 CD23 CD33 CD35 CD50 CD69 CD10 CD15 CD16 CD35 CD62L CD95 Lactoferrin TLR2 GM-CSF IL-4 Myeloid 骨髄性 dendritic 樹状細胞cell CD1a CD11b CD11c CD68 CD80 CD83 GM-CSF M-CSF Macrophage マクロファージ CD11a CD11c CD14 CD16 CD26 CD32 CD36 CD38 CD45b CD63 CD64 CD68 CD80 HLA ClassII（DR/DP） II (DR/DP) HLA クラス CD23 (activated) CD69 (activated) CD105 (activated) CD11a CD13 CD14 CD32 CD33 CD62L CD63 CD64 CD68 CD95 TLR2 CSFR1 Hematopoietic stem cell 造血幹細胞 CD34 CD45 CD90 CD105 CD117 IL-3 SCF Lymphoid リンパ球系幹細胞 stem cell CD10 CD34 CD38 CD117 IL-3 Self renewal 自己複製 IFN-γ Self renewal 自己複製 IL-3 IL-4 IL-6 IL-7 cell BB細胞 progenitor 前駆細胞 CD10 CD24 CD34 CD79a CD79b CD10 CD19 CD20 CD24 CD79a CD79b Pax5 Intermediate 中間BBcell 細胞 Mature CD19 CD20 CD23 CD24 CD79a CD79b Pax5 成熟 B 細胞 B cell IL-2 IL-15 T cell progenitor T 細胞前駆細胞 CD2 CD3 CD4 CD5 CD7 CD8 CD38 NK細胞 cell NK IL-2 IFN-γ Tc 細胞 cell Tc IL-2 IL-4 IL-7 CD8 CD28 CD95L Granzyme TCR ThO Cells 細胞 CD2 ThO CD3 CD4 CD5 CD6 CD7 CD8 CD26 CD38 CD45RO IL-27 IFN-α IL-12 IL-23 IL-4 IL-15 IL-25 CD2 CD7 CD8 CD11b CD16a CD26 CD56 CD57 CD69 CD94 IL-2RB NKG2D TGF-β IL-23 IL-6 Th1 Th2 Th17 NKT Treg CD3 CD4 CD26 CXCR3 CCR5 IL-12R IL-18R TCR CD3 CD4 CD30 CCR4 CCR8 CXCR4 TCR CD3 CD4 TCR IL-12R IL-23R CD28 NK1.1 CD1d CD16 CD56 Granzyme TCRα/β CD3 CD4 CD25 FoxP3 TCR Activated B cell 活性化 B 細胞 CD25 CD30 CD80 CD86 CD126 IL-6 Plasma cell 形質細胞 CD28 CD38 CD138 IL-6R 5 www.invitrogen.jp 免疫学 ヒトおよびマウス細胞分離用 Dynabeads サンプル調製および分離のステップが最終的な結果を極めて大 きく左右することは周知のとおりです。実験からリスクを排除 A し、細胞集団を健康・純粋に保ち生存させられるような方法を 採用しなければなりません。Dynabeads® と DynaMag™ マグ ネットならすべてが解決します（図 2）。1 本のチューブ内で分 離でき、操作ステップが少なく（図 3）、カラムを使用する必 要はありません。Dynabeads® テクノロジーによって変動性が 低下し、確かな再現性が得られます。 B チューブベースの細胞分離 細胞分離をこれよりも簡単に行なうことは不可能でしょう。 Dynabeads® を出発サンプルに添加してインキュベートし、マ グネットを近づけるだけで、細胞がチューブの壁へ引き寄せら れます。細胞はカラムを通るストレスにさらされることがない ため、分離方法によって結果が変動または変化するリスクを排 除できます。 図2 新製品のマグネットにより、細胞を効率的に分離できます。 DynaMag -15（A） およびDynaMag -50（B）マグネットは、強力な磁力と柔軟でスマートな人間工学的デ ザインを兼ね備えています。傾斜しているのでピペッティング時にひじを動かさず に済み、見やすく高い操作性が得られます。 ネガティブセレクション Negative isolation Untouched cells ビーズに結合しなかった細胞 �����������® ・Dynabeads Untouched™ products Untouched 製品 �����������® ・Dynabeads negative isolation kits ネガティブセレクションキット ・Dynabeads ® FlowComp ����������� ・製品 FlowComp™ products ・Dynabeads �����������® positive isolation kits ・ポジティブセレクションキット Positive isolation ポジティブセレクション ® Dynabeads を出発 Incubate Dynabeads サンプル中の細胞と一 with the cells in your starting sample 緒にインキュベートし ます ビーズに結合した細胞 Use magnet to separate をマグネットで分離し bead-bound cells ます 上 清 を 新supernatant しいチュー Transfer ブに移します to a new tube Release cells 細胞の離脱 ビーズフリーの細胞 Bead-free cells 図3 チューブベースの細胞分離法により、カラムを通るストレスが細胞にかかりません。Dynabeads はマグネットで固定可能な懸濁性固体担体として働きます。ポジティブセレクシ ョン法またはネガティブセレクション法をお選びいただけば、分離を簡単かつ効率的に行なうことができ、スケール変更も容易です。 Dynabeads 6 は日本国内では株式会社ベリタスからの販売になります。www.veritastk.com/ A 1,000 細胞除去 細胞除去では、Dynabeads® が約 99 ％の効率で混合細胞サン 750 Count 細胞数 プルから特定の種類の不要細胞を除去します。不要細胞が除去 P2 500 された上清（ターゲット細胞が含まれています）を回収して、 その後のアッセイに使用します。ビーズに結合しているポジ 250 0 ティブ分離されたターゲット細胞は、ビーズから離脱させる必 102 103 104 105 CD4 FITC-A 700 B 細胞の活性化と増殖 600 Count 細胞数 500 Dynabeads® 細胞増殖用製品は CD3/TCR と CD28 に同時にシ 400 グナルをもたらすことにより、抗原提示細胞（APC）からの in 300 vivo における細胞の活性化を模倣しています（図 5）。この効 200 率的なテクノロジーにより、ヒトやマウス T 細胞の特異的な活 100 0 要のない分子アプリケーションに使用することも可能です。 性化と増殖が可能になります。増殖後のビーズフリーの細胞は 102 104 103 105 CD4 図4 Dynabeads を用いるポジティブ分離法およびネガティブ分離法によっ て純度の高い細胞が得られます。Dynabeads® FlowComp Human CD4を 用いると、高純度のヒトCD4 T 細胞をポジティブ分離できます（ A ）。また、 Dynabeads® Untouched Human CD4 T Cellsを用いると、ネガティブ分 離法によって高純度のヒトCD4 T 細胞を分離できます（B）。 機能特性を維持し、APC やフィーダー細胞の培養を維持する必 要なしに再刺激できます。この他にも、刺激時間および強度に 対する馴化が容易である、たった 14 日間で最大 3,000 倍まで 増殖する、刺激後の細胞の機能、サイトカインプロファイルや 細胞のレパートリーが in vivo の環境を反映するなどといった 利点があります。 細胞分離法を選択する アプリケーションに基づき、ポジティブ細胞分離用製品、ネガ ティブ細胞分離用製品、細胞除去用製品のいずれかを選択して ください。 ポジティブ細胞分離 ポジティブ細胞分離では Dynabeads® がターゲット細胞に結合 生体内（ 樹状細胞 ） 休止 T 細胞 活性化 T 細胞 し、ビーズと細胞の複合体がマグネットに引き寄せられます（図 3、図 4A）。上清を捨てると、サンプル中には純粋なターゲッ ト細胞が残ります。ビーズは革新的な FlowComp ™ テクノロ ジーや従来の DETACHa-BEAD ™ 離脱メカニズムにより簡単に 除去できます。ポジティブ分離されたビーズフリーの T 細胞 増殖プラットフォーム ビーズ 抗 CD28 休止 T 細胞 活性化 T 細胞 はフローサイトメトリーや細胞ベースのアッセイに適していま す。 抗 CD3 ネガティブ細胞分離 ネガティブ細胞分離では Dynabeads® が不要細胞をすべて追い 出します（図 3） 。結合しなかったビーズフリーのターゲット 図5 一貫した信頼性の高いT 細胞の増殖。Dynabeads T 細胞増殖用製品はin vivoに おけるT 細胞と抗原提示細胞（APC）の相互作用を模倣するための簡単なソリューショ ンで、APC上に存在するCD3およびCD28という2種類の活性化シグナルをAPCと同じサ イズの三次元ビーズに結合して利用しています。 細胞がサンプル中に残るため、フローサイトメーターによる直 接分析やあらゆる機能アッセイにそのまま利用することができ ます（図 4B） 。 7 www.invitrogen.jp 免疫学 Ordering information 製品名 Methodology サイズ カタログ番号 Human cells Dynabeads® Human DC Enrichment Kit Negative selection (only enrichment) 1 kit 113-08D Dynabeads® Untouched™ Human NK Cells Negative selection 1 kit 113-49D Dynabeads® Untouched™ Human Monocytes Negative selection 1 kit 113-50D Dynal® CD34 Progenitor Cell Selection System Positive isolation with removal of beads and antibody (DETACHaBEAD®) 5 mL 113-01D Dynabeads® Biotin Binder Depletion/negative selection 5 mL 110-47 Dynabeads® FlowComp™ Flexi Positive isolation with removal of beads + antibody-conjugation kit 1 kit 110-61D Dynabeads® Untouched™ Human B Cells Negative isolation 1 kit 113-51D Dynabeads® Untouched™ Human T Cells Negative isolation 2 x 5 mL 113-44D Dynabeads® CD2 Pan T Depletion 5 mL 111-59D Dynabeads® CD3 Depletion 5 mL 111-51D Dynabeads® FlowComp™ Human CD3 Positive isolation 3 mL 113-65D Dynabeads® CD25 Depletion 5 mL 111-57D Dynabeads® FlowComp™ Human CD4 Positive isolation 3 mL 113-61D Dynal® CD4 Positive Isolation Kit Positive isolation 5 mL 113-31D Dynabeads® Untouched™ Human CD4 T Cells Negative isolation 2 x 5 mL 113-46D Dynabeads® CD4 Depletion 5 mL 111-45D Dynal® T4 Quant Positive isolation 2 mL 113-21D Dynabeads® Regulatory CD4+CD25+ T Cell Kit Positive isolation 2 x 5 mL 113-63D Dynabeads® FlowComp™ Human CD8 Positive isolation 3 mL 113-62D Dynal® CD8 Positive Isolation Kit Positive isolation 5 mL 113-33D Dynabeads® Untouched™ Human CD8 T Cells Negative isolation 2 x 5 mL 113-48D Dynabeads® CD8 Depletion 5 mL 111-47D Dynabeads®CD3/CD28 Human T-Activator T cell expansion 0.4 mL 111-61D Dynabeads® CD3/CD28 Human T-Activator T cell expansion 2 mL 111-31D Dynabeads® CD3/CD28 Human T-Activator T cell expansion 10 mL 111-32D Dynabeads® Human Treg Expander Treg cell expansion 2 mL 111-29D Dynabeads® CD3/CD28 Preclinical T cell expansion 10 mL 111-41D Dynabeads® ClinExVivo™ CD3/CD28 (formerly Xcyte™ Dynabeads®) Clinical-grade T cell expansion 10 mL 402-03D Mouse T cells Dynal® Mouse T Cell Negative Isolation Kit Negative isolation 2 x 10 mL 114-13D Dynabeads® Mouse Pan T (Thy1.2) Depletion 5 mL 114-43D Dynabeads® FlowComp™ Mouse Pan T (CD90.2) Positive isolation 3 mL 114-65D Dynabeads® FlowComp™ Mouse CD4 Positive isolation 3 mL 114-61D Dynal® Mouse CD4 Negative Isolation Kit Negative isolation 2 x 10 mL 114-15D Dynabeads® Mouse CD4 (L3T4) Depletion 5 mL 114-45D Dynabeads® FlowComp™ Mouse CD4+CD25+ Treg Cells Positive isolation 2 x 10 mL 114-63D Dynabeads® FlowComp™ Mouse CD8 Positive isolation 3 mL 114-62D Dynal® Mouse CD8 Negative Isolation Kit Negative isolation 2 x 10 mL 114-17D Dynabeads® Mouse CD8 (Lyt 2) Depletion 5 mL 114-47D Dynabeads® Mouse CD3/CD28 Mouse T-Activator T cell expansion 0.4 mL 114-56D Dynabeads® Mouse CD3/CD28 Mouse T-Activator T cell expansion 2 mL 114-52D Dynabeads® Mouse CD3/CD28 Mouse T-Activator T cell expansion 10 mL 114-53D DynaMag™-15 Magnet—Holds 4 standard 15 mL tubes or 4 x 5 mL tubes Magnetic separation 1 unit 123-01D DynaMag™-50 Magnet—Holds 2 x 50 mL tubes (5–50 mL) Magnetic separation 1 unit 123-02D Magnets 8 Dynabeads は日本国内では株式会社ベリタスからの販売になります。www.veritastk.com/ 本カタログ記載のカタログ番号は、株式会社ベリタスのカタログ番号とは異なりますのでご注意ください。 GIBCO® OpTmizer ™ T Cell Expansion SFM GMP ガイドライン下で製造された T 細胞培養専用の無血清培 地である OpTmizer SFM を使用すれば、より健康な T 細胞 を迅速かつ簡単に培養できます。OpTmizer 培地はヒト血清 Viable cell density (xt 106 cells/mL) 生存細胞密度︵ アルブミン以外のタンパク質を含有しないケミカリー・ディ ファインド培地で、in vitro におけるさまざまな活性化・増殖 条件下（遺伝子改変を伴うプロトコールを含みます）でのヒト T 細胞の増殖・培養用培地として特別に調製されています。 10 ％ の ヒ ト 血 清 を 添 加 す る 必 要 が あ り ま す。 こ れ に 対 し、 OpTmizer 培地はヒト血清非存在下（図 6）や低血清濃度下（図 7）でも速やかな増殖、高い生存率や細胞収率といった最適な （図 7） 。研究者が同様に重視する点として、OpTmizer 培地 を使用すると細胞が希望する機能を維持します（図 8） 。 濃度︵ ize r™ rCo 社® O pT m el lg C Th er ap St eu em tic lin s, S e社 In c. Lo nz a XVI VOL ™社 hj Ain 社5 6̶1 2 0 Ko Ko hAj 社 in ̶ 55１ 1 75 図6 いろいろな培地中における無血清下でのT 細胞の増殖性と生存率の比較。T 細胞 を活性化および増殖させるためにDynabeads® ClinExVivo CD3/CD28ビーズを使用 し、6ウェルのプレート中で培養しました。細胞密度が1 10 ⁶/ml以上に達したとき に培養液を分け、T 細胞の密度が 0.5∼1 10 ⁶ cell/mlとなるように希釈しまし た。細胞の生存率はVi-CELL 細胞生存率分析装置を用いて評価しました。 10,000 0 er 1 20,000 Th 2 80 30,000 h 3 85 40,000 5% jinA 社 5 5̶ se％血61 2 ru 清 + m 4 50,000 Ko 90 Concentration (pg/mL) T cell viability (%) 5 T cell density (× 106 cells/ml) 6 細胞生存率︵％︶ T 密度 Density IFN-γ 60,000 ︶ pg/ml 生存率 Viability 95 OpTmizer™ + 2％血清 2% serum GM-CSF 70,000 7 OpTmizer™ 図 7 Wave Bioreactor （ウェーブバイオリアクター）システム内におけるいろいろな培 地中での T 細胞の増殖（血清添加または非添加条件下） 。PBMC を解凍し、ClinExVivo CD3/CD28 T 細胞増殖ビーズと CD3 T 細胞の比率が 3：1 となるように混合しました。 ビーズに結合した T 細胞をマグネットによって濃縮し、IL-2 含有培地および 2％ヒト血 清含有培地、5％ヒト血清含有培地または血清不含培地中に懸濁して、5 日目に細胞 を Wave Bioreactor® 培養バッグに移しました。細胞の表現型（CD3、CD4、CD8） と活性化マーカーの発現（CD25、CD154）を分析しました。また、上清を回収してサ イトカイン（IFN- γ）の分析を行ないました。生細胞数が細胞増殖のカイネティクスお よび培養細胞密度に影響しました。 80,000 100 L 社 S 社 Lonza X-VIVO™ Stemline ＋ 5serum ％血清 Therapeutics, Inc. + 5% O pT m 2% ize 2％s r™ e血r + u清m クター）システム内で非常に優れたパフォーマンスを示します 0 O pT m ize r™ SFM は Wave Bioreactor®（ウェーブバイオリア 5 5% ellg rC s5e％血o ®社 ru 清 + m OpTmizer 10 er 血 + um清 のヒト血清を添加するとさらなるパフォーマンスを示します。 20 C た無血清 OpTmizer 培地と同等の効率性を示し、わずか 2 ％ 日目0 0Day 日目7 7Day 日目 10 Day 10 ap S eu te tic m l 2% s, 2I ineS n％ 社 Lo se c血. 清 r nz um + a XVI 5% VO s5％ ™L 社 培養結果が得られます。その上、最大で 5％のヒト血清を加え 25 15 ︶ 10⁶ cell/ml 他 社 の T 細 胞 用 培 地 は、 希 望 す る 結 果 を 得 る た め に 5 ∼ 30 図 8 いろいろな培地中でのT 細胞によるサイトカインの発現（血清添加または非添 加条件下）。T 細胞を活性化および増殖させるためにDynabeads® ClinExVivo CD3/ CD28ビーズを使用しました。細胞密度が1 10 ⁶/ml以上に達したときに培養液を 分け、T 細胞の密度が 0.5∼1 10 ⁶cell/mlとなるように希釈しました。0、4 、7お よび10日目の培養上清を用いてサイトカインの機能プロファイルを評価しまし た（4日目のデータを表示しています）。 9 www.invitrogen.jp 免疫学 OpTmizer 培地は無血清条件下や低血清条件下で優れたパ フォーマンスを示します。動物由来成分不含（ヒト血清アルブ ミンを除く）ですので、研究から前臨床開発への移行が容易に なります。血清不含培地なので、規制要件の一部が簡略化でき る可能性もあります。OpTmizer 培地の使用により、操作効 率の改善、サイクル回数の減少、生産性の向上、細胞製品の製 Ordering information 製品名 サイズ カタログ番号 OpTmizer™ T Cell Expansion SFM Kit (Bottle) 1L A1048501 OpTmizer™ T Cell Expansion SFM Kit (Bottle) 500 mL 0080022SA OpTmizer™ T Cell Expansion SFM Kit (Bag) 1L 0080022SC OpTmizer™ T Cell Expansion SFM Kit (Bag) 5L 0080022SD 造コスト削減が可能になります。 OpTmizer T Cell Expansion SFM および関連製品のご注文や 詳細情報については、www.invitrogen.com/optmizer をご覧 ください。 GIBCO® 無血清 AIM V ® 培地 AIM V 培地は最初に市販された T 細胞増殖用の無血清ケミカ AIM V 培地は、養子免疫療法でヒト血清添加培地の代わり リー・ディファインド培地で、cGMP に準拠して製造されてい にご使用いただけます*。ex vivo におけるインターロイキン 2 ます。AIM V 培地は FDA 承認（510(K)）を受けた唯一の治療 （IL-2）添加後のリンホカイン活性化キラー細胞（LAK 細胞）の グレードの T 細胞用培地で、米国では臨床診断や養子免疫療法 活性化に AIM V 培地が有効であることが証明されています。 に使用されています*。 ヒト血清不含の AIM V 培地中で培養した T 細胞は、血清含有 80 Relative lysis (%) 相対溶解率︵％︶ 70 RMPI 1640 中で培養したリンパ球と同等の LAK 細胞溶解活性 ® Medium AIM AIMVV® 培地 を示しました（図 9）。 1640 with 2% human ％ヒト血清含有 2RPMI RPMI 1640serum 60 AIM V 培地は現在 T 細胞を取り扱う科学者や臨床研究者、臨 50 床医に最も広く使用されている無血清培地です。AIM V 培地 40 30 の用途は、最初の目的であった LAK 細胞の研究から、ほとん 20 どすべての主要なヒトリンパ球の培養のほか、形質転換リンパ 10 2:1 4:1 8:1 16:1 エフェクター／ターゲット比 Effector target 図9 AIM V 培地およびヒト血清含有培地によるLAK 細胞溶解活性の比較。 1,000 unit/mlのIL-2と2％ヒト血清（AB型）を添加したRMPI 1640中でヒト末梢 血リンパ球（PBL）を1 10 ⁶ cell/mlで培養しました。また、600 unit/mlのIL-2を 添加した無血清AIM V®培地中でもヒトPBLを2 10 ⁶ cell/mlで培養しました。 Daudi細胞をターゲットとして、フラスコ2本を用いて3反複で行なった測定結 果の平均値を示しています。 10 球系（ヒトおよびマウス）、接着細胞（ヒト繊維芽細胞など） 、 ヒト単核球、樹状細胞などのヒトリンパ球関連細胞、ヒト食細 胞（マクロファージ、肥満細胞など）に広がっています。 AIM V 培地および関連製品のご注文や詳細情報については、 www.invitrogen.com/aimv をご覧ください。 ＊ AIM™培地は米国 FDA 承認の基、米国内では診断に利用できますが、日本においては薬事法に基づく承認は得ておりません。 よって診断を目的として利用することはできません。 References 1. 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Ordering information 製品名 サイズ カタログ番号 AIM V® Medium, liquid (bottle) 1L 0870112DK AIM V® Medium, liquid (bag) 10 L 0870112BK Therapeutic grade Research grade AIM V® Medium, liquid 500 mL 12055091 AIM V® Medium, liquid, contains AlbuMAX® (BSA) substituted for HSA 500 mL 31035025 AIM V® Medium, liquid 1L 12055083 11 www.invitrogen.jp 免疫学 GIBCO®Macrophage-SFM ヒト末梢血マクロファージおよび単球の無血清培養では GIBCO® GIBCO® Macrophage-SFM は無血清培地なので、適切な生体 Macrophage-SFM の使用によって、細胞の増殖を妨げること 応答修飾因子の存在下におけるマクロファージの維持と機能の なく、より多くの細胞が得られます。 一貫性が改善されます。図 10 および図 11 に示すように、単 GIBCO® Macrophage-SFM は成分が明らかでエンドトキシン濃 球を顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）含有 度が非常に低い（1.0 E.U./ml 未満）ため、比較的ディファイン 培地中でインキュベートすると、不含培地使用時よりも単球の ドな低バックグラウンド環境におけるマクロファージ／単球の 生存性が長期間維持されます。GIBCO® Macrophage-SFM に 研究が可能となり、添加したアクチベーターの「純粋な作用」 GM-CSF やリポ多糖類などの生体応答修飾因子を添加すると、 を確実に観察できるほか、マクロファージ分泌産物の分離や特 ＜次ページに続く＞ 性評価が容易となる可能性もあります。 1.0 1 日目 1Day 日目 3Day 3 日目 6Day 6 OD 595 nm 0.8 0.6 0.4 0.2 0 RPMI-1640+10% 500 U/mL MAC-SFM 500 U/mL RPMI-1640+10% 0 U/mL MAC-SFM 0 U/mL 図10 末梢血単球増殖の経時的変化。10％FBS含有RPMI 1640およびMacrophageSFM（MAC-SFM）に組換えヒトGM-CSFを添加して末梢血単球を1∼ 6日間培養し、増 殖性をGM-CSF 不含培地で培養した場合と比較しました。単球を分離し、MTT（ 3[4,5-ジメチルチアゾール -2- イル]-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロマイド）ア ッセイにより活性を測定しました。GM-CSFを添加した培地中でインキュベー トした単球は6日間にわたり増殖しましたが、GM-CSF 不含培地中では細胞の 生存率が低下しました。 図11 GM-CSFがMacrophage-SFM中でマクロファージの増殖に及ぼす影響。マクロ ファージをrhGM-CSF（10U/ml）存在下で45日間インキュベートしました。GIBCO ® Macrophage-SFMにGM-CSFを添加すると、マクロファージの増殖が長期間 にわたり促進されました。 12 図12 GIBCO Macrophage-SFM存在下でインキュベートしたFITC標識ラテックスビ ーズのヒト末梢血単球（PBMC）による食作用。Macrophage-SFM中で培養スライドガ ラスにPBMCを1時間かけて付着させた後で、付着しなかった細胞を除去しました。新し い培地中にFITC標識ビーズを添加して37 ℃で30 分間インキュベートした後、ス ライドガラスをPBS中ですすぎ、蛍光顕微鏡下で観察しました。MacrophageSFM中でインキュベートした単球／マクロファージは、ヒト血清含有培地中で インキュベートした細胞と同等の食細胞作用を示します。 図13 GIBCO Macrophage-SFM中でインキュベートし、ライト染色したヒト単球。 Macrophage-SFM中でヒトPBMCを培養スライドガラスに1∼2時間かけて付着させた 後、細胞をCa² /Mg² 不含D-PBSで洗浄し、ライト染色液を添加しました。接着細胞 の大部分がPBMCの形態を示しました。 ＜前ページ続き＞ References FBS やヒト血清を添加した RPMI 1640 の代わりとして単球／ 1. McNally AK et al. (2002) β1 and β2 integrins mediate adhesion during macrophage fusion and multinucleated foreign body giant cell formation. Am J Pathol 160:621–630. 13）。GIBCO® Macrophage-SFM は GM-CSF 存在下で血清添加 2. Zang X et al. (2002) Homologues of human macrophage migration inhibitory factor from a parasitic nematode. J Biol Chem 277:44261–44267. 培地と同等のパフォーマンスを示し（図 13）、成分が明らかで 3. ない血清を添加する必要はありません。 Doxey D et al. (1998) Diabetes-induced impairment of macrophage cytokine release in a rat model: potential role of serum lipids. Life Sciences 63:1127–1136. 4. Hasty DL et al. (2006) Monocyte and macrophage activation by lipoteichoic acid is independent of alanine and is potentiated by hemoglobin. J Immunol 176:5567–5576. 5. Makkonen J et al. (2007) Increased expression of the macrophage markers and of 11β-HSD-1 in subcutaneous adipose tissue, but not in cultured monocytederived macrophages, is associated with liver fat in human obesity. Intl J Obesity 31:1617–1625. マクロファージの培養に使用していただけます（図 12、図 GIBCO® Macrophage-SFM および関連製品のご注文や詳細情報 については、www.invitrogen.com/macrophagesfm をご覧く ださい。 Ordering information 製品名 サイズ カタログ番号 Macrophage-SFM, (1X), Liquid (Bottle) 500 mL 12065074 造血幹細胞培養用無血清培地 StemPro®-34 SFM 造血幹細胞（HSC）は自己複製と造血系の再構築が可能であり、 または新生児臍帯血由来造血細胞の研究に使用できます。無血 強力な化学療法を受けているまたは移植を必要としている特定 清培地であるため、培地中に添加する造血成長因子やその他の 疾患の患者にとって非常に高い治療価値があります。 サイトカインの組み合わせによって細胞の増殖と分化を制御で 培養系に 1 つ以上の動物血清を添加しなければならないことが きます。 HSC 研究の主な障害となっていました。血清の細胞特異的増殖 StemPro®-34 SFM の主な用途は以下の通りです。 促進能はロット間で大きく変動します。 → HSC の加工と処理（骨髄、末梢血または新生児臍帯血由来） StemPro®-34 SFM は、培地中でのヒト造血細胞の成長を促進 → サイトカインによる増殖と分化 するように開発された無血清培地（SFM）です。StemPro®-34 → 細胞遺伝学的分析 SFM は厳密な cGMP ガイドライン下でヒト由来成分、ヒト組 → 遺伝子治療 換え体または合成成分を用いて製造されており、骨髄、末梢血 13 www.invitrogen.jp 免疫学 StemPro® -34 SFM はヒト HSC（CD34 ） の増殖性を改善します ては、www.invitrogen.com/stempro34 をご覧ください。 StemPro®-34 SFM は、 基 礎 液 体 培 地 と 凍 結 サ プ リ メ ン ト （StemPro Nutrient Supplement、使用時に添加）のセットです。 培地中で増殖した HSC は臨床および研究目的で利用されます。 図 14 は、StemPro®-34 SFM 使用時の細胞増殖性が従来の培地 （20％ FBS 含有 IMDM）よりも優れていることを示しています。 References 1. Sandstrom CE et al. (1996) Comparison of whole serum-deprived media for ex vivo expansion of hematopoietic progenitor cells from cord blood and mobilized peripheral blood mononuclear cells. J Hematother 5:461–473. 2. Carotta S (2004) Directed differentiation and mass cultivation of pure erythroid progenitors from mouse embryonic stem cells. Blood 104:1873–1880. 3. に増加し、総細胞数が 22 倍近くまで増加することが示されてい Kouskoff V (2005) Sequential development of hematopoietic and cardiac mesoderm during embryonic stem cell differentiation. Proc Natl Acad Sci U S A 102:13170–13175. 4. ます。20％ FBS 含有 IMDM を使用した場合には、CD34 細胞数 Ando K et al. (2006) Direct evidence for ex vivo expansion of human hematopoietic stem cells. Blood 107:3371–3377. 5. Kanatsu-Shinohara M et al. (2003) Long-term proliferation in culture and germline transmission of mouse male germline stem cells. Biol Reprod 69:612–616. 6. Rookmaaker MB et al. 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StemPro®-34 SFM 中では細胞の倍加時間が 43 時間でしたが、 20％ FBS 含有 IMDM 中では倍加時間が 72 時間でした。 細胞増殖中の CD34 細胞群の変化についても検討しました。図 15 では、StemPro®-34 SFM の使用によって CD34 細胞群が 3 倍 が 3％減少し、総細胞数は 13 倍近くまで増加しました。StemPro® -34 SFM はマウス精原幹細胞の長期培養にも使用されています。 HSC の細胞密度を増加させるため 無血清培地をご使用ください StemPro®-34 SFM および関連製品のご注文や詳細情報につい Ordering information 製品名 サイズ カタログ番号 StemPro®-34 SFM 500 mL 10639-011 16 StemPro®-34 14 IMDM + 20% FBS Cell number (x 104) 12 10 8 2 ︶ 10⁵ 0 2 4 6 8 10 12 Days in culture 培養日数 図 14 StemPro -34 SFM の使用により、CD34 細胞を多く含む集団からのサイトカイ ンによる正常骨髄細胞の増殖性が 20％ FBS 含有 IMDM 使用時と比べて 2 倍近く増加。 24 ウェルプレートに CD34 骨髄細胞を初期密度 2 10⁴ cell/well となるよう播種しま した。ヒト組換え SCF（100 ng/ml） 、IL-3（50 ng/ml）および GM-CSF（25 ng/ ml）を StemPro ® -34 SFM または 20％ FBS 含有 IMDM をセットアップ時に添 加しました。培養 0、1、2、3、5、6、7、10 日目に細胞を回収し、血球計数 器とトリパンブルー染色を用いて生細胞数を計測しました。 14 総細胞数 Total cells 細胞数 CD34 CD34+ cells 75 50 ︶ 10⁴ 6 4 0 100 細胞数︵ Cells per mL (x 105) あたりの細胞数︵ 1 ml 25 0 日目0 0Day ＝10) （(nn = 10） StemPro®-34 SFM IMDM medium （6 Day ∼ 8 6–8 日目） + 20% FBS (n = 18) Day 6–8 (n = 10) 図 15 StemPro®-34 SFM の使用により、サイトカインによる CD34 細胞の増殖性が 20％ FBS 含有 IMDM 使用時と比べて 282％増加。10 名のドナーから採取した CD34 骨髄 細胞を 24 ウェルの平底プレートに細胞密度 2 10⁴/ml でそれぞれ播種し、6 ∼ 8 時 間培養しました。StemPro®-34 SFM または 20％ FBS 含有 IMDM 培地には同じ 増 殖 因 子（SCF［100 ng/ml］、IL-3［50 ng/ml］ お よ び GM-CSF［25 ng/ ml］）を添加しました。総細胞数を計測し、CD34 細胞数は 0 および 6 ∼ 8 日目に FACS 分析によって決定しました。 細胞遺伝学用培地 ─ 一貫性のある完全培地 GIBCO® の MarrowMAX 、AmnioMAX 、PB-MAX 培地につ および解凍後の有効期限は長く、凍結状態の MarrowMAX 培 いては独立した研究所で特別に調製および試験を行なってお 地は 18 ヵ月間保証、解凍後は 4℃で 2 ヵ月間保証されます。 り、骨髄細胞、羊水細胞、絨毛膜絨毛標本や末梢血リンパ球の MarrowMAX 培地は市販の巨細胞腫（GCT）馴化培地よりもは 分析に関する臨床プロトコールにおいて明白で再現可能な結果 。ロット間で性能は一貫しており （図 るかに優れています （図 16） を得られます。 17）、分裂係数は高く、染色体の形態も優れています（図 18）。 最大限に活用する必要があります。MarrowMAX 骨髄細胞 用培地をご使用になれば、これを迅速かつ容易に行なえます。 MarrowMAX 培地は、血清、ヒト間質馴化培地、抗生物質と L- グルタミンがすべて添加された、そのまま使用可能な調製済 みの完全培地です。他社の骨髄細胞用培地に必要な調製段階と サプリメント添加を省くことで時間と労力を削減し、汚染リス 1.75 1.50 BrdU uptake 骨髄吸引液など採取が難しいサンプルについては、それらを 2.00 取り込み量 BrdU 優れた形態と高い分析可能細胞濃度 MarrowMAX ™骨髄細胞用培地 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 0 1 2 3 4 図 17 M a r r o w M A X ™ 培 地 の 一貫 性 。正 常単 核 細 胞をロットの 異 なる 4 つの MarrowMAX™培地に細胞密度1 10⁵ cell/mlで播種し、BrdU取り込み量を405 nmの吸 光度により測定しました。ドナー10名についての平均標準誤差を示しています。 クを低下させることができます。MarrowMAX 培地を解凍前 スライドあたりの有糸分裂細胞数 100 80 60 40 20 B2 M GG CC TTC GC T-CCM M A1 礎 B 基 MM aar r roro ww MM AAXX ™™ 0 a培s a地l Number of mitotic cells/slide 120 図 16 Mar rowMA X ™ 培 地の 優れた性 能 。馴化 培 地不含の基 礎 培 地 、 MarrowMAX™培地、A社の培地（GCT-CM A）、B社の培地（GCT-CM B）を用 いて細胞を培養しました（A社およびB社の培地にはGCT馴化培地が含まれてい ます）。プレーティングから24時間後に有糸分裂細胞数を評価しました。 図18 GIBCO MarrowMAX™ 骨髄細胞用培地を使用すると、形態が優れた染色体が 得られます。MarrowMAX™培地中で24時間培養した正常骨髄細胞の染色体をばらして Gバンド分染法により分析しました。 15 www.invitrogen.jp 免疫学 AmnioMAX ™培地 羊水細胞培養のためのゴールドスタンダード̶結果が 1 日 早く得られます る必要はありません。 AmnioMAX ™ C-100 培地はヒト羊水検体と絨毛膜絨毛標本の たプレーティング密度をもたらします（図 20）。初代羊水細胞 体外診断用に開発されました。AmnioMAX ™培地の組成は、初 に対する AmnioMAX ™培地の性能を図 21 に示しています。以 代ヒト羊水細胞を用いたパフォーマンステストにより最適化さ 上の結果は、＜次ページに続く＞ AmnioMAX ™培地は羊水細胞の増殖性を維持し（図 19）、優れ 細胞接着性が高まるように最適化し、pH 安定性を向上させた 第二世代の AmnioMAX ™ -II 完全培地も提供しています。1 本 のボトルで構成される AmnioMAX ™ -II 培地は、抗生物質と増 殖促進因子を含む完全培地で、その他のサプリメントを添加す 3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 培養日数 Days in culture 6 7 8 図 19 AmnioMAX ™ 培地中で培養した羊水細胞の増殖曲線。AmnioMAX ™ 培地ま たは 20％ FBS 含有 MEM- α中で培養した二世代目羊水細胞の代表的な増殖曲線を示 しています。 各時点で細胞数を測定しました。2 サンプルの平均値を示しています。 5 3 2 1 0 60 Chang medium 50 40 30 20 10 0 AmnioMAX™ medium Chang medium (Lot 1) 1） 培地（ロット Chang Chang medium (Lot 2) 2） 培地（ロット Chang AmnioMAX™培地 medium AmnioMAX 40 30 20 10 0 図 21 初代羊水サンプルを用いた AmnioMAX ™ 培地の性能分析。対応するヒト羊水細 胞プールの対を並行培養し（n ＝ 10） 、AmnioMAX ™培地またはロットの異なる 2 種類の Chang 培地中でのin situ 培養開始から 6 日後のコロニーの増殖性と細胞遺伝学的分析 が可能かどうかを評価しました。 （A）得られたコロニーの総数、 （B）分析可能な コロニーの総数 C 200 180 160 Chang medium AmnioMAX™ medium 140 120 100 ︶ 10³ 4 Total cell number (×103) 6 B ︶ 10³ ︶ 10³ Total cell number (×103) 7 培地 AmnioMAX AmnioMAX™™medium 50 総細胞数︵ 8 培地 Chang Chang medium 総細胞数︵ 総細胞数︵ 9 40 10 A 60 Total cell number (×103) 5 4 ︶ 10⁴ Cell number (×104) 細胞数︵ 6 80 0 得られたコロニー数 MEM-α-20% FBS ％ FBS MEM- α＋ 20 7 培地（ロット Changmedium Chang (Lot 1) 1） 培地（ロット Chang (Lot 2) 2） Changmedium AmnioMAX™ medium AmnioMAX 培地 20 B AmnioMAX™ 培地 AmnioMAX ™medium Number of analyzable colonies の細胞遺伝学的分析も可能です。インビトロジェンではさらに 8 100 Number of obtainable colonies A 得られたコロニー数 強化するため診断時間が最短となる一方で、得られるコロニー れています。AmnioMAX ™培地はコロニーの増殖性を最大限に 80 60 40 20 0 図20 羊水細胞のプレーティング密度がAmnioMAX™ 培地の性能に及ぼす影響。初めて継代したヒト羊水細胞をAmnioMAX™ 培地中またはChang培地中で細胞密度が1ウェルあたり 100個（パネルA）、1,000個（パネルB）、5,000個（パネルC）となるよう培養しました。5日間の培養後に回収された総細胞数の平均（n＝6）を示しています。 16 ＜前ページの続き＞ 最適な RPMI ベースの完全培地です。PB-MAX ™ 核型分析用培 AmnioMAX ™培地中で培養したヒト羊水細胞は、他社の羊水細 地については性能試験および信頼性試験が行なわれており、そ 胞用培地使用時と比べて、コロニー数が約 22 ∼ 25％多く、細 のまま使用可能です。 胞遺伝学的分析が可能なコロニー数が 44 ∼ 80％多いことを示 KaryoMAX® コルセミド ® 溶液は細胞分裂中期で細胞周期を停 しています。さらに、AmnioMAX ™培地中で培養した初代羊水 止させるブロッキング試薬で、機能性試験が行なわれています。 細胞の分裂係数の平均は Chang 培地使用時と比べて有意に増 Hanks 平衡塩溶液（HBSS）またはリン酸バッファー塩（PBS） 。 加しました（図 22） で調製済みの KaryoMAX® を提供しています。KaryoMAX® ギ ムザ染色液は染色体の G バンド分染法用に最適です。Gurr バッ PB-MAX ™核型分析用培地および KaryoMAX® 核型分析用試薬 迅速な増殖と一貫した結果が得られるように最適化 ファー錠剤を使用すると、ギムザ染色用バッファー（pH 6.8） 1 L を簡便に調製できます。 細胞遺伝学用培地および関連製品のご注文や詳細情報について は、www.invitrogen.com/cyto をご覧ください。 培養時間および回収までの日数を短縮する PB-MAX ™核型分析 用培地と KaryoMAX® 核型分析用試薬の使用により、セットアッ プ時間を最小限に抑え、研究室の効率を最大限に向上させます。 PB-MAX ™核型分析用培地は、末梢血リンパ球の核型分析用に Number of mitotic events per 5,000 cells 細胞５０００個あたりの分裂回数 240 230 培地 Chang medium Chang AmnioMAX AmnioMAX™ 培地 medium 220 Ordering information 製品名 サイズ カタログ番号 MarrowMAX™ Bone Marrow Medium 100 mL 12260-0141 AmnioMAX™-II Complete Medium 100 mL 11269-0162 AmnioMAX™ C-100 Complete Medium 1 set 12558-0113 AmnioMAX™ C-100 Basal Medium, liquid 90 mL 17001-0824 450 mL 17001-0745 210 200 190 AmnioMAX™ C-100 Supplement, liquid 15 mL 12556-0156 75 mL 12556-0237 100 mL 12557-0138 500 mL 12557-0219 KaryoMAX® Colcemid® Solution, liquid (10 μg/mL), in HBSS 10 mL 15210-040 KaryoMAX® Colcemid® Solution, liquid (10 μg/mL), in PBS 10 mL 15212-01210 KaryoMAX® Giemsa Stain Stock Solution 100 mL 10092-01311 Gurr Buffer Tablets (pH 6.8) 50 x 1 L 10582-013 Phytohemagglutinin (M Form) (PHA), liquid 10 mL 10576-015 Potassium chloride solution, 0.075M 4 x 100 mL 10575-090 PB-MAX™ Karyotyping Medium 180 図22 AmnioMAX™ 培地とChang培地の分裂係数の比較。AmnioMAX™ 培地または Chang培地中で6日間in situ 培養した初代羊水細胞の相対的な分裂係数を求めました。 各培地について、細胞5000個あたりの分裂回数を計数しました。 17 www.invitrogen.jp 免疫学 イムノアッセイ 1 種類のタンパク質の測定にも複数のタン パク質の同時測定にも利用できるフレキ シビリティをお求めなら インビトロジェンの ELISA および Luminex ™試薬を 使用ください 細胞内または細胞外タンパク質を正確に定量するために、抗 体のペアを使用する 1 検体用（ELISA および phosphoELISA ™ キット）または複数検体用（Luminex® 試薬) のイムノアッセ イを幅広く提供しています。インビトロジェンが提供する高品 フォームを選択しても正確な測定と一貫した性能が得られま 質のイムノアッセイは、分泌されたサイトカインやケモカイ す。インビトロジェンの ELISA および Luminex® 試薬は相互に ンから細胞内リン酸化の変化まで、複雑な免疫系の機能分析 ベンチマークテストが行なわれているため、高い信頼性を保っ に役立ちます。インビトロジェンの ELISA および Luminex® 試 たままプラットフォームを容易に変更できます。免疫学的研究 薬 NIBSC スタンダードまたは公表されているモデル細胞系を 用試薬の詳細なポートフォリオについては、www.invitrogen. 用いてキャリブレーションされており、どのようなプラット com/immunoassays をご覧ください。 フローサイトメトリー用抗体 フローサイトメーターを最大限に活用 より多くの色と選択肢を 多色フローサイトメトリーは、異種細胞群のサブセット同定か らまれな事象の検出まで、複雑な細胞生物学的な疑問の解明に 活用できます。多重（higher-plex）多色フローサイトメトリー によって、各細胞に関するより多くの情報がより少ないサンプ ルを用いて短時間で明らかになります。機器がハイエンド型で も卓上型でも、お手持ちの装置を最大限に活用できる蛍光抗体 18 と試薬を業界で最も幅広く取り扱っています。インビトロジェ カー、サイトカイン、ケモカイン、増殖因子抗体のほか、アポトー ンは Molecular Probes® 蛍光検出テクノロジーをベースとして、 シスや細胞分化などの細胞プロセスに関与する主なターゲット フローサイトメトリーで使用できることを評価済みの極めて特 用のマーカーなどがございます。抗体標識シリーズの詳細につ 異的な 1 次蛍光抗体標識シリーズを提供しており、抗 CD マー いては、www.invitrogen.com/flowcytometry をご覧ください。 サイトカイン、ケモカインおよび増殖因子 より優れた活性、安定性、バリデーショ ンと価値を 実験を開始する前に、使用しているサイトカイン、ケモカイン 1.2 や増殖因子の活性がどのくらい高いかについて知っておく必要 1.1 があります。使用している試薬の生理活性が低ければ、適切な 1.0 ません。その結果として、汚染のリスクは高くなり、得られる 0.9 OD 反応が得られるために、より多くの試薬を使用しなければなり 0.8 0.7 結果は疑わしいものとなってしまいます。活性と純度が非常に 0.6 高い GIBCO® サイトカイン、ケモカインおよび増殖因子を使用 0.5 すれば、信頼性の高い免疫学的研究を行なうことができます。 0.4 生理活性と純度が高いので、得られる結果については高い信頼 性が保証されます（図 23）。GIBCO® サイトカイン、ケモカイ ンおよび増殖因子は ISO13485 の品質規格下で製造されていま す。また、GIBCO® の培地を用いてバリデーションを行なって ED50 (pg/ml) Invitrogen = 548.8 インビトロジェン製品＝ 548.8 他社製品＝ Competitor 6593.6 = 6593.6 1 101 102 103 104 105 106 SCF (pg/ml) 図23 インビトロジェンのタンパク質は他社製品よりも高い生理活性。MO7e細胞は他社 製の幹細胞因子（SCF）にも応答して増殖していますが、インビトロジェンのSCFの生理 活性は他社製SCFよりも高いことが示されています。 いるため、ばらつきを低下させ、信頼性の高い結果を得ること ができます。 用途につきましては、www.invitrogen.com/growthfactors を ご覧ください。 19 www.invitrogen.jp ※一部製品お問い合わせ先：株式会社ベリタス TEL：03-3593-3211 Web：http://www.veritastk.com/ ※研究用にのみ使用できます。掲載製品は日本において薬事法に基づく承認を得ておりません。よって、診断を目的として利用することはできません。 記載の社名および製品名は、弊社または各社の商標または登録商標です。©2010, Life Technologies Japan Ltd. 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