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1-5 T細胞分化過程におけるレトロウイルス感染と分化異
常の解析(X.共同利用研究 2.研究成果)
速水, 正憲; 伊吹, 謙太郎; 三宅, 在子; 竹村, 太地郎; 秋山,
尚志; 斎藤, 尚紀
霊長類研究所年報 (2005), 35: 91-92
2005-08-31
http://hdl.handle.net/2433/166175
Right
Type
Textversion
Departmental Bulletin Paper
publisher
Kyoto University
休息,探索.自己指向的動作,移動,社会交渉,その
のもっとも大きな調節機能は自己反応性の細胞 と括抗
他に区分 し.
ケージ個体は 1日9時間の観泰を9日間,
して,末梢性の自己免疫性応答を抑制す ることにある.
.
屋外個体は 1日3
0分の観察をエンリッチメン ト前後に
さらに,この亜集団は種々の感姓症やアレルギー疾患
0日間おこなった.その結果,ケージ個体は休息と
各3
においても.重要な調節性の役割を洪 じている.私共
自己指向的動作が全体の 80.
6%,屋外個体は休息と移
は,免疫生物学的 目的か ら,主にニホンザルを中心 と
動が 68.
1
%を占めた.ケージ個体は 68.
1
%を 1ヶ所で過
するマカク類における.この荘柴田の役割に注 目した.
ごし.屋外個体は高所で 73.
9%を過 ごし,様々な高さ
今回は,末梢血中の CD25+cD4十細胞の割合を,健常な
を利用 した.エンリッチメン ト前後で自己指向的動作
サルの末梢血と免疫系にゆらぎの生 じるよ うな状態の
は 5.
も%から 0%に消失 した.以上から,ケージ単独飼
サル末梢血の亜袋田を調べた.
育では活動性が低いこと,自己指向的動作は環境間で
大きく変化 し.心理的幸福の行動指標 とな りうること
方法 :抗体はベ ク トン ･デ ッキンソン杜p･
D 杜)
の CD4･
PE.CD25･
FI
TC ラベル抗体を用いた.サンプル
が示唆された.
は末梢血より採血 し.-バ リン処理血液 として.高速
1
3霊長類の潜伏感染 ウイルスの比較 と動態
遠心後,buf
&c
oa
tを採取,L1
2培地に懸濁 し.宅配便
にて.本学に輸送 した. リンパ球分離のために,この
石田貴文,セ-チャン ･ヴァンナラ (
東衷大
･理)
潜伏感染するウイルスは直接症状を呈さなくとも,
(
s
t
o
pa
q
ue1
.
07
7に塵屈 し,2,
0氾r
pm で 30分
懸濁液を Hi
遠心 し,中間層を採取 した.この層は 82%か ら 95% が
リンパ球であった.この細胞を l
mlに百万個になるよ
その感染が間接的に疾病の発症 と関わることが多く,
うに浮遊細胞液を作製 した.百万個の細胞を用いて,
それ らウイルスのモニタ リングは人猷問わず公衆衛生
du
a
l染色を行い,F
ACSCa
l
i
bu
r(
B･
D 社)
を用いて,プロ
学的に重要である.本研究では.常在 ウイルスの うち
ピジュム染色で FL3上の陽性細胞 として除外 して,チ
,1
)
γ-ルペスウイルス(
L
y
mph
o
c
T
y
Pt
O
V
t
'
r
u
s
)
を対象とし
ータ採取 と解析を行った.
霊長類各種におけるウイルス検出 ･ゲノム比較と2)宿
健常なニホンザルのこの亜集団の割合は, リンパ
主の健康指標 として細胞外ウイルスゲノムの検出をお
球中 0.
2から 1
.
5%で,人やマ ウスで報告 されている値
こなうための基礎研究を行った.r-ルペスウイルス
に近い と思われる.主に外傷などの疾患の場合,この
亜集団の割合が高 くなる個体もあったが,正常値内に
(
pr
ima
t
el
m phoc
y
r
y
pt
o
ir
v
uS
) の系統比較 とコアシーケ
ンス (
ウイルスの存続 ･病原性等に関わる普遍的配列)
収まる物 もあった.この亜免田の割合を上昇 させ る要
の同定のため,大型類人猿から新世界ザルまでを対象
因 との関連を見つけることは出来なかった.さらに,
とし採血 した.
この集団のサイ トカインプロファイルを調べるために,
霊長類 L
y
mph
o
c
T
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Pt
O
V
i
r
u
sのコアシーケンス検出用
PCRプライマーの設計をおこない. ヒト･類人猿 ･旧
この集団の精製を試みた.そこで,CD25+cD4+
蚕典団
を分離するキッ トを検討 したが,マカク類サルでは純
世界ザルのウイルスについて検出可能であることを確
皮,回収共に不十分であった.組織内での分布につい
認 した.このプライマーを用い既存の霊長類細胞株中
ては,現在検討中である.
の r-ルペスウイルス感染の有無 と塩基配列を調べた
ところ,意外にもヒ トウイルスの感典が多く見られた.
1
5T細胞分化過程におけるレ トロウイルス盛典 と分
健康指標 としての細胞外 ウイルスゲノムについては,
化異常の解析
チンパンジー血焚 ･唾液を用い リアルタイム P
CR法に
速水正鼠 伊吹謙太郎.三宅在子,
よってゲノムの有無 とコピー数を罪定する系を確立 し
た.
竹村太地郎.秋山尚志.斎藤尚紀 (
京都大 ･
ウイルス研 ･霊長類モデル研究領域)
昨年度に引き続き,レ トロウイルス感染の胸腺細
胞分化 ･増殖過程に及ぼす影響を,供与 された正常ア
1
･
4様々な疾病におけるマカク類サルの調節性 cD4細
カ ゲ ザ ル 胸 腺 (8 ケ 月 令 , 1 頭 ) と xe
no
ge
ni
c
胞塊団の変化 と機能
中垣和英,中村伸一朗 (日本獣医畜産大 ･獣
mo
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us
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e
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hy
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r
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qe伊TOC)s
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を用いて解析 した.FTOCs
ys
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mは i
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ma
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u
r
et
hm
y oc
y
t
e
医),後藤俊二 (
京都大 ･霊長研)
cD2
5+cD4+細胞サブセ ッ トは免疫応答の調節機
能を有する細胞亜典団としてしられている.この集団
/
4･
/
8
･
)か ら ma
t
ur
et
hy
m ocyt
e(
CD3
+/
4
+/
8
+)に分
(
CD3･
化 ･増殖させ る事の出来る臓器培養系であ り, ウイル
スを加えない場合には,
培養 1
4日目で約 75%が ma
t
ur
e
-91-
h
ty
m oc
yt
e
L
に分化 ･増殖 した.一方,強毒 ･弱毒サル/
ッ トに比べて,01年 ･03′
年キ ッ トは発色がやや不良で
ヒ ト免疫不全キメラウイルス(
S
f
HV)
をこの培養系に加
oD値が低めとなったが,診断キッ トの根幹である r
陽
えると,それぞれ 38.
1
%,44.
2% とな り,分化が抑制 さ
性 ･陰性の判定｣の点では,長崎で行った診断結果(
追
れ ることがわかった.この ことは, ウイルスがその病
99
読)と差異はなかった.04 年 ロッ トは,抗原濃度を .
原性の程度に相関 して未分化 なT細胞の分化 を障害す
年 レベルにまで戻 し(
上昇 し)
たので,良好な検査結果が
る可能性を示唆す るものである.今後 さらに例数 を増
得 られ るもの と期待 している.
や し再現性を確認す ると共 に,ウイルス感染 によ りど
の様なメカニズムで分化 が抑制され るのか, この系を
2
1 ウマヤザル信仰に伴 う頭蓋骨の調査による口承 と
用いて詳細に検討 してい きたい.
生息分布域の相関関係
中村民彦
1
6m 2抗原等 を用いたマカク血清 BV抗体調査 と陰
ウマヤザル信仰 とは厩に猿の頭蓋骨や手を紀 り牛
馬の健康や安産などを祈願 したものである.当信仰 は
性 コロニーの作出
佐藤浩,大沢-貴 く
長崎大 ･先導生命科学研
東北全域に流布 していたが,近代から現代における残
究支援セ ンター)
留形態や 口承の全容は充分に解明されていない.更に,
これに関係す るニホンザルの捕獲や捕殺の方法 も不 明
B ウイルス(
Ce
r
c
o
pi
he
t
c
i
nehe
r
pe
s
ir
v
us1)
は自然宿
主のサルでの致死的感染 は例外的であるが, ヒ トに感
である.今年度 も当風習を知る古老からの口承を求め,
触す ると致死的な疾患を引き起こす ことが知 られてい
聞き取 りにより記録 し,ニホンザルの生息分布 との関
る.このことか ら,簡便 な抗体検 出用のキ ッ ト開発が
係 を明 らかに しようと岩手県を中心に調査を行 った.
求め られているが,国内では B ウイルスの大息培養に
調査の結果,従来発見されている事例 も加 えると軽米
よる抗原作製は不可能である.最近 B ウイルスと近縁
町1
,山形材 6,久慈市 1,野 田村 1
,玉山村 1
,雫石町
のヒヒ-ルペスウイルス (
HVP
2
)抗原が抗体検出に非
2,新里村 2,沢内村 1
,東和町 1
,北上市 2.江刺市 1
.
常に有効であることが報告 された (
LAB,1
999
).そこ
胆沢町 1
,大東町 1
,前沢町 2,藤沢町 2,平泉町 1の
2抗原を用いた B ウイルス抗
で本突･
験施設では,HVP
計 26の事例を記録す る事ができた.保存形態の内訳は
体検出用 ELI
SA キ ッ トを作製 し,希望する研究機関に
頭蓋骨 2
2
,手 4である.頭蓋骨では牛馬の守護神,莱
銃布す ると共に,キ ッ トの安定性 の調査お よび換作性
用,安産,火災防止などの口承事例を得た.手につい
の向上を図るため,頒布先の機関よ りキッ トを用いた
ては種蒔 き時に使用すると豊作 との口承事例を得た.
検査結果 と検査血晴の送付 を依頼 している.今回,1
97
6
頭蓋骨には無病息災や家内安全を,手には五穀豊穣 を
年か ら20 3年にかけて京都大学霊長類研究所で採血 さ
と.祈願の内容に使い分 けが認められる.一方,捕猿
れたニホンザル血清 793検体についての検査を行った
や捕殺の方法を詳細に知 るインフォーマン トは発見で
ので報告す る.
きなかった.当信仰が広 く分布 し,こうしたサルの需
要にサルマタギのような供給者が関与 していたな ら県
【
材料 と方法 】
検査材料-8
0℃で凍結保存.遊星 月 ウイルスの代
下のサル生息地の消失を招いた狩猟圧の原因になった
替抗原 として ヒヒ-ルペス ウイルス (
HVP2
)抗原 を
可能性 も考えられ る.ウマヤザルの風習 とニホ ンザル
vc
r
o細胞に感染 させ ,3648時間後 に感染細胞 を回収 し,
の分布空 白域 との関係については,次年度以降の調査
可溶化後,遠心上清をウイルス抗原液 とした.対照 と
で更に検討を重ねていきたい.
して非感染 ve
r
o細胞抗原 を用いた.反応 と発色 96穴
プ レー トに 2008
0 倍希釈 ウイルス抗原 をコー トし,
2
2GI
S を用いたニホンザルの行動圏利用に関わる要
抗原プレー トとした.発色には ビオチン化抗 ヒ トI
g
G,
アビジン ･ビオチ ン化ペルオキシダーゼに よる増幅を
因の評価
辻大和 (
東京大 ･院 ･農学生命科学)
介 し,OPD を基質 として発色 させ,硫酸にて停止後,
本研究ではニホンザルの行動圏利用に関わ る諸要
波長 492mm にお ける吸光度 を測定 した.
因を定立化 し,各要因がニホンザルの生息地利用 に与
【
結果】検査の結果,陽性 :229,陰性 :557,不
える影響の相対的な重要性を把握することを目的 とす
定:
7とな り,陽性率は約 29% (
229
〝9
3) であった.
る.本年度は,泊ま り場の選択 と温度環境の関連性 を
2001年以降,陽性率が 1
0%前後 を推移 し,それまでの
示す こ とに重点を置いた.宮城 県金華 山岳北西部の
約 40%に比べて大きく低下 していた.S
PF コロニー作
様々な地形 6 タイプ 1
0箇所(
尾根 ×3,沢 ×3,海岸,
出が本格化 していることが うかがえた.99年 ･00年 ロ
-921