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アルコールの肝における高比重リポ蛋白代謝 に及ぼす影響
( 8 0 2 ) 奈医誌(]. N araM e d .A s s . )4 0,802-810,平 1 アルコールの肝における高比重リポ蛋白代謝 に及ぼす影響に関する研究 奈良県立医科大学第 3内科学教室 藤森由佳子 STUDYO NTHEROLEOFTHELIVERINALCOHOLINDUCED ALTERATIONOFHIGHDENSITYLIPOPROTEINMETABOLISM YUKAKOFUJIMORI The3rdDψa r t m e n t0 1I n t e r n a lM e d i c i n e ,NaraM e d i c a lU n i v e γs i t y R e c e i v e dNovember3 0,1989 Summary: The e f f e c to fa l c o h o li n t a k e on t h e serum l e v e l so fh i g h d e n s i t yl i p o p r o t 巴m c h o l e s t e r o l(HDL-ch),a p o l i p o p r o t e i nA-1 ( a p o .A-1 , ) anda p o l i p o p r o t e i nA-I I( a p o .A-I I )was i n v e s t i g a t e di n1 9h a b i t u a la l c o h o ld r i n k e r sw i t h o u tl i v e rd i s f u n c t i o n (GroupA),3 5w i t hmi 1d h e p a t i cdamage(GroupB), and7w i t hadvancedl i v e rd i s e a s e(GroupC ) . Theseruml e v e lo fHDL chwash i g h e ri nGroupA t h a ni n1 0n o n d r i n k e r s( c o n t r o lg r o u p )(P<0.001 ) . Buti twasl o w e r i nGroupB ( P< 0 . 01 )ands i g n i f i c a n t l y1 0 羽 アe ri nGroupC(P< 0 . 0 01 )t h a ni nt h ec o n t r o l s .Thel e v e l o fa p o .A-1wasa l s oh i g h e ri nGroupA (P<0.005)t h a ni nt h ec o n t r o l s, a l t h o u g ht h el e v e lo fa p o . A-I Iwasnot . Toe l u c i d a t et h ee f f e c t so fa l c o h o lona p o .A-1 p r o d u c t i o nbyh e p a t o c y t e s,t h e a u t h o ri n v e s t g a t e dt h es y n t h e s i so fa p o .A-1andalbuminbyc u l t u r e dr a tl i v e rc e l l si nt h ep r e s e n c e o fe t h a n o. 1E t h a n o lenhancedt h ep r o d u c t i o no fa p o .A-1b u tn o tt h a to fa l b u m i n . Theser e s u l t ss u g g e s tt h a tt h ee l e v a t i o no fserumHDLi nh a b i t u a la l c o h o ld r i n k e r sw i t h o u t l i v e rd i s t u r b a n c ei smainlya t t r i b u t a b l et ot h 巴 i n c r e a s eo fa p o .A-1s y n t h e s i si nt h el i v e r . IndexTerms h i g hd e n s i t yl i p o p r o t e i nc h o l e s t e r o l,a p o l i p o p r o t e i nA-1,a p o l i p o p r o t 巴i nA-I I,a l c o h o l,p r i m a r y c u l t u r eo fr a th e p a t o c y t e 緒 ー 国 1 9 7 7年 , Y ano ら1)はハワイ在住の日本人を対象に曙 i d e r i c h リポ蛋白からの t u r no v e rの充進9),などが想 定されているが未だ明らかではない. 告した.その後,アノレコーノレの比較的少量長期飲用が, 肝は, HDLの合成,異化およびその機能発現に必要な l e c i t h i nc h o l e s t e r o la c y l t r a n s f e r a s e(LCAT) の産生な どを介して HDL代謝に深く関わっている臓器であり, その障害時には種々の HDL代謝異常が観察されてい i g hd e n s i t y1 ip o p r o t 巴i n (HDL)ないし HDL 血中 h る10)11).また,肝はアノレコーノレ代謝においても中心的な役 c h o l e s t e r o l (HDL-ch) を上昇させるという報告が相次 ぎ2)3)既に F raminghams t u dy 4)等で虚血性心疾患の反危 割を果たしており,その影響によって特有の肝障害をお 好品と冠硬化症発生の関係について疫学調査をおこない, アノレコーノレは冠硬化症の発生に負の相関を示すことを報 険因子であることが指摘されてきた H DL-chの上昇と アノレコーノレ飲用との関係が注目されるに至った. アノレコール飲用による HDL上昇の機序については, r i g l y c 町田 肝または腸での合成の場加 8)一円異化の遅延 8),t こすことも多い. そこで著者は, アノレコーノレ飲用による HDL代謝の変 化における肝の役割について, HDLの主要構成成分で I Iとの関連を中心に臨床的 あるアポリポ蛋白 A-I,A ならびに実験的検討をおこなった. アルコーノレの肝における高比重リポ蛋白代謝に及ぼす影響に関する研究 対象と方法 1.臨床的検討 対象はすべて男性で,飲酒家恒例c1日エタノーノレ消 ( 8 0 3 ) 00mlに対し い , ローターは RP-65T を用いた.血清 1 5% EDTA溶液 (pH7 . 0 ) を 1ml加え, 1 0, 000rpm 4Cで 3 0分間遠心をおこない,浮上したカイロミクロン 0 ample 1 0 0ml に対し 9 . 8g の を除去した.その後, s 0g以上,飲酒歴 5年以上〉である. HBs抗原陽 費量 4 NaClを加え (d=1 .0 6 3 ) チューブに 9mlずつ分注し, 性例,輸血歴を有する例,糖尿病合併例は対象から除外 3 0, 0 0 0rpm1 6Cで 1 6時間違心をおこない,上層の v e r y 0 した. これらに一般肝機能検査,腹部超音波検査,腹部 lowd 巴n s i t yl i p o p r o t e i nおよび lowd e n s i t yl i p o p r o t 巴i n computedtomography(CT)検査を施行し,さらに異 分画を除去した.残りの液状面より 1~1. 5cm 下でチュ 常が認められた者について腹腔鏡,肝生検をおこない 3 ーブスライスし, s ample1 0 0mlに対し 1 9gの NaBrを 群に分類した.すなわち A 群は肝障害のない 1 9例 ( 2 8 0, 0 0 0 加え (d=1.21)チューブに 6.4mlずつ分注し, 4 ~65 歳,平均年齢 41 歳), B群は肝硬変を除く慢性肝障 4時間遠心をおこない,上層 1mlを採取し rpm1 6Cで 2 害を有する 35 例 (26~74 歳,平均年齢 44 歳入 C 群は肝 a m p l eを 同操作を 2回繰り返して精製した.その後 s 硬変を有する 7 例 (37~57 歳,平均年齢 50 歳〉である. 0 . 9% NaClで透析をおこなった.次にエタノーノレ・エ 0 これらで血清 HDL-ch ,アポリポ蛋白 A-I および A ーテノレ (3 :2) 法で脱脂し,粉末状のアポ HDLを得 I I(A-1,A-II)を測定した. HDL-chは燐タングステ た.そのアポ HDL を , 8 M 尿素および 0 . 0 0 1M の ン酸 Mg++法同(沈殿試液は HDL-ch沈殿試液,栄研 EDTAを含む T r i sHCl(pH8 . 6 ) に溶解し,同ーの緩 化学を使用し,発色にはデタミナ TCS ,協和メディクス ephadexG-200のカラムにかけて, ゲノレ炉過を 衝液で s を用いた.)で測定し ,A-I,A-IIは一元免疫鉱散法 S F 1 0 0,アドバン おこない,フラグションコレクター ( (SRID)13)アポ A-Iプレート,アポ A I Iプレート,第 テック東洋株式会社〕にて 3mlすやつに分割採取し . A 一化学薬品〕で測定した. I はフラクションナ γ パー 57~60 で最大ピ -!l を有す また,別に非飲酒家の慢性肝炎 11 例 (35~67 歳,平均 る分画として得られた ( F i g .1).得られた分割は 0 . 0 1M 年齢 4 9歳) 1 とも同様の検討をおこない,健常対照として T r i s -HCl( p h8 . 6, 0 . 0 0 1M の EDTAを含む〉緩衝液 非飲酒家 10 例 (26 歳 ~49 歳,平均年齢 43 歳〉を用い i a f l omembraneU M で透析をおこない尿素を除去後, D 2をもちいて Amicon52型セノレ中で、限外炉過法により た. 2 . 実験的検討 ラット初代培養肝細胞を用いて,エタノーノレ(ETOH) の A-I産生への影響を検討した. a) 動物および試薬 Sprague-Dawley(S-D)系ラットは, 日本 SLC株式 会社より購入した. 濃縮した.以上のようにアポ HDLから脱脂して得られ た A-Iを 8 M尿素を含むポリアクリノレアミドゲノレを支 持体としてディス F電気泳動をおこなったところ単一の F i g . 2 ) . パンドを形成した ( c )抗血清の作製 r 巴u ndの compl巴t ea d j u v a n t 前述の A-Iを等量の F L [ 3,4 ,5 -H(N)]一Leucine(>1 4 0Ci/mmoI)は, とよく混和して,家兎の足指皮内にタンパク量として 1 NewEnglandNu c l e a rRes巴a r c hP r o d u c t sより購入し mg注射して感作させた. 3週間後に追加免疫として l 3 -2mgを Freundの c o m p l e t ea d j u v a n tとともに管筋 た. C o l l a g e n a s e (Sigma Type 1)は Sigmac h e m i c a l company,St .L o i s,USA より, Ca2+および M2+を含 内に注射し,その 7日後に全採血し,抗ラット A-I血清 を作製した.抗ラット A-I血清は免疫電気泳動により, u l b e c c oの PBS液 (PBS( ー ) ) , Hanks液 , まない D ラット全血清に対して HDLに相当する一本の沈降線の HEPES緩衝液 ( p h7 . 3 ),W i l l i a m s 'E培地,ペニシリ F i g . 3 ) . 抗血清は 2mlずつサンフeノレチュー みを示した ( ン G( PC-G) は , FlowL a b o r a t o r i e sI n c .USAより, ブに分けー 7 5Cの冷凍庫で保存した固抗ラットアノレブミ abora ファンギゾン R (アンホテリシン B) は GIBCOL ン血清は C a p p e l社製をもちいた. 0 t o r i巴s ,NewYork ,USA より,硫酸ストレプトマイシ d) ラット肝細胞の初代培養 ン (SM) は明治製薬より購入した. 2 4時間絶食後の体重 2 0 0gの S-D系雄性ラットを用 b) ラットアポリポ蛋白 A-Iの分離・精製 体重 150~200 gの S-D系雄性ラットの新鮮プール血 いて, C o l l a g e n a s e潅流法 15)と低速遠心法により肝実質 細胞を分離した. 清から S canu ら14)の方法に準じて HDLを分離した. ラットにネンブターノレ〔輸入販売元大日本製薬株式会 超遠心機は,日立製作所 8 5P-73型分離用超遠心機を用 社)0.3mlを腹腔内に注射して麻酔し開腹した.門脈を ( 8 0 4 ) 藤 森 由 佳 子 切開しカニューレ(東レ・ホスピタノレサプライハツピ← 35mm径の Falconc u l t u r ed i s hに 1X1 05細胞/cm2 の キャス 1 8G) を挿入し,そのまま 30ml/minの流速で 濃度で播いた.培養液には PC-G000μ/m l ) , SM( 1 0 0 ベ リ ス ク ポ ン プ を 作 動 さ せ 3TCに 保 温 し た 0.5mM μg/ml ),ファンギゾン R (0.25μg/m l)を添加した.培 EGTAを含む PBS (-)を潅流し続けた.この状態で 養は, 4-5分濯流を続け, Hanks液に 0 . 0 5%となるように ーター中でおこなった. 2 4時間培養後,血清および、ホノレ 5%CO29 5%空気を気相として 3TCインキュベ 溶解したコラゲナーゼ溶液 ( 2 0 0ml)に交換し再び潅流を モンを含まない W illiams'E培地に変更し,さらに 1 2時 始め 10-20分後,肝臓各葉をハサミで切り離しシャーレ 閲培養後実験に用いた. に移した.肝を軽く細分した後,先太の駒込めピベット d) ETOH添加実験 で軽く 2-3回ピベッテッング L, 2-3枚のガーゼを 培養液中に分泌された A-Iおよびアルブミン量を測 v 重ねた細胞炉過器〔池本理化〕で炉過した. ヨ液を 50ml 定するため二種の方法〔短時間培養系および長時間培養 0gX1分間の低速遠心を 3回おこ 細胞遠心管に集め, 5 系〉で検討した. ない,ほぼ均ーな肝実質細胞を得た.分離肝細胞の v i a - b i l i t yは , トリパンブルー染色試験で 9 5%以上であっ た.その肝実質細胞を 1 0%仔牛血清, 1μMデキサメサ ゾン 1μMインスリン, 10mMHEPES緩衝液を含む なお培養液への ETOH添加量は, ETOH添加 2時間 後での細胞の v i a b i l i t y および遊離酵素活性 (LDH, GOT,GPT)に変化のみられなかった 100mMまでとし た ( T a b l e1 ) . まず短時間培養系では, L-[ 3,4 , 5 -3H(N) 一 ]Leucine5 W i l l i a m s 'E 培地に 5x105細胞 /mlの濃度に浮遊し, 0. 0 . 0 . 1 5 0 . 1 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 1 2 0 f r a c t i o nn u m b e r F i g .1. G巴1f i l t r a t i o np r o f i l 巴 o fa p o . HDLfromr a ts e r u m . Plasma l i p o p r o t e i n s were separated by density gradient u l t r a c e n t r i f u g a t i o n Fr 巴s h l yp o o l e dserumwast a k e nfromt e nr a t s . HDL was d e l i p i d a t e d by e t h e r e t h a n o l e x t r a c t i o n and nT r i s b u f f e r e d 8M chromatographedonS巴phadexG-200 i 巴a . u r Table1 .Enzymea c t i v i t i e si nt h emediumu s e df o rtwo-hourc u l t u r eo f h e p a t o c y t e sw i t handw i t h o u te t h a n o l(ETOH) ETOH 10mM ETOH 20mM ETOH 100mM ETOH 200mM 3 . 7 9 9 . 5土 4 1 0 4 . 5士3 9 . 3 6 6 . 3士1 7 . 6 1 :1 2 . 3 5 9 . 3: 2 2 3 . 8土 3 6 . 8 4 55土 4 . 5 . 2 4 7 . 2士4 4 3 . 5: 1 :4 . 4 4 9 . 3土 6 . 7 8 7 . 0土 8 . 9 3 . 5:1:1.0 . 6 3 . 8士0 4 . 0土1.4 5 . 0土 0 . 8 78土1.0 ¥ ¥ Control LDH ( IU/ l ) GOT ( IU/ l ) GPT ( IU/ l ) 目 Mean士s .D .o f4e x p e r i m e n t s 目 ( 8 0 5 ) アノレコーノレの肝における高比重リポ蛋白代謝に及ぼす影響に関する研究 i/ mlを含み, 1 0,2 0, 1 0 0m Mの各濃度に ETOH μC ュベートし,さらにヤギ抗家兎 γ ブロプリン抗体(1/ を加えた培養液で肝細胞を 2時間細胞した.その後細胞 1 0希釈) 1 0 0 μ Iを加え 4' cで 24時間インキュベートし 00μIを PBS(pH6 . 8 ) 200μlで希釈し, 液を回収し, 1 た.その後 2 0 0 0Xg,1 5分間遠心し,得られた沈澄を 0 . 1 家兎抗 A-I血清(1/1 0 0希釈) 100μlまたは家兎抗ア % sodiumdodecyls u l f a t 巴を含む PBSで 5回洗浄し cで 48時間インキ ノレブミン血清 0/100希釈〕を加え 4' た.沈溢は 1NNaOHで溶解し, 5mlのシンチレーシ ョン溶液 ( U n i v e r G e lI I;Nakaraic h e m i c a l s,Kyoto, J a p a n )を加え,その放射活性を液体、ンンチレーションカ ウンター (mod 巴1L S-7500,BeckmanI n s t r u m e n t sI n c ., Brea,C a l if)で測定した. 0,2 0,1 0 0m Mの各濃 次に長時間培養系で、も同様に 1 4時間毎に交換し, 4日 度に ETOHを加えた培養液を 2 M i n i c o n, 目の培養液を分離して,これを蛋白濃縮器 ( Amicon,D iv i s i o no fW.R .GraceandC o .,Danvers, M a s s . )にて 1 0 0倍濃縮した後, SRIDでアポ蛋白および g a r . アルブミンの定量をおこなった.平板ゲノレは 1% a A-I o s 巴に抗血清をそれぞれ 1% 混じて用いた. 3 . 検定方法 データーはすべて平均(土標準偏差〉で表現し,有意 差検定には分散分析および S t u d e n tの t t e s tを用いた. 結 果 1.臨床的検討 1)飲酒家における血清 HDL-ch, A-, 1 A-I I値 ( T a b l e2 ,F i g .4 ) 血清 HDL-chは , A 群では,健常対照に比べて有意 な上昇を示した .B群では対照に比べて有意に低下し, C群ではさらに著明な低下を認めた. A-1は HDL-ch と同様の変動傾向を示した.すなわ ち A 群では対照に比べて有意な上昇を示した .B群で は対照との有意差はみとめなかった .C群では対照と比 べて有意に低下していた. A-IIは対照と比べて A 群 , B群ともに有意差はない が , A B C群では著明な低下を示した. 2)各群における血清 HDL-ch,A-1,A-I I値の相関 F i g2 .P o l y a c r y l a m i d eg e le l e c t r o p h o r 巴s i so fr a t a p o . A-Iωandr a twholeserum( B ) . ( T a b l巴 3 ) 目 ratwholeserum 0 anti-ratwholeserum ← rat wholeserum anti-ratapo. A-1 serum 0 A群および C群では HDL-chは , A-1との聞に有意 F i g . 3 .Immunoelectrophor 巴t i cp a t t e r n so fr a tserumw i t ha n t i r a t a p o . A-Is 巴r umanda n t i r a twholeserum 由 佳 2 3 0 1 0 0 c o n t r o l C O GroupA a p o .A-1 主 ・ 明 H D L c h . B ま合唱岨・田金 3 0 GroupA O 恥o - F 自 5 0 i r - . . 個-- c o n t r o l C - J副圃. . 1 0 0 '十 叩 B 。 . 主 主 自 酔 ロ 骨 口 ..•• fr GroupA 1 0 0 2 0 0 -to品 hT・; AHU E 民J 一司¥一切 O 森 藤 子 ( 8 0 6 ) -control B C a p o .A I I 巴l so fHDL-ch., a p o .A-Ianda p o .A F i g .4 .D i s t r i b u t i o no fseruml e v -I Ii nmaleh a b i t u a la l c o h o ld r i n k e r switho rwithoutl i v e r n c l u d e ss u b j巴c t s d i s e a s eandi nmalen o n d r i n k e r s .GroupB i 巴o fl i v 巴r(e) , f a t t yl i v e r(0), h e p a t i c withnons p e c i f i cchang 口 ) , andc h r o n i ch e p a t i t i s(ム). f i b r o s i s( Table2 . Seruml e v 巴l so fHDL-ch.,a p o .A-I anda p o .A-I Ii nmale h a b i t u a la l c o h o ld r i n k e r switho rwithoutl i v e rd i s e a s 巴a ndin s malenondrink巴r Group HDL-ch(mg/ dJ ) Component 巴r sw i t h o u tl i v e r D r i n k A 9 ) d i s e a s e( nニ 1 D r i n k e r sw i t hm i l d B l i v e rd i s e a s e( nニ 3 7 ) D r i n k e r s w i t h l i v e r C ) c i r r h o s i s( nニ 7 C o n t r o l N o n d r i n k e r s (n=10) apoA -I(mg/dJ ) a I(mg/dl ) p o .A-I 目 7 2 . 9士1 1 . 6 1 7 6 . 8士2 8 . 3 帥 征士 8 . 8 . 4 * 4 93士9 3 . 3 1 3 8 . 4士2 3 6 . 5 : ! : 9 . 7 1 . 9 * 2 6 . 3士1 7 .ド 1 1 0 . 6土 3 1 7 . 1土仏 6 . 9 5 6 . 9士2 1 4 3 . 7士6 . 0 3 8 . 3土 16 木村 目 V a l u e sa r ee x p r e s s e da smean士S . D . . 0 1, **Pく 0 . 0 0 5, ***P<O.OOlv sC o n t r o l *Pく 0 Table3 C o r r e l a t i o namongseruml e v e l so fHDL-ch., a p o .A-I anda p o .A-I I 目 HDL-chv s . a p o .A-I HDL-chv s . a p o .A-I I a p o .A-1v s . a p o .A-I I GroupA n=19 * 0 . 8 6 6 8 目 。2 8 4 6 GroupB n=37 0 . 2 2 8 3 0 . 2 2 4 1 * 0 . 7 2 3 0 . 7 6 2 8 0 . 6 7 4 7 * 0 . 8 4 2 2 0 . 0 4 6 7 目 。0 0 2 2 * 0 . 6 9 7 7 GroupC 日ニ 7 C o n t r o l 0 nニ 1 キ 0 . 2 8 6 6 *Pく 0 . 0 5 判 目 ( 8 0 7 ) アルコーノレの肝における高比重リポ蛋白代謝に及ぼす影響に関する研究 な正の相関を示したが, A-IIとは有意な相関を示さなか の培養液中に分泌された A-Iへの [ ' H JL e u c i n eの取 I った . B群およびヌす照群では, HDL-chと A-1,A-I り込みは, 100mMまで濃度依存性に増加し, 100mMに の聞に有意な相関は認められなかった.対照群と B群お おいて有意な増加を認めた.一方アノレブミンへの [ ' H Jー よび C 群において A-Iと A-IIの間には,有意な正の Leucine の取り込みには,有意な変化はなかった ( F i g 相関が認められた 5 ) . 3) B 群の組織学的分類と HDL-ch,A-, 1 A-I I値 ETOH添加後 4日目の培養液の SRIDの計測から, A-Iおよびアノレブミンの定量値の平均とその比を検討 の関係 (Tabl巴~ ,A-1,A-I Iともに対 非特異的変化群では, HDL-ch すると, A-1は ETOH20mM添加群でピーク値を示 ,A-1 照と差を認めなかった.脂肪肝群では, HDL-ch しており,アルブミン量に対する比率で、も明らかに増加 は対照と差がなく, A-IIは増加傾向を示した.肝線維症 していた ( Table5 ) . 考 群では, HDL-ch , A-1,A-I Iともに低下傾向にあり, 察 とくに A-IIの低下は有意で,肝硬変 (C群〉に近い傾 向を示した.飲酒家慢性肝炎群では, HDL-ch , A-1, 今回の成績では,飲酒家における血中 HDL-chの上昇 A-IIいずれも非飲酒家慢性肝炎群とのくには差を認め は肝障害のない群にのみ見られ,肝障害を有する群では なかった. むしろ低下する傾向を示し,とりわけ肝硬変では著明な 2 . 実験的検討 低下を示した.以上のことより,肝障害の有無およびそ ラット初代培養肝細胞において, ETOH添加 2時間後 の重症度が HDL-ch の重要な変動因子であることが示 Table4 . Seruml e v e l so fHDL-ch., a p o .A-1anda p o .A-I Ii nGroupB, non 、d rink 巴r swithc h r o n i ch e p a t i t i sandc o n t r o l HDL-ch Cmg/dl ) 匂 Do 1 g / A d l I 〕 a a L D E o l gA I I /dl ) 1 .2 土7 . 1 5 1 4 6 . 3土 1 9 . 5 3 7 . 1土 6 . 2 9 1 .9 土1 2 . 1 5 5 . 3 1 4 8 . 8土 1 4 4 . 3士9 . 9 H巴p a t i cf i b r o s i s n=5 4 4 . 8士1 0 . 1 5 . 8 1 1 8士1 C h r o n i ch e p a t i t i s n=10 . 8 4 6 . 6士6 1 2 9 . 1士2 6 . 5 3 2 . 1土 9 . 4 N o n d r i n k e r sw i t h 1 c h r o n i cb e p a t i t i snニ 1 4 7 . 2士4 . 7 0 1 2 8 . 7士97 8 2 7 . 8: : 1 =2 . 6 3 C o n t r o l . 9 5 6 . 9士2 1 4 3 . 7士6 . 0 1 8 3 8 . 3土 15 H i s t o l o g i c a ld i a g n o s i s Nons p e c i f i cc h a n n = g 1 e 3 。Fattyliver 。 て 叶 口 コ 回 日三 n=10 目 2 8 . 5士4 . 5 * 目 」一一一 Mean土S . D . *P<O.Ol Tabl 巴 5 .Q u a n t i t a t i o no fa p o .A-1andalbumini nt h emediumby SRID ¥ ¥ ¥ ¥ C o n t r o l ETOH 10mM ETOH 20mM ETOH 1 0 0m M 〔 n p g o /A 1 0 6 I c e l l s / h r -〕 a 1 4 . 6 4 5 . 8 1 .3 8 6 4 . 6 a 〔 n l b E u / m 1 i 0 n 6 c e l l s / h r .〉 1 5 8 . 3 1 9 1 . 7 2 0 6 . 3 1 6 8 . 8 9 . 2 2 3 . 9 3 9. 4 3 8 . 3 。 a r a p t o iA I/Alb C%) 一一」一一一一一一一一 一 一 一 一L一 一 一 一 ー H e p a t o c y t e swerec u l t u r e df o r4d a y si nt h emediumw i t hand w i t h o u te t h a n o l CETOH). The medium was r e e x c h a n g e d e v e r y d a yandl a s td a y ' sc u l t u r e dmediumwasc o n c e n t r a t e dC X 1 0 0 )andu s e df o rS R I D . ( 8 0 8 ) 藤 森 由 佳 子 牢申 申 の 一 o a c 円・︿ . 三 E 三 E < = > + E L o J O O 一 o e 』 、 キ仕十 霊 三 E 0 : > ー E C C コ ー 工 ← O 工 w 0 ト w . Equ E a o nU ~ 1 0 0 < = > 、¥ n u n u 同 ¥23ub-¥Eao)E-Eコ D ﹂工 ι ー 工 、 、 、 0 + o E L 0 J 0 ト 工 凶 A 三 E Cコ e 、 4 2 E C C D D ー z 。。 ← w 。 工 工 ト 凶 ト 凶 B F i g . 5 The巴f f e c to fe t h a n o l(ETOH)ont h 巴i n c o r p o r a t i o n so fL [ 3, 4 ,5-'H(N)]一l e u c i n 巴 i n t oa p o .A-1ωandalbumin侶)which W 巴r 巴s e c r 巴t e dbyc u l t u r e dh e p a t o c y t e s . Eachv a l u ei st h emean土 s .D.of4experiments p=0.07 P<O.Olv sc o n t r o l 目 * ** 唆された.また HDLの主要な構成蛋白である A-1, 本研究では, HDL-chおよび A-Iの上昇は正常肝機 A-IIについてみると,肝障害のない群で A-Iのみ増加 能を示した群にのみ認められただけであり,肝硬変を除 が認められ,しかもそれが HDL-chの変動と良い相関を く軽度慢性肝障害群とした B群では,対照と有意差を認 示したことより, HDL-chの上昇は A-Iの増加と密接 めないとしづ成績を得た.この際,軽度肝障害群に何を u l l y 1 6 )らも,肝 な関係を有しているものと考えられた. H 含めるかが重要な問題であると考えらたので, B群をさ 障害のない飲酒家での HDL-chは,非飲酒家のそれより らに組織分類別に 4群に分け, HDL-ch ,A-1およびA 30-40%高く,その値は飲酒家と正の相関を示すと報告 I Iについて検討を加えた.非特異的変化群および脂肪肝 巴v e n y i問らは,重症肝障害を伴わない飲酒家 している .D 群では, HDL-ch ,A-1,A-I Iともに非飲酒家群と有意 n o r m a lおよび s t e a t o s i s,p o r t a lf i b r o s i sを含む群〉 群 ( 差を認めなかったのに対し,肝線維症群では HDL-ch , a l c o h o l i ch e p a t i t i s, で HDL は上昇し,重症肝障害 ( A-1,A-I Iともに低下しており,とくに A I Iは有意に c i r r h o s i sを含む群〉を伴う飲酒家では HDLの上昇を認 低下し,肝硬変群に近い値を示した.慢性肝炎群では, u h a m e l 1 8 )らも,正常肝および めないと報告している. D HDL-ch,A-1,A-I Iの値は飲酒家と非飲酒家の聞では 重症肝障害を伴わない欽酒家群 ( s t e at o s i s,m i l da l c o ほとんど差がなく, HDL増加に働くアノレコールの作用 h o l i ch e p a t i t i sを含む群〉で, A-I,A-II, HDL,の はこのような慢性実質性肝障害では消失するものと考え -IIの上昇は HDL ,の上昇 上昇を報告し, A-1および A られた.肝硬変群では従来の報告日)と同様に, HDL-ch , ,は,肝障害を重 によるものと推察している.また HDL A-I,A-IIの低下とくに A-IIの著明な低下を認めた. 症化するに従い低下したと報告している P o y n a r d 1 9 )らは,飲酒家 5 8 1例において,正常肝および肝 ( 8 0 9 ) アルコーノレの肝における高比重リポ蛋白代謝に及ぼす影響に関する研究 線維症を伴わない脂肪肝で A-Iの有意な上昇を認め 2) エタノーノレは, ラット橋養肝細胞のアポワポ蛋白 線維化の出現で明らかに A-Iは低下すると報告してお A-Iの産生を特異的に元進させた.以上より,アノレコー り,アノレコールによる肝での A-Iの生合成の誘導が,線 ノレによる血中 HDLの増加には,肝でのアポリポ蛋白 A 維 化 に よ り 低 下 す る も の と 考 察 し て い る -1の合成充進が重要な役割を呆たしているものと考え 今回の臨床的検討において,飲酒者での HDL-chの上 られた. 昇は,肝での A-I産生の増加に関係があることを示唆 する成績が得られた.しかし,なお小腸での合成, TG- 本論文の要旨は,第 2 8回日本消化器病学会大会,第 1 8 u r no v e rの増加など肝以外の因子 r i c hリポ蛋白からの t 回日本肝臓病学会西部会,第 7回アノレコーノレ代謝と肝研 による修修も否定できない. L e e ' )らは,慢性アノレコーノレ 究会において発表した.本研究の研究費の一部は文部省 投与ラットを用いた実験で,血清中の t o t a lc h o l e s t e r o l, 科学研究費 ( 6 0 7 7 0 5 3 6 ) によった. HDL-chの上昇傾向ならびに潅流肝からの HDL-chの 稿を終わるに臨み,終始御懇篤なる御指導,御校閲を 増加傾向を認めたと報告している.そこで著者は培養肝 賜った恩師辻井正教授に深甚の謝意を捧げるとともに, 細胞を用いた i nv i t r o実験系を用いて,アノレコーノレが肝 御助言,御校闘を賜わった生化学教室神谷知弥教授,な に直接作用して A-I産生を増加させ得るかどうかを検 らびに病態検査学教室中野博教授に深謝致します.ま 討した. た本研究の遂行にあたって常に御指導,御助力をいただ その結果,培養肝細胞による A-Iの産生はエタノー いた病態検査学教室岡本康幸講師ならびに御助力をいた ノ レ を 100mM添加して 2時間後で有意な増加を示した だいた第 3内科学教室福井博講師ならびに教室の諸兄 が,アノレプミンの産生は変動しないとしづ成績を得た圃 に感謝の意を表します.) このことより,肝細胞の A-I産生の増加はアノレコーノレ の直接作用によるものであり,また A-Iに特異的な反 応であることが窺われた.さらに 4日間培養後の SRID による検討でも, A-1産生はエタノーノレ 20mM添加群 文 献 1 ) Yano, 区 . , Rhoads ,G .G .andKagan,A .・C o f f e e, a1 co h o l,and r i s ko fc o r o n a r yh e a r td i s e a s e でピーク値を示しアノレプミン産生に対する比率でも明ら a p a n e s e m巴nl i v i n gi n Hawai. i New among J かな増加を示す成績を得た.この際, 1 0 0m M添加群で .J .Med.2 9 7 :4 0, 1 9 7 7 . Engl の産生量が短時間培養系に比べてそれほど高くなかった 2 )B e l f r a g e,P .,Berg,B .,Hagerstrand,1 .,N i l s s o n 4日間の長期培養により細胞障害が出現したため .,T o r n q v i s t,H.andWiebe,T . :A l t e r r a e h l e,P かもしれない.以上の実験成績から,臨床的に観察され 巴r s t i o no fl i p i dmetabolism i nh e a l t h yv o l u n t e たアノレコーノレ飲用による HDL-chの上昇は,主としてエ d u r i n gl o n g t e r m巴t h a n o li n t a k e . E u r .J .C l i n . のは タノーノレによる肝での A-I産生の増加を介したもので t .7 :1 2 7,1 9 7 7 I n v e s 3 )C a s t eH i , W.P .,Doyle,J .T .,Gordon,T .,Hames, あることが強く示唆された. エタノーノレによる肝での A-I産生増加の機序は明ら C .G .,Hjort 1and,M.C .H u l l e y,S .B .,Kagan,A . かではないが,エタノーノレと同様に HDLを増加させる . : A1 co h o l and b l o o dl i p i d s . and Z u k e I,W. J h e n o b a r b i t a lには,肝ミクロゾー ことが知られている p L a n c e tI I:1 5 3, 1 9 7 7 ムの酵素誘導を促進させる作用 2ベラット肝での A-Iの 4 ) Gordon,T .,C a s t e l l i,W.P .,H j o r t l a n d,M.C ., m-RNAの誘導を充進させる作用 21)があることが報告 区a n n e l, W.B .ahdDawber, T .R .:Highd e n s i t y されており,同様の機序によりアルコーノレが A-I合成 l i p o p r o t e i na sap r o t e c t i v 巴 f a c t o ra g a i n s tc o r o - を允進させまのではないかと推察される. n a r yh e a r td i s e a s e . The Framingham s t u d y . 結 語 r .J .Med.6 2 :7 0 7,1 9 7 7 Ame 5 ) Lee,H.,NoeI,S .P .,Hosein,E .A .andRubin- アルコーノレと肝での HDLの合成, とくにその主要な s t e i n,D . :S巴c r e t i o no fh i g hd e n s i t yl i p o p r o t e i n アポリポ蛋白である A-1の合成との関係に注目し,臨 by t h ei s o l a t e dp e r f u s e d a1 co h o l i cr a tl i v 巴 r . 床的ならびに実験的検討をおこない,以下の結論を得た. E x p e r i巴n t i a3 8・9 1 4,1 9 8 1 1)アノレコーノレ飲用は,血中 HDL-chおよびアポリポ 6 )C l u e t t e,J .E ., M u l l i g a n,J .J .,Noring, R ., 蛋白 A-1を増加させるが,その作用は肝障害を伴わな Doyle, K .andHojnacki, J . :E t h a n o le 叶l a n c 巴s d e い群でのみ認められた. novos y n t h e s i so fh i g hd e n s i t yl i p o p r o t e i nc h o l e s 【 ( 8 1 0 ) 藤 森 由 佳 子 t e r o. 1P r o c .S o c .E x p .B i o. 1Med.1 7 6 :5 0 8,1 9 8 4 . d e n s i t yl i p o p r o t e i ni nu r e as o l u t i o n .E v i d e n c ef o r 7 )C ouzigou,P .,F l e u r y,B .,C r o c k e t t,R .,Rautou, p o l y p e p t i d eh e t e r o g e i t y . B i o c h e m i s t r y8・3 3 0 9, J .J .,Blanchard,P .,Lemoine,F .,Richard. , Amouretti,M. and Beraud,C .・ Molard,B 1 5 )Tanaka,K . , Sato,M.,Tomita,Y .andI ch i h a r a, High d e n s i t yl i p o p r o t 巴i nc h o l e s t e r o l and a p o - A.: B i o c h e m i c a ls t u d i e s on l i v e rf u n c t i o n si n p r o t e i nA 1 i nh e a l t h yv o l u n t e e r sd u r i n gl o n g - primaryc u l t u r e dh e p a t o c y t e so fa b u l tr a t s . ] . term moderate a l c o h o li n t a k 巴 Ann. N u t r . 9 8 4 . M e t a b .2 8 :3 7 7,1 1 9 6 9 B i o c h e m .8 4 :9 3 7,1 9 7 8 1 6 ) Hu I l e y,S .B .andGordon,S .:A l c o h o landh i g h .,Mulligan,J .,Igoe,F ., 8 )C l u e t t e - Brown,J d e n s i t yl i p o p r o t e i nc h o l e s t 巴r o. 1C a u s a li n f e r e n c e . and Hojnacki,J . :E t h a n o li n d u c e d Doyle,K fromd i v e r s es t u d yd e s i g n s .C i r c u r a t i o n6 4 :5 7, a l t e r a t i o n si nlowandh i g hd e n s i t yl i p o p r o t e i n s . 1 9 81 . P r o c .S o c .E x p .B i o. 1Med.1 7 8 :4 9 5,1 9 8 5 . .,N i k k i l a,E .A .,Taskinen,M. R ., 9 ) Sane,T 1 7 ) Devenyi,P .,Robinson,G .M.,Kapur,B .M.and Roncari,D .A .K . :H i g h d e n s i t yl i p o p r o t 巴i n Valimaki, M.andYlikahr i .R .: A c c e l e r a t e dt u r n c h o l e s t e r o li nmalea l c h o l i c sw i t handw i t h o u t 巴n s t yl i p o p r o t e i nt r i g l y c e r i d 巴s o v e ro fv e r ylowd s e v 巴r el i v e rd i s e a s e . Am.].Med 7 1:5 8 9, 1 9 81 . i nc h r o n i ca l c o h o lu s e r s . Ath 巴r o s c l e r o s i s5 3 :1 8 5, 目 1 8 ) Duhamel,G .,Nalpas,B .,Gold 国t e i n, S .,Laplaud, P . M.,B e r t h e l o t,P . and Chapman,M. J . : 1 9 8 4 . 1 0 )板倉弘重,児玉龍彦,山田信博,村瀬敏郎,赤沼安 Plasmal i p o p r o t e i nanda p o l i p o p r o t 巴i np o f i l巴 i n 夫目肝における HDL代謝調節機構. 日本臨床代謝 a l c o h o l i cp a t i e n t sw i t handw i t h o u tl i v e rd i s 巴a s e目 学会記録 1 9:2 0,1 9 8 2 . 1 1 ) Kajiyama, G ., Takata, T ., Horiuchi, , . 1 Oyamada,K . and Miyoshi,A . : HDL and i t s s u b f r u c t i o n si np a t i e n t sw i t hc h r o n i cl i v e rd i s e a s e s . HiroshimaJ .M巴d .S c i .3 0 :2 7 3,1 9 81 . 1 2 )B u r s t e i n,M.andS c h o l n i c h,H.R .:L ip o p r o t e i n p o l y a n i o n m e t a li n t e r a c t i o n s . Adv.L i p i d .R e s . 1 1・6 7, 1 9 81 . .andA l b e r s,J .J . :Them e a s u r e 1 3 ) Cheung,M.C mento fa p o p r o t e i nA-1andA-I Il e v e l si nmen andwomenbyimmunoassay. ] .C l i n .I n v e s t .6 0 Ont h er e l a t i v er o l e so fa l c o h o landl i v e ri n j u r y . Hepatology4 :5 7 7,1 9 8 4 1 9 ) Poynard,T .,A b e l l a,A.,Pignon,J .P .,Naveau, S .,L e l u c,R .andChaput,J .C .: A p o l i p o p r o t e iA 1 anda l c o h o l i cl i v 巴rd i s e a s e . H巴p a t o l o g y6 : 1 3 9 1,1 9 8 6 . .V . : Microsomal enzyme i n d u c t i o n, 2 0 ) Luoma,P l i p o p r o t e i n s and a t h e r o s c l e r o s i s . Pharmaco. 1 Toxico1 .6 2 :2 4 3,1 9 8 8 . 1 ) Chao ,Y .S .,P i c k e t t,C .B . , Yamin,T .T .,Guo, 2