平成19年度科学研究費補助金実績報告書（研究実績

平成１９年度科学研究費補助金実績報告書（研究実績報告書)
1. 機
関
番
号 ３ ２ ６ ０ ４
3. 研 究 種 目 名 基 盤 研 究 (C)
5. 課
題
番
2. 研 究 機 関 名
大妻女子大学
4. 研 究 期 間
平成１９年度
～
平成２０年度
号 １ ９ ５ １ ０ １ １ ９
6. 研 究 課 題 名 凍 結乾燥可能なＤＮ Ａ複合体の調製と固形製剤による新規遺伝子導入システムの 創製
7. 研 究 代 表 者
研 究 者 番
号
研 究 代 表 者 名
所
属
部
局
名
職
名
ﾌﾘｶﾞﾅ ｺﾔﾏ,ﾖｼﾕｷ
０ ０ １ ６ ２ ０ ９ ０
小 山 ,義 之
家政学部
教授
8.研 究 分 担 者 (所 属 研 究 機 関 名 に つ い て は 、 研 究 代 表 者 の 所 属 研 究 機 関 と 異 な る 場 合 の み 記 入 す る こ と 。 )
研 究 者 番 号
研 究 分 担 者 名
所属研究機関名・部局名
職
名
ﾌﾘｶﾞﾅ
ﾌﾘｶﾞﾅ
ﾌﾘｶﾞﾅ
ﾌﾘｶﾞﾅ
ﾌﾘｶﾞﾅ
9. 研究実績の概要
我 々 は 、 HAで 保 護 さ れ た DNA/PEI複 合 体 は 、 活 性 を 維 持 し た ま ま 凍 結 乾 燥 す る こ と が で き 、 再 水 和
後 も 安 定 に 分 散 す る こ と を 最 近 見 出 し た 。 本 研 究 で は 、 極 低 濃 度 で DNA、 PEI、 お よ び HAを 混 合 し 、 得
ら れ る 微 小 な 三 元 複 合 体 を 凍 結 乾 燥 し 、 少 量 の 水 を 加 え て 高 濃 度 の DNA複 合 体 超 微 粒 子 分 散 液 を 調 製
し 、 そ の in vivo で の 遺 伝 子 発 現 に つ い て 検 討 し た 。
HAを 加 え て い な い DNA/PEI二 元 複 合 体 は 凍 結 乾 燥 ・ 再 水 和 す る と 培 養 細 胞 に 於 け る 発 現 効 率 が 極 端
に 低 下 し た 。 一 方 DNA/PEI/HA三 元 複 合 体 は 凍 結 乾 燥 後 で も 凍 結 乾 燥 前 と 同 等 の 高 い 遺 伝 子 発 現 を 示 し
た 。 凍 結 乾 燥 し た 複 合 体 は 、 さ ら に 4℃ で 5週 間 保 存 し た 後 で も 、 フ レ ッ シ ュ な も の と 同 等 の 発 現 効 率
を 示 し た [DNA]=10μ g/ml以 下 の 濃 度 で 調 製 し た DNA複 合 体 は 、 そ の 60%(in volume)以 上 が 直 径 100nm以
下 の 微 細 な 粒 子 で あ っ た 。 こ れ ら を 凍 結 乾 燥 し 、 [DNA]=200μ g/mlで 再 水 和 す る と 、 HAで コ ー ト し て
い な い 二 元 複 合 体 は ほ と ん ど が 数 百 nm以 上 の 凝 集 に な っ た の に 対 し て 、 HAで コ ー ト し た DNA/PEI/HA三
元 複 合 体 は 、 再 水 和 後 も 60%が 100nm以 下 の 微 粒 子 の ま ま で あ っ た 。
この小さな三元複合体を担癌マウスの尾静脈内に投与すると、腫瘍内で非常に高い遺伝子発現が見
ら れ た 。 HAコ ー テ ィ ン グ に よ る 副 作 用 の 低 減 、 粒 子 サ イ ズ の 小 さ さ に 加 え 、 HAの 持 つ 腫 瘍 細 胞 へ の 細
胞 特 異 的 な 接 着 効 果 、 被 転 写 効 率 の 改 善 効 果 が 効 率 の 良 い in vivo で の 発 現 を も た ら し た も の と 考
えられる。
10. キ ー ワ ー ド
(1)核 酸
(4)遺 伝 子 治 療
(7)
(2)ナ ノ バ イ オ
(5)凍 結 乾 燥
(8)
(3)バ イ オ テ ク ノ ロ ジ ー
(6)