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Protein Purification Competition 2008
Protein Purification Competition 2008 めざせ！ Uppsala 旅行 受賞インタビュー 「Protein Purification Competition 2008」では研究者の皆さまに、Capto 担体または HiScreen Column、Superdex 5/150 GL カラムのいずれかをお使いいただいたユニークな精製事例をご応募いただきました。外部審査員を含めた厳 正な審査の結果、大賞を受賞された生田真様（中外製薬株式会社） には 2009 年 9 月に「Sephadex のルーツを探れ！ スウェーデン（Uppsala）3 泊 5 日の旅」として、ご応募いただいた精製事例についてスウェーデン本社にてプレゼンテー ションを行っていただくとともに、弊社開発・製造部門の見学やノーベル賞晩餐会再現ディナーなどをご体験いただ きました。また、今回ご応募いただいた精製の過程で工夫されたお話、旅先での体験談などを生田様にお伺いしました。 ご応募いただいた精製事例についてご説明ください。 mAU 6,000 細胞質 Fe - S 蛋白質の初期精製です。酵素活性のある スウェーデンでの発表はいかがでしたか？ イオン交換でここまで頑張ることになった経緯を話した mAU 6,000 のですが、このアプリケーションの醍醐味である「溶出 step の最適化により、溶出が広がるという望まれない化学 市販標品はありません。この蛋白質は、強制発現系でほと んどが不溶になります。細胞質 Fe-S 蛋白質は、特別な機 4,000 構を経て生合成されるため、目的蛋白質のみの強制発現系 的性質を逆手に取り、夾雑蛋白質から分離できる」 、 「カウ ンターではないイオンの変更が、イオン交換での溶出のさ 4,000 れ方や回収率を画期的に改善する場合もある」 、 「いわゆる ではその機構が律速または不具合となり、正しく folding しなかったと推測されます。また、大きさや構造の複雑さ 2,000 から、変性剤で不溶画分を可溶化し refolding するのも至 選択性ではなく回収率という点で、DEAE が Q に勝る場合 もある」の 3 点を、より詳しく話したほうが良かったので 2,000 1M 難と考えました。可溶画分で精製用タグが消失するため、 アフィニティー精製もできず、 結局、 夾雑蛋白質の少ない「今 0 風の」出発材料は得られませんでした。さらに、一般的な 1M 0 イオン交換も、回収率は悪い上に 20 CV 以上に亘ってだら 25 CV 0 50 0 25 50 CV だら溶出されるため、 比活性が悪化し「精製」になりません。 溶出画分の一部を、同じイオン交換にかけても、再び広がっ て溶出されます。つまり、準安定な高次構造が複数あると 溶出 step により、溶出量は増えるけれども、夾雑蛋白質か らは分離できると考えるに至りました。 受賞の知らせを聞いた時はどう思われましたか？ ウプサラ大聖堂 開発、製造部門をご覧になった感想をお聞かせください。 ツアーで印象深かったことをお聞かせください。 各種カラムや機器の「故郷」を巡る、至福の時間でした。 ストックホルムの NK デパートで、膨らんだ缶＊ 1 を指し HiTrap カラムたちに 図 1：NaCl で溶出したクロマトグラム 目的の蛋白質がブロードに広がり回収率も低くなっています。 いうより、目的蛋白質の化学的性質ということなら、狭い IEX1mE001:10_UV1_280nm@01,PEAK はと後悔しています。 IEX1mE001:10_UV1_280nm@01,PEAK mAU 6,000 印をスタンプ、またスタンプ。 若き職人たちの活き活きした顔。幾世代も、其処彼処のビー た日本人ガイドさん。他にも「ホロムイイチゴ＊ 2 のジャム カーで蠢くスラリーたちの息遣い。新人カラムをパッキン は、これ」 「ダーラナホース＊ 3 は、このお店」と 15 時の グするため、ずらりと並ぶ現役老 FPLC たちの雄姿。試作品 予定を過ぎ夕刻まで親切に道案内してくれました。おか の工作機械と親方と瀟洒な感じの工作室。小綺麗な研究室 げで、Orrefors 本店＊ 4 や、音楽制作ソフト「Reason」の に在す、赤い ÄKTA の試作機。木漏れ日の差す本棚と実験台 Propellerhead 社にも行けました。ガムラスタン＊ 5 で別れ、 mAU が澄ました研究棟。食堂の花壇。かつての貨物用のプラット 6,000 ホーム。壁を飾る古い写真たち．．．でも、数年ぶりの背広 は窮屈で、お腹の具合が． ． ． したのが、正月明けでした。溶出が広がらないように HP 倍増し、さらに塩析効果が溶出に影響する可能性から、pH 4,000 4,000 1、2）。最終的に 10 mM 刻みで溶出 step などを評価して、 応募できたのは 2 月の締切日ぎりぎりでした。 1M ＊ 1 膨らんだ缶 …… シュールストレミング。ニシンを塩漬けにして缶の中 で発酵させたもの。においが強烈な食べ物として有名です。 ＊ 2 ホロムイイチゴ …… 北欧で食される黄色いキイチゴ。数が採れない ため高級品として扱われています。 ＊ 3 ダーラナホース（ダーラヘスト）…… 木彫りの馬で、スウェーデンの 伝統工芸品です。 ＊ 4 Orrefors …… ガラス製品で有名。ノーベル賞晩餐会のグラスは Orrefors 製です。 1M 0 0 0 25 50 CV 図 2：LiCl で溶出したクロマトグラム 目的のピークがシャープになり回収率も改善したことが分かります。 製品と皆さん、本当にありがとうござ いました。 2,000 2,000 低下や LiCl などによる溶出を比較したところ、LiCl が目的 蛋白質の溶出を画期的に改善することが分かりました（図 はずっしり。一方、美しいウプサラの街は、大聖堂の周辺 させていただき、 や Mono Q を検討後、低濃度の出発材料を想定してマルチ モーダルも選べる Capto を試すと Q より DEAE で回収率が ノーベル賞晩餐会再現ディナーのため市庁舎へ戻ると、鞄 しか散策できず、今も心残りです。今回は、貴重な経験を 素直にうれしかったです。いろいろな検討の末「大量の 試料をイオン交換で初期精製しないと、後がない」と結論 「これを、お土産に買ってはいけません！」と注意してくれ 0 25 50 ＊ 5 ガムラスタン …… 王宮やノーベル博物館がある旧市街。 CV 生田様の旅行記「素晴らしいスウェーデンの旅」は下記 生田様（左から 2 番目） とスウェーデンのスタッフ URL からご覧いただけます。 http://blogs.yahoo.co.jp/kryptolebias_marmoratus ご使用いただいたプレパックカラム Hitrap Capto シリーズ IEX1mE001:10_UV1_280nm@01,PEAK 118 www.gelifesciences.co.jp IEX1mE001:10_UV1_280nm@01,PEAK www.gelifesciences.co.jp 119