HPLCによる大豆イソフラボンの分析

LC Technical Note
HPLCによる大豆イソフラボンの分析
66
GL Sciences Inc.
今回は、Inertsil ODS-SP HPLCカラムを用いることによ
今回は、GL-7400高速液体クロマトグラフィー(HPLC)
シリーズを用いたグラジエント分析による大豆イソフラ
り良好な結果が得られましたので、ご紹介します。
ボンの一斉分析をご紹介します。
分析対象は、大豆イソフラボンアグリコンとして測定す
るため、マロニル配糖体、アセチル配糖体を含む12成分
大豆イソフラボンとは、主に大豆に多く含まれるフラボ
のイソフラボンとしました。
ノイドのひとつであり、女性ホルモンに似たはたらきを
（K.Suzuki）
するエストロゲン様活性を持つことで知られています。
標準液測定例
30
7. 6’’-O- Acetylglycitin （AGl）
8. 6’’-O- Malonylgenistin (MG)
9. Daizein (De)
10. Glycitein (Gle)
11. 6’’-O- Acetylgenistin (AG)
12. Genistein (Ge)
Daidzin （D）
Glycitin （Gl）
Genistin (G)
6’’-O-Malonyldaidzin (MD)
6’’-O- Malonylglycitin (MGl)
6’’-O- Acetyldaidzin (AD)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
PDA
mAU
20
各 10 mg/L
9
3
10
1
10
12
6
2
11
7
0
4 5
8
0
10
20
30
40
50
Time (min)
5000000
Daidzin
4500000
Genistein
R2 = 0.9994
4000000
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
面積値
3500000
3000000
2500000
2000000
R2 = 0.9999
1500000
1000000
500000
D
Gl
G
MD
MGｌ
AD
AGｌ
MG
De
Gle
AG
Ge
：
：
：
：
：
：
：
：
：
：
：
：
R2
0.9994
1.000
1.000
1.000
1.000
0.9999
0.9999
1.000
0.9999
1.000
1.000
0.9999
0
0
5
10
15
20
25
HPLC条件
カラム
溶離液
流量
カラム温度
検出
注入量
: Inertsil ODS-SP
(5μm, 250 x 4.6 mm I.D.)
: A) 0.1％Acetic acid in CH3CN
B) 0.1％Acetic acid in H2O
A/B = 15/85 － 8 min
－ 15/85 － 42 min － 35/65
（平衡化10 min）, v/v
（Mixed by a gradient mixer）
: 1.5 mL/min
: 35 ℃
: PDA 254 nm
: 10μL
濃度（ｍｇ/L）
検量線と相関係数
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前処理例
固体試 料
液体試 料
－ 1g
－ 1g
抽出
抽出
－ 70％エタノール水 25mL
－ 振とう 30min
－ 遠心分離 3500rpm 10min
－ 70％エタノール水で100mLに定容
－ 遠心分離 3500rpm 10min
残渣
－ 0.45μmフィルター
－ 70％エタノール水 25mL
－ 振とう 30min
－ 遠心分離 3500rpm 10min
HPLC
Ｘ 2回
定容
－ 100mLに定溶
－ 0.45μmフィルター
HPLC
試料測定例
きなこ
11
6
20
mAU
3
1
2
0
7
0
10
20
12
9
30
40
50
Time (min)
豆乳
3
1
20
mAU
8
6
11
9
12
7
拡大
4
0
2
0
10
30
40
50
Time (min)
納豆
1
9
3
20
7
6
8
10
拡大
2
12
11
0
mAU
20
0
10
20
30
Time (min)
40
50
GL Sciences LC Technical Note
COOH
CH3
O
R1 ：
構造とUVスペクトル
1. ダイジン
2. グリシチン
HO
OH
O
O
O
HO
OH
HO
3. ゲニスチン
OH
4. マロニルダイジン
OH
OH
O
R2 ：
O
O
HO
OH
O
OH
O
O
O
H3C
O
C6H11O5
250
300
350
400
mAU
200
250
Wave length (nm)
300
350
400
200
250
Wave length (nm)
5. マロニルグリシチン
OH
350
400
200
250
OH
300
350
8. マロニルゲニシチン
OH
O
400
Wave length (nm)
7. アセチルグリシチン
OH
O
O
OH
O
O
H3C
H3C
R1
R2
R2
O
mAU
250
300
400 200
350
R1
O
O
250
300
400 200
350
250
9. ダイゼイン
300
400 200
350
10. グリステイン
250
300
350
400
Wave length (nm)
Wave length (nm)
Wave length (nm)
Wave length (nm)
O
O
mAU
O
mAU
O
mAU
O
200
300
Wave length (nm)
6. アセチルダイジン
O
O
O
mAU
200
R1
O
O
O
O
mAU
O
C6H11O5
mAU
C6H11O5
11. アセチルゲニスチン
12. ゲニステイン
OH
OH
O
OH
OH
O
OH
O
CH3
OH
O
O
HO
O
O
O
250
300
350
Wave length (nm)
400 200
250
300
350
Wave length (nm)
400 200
mAU
mAU
O
mAU
mAU
200
O
HO
R2
HO
250
300
350
Wave length (nm)
400 200
250
300
350
400
Wave length (nm)
※ すべてのスペクトルについて吸光度（Y軸）のスケールは同じです。
GL Sciences LC Technical Note
Coffee Break
大豆イソフラボンはポリフェノールのひとつで、女性
ホルモン（エストロゲン：例 エストラジオール（右図））と
化学構造が似ていることから、植物性エストロゲンとも
呼ばれており、女性ホルモンと似た働きをすることで
知られています。そのため、女性ホルモンが不足して
いる場合に、代わりとなって体に働いて症状が解消さ
れたりします。
CH3
OH
HO
Estradiol
OH
R1
O
Daidzein
Genistein
Glycitein
R2
HO
R2
： H
： H
： OCH3
O
イソフラボン類
R5
OH
O
R3
HO
O
R4
O
HO
R1
： H
： OH
： H
OH
O
O
イソフラボン配糖体類
：
：
：
：
：
：
：
：
：
：
：
Daidzin
Genistin
Glycitin
6’’-O-Acetyldaidzin
6’’-O-Acetylgenistin
6’’-O-Acetylglycitin
6’’-O-Malonyldaidzin
6’’-O-Malonylgenistin
6’’-O-Malonylglycitin
6’’-O-Succinyldaidzin
6’’-O-Succinylgenistin
R3
H
OH
H
H
OH
H
H
OH
H
H
OH
：
：
：
：
：
：
：
：
：
：
：
R4
H
H
OCH3
H
H
OCH3
H
H
OCH3
H
H
：
：
：
：
：
：
：
：
：
：
：
R5
H
H
H
COCH3
COCH3
COCH3
COCH2COOH
COCH2COOH
COCH2COOH
COC2H4COOH
COC2H4COOH
HPLC装置：GL-7400 シリーズ
分析カラム：
Inertsil ODS-SP 5μm, 250×4.6mm I.D.
Cat.No. 5020-02746
番号
1
2
3
2
5
品名
キャリアリザーバー
PDA検出器
ポンプ
カラムオーブン
オートサンプラー
型番
GL-7480
GL-7452A
GL-7410
GL-7430
GL-7420
1
4
2
5
3
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TEL.029(858)3700
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TEL.045(475)1144
TEL.052(931)1761
TEL.082(233)1101
TEL.092(291)5200
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FAX.06(6357)4580
FAX.024(536)1518
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FAX.043(248)2485
FAX.048(667)1656
FAX.045(475)1145
FAX.052(931)1814
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東
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名
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九
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浜 営 業
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島 営 業
州 営 業
部
店
所
所
所
所
所
所
所
所
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