第31-2号 - 東京都健康安全研究センター

-r~ω 句〉
1
:1
1
1ぞ
CODEN:TREN
AF
東京都立衛生研究所
品2
研
年 報
~
ANNUALREPORT
OF
TOKYOMETROPO
L
I
TANRESEARCH
LABORATORYOF PUBLIC HEALTH
3
12
1980
東京衛研年報
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
R
e
s
. L
a
b
. P. H
.
71~二ノノ
CODEN:TRENAF
ANNUALREPORT
OF
TOKYOMETROPOLITANRESEARCH
LABORATORY OF PUBLIC HEALTH
東京衛研年報
Ann.R
e
p
.TokyoMetr
R
e
s
. L
a
b
. P
. H.
序
8
0
年代という新しい年代に入り，私達をとりまく社会情勢は大きく変化しております.過去
20年にわたる高度成長による科学の発展は，ややもすると人聞社会に対し思いもよらぬ影響を
与えております.健康を障害する要因は多様化，複雑化の様相を呈し，環境衛生，食品衛生，
それに大気汚染関連問題等日毎に増しております.このため当研究所としてもその内容の質的
な変化が要求され，これに充分対応出来る機能を整備し近代的研究設備を十二分に活用し，各
分野の試験検査と各種の調査研究を行うと共に，都民の健康保持について今日的問題ばかりで
なく 1
0
年先，さらに将来の問題を考えながら研究に取り組んでおります.
さてここに昭和5
4
年度の当研究所の研究成果を研究年報第3
1号として集録刊行することが出
来ました.ここに掲載された各課題は，当所研究員の苦労の結晶であります.特に試験検査に
かかわる研究成果，あるいは行政指導に関連のある調査研究が多いと思います.各地方衛生研
究所，また都区の試験検査，行政指導にも活用願えれば辛いと存じます.
昭和 5
5年 1
2月
東京都立衛生研究所長野牛
弘
1
目 次
報 文
オノレトフェユノレフェノ{ルのラットにおける急性経口毒性試験
・
・ ・・
.
.
.
.
.
・ ・-…・田山
H
優性致死試験法の開発
H
邦昭，井口
H
1.長期投与優位致死試験'
…・・平賀輿吾，小豚昭夫，吉田誠二，安藤
重孝，平賀輿吾…・・・
1
弘 ， 久 保 喜 一 ， 益 淵 正 典 ・・ 7
H
H
オルトフ且ユノレフェノールナトリウムのラットにおける長期投与優性致死試験
.
.
小i
勝昭夫，安藤
弘，久保喜一，平賀輿吾...... 1
7
.
.
.
.
・ ・
H
チアベンダゾ{ルのラヅトを用いた急性経口毒性試験
・・・三栗谷久敏，林間
チアベ γダゾ{ノレ
志信，高橋
博，平賀輿吾…・・・ 20
(
T
B
Z
)の突然変異誘起性に対ずるジブチルヒドロキジトノレェシ (BHT)の影響
-…・藤田
博，平賀輿吾…・・・ 2
6
・…・藤田
9
博，平賀輿吾…... 2
4種のかび防止剤の組み合わせによる突然変異誘起性
クロム鉱さい粉じんのラットによる 3か月間持続吸入実験(第 1報〉体重，器官重量，組織学的変化につ
い
て
・
…
.
.
.
.
・ ・
.
.
.
.
.
・ ・
.
.
.
.
.
・ ・
.
.
.
.
・ ・
… ・・
.
.
.
.
.
・ ・...坂本義光，神谷信行，池間虎雄，平賀興吾…... 3
3
H
H
H
H
H
H
H
クロム鉱さい粉じんのラットによる 1か月間持続吸入実験特に吸入後の回復について
…坂本義光，神谷信行，池田虎雄，平賀輿吾・….. 4
3
クロム鉱さい粉じんのラットによる 3か月間持続吸入実験(第 2報) クロムの体内分布
1
-…・・神谷信行，坂本義光，中尾順子，平賀輿吾...... 5
アデニレートシグラ{ゼにおよほ.すバナデートの影響
…
.
.
.
・ ・..中川敦子，中尾 j
順子…… 5
4
H
ラット尿中蛋白質(第 4報
〉
カドミウム投与ラットの尿中遊離アミノ酸の分析
原子…… 5
7
.
.
・ ・-樺島順一郎，中尾 j
H
ポリ塩化ピフェエ{ル (PCB) の肝薬物代謝酵素誘準作用に関する若干の考察
・
・ ・・
.
.
.
・ ・
.
J
I
I野澄江，平賀輿吾・…..6
1
H
ジブチルヒドロキシトノレエン
H
H
(BHT)の高脂肪食，無脂肪食投与肝に対する影響
7
……福森信隆，平賀輿吾…・・・ 6
肝グノレタチオンに対するジブチルヒドロキシトノレエシの影響
.
.
・ ・-…中川好男，中尾順子，平賀輿吾…… 7
7
H
ジプチルヒドロキシトノレエン
(BHT)摂取ラットの出血に対するエストロゲンの効果
1
関子，平賀輿吾 ・・79
.
.
・ ・..鈴木英子，中尾 1
H
H
H
ジブチノレヒドロキシトノレエ γ(BHT)の幼若マウス赤血球膜浸透圧抵抗におよぼす影響
…市川久次，小林博義，中尾 1
1
照子 ・・8
1
H
H
血液の保存期間延長に関する研究
.
.
.
.
・ ・...長井二三子，中尾順子，中尾
H
真
…
・
・
・ 8
5
2
培養細胞を用いた変異原物質スグリーニシグのための代謝活性化法の検討
既知変異原物質による染色体臭常及び姉妹染色分体交換 (SCE)誘発への代謝活性化の影響
・・・縄井寿美子，吉田 誠二，中尾順子，平賀 輿吾・…・・ 8
9
ジブチルヒドロキシトノレェ γ(BHT)投与ラットの肝 9，
000xg上清 (
S
9
)分画による突然変異物質の
代謝活性化について...・ ・
.
.
.
・ ・・・
.
.
.
.
・ ・
.
.
…
・
…
.
.
.
・ ・
.
.
.
.
.
・ ・....小嶋昭江，藤田
博，平賀輿吾・…・・ 9
6
H
H
H
H
H
H
H
培養細胞による変異原スクリーニングテスト
…・・佐々木美枝子，中尾順子，平賀輿吾… .
.
.
9
9
アセトアミノフェンおよびその関連物質の細胞遺伝学的研究
…・…吉田誠二，縄井寿美子，平賀輿吾 .
.
.
.
.
.
1
0
2
LASによるマウス抗体産生の抑制jについて
…・佐々木美枝子，中尾 順子…・・・ 1
0
9
pγ 酸トリー n
ープチルの雄性ラットにおよぼす影響
…・大石向江，大石真之，平賀輿吾・… .
.
1
1
5
低温下におけるラット死後変化の経時的観察
.......多田幸恵，矢野範男，湯海勝康，長湾関道，藤井
孝 ， 平 賀 輿 吾 ・・
1
1
8
H
H
経胎盤法・新生仔投与法によるマウス発癌試験(予備的考察〉
.
・ ・
.
.
.
.
.
・ ・-佐々木美枝子，中尾順子，平賀輿吾 .
.
.
.
.
.
1
2
7
H
H
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
1
3
幻1
学 会 発 表.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
1
3
岱3
他誌発表….....・ ・
.
.
.
・ ・
…
・
H
H
3
CONTENTS
REPORTS
AcuteO
r
a
lT
o
x
i
c
i
t
yo
fo
.
P
h
e
n
y
l
p
h
e
n
o
l (OPP) i
nR
a
t
s
…K.Tayama，S
.I
g
u
c
h
iandK
.H
i
r
a
g
a
.
.
.… 1
Improvemento
ft
h
eM巴t
h
o
d
si
nDominantL
e
t
h
a
lTest L DominantL
e
t
h
a
lTestw
i
t
hLong
TermA
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
n
.K
.Hiraga，A.Ogata，S
.Yoshida，H. Ando，Y.KuboandM. M
a
s
u
b
u
c
h
i
.
.
.… 7
DominantL
e
t
h
a
lT
e
s
t
so
fLongTermA
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
nw
i
t
hSodiumo
.
P
h
e
n
y
l
p
h
e
n
o
l(OPP.Na)i
nRats
.
.
.
.
.
.
A
.Ogata，H.Ando，Y.KuboandK
.H
i
r
a
g
a
.
.
.… 17
AcuteO
r
a
lT
o
x
i
c
i
t
yTesto
fT
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
ei
nR
a
t
s
.H.Mikuriya，S
.Hayashida，H.TakahashiandK
.H
i
r
a
g
a
.
.
.
…20
E
f
f
e
c
to
fB
u
t
y
l
a
t
e
dH
y
d
r
o
x
y
t
o
l
u
e
n
eont
h
eM
u
t
a
g
e
n
i
c
i
t
yo
fT
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
ei
nt
h
e
S
a
l
m
o
n
e
l
l
a
/
M
i
c
r
o
s
o
m
eTest
…
.H.FujitaandK. Hiraga...… 26
M
u
t
a
g
e
n
i
c
i
t
yo
fP
a
i
r
e
dF
u
n
g
i
c
i
d
eM
i
x
t
u
r
e
si
nt
h
eSalmonella/Microsome Test
.H
i
r
a
g
a
.
.
.
.
.
.H.F
u
j
i
t
aandK
…29
l
n
h
a
l
a
t
i
o
nExperim
巴n
t
so
fChromiteOreR巴s
i
d
u
eDustt
oR
a
t
sf
o
r3Months (1)
BodyWeight，OrganWeightandH
i
s
t
o
l
o
g
i
c
a
lChanges
.Y.Sakamoto，N. Kamiya，T. I
k
e
d
aandK
.H
i
r
a
g
a
.
.
.
…33
I
n
h
a
l
a
t
i
o
nE
x
p
e
r
i
m
e
n
t
so
fChromiteOreR
e
s
i
d
u
eDustt
oR
a
t
sRecoverya
f
t
e
r1MonthExposure
Y.Sakamoto，N.Kamiya，T. I
k
e
d
aandK
.H
i
r
a
g
a
.
.
.
…
.
…43
日
l
n
h
a
l
a
t
i
o
nExperimento
fChromiteOreR
e
s
i
d
u
eDustt
oR
a
t
sf
o
r3Months (
I
I
)
D
i
s
t
r
i
b
u
t
i
o
no
fChromiumi
nt
h
eRat
.N.Kamiya，Y.Sakamoto，T.NakaoandK
.H
i
r
a
g
a
.
.
.
…51
E
f
f
e
c
t
so
fVanadateonA
d
e
n
y
l
a
t
eC
y
c
l
a
s
ei
nRatB
r
a
i
n
…54
.A.Nakagawaand T.N
a
k
a
o
.
.
.
P
r
o
t
e
i
ni
nRatUrine (
IV) A
n
a
l
y
s
i
so
fFreeAminoAcidi
nt
h
eUrineo
fRatT
r
e
a
t
e
d
S
u
b
c
t
a
n
e
o
u
s
l
yw
i
t
hCadmiumC
h
l
o
r
i
d
e
.J
.KabashimaandT. Nakao..・・57
H
SomeC
o
n
s
i
d
e
r
a
t
i
o
n
si
nt
h
el
n
d
u
c
t
i
o
no
fH
e
p
a
t
i
cDrugO
x
i
d
a
t
i
o
nEnzymesProducedby
P
o
l
y
c
h
l
o
r
i
n
a
t
e
dB
i
p
h
e
n
y
l
s (PCB)
.S
.KawanoandK
.Hiraga…
… 61
c
t
so
fB
u
t
y
l
a
t
e
dH
y
d
r
o
x
y
t
o
l
u
e
n
e(BHT) onRatL
iv
e
rC
e
l
l
sbyFeedingw
i
t
hD
i
e
t
sDi
任e
r
e
d
E妊e
Fat C
o
n
t
e
n
t
N.FukumoriandK
.Hiraga・
.
. ・67
…
H
E
f
f
e
c
t
so
fB
u
t
y
l
a
t
e
dH
y
d
r
o
x
y
t
o
l
u
e
n
eont
h
eL
e
v
e
l
so
fL
iv
e
rG
l
u
t
a
t
h
i
o
n
e
Y.Nakagawa
，T.NakaoandK
.H
i
r
a
g
a
.
.
.
…
…77
E
f
f
e
c
t
so
fE
s
t
r
o
g
e
nonHemorrhagel
n
d
u
c
e
dbyB
u
t
y
l
a
t
巴dH
ydroxytoluene (BHT) i
nRats
.
.
.
H
.S
u
z
u
k
i，T.NakaoandK
.H
i
r
a
g
a
.
.
.… 79
4
E
f
f
e
c
t
so
fB
u
t
y
l
a
t巴dH
y
d
r
o
x
y
t
o
l
u
e
n
e(BHT)o
nO
s
m
o
t
i
cF
r
a
g
i
l
i
t
i
e
so
fE
r
y
t
h
r
o
c
y
t
e
si
nI
n
f
a
n
tM
i
c
e
H
.I
c
h
i
k
a
w
a，H
.K
o
b
a
y
a
s
h
ia
n
dT
.N
a
k
a
o
.
.
. 8
1
…
…
S
t
u
d
i
e
so
nP
r
o
l
o
n
g
a
t
i
o
no
fP
r
e
s
e
r
v
a
t
i
v
eP
e
r
i
o
do
fB
l
o
o
d
・
. ・
.
.
…F
.N
a
g
a
i，T
. Nakaoa
n
dM. N
a
k
a
o
.
.
.
.
・・ 8
5
H
巴巴 n
i
n
go
fM
u
t
a
g
e
n
so
n
E
x
a
m
i
n
a
t
i
o
no
fM
e
t
h
o
d
sb
yM
e
t
a
b
o
l
i
z
eA
c
t
i
v
a
t
i
o
nw
i
t
hS
9Mixf
o
rS
c
r
・K
1C
e
l
lL
i
n
e I
n
d
u
c
e
dS
i
s
t
e
rC
h
r
o
m
a
t
i
dE
x
c
h
a
n
g
e(SCE)a
n
dChromosom
巴 A
b
e
r
r
a
t
i
o
n
CHO
b
yM
e
t
a
b
o
l
i
z
e
dM
u
t
a
g
e
n
s
.
.
S
.N
a
w
a
i，S
.Y
o
s
h
i
d
a
，T
. Nakaoa
n
dK
.H
i
r
a
g
a
.
.
. 8
9
…
M
t
i
t
a
g
e
n
i
cA
c
t
i
v
a
t
i
o
no
fM
u
t
a
g
e
n
i
cC
h
e
m
i
c
a
l
sbyL
i
v
e
r9
，
0
0
0xgSi
.
1p
e
n
i
:
a
t
a
r
i
fF
r
a
c
t
i
o
n
sf
r
o
m
B
u
t
y
l
a
t
e
dH
y
d
r
o
x
y
t
o
l
u
e
n
巴(
BHT)・t
r
e
a
t
e
dR
a
t
s
.F
u
j
i
t
aa
n
dK
.H
i
r
a
g
a
.A
.K
o
j
i
m
a，H
… 96
I
nv
i
t
r
oS
c
r
e
e
n
i
n
gT
e
s
to
fM
u
t
a
g
e
n
so
nC
u
l
t
u
r
e
dC
e
l
l
s
…
.
.M.S
a
s
a
k
i，T，Nakaoa
n
dK
.H
i
r
a
g
a…… 9
9
C
y
t
o
g
e
n
e
t
i
cS
t
u
d
i
e
so
fA
c
e
t
a
m
i
n
o
p
h
e
n
.a
n
d1
t
s.
R
e
l
a
t
e
dCompounds
.Nawaia
n
dK
.H
i
r
a
g
a…… 1
0
2
.S
.Yo
s
h
i
d
a，S
I
m
i
ni
.
1h
o
s
u
p
p
r
e
s
s
i
v
eE
f
f
e
c
to
fL
A
S
t
r
e
a
t
e
dA
n
t
i
g
e
no
nM
i
c
e
“
・
・1
0
9
.
.
.
M
.S
a
s
a
k
ia
n
dT
.N
a
k
a
o
.
.
.
.
r
i
T
o
x
i
c
i
t
y0fT
口.
.
…
.
.
…
.
日
.
.
…
.
日.
…
.
.
…
.
リ..H.Oi
お
s
h
社
i
i
，S~ O
i
s
h
ia
n
dK
.H
i
r
a
g
a
.
.
.…1
1
5
O
b
s
e
r
v
a
t
i
o
n
so
fP
o
s
t
m
o
r
t
e
mC
h
a
n
g
e
si
nC
o
u
r
s
eo
fTimeo
nR
a
t
sk
e
p
ti
nLowT
e
m
p
e
r
a
t
u
r
e
.Y
.Tada
.
，N.Y:
a
no，K
. Yuzawa
，A
.N
a
g
a
s
a
w
a
，T~ F
u
j
i
ia
n
d1ζHiraga
… 118
C
a
r
c
i
n
o
g
e
nB
i
o
a
s
s
a
yi
nM
i
c
e
P
r
e
l
i
m
i
n
a
r
yE
x
p
e
r
i
m
e
n
t
so
nT
r
a
n
s
p
l
a
c
e
n
t
a
la
n
dN
e
o
n
a
t
a
lT
r
e
a
t
m
e
n
t
s
o
fT
e
s
tS
u
b
s
t
a
n
c
e
.M.S
a
s
a
k
i
，T.N:
a
k
a
oa
n
dK
.H
i
r
a
g
a
… 127
.
.
.
・ ・
.
.
.
.
.
・ ・
.
.
.
.
.
・ ・・・
.
.
.
.
.
・ ・
.
.
… ・・
.
.
・ ・
.
.
1
3
1
SUMMARIESOF PAPERSINOTHERPUBLICATIONS…
H
H
H
H
H
H
H
H
H
THEMES PRESENTEDATCONFERENCESANDSOCIETYMEETINGS・
. ・・・
.
.
…
.
.
.
・ ・
.
.
…
.
.
.
・ ・
.
.
1
3
3
H
H
H
H
H
文
報
REPORTS
来京衛研年報
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.Lab.P
.
H
.，~1-2， 1
6，1
9
8
0
オルトフェニルフェノールのラ'"トにおける急性経口毒性試験
田山一邦昭*，井口重孝*，平賀興吾*
AcuteOralToxicityof 0・
PhenylphenolCOPP) inRats
KUNIAKI TAYAMA*，SHIGETAKA IGUCHI*a
n
dKOGOHIRAGAキ
Keywords:オルトフェニノレフェノール
c
i
d
e
四
言
緒
Op
h
e
n
)
ヤhenol，急性毒性
a
c
u
t巴 t
o
x
i
c
i
t
y，ラット r
a
t，防ばい剤 f
u
n
g
i
開
12g
，雌1
0
3土 5gであった.
かんきつ類の防ばい剤として使用されているオルトフ
投与量・匹数:予備試験により適当と思われる最小お
ェニルフェノールおよびそのナトリウム塩〈以下 OPP
よび最大濃度を設定し，その間を 5段階とし，さらに溶
および OPP-Na とする〉の毒性評価の一環として，前
媒対照を設けた.投与匹数は各群 5匹とした (
T
a
b
l
e1
)
.
事長1)において， OPP-Naのラットにおける急性経口毒性
投与方法:体重測定後午前 1
0時ーから 1
0時3
0
分までの間
について報告した.今回， OPPについて急性経口毒性
に検体を胃ゾンデにて強制経口投与した. 5
4
0
0mgjkg
を同一系統のラットを用いて検討したので報告する.
投与群は結晶が析出したため加温溶解して行った.投与
本実験では使用動物数を各群 5匹用いて行った.この
3時間後より餌を与えた.
50%致死量 (LD50) の信頼性について検討するため，動
観察・検査.生死の観察は投与後2
4
時間までは 3
0
分毎
物数を 3倍にして再実験を行い，使用動物数が各群 1
5
匹
8
時間まで 2時間毎に， 3日以降は朝夕 2回行
に，以降 4
と 5匹の場合での LD
5
0値の相違について考察した.
った.死亡ラットは直ちに剖検を行い，生存ラットは 1
5
日目に断頭屠殺し，血液学的・血清生化学的検査および
実験材料ならびに方法
1
. 検体および実験動物
検体:OPP はダウケミカル社製の D
o
w
i
c
i
d
e1(
L
o
t
剖検を行った. '
&
I
J
検時，全身器官組織を肉眼的観察後，
緩衝ホルマリシ閤定，死亡例の一部について
直ちに 10%
4
1
9
6A)を用い，投与容量がすべて 10mljkg
N
o
.M M0
は常法に従い H-E染色を施し，組織学的検索を行った.
体重となるように，約 600 に加湿したオリーブ泊に溶解
. 実験 1は各群 5匹の動物数で LD50値を算出
実験 2
した.この LD
50値の検討として，同一週令の雄ラット
調製し，室温にもどして使用した.
i
s
h
e
r系ラット (F344jDuCrj)雌雄を日
実験動物 :F
を用い，動物数を 1
5
匹にして実験を行った.動物の群分
4週間飼
け
， 投与方法は実験 1と同様で， 投与量は 3800~1400
育後 (8週令時〉のものを実験に供した.ラットは投与
mg/kg間を 5段階とした (
T
a
b
l
e5
)
. そして各群 1
5匹を
前日午前 5時より除餌(飲水は自由〉しておいた.
用いた 1つの実験を 5匹用いたそれぞれ独立した 3つの
本チヤールス・リバー社より 4週令時に購入
5土10，湿度 5
5土5%，換気毎時 1
0回
，
飼育条件:室温2
実験 A， B， Cグル{プに分け，それぞれの LD
50値の
照明午前 6時から午後 5時の飼育室において，ステンレ
相違を合わせて検討した.グループ A， B， Cの選定は
スケ{ジ〈前面，床網; 4
0x25x16.5cm)に 5匹ずつ収
無作為に行った.一夜絶食後投与日の全体の平均体重は
容
， 日本 Fレア製 CE
ー
2固型飼料および細菌ろ過器経由
1
6
3土 10g
であった.
水道水を自由に摂取させた.
1
1
. 実験方法
実験
1
. 動物の群分 l
ナ:ラットは投与一週間前に体重
LD50値は実験 ，
1 2ともに 1
4日間の死亡率からLit
c
-
i
Vi
l
c
o
x
o
n法2)で算出した.算出にあたって，最小
h
f
i
e
l
dベ
2乗法 (
p
r
o
b
i
t法コンピューター・プログラム〉でで、求め
を層別化し，各濃度群(以下群とする〉へ無作為にわり
た回帰式をLi抗t
c
ぬ
h
f
i
児e
l
d
当てた.このとき各群の平均体重の差が，雌雄ともに 2
g
用した直線を利用した.
の範囲となり，標準偏差も各群ほぼ近い値となった.一
週間後，一夜絶食後投与日の全体の平均体重は雄 1
4
4土
実験結果
実験
1
.
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
4
.
1
，H
yakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
k
u， Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
2
*東京都立衛生研究所毒性部
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
9
8
0
2
. M
o
r
t
a
l
i
t
yDatao
fR
a
t
sA
d
m
i
n
i
s
t
e
r
e
dO
r
a
l
l
yw
i
t
hOPP
Table1
R
a
n
g
e
.
F
i
n
d
i
n
gTest
Sex
Dose
mg/kg
I
n
i
t
i
a
l
bodyw
e
i
g
h
tl)
it
y (
N
o
.o
fd
e
a
t
h
s
)
MortaI
r
a
t
i
o
(
N
o
.d
o
s
e
d
)
Timeo
fd
e
a
t
h
a
f
t
e
rd
o
s
i
n
g(
h
r
s
)
Male
2
5
0
1
0
0
0
4
0
0
0
1
5
3土9
1
5
2土9
1
5
1土6
0
/
4
0
/
4
4
/
4
<24
Female
2
5
0
1
0
0
0
4
0
0
0
1
0
4土4
1
0
3土5
1
0
2土6
0
/
4
0
/
4
3
/
4
<26
I
n
i
t
i
a
l
bodyw
e
i
g
h
tl)
M
o
r
t
a
l
i
t
y (
N
o
.o
fd
e
a
t
h
s
)
r
a
t
i
o
(
N
o
.d
o
s
e
d
)
Timeo
fd
e
a
t
h
a
f
t
e
rd
o
s
i
n
g(
h
r
s
)
1
4
5土 1
2
4
1
4
5土 1
3
1
4
3土 1
2
1
4
5土 1
4
1
4
2土 1
1
1
4
5土 1
0
/
5
0
/
5
/
5
2
/
5
1
/
5
5
/
5
14-34
31
.5
2.5-17.5
0
/
5
0
/
5
2
/
5
2
/
5
4
/
5
4
/
5
29-30.5
19-26.5
20-70
2-35
F
u
l
lS
c
a
l
eT
e
s
t
Sex
Dose
mg/kg
02)
Male
1
0
0
0
1
4
0
0
2
0
0
0
2
7
0
0
3
8
0
0
02)
Female
1
4
0
0
2
0
0
0
2
7
0
0
3
8
0
0
5
4
0
0
。
1
0
0土5
1
0
3土4
1
0
4土4
1
0
3土3
1
'
0
7土7
1
0
2土6
.
D
.(
g
)
1
) o
v
e
r
n
i
g
h
tf
a
s
t
e
dr
a
t
s，mean土 S
2
) v
e
h
i
c
l
ea
l
o
n
e(
1
0m
l
/
k
gb
.w
.
)
R
a
t
so
fs
i
m
i
l
a
rbodyw
e
i
g
h
t，s
e
l
e
c
t
e
d7d
a
y
sb
e
f
o
r
ed
o
s
i
n
g，a
r
ei
d
巴n
t
i
f
i
e
danda
s
s
i
g
n
e
dr
a
n
d
o
m
l
yt
ot
h
e
vanousg
r
o
u
p
s
.
Table2
. LD50 o
fR
a
t
sA
d
m
i
n
i
s
t
e
r
e
dO
r
a
l
l
yw
i
t
hOPPI)
LD
叩 (
mg/kg)
C
o
n
f
i
d
e
n
c
el
i
m
i
t (p=0.05)
S
l
o
p
巴 f
u
n
c
t
i
o
n
C
o
n
f
i
d
e
n
c
el
i
m
i
t (p=0.05)
Male
2
6
0
0
1991-3395
1
.3
6
1
.06-1
.7
3
Female
2
8
5
0
1946-4173
1
.
7
0
1.05-2.75
1
) LD
asc
a
l
c
u
l
a
t
e
dbyt
h
eL
it
c
h
f
i
e
l
d
.
W
i
l
c
o
x
o
nm
e
t
h
o
d
.
50 w
初期体重，死t数および LD
50 値予備実験および本
実験の投与日の体重，
死亡数，死亡時期と LD
50値を
Table1
，2に示した.投与前日までの平均体重，標準偏
差は，雌雄の各群でよく揃っていたが，絶食後投与日の
LD50値は雄 2600mg/
k
g，雌 2850mg/kgとなり，性差は認められなかった〈危
が，ほほ.時間内で分散していた
険率 5%).
一般症状
自発運動の低下および流涙は雌雄ともほぼ
体重は雌でやや不揃いとなった.死亡時期は雌雄ともに
共通で，投与直後より数時間にわたってみられ，とくに
投与後 2~35時間以内であり，雌 1 例が 70時間で死亡し
高濃度群で顕著であった.この自発運動の低下の認めら
た.死亡の多発時期は例数が少ないためはっきりしない
れたラットは外部刺激〈音・痛覚〉に対して鈍であった
東京術研年報 3
1
2，1
9
8
0
3
に糞塊等の付着が一部認められた.投与 2日後では数例
Ma1e Fema1e
1
4
0
で自発運動が強度に低下していた. 3日後以降上記の異
常音，
外見上の汚れ等はみられなくなり回復がみられ
た.糞便性状は軟便や下痢様使等も中・高濃度群にやや
多く散見されたが，一過性で 3日後以降ほとんど認めら
れなかった.
2
2
0十 1
2
0
4日間生存したラットの濃度別の体
体重変化 投与後1
重変化を F
i
g
.
1に示した.各群ともに，対照群雌雄と，
、
)
。
1000mg/kg投与群雄， 1400mg/kg 投与群雌を除き， 1~
{
2日まで下降し，その後上昇へ向った.期間中は対照群
みJ
。・、
旦
に雌雄とも近づく傾向をみせた.
r
i
+100
ω
32
0
0
。
剖検所見雌雄差，投与濃度に関連した所見はあまり
q
同
h
コ
みられず，死亡例では，副腎はほとんどすべての例で腫
大し，赤味を帯びていた.胃は前胃部では罪薄化し，腺
胃部では被援が消失し，扇平となり，一部では直径 1mm
以下の点状出血が確認された.また胃内に少量ガスの貯
留が認められた例もあった.胃内容物は摂取した餌と油
1
8
0
の混合した粘性褐色物中に， OPP の結晶と思われる白
色の塊が認められた.小腸は外見上，十二指腸側が褐色，
盲腸側とくに回腸が暗緑色を呈し，この暗緑色域は血液
が混さ.っている様な黒褐色および黒紫色のベ{スト様物
が詰っていた.盲腸はやや拡張したものも一部みられた.
工60
その他肝臓が黒色調を増し，腎では皮髄境界部，乳頭部
が赤くなっていた.
屠殺例では雌雄ともほとんど変化はみられなかった.
顕微鏡所見死亡例について無作為に取り出した雌雄
各群一例について鏡検した結果，ほぽ共通に認められた
1
4
0
変化は，腎臓では乳頭部の巣状壊死および集合管腔の拡
l
中
VA
25
S
2
0
-
1
0
a
February
1
9
8
0
5
コ
戸
15
。
D
130
March
. Changeso
fMeanBody Weightso
fS
u
r
.
F
i
g
.1
v
i
v
a
lR
a
t
sA
d
m
i
n
i
s
t
e
r
e
dO
r
a
l
l
y with OPP: 0
(
c
o
n
t
r
o
l
:+
)
， 1
0
0
0(
ム
)
， 1
4
0
0(A)，2
0
0
0(
口
)
， 2
7
0
0
(
圃
)
， 3
8
0
0(0)， o
r5
4
0
0
(
・)mg/kgb
.w
. Arrow
i
n
d
i
c
a
t
e
st
h
eday o
fs
i
n
g
l
e
d
o
s
ea
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
n
.
V
a
l
u
e
sa
r
et
h
emeanso
f1
5r
a
t
s
.
張，上皮細胞の壊死が認められ，尿細管は部分的に上皮
細胞の脱落および核の消失がみられた.またエオジン濃
染の均一無構造の物質が尿細管肢に多く認められ，これ
よりもやや淡染のものが集合管腔に認められた.肝臓で
は，小禁中心帯の肝細胞に粗大な空胞が認められ，また
散在性に肝細胞の萎縮がみられた.副腎では網状層細胞
の腫大が著しく，網状層から束状層の部分にかけて，一
部出血が認められた.胃および腸管では粘膜上皮の脱落
が顕著に認められた.
5日目の屠殺例
血液学的・血清生化学的検杢投与後 1
が，正向反射の消失はみられず，ケ{ジの隅で背を丸め
について行った結果を Table3
，
4に示した.高濃度群は
うずくまるものも認められた.さらに重篤なものでは歩
雌雄ともバラツキが大となったが，ほぽ対照群と近い値
行困難となり，静止状態で腹臥姿勢をとり，呼吸数の低
を示した.
下がみられ死亡した.その他投与濃度にあまり関連が認
.
実験 2
められなかったものとして，立毛，異常音〔クッグッグ
使用動物数と LD
50 値 実 験 1で使用動物数を各群 5
ッ〉の発声あるいは口，鼻周囲に淡褐色や赤褐色(赤褐
匹としたが，雄で死亡率が 0，
100%を除き，対数確率紙上
色液は潜血+)， 陰門周聞に淡褐色の汚れ，
2点しか得られなかった.この条件で L
i
t
c
h
f
i
e
l
d
-Wilco・
また紅門部
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，3
1
2，1
9
8
0
4
Table3
. H
e
m
a
t
o
l
o
g
i
c
a
lExaminationo
fRatsa
t1
5Days a
f
t
e
rS
i
n
g
l
eO
r
a
lA
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
no
fOPP
唱﹄
Oし
4 - A T Q U Q U 1 ム Tム
0
1
4
0
0
2
0
0
0
Female
2
7
0
0
3
8
0
0
5
4
0
0
310
0
1
0
0
0
1
4
0
0
2
0
0
0
2
7
0
0
3
8
0
0
c
u﹀
t
I
乱1
a
l
e
d州 5 5 5 3 4 0
oa
NS
氾同
αイげ
D 叫
Sex
WBC
x103jmm
RBC
x106jmm
Hgb
g
j
d
l
Hct
MCV
μ
3
%
MCH
μμg
恥1CHC
%
32)8.14土 0.24
8
.
1
3土1.1
1
6
.
4土 0.38 4
5
.
1土 1
.
5
15
5
.
8土 0.45 2
0
.
2土 0
.
4
93
6
.
3土1.0
1
1
0
.
0土 2
.
9
67
.
6
6土 0
.
4
21
5
.
4土 0.84 4
2
.
6土 2
.
3
75
5
.
8土 0
.
4
52
0
.
2土 0.54 3
6
.
2土1.0
3
8
.
6
0土 1
.
1
07
.
3
5土 0
.
4
91
5
.
4土1.1
6 41
.3土 3
.
4
65
6
.
2土1.09 21
.0土 0
.
2
93
7
.
3土 0
.
4
7
11
.2土 2
.
2
6 7.68土0.17 1
5
.
9土 0
.
0
64
3
.
6土 0
.
3
55
6
.
7土1.1
52
0
.
7土 0
.
4
63
6
.
3土 0
.
1
2
9.85土 3
.
3
57
.
5
1土 0
.
9
61
5
.
9土 2.17 43.8土 7
.
6
75
8
.
0土 3.37 21
.2
土0
.
5
3 36.5土1.5
5
.
3
91
6
.
9土 0.54 46.3土1.82 5
6
.
8土1.89 2
0
.
5土 0
.
8
5 36.4土 0
.
5
0
6
.
8
0土 0.72 8.16土 0
.
8
3 7.84土 0
.
6
61
6
.
3土1.2
9 44.6土 3.47 5
6
.
8土 0.50 2
0
.
7土 0
.
2
93
6
.
5土 0
.
2
1
6
.
2
5土 0
5
.
6
0土 0.40 7
.
0
8土 0
.
7
71
4
.
5土 1
.
7
34
0
.
5土 3.80 5
7
.
3土 0.58 2
0
.
6土 0
.
3
83
5
.
8土1.1
5
7
.
0
6土 0
.
9
0 7.47土 0
.
3
31
5
.
4土 0
.
8
3 43.2土1.8
05
7
.
3土 1
.
1
52
0
.
3土 0
.
7
13
5
.
6土 0
.
6
6
9
.
1
8
.
4
1
1
7
.
1
45.6
5
5
.
0
2
0
.
3
3
7
.
3
6.2
7.08
1
4
.
0
3
8
.
9
5
5
.
0
1
9
.
8
3
5
.
9
a
t
ss
u
r
v
i
v
e
dd
u
r
i
n
gt
h
ep
e
r
i
o
do
fe
x
a
m
i
n
a
t
i
o
n
.
1
) Ther
2
) mean 土 S.D.
Table4
. SerumB
i
o
c
h
e
m
i
c
a
lExaminationo
fRatsa
t1
5Daysa
f
t
e
rS
i
n
g
l
eO
r
a
lA
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
no
fOPP
Sex
Dose No.o
fr
a
t
s
)
mgjkg sampled1
Male
FhuRυηonO 噌 よ 噌 上
0
1
4
0
0
2
0
0
0
Female
2
7
0
0
3
8
0
0
5
4
0
0
nu
1
0
0
0
1
4
0
0
2
0
0
0
2
7
0
0
3
8
0
0
に
UFDFhuqadA官
0
TP
g
j
d
l
UN
GLU
m
g
j
d
l
m
g
j
d
l
GPT
ALP
K-Ujml KA-Ujdl
m
g
j
d
l
CHO
ChE
l
l
p
H
.
1
32)1
3
4土4.8
6
.
4
2土 0
6
.
6
0土 0
.
2
1 1
4
1土 4
.
9
6
.
7
6土 0
.
3
6 1
5
8土 2
1
6.60土O
.1
0 1
4
6土 1
5
6
.
6
5土0.06 1
3
8土2
1
1
8
.
8土 0
.
8
1
8
.
8土 2.4
2
0
.
4土 2
.
1
1
9
.
6土1.2
.
1
1
9
.
2土 2
4
2
.
4土3.7
4
3
.
0土 3.4
41
.8土7
.2
4
2
.
6土 3.2
3
9
.
0土2.2
.
0
49.4土 2
4
7
.
2土 7
.
6
51
.4土 5
.
1
51
.3土 3
.2
51
.0土 4
.
5
2
.
4土 0
.
9
.
9
5
5
.
6土 2
.1
5
5
.
6土 6
.
3
5
6
.
0土 5
5
6
.
0土 3
.
3
0
.
1
4
8土 0
.
0
2
0
.
1
7
4土 0
.
0
2
O
.1
8
2土 0
.
0
2
0
.
1
5
0土 0
.
0
2
0
.
1
8
0土 0
.
0
3
1
3
1土 1
8
1
2
7土 1
2
1
2
7土 5
.
0
1
2
7土 6
.
7
1
5
4
1
3
3
.8土 3
.
8
21
1
9
.
8土 2.4
1
9
.
3土 5
.
5
1
9
.
7土 6.7
1
8
24
.6土 2
.
6
41
49.6土 1
1
4
8
.
0土 1
3
.7土 1
2
41
44
43
3
7
.
6土 2
.
9
3
2
.
6土 2
.
3
3
5
.
3土 4
.
9
3
4
.
7土 4
.
1
40
5
0
6
3
.
5土 1
3
9
5
5
.
2土 1
6
9
.
3土 14
6
6
.
7土 1
7
76
3
6
0
.
5
1
2土 0
.
0
6
.
1
1
0
.
5
7
8土 0
0
.
5
4
0土 0
.
1
5
0
.
5
1
7土 0
.
1
2
0.52
0.36
5
.
4
0土1.04
4
.
9
8土1.4
1
6
.
5
3土 0
.
5
1
5
.
7
6土0.92
6.6
6
.
5
。
a
t
ss
u
r
v
i
v
e
dd
u
r
i
n
gt
.
hep
e
r
i
o
do
fe
x
a
m
i
n
a
t
i
o
n
.
1
) Ther
2
) mean 土 S.D.
xon法より LD50偵を算出した.この値がどれくらい信
5
匹を用い，これを 3つ
頼できるかの検討として，各群 1
に分け， 5匹用いたそれぞれ独立した実験 A，B，Cと考
考 察
OPP の F
i
s
h
e
r系ラットにおける急性経口毒性につ
いて検討した結果，
LD50値は雄 2600mgjkg， 雌 2
8
5
0
えた場合と 1
5
匹用いた 1つの実験 T(=A+B+C)と考
mgjkgであり，前報1)の OPP.Naで明らかに性差が認
えた場合とで比較をした.その結果を Table5に示す.
められたのに対し， OPPでは認められなかった .OPp-
A， B， Cそれぞれ LD叩値 2
8
0
0，2
7
O
U，2240mgjkg，
Naの場合，雄で 1000mgjkg前後であり，約 2
.
6
倍高い
s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
n1
.8
5，1
.4
3，1
.7
5となり， Tは LD501
直
値を示した.また週令，系統，飼育条件等に差があるに
2550mgjkg，s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
n1
.6
5となり，それらの 95%
もかかわらず， Hodgeらの報告 3) の成熟雄ラットでの
信額限界は 1
5
匹用いた Tよりも 5匹用いた A， B， Cの
2700mgjkgと近い値であった.
方が広くなった.
一般症状は OPP.Naにおける腹部膨満や体重の特異
東京術研年報 3
1
2，1
9
8
0
5
Table5
. M
o
r
t
a
l
i
t
yandLDsof
o
rEachGroupso
fMaleR
a
t
sA
d
m
i
n
i
s
t
e
r
e
dO
r
a
l
l
yw
i
t
hOPP
G
r
o
u
p
s
2
)
Dose (mg/kg)
1
4
0
0
1
8
0
0
2
3
0
0
3
0
0
0
3
8
0
0
A
B
C
T
0
/
5
0
/
5
0
/
5
2
/
5
5
/
5
3
/
5
1
/
5
2
/
5
2
/
5
4
/
5
4
/
5
1
/
1
5
4
/
1
5
6
/
1
5
1
2
/
1
5
1
0
/
1
5
3
)
2
/
5
2
/
5
3
/
5
3
/
5
LDso (
m
g
/
k
g
)
1
)
C
o
n
f
i
d
e
n
c
el
i
m
i
t (p=0.05)
S
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
n
C
o
n
f
i
d
e
n
c
el
i
m
i
t (p=0.05)
2
8
0
0
1915-4094
1
.
8
5
0.88-3.88
2
7
0
0
2087-3493
1
.4
3
0.99-2.08
2
2
4
0
1641-3057
1
.7
5
1
.00-3.05
2
5
5
0
2133-3048
1
.6
5
1
.24-2.1
8
1
) LDsowasc
a
l
c
u
l
a
t
e
dbyt
h
eL
it
c
h
f
i
e
l
d
.
W
i
l
c
o
x
o
nm
e
t
h
o
d
.
2
) GroupT wasd
i
v
i
d
e
di
n
t
og
r
o
u
pA，B and C
.
3
) M
o
r
t
a
l
i
t
yr
a
t
i
o(
N
o
.o
fd
e
a
t
h
s
/
N
o
.d
o
s
e
d
)
な変動はみられず，流涙，自発運動の低下等がみられ，
が
， L
i
t
c
h
f
i
e
l
d
W
i
l
c
o
x
o
n法の対数確率紙上で， A，B，
巴らの報告と同様に昭吸数の低下が確
死亡例では Hodg
Cのそれぞれの用量一反応関係の結果へ Tの回帰式を適
認された.体重変動は投与後 1~2 日目まで下降し，そ
用したところ
の後上昇へ向った.死亡時期は 2~35時間以内にそのほ
はそれぞれ Tと同じ用量一反応直線を持つことができ，
とんどが死亡し，
1例のみが7
0時間で死亡した. Hodge
らの報告で4
8時間以内にほとんど死亡し，
1例が 6日目
f検定へ適合した.これより A， B， C
T と同じ LDso値 2550mg/kg，s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
n1
.6
5で
あると言える. 逆への適用つまり Tの結果へそれぞれ
で死亡としているのとほぼ同様の結果であり， OPP-Na
A， B， C の回帰式を適用したところ Bだけが
の 1週間以上経っても死亡がみられたのと対象的であっ
で不適合となった.
f検定
l
o
p
ef
u
n
c・
実験 1の結果と実験 2の T との比較では， s
た.
解剖・組織所見として死亡例で副腎の腫大(これは
t
i
o
nが1.3
6および1.6
5とやや異なる値であったが， LDso
OPP-Na でもみられた)，胃腸管粘膜の剥離，腎乳頭の
値は 2600mg/kgおよび 2550mg/kgと近い値となった.
巣状壊死，肝細胞の空胞化が認められた.なお OPP-Na
これについても上記と同様の検定に適合し，実験 1の雄
の胃に対する顕著な出血等は今回の OPPでは認められ
{
直2550mg/kg，s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
n1
.65であると
も LDsoI
ず，馬淵らりのパラオキ、ン安息香酸プチルのナトリウム
言える. 逆の適用では同様の検定に不適合となった.実
塩の胃に対する出血等から考えて強アルカリの作用と考
験 1の雄と実験 2のBでは用量一反応関係がやや不良で
あり，このような場合に，最小 2乗法を適用した用量一
えられた.
以上 OPP と OPP-Naではかなり違った急性毒性で
反応直線では他のグル{プに比べて少し異なった直線を
l
o
p巴f
u
n
c
t
i
o
nはやや異なったが， LDso値は対数
示し， s
あることが示された.
今回， OPPの急性経口毒性試験で， 使用動物数を各
確率紙上の中心部の値であり
s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
n が f検
群1
5
匹用いた実験 T (=A+B+C) とこれらを 3つに
定を満たす範囲で、変動しても，それ程影響を受けずかな
分け， 5匹用いたそれぞれ独立した実験と考えた場合で、
り良い値が得られると思われる.
Tは LDso値
以上より，急性毒性試験で各群 5匹の動物数を用いた
2
5
5
0
r
噌 /
kg， s
l
o
p巴 f
u
n
c
t
i
o
n1
.6
5で
， A， B， Cはそ
の LDso僚について比較を行った結果，
場合， a
l
lo
rnoneの反応であるためバラツキはやむをえ
れぞれ LDso値 2
8
0
0，2
7
0
0，2240mg/kg， s
l
o
p
ef
u
n
c・
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
nが異なることがある点や， 95%
信頼
ず
， s
t
i
o
n1
.85，1
.43，1
.7
5となり， 5匹という少ない動物数
限界が広くなることを除けば， 1
5匹用いた場合と LDso
信頼限界は広くなったが，
を用いた場合では， 95%
値に大差ないと思われる.
LDso
値
， s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
nは1
5
匹用いた値とかなり近い値とな
った. Table5の LDso値の算出は，最小 2乗法で、求めた
i
t
c
h
f
i
e
l
d
回帰式を L
まとめ
①オルトフェニノレフェノール (OPP) の急性経口毒性
を F
i
s
h
e
r 系ラット雌雄 (8週令，一夜給食〉を用い，
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.
3
1
2
.1
9
8
0
6
1
4日間，観察した.
2
.5
7
，1
9
7
9
②投与に伴い自発運動の低下，流涙がみられた.死亡
は 2~35時間以内に起こり，副腎の腫大，腎乳頭部の壊
死，肝細胞の空胞化が認められた.
③ 50%
致死量 (
1
4日〉は雄 2
.
6
0
0
m
g
/
k
g
. 雌2
.850mg/
2
)L
i
t
c
h
f
i
e
l
d
，}
.T.}
r
.
.andWilcoxon，F
.:J
.Phar-
ρ.Thera
ρ
.
.9
6
.9
9，1
9
4
9
m
a
c
o
l
. Ex
3
) Hodge，H.C
.，Maynard，E
.A
.
.B
l
a
n
c
h
e
t，H.}.}
r
.
.
.
.andRowe，
V.K
.:J
.Pharmacol.
S
p
e
n
c
e
r，H.C
ρ
.
.1
0
4，2
0
2，1
9
5
2
E
x
t
e
r
. Thera
k
gであった.
④使用動物数と LD
5
0値の関係についての考察を加え
4
) 馬淵依子，川野澄江，藤田博，水尾昭江，樺島1
1
民
一郎，中尾1
1
原子，平賀輿吾.-東京衛研年報， 2
6
2，
た.
文
献
1
)田山邦昭，井口重孝，平賀輿吾東京衛研年報， 3
0
1
0
3，1
9
7
5
東京術研年報 A
nn.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，7
1
6，1
9
8
0
優性致死試験法の開発
1
.長 期 投 与 優 性 致 死 試 験
平賀輿吾ぺ小勝昭夫*，吉岡誠ニペ安藤
弘*
久保喜一ペ益淵正典料
ImprovementoftheMethodsinDominantLethalTest 1
. DominantLethal
TestwithLongTermAdministration
ぺ AKIOOGATA*，SEIJI YOSHIDAペHIROSHIANDO*，YOSHIKAZUKUBO*
KOGOHIRAGA
a
n
dMASANORIMASUBUCHI**
o
r
n
i
n
a
n
tl
e
t
h
a
lt
e
s
t， 長期投与 l
o
n
gt
e
r
r
na
d
r
n
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
n， エチノレメタシスルホネ
Keywords:優性致死試験 d
t
h
y
l
r
n
e
t
h
a
n
e
s
u
l
p
h
o
n
a
t
e，マイトマイシソ C r
n
i
t
o
r
n
y
c
i
nC，マウス r
n
o
u
s
e
{ト e
優性致死現象とは，雌雄のどちらかに由来する配偶子
材料および方法
実験動物と飼育条件雌雄とも JCL/ICRマウス
(卵あるいは精子〉のゲノムに変化が起ったため受精卵
が途中で発生を停止し死に致ることをいうが，遺伝的障
(日本グレア株式会社〉を用い， 4週令で購入後 8週令
害評価の際の簡便な一指標として，最近では環境中の突
まで予備飼育し，発育良好なものを選び実験に供した.
然変異原物質を検出するのに頻繁に用いられる傾向にあ
さらに雄に関しては，先天的致死因子の保有の有無を検
討するため，すべてを投与開始前に無処置未経産の雌と
る.
普通，マウスを用いた優性致死試験では，雄に 1回(急
予備交配し，正常な妊娠・胎児所見を示したもののみを
性〉あるいは 5~7 回〈亜急性〉被検物質を投与後，精
使用した.選択後の使用動物数を表 1に示す.飼育は温
子形成に要する 6週の閲，毎週未処置未経産の雌と交配
表1. 投与群，投与量および使用動物数
を続け，妊娠中期に胎児調査が行われている.しかし，
安全性の有無を評価する際に対象となってくる化学物質
のほとんどは微量かっ長期的に摂取されるものが多く，
体内での代謝や蓄積性をも含めて，その作用は急性試験
れぬものがある.優性致死試験にお
の結果からは推し誤u
投与量
物質
群
EMS D
E
いても長期投与による作用の調べられることが望まれる
F
が，これまでに試験法の開発を目的として行われた例は
G
H
I
J
MMC D
E
ほとんどなく，その是非を検討するにもほとんど資料の
ない現状である.
著者らは以上の観点から，長期投与による優性致死試
験の必要性を感じ，いくつかの化学物質についてそれを
試みてきた 1，
2
).今回さらにその有効性を検討するため，
既知突然変異原物質であり，優性致死試験においても陽
性対照物質としてよく用いられる e
t
h
yI
r
n
e
t
h
a
n
e
s
u
l
p
h
o・
n
a
t
e(以下 EMSと略す〉と r
n
i
t
o
r
n
y
c
i
nC C
以下 MMC
と略すJについて，長期 (4，6，8週〉関投与後の優性
致死現象を調べたので報告する.またその結果を，通常
行われている 1回投与後のそれと 3，
4
)比較しつつ，ルーチ
ンワークとして行う際の有用性についても論じたい.
料広島大学理学部
(
r
n
g
/
k
g
) 時の雄数
2
0
3
.
4
1
5
6
.
5
1
2
0
.
3
9
2
.6
71
.2
5
4
.
7
4
2
.
1
1
.7
5
1
.
3
5
1
.
0
4
0
.
8
0
0
.
6
2
0
.
4
8
0
.
3
7
。
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
交配時期と雌数
4週
6週
8週
1
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
20
20
2
0
2
0
2
0
20
2
0
20
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
2
0
1
0
1
0
一b
1
0
1
0
ー_b
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
一b
1
0
1
0
a
; あらかじめ予備交配し自然保有致死因子を持つも
のははぶいた.
b; 4週自の交配群からはぶいた.
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
2ι1，H
yakunincho3c
h
o
r
n
e，S
h
i
n
j
u
k
u
.
k
u，Tokyo，1
6
0J
a
p
a
n
*東京都立衛生研究所毒性部
水
F
G
H
I
J
C
o
n
t
r
o
l
投与開始&
Ann R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1三
， 1
9
8
0
8
目
度 25 土 1 ， 湿度 55 土 5% ，照明 8~17時，換気毎時 10 回
0
た.
の飼育室にて行った.雄は全期間プラスチックケ{ジに
5
. 交配方法投与開始日から 4，6，8週自に交配し
て 1匹飼い，雌は交配前日までアルミケ{ジにて 1
0匹飼
週令の無処置未経産の雌 2匹
た.交配は雄 1匹に対 U O
い，交配後はプラスチックケ{ジにて 2匹飼いとした.
を 4日間同居させて行った.毎朝腫栓の有無を確認し，
雌雄とも全期聞を通じ，固型飼料 CE-2 (日本グレア株
臆栓の認められたものを妊娠成立とみなし，その日を妊
式会社〉と水道水を自由に与えた.
娠 08とし，別ケージにて雄と分離飼育した.
2
. 試料 e
t
h
y
l
m
e
t
h
a
n
e
s
u
l
p
h
o
n
a
t
e (EMS) は E節 句
6
. 胎児および排卵数調査投与開始後 4，6，8週に
tmanKodakC
o
.製
， LotNo.B4Bを
， m
itomycinC
交配した妊娠 12~13 日の母獣を屠殺開腹し，卵巣および
(MMC) は生化学工業株式会社製， LotNo. MI070を
子宮を摘出，卵巣については黄体数を調べ排卵数とし，
用いた.これらは毎回使用直前に滅菌蒸留水にて希釈し
子宮については着床数，生存胎児数，早・後期死臨数を
て用いた.
調べた.
7
.
3
. 試料投与量の決定 あらかじめ予備実験を行い，
精巣，精巣上体の重量および組織学的所見
8週
最小作用量が EMSで 90mgjkg3l，MMCでは1.75~
間の投与・交配後，各群 1~5 匹の雄についてその精巣
2.28mgjkg的であることを得た.この値を参考にそれぞ
重量を測定した.また測定後ただちに精巣および精巣上
れ1.3の公比で 7の投与量群を設けた.表 1に投与群，
体を固定し，常法により組織標本を作製観察した.
投与量および使用動物数を示す.以下本論文中では煩雑
結 果
さを避けるため，それぞれの物質の投与最を数値ではな
1
. 死亡例(図 1a) EMS:1
コ群では 4日目に 1匹の
く，表 1中の群の記号で示すこととする.また群の記号
4
)に準じた.
の付し方は我々の先の報告 3，
1
6日目に 3匹
， 2
8日自に l匹が死亡し，全投与期間を通
， 1
2日目に 3匹
，
死亡がみられた.さらに 8日自に 1匹
4
. 投与方法 毎日連続投与が望まれるが，頻回投与
6日自に 1
じ生き残ったものは l匹であった. E群では 3
によるマウスへの影響が大きいと思われたため， EMS，
匹
， 4
4日自に 1匹
，
MMCとも 4日毎に 1回腹腔内投与した.荷物質とも投
F，H，1
，]群では死亡はみられず，投与量に対する作
0
0
g当り 1mlとなるよう希釈調整して行っ
与容量が体重 1
用関係は顕著であった. MMC: D群で投与 4
8日目， 5
2
G群で 44日目に 1匹が死亡した.
c
ミ
z
-
1
0
0
1
0
0
0・軍噛田圃圃圃副司園調岡国
i_
EMS
MMC
~ 40
b
)
a)
μ.....L....L...L .L...L..l
oC
t
件
lLL..l L-L.l f
十
プ
l I I I I I I
1
0
0
i
G
'8
0
lO
~
60
白
ち 40
。，
1 1 1 1 1 1 1_11
1 11 1 I 1 1
.__
.
_
.
_ 11
、，_
、
[
1
u、.-<"
、
'
"
、 、
戸 u、
対
-
r α
~喝
o
0
r
;
司
、
モ
0
8
~
6
o
司.
勺r:加 s
e
000
N";'
0 .
<.
<.
<(
rng/kg)噌 的
D
.-i NO""~
ト 晶 司 自 足
，
1 1 I 1 l'1 I
ト 田
"'0噌
o
0 0
勺てI..OC O O
0
EMS
MMC
d)
c)
r-::-=~
~
"
L_I 1 1 I 1 1
"
勺円Do
s
eN.
;
.，
iN 9
目 的
H
ト
N
喧 問 的 噌
~
.
<.
<.
<(
r
n
g
/
k
g
)司 的 ト 町 河 口
c
i
F
3
図1. EMS，MMC 腹腔内長期投与における投与量および投与期間と a) 生存率， b)交尾率， c
.
)妊娠率，
d)l母獣当りの平均着床数の関係.ム一一ム 4週間， 0一一0 6週間，・一一・ 8週間投与後の結果および……
陰性対照の結果を示す.
1
2，1
9
8
0
東 京 街 研年 報 3
は±--
un-ne--
t a・
，
om
c
-
l
mE)
3
0
0
印--
J
γ
↑一
400
9
ω ωH﹄ωω
H
けZ
hvJ門 出
2
0
0
M陀
EMS
﹄
1
0
0
tA4Y.mDN
円 .0NH
-Am.U的同
﹃
由.Nm
i
-A
11N.Hh
ト.噌的
山 門 .H
li
-A
司0 . H
μ
H・3
ti
∞ .0
-AO
∞ 噌 .D
0
84NU.0
A
ハ
ペ
門
・
。
EMS D
ose (mg/kg)
MMC D
ose (mg/kg)
図 2
. EMS，MMC 8週間腹腔内投与後の精巣重量と投与量の関係
日自に各 1匹
， E群では 3
2日目， 5
2日目に各 l匹
， F群
は，投与期聞が長くなればなるほど著しく， 8週時では
では4
8日自に 3匹
， H群では4
8日目に 1匹が死亡した.
D~G 群まで 0% であった.雌に関する妊娠率は付表 1
G， 1
，]群においては死亡はみられなかった. MMC投
に示した.
与により死亡した動物のほとんどは腹水が認められた.
4
. 着床数(図 ld) 妊娠した雌 1匹当りの平均着床
EMSでは投与開始後早い時期に，また MMCでは比較
数を求めた.これまで我々が得ている JCL/ICRマウス
的時聞が経過してから死亡する傾向がみられた.
1
.75 土 2.79~13.41 土1. 5
9でありト日
での平均着床数は， 1
2
. 交尾率(図 1b
) 交配に使用した雄数当りの交尾
した雄数で換算した値を求めた.一般に JCL/ICRマウ
スにおける交尾率は 75~100% であるが 3 ， 4) ，今回用いた
2
.
7
9でよく一致していた. EMS: 4~8 週時とも D~F
群で有意な減少をみたが投与期間の長短による顕著な差
o
n
t
r
o
l群が 1
0
0
雄 1匹に対し雌 2匹の 4日間同居法では C
異は認められなかった. MMC: 投与期聞が長くなれば
o
n
t
r
o
l群では 1
1
.
8
0土1.62~12. 7
5土
今回用いた動物の C
%の交尾率を示しており，本方法により交尾はほぼ完全
なるほど着床数は減少し，特に 8週時では l
群でも有意
に成立するものと判断される. EMS:すべての群におい
な低下が認められた.
て生存した雄はすべて交尾可能であった.先にも述べた
5
. 精巣重量(図2
) とその組織所見(図 3
) EMS，
ようにD群では多数が死亡したにもかかわらず，生存し
MMC8週間投与後の精巣重量を測定した. その結果，
た 1匹は交尾能力を維持していた .MMC:4，6週時の
EMS投与群については C
o
n
t
r
o
l群とほぼ同じであった
D 群に，また 8 週時の D~G 群に顕著な低下がみられた.
が
， MMC群では d
o
s
e
o
r
e
s
p
o
n
s
eをともなう顕著な重量
8週間投与により死亡例が多数認められたことから(図
の減少がみられた.特に最高投与量群である D群では精
1
a
) 交尾能力にも影響のおよんでいることが考えられ
巣が米粒大に萎縮していた.精巣重量測定後ただちに精
る.雌に関する交尾率は付表 1に示した.
巣および精巣上体を固定し，組織標本を作製した.観察
3
. 妊娠率(図 1c
) 交尾した雄数当りの妊娠させた
O
o
の結果， EMS群では精巣および精巣上体ともほぼ C
雄数で換算した値を求めた. これまで我々が得ている
D)，MMC群で
n
t
r
o
l群と同様の所見を得たが(図 3C，
JCL/ICRマウスにおける妊娠率は 90%以上であるが
3
，
4
)，今回の Control 群の値は 4~8 週時とも 100% であ
は
， D~G 群で精細管内にはわずかな精原細胞と支持細
胞が認められたのみで，精母細胞，精細胞，精子はまっ
った. EMS: 4~8 週時の D~F 群で顕著な低下をみた
たく観察されなかった(図 3E). また頭部，体部，尾部
が，投与期間の長短による差はなかった.これらの群は
の精巣上体管中においても精子は認められなかった〈図
交尾は正常に行っており(図 1b
)，明らかに何らかの欠
3F
)
. すでに精原細胞において強度の c
e
l
lk
i
l
l
i
n
gが起
陥を持つ精子が放出されていることを示唆している.
こり，精子形成が行われないものと思われる.また H~
MMC: EMSと同様低下は特に顕著であった.またそれ
J群は精原細胞から精子に致る細胞は観察されるが，そ
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
9
8
0
1
0
同伺﹄け制匂同け苫伺ロ世阿白川明。
000000
OB642
ω
H
a
s
t
i
n
g
sらのは， t
r
i
e
t
h
y
l
e
n
e
m
巴l
a
m
i
n(TEM)を飼料
に混じ， 1
0日間と 45日間摂取させたマウスについて早期
死座の出現率を比較し，長期間投与することにより検出
感度が高められることを示した.これは投与方法として
も検体添加飼料による経口投与が可能であることを示し
r
五m はさらに微量の EMS(10mg)を2
0回〈日〉
ている. S
ω
連続投与しその後の優性致死の検出を試みているが結果
v噂
回.門司 Y
同
ロ
.
ト
DN
HY.円
-v.4Y叩N
門.DNH
m
. 曲目同
N.Hト
q
間
.HY
ω.Nm
ト
sJJ
同.
Nq
加珂
ek
山
町田.向
的問.H
4V0.H
問
@.0
D田.口
.0
.
c
hh
円
田噂
w
m
.
N
∞N.N
mト.同
は陽性であった B) 先の筆者らのデータからも明らかな
ように，この 10mg投与量は 1回投与ではまったく検出
不可能な量である町.
図 4
. EMS，MMC腹腔内長期投与における投与
量および投与期間と優性致死誘発率の関係.ムーム
4週間， 0-06週間，・-・ 8週間 0 -。予備(無
処置時〕交配， A一企 1回投与実験の結果を示す.
長期投与による方法は，微量でも長期間投与すること
により優性致死現象を検出することができる，非常に有
効な方法だと考えられる.
2
. 投与量 今回の実験では，連続投与における総投
の数は C
o
n
t
r
o
l群に比べて少ない.これは 8週間投与後
与量が 1回投与におけるそれを大幅に上回っている.こ
D~G 群で交尾は行うが(図 1 b
)， 妊娠雌が得られない
れは比較のため先に報告した 1回投与実験における投与
(図 1c) 現象，および H~J 群で妊娠率が低下する(図 1
量 S川を連続投与における 1回の量としたためで、あるが，
もしも投与量を同ーとし，それを分割した場合はどうで
c
)現象の原因と考えられる.
6
. 優性致死誘発率(図 4
) Rohrbornの公式6)に従い
0
あろうか.先ほど述べた EMSの 200mg1回投与と 1
優性致死誘発率を求めた.なお比較のために，予備交配
mg2
0回(日〉投与実験B) では，投与完了後 8週間にわ
時に求めた無処置時の値を小白丸印で，また通常の試験
たり交配を続けそれぞれ最も高い優性致死誘発率を示す
法(腹腔内 l回投与〉において EMS，MMCの最も顕
時期で比較すると，分割投与した場合は 1回投与に比べ
著に優性致死現象の現われる時期に調べた値を黒三角
その値は明らかに低いが，交配しつづけた期間の優性致
印で図中に付記した. 荷物質とも， その d
o
s
e
r
e
s
p
o
n
s
e
死誘発率の和はほぼ問ーであった.物質によっては用量
c
u
r
v
e は投与期間の長短にかかわらず非常に似通った形
と作用反応聞に t
h
r
e
s
h
o
l
dのあることが考えられ，あら
状を呈し，その作用は同一機序によるものと思われる.
ゆる実験においてこの投与量の決定は問題となるところ
EMS:最も高い値を示した E群は 1回投与試験ではまっ
であろう.さらに多くの物質で検討されることが望まれ
たく作用は認められない. F， G群も同様であり，
る.
1回
投与後の値に比べ低投与量群でも顕著な優性致死誘発率
現在著者らは，繁殖実験として考えうる範囲での数段
の上昇がみられる.しかし本物質は 4週以上投与期闘を
階の高用量を投与して，まず被検物質に優性致死性があ
延長しても値は変化せず，薬物あるいは障害の蓄積性は
るか否かを判断し，もし疑いがあればさらに低投与量の
ないものと思われる. MMC:EMSと同様に 1回投与試
数群を設け，用量作用反応関係が存在するか否かを調べ
験ではまったく作用の認められない低投与量群でも顕著
る方法をとろうとしている.一般に実験動物は個体によ
な優性致死誘発率の上昇をみた.また本物質は EMSと
り感受性に差があるため結果はばらつきやすいが，使用
は異なり，投与期間が長くなればなるほどさらに低投与
動物数を増やすことおよび日常我々が接触しているより
量でも高い値を示すようになった.
もさらに高濃度の物質を投与することが可能であり，そ
れにより感度は多少にぶくとも大きな効果が得られるこ
考 察
図 4に示さ
とが期待されるからである.しかしその反面，急性試験
れたごとく，雨物質の d
o
s
e
r
e
s
p
o
n
s
ec
u
r
v
eは投与期間
にも共通することではあるが，日常の実際量と実験投与
1
. 長期投与によ~優性致死試験の感度
の長短にかかわらずそれぞれ似通った形状を呈し，その
量との差，および多量投与するために調べようとする反
作用は同一機序によることがうかがえ，長期間投与する
応以外の要因で生じる疑優性致死現象，たとえば今回，
ことによる弊害はないものと恩われる.一方，感度の上
MMC の高投与群にみられた生殖細胞での c
e
l
lk
i
l
l
i
n
g
昇は顕著に認められ，
などには十分な注意が払われねばならない.
1回投与ではまったく作用の認め
られない低投与量でもその作用を検出できることが明ら
3
. ルーチンとして行う場合の問題
かである.
ここで理想的なものとは感度の高いことはもとより，
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
①技術的に簡単で，②時間および③材料や設備などに費
用のかからぬ方法であろう.長期投与による試験法は以
下にふれるごとく，このいずれの条件をも満たしてくれ
1
1
文
献
1
) 益淵正典，高橋昭夫，高橋省，平賀輿吾:東京衛
7
2
，1
0
0，1
9
7
7
研年報， 2
るものであった.①に関してはかねて優性致死試験法の
わ小豚昭夫，縄井寿美子，吉田誠二，安藤弘，久保
長所として論ぜられるところである.②，③に関しては，
9
2，
喜一，平賀輿吾，益淵正典東京衛研年報， 2
9
9，1
9
7
8
図 4で示唆されたごとく，
EMSや MMC のように精
子形成過程の異なる時期に作用する物質であっても 6~8
週間投与すれば同時に優性致死現象を示すようになるこ
3
)吉田誠二，益淵正典，高橋昭夫，安藤 弘，久保喜
ー，平賀輿吾東京衛研年報， 2
8
2，1
9
2，1
9
7
7
とから，投与後最低ー聞の交配によりその影響を検討す
の高橋昭夫，益淵正典，吉田誠二，安藤弘，久保喜
ることができる.このことは非常に大きな長所であり，
投与後毎週交配を続ける従来の方法に比べ，使用する雄
一，平賀輿吾:東京衛研年報， 2
8
2
，1
8
7
，1
9
7
7
5
)益淵正典，高橋昭夫，高橋省， 吉田誠二， 安藤
数は変わらないが交配回数とそれに必要な雌数は 1/6~
弘，久保喜一，平賀輿吾:東京衛研年報， 2
8
2，1
5
4
，
1
/
8となり，また交配と解剖に要する労力， 時間や費用
は大幅に縮小される.これまで優位致死試験は簡便では
1
9
7
7
6
)Rohrborn，
G
. :C
h
e
m
i
c
a
lM
u
t
a
g
e
n
e
s
i
si
n Ma-
あるが手間や実施コストが高くつい， 10) と言われてきた
mmals and Man
，e
d
. by Voge!， F
. and G
.
ことを十分に補うものである
Rohrborn，C
h
a
p
t
. 4， 1
4
8，1
9
7
0，S
p
r
i
n
g
-V
e
r
l
a
g
，
また，慢性毒性試験などで飼育されている動物を使用
したり，それと同一ロットの動物で並行して実験を開始
すれば，遺伝毒性以外の毒性試験結果も参考にでき，総
合的な安全性の評価を下すことが可能であるい)
(本研究は日本環境変異原学会第 6回研究発表会 1
9
7
7
年
9回大会1
9
7
7
年 9月札幌で発
9月大阪，日本遺伝学会第4
表した〉
B
e
r
l
i
n
7
)H
a
s
t
i
n
g
s，S
.E
.，
K
.W.Huffman，andM.A. G
a
l
l
s
:
M
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，4
0，3
7
1，1
9
7
6
8
)S
r
五
m，R.]. :MutationRes.，41，25，1976
9
) Commite巴 1
7
，S
c
i
e
n
c
e
，187，503，1975
1
0
)岩原繁雄:遺伝毒性とその試験，講談社サイエシテ
ィフィック，東京， 1
9
7
7
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
9
8
0
1
2
付表 1
. 生殖生物学的所見
実験群
使用動物数
i
8
物￨群と￨交
交尾確認数
⑤￨
甲④
宮
質
I
C
m
g
/
k
g
)I
週￨与￨亡￨配 l
配 l
EMS
1
0
1
0
1
0
4
"
'
0
6 1
4
2
.
1 8 1
0
J
MMC
D
4
6
1
.
7
5 8
1
0
1
0
1
0
4
E
6
1
.35 8
1
0
1
0
1
0
4
F
6
1
.04 8
1
0
1
0
1
0
4
G
6
0
.
8
0 8
1
0
1
0
1
0
日
4
6
0
.
6
2 8
1
0
1
0
1
0
4
I
6
0
.
4
8 8
a
4
6
0
.
3
7 8
1
0
1
0
1
0
C
o
n
t C
o
n
t
4
6
8
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
。
o* o*
。。
。。
。
*
1
0
0 1
0
0
8
8
.8 8
3
.
3
1
0
0 1
0
0
1
1
1
l
1
1
1
0
2
0
2
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
8
2
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
9
0
.
0
1
0
0
3
7
9
3
1
2
1
4
2
0
1
8
1
0
9
1
9
1
8
1
0
0
1
0
0
9
5
.
0
1
0
0
1
0
9
1
6
1
7
1
0
0
1
0
0
1
0
2
0
2
0
1
0
1
0
1
0
1
0
2
0
1
9
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
9
5
.
0
1
0
1
0
9
1
0
2
0
1
7
1
0
0
1
0
0
9
0
.
0
1
0
0
1
0
0
8
9
.
5
1
0
2
0
2
0
1
0
1
0
1
0
1
0
2
0
1
9
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
9
5
.
0
8
1
0
1
0
8
2
0
1
9
8
0
.
0
1
0
0
1
0
0
8
0
.
0
1
0
0
1
0
0
2
0
2
0
1
0
1
0
2
0
1
9
1
0
0
1
0
0
1
0
0
9
5
.
0
1
0
1
0
2
0
1
8
1
0
0
1
0
0
1
0
0
9
4
.
7
6
1
0
4
1
0
2
0
8
9
1
0
3
9
1
2
3
9
0
.
0 9
0
.
0
6
0
.
0
*キ
1
0
0
7
5
.0 3
7
.5
*
*
*
1
2
9
8
1
0
1
8
1
6
1
0
9
6
1
0
1
4
7
1
0
0 1
0
0
1
0
1
0
0
7
7
.
7
1
7
5
.0 4
3
.8
*
*
*
1
0
2
0
1
0
1
0
1
0
4
1
0
1
7
5
1
0
0 1
0
0
1
0
0
8
5
.
0
8
0
.
0 5
0
.
0
*
*
8
2
0
1
8
8
1
0
6
8
1
9
1
0
1
0
0 1
0
0
1
0
0
9
5
.
0
6
6
.
7 5
5
.
6
*
*
1
0
2
0
1
6
1
0
1
0
8
1
0
1
9
1
4
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
2
0
2
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
7
2
0
2
0
2
0
1
0
1
0
1
0
2
0
2
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
0
4
6
5
4
.
7 8
妊し
~
4
F
6
1
2
0
.
3 8
1
0
1
0
1
0
9 ⑫
1
0
1
5
1
6
1
2
4
6
7
1
.
2 8
C
%
)
1
0
9
8
1
0
1
0
1
0
H
娠た
8 ⑪
1
0
1
8
1
6
4
6
1
5
6
.
5 8
4
"
'
G
0
6 1
9
2
.
6 8 1
0
時持
妊さ
せ
娠た
妊娠率
2
1
8
9
1
0
E
C
%
) 妊娠動物数
q③
8⑨ g⑬
2
1
1
0
1
0
1
0
2
8⑦
2
4
6
2
0
3
.
4 8
D
交尾率
⑥
1
2
。
。
。 10
9
8
。 10
。
。 1100
。 10
1
9
。
1
0
。
1
。 100
。
1
0
。
1
。0
1
0
。
。 1100
。
。 10
。 10
。
。 1100
5
5
。
8
。
1
1
0
9
。
。 1100
8
2
。
1
0
。
。 1100
。
。 1100
。 10
。
。 1100
1
0
0
1
0
0
1
0
0
5
0
.
0
*
本
市本 3660..70***
3
0
.
0
7
0
.
0
1
0
.
0
1
0
.
0
*
*
*
1
1
.
1
*
6
.
7
*
*
*
1
2
.
5
*
*
* 6
.
3
*
*
*
9
0
.
0
7
0
.
0
*
8
4
.
2
9
4
.
4
7
7
7
7
.
8
7
.
8
。
。
*
*
*7。
。
*
*
*
。。
。。
*
*
*
*
*
1
0
0
1
0
0
1
.1
*
*
* 7
.
1
*
*
*
1
1
0
1
。。。
*
*
*。
*
*
*
1
0
1
0 1
0
0
1
0
0
4
2
3
.
5
*
*
*
4
4
0
.
0
*
。
。
。
*
*o
*
*
*
7
8
7
1
6
1
0
0
9
5
.
0
8
7
.
5
1
0
9
5
1
0
1
4
8
1
0
0
9
0
.
0
6
2
.
5
。
1
0
0
7
3
.
7
本
5
7
.
1
*
*
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
8
5
.
0
1
0
0
1
0
1
0
8
1
0
1
6
1
2
1
0
0
1
0
0
8
0
.
0
1
0
0
9
4
.
1
6
0
.
0
*
*
2
0
2
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
1
0
1
8
1
7
1
0
0
1
0
0
1
0
2
0
2
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
;
9
5
.
0
1
0
0
1
0
1
0
1
0
1
0
2
0
2
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
。。
8
7
.
5
8
7
.
5
8
0
.
0
8
4
.
2
o***
9
0
.
0
8
5
.
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
①投与した匹数，②投与期間中に死亡した匹数，③①ー②=③，④③に同居させた雌の合計匹数，⑤同居
させた雌 2匹に膝栓が確認されない時は除く，⑥腫栓を確認した雌の合計匹数，⑦⑤/③，③⑥/<弘⑨同
居させた雌 2匹のうち 1匹でも妊娠を認めたものに対する雄数，⑬開腹時，着床痕・脹胎児の認められた雌数，
2検定
*p<0.05
p<0.01
p<O.OO
1 a交配群よりはぶいた.
⑪⑨/⑤，⑫⑬/⑥. (統計〉 χ
料
料
*
付表 2
. 排卵数および胎児に関する所見(その 1)
実
物質
験
②
①
群
量交配週
拶
ド
卵
数
着
床
数
未
着
③
床
④
生存胎児数
数
早期死座数
⑦
⑥
⑤
後期死座数
総
死 座
数
(mg
ルg)
2
0
3
.
4
ーム噌よ
凸
U
-tA ワa
1・
AU
GURU
00
i
凸U
噌
483
768
u
0
.
3
3土 0
.
6
7
.
8
0
0
.
5
0土 0
.
3
6
0
.
1
4土 0
4
93
噌よ Eun'
唱
止
。
。
。
，
内宅
ti
。
-δ5u7
斗
企
。G z u q o
d斗a d
酒t
.
3
0
*
*
*
4
.
6
6土 2
.
1
5
*
*
*
4
.
9
2土 2
.
2
9
キキ*
5
.
2
1土 2
~Iト
童
書
4
.
4
0土 2
.
2
7
*
料
3
.
5
0土 2
.
3
3
*
*キ
3
.
2
9土 1
.
9
9
*
*
*
∞
。
-lNU由
H
帥
1ioLno
42 6
.
0
0土 2
.
8
9 1
.
1
4土1.35
5 2
140
1
9 2
.7
1土 2
.
2
2
0
.
3
0土 0
.
4
7
.
7
7
0
.
4
2土 0
田
2
2
8 1
1
.
4
0土1.47 20 1
.0
0土1.17
1
9
3 1
.
2
3 15 0
.
7
9
0
.
7
2土 3
.
8
3土 0
numboo
32 1
.60土 2
.
4
8
.8
3土1.82
33 1
.
4
2
0
.
2
0土 0
.
8
8
0
.
6
0土 0
.
6
2
0
.
4
1土 0
Mt 河
'
n
τょ
U
1
.38土 0.92
0
.
9
0土1.12
1
.1
6土 0
.
8
3
9hM“
9
守
1
1
.
1
3土1.8
1
.
0
6
1
1
.
4
5土 2
1
0
.
7
9土1.72
4
.
2
0土 2
.
4
9
.
2
2
2
.
9
0土 2
.
0
3
2
.
8
8土 2
市
ム
。
。
。
，
11 i n L
QUQUFD
，
。
2
.
2
5土 2
.
1
9
0
.
7
0土1.1
3
1
.58土1.92
.
0
0土 3
.
5
6
70 7
.
3
3
.
7
0土 3
1
5
4 7
.
6
4
.
1
2土 2
1
5
5 9
oonanu
unL
5
8 8
.
2
9土 4
.
2
3
*
噌
00
.
5
5
1
.
0
0土 4
77 1
唱
の
，
“
2
.
7
5土1.62 2
5
5 1
2
.
7
5土1.62
2
8
7 1
2
4
6 1
.
5
7 2
3
.
6
7土 2
1
3 1
.
1
5
1
.
8
3士3
8i4A0
qδ
の
4
ヮ
'FU
氏u n o
1
4
.
7
5土1.67 1
0
0 1
2
.
5
0土1.77
5
3 1
.
6
9 2
1
3
.
3
5土 1
3
2
.
6
5土1.7
3
5 1
1
3
.
9
5土1.93 2
.
6
4
2
.
3
7土 1
1
.30土1.42
.
5
7
1
.
8
0土 2
1
.5
3土 2
.
9
0
.
3
8土 3
.
0
7 6
.
7
5土 2
.
2
1
*
*
*
3 3
.
9
4土 2
.
2
1 1
.
8
1土 0
.
9
1 76 4
3 0
70 4
書
詰
.
3
2 8
.
2
6
*
*
キ
.
8
8土 2
.2
9土 2
3 4
.
2
9 7 0
.
6
2 90 5
.
8
8土 2
.
4
1土 0
66 3
。
boonU
4FDA-
.
4
9 1
1
4 1
1
2
.
7
0土 1
1
.
4
0土 1
.
9
6
1
3
.
0
0土1.41 2
.
0
0
1
.
2
0土 3
2
4 1
.
3
3 2
1
3
.
9
4土 2
2
.
4
1土1.46
1
1 1
qanDPO
A
噌 nonL
QU
1
.75
aa
D
n噌 匹 む
MMC
14
i
唱
4
2
.
1
ψ68
J
4
.
3
3土 2
.
8
9
.
7
3
4
.
4
2土 1
5
.
0
7土 2
.
2
0
4
封
.
1
3土 3
.
2
2
キ* 5
2
0
0 1
2
.
5
0土 2
4
6 9
.
2
5 1
.
3
8土 2
.
5
5
*
*
4 3
2
0
3 1
.1
1 1
5
6 9
.
1
8土 3
.
4
0
*
* 47 2
1
.
9
4土 2
.
3
1
*
*
.
7
6土 2
ヮ
'nυn'e
。
PonO
1L2
2
5
4
.7
ム
I
0
.
6
7土1.1
6
3
.
7
5土 2
.
8
3
.
9
9
3
.
0
7土 6
*
*
*
主
翼
468
71
.2
.
3
3土1.16
ネネ
32 1
0
.
6
7土 4
.
1
6 1
6 5
.
0
6
*
*
*1
6 5
.
3
3土 3
4
.
3
3
土
3
.
8
5
特
1
5
6 1
.
0
4 1
0
4 8
.
5
8
*
* 52
3
.
0
0土 2
.
6
7土 3
土
1
.
7
2
*
1
1
6
土
2
.
7
9
*
本
*
4
9
1
1
.
7
9
8
.
2
9
1
6
5
3
.
5
0土 2
.
8
5
*
*
*
468
H
噌
9
2
.
6
ψ68
G
468
F
1
2
0
.
3
1i4
1
141
1
5
6
.
5
468
E
nooo
D
Gaea-o
d告
EMS
1
.
3
8土 0
.
9
2
1
.2
0土1.15
1
.5
8土1.1
7
7 0.35土 0.75 27 1.35土1.23
.
4
6 20 1
.
2
8土 0
5 0
.1
1土 0
.
9
6
1 0
.
1
4土 0
.
3
8 1
.
2
9土1.6
0
*
*
*
6 2
ト.
.
.
t
ぬ
ト.
.
.
串
付表 2
. 排卵数および胎児に関する所見(その 2)
実
0
.
8
0
床 数
.
1
0土1.97
2
1 2
1
早期死阪数
生存胎児数
1
0
1 1
0
.
1
0土 3
.
7
6 1
6 1
.
6
0土 1
.
5
1
3
1
2
後期死座数
総
死 底
数
3 0
.9
.
3
0土 0
.
4
8 1
9 1
0土1.6
0
*
3
0
1 0
.
3
8 1
.8
6土 0
.
0
7
.
1
4土 0
3 1
2 0
.
3
4 2
.
1
3土 0
5 1
.5
6土1.5
9
*
*
*
ゐ可ム
a--
noη400
κ“ 司
- 向
噌E
。
，
“
。
8 0 2L
0
.
4
0土 0
.
8
4
.
6
0
0
.
4
5土 0
0
.
4
0土 0
.
6
8
⑦総数および平均土S
.
D
.，①黄体数より推定，⑤肉眼的に脱落膜腫のみ認められたもの，⑥肉眼的に少しでも膝塊の認められたもの
a; 妊娠雌が得られなかった， b
; 交配群よりはぶいた
(統計〉 ① ， ② t検定，③ー⑦ f検 定
*p<0.05，料 p<O.Ol， *
*
* p<O.OOl
9
4
.
9
7
0
.
4
0土 0
3
0
.
5
5土1.2
0
.
7
0土 0
.
9
8
1
.5
0I1
.4
3
1
.8
6土1.1
7
*
1
.2
5土1.2
8
*
*
1
.6
0土 0
.
9
7
1
.6
9土1.4
0
1
.5
0土1.1
7
*
.
4
4土 0
.
6
2 2
7 1
8 0
.5
0土 1
.
5
4
.
6
2 2
.
4
7土 0
.5
9土1.00
7 1
8 0
498
占
4 1 4・
咽
'
'
'
・
.
0
0
1
.
0
0土 2
1
1
0 1
1
.0
0土 2
.
4
1
2
2
0 1
.
2
3
1
.
6
5土 3
2
3
3 1
0
.
5
0土 0
.
7
0
.
6
2
0
.
3
8土 0
.
7
9
0
.
4
2土 0
唱4
9 1
0
.
5
0土 3
.
4
2 1
.0
6土1.5
1
1
8
9 1
.
8
2 1
9 1
.
2
4土 2
1
6
5 2
.1
2土 0
.
9
3
565
qa
1
.1
0土 1
.
1
0
1
.
3
1土1.40
0
1
.
0
8土1.0
0
.
5
0土 0
.
9
7
.
8
4
0
.
6
4土 0
0
.
6
3土0
.
9
2
RMnOAU
1
.2
1土 0
.
9
7
595
唱 止 唱i
i
守
。
作
0
.
8
0土 1
.
3
2
1
.0
0土 0
.
3
3
.
7
4
0
.
6
3土0
tム 9aτ ょ
1
.2
0土1.1
4
1
.1
0土 1
.
9
4
i
唱
2
9 1
.6
1士2
.
3
8
.
8
2
*
.
2
4土 2
3
8 2
9U
i
噌 oru
1
8 1
1
.
8
0土1.62
3
.
0
0土 2
.
1
1 1
1
3
0 1
3
.
1
0土1.8
3 240 1
2
.
0
0土1.9
5
2
6
2 1
3
.
5
5士 2
.
7
2 255 1
.
7
9
2
.
7
5土2
2
7
1 1
.
6
8
0
.
3
0土 0
2
.
6
0土 2
.
1
2
1
2
6 1
1
.1
9土 1
.
2
2
0
.
9
4土 2
.
3
5
1
7
5 1
.
7
7
*
* 9
3
.
3
3士3
.
4
9
.
7
5土 3
3 7
白
。
2
.
0
0土 2
5 2
.
8
5
3
.
6
1土1.7
1
6 1
245 1
3
.
5
3土 2
.
1
2 1
9
2 1
1
.2
9土 2
.
2
6
2
3
0 1
qunudnu
i
ιτ
噌a
i
唱
4
.
2
0土1.6
2
*
*
.
8
4 1
4
2 1
1
4
.
5
0土 1
7 2
.
7
5
2
.
6
3土 1
1
3
.
8
1土1.1
0
2 1
3 1
.
0
7
*
*
1
2
.
5
8土1.8
.
2
5土 4
1
1 9
唱
2
.
1
0土 2
.
8
5
1
2 1
.2
0土1.2
3
1
0
6 1
2
1 1
.
8
7 1
0
.
6
0土 3
.
4
1
3
.
3
0土 2
1
3
3 1
1
.0
7土 3
.
1
7
29 2
3
1
2
9 9
.
0
7土1.7
5
5 1
.
5
4 1
.
1
4
3
.
1
4土 2
.
2
1土 3
1
8
4 1
.
1
3土 3
.
1
8
*
ネネ
2
8 3
.
7
5土4
.
1
7
*
*
キ 5
77
8 4
1
.
8
8土 2
.
5
0土 3
.
4
2 3
.
9
3
9
5 1
噌よ
①
未
.5
7土1.8
1
8 1
0
.
7
1土1.9
7
5 1
.
6
9 8
0
1
1 1
.7
1土 1
.
1
1
2 1
2
.
5
7土1.4
4
.
1
4土0
8 1
9
9 1
.
1
3土 4
.
6
0
*キネ 7
6 4
.
8
0
*
*
* 8
.
7
5土 3
9 5
.
7
6 2
.
5
6土 3
3 1
1
.8
8士2
.
3
9 114 7
.4
4土 1
.
5
0
1
9
0 1
i
唱
Cont
468
Cont
数
.
3
0土 0
.
4
8 2
5 2
3 0
.
5
0土 1
.
1
8
*
*
.
2
5土 0
1 0
.
5
0 3 0
.
5
0
.
7
5土0
告の
0
.
3
7
968
J
床
⑦
⑥
22 2
.
2
0土 4
.
0
8
4
.
1
0土4
1
9 1
94 9
.
3
1 1
.
4
0土 1
.
5
8 22 2
.
2
0土 1
.
2
3
1
4
1 1
1
.
9
0土0
.
9
9
.
5
7
*
*
* 22 5
.
7
5土 4
5 6
.
7
4
*
* 2
7 6
.
4
5 2 0
.
5
8
.
2
5土5
.
5
0土 5
.
5
0土 0
3
.
0
0土1.6
3 2
5
2 1
u
0
.
4
8
468
I
着
2
0 1
2
.
0
0土3
.
4
0
4
.
1
0土 2
.
3
8 1
1
4
1 1
1
5
1
6
ruFb
、
戸a
τiqG
0
.
6
2
数
⑤
④
0i7 5
H
4 6 8ea 4 6 8
G
1
'
J
s
③
0
.
8
0土 1
.
3
1
1
.0
0土 1
.
4
5
1
.
1
0土1.3
3
皆
、 NNE-﹄
与さ -HNG・
い
忌 -hv
同--SIN- 包∞。
3bE﹄
1
.
0
4
:
j
;
!F
着
F
4 6 8aa 4 6 8a
1
.3
5
週
配
M
E
②
①
群
交
-事
摘附
量四
験
図 3
. EMS， MMC 8週間腹腔内投与後の精巣および精巣上体の組織所見 A，B :c
o
n
t
r
o
l群
， C，D:EMS
.80~ 1. 75mg/kg投与群， G，H :MMCO
.37~O. 62mg/kg投与群，
4
2
.1~203. 4mg/kg投与群， E，F :MMCO
A，C，E，G は精細管， B，D，F，H は精巣上体管を示す.
東京衛研年報 A
nn.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
7
1
9，1
9
8
0
オルトフェニルフェノールナトリウムのラットにおけ~長期投与優性致死試験
小県議昭夫*，安藤
弘ペ久保喜一*，平賀輿吾*
DominantLethal TestsofLongTerm AdministrationwithSodium
0・Phenylphenol C
oppNa) inRats
凶
AKIOOGATA
ぺ HIROSHIANDO汽 YOSHIKAZUKUBO*andKOGOHIRAGA*
坊ばい剤 f
u
n
g
i
c
i
d
e，オノレトフェニルフ z ノール・ナトリウム sodium0・p
h
e
n
y
l
p
h
e
n
a
t
e， 優性致死
Keywords:I
試験 d
o
m
i
n
a
n
tl
e
t
h
a
lt
e
s
t，ラット r
a
t
Table1
. E
x
p
e
r
i
m
e
n
t
a
lD
e
s
i
g
n
当部では以前より防ばい弗j
の安全性についての点検作
業を進めており，オルトフェユルフ
z
ノールおよびその
塩については既に催奇形性試験や変異原性試験 (Ames
e
s
t，マウス優性致死試験〉で
t
e
s
t，染色体試験， SCEt
C
o
n
c
e
n
t
r
a
t
i
o
n Numbero
fNumbero
f
f Numbero
o
fOPP-Na
m
a
l
er
a
t
s
m
a
l
er
a
t
sf
e
m
a
l
er
a
t
s
i
nd
i
e
t
t
t
l
i
z
e
d u
t
t
l
i
z
e
d
a
d
m
i
n
i
s
t
e
r
e
d u
OPP-Nad
i
e
tf
o
rm
a
t
i
n
gf
o
rm
a
t
i
n
g
(%)
の成績を多数報告しており，いずれも陰性の結果を得て
4
.
0
2
.
0
1
.
0
o(Cont.)
いる 1目的.本報告はオルトフェユルフェノ{ノレナトリウ
ムのラットを用いて行なった当部で開発した長期投与優
性致死試験成績である.
2
0
2
0
2
0
2
5
2
0
2
0
2
0
2
5
2
0
2
0
2
0
2
5
試験材料ならびに方法
1
. 試料 オルトフェニルフェノ{ルナトリウム(以
下 OPP.Naと略す〉は DowC
h
e
m
i
c
a
l社製の D
a
w
i
c
i
d
e
A LotNo. MMO1
0
4
4を使用した.
2
. 実験動物雌雄とも(株〉日本チヤールスリパ{
社生育の近交系 F
i
s
c
h
e
r ラット (F344jDuCrj)を用い
た.雄は 4週令で購入，
1週間予備飼育後，また雌は雄
購入時より 8週後に 4週令で購入， 4週間予備飼育後，
実験に供した.
0
3
. 飼 育 条 件 温 度2
5土 1
，湿度 5
5土 5 %，換気毎時
的らが報告している.
6
. 体重および飼料摂取量添加飼料を摂取させた雄
ラットの体重・飼料摂取量に関しては，同一生年月日の
ラットを用い，同一濃度の飼料を摂取させ，同時にスター
3
週間亜急性毒性試験成績10)を考慮に入
トした当部での 1
れた.その報告中雄ラットの体重は 4 %
群で全期聞を通
群も実験 3週まで有
じ有意な増加抑制がみられまた 2 %
意な増加抑制がみられたが以降対照群と同等となった.
1
0回，照明午前 6時 午後 5時までの b
a
r
r
i
e
rs
y
stem飼
群が全期間にわたって少なく，そ
飼料摂取絶対量は 4 %
育室において，前面および床面が網のステ γ レス製ケ{
の他の群も体重増加変動に関連するような値を示してい
ジに個別に収容，自動給水装置く細菌ろ過器経由〉付ベ
る.
ルト式飼育架台に配置した.
7
. 交 配 方 法 雌 雄 1:1のラットを 4日間同居させ
4
. 実 験 群 の 設 定 表 1に示した添加量群，雌雄動物
た.毎朝精子存在の有無を確認し，精子の存在を確認し
数を用いた.添加量群はすでに報告したマウスでの優性
たものを妊娠成立とみなし，その日を妖娠 0日とした.
対
致死試験と同一濃度とし， 4 %， 2 %， 1 %， 0 % (
照〉の計 4群を用いた.
8
. 胎児調査優性致死誘発性を判定するため，妊娠
1
3日の母獣をエーテル麻酔下に屠殺開腹し，卵巣と子宮
5
. OPP-Na 添加飼料と投与方法 OPP.Na は白木
を摘出，卵巣については黄体数を，子宮については着床
クレア(株) CE-2国型飼料に添加使用した. 雌維とも
数，生存胎児数，早・後期死座数を調べ常法 11-12)に従い
飼料，水道水を自由摂取させたが，雄には 5週令時より
処理した.
結 果
添加飼料を，雌には全期間を通じ無添加飼料を与えた.
なお， OPP.Na添加飼料の安定性については当部の縄井
結果を表 2に示した.
*東京都立衛生研究所毒性部
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
4-1
，H
yakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
.
k
u，Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
2
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，1
9
8
0
1
8
f
f
e
c
t
so
fOPP-Naw
i
t
hDamsa
n
dF
e
t
u
s
e
s
Table2
. E
C
o
n
c
e
n
t
r
a
t
i
o
n
o
fOPP-Na
i
nd
i
e
t
く%)
Numbero
f Numbero
f Numbero
f Numbero
f Numbero
f Numbero
fNumbero
fNumbero
f
f
e
m
a
l
er
a
t
s p
r
e
g
n
a
n
t c
e
t
a
1
e
a
r
l
yf
e
t
a
1 1
a
t巴 f
o
r
p
o
r
a
l
i
v
e
1
a
n
t
s
p
r
e
・
i
m
p
1
a
n
t
s
s
u
c
c
e
s
s
f
u
1
l
m
p
l
a
n
t
s
1
0
s
s
d
e
a
t
h
f
e
t
u
s
e
s
d
e
a
t
h
1
u
t
e
a
r
a
t
s
f
o
rm
a
t
i
n
g
Mean土 SDMean土 SD Mean土 SD Mean土 SDMean土 SDMean土 SD
く%)
く%)
4
.
0
2
.
0
1
.0
O
(
C
o
n
t
.
)
9
(
1
0
0
)
8
(
7
2
.
7
)
8
(
8
0
.
0
)
1
6
(
9
4
.1
)
9
(
4
5
.
0
)
1
1
(
5
5
.
0
)
1
0
(
5
0
.
0
)
1
7
(
6
8
.
0
)
98
9
2
1
0
.
9土1.1 1
0
.
2土1.1
8
7
8
2
0
.
3土 0
.
9
1
0
.
9土1.5 1
8
3
6
5
1
0
.
4土1.4 8
.
0
.
1土 2
1
5
3
1
6
7
1
0
.
4土 2
.
6土 3
.
0 9
.
0
6
O
.7土 0
.
7
5
0
.
6土1.1
1
8
2
.
3土 2
.
4
1
5
0
.
9土1.4
8
2
9
.
1土1.6
77
9
.
6土1.3
6
0
.
1
7
.
5土 2
1
4
3
8
.
9土 3
.
0
3
0
.
3土 0
.
7
2
0
.
3土 0
.
7
3
0
.
4土 0
.
7
7
0
.
4土 0
.
7
7
.
8
*
0
.
8土 0
3
.
5
0
.
4土 0
2
.
5
0
.
3土 0
3
.
4
0
.
2土 0
*P<0.05
添加飼料を投与した雄ラットのいずれの群においても投
与期間中死亡した動物はみられなかった.
排卵数(黄体数〉および胎児に係わる所見では 4 %
群
の後期死腔数に対照群と絞ベ有意な増加を認めた.しか
1
. 生殖生物学的所見
し他の観察項目に有意なまた用童相関のうかがえる変動
(
1
) 交尾率 OPP.Na添加飼料投与群のいずれも対照
はみられず，優性致死誘発性評価の重要な指標となる早
群に較べ，交尾雌数の低値がみられるが，推計学的に有
期死座数でも有意なまた用量相関のうかがえるま首加はみ
意ではなかった.
群で有意であった後期死怪数の増加
られなかった. 4 %
(
2
) 妊娠率交尾を確認した雌で開腹時に着床の認め
に関し，早・後期死伍を合わせた総死目玉数では推計学的
群 100%，2 %
群72.7%， 1 %
群8
0
られた雌の割合は 4 %
に有意を示さなかった. ちなみに R
ohrborn の方式13)
%，対照群94.1%であった. 2 %
群がやや低値を示した
に従って優性致死誘発率を求めると 4 %
群 (
4
.
0
)， 2 %
が，対照群と較べ推計学的に有意で、はなかった.
群 (-1)，1 %
群 (1) となり，本試験での OPP.Naの
2
. 排卵数および胎児に係わる所見
ラ y トに対する優性致死誘発性はなかったものと思われ
表 2に示すとおり， 4 %
群の後期死臨数が対照群に比
る.
し，有意に増であったが，排卵数を推測させる黄体数，
今回の試験では 1回の交配で充分な妊娠(交尾した〉
着床数，生存胎児数，早期死腔数では投与群関に有意な
動物を得ることができなかった為，数回くり返し交配し
また用量相関の変動はみられなかった.
たが，充分な数を得ることができなかった.また Opp.
総括と考察
防ばい剤オルトフェユルフ
z
ノーノレナト
Pウム (OPP
-Na) の優性致死誘発性をラットを用いて検討した.実
Na添加飼料投与群での交尾率が推計学的に有意ではな
かったが低値を示している.マウスでは OPP.Na添加
飼料投与群でもほとんどの雄が交尾をしており，この差
験は OPPNa添加飼料を 3か月間雄ラットに摂取させ
はラ
3日に開腹，黄体
た後，無処置未経産の雌と交配，妊娠1
物種差〉に起因するのかもしれない.
回
数および胎児観察を行なった.
OPP.Na添加飼料投与期間中死亡した動物はなかっ
た.しかし井口ら 10)の報告によると高濃度群 (4%)では
有意な体重増加抑制と摂餌量の低下が認められており，
マウスを用いた優性致死試験4) のそれとよく一致してい
る.また OPP ふ~a の 1 日平均摂取量は 4%群 (2487mg
jkgjday)， 2%群 (1384mg)， 1%群 (706mg)と報告
している.
生殖生物学的所見では OPP.Na添加飼料摂取群の交
尾雌数が対照群に較べ少ないようであるが有意差は認め
られなかった.また妊娠率に有意な，用量相関のうかが
える変動はみれらなかった.
γ
トとマウスでの OPP.Na に対する感受性差(動
文 献
1
)小嶋昭江， 平賀輿吾:東京衛研年報， 2
9
2， 8
3，
1
9
7
8
2
)吉田誠二， 益淵正典， 平賀輿吾:東京衛研年報，
2
9
2，8
6，1
9
7
8
3
) 小勝昭夫，安藤弘，久保喜一，平賀輿吾:東京衛研
9
2，8
9，1
9
7
8
年報， 2
4
) 小J
騒昭夫，吉田誠二，縄井寿美子，平賀輿吾東京
衛研年報， 2
9
2，9
9，1
9
7
8
5
)佐々木美枝子，縄井寿美子，中尾順子:東京衛研年
報
， 2
9
2，1
0
4，1
9
7
8
6
)佐々木美枝子，
中尾)1原子:東京衛研年報，
2
9
2，
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
9
7
8
1
0
9，1
然変異性検出法， 8
1，1
9
7
3，講談社サイェ γテイフ
7
)吉田誠二，縄井寿美子，平賀輿吾:東京衛研年報，
3
0
2
，44，1979
0
2，5
1，1
9
7
9
衛研年報， 3
9
)縄井寿美子，小 l
孫昭夫，吉田誠二，平賀輿吾東京
衛研年報， 2
9
2
，9
7，1
9
7
8
岡山邦昭，
ィグ
1
2
)高野喜一，菊池康基，飯島貞二，土川清:薬物の
8
) 縄井寿美子，吉田誠二，中尾1
1
原子，平賀輿吾東京
1
0
)井口重孝，
1
9
平賀興吾:東京衛研年報，
3
0
2
，67，1979
1
1
) 田島弥太郎，吉田俊秀，貧困恒夫編:化学物質の突
特殊毒性1，胎児毒性と遺伝毒性， 1
2
8，1
9
7
5，南江
堂
1
3
)Rδhrborn，G
. :C
h
e
m
i
c
a
lM
u
t
a
g
e
n
e
s
i
si
nMa-
，e
d
. byVoge!，F
. a
n
dG
.
mmals and Man
h
a
p
t
.4，1
4
8
，1
9
7
0，S
p
r
i
n
g
-V
e
r
l
a
g
，
Rohrborn， C
B
e
r
l
i
n
東京衛研年報
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.Lal
;
>
.P
.
H
.，
3
1
2，2
0
2
5，1
9
8
0
チアベンダゾールのラ・y トを用いた急性経口毒性試験
三栗谷久敏*，林田志信*，高橋
博*，平賀輿吾*
Acute Oral ToxicityTestofThiabendazole inRats
HISATOSHIMIKURIYAぺ SHINOBU HAYASHIDA汽 HIROSHITAKAHASHI*
andKOGOHIRAGA*
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
e，防ぽい剤 f
u
n
g
i
c
i
d
e，ラット r
a
t
，急性毒性 a
c
u
t
et
o
x
i
c
i
t
y
Keywords:チアペ γダゾーノレ t
・
宅豆5
緒
日
チアベンダゾ{ル t
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
e (以下 TBZとする〉
供した.
0
飼育条件:室温 2
5土 1
， 湿度 50~60% ，換気毎時 10
は駆虫剤あるいは防ばい剤として用いられている.わが
回，照明午前 6時から午後 5時に制御した飼育室におい
9
7
8
年に食品添加物に指
国では，その安全性を評価して 1
て，前面および床が網のステシレスケ{ジ〈縦 1
6.5X横
定し，柑きつ類およびバナナへの防ばい剤として使用を
25x奥行40cm)に 5匹づっ収容し，日本グレア(株)CE-
認めた. TBZの毒性に関しては R
o
b
i
n
s
o
nら口が報告し
2固型飼料および細菌ろ過装置経由の水道水を自由に摂
ており，顕著な毒作用のないことを示唆している.しか
取させた.
し，最近当部で行った催奇形性試験での催奇形作用の疑
試験方法:動物は投与前日の午後 5時より除餌し，水
石館の報告した染色体異常試験における高頻度の
のみを与え，投与日の午前 9時3
0
分より 1
0
時3
0分までの
4倍体の出現8)など TBZ の毒性，特にがん原性につい
間に検体を胃ゾンデを用いて強制経口投与した.投与後
て再吟味する必要性が生じた.
4時間目より飼料を与えた.
い汽
そこでがん原性試験を行うにあたって，その前段階と
試験 1 8週令の雌雄ラットに TBZオリ{プ油懸潟
して，同試験に用いると同一系統のラットにより，同一
液および TBZO.5% アラビアゴム溶液懸濁液を投与し
飼育環境での急性経口毒性試験を行った.
able1に示したように，オリーブ油懸潟
た.投与量は T
TBZの急性経口毒性について R
o
b
i
n
s
o
nらりは，ラッ
トの LD
.1g/kg(TBZ2%CMC溶液懸濁液投
50値を 3
液使用， 614mg/kgから 1800mg/kgの聞を公比1.2
5で
，
0.5%アラビアゴム溶液懸淘液使用， 1300mg/kg から
4827mg/kgの聞を公比1.3でそれぞれ 6用量設けた.ま
与〉としている.
今回， TBZは水に難溶のためオリーブ油およびアラ
た対照としてオリープ油または 0.5%アラビアゴム溶液
ピアゴム溶液の 2種類の懸潟剤を用い懸潟液として投与
を投与した.投与匹数は各用量雌雄とも 5匹とした.な
)
. その結果，
した〈試験1
お投与量は文献{直および予備試験の結果を参考にして決
TBZ アラビアゴム溶液懸濁
液投与の雌は用量に伴う致死率の逆転が著しかった.そ
定した.
のためこれに関して確認試験を行うとともに，急性毒性
投与後の一般症状および生死の観察は 24時間まで 1~
試験に用いられる動物数を少数にした場合の用量一致死
2時間毎に， 2日以降は朝夕の 2回行った.死亡ラット
)
.
率関係と LD
50値についても併せて検討した(試験 2
0
は直ちに剖検し，生存ラットについては毎日午前 9時3
試験材料および方法
分に体重測定し投与後 1
5日自にと殺，剖検した.また 1
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
em
i
c
r
o
f
i
n
eMSD
検体米国メルグ社製 t
(
L
o
tNo.BZA-539) を日本薬局方オリープ泊または日
本薬局方アラピアゴムの 0.5%溶液に懸濁させたもの.
.W.とした
投与容量はすべて 10ml/kgB
試験動物:チヤールスリバー社生育の近交系 F
i
s
c
h
e
r
ラット (F3
44/DuC
r
j
) を用い，試験 lでは雌雄を 4週
週間の死亡率に基づきLit
c
h
f
i
e
l
d
-W
i
l
c
o
x
s
o
n法4) により
50%致死量 (LD50) を求めた.
試験 2 TBZO.5%アラピアゴム溶液懸濁液の 6
6
0，
8
2
0，1
0
5
0，1
3
0
0および 1600mg/kgB
.W.を各 5匹に投
与した. この投与グノレ{プを 3グル{プ作りそれぞれ
A， B， Cとした.
令で購入し 4週間飼育後，また試験 2で は 雌 を 5週令
生死の観察は検体投与後午後 5時まで連続的， 2日以
で購入し 3週間飼育後それぞれ発育良好なものを試験に
降は朝夕の 2回行った.観察期間は 2週間とし，この間
1
6
0 東京都新宿区百人町 3
ー 2
4-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
2
4-1
，H
yakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
・
ku
， Tokyo
，1
6
0J
a
p
a
n
*東京都立衛生研究所毒性部病理研究科
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
2
1
Table1
. TheTimeC
o
u
r
s巴 o
fNumbero
fDeadR
a
t
sa
f
t
e
rA
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
no
fT
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
e (TBZ)
帽
V
e
h
i
c
l
e
& S
ex
d
a
y
s
)
Dose No.of No.of
Deadt
i
m
e
1 2 3 (
(
h
r
)
a
t
s d
(mg/kg) r
e
a
drats05l-1l-0l
152024
￨イ:_H-H
一
一￨ー!ートHー トH-H;
1
1
一ートーl
O
l
i
v
eo
i
l
1
8
7
5
5
1
5
0
0
5
5
1
2
0
0
Male
9
6
0
5
7
6
8
5
6
1
4
5
v
e
h
i
c
l
el)
5
1
8
7
5
5
5
1
5
0
0
1
2
0
0
5
Female
9
6
0
5
7
6
8
5
6
1
4
5
v
e
h
i
c
l巴1)
5
0.5%Guma
r
a
b
i
cs
o
l
u
t
i
o
n
4
8
2
7
5
5
3
7
1
3
2
8
5
6
5
Male
2
1
9
7
5
1
6
9
0
5
1
3
0
0
5
2
l
v
e
h
i
c
l
e
5
4
8
2
7
5
5
3
7
1
3
2
8
5
6
5
Female 2
1
9
7
5
5
1
6
9
0
1
3
0
0
5
2
l
v
e
h
i
c
l
e
5
5(
1
0
0
)め
3(6
0
)
5(
1
0
0
)
2(4
0
)
2(4
0
)
o(0)
o(0)
4 (8
0
)
2(4
0
)
2(4
0
)
4 (8
0
)
1(2
0
)
o(0)
。( 0
)
5(
1
0
0
)
5(
1
0
0
)
4(8
0
)
4 (8
0
)
5(
1
0
0
)
3(6
0
)
o(0)
5(
1
0
0
)
5(
1
0
0
)
5(
1
0
0
)
5(
1
0
0
)
1(2
0
)
2(4
0
)
o(0)
1
1
1
2
4) 1
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
) o
l
i
v
eo
i
l1
0ml/kg
2
) 0.5%Guma
r
a
b
i
cs
o
l
u
t
i
o
n1
0ml/kg
1
21
3
2
11
1
1
22
21
1
1
1
1
1
11
111
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
3
) M
o
r
t
a
l
i
t
y(%)
4
) No.o
fd
e
a
dr
a
t
s
のA， B， C各グノレ{プの死亡数に基づき T
able3に示
投与ラットの雄と同様の体重を示した (
F
i
g
.
1，2
)
.
1用量に用いた動物数を 5匹
， 1
0
匹お
よび 1
5匹とした場合について死亡率を求め L
i
t
c
h
f
i
e
l
d
-
ゴム溶液懸濁液使用とも観察された症状は共通してい
した組み合せで，
L
D
s
o
)を求めた.
Wilcoxson法的により 50%致死量 (
試験結果
試験 1
C
o
n
t
r
o
l (
v
e
h
i
c
l
e
)・ォロープ油投与ラット， 0.5%
投与群:オリ{ブ泊懸濁液使用および 0.5%アラピア
た.主な症状は投与直後よりうずまり，閉限，流涙を認
めるものが多く，次いで一部に洗顔様動作，ふらふらと
歩く，背をまるめてはねるような動作をする，背をまる
め前両足で頭を抱え込むような動作をするものなどがみ
アラビアゴム溶液投与ラットとも投与直後にうずくま
られた.続いて自発運動が低下し伏臥または横臥の姿勢
り，ー部に流涙が見られたが回復は早く， 4時間後飼料
をとり死に至った.この時ー部に伏臥または横臥の状態
を与えると同時に摂取し始めた.また投与前一夜絶食に
から仰臥状態になり四肢を激しく震わせて死亡するも
よる体重の減少もオリープ油投与の雄を除き 2
4
時間後に
の，またケ{ジ内を激しく暴れ回りその後仰臥状態にな
はほぼ回復し，その後順調な発育を示した.オリ{ブ泊
り四肢を震わせて死亡するものも見られた.その際死亡
投与の雄も 4
8時間後には絶食前の体重に回復し，その後
ラットのロの周囲に泡状の物質が，また鼻には血液様の
順調に発育して試験終了時には~0.5% アラピアゴム溶液
液体が付着していた.死亡ラットの剖検で，胃は全体的
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，1
9
8
0
2
2
160
140
120
乞 100
主
f
主
80
、 70
白
.
〉
。
0
安 140
z
ー
r
i
o
・
阿
120
100
80
。
「寸
5
D
a
y
s
1
0
1
5
F
i
g
.1
. R
e
l
a
t
i
v巴 BodyWeightChangeso
fR
a
t
sS
u
r
v
i
v
e
da
f
t
e
rA
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
no
fT
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
e (TBZ)
V
e
h
i
c
l
e:0.5%Guma
r
a
b
i
cs
o
l
u
t
i
o
n
Arrow:A
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
no
fTBZ
・
)
， 1
3
0
0mg/kg(_
A
)
， 1
6
9
0mg/kg(
口
)
， 2
1
9
7mg/kg(O)，2856mg/kg(
園
〉
C
o
n
t
r
o
l
(
に膨張して透明感があり，ガスとともに黄白色の物質(大
かった.
部分は検体と恩われる〉が貯留していた.また黄白色の
死を免れた動物は 2~4 日まで体重減少を続けたが，
物質は盲腸付近まで認められた.他主要器官に著変は認
それ以降順調な回復を示した.しかし，大多数はその体
められなかった.
o
n
t
r
o
lのそれと平行的であり，し
重増加曲線の勾配が C
死亡発生時間と死亡数を Table1に示した.死亡の初
たがって投与後の体重減少が大きかったものは 1
5日間の
発は 6時間目，最終は 5
3時間目であったが大多数は 2
4
時
観察終了時においても C
o
n
t
r
o
lと同等の体重までに回復
間以内に死亡した.特に 0.5%アラピアゴム溶液懸濁液
しなかった (
F
i
g
.
1，2
)
. 観察終了時に行った生存ラット
使用では死亡開始とほぼ同時にピークがおとずれ，ほと
の剖検では主要器官に特記すべき変化が認められなかっ
んどは 1
5
時間以内に死亡した.また 0.5%アラビアゴム
た.
用量一致死率曲線の s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
n(
L
i
t
c
h
f
i
e
l
dベ
高
T
i
lc
o・
溶液懸濁液使用はオリーブ治懸濁液使用より死亡率が高
かった.両懸濁剤使用とも雌雄聞の死亡時聞に大差はな
お
on法〉および LD50値とその 95%
信頼限界値を Table2
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
2
3
160
140
120
，
‘
。
.
、
a
、
園
、
、
・
'
・ 100
Z
4
ニ
開
0
43
。
主
主
80
〉、
て
0
白
3
140
q
〉J
2
百 120
100
80
。
5
1
5
1
0
D
a
y
s
F
i
g
.
2
. R
e
l
a
t
i
v
eBodyWeightChangeso
fR
a
t
sS
u
r
v
i
v
e
da
f
t
e
rA
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
no
fT
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
e (TBZ)
V
e
h
i
c
l
e:O
l
i
v
eo
i
l
Arrow:A
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
no
fTBZ
C
o
n
t
r
o
l
(
・
)
， 614mg/kg(A)，
768mg/kg(
圃
)
， 960mg/kg(O)，1
2
0
0r
暗 /
kg(
口
)
， 1
5
0
0mg/kg(
ム
)
，1
8
7
5
m
g
/
k
g
(
.
.
.
.
)
r
a
lT
o
x
i
c
i
t
y Testo
fT
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
e (TBZ) i
nF
i
s
c
h
e
r3
4
4R
a
t
s
Table2
. AcuteO
V
e
h
i
c
l
e
O
l
i
v
eo
i
l
0
.
5
a
M
r
a
D
G
l
C
um
s
o
l
u
t
i
o
n
Week-Old
8
8
Sex
l
n
i
t
i
a
lbody
W〈
E
i
g
g
〉
h
t
a
〉
Male
.
5
1
5
1土 8
9
1
2
4
9
1
.5
0
1
0
7
5
836-1383
Female
1
1
2土 5
.
1
9
1
5
5
3
1
.62
1
1
8
0
902-1544
Male
1
5
2土 7
.
8
6
9，14
2
1
1
.5
5
1
3
2
5
905-1940
Femal巴
1
1
2土 5
.
4
9
9-15
2
1
1
.
5
0
1
7
5
0
1310-2340
Deadt
i
m
e(
h
r
)
Onset Peak End
C
o
n
f
i
d
e
n
c
e
l
i
m
i
t
s
b
)
(mg/kg)
S
l
o
c
t
p
1
e
LD
f
u
n
c
t
i
o
n (mg/kg)
.D
. l
n
i
t
i
a
lbodyw
e
i
g
h
twasd
e
t
e
r
m
i
n
e
ds
h
o
r
t
l
yb
e
f
o
r
ea
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
no
fTBZ.
a
) Mean土 S
b
) P=0.05
Ann. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
. P.H，
3
1
2，1
9
8
0
24
Table3
. AcuteO
r
a
lT
o
x
i
c
i
t
yT
e
s
to
fT
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
e (TBZ) i
nF
i
s
c
h
e
r3
4
4FemaleR
a
t
s
一-RelationofDose-MortalityandNumberofRats一
一
ー
C
o
n
f
i
d
e
n
c
e
l
i
m
i
t
sa
t
P=0.05
(mg/kg)
M
o
r
t
a
l
i
t
y
Group
6
6
0
(A)
0
/
51)
(B)
(C)
Dose(mg/kg)
0
5
0 1
8
2
0 1
3
0
0
S
l
o
c
t
p
1
e
f
u
n
c
t
i
o
n
〕
(
m
L
g
D
/
k
s
g
o
1
6
0
0
0
/
5
1
/
5
2
/
5
2
/
5
0
/
5
1
/
5
1
/
5
3
/
5
3
/
5
1
/
5
3
/
5
4
/
5
3
/
5
3
/
5
1
.4
2
1
.4
7
1
.
4
4
1
1
7
5
1
2
5
0
1
1
7
0
(A+B)
(A+C)
(B+C)
0
/
1
0
1
/
1
0
1
/
1
0
4
/
1
0
2
/
1
0
2
/
1
0
2
/
1
0
4
/
1
0
4
/
1
0
4
/
1
0
6
/
1
0
4
/
1
0
7
/
1
0
7
/
1
0
6
/
1
0
1
.4
6
1
.4
3
1
.4
9
1
2
0
0
1
1
5
0
1
3
2
0
1017~1416
(A+B+C)
1
/
1
5
4
/
1
5
5
/
1
5
0
/
1
5
7
/
1
5 1
1
.4
7
1
2
0
0
1045~1377
946~1459
950~1644
931~1469
984~1344
1079~1614
1
) N
o
.o
fd
e
a
drats/No.o
ft
r
e
a
t
e
dr
a
t
s
に示した. S
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
nは両懸濁剤使用とも1.5
5
付近
s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
nが1.5
5付近であり LD50値には推計学的
であった. また LD
5
0値はオリ{プ泊懸濁液使用，雄
に有意差がなかったことなどから荷懸濁剤使用ともその
1075mg/kg，同雌1180mg/kg，0.5%アラピアゴム溶液
致死作用に本質的な差はないと考えられる. また 0.5%
懸潟液使用，雄1325mg/kg，同雌 1750mg/kgで雌雄と
アラピアゴム溶液懸濁液使用の雌で用量一致死率の関係
も 0.5%アラピアゴム溶液懸濁液使用の方がオリーブ治
が逆転し， LD
750mg/kgと高い結果になったの
50値が 1
懸濁液使用より大きく，特に雌は用量一致死率の関係が
は，用量の設定が全体的に高かったためと思われる.こ
逆転していたためオリ{プ油懸溺液使用雌の値と大差を
示した. しかし，
LD50値の両懸淘剤聞での差および各
のことは試験 2で LD
2
0
0
r
n
g
/
k
g付近， s
l
o
p
e
50値が 1
5付近であったことからも推察できると考
f
u
n
c
t
i
o
nが1.4
試験 2
l
o
p
e
えられる.さらに両懸濁剤使用ともその雌雄聞の s
f
u
n
c
t
i
o
n，LD
50値には推計学的に有意差がないこと，発
A， B， C各グノレ{プとそれらの組み合せによる死亡
症時間や症状，死亡時聞に大差がなかったことなどから
懸濁剤での性差は推計学上有意でなかった.
動物数， s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
n
(
L
i
t
c
h
f
i
e
l
d
.
W
i
l
c
o
x
s
o
n
法〉および
LD50値とその 95%信頼限界値を Table3に示した.用
その致死作用に性差はないと考えられる.
R
o
b
i
n
s
o
nら。は TBZの急性経口毒性試験においてラ
量一致死率の関係は 1用量につき 5匹の A，B，C各グ Jレ
HolzmanS
.D
.ラット〉の LD50値は 3.1g/kgで
ット (
【プより，各グループを組み合せて l用量につき 1
0匹
，
あり，その主症状は衰弱，体重低下，運動失調および昏
1
5匹と数を増すにしたがって良好となった.しかし，
s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
nおよび LD50債はいづれも同様の値をと
睡状態であったと報告している.今回の試験で主症状は
昏睡状態を除き類似していたが， LD
o
b
i
n
s
o
nら
50値は R
5付近， 1200mg/kg付近であった.また 1用量に
1
.4
り，
の約 1
/
2の値であった.このことは使用動物の系統，実
つき A， B， Cを組み合せて 1
5
匹とした場合の用量一致
験条件および飼育条件等の相違によるためではないかと
死率曲線に，
A， B， C各グループと 1
0
匹に組み合せた
場合との用量一致死率関係を適合させてみたところ，い
考えられる.
Toccoら引は 1
4
Cでラベルした TBZのラットを用いた
ずれも推計学的に適合可能であり， s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
n1
.4
7，
投与実験で，投与された TBZ の 80~90% は 48 時間以内
LD50値 1200mg/kg，95%信頼限界値， 1
5匹とした場
に排征されるとしている.今回死を免れた動物は症状の
合 1045~1377rng/kg ， 10 匹とした場合 1014~1421mg/
回復も早く，その後の体重増加も c
o
n
t
r
o
l とほぼ同様で
kg ， 5 匹の場合 945~1523mg/kg であった.
あったことから， Toccoらが示唆しているようにラット
考 察
チアペシダゾール (TBZ)のラットにおける急性毒性
について検討した
LD50値は Table2 に示したように
世は比較的迅速に行われるも
における TBZの代謝，排i
のと恩われる.
従来け'っ歯類における急性毒性試験では 1用量に雌雄
0.5%アラピアゴム溶液懸濁液使用の方がオリープ泊懸
0
匹程度の動物を用いるのが一般的であった.しかし
各1
濁液使用より雌雄とも高い傾向を示した.しかし，いず
最近がん原性試験等の前段階の試験として急性毒性試験
れも投与後の主症状や死の様子が類似していたこと，
が行われる場合は，
1用量に雌雄各 5匹が用いられてい
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
2
5
る.そとで試験 2では試験 1における 0.5%アラピアゴ
液使用，雄1325mg/kg，同雌 1750mg/kgであり，推計
ム溶液懸濁液使用雌の用量一致死率関係の確認と併せ
学的に性差，懸濁剤による差は認められなかった.
0お
て，同一条件下において 1用量につき 5匹の場合と 1
② 0.5%アラビアゴム溶液懸潟液使用雌の用量一致死
よび 1
5
匹とした場合の用量一致死率関係や LD
5
0値等に
率関係と LD
5
0値に関しての確認と併せて ， 1用量に用
ついて検討した.結果としていずれの場合も LD
5
0値や
0および 1
5
匹とした場合の用量一致死
いる動物数を 5，1
s
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
nはほぼ同様の値を示したが，用量一致死
率関係および LD
5
0値について検討した. 1用量に用い
率関係は 5匹のグループが良好でなかった.しかし， 1
5
る動物数が多い程用量一致死率関係は良好であった.し
匹とした場合の用量一致死率曲線と 5匹ないし 1
0
匹とし
l
o
p
ef
u
n
c
t
i
o
nや LD50値に大差はなく，それぞ
かし， s
た場合との用量一致死率関係は推計学的に適合した.す
5付近， 1200mg/kg付近であった.
.4
れ1
なわち，使用動物数が少なければ用量に伴う致死率に逆
転などが生ずるのは確率的にも当然であり，
1用量 5匹
の使用でも用量一致死率の関係， LDso値を十分推定で
o
x
i
c
o
l
.Aρt
l
.P
h
a
r
m
a
c
o
l
.，7，53，1965
E
. :T
2
)小勝昭夫ほか東京衛研年報， 2
9
2，1
1
2
，1
9
7
8
きると考えられる.
まとめ
①チアベ γダゾール (TBZ)の F344(
F
i
s
c
h
e
r
)ラグト
雌雄における急性毒性を，オリ{ブ泊および 0.5%アラ
ピアゴム溶液を用いた懸濁液として経口投与し検討し
た.主な症状は両懸潟剤使用雌雄とも共通しており， う
ずくまり，閉眼，流涙，自発運動の低下，四肢の震え等
であった
文 献
1
)Robinson，H.J
.，S
t
o
e
r
k，H.C
.，andG
r
a
e
s
s
l
e，O
.
LD50値は，オリーブ泊懸濁液使用，雄 1
0
7
5
mg/kg，同雌1180mg/kg，0.5%アラビアゴム溶液懸濁
3
) 石館基:培養細胞の染色体異常を指標とする癌原
性物質のスグリーニシグ，厚生省がん研究助成金に
5
0，1
9
7
6
よる研究報告集〈下)， 7
it
c
h
f
i
e
l
d，J
.T.J
r
.，andWilcoxson，F
. :J
.Pha4
)L
r
m
a
c
o
l
.Ex
ρ.T
h
e
r
a
ρ
.，
9
6，9
9，1
9
4
9
5
) Tocco，D
.J
.，Rosenblum，C
.，M
a
r
t
i
n，C
.M.，and
o
x
i
c
o
l
. Aρ
t
l
.P
h
a
r
m
a
c
o
l
.，
Robinson， H.].: T
9，3
1，1
9
6
6
東京衛研年報 A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，3
1
2，2
6
2
8，1
9
8
0
チアベンダゾール (TBZ) の 突 然 変 異 誘 起 性 に 対 す る
ジブチルヒドロキシトルヱン (BHT) の影響
藤田
博*，平賀輿吾*
Effectof ButylatedHydroxytolueneonthe Mutagenicityof
Thiabendazole inthe SalmoneIIajMicrosome Test
HIROSHI FUJITA*a
n
dKOGOHIRAGA*
回:ジブチノレヒドロキシトルエ γbuty!atedh
y
d
r
o
x
y
t
o
!
u
e
n
e，チアペ γダゾ{ノレ t
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
!
e，突然変
Keyword
異誘起性 mut
a
g
e
n
i
c
it
y
緒
言
食品に添加される酸化防止予測であるジブ、チルヒドロキ
シトノレエシ(以下 BHTと略す〉は単独では突然変異誘
起性は示さないが 1
，
2)t 他の化合物の突然変異誘起性ある
活性化には PBまたは PCBにより薬物代謝酵素を誘導
した W
i
s
t
a
r系ラット雄の肝臓ホモジネートの 9
，
0
0
0xg
の1
0
分間遠心の上清分画 (
S
9
)を用いた.
DMSOに溶かした TBZ(
1
0
0
0，5
0
0，100pg/O.05m
め
2
ーアミノアントラセシ等の突然変異物質の突然変異
および BHT(
1
0
0，5
0，1
0，5，1μg/O.05m
めを小試験管
0)O
に入れ， S-9Mix1
.5mlおよび一夜培養の TA98菌液
誘起性に対する BHT の効果を代謝活性化を導入した
O.lmlを加え， 3
7
'
Cで2
0
分間の前橋養を行った.これに
Ames の m
u
t
a
t
i
o
nt
e
s
t系りを用いて検討したところ，
4
5Cに保温した軟寒天 1
)
2
m
lを加え混合後，最少寒天培
いは発がん性を変動させる効果があるト的.
0
突然変異誘起性が BHT量によって増加する場合と減少
地口に播種し， 3
7
'
Cで4
8
時間培養後，プレ{トに生じた
する場合が見られた.特に，フェノパノレピタ{ノレ〈以下
復帰コロニ{を計数した.なお， S-9Mix中の S
-9量は
PB と略す〉で薬物代謝酵素を誘導したラット肝臓ホモ
PB，PCB誘導 S-9共に 5
0
μl
/プレートとした.t
こだし，
，
000xg遠心の上清分画(以下 S-9と略す)
ジネートの 9
S-9量を変えた実験では S-9量は0，2
5，5
0，1
0
0および
を代謝活性化に用いた場合に増加の効果が著しく，その
1
5
0
μl
/フ・レートの 5段階とした.
効果は S
-9量により著しく変動することなどから， BHT
すべての測定値はプレ{ト 3枚の平均値で示した.
が薬物代謝酵素に作用している可能性が示唆された島町.
これまでは既知の突然変異物質に対する BHTの作用
結果と考察
TBZ と BHT の混合溶液の m
u
t
a
tlOnt
e
s
t の結果
を検討して来たが，単独では突然変異誘起性を示さない
を表 lに示した. TBZ1
0
0
0，
5
0
0，1
0
0
μg
/プレートに対し
が BHTを加えると突然変異誘起性を示す化合物の検索
u
t
a
t
i
o
nt
e
s
t系を用いて試みた. その結
を Amesの m
果，かび防止剤であるチアベシダゾーノレ(以下 TBZ と
略す〉と BHTの混合溶液に弱い突然変異誘起性が見ら
れたので報告する.
表1. TBZと BHTの混合溶液の S
.t
y
ρhimurlum
TA98を用いた m
u
t
a
t
i
o
nt
e
s
t
TBZ
(μd)S91〉
プレ{ト
1
0
0
実験材料と方法
試料
BHT (和光純薬， LotN
o
. KIK-5562)，TBZ
(メルグ，
LotN
o
. BZA-539)，PB (吉田製薬)，アロ
クロール 1
2
5
4(以下 PCB と略す， 三菱モ γサ γ ト化
成
)
，
ジメチルスルホキサイド〈以下 DMSO と略す，
和光純薬〕
a
l
押w
nella りρhimurium
Mutation t
e
s
t 菌株は S
TA98を用い Ames法わの変法 1
，
1
0
)により行った.代謝
1
0
0
0
5
0
0
1
0
0
。
2)
5
4
2
8
5
3
3
5
4
9
3
8
3
6
44
5
0
1
0
5
1
5
3
3
0
6
2
4
2
5
7
4
7
5
0
4
5
9
5
44
8
6
5
0
4
5
5
3
4
8
4
1
5
8
4
8
4
5
5
9
4
9
4
2
4
8
4
3
4
2
4
8
4
9
5
8
4
2
4
6
4
3
4
3
1
)5
0
μ1
/フ。レ{ト， 2
)復帰コロニ{数/プレート
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
!
i
cH
e
a
l
t
h
2
41
，H
yakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
k
u， Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
*東京都立衛生研究所毒性部
PB
PCB
PB
PCB
PB
PCB
PB
PCB
BHT (
μ
g
/プレート〉
。
4
3
3
5
4
5
4
5
3
9
3
8
4
2
4
0
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
27
て BHT1
0
0，5
0，1
0
，5
，1
μg/プレートとした. PCB
1
0
0
誘導 8
-9を用いて代謝活性化した場合は，復帰コロニー
TBZ BHT
o1000Ug，
-9を用いた場合
数に変化は見られなかった. PB誘導 8
・
A -5õõ~~J30いq
0
0
0，
ugまたは 5
00μgに BHT10μgを混合した
は
， TBZ1
組み合わせで復帰コロユ{が増加し， BHT無添加のコ
企
シトロールに対して約 2倍であった. TBZおよび BHT
U
，
.
.
は
， Amesの m
u
t
a
t
i
o
nt
e
s
t系において単独では突然変
向
、
、
異誘起性が検出されないことから，この増加は TBZと
(
l
)
.
同
BHT による相互作用の結果と考えられる.
レ{トに対して BHT は 3
0μg/プレートとし， 8-9
量は
0~150μ1/ プレ{トとした
u
l
国
5
0
，
.
:
:
:
0
U
リ
)
. TBZは 1000μg
，5
00μg/プ
による影響を調べた〈図 1
国
.
1
同
国
一HHU﹀山凶
V
PB誘導 8-9を用いて代謝活性化した場合に復帰コロ
ニ{数の増加が見られたととから， 8-9Mix中の 8
-9量
，
1
0
0
0
い
g
5
0
0珂 J0
悶
BHT を加えない場合 8-9 量
を変えても復帰コロニ{数は変化しないが， 30μgの
BHTを加えることにより 8-9量の増加に伴って復帰コ
ロニー数は増加した. TBZ1
000μgでは 8-9量 1
5
0
μ
Jま
-9最 1
5
0
μ
Jの時復帰コロニー数は
で直線的に場加し， 8
コγ トロ{ルの 3倍以上の増加であった.また TBZ500
量1
0
0
μ
lが最大となり 8-9量 1
5
0
μ
lでは少し
μgでは 8-9
減少した.
TBZ と BHT の混合溶液の突然変異誘起性に見られ
た相互作用の機構については明らかではないが，復帰コ
図1. TBZと BHTの混合溶液の S
.t
y
t
h
i
m
u
r
i
.
e
s
tにおける 8-9
量
umTA98を用いた mutationt
の影響
同一 8
-9量のコシトロ{ノレ (TBZ0
μ
g
) の復帰
コロユー数 (28~44) を引いた値を示す.
ロニ{の増加は， 1) BHT 量に最適濃度があること，
OBにノルハルマ γ を加えることにより突然変異誘起性
2) PB誘導 8-9を用いた代謝活性化が必要であること，
3) 8-9Mix中の 8-9量によって変化し， 8-9量が多い
が現われることを報告している.これは薬物代謝酵素に
ほうが効果があることがわかった.これらの条件は，前
ー OBから突然変異誘起性をもっ代謝物質が生成すると
報 8，
9
) に報告した 2
-アミノア γ トラセシ等の突然変異物
omutagen であるとしている.
考え，ノルハルマ γが c
質の突然変異誘起性を BHTが増加させる場合に一致す
BHT にも類似した comutagen の作用があると推察さ
る.従って，
TBZと BHT の相互作用においても，
BHTと 8-9中の薬物代謝酵素の活性との関連が大きな
要因となっていると推察される. すなわち， TBZ 由来
ノルハルマソが作用し，オルトトルイジ γおよびイエロ
れる.
要 約
チアベ γダゾール (TBZ) とジプチノレヒドロキシトノレ
の代謝物質に突然変異誘起性を有する物質が存在し，こ
ェ γ(BHT) の混合溶液の突然変異誘起性を Amesの
の物質の生成に BHTが影響している可能性が考えられ
m
u
t
a
t
i
o
nt
e
s
t 系を用いて検討した. ブェノパルピター
る.
ル誘導ラット肝臓ホモジネ{トを用いて代謝活性化した
TBZ1000μg，8-9
量1
5
0
μ
Jの時， 8
8
個の復帰コロユ{
場合， TBZ1000μg
，BHT30μgで復帰コロニ{数が 3倍
の増加が見られた〈図 1
)
. Amesら11)の突然変異誘起能
に増加した.これは 0
.
0
1
8
復帰コロニー /μmoleとなり，
.
0
1
8復帰コロニ -/μm.
を表わすための計算によると， 0
非常に弱いが突然変異誘起性陽性と判断した.
。
l
eTBZ となる. Ames らは，この値が 0
.
0
1を越える
化合物は突然変異物質であるとしている.従って， TBZ
と BHTの混合溶液は突然変異誘起性をもっと考えられ
文 献
1
) 藤田博，小嶋昭江，平賀興吾:東京衛研年報， 2
8
3，1
9
7
7
-2，5
るが，河内 12)の突然変異誘起性の強さによる分類に従う
8
2
)小嶋昭江，藤田 博，平賀興吾:東京衛研年報， 2
ならば非常に弱い突然変異誘起性である.
6，1
9
7
7
-2，5
3
)P
r
a
s
a
d，O
.M.，a
n
dKamra，O
.P
.
:1
n
t
.J
.Radiat.
Nagao13) は Amesの mutatJont
e
s
t系において突然
変異誘起性を示さないオルトトルイジンおよびイエロ{
B
i
o
l
.，
2
5
，67，1974
2
8
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oMetr
・J
?
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
9
8
0
4
)U
l
l
a
n
d， B
.M.，and Weisburg
巴r
，E
.K
.:Fd
1，1
9
9，1
9
7
3
C
o
s
m
e
t
.T
o
x
i
c
o
l
.，1
5
)P
r
a
i
n
o，C
.，Fry，R
.J
.M.，S
t
a
f
f
e
l
d
t，E
.，andC
r
i
s
t
o
p
h
e
r，J
.P.: Fd C
o
s
m
e
t
.T
o
x
i
c
o
l
.，1
5，9
3，
1
9
7
7
6
) Wattenberg
，L.W.:]
.N
a
t
l
. CancerI
n
s
t
.，
6
0，
1
1，1
9
7
8
7
) Ames， B
.N.，McCann， J
.，andYamasaki，E.:
MutationR
e
s
.，3
1，3
4
7，1
9
7
5
8
)藤田博，平賀輿吾:東京衛研年報， 2
9
2， 4
0，
1
9
7
8
9
)藤田
博，平賀輿吾:東京衛研年報， 3
0
2， 4
1，
1
9
7
9
1
0
)矢作多貴江:蛋白質核酸酵素， 2
0，1
1
7
8，1
9
7
5
.，Choi，E.，Yamasaki，E.，andAems，
1
1
) McCann，J
B
.N.:P
r
o
c
.N
a
t
. Acad.S
c
i
. USA，72，5135，
1
9
7
5
1
2
)河内卓:蛋白質核酸酵素， 23，4
2
2，1
9
7
8
1
3
) Nagao，M.，Yahagi，T.，and Sugimura，T.:
B
.
B.R.C
.，8
3，3
7
3，1
9
7
8
東京衛研年報 A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，2
9
3
2，1
9
8
0
4 種のかび防止剤の組み合わせによ~突然変異誘起性
藤田
博*，平賀輿吾*
Mutagenicityof Paired Fungicide Mixtures inthe Salmonella/Microsome Test
n
dKOGOHIRAGA*
HIROSHI FU]ITA*a
u
n
g
i
c
i
d
e
s，チアベンダゾール t
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l，オノレトフ
Keywords:かび防止剤 f
ジフェニ{ノレ
z
ニルフ
z
ノ{ノレ
0・p
h
e
n
y
l
p
h
e
n
o
l，
d
i
p
h
e
n
y
l， パラヒドロキ、ン安息香酸プチノレ ρh
y
d
r
o
x
y
b
u
t
y
l
b
e
n
z
o
a
t
e， 突然変異誘起性 r
n
u
t
a
g
e
幽
n
i
c
i
t
y
タール(以下 PBと略す，吉田製薬〉またはアロクロー
緒 言
柑きつ類のかび防止剤として使用されているチアベン
ダゾ{ノレ(以下 TBZと略す)，オルトフェユルフェノ{
ル(以下 OPPと略す)，ジフェニ{ル(以下 DPと略す〉
2
5
4(以下 PCB と略す，三菱モシサシト化成〉を用
ル1
いた.
Mutationt
e
s
t 菌株は Salmonella t
y
ρhimurium
およびパラヒドロキ、ン安息香酸フoチル(以下 PHBBと略
TA98を用い A
r
n
e
s法 5)の変法18)により行った.代謝活
す〉の安全性については当部においても種々の聞からの
性化には PB または PCB により薬物代謝酵素を誘導
検討がされて来た 1-4)
i
s
t
a
r系ラ
した W
5
)の
突然変異誘起性に関する報告としては， A
r
n
e
s
r
n
u
t
a
t
i
o
nt
e
s
t系を用いた TBZ，DPおよび PHBBの
γ
ト雄の肝臓ホモジネートを 9000xg
で1
0
分間遠心した上清分画(以下 S
-9と略す〉を用いた.
4種のかび防止剤を 2種ずつ組み合わせ 6種類の実験
陰性の報告 6，りがある.しかし， OPPについては陰性の
を行った〈表1).各実験は 2化合物ともそれぞれ1
0
0
0，
報告 6，りが多いなかで花岡田による陽性の報告も見られ
1
0
0，1
0，1および 0μg/プレートの 5濃度段階とし，す
る.
べての濃度の組み合わせは 2
5
種類とした.
多くの化合物の突然変異誘起性の検索が広く進められ
混合試料苦言液 O
.
l
r
n
lに代謝活性化する場合には0
.
5
r
n
l
てくるに従い，突然変異誘起性は持たないが，他の化合
の S-9Mix18，
1
引を，しない場合には 0
.
5
r
n
lのリン酸緩衝
物の突然変異誘起性を変動させるノノレハルマン 9，
1
0
) やジ
液(
pH7.4)を加え，さらに一夜培養の TA98菌液 O.lml
1
2
) (以下 BHTと略す〉の
ブチノレヒドロキシトノレエ γ11，
を加え， 3TC、
で2
0
分間の前培養を行った.これに 4
5
'
Cに
ような化合物が見い出され，相互作用が起る場合が示さ
保混した軟寒天 1
4
)
2
m
lを加え混合後，最少寒天培地14)に
れて来た.
7
'
Cで4
8時間培養後，プレートに生じた復帰
播種した. 3
そこで，我々は 4種のかび防止剤が 2種以上併用され
コロニ{を計数した.なお， S-9Mix中の S
-9量は PB，
2種ずつ組み合わせた混合溶液の
PCB誘導 S-9共に 5
0
μ1
/プレ{トとした.ただし， S-9
突然変異誘起性を A
r
n
e
sの r
n
u
t
a
t
i
o
nt
e
s
t系を用いて検
量を変える実験では， S
-9
量は 0
，2
5，5
0，1
0
0および 1
5
0
討したので報告する.
f
11
/プレ{トとした.
ている現状も考慮し，
実験材料と方法
試料
すべての測定値はプレート 3枚の平均値で示した.
TBZ (メノレグ， LotN
o
.BZA-539)，OPP(
東
京化成 L
otN
o
.FB-101)，DP(東京化成 LotNo. A101)
結巣と考察
TBZ，OPP，DP および PHBB の 4種のかび防止
および PHBB (和光純薬 L
otN
o
.KI02
2
8
4
) をジメ
剤を 2種ずつ組み合わせた 6種類の r
n
u
t
a
t
i
o
nt
e
s
tの結
チルスルホキサイド(和光純薬 L
otN
o
.B
7
7
5
3
7
8
)に
果を表 1に示した. TBZ-DP，TBZ-PHBB，
OPP-DP，
溶かした.陽性コントロ{ルとしてフリルフラマイド
OPP-PHBBおよび DP-PHBBの 5種類の組み合わせ
(AF-2，上野製薬)，ベンツ (
a
)ピレシ (BP，和光純薬〉
では代謝活性化の有無にかかわらず復帰コロニー数に変
および 2
-アセチノレアミノフルオレン (AAF，和光純薬〉
化は見られず， 突然変異誘起性は検出されなかった.
を用いた.薬物代謝酵素の誘導剤としてはフェノバルピ
TBZ-OPPの組み合わせでは，代謝活性化しない場合と
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
h
o
r
n
e，S
h
i
n
j
u
k
u
k
u， Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
2ι1，Hyalmnincho3c
*東京都立衛生研究所毒生部
占
-
同
1
-6 DP-PHBB
﹄
の
L
唱A
只
U1ム0
0
内h
U00
i
EAリ u
a
u
q
δ i
噌
噌n
u 田川廿却 zu
qO 向。 5 4 2
zuqan，
&の
A2
日リn
qGn'O0 A
onu 9UA宮 内U
90τiτi pbqd9u 日明副却 FDndnG RUA告内、υ
k
F
S
- 河内、・凶ヨ急、。﹄向、守-NNE- bF・吋・同・・ 21N・58
伊
戸
戸
凸りのよ“ヴd
F
h
u
η
Oi
唱
3に
。
。
A
4。
ORhunU q
t
u
n
H
d
A
U
唱
Ruqoqo FbqOQd
凋任。，“
1V
u
UAUAUnunU U
凸A
UnuhununununUAU
白h
噌
i 唱i
O tiηtzu w
nvnLη& 組処qa b i
凸
d
η
δ
噌 nリO
・9“
4 zuqaqo A&A
F
h
u
q
a
n
L E
U
η
ο の
η
A 司土
'qan'A3
nuoonu g
弓o
onozanU i
噌 qonリη
522533533542533
円
白
dワanu
EUnv
'
弓E
υFO zuη'nu
U 内。。，“
F
h
d
q
O
0
4 RυqonL E
C口n
H
d
o
o 川叩川品部
a佳n
LL
の
同
巧
90qoqa qoa告C
O η
G
n
u
q
δ qontoo nuQU d
4 FbqonL
U 向。n
L Fbquqd auqO の
nbqdqo R
巧
o
d
s
ι
T
U hungAU 8 0 4 n
vi
todQU h
唱o
‘
4 "bA3
AA9U 噌よ 5 3 2 pbqoqu 凋品・ 8告η
nunUAUnりのUnununununUAUAUAUnunu
門，
Anu a dnυqu i
anUOO bqooo
an百 ワ
市
唱q
“
U 訓告n
L HUA・9
zuqO04 RUEuno O A‘q
u R
“
，
0i
U
5 の
poquqa 向日nLcu 。，us笹 田u
川
GRU 0
唱A
h
u
p
u
n
h
U 凋令向。 F
FDQU9u a佳 凋 佳q
o auηoqo F
﹃
m
副部部門出向悩羽田川岨却曲川叫訪白川切羽
“
，
内
四
U
4告。，u
ununu aqδτi 白川廿却 oonunY h
432 R
。
δqo
p
h
u
q
o
q
a
U
000979521923097
RUAaqbA- 必せっd A ‘A-qdFbqu2
内
000384529788670
に
uqoqOFhuaAτηLa佳qaqO 必佳q3qa
000991425997402
432532432443
U
n
u凸
ununリ 凸uhunuhununuAununuAU 白
PCB
1
0
0 PB
凸
リ
Aununu
M切 羽 羽 田 必 泊 必 沼 郡
内
占
9u 1
t
i δA&9u 7 0 9
ρ
白 白d
iι
凋τ
q
Ai
i
i
i nL1 14 n
L
η
ρ
唱1
噌t
ono 戸 包 i
凋告d告 の
'u
AUnu--ηd d
巧q
δ 。，u 。
噌
LEUqaqGZU の﹃unL
に
dqa i
唱 zua伎 の
000482766029954
532532542442
000 回
目制 U
000564757909571
42442442433
PCB
1
0
0
0 PB
、
t
η ，。，“
民u
n
z
u
n
U 465 9
， i
auq
upo ヴ
0
ηa
唱
に
F
h
d
η
0
η
uqoqA 6 3 3 noqaQG にほηoqo
守
4・0dqd 3 5 6 2 6 5 白川品部 RuqδnU
unL
9do，
n
L
i 311 0
L
0i
噌n
戸
HHm
叫
'
0
0bnO U
凸n
va告 の LoonuoonO ヴ ' 月 tn汐n
432533542542442
白 白 抑 制 日 必 白 川 目4 沼 田 日 叩 訪 貯
。PPBCB
PCB
PB
。
PCB
PB
。
。
GAUood告nunvnリnooOEリヴ4nyn'oono
EUoonLEUcoqon口ηon4rBaa-qorDqO のよ“
PCB
PB
1
PCB
PB
1
PCB
PB
1
企
PCB
1
0 PB
PCB
1
0 PB
PCB
1
0 PB
QdAQUTAQU9UQd ヴ ， ヮ “ ヮ 白 氏uquQUQU9hM
462543633632533
PCB
1
0
0 PB
1
PCB
1
0
0 PB
AUAUAUnununununununUAUAUnununu
PCB
1
0
0
0 PB
1
0
PCB
1
0
0
0 PB
3
) 陽性コシトロール:PCB-89=BP (
1
0pg) 365-615，PB-89=AAF (
1
0pg) 4100-5100，89
一=AF-2
1
) 5
0p
l
/プレート， 2
) μg/プレート，
(
0
.0
5pg)309-657
1
0
。
PHBB
89
DP
1
0
0
0 1
0
0
PCB
PB
PCB
PB
0
0
1
0
0
0 1
1
PCB
PHBB
。
。
。PPBCB
OPP 89
PCB
PB
1
1 PB
PCB
PB
1
PCB
1
0 PB
PCB
1
0 PB
1
0
PCB
1
0
0 PB
PCB
1
0
0 PB
。
0
0
1
0
0
0 1
PCB
1
0
0
0 PB
PCB
1
0
0
02) PB
。
PCB
1
0 PB
。
1
DP
OPP 89
PCB
1
0
0 PB
1
0
1
1
0
0
0 1
0
0
1
0
1
0
0
0 1
0
0
。
1
0
1
2) 1
1
0
0
0
0
0
1
5 OPP-PHBB
1
4 OPP-DP
PCB
1
0
0
0 PB
1
。
PHBB
TBZ 89
DP
TBZ 89
OPP
TBZ 891)
c
コ
w
1
1 TBZ
ー
opp
e
s
t3)
表1. かび防止剤を 2種ずつ組み合わせた混合溶液の TA98を用いた mutatIont
1
2 TBZ-DP
1
3 TBZ-PHBB
3
1
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
れたことから， Amesら聞の突然変異誘起能を表わすた
めの計算によると， 0
.
0
1
4
復帰コロニー /
μmole となる.
Amesらは，この値が 0
.
0
1を越える化合物は突然変異物
0
ド
日H H H
qJqd
DLHVH
HPU
白羽
1
qq1
gq
ーム司 i
内
ηhunununU U
ununUハunu
OA@&
ロ
E
0505
1
0
0
質であるとしている. 従って，
TBZ
-O
PP の混合溶液
は突然変異誘起性を持っと考えられるが，河内 16)の突然
変異誘起性の強さによる分類に従うならば非常に弱いも
，
.
.
Q)
のであると考えられる.
同
・
4
F
p
.
、
TBZ-OPPの混合溶液が突然変異誘起性を示すために
u
l
g
5
0
はPB誘導 S
-9による代謝活性化が必要である.従って，
由
・
代謝物質の存在が予想されるが，その物質が TBZ由来
u
か
， OPP由来かそれとも両者によるのかは明らかでは
F4
0
VHD
日戸何回U
﹀む凶
ない.しかし， TBZ と BHT の混合溶液が突然変異誘
起性を示す 17)こと，そして BHTが突然変異物質の突然
変異誘起性を変動させる作用を有する 11，
1
のことを考慮す
ると TBZ由来の代謝物質の可能性が考えられ， OPPは
BHT 同様の変動させる作用を持つのではないかと考え
られる.今後，この点について検討する予定である.
5
0
1
0
0
S-9ω1)
1
5
0
図1. TBZ とoPP の混合溶液の S
.t
y
ρh
i
m
u
r
i
umTA98を用いた m
u
t
a
t
i
o
nt
e
s
tにおける S-9量
の影響
同一 S
-9量のコントロ-/レ (TBZO
'
μ
g
)の復帰
コロエ{数 (27~40) を引いた値を示す.
要 約
4種のかび防止剤を 2種ずつ組み合わせた混合溶液の
突然変異誘起性を Amesの m
u
t
a
t
i
o
nt
e
s
t系を用いて検
討した.フェノパルピタ{ノレ誘導ラットの肝臓ホモジネ
ートを用いて代謝活性化した場合に，チアベシダゾ-/レ
1
0
0
0
μ
g
，オルトプェニノレプェノ{ノレ 30μgで復帰コロニ
ーが約 3倍に増加した.これは0
.
0
1
4
復帰コロユー /
μmole
PCB誘導 S-9を用いて代謝活性化した場合には復帰コ
となり非常に弱いが突然変異誘起性陽性と判断した.こ
-9を用
ロニー数はほとんど変化しなかった. PB誘導 S
の組み合わせ以外はすべて陰性であった.
いた場合には TBZ1000μg，OPP10μg/プレートの時，
文 献
TBZまたは oPP単独のコントロールに対して復帰コロ
1
) 佐々木美枝子，縄井寿美子，中尾順子:東京衛研年
ニ{数は約 2倍の増加が見られた(表 1
1
)
.
このように， PB誘導 S
-9を用いて代謝活性化した場
合に TBZ・
oPP の組み合わせで復帰コロニー数に増加
が見られたので，代謝活性化に用いた S-9Mix中の S
-9
量による影響を調べた(図 1
)
. TBZは 1
0
0
0
μ
g
/プレー
報
， 2
9
2，1
0
4
，1
9
7
8
2
) 小豚昭夫，安藤弘，久保喜一:東京衛研年報， 2
9
一
2
，1
1
2，1
9
7
8
3
) 吉田誠二，縄井寿美子，平賀輿吾東京衛研年報，
3
0
2，4
8，1
9
7
9
トに対し oPP は 3
0μg/フ.レ{トとし， S-9 量は 0~150
4
) 田山邦昭，井口重孝，平賀興吾:東京衛研年報， 3
0
μl
/フ。レートとした. S-9量の増加に伴って復帰コロニー
5，1
9
7
9
2，5
5
) Ames，B
.N
.，McCann， ，
.
] a
nd Yamasaki，E
.
:
-9
量1
5
0
μl
，TBZ1000μgでは TBZ無添
数は増加し， S
加の{直に対して約 3倍の増加であった.
以上のように， TBZあるいは oPPは単独では突然変
-9によ
異誘起性を示さないが，両者を混合し PB誘導 S
M
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，3
1，3
4
7，1
9
7
5
0
2，
8
3，1
9
7
9
6
)小嶋昭江，平賀興吾東京衛研年報， 3
7
) 河内
卓・遺伝変異原物質を主とする発癌物質スク
る代謝活性化を行うことにより復帰コロニー数が増加し
リ{ニシグの技術開発，厚生省がん研究助成金によ
た.従って，この増加は， TBZ と oPP の相互作用の
9
7
5・
1
9
7
6
る研究報告， 1
結果であると考えられる.ただし，その機構は明らかで
はない.
TBZ1000μg，OPP30μg/フ。レ{ト， S-9
量1
5
0
μl
/プレ
1個の復帰コロニ{数の増加(図 1) が見ら
{トの時， 9
9
1，6
6，1
9
7
6
8
) 花田信次郎:栄養と食糧， 2
9
) Nagao，M.，Yahagi，T
.，andKawachi，T.:P
r
o
c
.
Ja
ρan A
c
a
d
.，5
3，9
5，1
9
7
7
1
0
) Nagao， M.， Yahagi， T
.，and Sugimura， T.:
3
2
1
2，1
9
8
0
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，3
B
.B
.R
.C
.，8
3
，3
7
3，1
9
7
8
1
1
)藤田 博，平賀輿吾:東京衛研年報， 2
9
2， 4
0，
1
9
7
8
0
2， 4
1，
1
2
)藤田博，平賀輿吾:東京衛研年報， 3
1
9
7
9
1
3
)矢作多貴江:蛋白質核酸酵素， 2
0，1
1
7
8，1
9
7
5
1
4
)藤田 博，小嶋昭江，平賀輿吾:東京衛研年報， 2
8
2
，5
3，1
9
7
7
1
5
)McCann，，
.
J C
h
o
i，E
.，Y
a
m
a
s
a
k
i，E
.，a
n
d Ames，
B
.N
.;P
r
o
c
.N
a
t
.A
c
a
d
.S
c
i
. USA，7
2
，5
1
3
5，
1
9
7
5
1
6
)河内卓:蛋白質核酸酵素， 2
3
，4
2
2
，1
9
7
8
1
2，2
6，
1
7
)藤田 博，平賀輿吾:東京衛研年報， 3
1
9
8
0
東京衛研年報 A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，3
3
4
2，1
9
8
0
クロム鉱さい粉じんのラットによi>3か 月 間 持 続 吸 入 実 験 ( 第
1報〉
体重，器官重量，組織学的変化について
坂本義光犬神谷信行*，池田虎雄ぺ平賀輿吾*
InhalationExperimentsofChromite Ure Residue Dustt
o Ratsfor 3 Months (
1
)
BodyWeight
，UrganWeightandHistologicaIChanges
n
dKOGOHIRAGA*
YOSHIMITSUSAKAMOTO*，NOBUYUKIKAMIYA*，TORAOIKEDA*a
h
r
o
m
i
t
eo
r
er
e
s
i
d
u
ed
u
s
t，ラット r
a
t，吸入毒性 i
n
h
a
l
a
t
i
o
nt
o
x
i
c
i
t
y
Keywords:クロム鉱さい粉じん c
緒
Table1
. M
e
t
a
lC
o
n
c
e
n
t
r
a
t
i
o
no
fDust
言
クロム鉱さい粉じんの経気道摂取による生体におよぼ
す影響を観察する目的で，粉じん吸入実験装置 1) を用い
た昼夜連続の吸入曝露実験を行なっている.すでにラッ
トによる 7日間および 1
か月聞の吸入実験を行ない，結果
については前報で報告した%の.実験では鉱さいの影響
を呼吸器系だけでなく，ラ
γ
トの生育状態，血液血清成
分，肺以外の諸臓器についても観察を行ない，同時に諸
臓器中のクロム含量を分析し，経気道摂取によるクロム
の体内分布についても検索を行なった的. 前実験におい
て鉱さいの生体への影響は，鉱さいの可溶性成分による
防組織への直接的な作用が主で，他の諸臓器への影響は
認められなかった.本報では，さらに吸入曝露を継続し
た場合の肺の組織変化の経過ならびに他の諸臓器への影
響の有無を観察し，今後行なう予定の低濃度長期吸入実
C
h
r
o
m
i
t
eo
r
er
e
s
i
d
u
e
く%)
Ca
2
1
.2
Fe
6
.
1
Cr
2
.
8
(1
.2
)
*
S
i
2
.
4
Al
1
.
8
Na
0
.
4
Ni
0
.
3
MnTiZnS
r <0.1
JISDustNo.1
1
S
i
F巴
Al
Mg
Ca
Ti
Cr
く%)
16-19
12-16
14-17
2-4
0-2
0-2
ND
( )*:Waters
o
l
u
b
l
eCr
各粉体の比重は鉱さい 2
.
7
9，関東ロ{ム 2
.
9
7であり，
原粉体の平均粒径は各々 3
.
3および1.7
9
μ であった.
粉体の化学的性状について T
a
b
l
e1に粉体中に含まれ
験の濃度設定の参考にする目的で行なった 3か月間の昼
る金属の濃度を示した.鉱さいについては原子吸光分析
夜連続吸入実験の結果を報告する.実験は，実験室内空
りにより，また関東ロームについては日本粉体工業協会
気のみを通したチャンパー内飼育の対照群の他に，姉の
の分析債によった.鉱さい中のクロム量は 2.8%，水可溶
粉じんに対する反応を比較する目的で，エアロゾルとし
性グロムは1.2%であった.また T
able2に成分の化学
た時に鉱さい粉じんと同様の粒度分布を示す関東ロ{ム
able1の値より換算した濃度を示した.
的組成および T
粉体の吸入曝露群を比較対照群として設定して行なっ
クロム鉱さいについては，含まれる主な金属についての
T
こ.
み
，
実験材料および方法
X線回折分析による結果を示した.また関東ローム
については T
able1と同様である.鉱さいでは Caの化
S
l
c
W
i
s
t
a
r系雄ラット， 4週令を購入し 1
1日間
合物が主な成分であり，関東ロ{ムは S
i， Al， Feの
予備飼育した後，実験に用いた.吸入実験開始時の体重
化合物が主な成分であった.なお鉱さい中 Cr6+ につい
は 110~135g であった.
ては検出できなかった .X
線回折分析は島津 X線回折装
動物
粉体
クロム鉱さい粉じんは，鉱さい塊を前報3) で述
置 XD-3Aにより，同社に依頼して行なった.粉体の生
べた方法により粉砕，分節し調製した.比較対照として用
理食塩水に対する溶解性は前報2) に記したとおりであ
I
SZ
8
9
0
1
いた関東ロ{ム粉体は日本粉体工業協会より J
る.
試験用粉体 1
1種を入手し，使用した.両粉体とも吸入実
吸 入 実 験 実 験 は 1群1
6
匹として，比較対照の関東ロ
験に用いる前に 1
0
0
'
Cで 一 昼 夜 乾 熱 し た - ム 粉 体 10mgjm3 (
JI
SD
u
s
t群)，クロム鉱さい粉じん
*東京都立衛生研究所毒性部
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
2
4
-1
，H
yakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
k
u，Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
34
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，3
1
2，1
9
8
0
h
e
m
i
c
a
lC
o
m
p
o
s
i
t
i
o
no
fDust
Table2
. C
Table3
. P
a
r
t
i
c
l
eS
i
z
eD
i
s
t
r
i
b
u
t
i
o
n
so
f
A
e
r
o
s
o
li
nl
n
h
a
l
a
t
i
o
nChamber
巴 r
e
s
i
d
u
ed
u
s
t
Chromiteo
r
S
a
m
p
l
e
r
S
t
a
g
e
%
Foωrmu
叫
lla
ぜ~~ドe
.7
51
00EU
OQA
丹
7144
%
30-40
26-32
17-32
3ー 7
0-4
0-3
*:X-Rayd
i
f
f
r
a
c
t
i
o
na
n
a
l
y
s
i
s
01234567V
CaCO
s1
CaO J
Fe20S
Si0
2
A120s
C
r
2
0
S
JISDustNo.11
Formula
Si0
2
A1
20s
Fe20a
MgO
Ti0
2
CaO
Weightp
e
r
c
e
n
t
D
i
a
m
e
t
e
r
μ
Cr-L
Cr-H
JISDust
>11.0
1
1
.0
ー7
.
0
7.0-4.7
4.7-3.3
3.3-2.1
.1
2.1-1
1
.1-0.65
0.65-0.43
0.43>
1
.0
8
1
.6
6
3
.
7
1
1
3
.
3
9
3
0
.
4
0
3
6
.
4
6
1
2
.
7
1
0
.
4
9
0
.
1
0
1
.1
0
1
.5
2
7
.
4
7
2
0
.
6
5
3
3
.
6
2
2
5
.
2
9
9
.
0
1
1
.
1
4
0
.
0
2
1
.
1
8
1
.5
2
5
.
3
1
1
9
.
8
3
3
7
.
2
9
2
6
.
6
6
6
.
8
8
1
.0
0
0
.
3
3
8
*:F
i
l
t
e
r
いて C
o
u
l
t
e
rC
o
u
n
t
e
rM
o
d
e
l
sを用いて， WBC，
RBC，
Hgb，Hct，MCV，MCH
，MCHCを測定した.
3)血清生化学的検査.定法により調製した血清につ
10mg/ms(Cr-H群〉および 1mg/ms(Cr-L群〉の粉じ
いて自動分析装置 (HITACHIM-400) により， TP，
ん曝露群と実験室内空気のみの対照群の 4群を設定し 9
1
Alb， Cho，Glu，U N，GPT，GOT，Alp， ChE を
羽
目
日間昼夜連続で行なった.なお実験に使用した吸入実験
定した.
装置の詳細は前報にゆずる 1)
実験期間中，動物は吸入
チャシバー内に 2個のケージに等分して収容し，クレア
製固型飼料 CE-2およびチャ γパー内給水ノズルより水
4) 剖検.肉眼的観察.
5)臓器重量の測定.脳，心臓，肺(左右)，肝臓，牌
臓，腎臓〈左右)，胸腺，精巣(左右)，前立腺，下垂体，
道水を自由に摂取させた.チャシパー内飼育条件は換気
甲状腺，副腎(左右〉を測定した.各器官について絶対重
回数1O ~11 回/時で，温度 25~260C ，湿度 50~60% であ
量と解剖j
時の体重にもとづいて体重比重量を求め各群 1
0
った.照明時聞は吸入実験室と同様午前 6時 午後 6時
例の平均値土 S
.
D
.で表わした.さらに肺については 1
1
0
とした.またチャンパー内粉じん濃度の変動幅は各群と
℃で恒量になるまで乾異常し，乾燥重量及び水分含量を測
able3に示
も設定濃度土 10%以内であり，粒度分布は T
定した.
したように各群とも 4
.
7
μ 以下が90%，2
.
0
μ 以下は，鉱
s
さい 1mg/m 曝露群では約 50%， 鉱さいおよび関東ロ
縦隔部リシパ節，食道，胃，小腸，大腸，唾液腺，すい
s曝露群では約 35%の割合であった.
{ム粉体 10mg/m
臓，鼻腔を摘出し， 10%
緩衝ホルマリシで固定した.肺
検 査 動 物 は 曝 露 後9
1日自に大腿部動静脈を切断，放
は結主主した気管より周定液を約 10cm水柱の圧で注入
6) 病理組織学的検査.重量秤量臓器の他に，気管，
6
例中 1
0
例に
出する血液を採取し，放血屠殺した.各群 1
し，再膨張させた後固定した.悶定後定法に従って組織
ついて器官重量秤量，血液，血清生化学的検査および臓
標本を作製し， HE染色の他に， PAS反応，鍍銀染色を
器中クロム含量の測定を行ない，残り 6例について病理
行なった.
組j
織学的検査を行なった.このうちグロム含量分析につ
いては神谷らめの報告にゆずる.
1) 一般症状の観察および体重の測定.実験期間中毎
結 果
1
. 一般症状 吸入曝露期間中，各粉じん曝露群の動
物の挙動，外見には，特に異常は見られなかった.
日，吸入チャ γ パ{のガラス窓より観察し，また週一度
2
. 体重 吸入開始日より毎週の体重および増加率の
の体重測定時には，呼吸の際の鼻および咽喉よりの異常
音の有無に注意した.体重は毎週の各群の値を 1
6
例の平
値を T
able4に示し，各群の増加曲線を F
i
g
.
1に示した.
s曝露群では，曝露
表に示したように，鉱さい 10mg/m
均値土 S
.
D
.，および吸入開始時の体重にもとづいた増加
1
0週目より対照に比べ有意に小さかったが，増加率では
率(%)で表わした.
差がなかった. しかし各群の増加曲線をみると， F
i
g
.
1
2)血液学的検査.上述した方法で採取した血液につ
に示したように，鉱さい曝露群では曝露後 4週目より増
Table4
. WeeklyBodyWeights andBodyWeightGainsDuringExposuret
oDustf
o
r3 Months
3
3
5土 20
2
7
4土 20
3
3
9土 14
3
2
7
9土 1
8
3
2
4土 1
0
2
6
7土 1
1
*
*
3
1
4土 2
減
6
2
6
1土 2
3
2
8土 2
0
2
6
8土 2
0
3
3
2土 14
2
7
3土 1
3
3
1
8土 17
2
6
2土 9
3
1
0土 2
0
*
2
5
7土 25
9
2
8
0:
1
:1
4
3
2
2
9土 1
2
2
8
0土 1
0
2
3
1土 1
5
2
7
3土 1
2
2
5土 7
5
2
7
4土 1
7
2
2
7土 1
2
9
3土 1
5
2
3
9土 14
2
2
9
2土 1
1
2
4
0土 1
6
2
8
3土 1
2
3
3土 7
7
2
8
3土 1
9
2
3
5土 1
3
0
2土 1
5
2
4
7土 1
4
3
0
2土 1
2
2
4
8土 1
1
2
9
4土 1
6
2
4
2土 8
2
9
1土 1
8
2
4
2土 2
0
2
3
3土 1
2
1
:8
1
9
0:
2
3
2土 8
1
9
1土 7
2
2
2
8土 1
1
8
9土 6
1
2
3
2土 1
1
9
2土 1
1
JISDust (
1
6
)
Cr-L
(
1
6
)
Cr-H
(
1
6
)
1
2
2土 7ω153土 9 1
8
3土 1
1 210土 1
1
1
2
5土 3b>1
4
9土 5 1
7
2土 7
1
2
1土 5 1
5
2土 7 1
8
1土 7 2
0
8土 8
4
8土 6 1
7
1土 6
1
2
5土 3 1
5
2土 9 1
8
0土 1
2 2
1
1
2
1土 6 1
0
5土 1
4
9土 5 1
1
2
5土 3 1
6
9土 4
5
2士8 1
8
2土 8 2
1
2
0土 5 1
1
0土 9
5
1土 7 1
7
4土 9
1
2
5土 5 1
(
1
6
)
6
5
4
3
2
1
2
5
0土 14 2
6
5土 14
0 2
2
0
4土 1
2
1
6土 1
0
6
5土 1
2
5
1土 9 2
2
0
6土 8 2
1
8土 9
2
4
4土 14 258土 15
2
0
1土 6 2
1
3土 7
3 2
2
4
5土 1
6
1土 14
6
2
0
3土 14 2
1
6土 1
8
3
1
3土 15 3
2
1土 1
7
2
5
6土 16 2
6
2土 1
8
314土 12 322土 13
1 265土 1
2
2
5
9土 1
0
8土 16
3
0
3土 16 3
5
4土 9
2
5
0土 9 2
0
*3
0
2土 2
0
*
ネ
2
9
7土 2
2
4
7土 2
3 2
5
0土 24
1
3
12
1
1
1
0
7
C
o
n
t
r
o
l
Experimentald
u
r
a
t
i
o
na
f
t
e
rt
h
es
t
a
r
to
fe
x
p
o
s
u
r
e (weeks)
。
No.of
r
a
t
s
Group
減
望
者
a
) Absoluteweight (
g
)，mean土 S
.D
.， b
) Bodyweightg
a
i
可%):(Eachweek'sweight/weighta
tt
h
es
t
a
r
to
fe
x
p
o
s
t
田)x
1
0
0
.
S
t
a
t
i
s
t
i
c
a
ls
i
g
n
i
f
i
c
a
n
c
e， *p<O.0
5，料 p<O.Ol(
v
sC
o
n
t
r
o
l
)
芸
員
・巴∞。
2lM
H
hB完・本胃 H蝋脳内斉酬副
透通什除法
背開篠田附議 fqpH
uy創作一済川 wrJ
N
V盤 ゆ A，
J﹃
下
国
母
島
)
掛
田
執
掛
出
町 45MUHAd恥v dパ詮吊)磯田耕岬刊行完滋適作詩
内
吊
﹀
搬
をH
汁伶蛍国即日白川薄前戸、パ UYOすが vqf ・
ト時同州冷戸、汁 U
網棚刺殺(のTE議﹀・罫雷雨苫行きロ
世
間
川
明 rJHOg悶¥BJ
下
声議官 H轍凶町干HNHbM44h・
﹀・国司 3 9命幼時凶刊行
い
民 λbvNgνd汁 erogH
NVAVδ胃
1
汁ゆ歯固定 Hu 遺品町市押 dパ rJ
治併が07汁・証錦戸、パ rJNVU
庁玲賛同殴旦)証規胃 H h q・対西川明営汁捕時ロト常市市島)判明
R-U
B
庁ゆ醤国防局υ
叩δ前回附斉割問︿ UY ヴ 怜 戸 市
議官 HL
h・国母国世苫宵干 HU
叩δ迦尚吊 U国
母
国
防 dpH
V議
汁玲登首砂川、八一明前斗 N
昨何%サ L
含
・ U
凶UYV営・掛呂田健局)越除 H
V薄淘併
ゆ序回日制﹁汁罫寄陶帥 A
庁M
O
U
爾l号制岡田附 δ厨
母
司
即
片
一
回
附
吊U
叫
v
h
- 雪国防脚 fqpH- 国
祈叫 m﹁パ﹁ J
滅吟戸、八回司出回苫胃ド
O
M
庁伶醤国宙局﹀l強円高・時件直 U
戸、パ営ア U
O
H
罫国防 3 Rゃん薄叫問
露骨甘一必品町議 t
v
h戸、汁法治掛自国ぽ U
m
d
ト首ポ t
ロ
日血潮百 lkyき森編剰報 QZug同議)・同岬ゆ戸、持 補
Hヰ
d
rJパ 命 議fq九)討論泣針。 隣同時
﹀
脳
内 4R d
時汁向い営吊 U吊
い
胃
、叶白豆町∞門川町什 δ パ出﹁ HH・
・
片岡団・山別品刊行， orJパ帯。営汁訴湘胃ド，、 urJパ九﹀タ神間 λ び
λ議行出町 45H
・ M
材難 dFH
脳内 4Rδuyv営
酬
洲
町 U O営 Ngud汁
F
露"羽田蹴吊﹀
判
官 mJFH v
恥v d汁・州汁蜘開札 wrJHOB悶¥自 ω拙
urq
円
、
・
刷 mvuMN vud汁
森岡﹂江町 d 斉
誌滋岡剛 uqHιJM UU44hMZ
見
阿
礼
明
惑溺棉ヰロト縮刷同制拙材育刊抑制官 U O営汁胤阿R
回・掛田簿岬 WEd
撤回附宗務国附宵い詩、一二、パ rJNvh
町
九υ
明
︿ -L
森榔民 H併 RA-JM
申凶器滋槻剛・
潟明副刺殺 fq
弔岡剛 U
片
蜘
阿
川
明
﹁J
出器﹂弘、千九)悪報 eq骨
切﹁汁・
同¥一 B♂酒湖?
l
P議， dFH- 今川別対商品町
片円八・世阿 MwrJHOB
同行滋
岬陣品町時間同
ム越国三、パ rdMmMOM-NTSd
Nr
ゆ玲陣 A
V述、須符 -R
﹃門部﹁汁・品中拙制作沙諸岡剛δ遣い守口行民主﹁パ持瀦同州-
同
開
P議 qnRλ社
︿・時け惜肘叫明 rJ溺鯵同州議 dFH- 謹減司 1 ・
蛮 -afmd恥v d
週議 Nn
庁
山
明
治 vdげ・品叩拙嚇 H所附計局)同部 rd
﹃
nu
今時 W剛品町吋白ゲ円四日
汁・国母(附綿﹀ δ時同州仰剛、持一箔岡剛 uNR
庁
仙
﹃
O
H
計測宵い U
剰報 u伊滋田知胃 HRλ議滋岡剛 w森岡浜岡剛 U
山崎由担月刊脳内食品町切戸、汁③斉罫﹂ゆ品叩捕時ロト繍
胃い切戸、刊 H H U R
m
- 綿時剛剛訴湘品町時什 δパ吋曲げ︼目。内・切戸、 HH・糊
官
。
。
υ¥
同司法法適胃い詩、， h命令汁山明治 νd 苛
、A
γ討す d刊・
ム・珪添加品加盟 wm司lkf 惜同 ωrd溺務雨報δ議罰百
u論。営月阿見7 4汁
・
$骨即断訴湘 FHW 出遅滞山知問時片爾判。汁v
V亙嗣皿作付加叩開設完討す dげ・叫汁民戸籍品作
汁 uofτ斗“営 A
ω・岳山甜除宗根き藩同附命議吊﹀議湘品町、吋同ゲ目白問符切戸、
。営汁・
m時間-昌弘弁
O
H
篠田附符・民ヨ一戸、パ詰謹ω N
︽)盟吟 M
持、 hw 議 H
V
Z
、
堂
P潟明間刺殺(﹄出口口三議)行
間判議fqp リヰ頚- E減官 1 ・
惜
肘
叫 wrJ編朝
nb
叩九﹀時間山立三 JMwrJ HrJU融制恥品町切戸¥パ同 4q・
﹃
“思別職戦 12HM
明
。
明
︿ w ∞嵐田﹄引戸尚治 HOBm¥g
Hロ
溜 -abM斗J川
有数
<
:
.
n
w
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，1
9
8
0
36
2
:
l
!
:1
0
4
{切
qd
.
j
.
l
.
a
u、
.
叶
ω
B
h
'o
0
.
a
民
国
ω
記
2
1
。
工
2
3
7
B
5
4
6
Duration 0王 exposure (weeks)
9
1
0
11
1
2
13
F
i
g
.1
. GrowthC
u
r
v
e
so
fR
a
t
sd
u
r
i
n
gExposure
Eachp
o
i
n
tr
e
p
r
e
s
e
n
t
st
h
emeano
f1
6r
a
t
s
.
0-0C
o
n
t
r
o
l，ムーム J
I
Sd
u
s
tNo.1
11
0mg/m3，
Chromiteo
r
er
e
s
i
d
u
ed
u
s
t1mg/m3，.ー@
Chromiteo
r
er
e
s
i
d
u
ed
u
s
t1
0mg/m3
.
.
.
一
企
Table5
. R
e
s
u
l
t
so
fBloodB
i
o
c
h
e
m
i
c
a
lExamination
Group N_(~:._of
r
a
t
s
C
o
n
t
r
o
l
JISDust
Cr-L
Cr-H
(
1
0
)
(
10
)
(
10
)
(
1
0
)
TP
Alb
Cho
Glu
UN
g
/
d
l
g
/
d
l
mg/dl
mg/dl
mg/dl
.
2
0
凶
7
.
5
8土 0
.
1
0
7
.
6
5土 0
7
.
5
1土 0
.
1
5
.
2
3
7
.
3
4土 0
4
.
3
7土 0
.
2
5
4.43土 0
.
1
8
4
.
34土 0
.
2
3
4
.
2
7土 0
.
1
9
1
0
5土 2
.
0
1
0
4土1.5
1
0
5土 4
.
0
1
0
1土 2
.
6
2
1
0土 45
1
9
5土 3
9
2
1
5土 3
7
1
9
9土 4
3
4
5
.
6土 6
.
1
4
3
.
9土 4
.
1
4
2
.
1土 3
.
3
4
2
.
8土 3
.
3
GPT
GOT
Alp
ChE
Uj
ml K-Uj
mlK
.A-Uj
d
l spH
K5
0
.
2土 1
1
.
4
4
8
.
8土 1
1
.
4
4
5
.
9土 7
.
2
4
7
.
7土 6
.
1
1
0
4土 1
6
1
1
0土 1
1
1
0
1土 1
6
1
0
1土 1
1
4
3
.
1土 6
.
8
42.4土 7
.
9
4
3
.
0土 6
.
8
4
0
.
3土 5
.
0
1
2
3土 3
.
7
1
2
4土 5
.
8
1
2
6土 1
.
3
1
2
5土 4
.
8
a
):mean土 S
.D
.，C
o
n
t
r
o
l:Airo
fi
n
h
a
l
a
t
i
o
nroom，J
I
SDust:J
I
SDustNo.1
11
0mg/m3，Cr-L:Chromite
o
r
巴 r
e
s
i
d
u
ed
u
s
t1mg/m3，Cr-H:Chromiteo
r
er
e
s
i
d
u
ed
u
s
t1
0mg/m3
関東ローム群に比べはるかに少なく，崩壊または腫大し
胞内に存在する大食細胞は遊離の状態のものと数個が集
崩壊過程にあるものが多かった.また胞体内の粉じん粒
合して存在しているものがみられた.肺胞内には，大食
子もはるかに少ないが，粉じん粒子と思われる微細穎粒
細胞の存在の他に，微細穎粒状から均質，硝子様でエオ
の他に賞褐色のやや粗大な穎粒も同時に認められた.肺
ジ γ淡染 ，PAS陽性のタンパク様物質の存在がみられ，
東京術研年報 3
1
2，1
9
8
0
3
7
Table6
. OrganWeightso
fR
a
t
sExposedt
oJISDustNo.111
0mg/m3，
3
Chromit
巴 O
r
巴 R
e
s
i
d
u
eDust1mg/m3 and1
0mg/m
Group
No.of
r
a
t
s
C
o
n
t
r
o
l
(
1
0
)
B
r
a
i
n
mg
Heart
mg
1
9
2
5土 4
5
叫
b)
6
5
8
3土 3
JISDust (
の 1933土 49
1
8
5
8
4土 2
Cr-L
(
1
0
) 1
0
9
2
7土 6
8
6
0
1土 2
Cr-H
(
1
0
) 1
8
9
2
0土 3
2
6
1
7土 3
Group
Lung(R) Lung(L)
mg
mg
9
0
5土 4
7
2
7
4土 1
6
9
2
1土 5
0
2
7
7土 8
8
6
7土 7
0
2
7
0土 1
4
8
3
5土 8
5
*
2
6
7土 1
5
L
i
v
e
r
g
S
p
l
e
e
n
mg
Kidney(R) Kidney(L)
mg
mg
6
9
8土 3
4 3
7
0土 2
4 1
1
.0
5土 0
.
6
9 6
1
5土 3
0
3
.
3
4土 0
2
1
1土 1
2 1
.
1
9 1
8
6土 9
1
2土 7
1
0
0
8土 7
2
*
*5
5
6土 4
7
*
*1
0
.
7
2土 0
.
6
7 6
2
6土 3
9
3
0
3土 1
1
*
*1
6
7土 8
*
* 3
.
2
3土 0
.
1
0 1
8
9土 8
7
3
4土 3
6
* 4
0
7土 2
5
*
*1
0
.
0
9土 0
.
8
9
* 6
1
0土 7
2
2
2
9土 1
0紳 1
2
6土 6
*
* 3
.
1
4土 0
.
1
2
地
1
8
9土 1
2
1
1
0
5土 8
5
1
*6
1
4土 4
4
1
* 9
.
4
9土 0
.
8
7
*
*5
8
3土 43
.
0
4土 0
.
1
2
*水 1
8
7土 1
3
7
7 3
3
5
4土 1611197土 9
9
5
1土 5
1
2
8
8土 1
9
9
2
9土 4
9
2
8
0土 7
9
0
6土 6
8
2
8
2土 1
5
8
8
3土 7
0
*
2
8
3土 1
1
9
2
6土 6
1
2日~O 土 21
9
2
2土 4
8
4
2
7
8土 1
8
9
5土 8
1
2
7
8土 1
8
1
9
1
5土 7
5
2
9
3土 1
lHypophysisThyroidg
.
l Adr/~~l gl
. Adr~Tn~l gl
.
No.o
f Thymus T
e
s
t
i
s
(
R
) T
e
s
t
i
s
(
L
)P
r
o
s
t
a
t
eg.
r
a
t
s
〈
R〉
〉
mg
mg
mg
mg
mg
mg
mg
mg
C
o
n
t
r
o
l
(
L
(
1
0
)
JISDust (
1
0
)
Cr-L
(
10
)
Cr-H
(
1
0
)
9
2
0
4土 1
6
1土 4
4
1
9
3土 2
5
8土 5
9
2
0
7土 3
6
4土 9
1
9
1土 2
2
6
1土 8
1
5
0
2土 9
6
4
5
4土 2
9
1
4
9
1土 4
7
4
5
0土 2
4
1
4
8
9土 1
1
9
464土 2
6
1
5
3
1土 8
4
4
9
2土 2
8
1
5
5
8土 1
1
8
8
4
7
1土 3
0
1
5
3
1土 7
6
4
6
2土 2
1
5
3
5土 1
1
3
4
7
8土 2
6
6
1
5
6
1土 8
5
0
1土 1
4
2
9
3土 8
2
8
8土 2
3
2
7
0土 3
9
8
1土 1
4
3
0
6土 8
5
9
5土 2
8
2
8
4土 6
7
9
1土 2
1
8
.
7
4土1.10
2
.
6
4土 0
.
3
2
8
.
4
9土1.3
1
2
.
5
6土 0
.
3
6
8
.
2
4土1.1
7
2
.
5
8土 0
.
3
8
8
.
2
5土 1
.
2
9
2
.
6
5土 0
.
4
3
1
2
.
1
2土1.2
6
3
.
6
7土 0
.
5
5
1
1
.9
7土 3
.
1
5
3
.
6
3土 0
.
9
2
1
0
.
8
5土 2
.
0
3
3
.
4
0土 0
.
6
8
1
1
.0
3土 2
.
4
4
3
.
5
3土 0
.
7
5
1
7
.
2
7土 1
.
4
2
.
3
6
5
.
2
2土 0
1
8
.
1
6土1.6
9
5.
4
8土 0
.
5
0
1
6
.
6
0土 2
.
1
6
.
8
2
5
.
2
1土 0
1
7
.
2
8土 2
.
3
4
.
7
5
5
.
5
5土 0
1
9
.
6
3土1.6
1
5
.
9
5土 0
.
5
4
1
8
.
9
1土 1
.
3
6
.
5
1
5
.
7
4土 0
1
8
.
3
2土 2
.
0
2
5
.
7
5土 0
.
8
5
1
9
.
0
1土 1
.
7
8
6
.
1
1土 0
.
6
4
a
) A
b
s
o
l
u
t
ew
e
i
g
h
t，mean土 S
.D
. b
) mg(g)/100gBodyw
e
i
g
h
t，mean土 S
.
D
.
巴
:*p<0.05，料 p<O.Ol，C
o
n
t
r
o
lv
sJISDust， Cr-L， Cr-H
S
t
a
t
i
s
t
i
c
a
ls
i
g
n
i
f
i
c
a
n
c
，p<0.05
， "p<O.0
1JISDustv
s Cr-H
Table7
. Lung (
le
f
tl
o
b
e
) 羽Tet，
Dry 羽T
e
i
g
h
t
andWaterC
o
n
t
e
n
to
fR
a
t
sExposed
t
o JIS Dust No.1
1a
n
dC
h
r
o
m
i
t
e
Or巴 R
e
s
i
d
u
eDustf
o
r9
1Days
2
)
. この変化は，大食細胞の存在する姉胞で主にみられ，
タンパク様物質の存在する部位の姉胞では，対照と同様
なものの他，細胞成分が少なく非薄になった姉胞獲が散
見された (
p
h
o
t
o3
)
. 鉱さい 10mg/m3曝露群では，この
Group
C
o
n
t
r
o
l
JISDust
Cr-L
Cr-H
Wet
w
e
i
g
h
t
mg
4
3
7
0土 2
7
*
5
5
6土 4
5
*
407土 2
5
*
6
1
5土 4
W
D
E
i
r
g
y
h
t
mg
Waterc
o
n
t
e
n
t
mg
%
9
0土 2
1 7
8
.
2土 0
.
7
8
1土 4 2
1
3
5土 1
4
*4
2
1土 4
0
*7
5
.
6土 2
.
1本
8
8土 5
* 3
2
0土 2
1
*7
8
.
5土 0
.
7
1
4
5土 1
1
*4
6
9土 3
5
ネ 7
6
.
4土 0
.
6
1
JISDust:JISDust No.1
11
0mg/m3
Cr-L，Cr-H:Chromit巴 o
r
er
e
s
i
d
u
ed
u
s
t1mg/m3，
10mg/m3
*:p<0.05，
v
sC
o
n
t
r
o.
l'
:p<0.05，v
sJISDust
他気管の喉頭に近い部位で軽度な気管粘膜上皮の細胞高
の増加が認められたが，肺内の各気管支には著変はみら
れなかった.
3
曝露群.粉じんを貧食した大食細胞は，
鉱さい 1mg/m
肺胞内に，主に集合した状態で存在し，遊離のものは少
なかった.また軽度な腫大を示している大食細胞もみら
れるが崩壊したものは見られず，また肺胞腔内には，高
濃度群でみられたタンパク様物質の存在もなかった.肺
胞援の変化は，大食細胞の存在する部位で，肺胞上皮が軽
p
h
o
t
o4
)
.
度な腫大を示した他は，対照と差がなかった (
粉じん粒子の存在.H
市内に吸入された粉じん粒子は，
粉じん粒子や大食細胞や壁成分の崩壊残澄の混在も認め
肺食細胞に貧食された状態で肺胞内に存在する他，肺
られた.またこの物質が存在する部{立は全棄にわたって
内リ γ パ組織や縦隔部リンパ節にも蓄積が認められ，小
散在していた.腕胞壁は肺胞上皮が軽 中程度に腫大し
集族巣を形成していた.これらはいす.れも食細胞に貧食
ており，関東ローム曝露群に比べ程度は弱かった (
p
h
o
t
o
された状態で存在していた.また量的には，関東ロ{ム
Ann.Rψ.TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
9
8
0
38
Table8
. R
o
e
s
u
l
t
so
fH
i
s
t
o
l
o
g
i
c
a
lO
b
s
e
r
v
a
t
i
o
no
fLungfrom t
h巴 RatsExposedt
JISDustNo. 1
1 and ChromiteOreResidueDustf
o
r3 Months
Changes
C
o
n
t
r
o
l
十
Cr-L
土
+
+
+
+
+
+
+++
十
仲
間
Amounto
fphagocytosedd
u
s
tp
a
r
t
i
c
l
e
Enlargement
D
i
s
i
n
t
e
g
r
a
t
i
o
n
S
m
a
l
la
g
g
r
e
g
a
t
i
o
ni
na
l
v
e
o
l
i
P
r
e
s
e
n
c
eo
fd
e
b
r
i
si
na
l
v
e
o
l
i
Trachea
Cr-H
+土+
巴o
l
a
rc
e
l
l
Alv
Enlargement
P
r
o
l
i
f
e
r
a
t
i
o
n
Desquamation
A
l
v
e
o
l
a
rmacrophage
I
n
c
r
e
a
s
eo
fnumber
JISDust
ト
+
十
+
十
件
十
+
+
州
+
I
n
c
r
e
a
s
eo
fe
p
it
h
e
l
i
a
lc
e
l
lh
e
i
g
ht
:C
o
n
t
r
o
l:Airo
fi
n
h
a
l
a
t
i
o
nroom，JISDust:JISDustNo.11 1
0mg/m3
Cr-L:Chromiteo
r
巴 r
e
s
i
d
u
ed
u
s
t1mg/m九 Cr-H:Chromiteo
r
er
e
s
i
d
u
ed
u
s
t1
0mg/m3
:Gradeo
fc
h
a
n
g
e
si
nt
a
b
l
ei
sp
r
e
s
e
n
t
e
dwithmeano
f6 r
a
t
s
l
i
g
h
tr
巴a
c
t
i
o
n，
十
十 moderat
er
e
a
c
t
i
o
n，削一間 Marked
:Symbols，- nor
e
a
c
t
i
o
n，土 v
e
r
ys
l
i
g
h
tr
e
a
c
t
i
o
n，+s
r
e
a
c
tlOn
群で各部位に多く，不漆性粉じん量に比例した蓄積最を
ウムの吸入曝露により同様な変化を観察している.この
示した.各曝露群のこれらの組織では，粉じんの存在以
変化は粉じんのもつ細胞毒性により，大食細胞の破壊を
外の組織変化はみられなかった.
伴った大食細胞による肺クリアランス機構の障害と考え
られ5パ〉，腕内に粉じんが大量に残存する関東ローム群で
考 察
グロム鉱さいを lOmg/m3 の濃度で 3か月間昼夜連続
程度が弱く，鉱さい曝露群で顕著にみられることは，こ
曝露すると，肺以外の臓器のうち，腎臓，牌臓，肝臓に
の変化が粉じん量によるものではなく粉じんの性質によ
クロムの蓄積が多かったり. しかし組織学的観察結果か
るものであり，気管粘膜上皮の変化とともに，鉱さい成
ら，経気道摂取されたクロムやその他の鉱さい成分は，
分の強い細胞毒性を示すものである.鉱さい 1mg/m3曝
呼吸器以外の諸器官には影響は認められず，鉱さい曝露
市胞領域での変化は肺胞細
露群では，前実験2)と同様 ， n
群における体重の増加抑制傾向も，鉱さいによる呼吸器
胞の軽度な腫大以外には，著変はみられなかった.大食
への作用の二次的な影響によるものと思われる.肺の組
細胞は肺胞内に集合し，小集族巣を形成して存在したが，
織変化は，前実験2)ですでにみられた変化が，曝露量，
低濃度でのこのような状態の大食細胞の存在は粉じんの
曝露期聞にともなって程度が強くなったもので，特に性
長期間，昼夜連続という曝露条件に加え，大食細胞が肺
質を異にする変化はみられなかった.肺組織変化のう
クリアランス過程に関与する能力を妨げるという鉱さ
ち，肺胞細胞の腫大，増殖は，肺内の粉じん量が多い関東
い成分の作用も考えられる.また肺重量が対照に比べ大
戸{ム群でやや強かった.これは粉じんや粉じんを貧食
きい事や，さらに肺に含まれるクロム量の分析結果4) か
した肺食細胞の存在する部位に顕著であり，肺胞から異
ら，曝露終了時のクロム量の曝露量に対する割合は，む
l)
}アラ γ ス機能の允進した部位に一
物を取り除く，肺 !
しろ低濃度群で大きい事などから，鉱さいの肺実質への
致し，生理的反応の一つであると考えられ，また肺胞細
影響は全くないとはいえず，その曝露量に比例している
胞の増殖は，これらが格子線維やコラ{ゲン線維の増生
と思われる.
を伴わないかぎり可逆的であるとされている鳥田.本実験
以上の結果から， 1mg/m3を最高濃度とした低濃度長
では線維の増生はみられなかった.鉱さい曝露群では肺
期吸入実験を計画し，低濃度でのクロム鉱さい粉じんの
胞内へのタ γパグ様物質の蓄積が特徴的な変化として認
生体への影響について現在実験観察中で、ある.
められた. GrossG7，
8
)は大量の石英粉体や金属アルミニ
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
まとめ
クロム鉱さい粉じんを 10mg/m3，および 1mg/m3の濃
度で， 3か月間ラットに吸入曝露し，鉱さい粉じんの経
気道摂取による生体への影響を観察した.実験では粉じ
39
3
) 坂本義光，神谷信行，池田虎雄，平賀輿吾:東京衛
42，1
9
7
7
研年報， 28-2，1
4
) 神谷信行，坂本義光，中尾順子，平賀輿吾:東京衛
研年報， 3
1-2，5
1，1
9
8
0
んに対する肺の反応を比較する目的で鉱さいlOmg/m8
r
c
h
.E
n
v
i
r
o
n
.H
e
a
l
t
h，
1
4，883，
1
9
6
7
5
) Gross，P.:A
曝露群と向濃度の関東ローム粉体曝露群を設定した.
.，andGross，P.: P
ulmonaryDe
ρ0・
6
) Hatch，T.F
鉱さい曝露群では実験後半より濃度に比例し，体重の
増加抑制傾向を示した.肺重量は各曝露群で対照に比べ
大きくその程度は鉱さい 10mg/m3，関東ロ{ム，鉱さい
1mg/m8 の順であった.腕以外の臓器では，鉱さい曝露
群で，肝重量が濃度に比例し小さく，鉱さい 10mg/m3曝
露群で心臓，腎臓が小さかったが，いずれも体重の増加
抑制に伴った変化であった.
肺の組織変化は，鉱さい 10mg/m3 では，大食細胞の
s
i
t
i
o
nandR
e
t
e
n
t
i
o
n0
1lnhaledAerosols，87，
1964，A
c
a
d
e
r
n
i
cP
r
e
s
s， NewYo
r
k
7
)Gross，P
.，andd
e Trevi
l
1e
，T.P
.:A
r
c
h
.P
a
t
h
.
8
6，255
，1968
.，
Halr
1ey，R
.A.，andde Trevi
l
1e
，T.P
.:
8
)G
r
o
s
s，P
A
r
c
h
.E
n
v
i
r
o
n
.H
e
a
l
t
h26，227，1973
ExplanationofP
l
a
t
e
s
r
e
p
a
r
巴df
r
o
r
ns
e
c
t
i
o
ns
t
a
P
h
o
t
o
r
n
i
c
r
o
g
r
a
p
h
swer巴 p
崩壊が顕著であり，肺胞内へのタンパク様物質の蓄積が
i
n
e
dwithh
e
r
n
a
t
o
x
y
l
i
nande
o
s
i
n
多く鉱さい成分による肺クリアラ γ スの障害が示唆され
Photo 1
. Lungo
fr
a
texposedt
o]
IS Dust No.11
.
た.肺胞壁では関東ロ{ムに比べて軽度な肺胞細胞の腫
Macrophages f
i
l
l
e
d with d
u
s
tp
a
r
t
i
c
l
e
sa
r
e
大の他，壁成分の剥離もみられた.この他気管で粘膜上
o
b
s
e
r
v
e
di
na
l
v
e
o
l
i
.A
l
v
e
o
l
a
rw
a
l
la
r
et
h
i
c
k
e
-
皮の細胞高の増加が認められ，鉱さい 10mg/rn8 では呼
nedbyi
n
c
r
e
a
s
ei
nn
u
r
n
b
e
rands
i
z
e
. (x1
0
0
)
吸器系への影響が関東ロ{ム群に比べ大きかった.鉱さ
Photo2
. Lungo
fr
a
texposedt
oC
h
r
o
r
n
i
t
eo
r
er
e
s
i
-
r
n
g
/
r
n8 では大食細胞の崩壊はみられず主に腕胞内に
い1
dued
u
s
t10rng/rn8 • Air s
p
a
c
e
si
nh
a
l
fp
a
r
t
s
小集族巣を形成して存在し，その周辺の肺胞壁で肺胞細
i
l
1ed with p
r
o
t
e
i
n
a
c
e
o
u
s
o
ft
h
ef
i
e
l
d
sa
r
ef
胞の軽度な腫大がみられた他は特に著変はなかった.そ
m
a
t
e
r
i
a
l
s
.I
no
t
h
e
rr
e
g
i
o
nhaveno r
n
a
t
e
r
i
a
l
s
の他鉱さい曝露群では関東ロ{ム曝露群と同様，肺内の
i
na
l
v
e
o
l
i，a
l
v
e
o
l
a
rw
a
l
la
r
et
h
i
c
k
e
n
e
d
. Ma-
各気管支，粉じんが蓄積している肺内 ~ :/パ組織および
縦隔部日
γ パ節，また肺以外の諸臓器には特に変化はみ
c
r
o
p
h
a
g
e
sa
r
eo
b
s
e
r
v
e
di
nt
h
i
sr
e
g
i
o
n
.(x1
0
0
)
Photo3
. Higherr
n
a
g
n
i
f
i
c
a
t
i
o
no
fphoto2
.P
r
o
t
e
i
n
a
c
e
o
u
sr
n
a
t
e
r
i
a
l
s have f
i
n
eg
r
a
n
u
l
a
ro
rr
n
o
r
e
られなかった.
〈本研究の概要は毒作用研究会第 6回昭和 54
年 6月で発
表した.)
d
e
n
s
eh
o
r
n
o
g
e
n
e
o
u
sa
p
p
e
a
r
a
n
c
eandc
o
n
t
a
i
n
e
d
d
u
s
tp
a
r
t
i
c
l
e
s
. A
l
v
e
o
l
a
rw
a
l
la
r
en
o
r
r
n
a
lo
r
文 献
1
)坂本義光，調武久，平賀輿吾:東京衛研年報， 28
3
5，1
9
7
7
-2，1
2
) 坂本義光，神谷信行，伊川三枝子，平賀輿吾.東京
衛研年報， 29-2，67，1
9
7
8
t
h
i
nandl
e
s
sc
e
l
l
u
l
a
r
i
t
y
.(x2
0
0
)
Photo4
. Lungo
fr
a
texposedt
oC
h
r
o
r
n
i
t
eo
r
er
e
s
i
o
l
l
e
c
t
e
di
n
dued
u
s
t 1mg/rn8• Macrophages c
a
l
v
e
o
l
ia
r
eo
b
s
e
r
v
e
d
. A
l
v
e
o
l
a
rw
a
l
l around
c
o
l
l
e
c
t
i
o
no
fc
e
l
l
s a
r
es
l
i
g
h
t
l
yt
h
i
c
k
e
n
e
d
.
(x1
0
0
)
w
j
h
ヤ ル 品 川 λVR治
ぷ
hpJ
yb4dy
hJ
ぷぷ
町
二
~
東京衛研年報 A
nn. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
l
，
王3
1
2，4
3
5
0，1
9
8
0
クロム鉱さい粉じんのラ γ トによる 1か月間持続吸入実験 特に吸入後の回復について
坂本義光汽神谷信行*，池田虎雄*，平賀輿吾*
InhalationE玄perimentsof Chromite OreResidueDust toRats-Recovery
after 1Month Exposure
，NOBUYUKIKAMIYAペ TORAOIKEDA*andKOGOHIRAGA*
YOSHIMITSUSAKAMOTO*
Keywords: クロム鉱さい粉じん Chromiteo
r巴 r
e
s
i
d
u
ed
u
s
t， ラット r
a
t，吸入毒性 i
n
h
a
l
a
t
i
o
nt
o
x
i
c
i
t
y，図復
r
e
c
o
v
e
r
y
緒
~10 回/時で温度 25~260C 湿度 50~60% であった.また
百
グロム鉱さい粉じんの経気道摂取による生体におよぼ
チャ γパ{内のエアロゾノレ粒度分布は両粉じん曝露群と
す影響を観察する目的で粉じん吸入実験装置1)を用いた
も4
.7
μ 以上 15%，4
.7~2.1μ50% ， 2
.
1
μ 以下35%であ
ラヅトによる全身曝露実験を行なっている.すでに 1週
った1)
間
， 1
および3か月間の昼夜連続吸入実験を行ない結果は
曝露終了後動物はパリヤー動物室へ移 L，飼育した.
前報2-4)で報告した.以上の実験から得られた結果では，
吸入曝露およびノリヤ{内飼育期間中，日本クレア製国
比較対照として用いた関東ローム粉体を同濃度で曝露し
型飼料 CE-2，水道水を自由に摂取させた.体重は曝露
たラットに比べ，体重の増加抑制傾向的，
肺重量の増加
に加えて，肺実質の損傷を伴うより強い肺の組織変化
が認められた.しかしいずれの実験においても，肺以外
開始および終了時の他，終了時より 2週間毎に測定し，
同時にラヅトの外見，挙動を観察した.
動物は，各群 2
4
例で吸入曝露を行なったラットについ
の諸臓器には鉱さいによると思われる変化は認められな
1
3，
て，曝露終了時および終了後1.3，6か月目(各 4，
かった.本報では鉱さい粉じんを 20mg/m3 の濃度で 1
2
6週間目〉に各 6例を，また各群 2
0
例で吸入曝露したラ
か月間吸入曝露したラットについて，曝露中止後の肺の
ットについて終了時 2例，終了後 1
2か月目 (
5
3
週間目〉
組織変化の経過および肺内に吸入された粉じん粒子の挙
に各群 3例を大腿部動静脈の切断により放血屠殺した.
動を中心に曝露後のヲットの生育過程における影響の有
解剖後肺，肝臓，腎臓，牌臓を摘出，秤量し，気管，縦
無について，同条件で関東ロ{ム粉体を吸入曝露したラ
隔部リ γパ節および鼻腔とともに 10%
緩衝ホルマリ γで
ットと比較観察した結果を報告する.なお本報では曝露
固定後，定法により標本を作製し H E染色を行ない組織
2か月日までの結果を示した.
終了後 1
0
学的観察を行なった.肺は結熱した気管より固定液を 1
実験材料および方法
cm水柱の圧で注入し，再膨張させ固定した.
l
c
W
i
s
t
a
r 系雄ラット， 5週令を用い，実験
動物は S
は鉱さい粉じん (
Cr若手〉および比較対照としての関東ロ
結 果
1
.
一般症状鉱さいを曝露したラットでは呼吸の際
1種:]
ISD
ust群〉の各 20mg/
ーム粉体(JIS試験粉体 1
に鼻腔または咽喉より，プツプツ ，!
Jプクプ，グウ{グ
m8曝露群と実験室内空気のみの対照若手の 3群を設定し，
ウ，等の音を発するラットが認められた.この変化を
0日間昼夜連続で行なっ
粉じん吸入実験装置1)により 3
示したラ
た.実験に用いた動物数は曝露終了後1， 3，6か月間飼
曝露後終生飼育ラット 18例中 1~4 例であり，
育観察のために各群24
匹，また終了後終生飼育観察のた
2か月目までに半数以上のラットに認められた
後より 1
めに各群2
0
匹として 2回に分けて吸入実験を行なった.
が，対照，関東ローム群には全く認められなかった.
y
トは曝露終了時より終了後 6か月日までは，
6か月前
グロム鉱さい粉じんおよび関東ローム粉体の調製法お
2
. 体重 F
i
g
.
1に曝露後終生飼育ラットの 1
2か月目
よび化学的性状は前報2，
4
)に示したとおりである.鉱さい
(
5
3週間目〉までの体重増加曲線を示した.鉱さい曝露
中の総 Fロム量は 2.8%，水溶性クロムは1.2%であった.
群では，増加が抑制され終了時対照および関東ローム群
吸入期間中の吸入チャ γパ{内飼育条件は換気回数 9
に比べ小さな値を示した.曝露終了後も各週の値は，飼
*東京都立衛生研究所毒性部
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
t
i
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
2
4
1
，Hyakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
k
u， Tokyo，1
6
0J
a
p
a
n
4
4
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
9
8
0
(WEEKS)
5
0
0
1
3
1
7
2
1
2
5
2
9
3
3
3
7
4
1
押5
4
9
5
3
4
0
0
工
↑
(ω)
ヲ
、J
n
u
nU
U 凶 三 ﹀ 白O同 Z︽UE
2
0
0
1
0
0
.
1
2
1
5
1
8
2
1
2
4
2
7
3
0
3
3
3
6
3
9
4
2
4
5
4
8
5
1
EXPERIHENTAL DURATION
5
4
5
7
(WEEKS)
・
・
F
i
g
.1
. Growth Curves o
fR
a
t
si
nD
u
r
a
t
i
o
no
fExposureandRecovery
C
o
n
t
r
o
l，企-.ia. ]
IS DustNo.112
0mg/m3， 回一圃 Chromiteo
r
巴 r
e
s
i
d
u
ed
u
s
t2
0mg/m 3•
Eachp
o
i
n
t
sr
e
p
r
e
s
e
n
tmeans土 S
.D
.o
f1
5r
a
t
s
育期聞を通して他の群に比べ小さいが，増加曲線の変動
気管粘膜の変化についてのみ結果を示した.
推移は他の群と平行であり，終了後の増加の割合は他の
群と同様であった.
3
. 器官重量 曝露終了時および終了後1， 3，6か月
関東ロ{ム曝露群.曝露終了時，大量の粉じんを貧食
した大食細胞が肺胞内に散在してみられ，肺胞壁は軽
中等度の肺胞細胞の腫大がみられ，大食細胞の存在する
目の各群 6{
1
1
J
のラヅトの器官重量を Tab!e1にまとめて
肺胞やその周辺では特に顕著であった.肺胞内には大食
示した.肺重量の他には，特に意味のある変化を示した
細胞の他に大食細胞の崩壊残溢と思われる粉じん粒子を
器官はなかった.肺重量は鉱さい，関東ローム群ともに
混在した微細穎粒状のエオジン淡染物質の存在がわずか
曝露終了時より 3か月目までは対照と比べ有意に大きか
ではあるが認められた (Photo1
)
. 曝露終了後 lか月目
ったが， 6か月日では差はみられなかった.また肺絶対
で
重量および体重比重量の回復期間における変動推移を
を示し
F
i
g
.
2に示した. 関東ローム群では，その変動推移は対
態のものは少なくなった (Photo2
)
. 集族巣の大きさ
照群とほぼ平行であり，重量の大きいなりに，体重の増
は，それらが存在する肺胞のひとつの大きさであるが，
3か月以後肺胞内に小集族巣を形成し遊離の状
加に伴い肺重量の増加する筈J
I
合は徐々に減少するという
12か月目では集族巣の存在する肺胞同土が融合したよう
性質を対照群同様示していたが，鉱さい曝露群では各期
な大きいものもみられた (Photo3
)
. 肺胞壁の変化は 1
間での増加の割合の変動が大きく他の群とやや性質を異
か月以後肺胞細胞の腫大は軽減し，大食細胞の集合して
にしているようであった.
いる部位の肺胞壁を除いて対照と差がなかった.集後巣
4
. 組織学的観察 関東ロ{ムおよび鉱さい曝露群と
の周囲では肺胞細胞の腫大や軽度な増殖がみられ，特に
もに呼吸器系以外の器官組織には特に変化は認められ
6か月以後より顕著であった.気管，肺内の各気管支に
ず，以下肺の組織変化および，鉱さい曝露群でみられた
は曝露終了時より変化はみられなかった.
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
45
fR
a
t
sk
i
l
l
e
da
tt
h
eT
e
r
m
i
n
a
t
i
o
no
fExposure
Table1
. OrganWeighto
13
，6Monthsa
f
t
e
rC
e
s
s
a
t
i
o
no
fExposure
and，
Examination
Exposure
(
3
0d
a
y
s
)
Group
Numb巴r
Lung
L
i
v
e
r
o
fr
a
t
s
mg
g
C
o
n
t
r
o
l
6
]
IS D
ustNo. 1
1
6
Chromiteo
r
e
r
e
s
i
d
u
ed
u
s
t
6
C
o
n
t
r
o
l
Recovery
(
1month)
]
IS D
ustNo. 1
1
巴
Chromiteo
r
r
e
s
i
d
u
ed
u
s
t
C
o
n
t
r
o
l
Recovery
(
3months)
]
IS D
ustNo. 1
1
巴 o
r
e
Chromit
r
e
s
i
d
u
ed
u
s
t
C
o
n
t
r
o
l
Recovery
(6months)
]
IS D
ustNo.1
1
Chromiteo
r
e
r
e
s
i
d
u
ed
u
s
t
6
6
6
6
6
6
6
6
6
Kidney
r
i
g
h
t
l
e
f
t
mg
mg
8
7
2土 7
7
0土 3
8
ω 8
0
.
4
2 7
4
8土 2
7 7
.
7
4土 0
b) 3
4
9土 1
5
1
3
9
5土 2
.
9
7土 0
.
1
1 3
3
9土 8 3
3ネ 9
1
1
3
3土 5
.
2
2土 O
.1
6
* 7
8
5土 2
8
* 7
8
7土 1
6
.
0
9 3
4
3土 1
8 3
4
4土 1
3
.
0
3土 0
2
* 4
4
9
4土 2
1
2
3
4土 1
0
6
* 8
.
0
0土 0
.
9
8 7
3
3土 58 7
3
3土 40
2
* 3
.
8
5土 0
.
2
0 354土 1
5 3
5
4土 1
9
5
9
8土 6
0 1
0
.
0
3土 0
.
6
8 8
2
2土 4
0 8
4
5土 3
9
1
0
4
7土 5
9 3
.
7
1土 0
.
1
0 3
0
4土 1
3 3
1
3土 7
3
8
8土 2
2
* 1
0
.
2
2土 0
.
6
5 8
4
6土 1
9 8
5
7土 2
0
1
2
5
1土 8
.
7
7土 0
.
1
2 3
4
5
9土 4
6
* 3
2 3
1
7土 1
7
1
3土 1
.
6
1土 0
.
6
1 8
1
2
6
3土 5
5
* 9
4
7土 4
8
0
7土 49 8
4
キ
4
9
2土 1
3
0土 8
3
.
7
4土 0
.
0
9 3
1
4土 9 3
1
1
9
8土 5
1 1
1
.
9
4土 0
.
5
8 964土 3
3 9
8
9土 2
1
9
0土 8
1 3
.
5
0土 0
.
0
5 2
3
5
1土 1
8
3土 6 2
0
6
*1
1
.5
4土 0
.
4
1 9
1
3
3
0土 1
5 954土 48
5
8土 5
8
本
3
9
5土 2
3
.
4
3土 0
.
1
2 2
2 2
8
4土 1
1
8
5土 1
1
4
2
0土 1
2
9
*1
1
.2
9土1.1
4 9
9
2土 63 9
6
7土 9
0
.
0
9 3
.
4
5土 0
0
3土 9 2
6
* 3
9
5土 1
3
4
3
5土 3
5
7 1
2
.
4
4土 0
.
7
4 1
0
5
7土 1
0
01
0
8
2土 6
8
1
2
3
0土 1
8
1土 9
.
2
4土 0
.
1
0 2
3
1
7土 34 3
7 2
7
5土 1
1
1 1
2
.
8
4土 0
.
6
8 1
0
2
9土 77 1
0
7
9土 6
3
1
3
6
2土 1
.
2
5土 0
.
0
9 2
0 2
7
2土 9
6
0土 1
3
4
4土 26 3
2
2 1
1
.
6
4土 0
.
8
7 1
0
1
4土 72 1
0
1
7土 5
5
1
2
2
9土 1
7 3
3
2
6土 2
.
0
9土 0
.
0
9 2
6
9土 8 2
7
0土 1
0
S
p
l
e
e
n
mg
4
5
0土 1
0
2
0
4土 6
4
6
0土 2
0
2
0
0土 7
4
3
6土 64
2
1
0土 1
4
5
7
2土 47
2
2
1
1土 1
5
5
7土 33
2
0
6土 14
5
2
5土 3
6
2
0
4土 7
2
6
1
1土 5
0
1
7
9土 1
7
6
3
2土 2
1
8
8土 9
6
0
4土 5
8
1
1
8
5土 1
7
6
4
6土 2
1
6
8土 5
5
6
7
4土 2
1
7
0土 7
7
6
3
1土 3
1
6
7土 6
Body
w
e
i
g
h
t
g
2
2
0土 8
2
2
9土 7
2
0
7土 1
5
2
7
0土 1
3
2
7
0土 1
0
3
2
5
6土 1
3
3
4
0土 1
3
3
6土 1
3
3
2
7土 27
4
3
8
3土 1
3
9
5土 1
7
9
3
7
6土 1
a
):A
b
s
o
l
u
t
ew
e
i
g
h
t，b):R
e
l
a
t
i
v
ew
e
i
g
h
t (mgo
rg
!
1
0
0g Bodyw
e
i
g
h
t
)
S
t
a
t
i
s
t
i
c
a
ls
i
g
n
i
f
i
c
a
n
c
e:キ p<0.05(
v
sC
o
n
t
r
o
l
)，p<0.05 (
v
sJISDustNo.11)
鉱さい曝露群.曝露終了時粉じんを貧食した大食細胞
ロ{ム群と比べ程度は弱かった (
Photo6，
7
)
. 肺胞内の
が腕胞内に散在しているが，その数は関東ローム群に比
崩壊残澄の存在は曝露終了後 1か月目以後ほとんど見ら
ベはるかに少なく，むしろ崩壊または腫大し崩壊過程に
れず，また肺胞細胞の剥離も同様であった.その他鉱さ
あるものが多かった.腕胞内や気道内には，主に大食細
い曝露群では気管粘膜上皮が細胞高の増加により円柱上
胞の崩壊残澄と思われる粉じんを混在したエオジ γ淡染
皮様に変化していた.この変化は曝露終了時より認めら
物質の存在がみられ，関東ロ{ム群に比べ広い部位の肺
れたが，その程度は 3~6 か月自で強く固有層では白血
胞に多かった (
Photo4
)
. 肺胞壁は関東ロ{ム群に比べ
球の浸潤や気管腺の増生を示すものも多かったが， 1
2
か
軽度な肺胞細胞の腫大みられたが，崩壊残澄の存在する
月目では，軽減していた.以上の変化は喉頭に近い部位
部位では，肺胞細胞の剥離した細胞成分の少ない肺胞壁
で顕著であった (
Photo8
)
. また肺内の各気管支には曝
も散見された (
Photo5
)
. 曝露終了後 1か月目では，大
露終了時より著変はみられなかった.
食細胞は，肺胞内に遊離または数個集合した状態で存在
粉じん粒子の存在.両曝露群とも吸入された粉じん粒
し，崩壊またはその過程にあるものはほとんど見られ
子は，大食細胞に貧食された状態で曝露終了後 1
2か月を
ず，大きさは関東ロ{ム群と変らず，細胞境界の明瞭な
経過しでも肺胞内に存在する他，肺内リシパ組織および
ものが存在していた.大食細胞の挙動は 3か月以後関東
縦隔リンパ節にも蓄積がみられた.これらの組織内でも
ロ{ム群と同様，肺胞内に集族巣を形成して存在し， 1
2
食細胞に貧食された状態で存在し曝露終了時ーより回復期
か月目では形は大きくなり，数は減っていた. s
市胞壁の
聞に伴い増加していた.また量的には不溶性粉じんであ
変化は 1か月目では，肺胞細胞の腫大した肺胞壁が散見
る関東ローム群で多かった.両群とも粉じんの存在以
されるが 3か月以後，大食細胞の存在する部位を除いて
外，これらの部位での組織変化はみられなかった.
対照と差がなかった.集族巣周囲の肺胞壁の変化は関東
4
6
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，3
1
2，1
9
8
0
ていると思われる.
2
Xl0
16
曝露終了後肺内に残存する粉じん粒子は，鉱さい群で
a-Aa
阻E
占
有
ω診 ω
ωロHOωAd同
けが戸市伊刊
420
111
(huE)
•.
は，回復期間において粉じんを食食した大食細胞が腫大
や崩壊を示さないことから，鉱さいの可溶性成分は急速
に除去され，不溶性で直接的な作用のない粉じんが残存
していると思われ，それらの粉じんの挙動は関東ロ{ム
粉体と同様であった.肺内には曝露終了後1
2
か月を経て
も大食細胞に貧食された状態の粉じんの存在がみられた
が，一般に線毛上皮のある気道上での粉じんの排除は比
較的早い時間内で行なわれるが，腕胞領域での排出は遅
く，月単位の時聞を要するとされ，またこの時期で大食
﹂門
543
Hwnb ω3hMUO伺 ゆ OOH¥伊良
細胞の線毛上皮への移動やリンパ系への取り込みがおこ
るとされている 5)
肺内に吸入された粉じんの挙動につ
いてはH
e
p
p
l
e
s
t
o
n，わの報告に詳しく，鉄鉱石，石炭，シ
6
4
リカの粉じんを用い曝露終了後の挙動について観察した
結果，曝露後ラットの生存期聞に伴い，粉じん粒子は呼
吸細気管支周囲の肺胞内に多く集族していた.本実験で
3
Duration of recovery
ト「
12
mon七hs
F
i
g
.
2
. LungWeight Changesd
u
r
i
n
gRecovery
(・) Control， (A) ]ISDust No.1
120mg/m3
(
園)Chromiteo
r
er
e
s
i
d
u
ed
u
s
t2
0mg/m3
Eachp
o
i
n
t
sr
e
p
r
e
s
e
n
tt
h
emean土 S
.D
.o
f6r
a
t
s
e
x
c
e
p
tf
o
rr
a
t
sa
t1
2monthso
fr
e
c
o
v
e
r
ywhich
a
r
eshownbye
a
c
hv
a
l
u
eo
f3r
a
t
s
考 察
得られた結果でも，特に集族巣の部位については述べな
かったが Hepplestonの観察結果と同様であると思われ
る.さらにシリカでは集族巣の周閤に線維化が生じるの
に対し，鉄鉱石，石炭では線維化はおきないとしている円
長時間肺内に存在する粉じんが，その部位でどのような
変化をひきおこすかという点については，粉じんの性質
に大きくかかわっているが，現在継続中である曝露後終
生飼育ラ v トによって観察を続ける予定である.
クロム鉱さい粉じん 20mg/m3，3
0日間昼夜連続の吸
鉱さい曝露群では気管粘膜の変化が曝露了時より回復
入曝露によりラヅトに認められた変化は，体重の増加抑
期聞を通して認められた.この変化は関東ローム曝露群
制，肺重量の増加，肺および気管の組織変化であった.
いずれも既に行なった実験2-4) において観察されたもの
である.体重の増加抑制は，鉱さいによって呼吸器以外
の諸器官には影響をおよぼさないことから鉱さい成分に
よる主に肺の障害による影響と考えられ，曝露を中止す
ることにより肺の回復に伴って同時に回復するものと思
ではみられないことから粉じんの物理的作用ではなく，
鉱さい成分による直接作用と思われるが，終了後 3~6
か月自にその程度が強くなる事については，呼吸器系の
障害という点から興味ある結果と思われるが，今回はそ
の理由については推測できなかった.
まとめ
われる.肺重量は一般的に種々の物質の吸入によって増
クロム鉱さい粉じんを 20mg/m3 の濃度で 1か月間吸
加するが，短期吸入実験では主に肺胞細胞の腫大，増生
入曝露したラットにおける，曝露中止後の鉱さいの影響
など肺実質の増加を反映したものである.肺胞壁の変化
の有無および経過について，肺の組織変化を中心とした
は，本実験でも曝露終了後1
2
か月目でも粉じんを貧食し
観察を行なった.体重は吸入曝露により増加が抑制され
た大食細胞の存在するかぎり認められたが，曝露終了後
たが，曝露終了後，回復期聞を通して，その増加推移に
肺内より粉じんが徐々に排出されるのに伴い肺胞壁の変
は対照と比べ差がなかった.肺重量は終了時より 3か月
化も回復すると思われ，関東ローム群での回復期間にお
目まで対照に比べ大きく ， 6か月目では差がなかった.
ける肺重量の変動推移はこのことをよく反映しているも
腕の組織変化は大食細胞の崩壊，肺胞内の崩壊残澄の存
のと思われる.鉱さい曝露群では，肺組織変化は肺胞細
在，肺胞壁成分の剥離の他，関東ローム群と共通した肺
胞の腫大に加え，腕胞内への崩壊残溢の蓄積，肺胞壁の
胞細胞の腹大が曝露終了時みられたが，いずれも曝露を
損傷などがみられ，これらの回復経過が重量の変動推移
中止することにより悪化することなく，軽減した.肺内
にも反映し，関東ローム群のそれとは異なったものにし
に残存する粉じんは，回復期間の経過に伴い，大食細
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
47
胞に食食された状態で肺胞内に集族巣を形成した.この
s
l
i
g
h
t
l
yt
h
i
c
k
e
n
e
di
na
l
v
e
o
l
i have m
a
c
r
o
-
変化は関東ロ{ム群のラットでも同様の経過を示した.
p
h
a
g
e
s
. (x1
0
0
)
鉱さい曝露群では気管粘膜上皮が円柱上皮様に変化し，
固有謄への白血球の浸潤，気管腺の増生を伴っていた
が，曝露終了時より終了後 3~6 か月目で顕著であり，
1
2か月目では軽減した.序吸器系以外の諸器官には， 爆
!
Photo2
. Lunga
t3 months a
f
t
e
rt
h
et
e
r
m
i
n
a
t
i
o
n
。
fe
x
p
o
s
u
r
e
. Macrophages a
r
ec
o
l
l
e
c
t
e
di
n
a
l
v
e
o
l
i
. (x1
0
0
)
Photo3
. Lunga
t1
2monthsa
f
t
e
rt
h
et
e
r
m
i
n
a
t
i
o
n
露終了時より回復期聞を通して，鉱さいの影響によると
o
fe
x
p
o
s
u
r
e
. Aggregates o
fd
u
s
t
b
e
a
r
i
n
g
思われる変化はなかった.
u
r
r
o
u
n
d
e
d by t
h
i
c
k
e
n
e
d
macrophages， s
(本報告の概要は毒作用研究会第 7回昭和 5
5
年 6月で発
r
es
i
t
u
a
t
e
di
nr
e
l
a
t
i
o
nt
o
a
l
v
e
o
l
a
rw
a
l
l，a
r
e
s
p
i
r
a
t
o
r
yb
r
o
n
c
h
i
o
l
e
. (x1
0
0
)
.
表した〉
文
献
1
) 坂本義光，調武久，平賀輿吾:東京衛研年報， 28
-2，1
3
5，1
9
7
7
2
) 坂本義光，神谷信行，池田虎雄，平賀興吾:東京衛
研年報， 2
8-2，142，1
9
7
7
3
) 坂本義光，神谷信行，伊川三枝子，平賀輿吾:東京
衛研年報， 2
9-2，67，1
9
7
8
4
) 坂本義光，神谷信行，池田虎雄，平賀輿吾東京衛
研年報， 3
1
2，3
3，1
9
8
0
5
) 河合清之訳:新毒性学の基礎と応用， 2
1
1， 1
9
7
5，
ソフトサイェ γス社
6
)H
e
p
p
l
e
s
t
o
n，A.G.: Amer.J
.P
a
t
h
.，42，119，1963
r
c
h
.E
n
v
i
r
o
n
. Health，7
，
7
)H
e
p
p
l
e
s
t
o
n，A.G.: A
Photo4
7
. Lung o
ft
h
er
a
t
sexposedt
oc
h
r
o
m
i
t
e
8
o
r
er
e
s
i
d
u
ed
u
s
t2
0 mgjm
f
o
r1month.
Photo4
. Lunga
tt
h
et
e
r
m
i
n
a
t
i
o
no
fe
x
p
o
s
u
r
e
.C
e
l
l
d
e
b
r
i
sa
r
eo
b
s
e
r
v
e
di
na
i
rs
p
a
c
e
s
.(x1
0
0
)
Photo5
. Higherm
a
g
n
i
f
i
c
a
t
i
o
no
fphoto4
.D
e
b
r
i
si
n
a
l
v
e
o
l
ic
o
n
t
a
i
nd
u
s
tp
a
r
t
i
c
l
e
s
. Numbero
f
d
u
s
t
b
e
a
r
i
n
gmacrophagesa
r
el
e
s
sthanl
u
n
g
o
f photo1 and e
n
l
a
r
g
e
d macrophag
巴 i
s
o
b
s
e
r
v
e
di
na
i
rs
p
a
c
e
. A
l
v
e
o
l
a
rw
a
l
lwith
l
e
s
sc
e
l
l
u
l
a
r
i
t
ya
r
eo
b
s
e
r
v
e
di
nt
h
i
sr
巴g
i
o
n
.
(x200)
Photo6
. Lunga
t3 months a
f
t
e
rt
h
et
e
r
m
i
n
a
t
i
o
n
o
fe
x
p
o
s
u
r
e
.D
u
s
t
b
e
a
r
i
n
gmacrophagesa
r
e
c
o
l
l
e
c
t
e
di
na
l
v
e
o
l
i
. (x1
0
0
)
54
，1963
Explanationofp
l
a
t
e
s
Photomicrographswerep
r
e
p
a
r
e
dfroms
e
c
t
i
o
ns
t
a
i
nedwith h
e
m
a
t
o
x
y
l
i
nande
o
s
i
n
.
ISDust
Photo1
3
. Lungfromt
h
er
a
t
se
x
p
o
s
e
dt
o]
3f
No.1
120mgjm
o
r1month.
Photo 1
. Lung a
t t
h
e t
e
r
m
i
n
a
t
i
o
no
fe
x
p
o
s
u
r
e
.
Photo7
. Lunga
t1
2monthsa
f
t
e
rt
h
et
e
r
m
i
n
a
t
i
o
n
o
fe
x
p
o
s
u
r
e
. Numbero
fa
g
g
r
e
g
a
t
e
so
fma巴 d
e
c
r
e
a
s
e
d，but i
ns
i
z
ea
r
e
c
r
o
p
h
a
g
e
sa
r
i
n
c
r
e
a
s
e
d
. (x1
0
0
)
Photo8
. Tracheafromr
a
tk
i
l
l
e
da
t6monthsa
f
t
e
r
t
h
et
e
r
m
i
n
a
t
i
o
no
fe
x
p
o
s
u
r
e
.I
n
c
r
e
a
s
eo
f
乱i
l
a
c
r
o
p
h
a
g
e
sf
i
l
l
e
dwithd
u
s
tp
a
r
t
i
c
l
e
sa
r
e
c
e
l
lh
e
i
g
h
ti
ne
p
i
t
h
e
l
i
u
ma
r
eo
b
s
e
r
v
e
d
.
巴
o
b
s
e
r
v
e
di
na
i
rs
p
a
c
e
s
. A
l
v
e
o
l
a
rw
a
l
la
r
(x400)
w
~
」
。、
t
.
n
∞
.
、
t
東京術研年報
Ann. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，5
1
5
3，1
9
8
0
クロム鉱さい粉じんのラットによi>3か 月 間 持 続 吸 入 実 験 ( 第 2報 〉 ク ロ ム の 体 内 分 布
神谷信行*，坂本義光ぺ中尾 1
]
民子*，平賀輿吾*
Inhalation ExperirnentofChrornite OreResidueDust toRatsfor3Months C
I
I
)
Distributionof Chrorniurn intheRat
ペ TOSHIKONAKAOネ andKOGOHIRAGA*
NOBUYUKIKAMIYA汽 YOSHIMITSUSAKAMOTO
h
r
o
m
i
t
eo
r
er
e
s
i
d
u
ed
u
s
t，ラット r
a
t，吸入毒性 I
n
h
a
l
a
t
i
o
nt
o
x
i
c
i
t
y
， 分布
Keywords: クロム鉱さい粉じん C
d
i
s
t
r
i
b
u
t
i
o
n
緒
o
m
p
o
s
i
t
i
o
no
fC
h
r
o
m
i
t
e
Table1
. C
OreR
e
s
i
d
u
eDust
.宣言
区司
粉じんとして経気道により摂取されるグロム鉱さいの
生体におよぼす影響を観察するために，当部では粉じん
吸入実験装置口を製作し，ラットによる持続(昼夜連続〉
3，2
吸入実験を行っている.既に粉じん濃度1.5mg/m
1
8日間の持続吸入実験を行い，その結果は前
mg/m3 で 2
卑
報 2) で述べたように，臓器中のグロムは，肺，腎臓 ，B
臓，肝臓，脳の1
]
債で高く，血液では血餅に高く，血清は
21mg/m3爆露群でわずかに高い値を示した.本報では，
より長い曝露期間における変化を観察するため， 3か月
聞にわたって持続吸入した際の，クロムの臓器，血液に
おける分布と，グロム鉱さい中に含まれるカルシウム，
アルミニウム，ニッケル，マシカゃ列車鉛の肺での濃度
について報告する.
動物
吸入実験方法
S
l
c
w
i
s
t
a
r系 (SPF) ラ γ トの雄を 4週令で購
入し， 1
1日間予備飼育後，順調な発育を示したもので，
体重 110~135g のものを使用した.
粉じん
クロム鉱さい粉じんは投棄地区より採取した
鉱さい塊をボールミル (
A
l
f
r
a
dF
r
i
t
s
c
hC
o
.
) で約 8時
間粉さいして調整した.粉じんに含まれる主な重金属成
able1に
， 粉じんの粒径分布は T
able2
分については T
に示した.
動物実験既報1)の粉じん吸入実験装置により，吸入
チャンパ{内の粉じん濃度は，
1.0mg/m3 (低濃度曝露
群
)
， 10mg/m3 (高濃度曝露群〉に設定，
コシトロ{ノレ
9
1日〉間持続吸入を行
群は供給空気のみとし， 3か月 (
った.環境条件は，温度 25~260 ，湿度 50~60%，換気
回数 10~ 1l回/時 (llOI/min) ，照明時間 6~18時に調整，
飼料は CE-2 (日本グレア〉を，飲料水は水道水を自由
巴 C
r
()
*:Waters
o
l
u
b
l
AtomicA
b
s
o
r
p
t
i
o
nS
p
e
c
t
r
o
p
h
o
t
o
m
e
t
r
y
Table2
. P
a
r
t
i
c
l
eS
i
z
eD
i
s
t
r
i
b
u
t
i
o
ni
n
I
n
h
a
l
a
t
i
o
nChamber
S
a
m
p
l
e
r
D
i
a
m
e
t
e
r
S
t
a
g
e
μ
1
2
3
4
5
6
7
8
*
>11
.0
1
1
.0-7.0
7.0-4.7
4.7-3.3
3.3-2.1
.1
2.1-1
1
.1-0.65
0.65-0.43
0.43>
。
8
*:F
i
l
t
e
r
に摂取させた.
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
241
，H
yakunincho3chome
，S
h
i
n
j
u
k
u
k
u，Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
*東京都立衛生研究所毒性部
日
く%)
.2
21
6
.
1
2
.
8
(1
.2
)
*
2
.
4
1
.
8
0
.
4
0
.
3
0
.
0
8
0
.
0
4
0
.
0
3
0
.
0
0
5
Ca
Fe
Cr
S
i
Al
Na
Ni
乱1
n
Ti
Zn
S
r
Weightp
e
r
c
e
n
t
Cr-Low
Cr-High
1
.0
8
1
.1
0
1
.6
6
3
.
7
1
1
3
.
3
9
3
0
.
4
0
1
.5
2
7
.
4
7
2
0
.
6
5
3
3
.
6
2
2
5
.
2
9
3
6
:
4
6
1
2
.
7
1
0
.
4
9
0
.
1
0
9
.
0
1
1
.1
4
0
.
0
2
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，3
1
2，1
9
8
0
5
2
Table3
. D
i
s
t
r
i
b
u
t
i
o
no
fChromiumi
nt
h
eR
a
t
se
x
p
o
s
e
dt
o ChromiteOre
R
e
s
i
d
u
eDusta
t1
.0mg/r
凶 a
nd1
0mg/m3 f
o
r3months
C
o
n
t
r
o
l
.
0
0
8(
0
.
0
1
9
)
0
.
0
1
8土 0
3
7
.
6
)
.
0 (
3
.
4土 1
2
4
.
8
)
.
4 (
1
3
.
2土 2
6
.
8
)
1
.8
土1.8 (
1
5
.
8
)
.
8 (
3
.
0土 2
.
2
7
.
3土 1
3
.
2土 4.2
Lung
L
i
v
e
r
Kidney
S
p
l
e
e
n
B
r
a
i
n
C
l
o
t
Serum
mean土 SD u
n
i
t
:ng/g[
l
u
n
gμ
g
/
g
] wetb
a
s
e
():ng/wholet
i
s
s
u
e[
l
u
n
gμg/wholet
i
s
s
u
e
]
曝露期間終了後，動物の体重を測定し，大腿部動静脈
を切開，採血し，屠殺後，腕，腎臓，肝臓，牌臓，脳の
各臓器を摘出，秤量，血液は定法により血餅と血清に分
離後，これらのグロムを原子吸光法で測定した.また肺
(
0
.
2
2
0mg)*
10mg/m3
(2.03mg)*
.
1 (
2
5
.
7
)
2
2
.
5土 4
.
5 (
1
6
7
.
5
)
1
6
.
6土 3
5
.
1(
2
8
0
.
1
)
1
5
5
.
5土 2
4
.
4(
6
7
.
1
)
1
1
0
.
0土 1
.
5 (
8
.
1
)
4
.
2土 2
.
9
1
5
.
6土 3
.
8
2
.
9土 4
1
2
5
.
7土 1
1
.9 (
2
1
6
.1
)
9
0
.
6土 1
8
.1(
8
5
9
.8
)
1
4
7
7土 2
5
2 (
2
6
5
5
)
1
4
8
0土 1
5
4 (
8
6
2
.
8
)
9
.
3土 5
.
2 (
1
7
.
9
)
8
3
.
5土 7
.
1
.
5
2
6
.
3土 7
3
1
.Omg/m
( )*:t
o
t
a
li
n
h
a
l
a
t
i
o
nv
a
l
u
e
(
C
r
)
Table4
. Metal C
o
n
c
e
n
t
r
a
t
i
o
ni
nLungo
ft
h
e
R
a
t
s e
x
p
o
s
e
d t
o Chromite Ore
R
e
s
i
d
u
e Dust a
t 1
.
0mg/m3 and
1
0mg/m3 f
o
r3Months
C
o
n
t
r
o
l
については， カノレ、ンウム，アノレミニウム， ニヅケ Jレ，マ
ンガ γ，亜鉛をプラズマジェット発光法で測定した.
定量方法
試薬硝酸は有害金属測定用を，過酸化水素水は電子
工業用を用いた.クロム，カルシウム，アルミニウム，
ニ y ケノレ，マ γ ガシ，亜鉛の各標準液は原子吸光分析用
標準溶液をその都度希釈して用いた.水は石英二段蒸留
装置〈藤原製作所〕で再蒸留したものを用いた.
Al
Ca
Cr
Mn
Ni
Zn
1.0mg/m3
7
.
4土 0
.
9
8
3
.
5土 6
.
5
0
.
0
2土 0
.
0
0
8
ND
0
.
2
1土 O
.1
1
5
.
1土 2
.
0
mean土SD
4
7
.
5土 4
.
5
2
.
3
1
1
9
.
7土 1
.1
2
2
.
5土 4
ND
.
1
O
.1
4土 0
.
9
1
6
.
3土 0
10mg/m3
.6
2
1
4
.
6土 21
0
.
2
3
5
7
.
0土 2
1
2
5
.
7土 1
1
.
9
1
.6
3土 0
.
2
1
.3
7土 0
.
2
.
7
1
5
.
8土 0
u
n
i
t:p
.g/gwetbas巴
装置原子吸光分光光度計は Nippon J
a
r
r
e
l
l
A
s
h
.
，
AA-8500 (フレームレスアトマイザー.FLA-100)を
ン (364.3nm・20mA)，試料注入量・ 2
0p
.l
プラズマジェット発光分光分析装置は SMI・SPECTR-
訊u
定条件〈プラズマジ z ツト発光法〉・波長・ C
a-393.3
.4nm M
n-257.6nm Z
n
2
1
3
.8
nmA
I
3
9
6
.1nmNi-341
ASPAN-IIIを使用した.
操作摘出臓器および血餅は洗浄済のピーカー 2)に入
れ，ホットプレート上約 1
0
0。で乾燥，放冷後，硝酸 2ml
を加えて一日放置した後，ホットプレート上で徐々に加
nm，プラズマ霞流・ 14A，アルゴンガス流量・ 51/min，
試料導入量・ 3ml/min
結果と考察
熱，溶解させ，放冷後，過酸化水素水 1mlを加え，突沸
グロム量を臓器，血餅は湿重量あたり，血清は容量あ
を防ぐためにゆっくり温度を上げて加熱を続けた.完全
たりの値で示し， ( )内には各臓器中の総クロム量をそ
に溶解しなかった臓器は，硝酸 1ml
，過酸化水素水0.5ml
れぞれ示した (
T
a
b
l
e3
)
. 鉱さい粉じん曝露群はコント
を追加し，淡黄色透明の液となるまでこの操作をくりか
ロール群に比絞しておおむね高い測定値がみられ，高濃
えした.分解終了後，放冷し，再蒸留水で、正確に 10ml
に
度曝露群と低濃度曝露群との聞にも，差が認められた.
メスアップして試験溶液とした.別に同様に操作した空
臓器では，肺，腎臓，牌臓に高く，次いで肝臓で，脳が
試験溶液を調整した.血清は再蒸留水で正確に 3倍に希
最も低かった.肺は直接曝露を受けるため他の臓器に比
釈して試験溶液とした.
べて非常に高い値で，高濃度曝露群で 1
25.7μg/g，低濃
測定条件〈原子吸光法〉
波長・ 357.9nm， ラ ン プ 電
度曝露群で 2
2.5μg/gに達した.腎臓は 1
4
7
7
n
g
/
g， 1
5
5
.
5
流・lOm A，DRY・20A・1
5
秒・ STEP，ASH・70A・
ng/g，牌臓は 1480ng/g
，1
10.0ng/gで，肝臓はこれら
20
秒・ STEP，ATOMIZE・270A・7秒・ FLASH，ア
臓器より比較的少なく 9
0.6ng/g
，1
6
.
6
n
g
/
gで，以上 4
1
/
m
i
n，バッググラウ γ ド補正・チタ
ノ
レ
ゴ γガス流量・ 2
つの臓器は血球濃度以上であった.脳および血清では，
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
高濃度曝露群でのみ高い値を示し，低濃度曝露群はコ γ
と
，
5
3
カルシウムは低濃度曝露群でコシトローノレ群の1.4
倍，高濃度曝露群はコシトローノレ群の 4
.
3倍
， クロムは
トロ{ノレ群と差がなかった.
このように各臓器へのグロムの分布は，肺，腎臓，牌
それぞれ1
1
2
5倍
， 6
2
8
5倍，アルミニウムはそれぞれ6
.
4
臓，肝臓の l
隠で高い値を示したが，これはクロム (6価
〉
倍
， 2
9
倍となり，これらの金属の腕における挙動が大き
の経気道投与実験の結果8川やクロム鉱さい水浸出液に
く異なることが示唆された.
まとめ
よる経皮吸収実験の結果町田と一致しており，また先に報
告2) した 1か月間持続吸入実験と同様の体内分布を示し
た.
3
3
クロム鉱さい粉じんを，1.Omg/m
，10mg/m
の濃度で
か月間昼夜連続で曝露し，
吸入チャシバー内のラットに 3
各臓器について 1か月間持続吸入実験の結果と比較す
経気道進入によるクロム鉱さい粉じんの生体におよぼす
ると，高濃度曝露群の牌臓を除いて 3か月では ， 1か月
影響を調べる目的で，グロムの体内分布および粉じんに
のほぼ1. 5倍 ~2倍になっているが，高濃度爆露群の牌臓
含まれる主な金属の肺における濃度について検討した.
では， 5
.
4
倍にもなり他の臓器とは異なる挙動を示した.
これは牌臓における赤血球の破壊による血球成分の残留
臓器では肺，腎臓，牌臓に高く，次いで肝臓で，脳が
最も低かった.
や，網内皮系の食作用による蓄積のためと考えられる.
血液では血餅に高く，血清は高濃度曝露群でのみわず
脳，血餅，血清は，低濃度曝露群では皇室が認められなか
かに高い値を示した.これら臓器，血液の結果は 1か月
倍になった.
ったが，高濃度曝露群では，ほぼ1.3
持続吸入実験2)と同様の体内分布を示した.
1か月， 3か月ともに試算
肺における金属では，カルシウムアルミニウムが高
による総クロム吸入量の約 10%で，期間による差はなか
く，マンガシ，ユッケルは高濃度曝露群でのみ高い値を
った.
示し，亜鉛は差がなかった.
また肺での総クロム量は，
姉における各金属について，クロムと同様に湿重量あ
たりの値で示した (
Tabl巴 4
)
. コントロール群と比較し
て，カルシウム，アルミニウムは低濃度曝露群，高濃度
曝露群とも高い値を示し，マ γ ガン，ニッケルは高濃度
曝露群でのみ高い{直を示したが，亜鉛は変化が認められ
なかった. Table1にみられるように鉱さい中のカルシ
文 献
1
) 坂本義光，調武久，平賀輿吾:東京衛研年報， 2
8
-2，1
3
5，1
9
7
7
2
)神谷信行，坂本義光，伊川三枝子，中尾順子，平賀
9
2，6
4，1
9
7
8
興吾東京衛研年報， 2
3
)B
a
e
t
j
e
r， A.M.，Damron， C
.，and Budacz，V.:
1
.2%でクロムの 7
.
6倍，アルミニウムの 1
2
ウム最は， 2
A
.M.A
. A
r
c
h
i
v
e
s 01l
n
d
u
s
t
r
i
a
lH
e
a
l
t
h，2
0
，
倍存在するにもかかわらず，各群の肺における濃度(コ
5
4，1
9
5
9
ントロール群の値を差し引いた値〕を比較すると，低濃
4
) 宮井享:四国医学雑誌， 3
6，1
9
3，1
9
8
0
度曝露群では，カルシウムはクロムの1.6
倍
，
5
) 福森信隆，棒島順一郎，井口重孝，平賀輿吾:東京
アルミニ
ウムの 0
.
9倍，高濃度曝露群ではクロムの 2.2
倍，アルミ
ニウムの1.3倍にとどまった.またこれらの元素をコン
トロール群と低濃度曝露群，高濃度曝露群とを比較する
衛研年報， 2
8
2，1
2
9，1
9
7
7
6
) 長井二三子，金西信次，原しげ子，棒島)1慎一郎，中
7
2，5
6，1
9
7
6
尾順子，平賀輿吾東京衛研年報， 2
東京衛研年報 A
nn.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，3
1
2，5
4
:
5
6，1
9
8
0
アデニレートシクラーゼにおよぼすパナデートの影響
中川敦子ペ中尾順子*
EffectsofVanadateon Adenylate Cyclase inRatBrain
ATSUKONAKAGAWA*a
n
dTOSHIKONAKAO*
d
e
n
y
l
a
t
ec
y
c
l
a
s
e，パナデート v
a
n
a
d
a
t
e，コレラトキシシ c
h
o
l
e
r
at
o
x
i
n
Keywords:アデニレートシクラーゼ a
緒 言
ノミナジウムはヒヨコわやラット 2) の必須微量金属であ
ることから，ヒトにとっても重要な金属であると推測さ
れている .i
nv
i
t
r
oにおいて 5価パナデート (
V5つは，生
体内濃度に近い低濃度で種々組織のアデニレートシクラ
，
4)一
方，
{ゼ (AC) を賦活化する 3
Na，K-ATPase
町お
よび各種りん酸水解酵素を阻害6，りする.さらに赤血球膜
の陽イオシ輸送を細胞の内側から阻害することも報告さ
ロ
3
.
0
0
.
r
l
E
o
F寸
¥
、
2
.
0
0
句
、
5
、
、
ω
ぢ 1 .0
0
E
Z
れ
， V5+は生体の調節に関与している可能性が示唆され
ている.私共は V5+の AC賦活化機構について報告4川
u
d
してきたが，今回は AC活性調節の一因子である GTP
CONT C T
結合タンパクにおよぼす V5+の影響について検討した.
CT C T
GTP GTP
CT
GTP
NAD
NAD
NH4
.'
VO
3
実験方法
膜酵素標品の調製および AC活性の測定は前報叫に従
図1. ラット脳 A Cの C Tによる賦活化
った.
CT) の前処理
コレラトキシン (
AC反応に先だち
0.67mg/mlCT に 133mMd
i
t
h
i
o
t
h
r
e
i
t
o
l (DTT) を
加え， 3
0
'
C4
0
分間インキュベートして CTを活性化して
使用した. CT存在下での AC活性測定は，反応液に 5
m MNAD，20mMDTT，1
0
-4M GTPおよび 1
0
0
μg
/
m
l
CTを添加して行った.
VO
試薬 V5+には和光純薬 KKの N H
4
aを使用した.
C
ロ
H
E
当
2.00
叶
¥
民
む
、
、
¥
ω
F
4
口
E
O
ATP は、ングマ社の G
r
a
d
e1を用い， GTP，DTT は
シグマネ土， CTはジュパルツマ γおよびシグマネ土， NAD
巳J
はオリエンタノレ酵母 KKのものを使用した.
同
1.0
0
実験結果および考察
5
0
CTは鳥類赤血球膜10-12九リンパ球膜18〉，脂肪細胞膜 14)
など種々の動物細胞 AC を賦活化する
CT によるラ
100
CT
150
200
(pg. / m1 )
図 2
. ラット脳 A Cの C Tによる賦活化曲線
ット脇細胞膜の ACを賦活化する条件を検討し，その結
果を図 1に示した. CTのみの添加では賦活化作用はほ
CTに付加的に作用した.図 2に CTによる ACの賦活
とんどみられなかった.十分な賦活化作用を示すには他
化曲線を示した
の組織と同じく GTPおよび NADの添加が必要で，ラ
ツト脳細胞膜 ACのCTによる賦活化にも A
D
P
.
r
i
b
o
s
y
l
.
CTを酵素に加え 3
0
'
C 5分間インキュベートした後，
ATP胞を加えて反応を開始して行った. 鳥類赤血球膜
a
t
i
o
n反応が関与していることがわかった.また V5+は
AClO，l2lやリンパ球膜 A
C
I
3
)に比べて作用は弱いが，ラ
CTを添加した活性は，前処理した
1
6
0 東京都新街区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH巴a
l
t
h
，H
yakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
.
k
u， Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
2
4
-1
*東京都立衛生研究所毒性部薬理研究科
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
5
5
cコー
3.00
c l ・ NH.
VO3
4'
NaF
l
Z
Z
l + NaF
l
2
Z
J +NH.
VO3
4'
3.00
h
，
.
.
.
・
吋
.~ 2.00
，
.
.
.
4
吋
叶
〉
2
ー
M
凶
4
吋
2.凹
U
司
U
t
J
'
l
1.00
4
o
b
，
.
.
，
.
'
"
t
9
2
i
a
.
e 1加
"
'
ω
.
i
晶
GTP結合タ γパクに関与するリガンド存在
NaFによる ACの賦活化
下での
ACでも CTによる賦活化作用は認められた.と
CTで十分な AC賦活化
の条件下では 1
0
0
μg
/ml以上の
表
L V5+および NaF依存性 ACの
リガ γ ドによる影響
作用がみられ，以下の実験では全て 1
0
0
p
g
/
m
l濃度の
CTを使用した. AC活性の調節には種々の機構が推測
されているが， ACに付随し細胞膜の内側に存在する
GTP結合タンパクも重要な因子の一つである. CTは
GTP結合タンパクに結合したGTP水解酵素の阻害 10，
1
3
)，
および GTP結合タンパクへの A
D
P
r
i
b
o
s
y
l
a
t
i
o
nの促
進 12，
1
5，
1
引を通して ACを賦活化することが明らかにされ
ている. V5+による AC
賦活化反応がGTP
結合タンパク
結合タンパグに
を介した反応、かどうかを知るため， GTP
関与する種々のりガ γ ドと V5+の関係を調べ図 3に示し
V5+依存性 AC活性はいずれのリガンドが存在して
も変わらず， V 5+が存在しない時の活性の 119~137% が
得られた.一方 N
aFは細胞の内側から作用し，可溶化 AC
でも賦活化作用を示すなど
ACに対し V5+とよく似た反
応を示す既知の AC
賦活剤である.N
aFのGTP結合タ γ
パクにおよぼす影響を検討し図 4に示した. N
aF依存性
AC活性は稜々リガンドの存在下で阻害され， NaFの作用
はGTP結合タシパクに関与していることが示唆された.
NaFとV“の作用を比較するため，図 3および図 4より
リガンドを加えない時の V5+依存性 ACおよび N
aF依
存性 AC活性を 1
00として，種々りガンド存在下での V5+
および N
aF依存性活性を相対値で表わし表 lに示した.
NaF依存性 AC活性は GTP，イソプロテレノール存在
3，61%に
， CT 存在下では 13~14% に低下し
下で各々 7
V5+の作用とは異っていた.
AC賦活化機構の一つに GTP結合タシパクを介した
aFは従来触媒部位に直接作用
系が考えられている. N
し ACを賦活化すると考えられていた. しかし，最近
mム 内 包
ット脳
GZC
T
C
円V
Tム
ロ
&
3
. GTP結合タンパグに関与するリガ γ ド存在
下での V5+による ACの賦活化
図 4
.
た
CM
T
G
T
N
O
C
図
poT
FU
POT
T
s
nuT
仰
しv
T
nD
nu
Ta
T
G
p
FEM
巾ゐ
N
O
同
よ人-GTP
A
c
t
i
v
NH4VOa
NaF
1
0
0 1
2
2
3
1
0
0 7
GTP
イソフ.
ロテレ
ノール
CT
1
3
7
6
1
70
1
3
イソプロ
テレノール
CT
1
0
0
1
4
D
o
w
n
s等1りにより NaFは G
T
P
a
s
e活性は阻害しないが，
GTP結合タンパクに作用して ACを賦活化することが
aFは GTP結合タ γ パグを介
報告され，本実験でも N
した系で ACを賦活化している可能性が示唆された.
V5+による AC賦活化機構が GTP結合タンパクを介す
る可能性については， V5+の賦活作用が GTP結合タシ
パグに関与するいずれのリガ γ ドが存在しでも変わらな
GTP結合タンパクを介さない機構である
V5+は Na
，
K-AT
P
a
s
eはじめ各
種りん酸水解酵素の強力な阻害剤であることから， GTP
結合タンパクに特異的な G
T
P
a
s
eを阻害して ACを賦
いことから，
と推測される.しかし
活化している可能性も否定できない.これについては現
在検討中である.
要 約
1
. ラット脳の膜標品 ACは
， A
D
P
r
i
b
o
s
y
l
a
t
i
o
nが行
CTにより賦活化された.
2
. NaF依存性 AC活性は GTP結合タンパクに関
与するりガ γ ドの存在下で阻害され， N
aFによる AC
賦活化には GTP結合タンパクが関与することが示唆さ
われる条件下で，
れた.
3
. V5+依存性 AC活性は GTP結合タンパクに関与
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，1
9
8
0
5
6
するリガ γドの存在下で影響を受けず， NaF とは異っ
l
V
a
t
u
r
e
，272，552，1978
9
)中川敦子，中尾1
1
原子:東京衛研年報， 3
0
2， 1
3
6，
ていた.
1
) Hopkins，L
.L
.
， J
r
.，andMohr， H.E
.
:l
V
ewer
1
9
7
9
1
0
) S巴l
i
n
g
e
r，Z
.，a
n
dC
a
s
s
e
l，D
.:P
r
o
c
. lV
a
t
l
.A
c
a
d
.
TraceE
l
e
m
e
n
t
si
nl
V
u
t
r
i
t
i
o
n，1
9
5，1
9
7
1，M
a
r
c
e
l
Dekker
，NewYork
S
c
i
. USA，7
4，3
3
0
7
，1
9
7
7
1
1
) Lad，P
.M.，N
i
e
l
s
o
n， T.B
.，a
n
dR
o
d
b
e
l
l，M.:
文
献
c
i
e
n
c
e，1
7
4，
2
)Schwarz， K
.
， a
n
dM
i
l
n
e，D
.B
.
: S
4
2
6，1
9
7
1
3
)中川敦子，中尾1
]
原子:東京衛研年報， 2
9
2， 1
5
1，
1
9
7
8
4
) Schwabe， U.，P
u
c
h
s
t
e
i
n， C
.，Hannernann， H.，
andS
o
c
h
t
i
g，E
. :l
V
a
t
u
r
e，2
7
7，1
4
3，1
9
7
9
巴y
，L
.C
.，J
r
.，J
o
s
e
p
h
s
o
n， L
.
， Warner， R
.
，
5
)C
a
n
t
l
Yanagisawa，M.，L
e
c
h
e
n
e，C
.，andG
u
i
d
o
t
t
i，G.:
]
.B
i
o
l
. Chem.，2
5
2，7
4
2
1，1
9
7
7
in
d
q
u
i
s
t，R
.N.:
6
) Lopes，V.，S
t
e
v
e
n
s， T.，a
n
dL
・
o
c
h
e
m
.B
i
o
ρh
y
s
.，1
7
5，3
1，1
9
7
6
A
r
c
h
. Bi
7
) VanE
t
t
e
n，R
.L
.，Wayrnach，P
.P
.，andRehkop，
D
.M.:]
.Amer. Chem. S
o
c
.，9
6， 6
7
8
2，1
9
7
4
8
)C
a
n
t
l巴y，L
.C
.，J
r
.，Resh，M.，andG
u
i
d
o
t
t
i，G
.:
]
.B
i
o
l
，Chem.，255，988，1980
i
o
l
. Chem.，
1
2
)E
n
o
r
n
o
t
o，K
.
， andG
i
l
l， D
.M.:]
.B
2
5
5，1
2
5
2
，1
9
8
0
1
3
)J
o
h
n
s
o
n，G
.L
.
， and Bourne， H.R
.:Biochem
，
。
Bi
，
ρh
y
s
.R
e
s
..
Communs.，7
8，7
9
2，1
9
7
7
1
4
)C
o
o
p
e
r，D
.M.F
.，S
c
h
l
e
g
e
l，W.，L
i
n，M.C
.a
n
d
R
o
d
b
e
l
l，M.:]
.B
i
o
l
. Chem.，2
5
4，8
9
2
7，1
9
7
9
1
5
) Vaughan，M.，andMoss，J
.:]
.B
i
o
l
.Chem.，2
5
2，
2
4
5
5，1
9
7
7
1
6
)G
i
l
l，D
.M.，andMeren，R.: P
r
o
c
.lV
a
t
l
. Acad.
S
c
i
. USA，75
，3
0
5
0，1
9
7
8
1
7
)Downs，R
.W.，J
r
.，S
p
i
e
g
e
l， A.M.，S
i
n
g
e
r，M.，
Reen，S
.，a
n
dAurbach，G
.D.: ]
.B
i
o
l
. Chem.，
2
5
5
，9
4
9，1
9
8
0
東京衛研年報
Ann.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，5
7
6
0，1
9
8
0
ラ '1 卜原中蛋白質(第 4報 〉 カ ド ミ ウ ム 投 与 ラ
樺島
'
1
卜の尿中遊離アミノ酸の分析
)1頂-~~*，中尾順子*
ProteininRatUrine(IV) AnalysisofFree Amino Acidinthe UrineofRat
TreatedSubctaneouslywithCadmiumChloride
]UNICHIROKABASHIMA*a
n
dTOSHIKONAKAO*
minoAcid
，ラット尿 R
atU
r
i
n
e
Keywords:塩化カドミウム CdCI
2，アミノ酸 A
の重金属を投与し，尿中の蛋白質，酵素活性の変動と腎
Proは投与開始後2
6日目から増加の傾向が認められる.
しかしながら G
ly， Lys， 1-MeHis
，3-MeHisでは， 2
6
障害との関連について検討してきた 1-3) 一方， 人の慢
日目からすでに有意な増加が認められたが ，a-AAA，
性カドミウム中毒とアミノ酸についての報告も多く←ペ
Hyproでは，ややおくれて 3
1日目から有意な増加が認め
我々は，これまでにラットにカドミウムやグロムなど
尿中アミノ酸個々についての報告もされているト町. 今
られた
回，ラットに約 2カ月間カドミウム(塩化カドミウム，
が，カドミウム投与群では明らかに排出が認められた.
CdCl2水溶液〉を連続投与し，その尿中遊離アミノ酸排
Met，s-AIBAでは，増加傾向に有意差が認められなか
a-ABA では対照群では検出限界以下であった
世におよぼす影響についての検討を試み，ここに途中経
った.人間の場合， H
i
s， C
y
s
t
h
i
o，3-MeHis， s-AIBA
過であるが投与開始後3
4日までの経過につき報告する.
などは，正常人で血中アミノ酸濃度が上昇するだけで尿
実験材料および方法
中への排准が増大し腎の再吸収がほとんど行われない
実験材料および方法は，前報に従って採集した尿を，
-500 に凍結保存したものを分析時に解凍し， 尿 0.5ml
11)
これらのアミノ酸は，イタイイタイ病患者の場合で
も尿中への排粧が増加しないことが知られている的. し
に 2規定の水酸化リチウムを 5
0
μ
f加え， pH12~13位に
y
s
t
かし今回の，ラットへのカドミウム投与実験では， C
0
.
2規
h
i
oの増加は認められなかったが，他の His，3-MeHis，
して約 5~10分放置してアンモニアを除いた後，
以下にしたものをアミノ酸分
定塩酸を1.5ml加え， pH2
析用試料とした.分析機は，
s-AIBA などの尿中への排准は増大した.このことは，
目立高速アミノ酸分析計
カドミウム投与群のラットの腎での病変は，人のイタイ
8
3
5
5
0
型を用い，各々のアミノ酸量を測定した.分析操
イタイ病における慢性的な病変とは異なるが，腎機能上
作は，その生体液分析法 (
8
3
5型高速アミノ酸分析計取
の障害の詳細については，今後の研究にまたねばならな
扱説明書〉によった.また使用動物数は，カドミウム投
い.これらについては，今後未分析の 3
5日目以後の尿の
与群，対照群ともに 5匹で，統計処理を行った.
分析や，投与方法の変更などによって明らかにしたい.
腎でのアミノ駿の再吸収に関しては， 5つの輸送系があ
結果および考察
Table1にカドミウム投与ラットならびに対照ラット
世
るとされている 12-14) カドミウム投与ラットの尿中排i
の 1日当りの尿中遊離アミノ酸排液量の分析結果を示し
アミノ酸の増加は，一つのアミノ酸輸送系のアミノ酸の
た.正常人では，尿中に排i'Il!:された総アミノ酸量に対し
排池の増加ではなく，全輸送系の一部のアミノ酸の排祉
ly，Tauであるが，
て，最も大きな割合を示すのは， G
の増加である.これらのことから，排池アミノ酸の増加
ラットは，カドミウム投与群，対照群ともに G
ly，Tau
の理由としては
の割合が大であった.しかし， 1
7日目では，投与群の排
起こしている可能性が考えられる.また前報で報告した
5つの輸送系が全体的に，軽い病変を
池量は，対照群に対してやや減少した.またイタイイタ
1日目と 3
1日目でほと
ように，メタロチオネインの量は 1
lyは正常人と差がないが， Tauは
イ病患者の尿では， G
んど同じであるが， 3
1日自にはカドミウムの排i
世量は，約
減少することが知られている 10) 一方，
1
0倍位に増加している.アミノ酸分析の結果では， 1
2
，
カドミウム投
与群と対照群のアミノ酸を比較すると， G
ly， a-AAA，
1
7，2
1日目に Alaの量が減少し， 2
1， 3
4日自にか Ala
Met，s-AIBA，Lys，1-MeHis，H
i
s，3-MeHis，Hypro，
の量が有意に低下していた.これらのアミノ酸以外では
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
4-1
，H
yakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u・ku， Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
2
*東京都立衛生研究所毒性部
58
A
ηn
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
9
8
0
fMaleR
a
t
s
r
e
eAminoAcidsC
o
n
t
e
n
t
si
nt
h巴 Urineo
Table1
. F
5d
a
y
s
1
2d
a
y
s
1
7d
a
y
s
P
S
e
r
C
o
n
t
r
o
l
5
)
5
)
5
)
1
1
8
.
4土 41
.7
3 (
2
1
0
.
7土 3
2
.
7
3 (
1
4
6
.
2土 6
3
.
5
1 (
5
)
5
)
CdCI2
1
2
2
.
4土 2
6
.
8
8
*
*
*
(
5
)
1
0
4
.
6土 5
0
.
8
0 (
1
7
4
.
7土 1
6
.
9
7 (
Tau
C
o
n
t
r
o
l
8
3
7
.
5
6(
5
)
6
4
7
4
.
3土 1
6
2
7
.
6
0(
5
)
9
8
5
3
.
6土 3
4
8
7
.
9
1(
5
)
2
3
2
4
.
4土 1
CdCI2
4
5
9
9
.
1土 1
7
8
8
.
8
7
*
(
5
)
2
6
1
1
.
5土 1
7
5
7
.
2
8(
5
)
5
3
6
6
.
7土 1
4
3
5
.
6 (
5
)
Asp
C
o
n
t
r
o
l
(
5
)
4
)
4
)
1
9
.
7土 1
5
.
2
5 (
2
.
0
7 (
8
2
.
6土 7
1
.9
土2
2
.
3
5
5
)
(
3
)
CdCI2
5
)
3
9
.
4土 3
3
.
0
1 (
31
.2
土1
7
.
0
9 (
4
.
3土 4
.
5
0
Thr
C
o
n
t
r
o
l
(
1
)
5
)
5
)
.
4
4 (
2
.
3土 5
.
1
9
2
9
.
4土 1
5
.
7
2 (
1
0
.
0土 4
4
)
2
)
1
)
CdCI2
1
.6
土3
.
4
9
* (
21.3士3
6
.
7
0 (
2
.
8土 4
.
0
0 (
2
)
S
e
r
C
o
n
t
r
o
l
1
)
5
)
1
.0
土2
.
3
2 (
3
8
.
0土 31.1
6 (
7
.
6土 1
0
.
4
6 (
4
)
2
)
(
1
)
CdCI2
2
.
0土 4
1
6
.
5土 2
9
.
7
9 (
.
3
8
6
.
3土 4.37 (
Glu
5
)
C
o
n
t
r
o
l
5
)
5
)
5
.
7
8 (
6
.
9
1 (
1
5
3
.
4土 8
1
9
2
.
5土 4
1
3
0
.
5土 3
3
.
3
3 (
CdCI2
5
)
4
)
1
71
.7
土1
4
1
.
6
9 (
5
)
1
3
5
.
1土 4
4
.
8
3 (
8
3
.
6土 5
2
.
9
0 (
C
o
n
t
r
o
l
(
4
)
a-AAA
3
)
(
1
)
9.4土 1
1
.
5
0 (
.
7
4
1
2
.
3土 7
.
5
0
2
.
1土 4
(
1
)
2
)
CdCI2
3
.
3土 7
1
.9
土4
.
2
3
.
4
2
1
.
6
0 (
7
.1土 1
(
1
)
Gly
C
o
n
t
r
o
l
8
4
6
2
.
8土 4
6
4
2
9
.1土 2
1
4
1
.3 (
5
)
7
5
9
.
1
7(
5
)
0
0
4
.
4
4(
5
)
7
7
7
4
.
3土 2
CdCI2
5
1
5
5
.
1土 6
3
9
.
1
5 (
5
)
5
0
1
5
.
3土 1
2
7
6
.
7 (
5
)
5
2
1
8
.
5土 1
0
6
0
.
1
0
*
(
5
)
Ala
C
o
n
t
r
o
l
0
4
.
7
3 (
5
)
5
0
4
.
3土 1
4
9
.
7
1 (
5
)
5
2
7
.
8土 2
3
9
.
5
8 (
5
)
7
4
8
.
4土 4
CdCI2
1
9
6
.
2土 5
9
.
8
6
* (
5
)
3
9
5
.
4土 2
1
1
.
4
7 (
5
)
2
5
4
.
6土 5
8
.
5
2
*
*(
5
)
4
)
C
i
t
C
o
n
t
r
o
l
5
)
ND
3
4
.
4土 2
7
.
6
5 (
.1
0 (
4
0
.
6土 21
4
)
5
)
5
)
CdCI
2
0
.
5土 2
3
.
6
7 (
6
.
0
8 (
1
9
.
9土 1
2
8
.
1土 1
1
.6
9 (
2
ND
a-ABA
C
o
n
t
r
o
l
ND
ND
ND
ND
CdCI2
(
1
)
1
.2
土2
.
6
3
3
)
Val
C
o
n
t
r
o
l
(
4
)
5
)
.
8
3
5
.
2
2 (
2
4
.
5土 2
1
0
.
4土 6
4
0
.
5土 2
0
.
3
3 (
1
)
CdCI2
4
.76 (
5
)
6
.
6土 1
5
.2土 1
1
.
5
4 (
4
6
.
3土 2
5
.
2
5 (
1
)
4
)
C
o
n
t
r
o
l
(
3
)
5
)
Met
0
.
5
2 (
1
7
.
7土 1
.
2
5
1
7
.
8土 1
0
.
9
9 (
4
.
5土 5
(
5
)
(
3
)
(
3
)
CdCI2
1
0
.
7土 5
1
0
.
7土 8
.
7
9
.
0
3
.
2
9
7
.
7土 3
C
y
s
t
h
i
o
(
5
)
(
5
)
C
o
n
t
r
o
l
.
8
2
(
5
)
2
3
.
7土 8
.
3
1
2
5
.
3土 8
.
0
5
1
2
.
2土 4
3
)
5
)
5
)
CdC12
8.4土 8
.
8
6
* (
1
5
.
4土 6
.
5
0 (
1
6
.
7土 8
.
8
7 (
C
o
n
t
r
o
l
(
5
)
I
1eu
4
)
4
)
1
8
.
8土 1
3
0
.
4土 8
2
.
5
4 (
.
8
7
5
.
0
5 (
2
6
.
1土 1
(
5
)
4
)
(
5
)
1
9
.
6土 1
2
.
5
7 (
CdC12
2
2
.
8土 3
.
9
3
2
5
.
6土 6
.
2
8
(
3
)
(
3
)
Leu
(
5
)
7
.
8土 7
.
5
6
C
o
n
t
r
o
l
8
.1土 7
.
8
1
.
9
2
9
.
6土 5
(
4
)
(
3
)
(
5
)
CdC12
8
.
9土 5
.
3
6
5
.3土 6
.
1
1
9.7土1.3
0
5
)
2
)
Tyr
(
5
)
C
o
n
t
r
o
l
8
0
.
2土 3
3
.
5
0 (
4
8
.
2土 6
8
.
8
1 (
3
.
0
3
8
.
3土 2
4
)
4
)
(
5
)
4
5
.
6土 3
5
.
8
1 (
CdCl2
5
4
.
5土 3
3
.
6
3 (
4
2
.
7土 3
2
.
3
5
)
5
)
5
)
Phe
4
6
.
5土 2
C
o
n
t
r
o
l
8
.
5
6 (
7
5
.
3土 1
4
.
2
3 (
0
.
9
3 (
4
2
.
9土 1
(
5
)
5
)
5
)
7
0
.
0土 7
.
6
1
CdC12
7
0
.
4土 1
8
.
8
9 (
8
8
.
6土 1
2
.
9
1 (
5
)
3
4
8
.
4土 1
51
.2
0 (
5
)
5
)
s-Ala
C
o
n
t
r
o
l
5
.
0
6 (
2
4
0
.
2土 7
2
.
7
8 (
2
2
3
.
6土 8
5
)
5
)
1
31.2土 6
7
.
6
3
* (
5
)
1
91.0土 9
8
.
8
1 (
CdC12
1
9
6
.
5土 6
8
.
2
6 (
5
)
5
)
7
9
.
0土 3
C
o
n
t
r
o
l
0
.
3
3 (
8
3
.
7
6 (
5
)
5
8
.7土 2
5
.
0
1 (
s-AIBA
5
0
.
3土 3
5
)
3
)
5
)
5
3
.
2土 2
0
.
2
9 (
2
7
.
4土 2
5
.
2
1 (
CdC12
4
6
.
5土 2
6
.
4
4 (
5
)
ABA
(
5
)
5
)
4
5
.
2土 1
C
o
n
t
r
o
l
8
.
1
4 (
41
.3
土8
.
4
8
1
.
8
8 (
4
3
.
8土 1
r
5
)
(
5
)
3
4
.
8土 1
9
.
6
1 (
5
)
CdC12
4
5
.
5土 2
5
.
9
2 (
3
3
.
0土 8
.
7
5
5
)
(
5
)
(
5
)
2
7
.
7土 1
C
o
n
t
r
o
l
1
.4
8 (
1
9
.
6土 5
Orn
.
8
2
.
5
9
1
7
.
4土 3
5
)
5
)
1
3
.
8土 4
.
7
7
* (
5
)
CdCl2
.
5
2 (
1
2
.
9土 4
1
7
.
3土 1
1
.
6
9 (
(
5
)
5
)
(
5
)
2
0
.
0土 8
Lys
C
o
n
t
r
o
l
.
6
1
.
5
8
2
0
.
2土 5
.
9
2 (
1
2
.
9土 3
(
5
)
(
5
)
5
)
1
0
.
6土 7
.
3
1
CdCl2
1
9
.
1土 2
0
.
7
7 (
2
6
.
5土 9
.
0
2
4
)
3
)
1
7
.
1土 1
1-MeHis C
3
.
2
3 (
(
5
)
o
n
t
r
o
l
.
9
5
1
0
.
8土 1
2
.
1
0 (
1
6
.
2土 5
4
)
3
)
1
4
.
8土 1
1
.4
5 (
2
)
.
7
4 (
6
.
9土 6
CdC12
6
.
2土 9
.
2
7
* (
(
5
)
(
5
)
2
3
.
6土 9
.
7
6
(
5
)
His
C
o
n
t
r
o
l
2
4
.
5土 8
.
0
6
.7
1
1
3
.
7土 4
(
5
)
5
)
2
2
.
0土 7
.
0
8
(
5
)
.
8
6 (
1
9
.
3土 6
CdC12
1
3
.
8土 8
.
9
5
5
)
5
)
5
0
.
4土 2
5
.
2
7 (
5
)
3-MeHis C
o
n
t
r
o
l
5
7
.
0土 1
6
.
0
4 (
6
.
8
0 (
5
2
.
9土 1
5
)
5
)
51
.7
土2
5
.
7
8 (
5
)
5
.
1
0 (
3
7
.
1土 1
CdC12
3
8
.
1土 2
9
.
2
4 (
5
)
5
)
C
o
n
t
r
o
l
(
4
)
3
4
.
3土 1
8
.
7
5 (
Arg
6
.
1土 4
.
6
1
4
2
.
5土 1
5
.
8
6 (
5
)
5
)
2
.
1
9 (
2
5
.
2土 1
5
)
CdC12
1
9
.
3土 1
6
.
8
9 (
2
6
.
6土 1
2
.
4
0 (
5
)
1
8
7
.
2土 1
3
2
.
4
6 (
4
)
5
)
C
o
n
t
r
o
l
1
9
0
.
6土 8
5
.
1
1 (
Hypro
4
.
1
0 (
2
1
6
.
9土 8
5
)
5
)
91
.7
土1
8
.
0
5 (
CdCl2
7
3
.
0土 4
7
.
3
8
* (
4
)
1
0
5
.
4土 3
8
.
3
3 (
5
)
5
)
4
)
5
9
.
4土 8.44 (
C
o
n
t
r
o
l
81
.4
土4
0
.
6
8 (
AspNH2
0
.
9
1 (
2
8
.
7土 2
3
)
5
)
3
7
.
4土 3
ND
5
.
1
9 (
3
.
8
2 (
51.7土 1
CdCl2
4
)
5
)
41.6土 2
4
.
6
6 (
5
)
C
o
n
t
r
o
l
2
.
6
6 (
7
7
.
9土 2
2
.
9
8 (
Pro
4
2
.
0土 1
(
5
)
5
)
3
)
4
4
.
1土 9
.
6
7
4
8
.
9土 2
4
.
3
0 (
CdCl2
2
2
.
3土 2
2
.
9
7 (
巴 i
s
E
x
p
r
e
s
s
e
da
snm
o
l
e
so
faminoi
a
c
c
a
l
n
d
/
t
l
d
y
a
y
c
l
/
i
f
r
f
a
e
t(mean土 SDf
o
r5r
a
t
s
)
.
Eachv
a
l
u
〉
p<0.01 料 *
(
p
1
.
<
5
0
m
.
g
0
/
0
1
K
;
S
i
g
W
n
i
.
f
r
E
n
tfrom c
o
n
t
r
o
l
*
a
p
l
i
<
n
e
0
.
0
5 料 l
.W.) wasi
n
j
e
c
t
e
do
n
c
ead
a
y
S
a
l
i
n
e(
c
o
n
t
r
o
l
)a
n
dCdCl2 (1.5mgjKg.B
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
T
r
e
a
t
e
dS
u
b
c
t
a
n
e
o
u
s
l
yw
i
t
h Cadmium C
h
l
o
r
i
d
e
2
1d
a
y
s
2
6d
a
y
s
3
1d
a
y
s
5
)
(
5
)
2
.
4
2
3
3
8
.
7土 8
6
.
0
0 (
2
6
9
.
7土 1
1
7
.
4
3 (
5
)
2
5
7
.
3土 7
(
5
)
5
)
3
.
4
8
1
5
3
.
0土 3
3
.
3
2
* (
5
)
2
5
2
.
4土 6
3
.
6
8 (
2
4
4
.
7土 5
7
5
0
.
2
0(
5
)
8
4
5
2
.
8土 2
2
1
3
.
0
3(
5
)
9
7
5
4
.
1土 1
1
4
0
.
5
5(
5
)
8
4
6
0
.
7土 2
7
41
.0
9(
5
)
5
9
0
7
.
7土 1
4
2
9
.
0
7(
5
)
6
2
6
0
.
3土 2
6
0
0
.
2
9(
5
)
6
7
6
4
.
2土 3
(
1
)
3
)
5
)
3
.
4
7 (
1
4
.
6
0土 1
0
.7
5 (
2
.
1土 4
.
7
0
4
4
.
4土 3
3
)
(
4
)
4
)
.
8
7
4
5
.
5土 2
7
.
0
0 (
1
5
.
4土 9
2
.
7
0 (
1
5
.
9土 2
3
)
3
)
.
8
8
(
5
)
1
3
.
1土 3
.
9
2 (
1
6
.
7土 1
8
.
2
2 (
8
.
1土 7
ND
(
3
)
(
5
)
1
11
.6土 9
8
.
0
.
3
0
8
.
1土 8
(
3
)
5
)
(
1
)
2
7
5
.
0土 8
7
.
6
1 (
2
.
9土 6
.
4
9
.
1
1
9.4土 9
(
2
)
4
)
4
6
.
0土 2
5
.
2
3 (
3
.
1
6
キ
(
4
)
1
8
.
6土 2
.
1
3
4
.
4土 6
1
81
.1土 1
3
0
.
8
7 (
5
)
2
4
9
.
4土 1
2
2
.
2
3 (
5
)
2
0
2
.
5土 1
3
8
.
4
8 (
5
)
5
)
1
7
4
.
1土 61
.8
9 (
3
4
6
.
2土 1
8
0
.
7
1
*
*
(
5
)
4
3
9
.
8土 1
5
4
.'
1
4
*(
5
)
4
)
ND
.9
0 (
1
4
.
9土 11
2
4
.
0土 5
.
2
8
(
1
)
3
)
3
)
6
.
4
3 (
1
1
.6土 1
1
.
8
8 (
51
.6土 3
3
.
3
6
紳 *
(
5
)
2
8
.
0土 3
2
1
6
.
8
3(
5
)
7
2
2
6
.1土 2
3
2
2
.
6
3(
5
)
4
1
4
8
.
9土 2
5
1
1
2
.
7土 2
4
4
8
.
5
0(
5
)
1
3
4
.
7
0(
5
)
4
1
9
8
.
8土 2
4
6
0
9
.
4土 1
6
5
7
.
1
1(
5
)
4
9
5
.
3
1(
5
)
3
8
3
4
.
8土 1
6
7
.
8
0 (
5
)
1
2
9
5
.
8土 3
1
7
.
7
2 (
5
)
1
1
5
7
.
0土 2
1
2
7
6
.
2土 9
0
4
.
2
3 (
5
)
6
3
9
.
4土 1
5
7
.1
2
*(
5
)
8
2
0
.
9土 371
.0
5 (
5
)
5
6
.
6
1 (
5
)
1
2
8
2
.
0土 6
ND
ND
.
9
7
(
4
)
1
3
.
3土 7
ND
2
)
2
8
.
5土 2
4
.
3
7 (
5
)
3
.
6
7 (
46.4土 6
ND
ND
ND
ND
(
2
)
5
.
0土 6
.
8
5
(
2
)
.
8
9
4
.
2土 5
3
)
ND
ND
3
9
.
2土 3
7
.
8
7 (
1
)
4
5
.
8土 2
6
.
8
2 (
5
)
9
.
3
4 (
1
3
.
1土 2
3
.
8
5 (
1
5
.
1土 3
1
)
4
)
ND
(
2
)
7
.
1土 9
.
7
7
3
.
6
8 (
1
2
.
4土 5
3
)
3
)
2
.
5
7 (
2
3
.1土 6
.
8
9
* (
5
)
8.9士1
8
.
9
3 (
2
0
.
2土 1
4
)
5
)
(
5
)
1
9
.
9土 1
2
.
9
8 (
.
3
5
2
9
.
0土 7
4
.
1
4 (
2
9
.1土 1
(
5
)
(
5
)
(
5
)
.
1
2
1
8
.
5土 6
.
7
3
2
7
.
6土 8
.
9
1
1
9
.
1土 7
5
)
5
)
5
)
6
.
6
6 (
3
5
.
7土 1
0
.
6
4 (
3
7
.
4土 1
3
.
2
3 (
21
.7土 1
(
5
)
5
)
.
0
5
(
5
)
2
8
.
6土 6
.
4
2 (
2
4
.
5土 5
2
0
.
4土 7
.
1
0
(
2
)
3
)
.
5
6
3
.
7土 5
.
0
3
2
.
0土 4
8
.
9
2 (
1
8
.
2土 2
(
1
)
3
)
(
3
)
0
.
1
2 (
9
.
2土 1
.
8
6
7
.
0土 6
(
5
)
1
7
.
5土 5
.
9
8
1
)
2
)
8
.
6
9 (
(
1
)
8.4土 1
3
.
4
0 (
1
7
.
0土 2
1
.0土 2
.
1
5
2
)
3
)
5
.
7
0 (
1
7
.
7土 1
1
.0
2 (
3
3
.
4土 1
3
.
5
3
料 *
(
5
)
2
7
.
7土 4
5
)
4
)
6
.
5
8 (
6
1
.4土 1
1
.2
0 (
5
3
.
5土 3
5
)
1
0
8
.
3土 3
5
.
4
6 (
5
)
5
)
4
.
9
4 (
6
5
.
5土 1
5
.
2
3 (
5
)
7
0
.
8土 2
1
0
4
.
4土 31
.96 (
5
)
3
.1
9 (
5
)
3
3
0
.
7土 5
0
.
0
4 (
2
2
5
.
7土 7
(
5
)
1
9
5
.
9土 7
5
.
6
6
.
4
2
* (
5
)
5
)
5
)
2
3
3
.
9土 7
1
7
6
.
3土 7
8
.
6
7 (
1
8
0
.
4土 8
0
.
8
1 (
5
)
.2
6 (
4
)
3
5
.
3土 21
2
.
4
4 (
4
9
.
2土 1
3
)
2
8
.
8土 2
7
.
7
9 (
5
)
5
)
0
.
7
9 (
3
7
.
5土 2
5
)
9
.
0
9 (
8
2
.
7土 2
8
.
3
1 (
7
9
.
0土 1
5
)
.
8
1
(
5
)
3
7
.
3土 9
5
)
0
.
5
5 (
3
5
.
0土 1
2
.
8
9 (
2
6
.
6土 1
(
5
)
3
.
9
7 (
5
)
4
1
.
4土 2
5
)
.
0
1
3
3
.5土 6
3
.
5
4 (
2
6
.3土 1
0
.
8
7 (
4
)
1
2
.
1土 1
0
(
5
)
1
6
.
1土8.2
.
7
7
2
.
6土 5
(
1
)
4
)
(
3
)
4
.
9
7 (
8
.
8土 9
.
1
9
1
6
.
4土 1
.
2
6
2
.
8土 6
(
1
)
4
)
4
)
5
)
6
.
9
4 (
1
2
.
2土 8
.14 (
41
.4土 2
.89 (
1
9
.
5土 21
5
)
3
4
.
0土 1
1
.
8
8
料 *
(
5
)
0
.
6
3 (
0
.
1
0
* (
5
)
5
7
.
5土 2
2
4
.
3土 2
2
)
3
)
2
)
6
.
1
2 (
1
2
.
6土 1
2
.
1
2 (
9
.
8土 1
3
.
8
4 (
1
0
.
2土 1
(
2
)
.
9
3
3
4
.1土 9
.
7
1
* (
5
)
5
.1土 6
4
.
7
0
*
*
*
(
5
)
6
0
.
2土 2
5
)
(
3
)
3
)
0
.
5
5 (
8
.
3土 7
.
8
1
1
8
.
1土 1
9
.
6土 9
.
3
4 (
(
5
)
4
)
5
)
.
0
7
2
1
.5土 1
6
.
3
5 (
1
9
.
0土 9
6
.
0
3 (
6
8
.
2土 5
4
)
(
5
)
(
4
)
.
5
5
2
1
.3土 1
3
.
1
6 (
2
8
.
5土 7
1
2
.
7土 7
.
8
6
2
.
5
7 (
5
)
6
0
.
8土 2
3
.
6
1* (
5
)
2
9
.
2土 2
7
.
4
2
*
*
*
(
5
)
7
2
.
3土 1
4
)
3
)
4
)
4
.
6
4 (
1
4
.
8土 1
5
.
9
0 (
1
2
.
4土 1
2
7
.
8土 1
9
.1
8 (
4
)
(
5
)
5
)
7
.
8
6 (
2
0
.
0土 1
.
6
0
4
7
.
0土 3
6
.
5
0 (
1
8
.
0土 4
5
)
2
4
9
.
6土 1
0
7
.
5
5 (
5
)
1
6
5
.
7土 7
8
.
8
0 (
1
2
.
9
3 (
4
)
1
4
0
.
0土 1
5
)
5
)
5
.
2
9 (
1
81
.3土 5
6
.
8
4 (
1
5
9
.
6土 3
8
.
7
9 (
5
)
1
6
5
.
1土 4
3
)
4
)
4
)
8
.
4
3 (
3
0
.
2土 3
7
.
8
9 (
91
.5土 5
2
.
1
1 (
6
2
.
3土 5
4
)
5
)
6
.
8
5 (
8
6
.
0土 2
9
.
4
4 (
5
)
67.7土 4
1
3
0
.
2土 5
3
.
3
4 (
5
)
ND
1
0
4
.
7土 1
3
)
9
.
0
3 (
8
.
6
5 (
4
7
.
1土 4
4
)
5
)
4
)
7
.
4
3 (
6
0
.
3土 3
5
.
5
7 (
8
0
.
0土 1
6
7
.
3土 4
6
.
0
6 (
ND: Nod
e
t
e
c
t
e
di
na
l
lo
f5r
a
t
s
fr
a
t
sd
e
t
e
c
t
e
d
F
i
g
u
r
e
si
np
a
r
e
n
t
h
e
s
i
si
n
d
i
c
a
t
eno・o
。
5
9
34d
a
y
s
5
)
1
9
0
.
8土 7
9
.
5
3 (
5
)
2
3
6
.
9土 6
2
.
4
3 (
1
0
7
3
8
.
5土 2
8
9
4
.
3
2(
5
)
9
5
0
0
.
3土 4
3
8
3
.
2
1(
5
)
5
)
9
6
.
2土 1
1
.2
2 (
2
4
.
6土 2
2
.1
9
*料 (
3
)
3
)
1
6
.
1土 1
5
.
7
0 (
ND
3
)
1
1
.
5土 1
0
.
7
3 (
(
2
)
3
.
7土 5
.
4
7
5
)
3
3
5
.
2土 5
2
.
2
9 (
1
6
.
1
9
*(
5
)
2
3
9
.
2土 2
ND
5
)
1
0
0
.
1土 6
5
.
4
5 (
1
0
5
.
2
9(
5
)
9
0
1
7
.
4土 1
7
5
51
.2土 1
5
4
4
.
9
9(
5
)
6
4
.
9
5 (
5
)
8
7
4
.
8土 2
1
0
6
4
.
4土 4
3
7
.
8
9キ (
5
)
ND
ND
ND
(
1
)
2
.
5土 5
.
5
9
3
)
2
.
0
4 (
5
5
.
7土 5
1
)
9
.
3土 2
0
.7
1 (
3
)
1
2
.
7土 1
1
.6
5 (
4
)
2
8
.
3土 1
7
.
3
6 (
5
)
3
6
.
6土 1
1
.
6
8 (
5
)
4
4
.
1土 1
4
.
2
3 (
(
5
)
2
9
.
6土 7
.
2
8
(
5
)
.
0
5
3
2
.
8土 9
(
3
)
8
.
2土 9
.
3
6
5
)
.
0
0
* (
2
5
.
9土 9
3
)
4
.
2
1 (
3
5
.
2土 3
3
)
8
.
5土 1
1
.83 (
5
)
7
.73 (
9
4
.
6土 2
4
)
1
21
.8土 7
7
.
7
0 (
5
)
3
.
7
0 (
2
3
5
.
2土 6
5
)
2
5
6
.
2土 6
8
.
2
0 (
3
)
2
1
.5土 21
.6
5 (
1
9
3
.
0土 4
0
.
1
9
*水*
(
5
)
(
5
)
4
3
.
3土 8
.
0
0
5
)
5
3
.1土 2
2
.3
0 (
5
)
2
7
.
5土 1
0
.1
0 (
4
)
1
9
.
2土 1
2
.
0
2 (
(
5
)
2
1
.9土 9
.
3
5
1
2
3
.
2土 6
7
.
2
4
* (
5
)
5
)
3
7
.1土 11
.9
6 (
1
6
7
.
8土 5
4
.
2
4
*
*
*
(
5
)
.
9
0
(
5
)
2
0
.1土 2
2
7
3
.
9土 2
6
6
.
9
6 (
5
)
7
.
1
9 (
5
)
4
9
.
3土 1
2
0
3
.
5土 3
4
.
7
4
判 *
(
5
)
5
.
5
7 (
5
)
5
2
.
5土 3
3
)
2
7
.
0土 3
0
.
1
3 (
4
)
1
2
2
.
9土 8
3
.
1
5 (
3
4
5
.
6土 1
3
0
.
2
1
*(
5
)
5
)
1
3
4
.
6土 2
6
.
2
8 (
2
3
.
8
5 (
3
)
1
3
2
.
0土 1
ND
3
)
7
9
.1土 8
9
.7
2 (
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，1
9
8
0
60
7，26日目， Tau，Ornが1
7日自に有意に低下
P
S
e
rが1
を示し ，a-AAAが 3
1日目， Leuが 34日目に有意に増
4日目までの途中断
加を示していた.以上，投与開始後3
続的な分析の結果からは，結論を出せるまでのデータは
2
9
2，1
5
8，1
9
7
8
3
) 中尾j
関子，道源正子，様島1
]
慎一郎，藤井芳美:東京
衛研年報， 3
0
2，1
2
9，1
9
7
9
4
)C
l
a
r
k
s
o
n， T.W.，and Kench，]
.E
.:B
i
o
c
h
e
m
.
J
.，62，361，1956
得られなかった
注〉最後にアミノ酸分析に際して，分離が非常に悪い
5
)K
a
z
a
n
t
z
i
s，G
.，Flynn，F
.V.，Spowage，]
.S
.，and
Cys，Hylys など，対照群，投与群ともに検出限界以下
T
r
o
t
t，D
.G
.:Q
u
a
r
t
.J
.med.，32，165，1963
のものが多いアミノ酸は除外して検討した.検討の対象
6
) 農島滋，星野忠夫，土屋健三郎..環境庁調査委託事
S
e
r
としたアミノ酸は以下に記載するとおりである. P
(
P
h
o
s
p
h
o
s
e
r
i
n
e
)，Tau(
T
a
u
r
i
n
e
)，Asp(Aspartica
c
i
d
)，
Thr(
T
h
r
e
o
n
i
n
e
)，S
e
r
(
S
e
r
i
n
e
)，Glu(
G
l
u
t
a
m
i
ca
c
i
d
)，
a・
AAA(a-Aminoa
d
i
p
i
ca
c
i
d
)， Gly (
G
l
y
c
i
n
e
)， Ala
同
(
A
l
a
n
i
n
e
)，C
i
t(
C
i
t
r
u
l
l
i
n
e
)，a・ABA(a-Aminob
u
t
y!
ic
a
c
i
d
)， Val (
V
a
l
i
n
e
)， Met (
M
e
t
h
i
o
n
i
n
e
)， C
y
s
t
h
i
o
(
C
y
s
t
a
t
h
i
o
n
i
n
e
)， I
le
u(
ls
o1
巴u
c
i
n
e
)，Leu(
L
e
u
c
i
n
e
)，
P
h
e
n
y
l
a
l
a
n
i
n
e
)，s
A
l
a(
s
A
l
a
・
Tyr(
T
y
r
o
s
i
n
e
)，Phe (
n
i
n
巴
)
， s-AIBACβAminoi
s
o・b
u
t
y!
ica
c
i
d
) r-ABAC
r
開
業報告書， 65，日本公衆衛生協会， 1
9
7
3
7
) 星野忠夫，土屋健三郎:環境公害防止等調査研究委
託費による報告書， 1
6
3，日本公衆衛生協会， 1
9
7
3
8
)福島匡昭，坂元倫子，小林悦子:日衛誌， 2
9，4
9
8，
1
9
7
4
9
)能川浩二，本多隆文，小林悦子，石崎有信:日街誌，
3
4，7
2
3，1
9
8
0
1
0
)西野治身，城石和子，渡辺正男:環境保健レポ{ト，
1
8
4，1
9
7
8
Amino-n
・
b
u
t
y!
ica
c
i
d
)，O
r
n
(
O
r
n
i
t
h
i
n
e
)，L
y
s
(
L
y
s
i
n
e
)，
1
1
) Efron，M.L
.:NewEng.J
.Med.，
2
7
2，1
0
5
8，1
9
6
5
i
s
(
H
i
s
t
i
d
i
n
e
)，3-MeHis
1
M
e
H
i
s
(
1
M
e
t
y
l
h
i
s
t
i
d
i
n
e
)，H
1
2
) Milne，M.D.: B
r
i
t
. Med. J
.，1，327，1964
(
3
M
e
t
y
l
h
i
s
t
i
d
i
n
e
)， Arg(
A
r
g
i
n
i
n
e
)， Hypro(Hydro-
1
3
) Milne，M.D
.:I
n3
r
dE
d
."
B
i
o
c
h
e
m
i
・
c
a
lD
i
s
o
r
d
e
r
s
x
y
p
r
o
l
i
n
e
)，AspNH2(
A
s
p
a
r
a
g
i
n
e
)，Pro(
P
r
o
l
i
n
e
)
文
献
1
) 中尾]1原子，道源正子，樺島j
国一郎・東京衛研年報，
2
8
2，2
2
7，1
9
7
7
2
) 中尾!原子，道源正子，樺島順一郎東京衛研年報，
i
nHumanD
i
s
e
a
s
e
"(
E
d
i
t
a
r
:Thompson，R
.H.S
.，
and 羽T
o
o
t
t
o
n，I
.D
.P.)， 5
5
3， 1
9
7
0， Academic
P
r
e
s
s，NewYork
3，1
3
1
6，1
9
7
4
1
4
) 荒川雅雄，吉岡稔男:内科， 3
東京衛研年報 A
nn. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，6
1
6
6，1
9
8
0
ポ リ 塩 化 ビ フ ェ ニ ー ル (PCB) の 肝 薬 物 代 謝 酵 素 誘 導 作 用 に 関 す る 若 干 の 考 察
川野澄江*，平賀輿吾*
SomeConsiderationsintheInduction of HepaticDrug Oxidation Enzymes
Produced byPolychlorinatedBiphenyIs (PCB)
SUMIEKAWANO*a
n
dKOGOHIRAGA*
Keywords:ポリ塩化ピブェニ{ル (PCB) p
o
l
y
c
h
l
o
r
i
n
a
t
e
db
i
p
h
e
n
y
l
s(PCB)， 薬物代謝酵素 d
r
u
go
x
i
d
a
t
i
o
n
e
n
z
y
m
e
s，チトクロ{ム P-45
0c
y
t
o
c
h
r
o
m巴 P-4
5
0，ラット r
a
t，肝臓 l
i
v
e
r
市販ポリ塩化ピフェニール (PCB)製品は，肝薬物代
た.各分画は， KD式濃縮装置，次いで温浴上で溶媒を
謝酵素の強力な誘導物質としてよく知られているが，こ
完全に除去したのち，オリ{ブ油に溶解して動物に投与
の酵素に数種のアイソザイムが存在する事実が明らかに
，4
，3
'，
4
'
TCB20mg も同様な方法で精製し，
した. 3
2
)，PCB異性体とアイソザイム誘導との関
されて以来 1，
PCDF を除去した.
実験結果
連についての詳細な検討が行われつつある科目.そこで今
回われわれは，
1) PCB の各種異性体がどのアイソザ
イムを誘導しているのか， 2)動物体内で生じた PCB
1
) 塩素含量の異なる Kanechlor標品の肝薬物代謝
T
a
b
l
e1
)
酵素誘導作用の比較 (
の代謝物によって誘導作用が修飾されているか， 3) 市
低用量 (
0
.171mmolesjkg) の KC-600の投与では，
販 PCB混合物中に存在するポリ塩化ジベンゾフラン
KC-400，KC-500の投与に比べてはるかに強い誘導が認
(PCDF)等の不純物の寄与はどの程度か，以上の諸点に
-450合量は，対照の 2
.
7
倍に
められた〈チトクロ{ム P
ついて若干の検討を行った.
上昇).しかしながら，エチルイソシアニド差スベグト
ルの 455nmj430nmピ{グ比〈以下， EIC比と略す〉の
実験材料および方法
1
) 試薬市販ポリ塩化ピフェニーノレ (PCB)混合物:
上昇はわずかであり， ρ・ユトロアニソーノレ・デメチラ{
K
a
n
e
c
h
l
o
r2
0
0
，3
0
0，4
0
0，5
0
0，6
0
0は，和光純薬工業株
ゼ(NADM)活性，アミノピリ γ ・デメチラーゼ (APDM)
式会社から， PCB異性体:2
，5
，2
'，5
'
，
ー 3
，4
，3
'，4
'
，
一
活性の上昇は，それぞれ対照の 3
.
5
倍
， 2
.
5倍といずれの
2，
4，2
'，
4
'
，2
，
3，
2
'，
3
'
-， 2
，
3，
4，
5
ーテトラクロロピフェ
場合も顕著で、あった.以上の事実から，低用量の KC-600
，
3，
4，
2
'，
5
'
-，2，
4，
5
，
2
'，
5
'
ーベ γ タグロ
ニ-/レ (TCB)，2
による誘導は， PB型に近いとみられる.
，
3，
4，
2
'，
3
'，
4
'
，
ー 2
，
4，
6，
2
'，
4
'，
ロピフェニ-/レ (PCB)，2
高用量(1.7
1mmolesjkg)の KC
-4
0
0，5
0
0，6
0
0の投
6
'
ーへキサクロロピプェニ{ノレ (HCB)は
， A
n
a
l
a
b
sI
n
c
.
与でチトグロ{ム P 450含量は 2
.
5倍前後に上昇し，
から購入し，特に記載のない限りそのまま使用した.そ
EIC比も1.0前後に上昇した.しかしながら酵素活性の
の他の試薬は，既報5，
6
)のとおりである.
変化をみると， NADM活性が 3倍以上に上昇するのに
2
) 動物および投与方法 Wistar-]CL系雄ラ
γ
ト(4
由
対して， APDM 活性の上昇は40~50% にすぎなかった.
PB型の酵素と同時に
~6 週令〉を使用した.各検体は，オリーブ油に溶解し
以上の結果から，高用量では，
て腹腔内に投与し，投与後 5日闘に屠殺した.
M C型の酵素も強く誘導されていると推測されるが，
3
) 肝ミクロソーム分画の調製法，酵素活性，差スペ
クトルの測定法既報のとおりであるト 7)
4
) PCBの 精 製 法 へ キ サ γ に溶解した KC-4
0
0，
100mgを 加gの酸化アルミニウムを充てんした内径 1
0
mmのカラム上に添加し， 5%ジクロロメタシーヘキサ γ溶
液2
00ml，次いで 20%ジクロロメタシーヘキサン溶液 2
5
0
mtで溶出し，それぞれを PCB分闘， PCDF分固とし
KC-600，KC-500
投与の EIC比の有意差を考慮すると，
KC-600による M C型の誘導は， KC-500のそれに比べて
弱いと考えられる.低塩素含量の KC-200
，KC-300によ
る誘導は小さかった.
2
) 酸化アルミ=ウムカラムで分別された KC4
0
0分
画の肝薬物代謝酵素の誘導能
市販 PCB混合物は， M C型の薬物代謝酵素の強力な
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR巴s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
h
i
n
j
u
k
u・
ku， Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
2ι1，Hyakunincho3chome，S
*東京都立衛生研究所毒性部
Table1
. I
n
d
u
c
t
i
o
no
fH
e
p
a
t
i
cDrugO
x
i
d
a
t
i
o
nEnzymesi
nMaleRatsGivenV
a
r
i
o
u
s CommercialP
o
l
y
c
h
l
o
r
i
n
a
t
e
dB
i
p
h
e
n
y
l乱1
i
x
t
u
r
e
s
。
σ3
E
(
K
a
n
e
c
h
l
o
r
s，KC) D
i
f
f
e
r
e
n
ti
nC
h
l
o
r
i
n
eC
o
n
t
e
n
t
Compound
Body
No.of w
e
i
g
h
t
:
r
.
'
)
a
n
i
m
a
l
s(
B
.
L
i
v
e
r
w
e
i
g
h
t
(
ず
験
)
Microsomal
protem
Cytochrome
P-4
5
0
(rr官~fZ~g)
(nwmg)
m
i
c
r
o
s
o
m
a
l
p
r
o
t
e
i
n
E
t
h
y
l
i
s
o・
c
y
a
n
i
d
e
d
i
f
f
e
r
e
n
c
e
ロ1
s
p
e
c
t
r
u
(455Ç，r
勾
~nm)
a
tlO
Drugo
x
i
d
a
t
i
o
na
c
t
i
v
i
t
y
ω
少N
i
t
r
o
a
n
i
s
o
l
e
Aminopyrine
d
e
m
e
t
h
y
l
a
s
e
d
e
m
e
t
h
y
l
a
s
e
4
0
1
3
3土 1
.
3
9
4
.
7
8土 0
1
0
0
.
1土 1
2
.
4
0
.
7
9土0
.
0
2
0
.
3
1土 0.04
1
3
.
2土1.2
6
8
.
5土 1
4
.
7
KC-4
0
0
4
f
:8
1
2
6:
5
.
0
2土 0
.
3
8
1
2
6
.
0土 9.4
.
0
8
*
*
*
1
.
2
7土 0
0.54土 0
.
0
2
*
*
*
3
2
.
8土 3
.7
キ**
5
.
0
*
9
6
.
6土 1
KC-500
4
1
2
9土 6
.
5
6
5
.
1
9土 0
1
3
0
.7土 3
2
.7
.
3
8
ネ
1
.32土 0
0
.
4
8土 0
.
1
2
*
3
1
.5土 6
.
0
*
*
*
1
0
2
.
0土 1
4
.
3
*
KC
-60
0
4
1
2
9土 8
5
.
3
7土 0
.
5
1
.
1
*
*キ
1
4
4
.
7土 5
2
.
1
1土 0
.
1
0
*
*
*
0
.
5
4土 0
.
0
5
*
*
*
46.0土 5
.
5
*
キ*
2
.
2
*
*
1
71
.0土 3
Experiment2 (
1
.7
1mmolesjkgbodyw
e
i
g
h
t
)
3
1
5
9士7
.
0
8
5.02土0
1
2
0
.
8土 1
1
.8
0
.
5
9土 0
.
2
2
.
1
0
0
.
3
3土 0
11
.0土 5
.
6
6
6
.
2土 2
8
.
6
KC-200
3
1
6
1土 2
.
0
9
*
*
*
6
.
2
1土 0
1
8
0
.
0土 3
7
.
9
0
.
8
6土 0
.
1
0
0
.
4
3土 0
.
1
2
3
4
.
2土 5
.
4
*
*
7
.
6
8
8
.
8土 1
KC-300
3
1
5
8土 1
2
6
.
3
6土0
.
6
4
*ネ
1
8
3
.
8土 3
6
.7*
.
0
2
*
1
.
1
9土 0
0
.
6
2土 0
.
0
8
*
41.6土 1
.
6
*ホ *
1
.
0
1
0
5
.
6土 1
Experiment 3 (
1
.
7
1mmolesjkgbodyw
e
i
g
h
t
)
None
3
1
8
0土 8
.
2
7
4.20土 0
89.4土 7
.
9
.
0
7
0
.
8
8土 0
0
.
3
9土 0
.
0
2
1
2
.
4土 0
.
9
6
2
.
8土 2
.
1
KC
-4
0
0
3
1
8
7土 3
.
7
4
*
5
.
6
9土 0
1
7
9
.
9土 1
4
.
1
*
*
.
2
3
*
*
2
.
0
4土 0
1
.1
5土 0
.
2
3
*
*
46.3土 6
.
8
*
*
8
7
.
2土1.2料 キ
KC-500
3
1
8
1土3
6
.
0
5土 0
.
4
6
*
*
2
5
4
.
9土 1
5
.
9
*特
2
.
4
0土 0
.
3
2
*
*
1
.2
9土 0
.
1
9
*
*
b
】
.
1
*
*ネ
43.6土 6
0
.
8
*
8
8
.
8土 1
KC
60
0
3
1
8
0土 1
5
.
4
9土 0
.
2
2
キ*
2
5
5
.
0土 2
8
.
9
*
*
*
2
.
2
0土 0
.
2
5
*キ*
0
.
8
9土 0
.
1
0
*
*
b
l
3
6
.
5土 3
.
3
本*
2
.
7
*
9
6
.
6土 1
Fourt
os
i
xw
e
e
k
o
l
dWistar-]CLmaler
a
t
swere g
i
v
e
nか v
a
r
i
o
u
sc
o
m
m
e
r
c
i
a
lp
o
l
y
c
h
l
o
r
i
n
a
t
e
db
i
p
h
e
n
y
lm
i
x
t
u
r
e
s(
K
a
n
e
c
h
l
o
r
s
)a
tah
i
g
h
e
r(
1
.7
1
mmolesjkg) o
ral
o
w
e
r(
0
.
1
7
1 mmolesjkg)d
o
s
e
s andk
i
l
l
e
df
i
v
ed
a
y
sl
a
t
e
r
.
Eachv
a
l
u
er
e
p
r
e
s
e
n
t
smean土 SD.
S
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yd
i
f
f
e
r
e
n
tfromo
l
i
v
eo
i
la
l
o
n
ei
n
j巴c
t
e
dc
o
n
t
r
o
lr
a
t
s
: *p<O.05;料 p<O.01; *
*
*p<O.0
01
.
a
) nmoleso
fformedmetabolitejmgm
i
c
r
o
s
o
m
a
lp
r
o
t
e
i
n
j
1
0m
i
n
.b
)S
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yd
i
f
f
e
r
e
n
t (p<0.05)・
NNE-haF句
・尚一アMWsg
None
・
河
内
、
・
叫
足
、
。
ミ
内
町
、
・
None
33
入山
Experiment1(
0
.
1
7
1mmolesjkgbodyw
e
i
g
h
t
)
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
6
3
Table2
. Comparisono
ft
h
eI
n
d
u
c
i
b
i
l
i
t
yo
fDrug O
x
i
d
a
t
i
o
n Enzymes b
e
t
w
e
e
naCommercial
P
o
l
y
c
h
l
o
r
i
n
a
t
e
dB
i
p
h
e
n
y
l Mixture(
K
a
n
e
c
h
l
o
r4
0
0
) andI
t
sF
r
a
c
t
i
o
n
sD
e
r
i
v
e
dfrom
AluminiumOxideColumnChromatography
KC-400
C
o
n
t
r
o
l
(
o
l
i
v
eo
i
l
)
No. o
fa
n
i
m
a
l
s
Bodyw
e
i
g
h
t(
B
.羽T
.，
g
)
L
i
v
e
rw
e
i
g
h
t(
g
/
1
0
0
gB
.W.)
Microsomalp
r
o
t
e
i
nc
o
n
t
e
n
t (mg/100gB
.W.)
CytochromeP-450c
o
n
t
e
n
t
(nmoles/mgm
i
c
r
o
s
o
m
a
lp
r
o
t
e
i
n
)
E
t
h
y
l
i
s
o
c
y
a
n
i
d
ed
i
f
f
e
r
e
n
c
es
p
e
c
t
r
u
m
(
4
5
5nm/430nmp
e
a
kh
e
i
g
h
tr
a
t
i
o
)
Drugo
x
i
d
a
t
i
o
na
c
t
i
v
i
t
y
(
n
m
o
l
e
so
fformedm
e
t
a
b
o
l
i
t
e
/
m
g
m
i
c
r
o
s
o
m
a
lp
r
o
t
e
i
n
/lOmin)
ρ
N
i
t
r
o
a
n
i
s
o
l
ed
e
m
e
t
h
y
l
a
s
e
Aminopyrine d
e
m
e
t
h
y
l
a
s巴
(252r
PCB
f
r
a
c
t
i
o
n
PCDF
f
r
a
c
t
i
o
n
3
3
3
3
1
4
3土 5
1
4
1土 9
1
4
3土 9
1
4
1土 3
.
2
8 7
.
0
9土 0
.
2
3
*
*
* 6
.
7
6土 0
.
4
0
*水 4
.
9
3土 0
.
1
3
4
.
6
6土 0
1
0
9
.
5土 9
.
3 2
1
9
.
0土 3
9
.
6
*
* 2
0
5
.
1土 2
6
.
4
料
1
1
4
.
8土 9
.
9
.
1
5 2
.
0
0土 O
.2
6
*
*
* 1
.9
6土 0
.
0
8
*
*
* 0
.
8
5土 0
.
0
2
*キ*
0
.
7
0土 0
.
1
2
*
*
水
0
.
9
2土 0
.
1
2
*
*
* 0
.
2
7土 0
.
0
1
0
.
8
7土 0
.
0
1
0
.
2
8土 0
1
3
.
4土1.0
81
.6
土6
.
5
4
4
.
5土 4
.
4
*
*
* 4
2
.
0土1.6
*
*
* 1
3
.
1土1.0
1
1
6
.
6土 1
2
.
8
* 1
1
9
.
7土 9
.
6
*
* 81
.8
土5
.
2
Twof
r
a
c
t
i
o
n
so
fK
a
n
e
c
h
l
o
r4
0
0 (KC4
0
0
)s
巴p
a
r
a
t
e
dby aluminium o
x
i
d
e column chromatography，ι
i
.
e
.
p
o
l
)
c
o
n
c
e
n
t
r
a
t
i
o
n∞
c
o
r
r
巴s
p
o
叩n
J
叫
必
d
i
i
n
gt
ω
o出
t
h
a
抗t0ft
h
eo
r
i
g
i
n
a
lKC
一
4
00
，andi
n
j
e
c
t
e
di
pt
om
a
l
er
a
t
s
.
Eachv
a
l
u
er
e
p
r
e
s
e
n
t
smean土 SD.
5
; 料 p<O.0
1
;*
*
*p<O.0
01
.
S
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yd
i
f
f
e
r
e
n
tfromc
o
n
t
r
o
l，*p<O.0
“
∞
誘導物質である PCDF を種々の濃度で含有している 8)
，
4，3
'，
4'-TCBの
両酵素活性とも有意の上昇を示した. 3
そこで， PCDF含量が最も高いと考えられる KC-400を
特異的誘導能が， PCDF等の不純物に起因している可
酸化アルミユウムカラムで分画し， PCB分画， PCDF分
能性も考えられるため，酸化アルミニウムカラムで精製
画の誘導能をもとの KC-400の誘導能と比較した (
T
a
b
l
e
した標品について同様な実験を行ったところ，全く同じ
2
)
. PCB分画は， KC-400と全く変らない強力な誘導作
結果が得られた (
E
x
p
e
r
i
m
e
n
t2
)
. 従って， 3
，4
，3
'，4
'
-
用を示した. また，
PCDF分菌の投与でチトクローム
TCB標品の M C型の誘導能は，この物質に周有の性質
P45
0含量にはわずかながら上昇が認められたが， EIC
と言える.他の 3種の異性体は， PB型の誘導物質と考
比には上昇が認められなかったことから，この誘導は，
えられる.
PCDFによると考えるよりも， PCB分画に回収されず
に残った高塩素含量の PCBによっていると考えた方が
妥当であろう.
3
) PCB異性体の誘導能の比較
4
) PCBによる肝薬物代謝醇素の誘導に及 I
ます前投
与フェノパルビタール (PB) の影響
Ryanらにより，市販 PCB混合物によって PB型
，
M C型の両酵素が誘導されていることが明らかにされ
5種のテトラグロロピフェニーノレ (TCB)，各 2種のベ
た9) また， P
o
l
a
n
dらにより， PCBの異性体のうち M C
ンタグロロピフェユ{ノレ (PCB)， ヘキサクロロピフェ
型の誘導を示すものは， 3
，4
，
3
'，
4
'
-TCB，3，4，5
，3
'，4
'，
ニ{ノレ (HCB) の肝薬物代謝酵素の誘導能を比較した
5'-HCB 等数種に限られており，ピフェニ~/レの 2 個の
(
T
a
b
l
e3
)
.チトクロ{ム P-450含量に有意の増加を示し
ベンゼン環の平面的配置に関連があることが指摘され
たのは， 3
，
4，3
'，4'-TCB，2
，
4，2
'，4'-TCB，2
，
3，
4，2
'，
た3) しかしながら， PCB混合物中に占めるこれらの異
3
'，
4'-HCB，2，4，
6，2
'，4
'，
6'-HCBの 4具性体であるが，
性体の存在割合は小さく
EIC比の上昇を示したのは， 3，
4，3
'，4'-TCBのみである.
4'-TCBの誘導能から判断した限りでは， PCB 混合物
1
0
)，
Table3で示した 3，
4，3
'，
また，酵素活性の変化をみると， 3
，
4，3
'，4'-TCB で
、
は
，
の有する強力な M C型の誘導作用を，これらの異性体の
NADM活性は約 2倍に上昇するのに対して， APDM
able3
存在のみによって説明することは困難である. T
活性は逆に減少の傾向を示した.他の 3種の異性体では
および P
o
l
a
n
dらへ G
o
l
d
s
t
e
i
n ら引の実験結果を考慮す
Ann. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，1
9
8
0
64
n
d
u
c
t
i
o
no
fRatH
e
p
a
t
i
cDrugO
x
i
d
a
t
i
o
nEnzymesProduced
Table3
. I
byV
a
r
i
o
u
sP
o
l
y
c
h
l
o
r
i
n
a
t
e
dB
i
p
h
e
n
y
lI
s
o
m
e
r
s
-CO
ntuqO 刈
官
A a A t A‘
時
品
。
“
AAA
tAOaqu
2
，
3
，
4，
2
'
，5'-PCB
，
4，5
，
2
う5'-PCB
2
3
，
4，
2
'，
3
'，
4'-HCB
2，
，
4，
6，
2
'，
4
'，
6'-HCB
2
Oz--uJU
Experiment1
None (
o
l
i
v
eo
i
l
)
5
，
2
'
，5
'
TCB
2，
4，
3
'
，
4
'
TCB
3，
4，
2
'，
4
'
TCB
2，
，
3
，
2
'
，3
'
TCB
2
3
，
4，
5TCB
2，
Experiment2
None (
o
l
i
v
eo
i
l
)
，
4，
3
'，
4
'
TCBb)
3
NoMm
Compound
Body
w
e
i
g
h
t
L
i
v
e
r
w
e
i
g
h
t
t
h
v
l
i
s
o・ Drugo
x
i
d
a
t
i
o
na
c
t
i
v
i
t
y叫
Microsomal Cytochrome E
"::~:~::';:;'~
P-4
5
0
，':{…~~
protem
d
i
f
f
e
r
e
n
c
e
叩叫叫
nm
刷吋
moc
山
01r
口
leo
esωomalllμ455/430nr
m
凶i
r
叶 a
n
i
s
o
l
e
p
y
r
i
n
e
(f
r
g
) (~に口口
(
B
.:
"
'
l(ぜ紗) 官
p
r
o
t
e
i
n /¥ r
a
t
i
o )d
e
m
e
t
h
y
l
a
s
ed
e
m
e
t
h
y
l
a
s
e
間
.
8
8土 0
.
2
0 81.7土 1
1
.7
1
3
3土 2 4
.
4
6土 0
.
3
0
* 9
7
.
4土 5
.
0
1
3
9土 7 5
.
2
9土 0
.
7
6
水 1
11.6土 2
0
.
5
1
3
7土 8 6
15
.
1
2土 0
.
3
6 9
3
.
9土 8
.
0
1
4
4土 1
.
7
3土 0
.
2
1 8
7
.
2土 8
.
7
1
4
2土 9 4
.
3
3土 0
.
2
3ネ 8
3
.
6土 5
.
2
1
3
4土 3 4
.
0
8
0
.
8
7土 0
.
0
9
0
.
8
8土 0
1
.5
6土 0
.
3
1
*
1
.
2
1土 0
.
1
2
*
.
0
6
0
.
9
0土 0
.
0
5
0
.
9
6土 0
0
.
3
2土 0
.
0
5
.
0
5
0
.
3
4土 0
.
2
6
*
0
.
9
1土 0
.
0
4
0
.
3
6土0
.
0
1
0
.
3
1土0
.
0
4
0
.
3
6土 0
1
5
.
9土 0
.
7 8
2
.
1士8
.
6
.
9 9
3
.
7土 1
0
.
3
1
6
.
8土0
.
3
*
* 7
7
.8土8
.
6
2
9
.
3土4
.
9
*
*1
1
4
.
9土 1
1
.0
*
*
2
8
.
3土3
.
5 1
0
4.4土 7
.
8
*
1
7
.
7土 1
.
1 6
9
.
3士4
.
2
*
2
5
.
2土 8
1
3
3土 4 5
.
0
5土 0
.
2
2 9
5
.
7土 1
0
.
6 0
.
8
1土 0
.
0
3 0
.
3
2土 0
.
1
1 1
5
.
1土1.2 8
1
.
9士9
.
7
1
2
2土 9 6
.
1
2土 0
.
5
4
*1
3
7
.
0土 1
0
.
0
*
* 1.46土 0
.
2
5
*
*
* 1.0
9土 0
.
3
8
*
*3
2
.
6土 7
.
4
*
* 7
1
.8土 1
4
.
2
.
2
9土 0
.
3
5 1
1
2
.
3土 2
7
.
4 0
.
8
1土 0
.
0
8 0
.
3
7土 0
.
0
3 1
6
.
6土 2
.
3 8
2
.
9土 4
.
6
1
3
1土 1 5
1
2
7
5
.
2
7
9
6
.
7
1
.
0
4
0
.
3
4
2
3
.
7
1
3
3
.
3
.
3
9土 0
.
1
8 1
1
2
.
4土 8
.
8 1
:
10土 0
.
0
9
*
* 0
.
2
8土 0
.
0
1 2
3
.
6土 0
.
6
*
*1
3
3
.
8士1
9
.
4
*
*
1
3
7土 7 5
*5
.
1
1土 0
.
2
7 1
01.7土 1
7
.
9 0
.
9
7土 0
.
0
5
*
* 0
.
2
8土 0
.
0
3 21.9土 4
.
9
* 1
2
3
.
8土 2
4
.
1
*
1
4
4土 5
Fourw
e
e
k
o
l
dWistar-]CLmaler
a
t
swereg
i
v
e
nv
a
r
i
o
u
stetra-(TCB)，penta-(PCB)o
rh
e
x
a
c
h
l
o
r
o
b
i
p
h
e
n
y
l
(HCB) i
s
o
m
e
r
sa
tad
o
s
eo
f50mg/kgo
fbodyw
e
i
g
h
tand ki
l
1e
d5d
a
y
sl
a
t
er
.
Eachv
a
l
u
er
e
p
r
e
s
e
n
t
smean土 SD.
S
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yd
i
f
f
e
r
e
n
tfromo
l
i
v
eo
i
la
l
o
n
eg
i
v
e
nc
o
n
t
r
o
lr
a
t
s
: *p<O.0
5
; 料 p<O.0
1
;*
*
*p<O.0
01.
a
)n
m
o
l
e
so
fformedm
e
t
a
b
o
l
i
t
e
/
m
go
fm
i
c
r
o
s
o
m
a
lp
r
o
t
e
i
n
/
1
0
m
i
n
.b
)3
，
4，
3
'，
4に TCBp
u
r
i
f
i
e
dbyaluminium
o
x
i
d
ecolumnchromatographywasg
i
v
e
nt
or
a
t
s
.
ると， 塩素数の比較的多い多数の PCB異性体は， PB
田
孝
素
， M C型酵素の誘導が， PCB の異なる異性体によ
型の誘導作用を示す.それゆえ，誘導された PB型酵素
って別々に引起きれていることを示し，従来知られてい
によって生じた PCBの代謝物が， M C型の誘導を引起
る M C裂の誘導物質(多環式炭化水素，
している可能性も考えられる. そこで， PCB投与の 3
香族化合物)がすべて平面構造をとっていることから，
目前から PBを飲水中に添加して与えたときの， 3
，
4，3
'，
M C型の誘導を行う PCB異性体 (
3，
4，
3
'，
4'-TCB，3，
4
'
-TCB(5mg/kg)，
KC-200および KC-300(500mg/kg)
4，
5
，
3
'，
4
'，
5'-HCB)も同様な平函構造を有していると推
の誘導能の変化を調べた.結果は， Table4に示すごと
定した.また，ピフェニール・プリヅジに隣接した位置に
く
， PB単独で与えたときの誘導能とほとんど差がなか
塩素基が置換している異性体は，平面構造をとりえない
った.
ため， M C型の誘導も起しえないと考えた.しかしなが
ら，このような平面構造をとりうる異性体は 5種〈ほか
考 察
PCB による薬物代謝酵素の誘導の問題は，
に数種のアイソザイムが存在することと，
この酵素
PCBに塩素
数と塩素基の位置の異なる多数の異性体が存在すること
によって二重に複雑化されている
ハロゲン化芳
A
l
v
a
r
e
sら11)は
，
に3
，
4，
3'-TCB，3
，
4，
4'-TCB，3，
4，
5
，
3
'，
4'-PCB) に限
られ，市販 PCB混合物中の存在量がきわめて低く 10
，
〉
誘導能が特別強力ではないこと(十分な酵素誘導には
50mg/kg以上の投与が必要〉を考えあわせると， PCB
A
r
o
c
l
o
r1
2
5
4による誘導が PB型と M C型の混合型であ
のM C型の誘導作用をこれだけで説明することは困難で
ると報告している. その後 Ryanら引は， Ouchte
r
1ony
あると思う.
二重拡散分析法を用いて，
A
r
o
c
l
o
r処理ラットで， PB
最近， Dannanら12)は
，
2
，
4
，5
，
3
'，
4
'，
5
'
ーヘキサプロモ
型酵素， M C型酵素がともに誘導されていることを免疫
o
b
e
r
t
s
o
nら聞は， 2
，
4，
5
，3
'，4
'
ベγ
ピフェニ{ノレで， R
学的に明らかにしている.一方， P
o
l
a
n
dら引は， PB型
タブロモピフ
z
ニーノレで， PB型
， M C型の両酵素が誘
9
8
0
1
2，1
東 京 衛 研年報 3
6
5
f
f
e
c
to
fP
r
e
v
i
o
u
s
l
yA
d
m
i
n
i
s
t
e
r
e
dP
h
e
n
o
b
a
r
b
i
t
a
l (PB) on t
h
eP
o
l
y
c
h
l
o
r
i
n
a
t
e
d
Table4
. E
B
i
p
h
e
n
y
l (PCB)-Producingl
n
d
u
c
t
i
o
no
fRatH
e
p
a
t
i
cDrugO
x
i
d
a
t
i
o
nEnzymes
Drug
。
。
。
+
+
+
のA n O の
，
“
+
Lqoηδ
None
None
3，
4，
3
'
，
4
'
TCB
3，
4，
3
'
，
4'-TCB
KC-300
KC-300
KC2
0
0
No.of
PB a
n
i
m
a
l
s
Body
w
e
i
g
h
t
(
B
.
;
.)
，
1
7
2土 4
1
6
0土 1
*
ω
1
6
5土 7
*
1
4
8土 4
1
7
9土 1
5
1
6
1土 2
1
6
6土 O叫
r
o
l
内)
Microsomal
Cytochrome Et
is
o
c
y
a
n
i
d
巴
h
yI
p
r
o
t
e
i
nc
o
n
t
e
n
t P-4
5
0c
o
n
t
e
n
t
d
i
f
f
e
r
e
n
c
e
s
p
e
c
t
r
u
m
m
i
c
r
o
s
o
m
a
l
剛
3
0
同:~~g)
protem
r
a
tlO
L
i
v
e
r
w
e
i
g
h
t
(ぜ鳴~)
96.2土 1
.
5
0
6
.
1
0
.
8
7土 0.04
5
.
1
3土 0
6
.
5
2土 0.40* 2
0
3
.1土 7
.
8
*
* 2
.
1
8土 0
.
2
8
*
*
*
4
.
8
9土 0
.
4
8
.
0
0
.
9
6土 0
.
0
7
8
0
.
0土 7
8
0
.
5土6.9***ω2.28土0
.
2
5
*
*
.1
9
* 1
6
.1
6土 O
1
4
0
.
7
1
.
1
4土 0
5
.
9
2
.
0
0
7
.
9
0土 0
.
3
6a
) 2
7
0
.
5土 2
4
.
0叫
2
.
2
1土 0
.
4
5
*
7
.
6
9土 0
.
1
7
叫
2
4
0
.
8土 3
6
.
3
2.17土 0
.
1
3
4
( 叶
0
.
2
7土 0
.
0
1
0
.
4
3土 0
.
0
2
*
*
b
0.32土0
.
0
2
)
.
0
8
0.44土0
.
O
O
b
)
0.34土 O
.
0
4
*
*叫
0
.
5
9土0
O
.5
9土 O
.0
9
Five w
e
e
k
o
l
dWistar-]CL mal巴 r
a
t
s were g
i
v
e
n as
i
n
g
l
ei
ρ
i
n
j
e
c
t
i
o
no
f 3，
4，
3
'
，
4
'
t
e
t
r
a
c
h
l
o
r
o
b
i
p
h
e
n
y
l
a
n
e
c
h
l
o
r (KC)-300 (500mg/kg) o
rKC-200 (500mg/kg) andki
l
1edf
i
v
ed
a
y
sl
a
t
e
r
.
(TCB，5mg/kg)，K
i
l
1
Ap
a
r
to
fa
n
i
m
a
l
swereg
i
v
e
nPB i
nd
r
i
n
k
i
n
gw
a
t
e
r (0.1%) fromt
h
r
e
ed
a
y
sp
r
i
o
rt
o PCB i
n
j
e
c
t
i
o
nt
t
h
eendo
fe
x
p
e
r
i
m
e
n
t，ap
e
r
i
o
do
f8d
a
y
s
.
Eachv
a
l
u
er
e
p
r
e
s
e
n
t
smean土 SD.
S
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yd
i
f
f
e
r
e
n
tfrome
a
c
hPB-nongivengroup， 水 p<0.05; 料 p<O.Ol; * 料 p<0.001.
巴 g
i
v
e
nr
a
t
s (p<0.05). b
)S
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yd
i
f
f
e
r
e
n
tfromPCB and
a
)S
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yd
i
f
f
e
r
e
n
tfromPB a
l
o
n
a
t
s (p<0.05).
PB・nongivenr
a
r
k
i
n
s
o
nら14)は
，
導されることを報告している.また， P
M C型の誘導作用を説明しうるほど強力で、はなかった.
2，
3，
4，5
，
3
'，
4
'，
5
'
ーへプタグロロピフェニ}ルが M C型の
他の 3種の異性体は PB型の誘導作用を示した. PBを
誘導を示すことを報告している.それゆえ， PCBでは，
0
0，TCBの誘導能を調
前投与したラヅトの KC-200，3
M C型の誘導がベンゼソ環の平間的配置に必ずしも関係
べたが， PB投与による誘導能の強化は認められなかっ
していないように思われる. Dannanら
1
2
)
， R
o
b
e
r
t
s
o
nら
た.
1
3
)のブロモピフェニールに関する報告は，単一の化合物
謝辞本研究の遂行にあたって御助言をいただいた環
が M C型と PB型の両酵素を誘導することを示した最
境保健部，秋山和幸主任，中川1
)
慎一主事に感謝の意を表
初の例であり，誘導機構との関連で興味がもたれる.
します.
nv
i
t
r
oの酵素系による 2，5，2
'，
最近 Forgueら15)は，i
5'-TCB の a
r
e
n
eo
x
i
d
e の生成を確認している.それ
文 献
1
) Haugen，D
.A.，vand
e
rHoev
巴n
，T.A.，and
ゆえ，環境汚染物質， PCBの発がん性を検討する上で，
Coon，M.].・ J
.B
i
o
l
.Chem.，
2
5
0，3
5
6
7，1
9
7
5
個々の異性体の生体内における代謝機構を酵素誘導との
2
) Ryan，D
.E
.，Thomas， P
.E
.，K
o
r
z
e
n
i
o
w
s
k
i， D
.，
関連において解明することが，ますます重要になってき
andLevin，W.:J
.B
i
o
l
.Chem.，254，1365，1979
3
) Poland，A.，and G
l
o
v
e
r，E.:M
o
l
.P
h
a
r
m
a
c
o
l
.，
ていると言える.
1
3，924，1
9
7
7
要 約
種々の塩素含量の市販 PCB混合物， Kanechlor(KC)
のラット肝薬物代謝酵素誘導作用を比較したところ，低
用量 (
0
.171mmoles/kg) の KC-600でフ
z
ノパルピタ
{ル (PB) 型に近い誘導が，高用量(1.71mmoles/kg)
の KC
-4
0
0，5
0
0，
6
0
0で PB型と同時に3
ーメチルコラ γス
レγ(MC) 型の強い誘導が示された.この M C型の誘
導は，ポリ塩化ジベンゾブラシ等の不純物の存在による
ものではなかった. 9種の PCB異性体の誘導能を比較
したところ， 3，4，3
'，4
'
ーテトラグロロピフェニ{ル
(TCB)は M C型の誘導を示したが，これ単独で KCの
.A.，McKinney，]
.D
.，L
u
c
i
e
r
，G
.
"
¥
杭
，
4
)G
o
l
d
s
t
e
i
n，]
Hickman，P
.，Bergman， H.，andMoore，]
.A.:
T
o
x
i
c
o
l
. Aρ
ρ.
lP
h
a
r
m
a
c
o
l
.，36，81，1976
5
) 川野澄江，中尾1
)
関子，平賀興吾:東京衛研年報，
27-2，1
7
9，1
9
7
6
7
5，
6
) 川野澄江，平賀輿吾東京衛研年報， 28-2，1
1
9
7
7
7
) 川野澄江，広瀬久美子，井口重孝，平賀興善東京
衛研年報， 3
0
2，1
1
6，1
9
7
9
8
) 中川順一，森田昌敏，秋山和幸，橋口育子，三村秀
6
6
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，1
9
8
0
一:東京衛研年報， 2
7
1，3
1
6，1
9
7
6
.E
.，Thomas， P
.E
.，and L
e
v
i
n， W.:
9
)Ryan，D
M
o
l
.P
h
a
r
m
a
c
o
l
.，1
3，5
2
1，1
9
7
7
8
5，4
5
0，1
9
7
8
.W.，P
a
r
k
i
n
s
o
n，A.，andS
a
f
e，A.:
1
3
)R
o
b
e
r
t
s
o
n，L
B
i
o
c
h
e
m
.B
i
o
ρh
y
s
.R
e
s
.Commun.，
9
2，1
7
5，1
9
8
0
1
0
) 中村彰夫，樫本隆:食衛誌， 1
8，1
，1
9
7
7
1
1
)A
l
v
a
r
e
s，A.P
.，B
i
c
k
e
r
s，D
.R
.
， andKappas，A.:
1
4
)P
a
r
k
i
n
s
o
n， A.，C
o
c
k
e
r
l
i
n
e， R
.
， and S
a
f
e，S
.
:
P
r
o
c
.N
a
t
.Acad.S
c
i
. USA，
7
0，1
3
2
1，1
9
7
3
1
2
) Dannan，G
.A
.，Moore，R
.W.，Besaw
，L
.C
.，and
.D
.:B
i
o
c
h
e
m
.B
i
.ρh
y
s
.R
e
s
. Commun.，
Aust，S
.T.，P
r
e
s
t
o
n，B
.D
.，H
a
r
g
r
a
v
e
s，W.A.，
1
5
) Forgue，S
。
B
i
o
c
h
e
m
.P
h
a
r
m
a
c
o
l
.，2
9，2
6
3，1
9
8
0
R
e
i
c
h，1
.L
.
， andA
l
l
e
n，J
.R.:Biochem. Bioρh
y
s
.
R
e
s
. Commun.，9
1，4
7
5，1
9
7
9
東京衛研年報
Ann. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，6
7
7
6，1
9
8
0
ジブチルヒドロキシトルエン (BHT) の 高 指 肪 食 ， 無 脂 肪 食 投 与 肝 に 対 す あ 影 響
福森信隆*，平賀輿吾*
Effects ofButylatedHydroxytoluene(BHT) on RatLiver Cells hy Feeding
iets Di
ffered FatContent
withD
NOBUTAKAFUKUMORI*andKOGOHIRAGA*
E
f
f
e
c
t
so
fb
u
t
y
l
a
t
e
dhydroxytoluene(BHT) a
sa
n
t
i
o
x
i
d
a
n
tonh
e
p
a
t
o
c
y
t
e
si
nmale Wistarr
a
t
sf
e
d
ei
n
v
e
s
t
i
g
a
t
e
de
l
e
c
t
r
o
nm
i
c
r
o
s
c
o
p
i
c
a
l
l
yandb
i
o
c
h
e
m
i
c
a
l
l
y
.
d
i
e
t
sw
i
t
hd
i
f
f
e
r
e
n
tf
a
tc
o
n
t
e
n
t
sf
o
raweekw巴r
， 30%and0%l
i
n
o
ls
a
l
a
do
i
lwereaddedt
os
t
a
n
d
a
r
d，h
i
g
h
f
a
tandf
a
t
f
r
e巴 d
i
e
t
s，r
e
s
p
e
c
t
i
v
e
l
y
.I
nt
h
e
S
i
x%
d
e
c
r
e
a
s
eo
fg
l
y
c
o
g
e
np
a
r
t
i
c
l
e
sandr
e
m
a
r
k
a
b
l
巴 p
r
o
l
i
f
e
r
a
t
i
o
no
fv
e
s
i
c
u
l
a
r
s
t
a
n
d
a
r
dd
i
e
tc
o
n
t
a
i
n
i
n
g1%BHT，
SERs
h
i
f
t
e
dfromt
h
eendo
fRERwereo
b
s
e
r
v
e
d
. Deformed m
i
t
o
c
h
o
n
d
r
i
aweres
u
r
r
o
u
n
d
e
dbyRER.
巴ta
l
o
n
eweres
e
e
na
snumerousl
i
p
i
dd
r
o
p
l
e
t
se
x
t
e
n
d
i
n
g from
Thec
h
a
n
g
e
sbyf
e
e
d
i
n
gw
i
t
hh
i
g
h
f
a
td
i
n
c
r
e
a
s
eo
fm
i
c
r
o
b
o
d
i
e
s，dev
巴l
o
p
e
dG
o
l
g
ia
p
p
a
r
a
t
u
sandm
u
l
t
i
p
l
e
m
i
d
l
o
b
u
l
a
rt
op
e
r
i
p
h
e
r
a
ll
o
b
u
l
a
rr
e
g
i
o
n，i
u
tn
o
tmanyo
f
g
l
y
c
o
g
e
np
a
r
t
i
c
l
e
s
. Thea
d
d
i
t
i
o
no
f1%BHTp
r
o
d
u
c
e
da
b
u
n
d
a
n
tg
l
y
c
o
g
e
np
a
r
t
i
c
l
e
s， b
a
l
u
e
si
nt
h
eserumwerei
n
h
i
b
i
t
e
db
i
o
c
h
e
m
i
c
a
l
l
y
. Th
巴 f
o
r
m
so
f
l
i
p
i
dd
r
o
p
l
e
t
s
. Moreover，TGandPLv
巴 c
h
a
n
g
e
sc
a
u
s
e
dbyf
a
t
f
r
e
巴 d
i
e
twere
p
r
o
l
i
f
e
r
a
t
e
dSERshowedf
i
l
a
m
e
n
t
o
u
sand t
u
b
u
l
o
u
ss
h
a
p
e
s
. Th
h
echanges
d
i
s
a
p
p
e
a
r
a
n
c
eo
fg
l
y
c
o
g
e
np
a
r
t
i
c
l
e
sands
w
e
l
l
i
n
go
fm
i
t
o
c
h
o
n
d
r
i
a
. Whenadded1%BHT，t
巴1
巴sa
ndTG
，PLv
a
l
u
e
si
nt
h
eserume
x
c
e
p
ts
l
i
g
h
tp
r
o
l
i
f
e
r
a
t
i
o
n
weren
o
tf
o
u
n
dc
o
n
c
e
r
n
i
n
go
t
h
e
ro
r
g
a
n
andd
e
p
l
e
t
i
o
no
fg
l
y
c
o
g
e
np
a
r
t
i
c
l
e
s
. Thec
h
a
n
g
e
si
ns
t
a
n
d
a
r
dandh
i
g
h
f
a
td
i
e
t
swhen
o
fv
e
s
i
c
u
l
a
rSER，
巴 r
e
m
a
r
k
a
b
l
e
. Thoser
e
s
u
l
t
ss
u
g
g
e
s
tt
h
a
td
i
e
t
s'wi
t
hd
i
f
f
e
r
e
n
tf
a
tc
o
n
t
e
n
t
s
comparedt
of
a
t
f
r
e
ed
i
e
twer
巴db
yBHT.
modifyt
h
ec
h
a
n
g
e
si
n
d
u
c
，r
a
th
e
p
a
t
o
c
y
t
e，u
l
t
r
a
s
t
r
u
c
t
u
r
a
lc
h
a
n
g
e
s，h
i
g
h
f
a
td
i
e
t，f
a
t
f
r
e
ed
i
e
t
Keywords:b
u
t
y
l
a
t
e
dh
y
d
r
o
x
y
t
o
l
u
e
n
e
緒
言
抗酸化剤として食品等に使用されるジブチノレヒドロキ
糸粒体の崩壊，核委縮などを認め細胞機能の低下を示唆
したが必ずしも肝細胞の広範囲に及ぶものではない白.
シトルェ γ(BHT)は主に肝臓で代謝され，用量の増加
今回， BHT と他因子との相互作用を検討する一環と
に伴い肝重量の増加1)が認められている.その際，電子顕
して， BHTが脂溶性物質であり，また種々の脂肪肝に
微鏡的観察で滑商小胞体 (SER)の増殖2)がみられ肝細胞
抑制的に作用する可能性が強いことから脂肪含量を異に
における代謝の反映と解されているが，同時に糸粒体の
した摂餌条件下で肝細胞に対する BHTの作用を比較検
呉型，層状配列を乱した粗面小胞体 (RER) の減少，
討した.
g
l
y
c
o
g
e
n 頼粒の減少など他の細胞小器官に与える影響
も少なくない.これらの細胞内小器官の変動に着目し著
実験方法
動物は思1
1
化した 7週令の JCL:W
istar系雄性 r
a
tを
者らはこれまでに BHTの投与時間，投与量の相違によ
用い，室温 2
5土 10，湿度 50土 5 %の環境下で飼育し，
る肝細胞内微細構造の変化および肝臓の代謝に影響を与
Table1に示す割合で混合した粉末飼料(オリエンタル酵
える他の化学物質との併用による相互作用について検討
母工業〉を与え，それぞれ標準食，高脂肪食，無脂肪食
してきたが，いずれも BHTによる肝細胞の変化は重度
とした.実験前，
な細胞障害を惹起せしめない 3-6) さらに Botham らに
%の割合で BHT (和光純薬〕を混和させた飼料を与え
よると SERの増殖は BHT の代謝にもとづく生理反
6群に分けて水とともに自由に摂取させた.投与期聞は
応であり BHTの投与中止により増殖した SERが速や
1週間とし次の諸検査を実施した.
1晩絶食後 BHT投与群では各群に 1
かに減少し正常に復すると報告幻しているが，一方著者
体重絶食後および屠殺時に測定した.
らは顕著な SERの増殖がみられた細胞で RERの消失，
肝重量 断頭屠殺後開腹し，速やかに肝臓を摘出し重
*東京都立衛生研究所毒性部
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
2
4-1
，Hyakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
k
u，Tokyo，1
6
0J
a
p
a
n
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
. P.H，3
1
2，1
9
8
0
68
.C
o
m
p
o
s
i
t
i
o
no
fD
i
e
t
s
Table1
子顕微鏡にて検鋭した.
実験結果
a
t
f
r
e
e
S
t
a
n
d
a
r
d H
i
g
h
f
a
t F
d
i
e
t
(
%
)
d
i
e
t
d
i
e
t
O
内
05408652
241
0
5 4 0止8 6 5 2
qO のL 1 i 守
6。
5L8 0噌土8 6 5 2
L
i
n
o
ls
a
l
a
do
i
l
Milkc
a
s
e
i
n
Corns
t
a
r
c
h
a
S
t
a
r
c
h
C
e
l
l
u
l
o
s
epowder
M
i
n
e
r
a
l
s
G
r
a
n
u
l
es
u
g
a
r
V
i
t
a
m
i
n
s
体重各群の初期および投与後の体重，成長率を
Table2に示した.標準食に比べ高脂肪食で増加を示し
たが無脂肪食では減少傾向がみられた. BHTを添加し
た飼料では標準食，高脂肪食の体重増加が抑制されてい
るのに対し無脂肪食では抑制がみられずほぼ維持状態を
保った. BHT添加の影響は無脂肪食に比べ高脂肪食で
著しかった.なお高脂肪食， BHT添加高脂肪食では他
の群に比べ若干の摂餌量の減少がみられた.
肝重量
絶対値は無脂肪食で標準食に比べ減少がみら
れ
， BHT添加により高脂肪食で増加を抑制する傾向が
認められた.一方，相対的肝重量値で比較すると無脂肪
量を測定した.
血清生化学的検査
食で有意な減少を認めたが高脂肪食の減少は著しくなか
断頭放血時の血液から血清を分離
ヨ
i
u
r
e
t法，グルコース量 (
G
l
u
)
:
して，総蛋白量 (TP):1
った
グルコースオキシターゼ法，
)
.
が，高脂肪食ではその影響が少なかったくTable2
トラ γ ス ア ミ ナ { ゼ 活 性
(GOTおよび GPT):R
e
i
t
m
a
n
F
r
a
n
k
e
l 変法，アルカ
BHT添加で標準食，無脂肪食の増加がみられた
血清生化学的検査 Table3に各群の検査値を示した.
リフォスファターゼ活性 (ALP):K
ind-King変法，尿
TPは脂肪含量の差異による変化がほとんどみられず，
r
e
a
s
e
I
n
d
o
p
h
e
n
o
l法，総コレステロー
素窒素 (UN):U
BHTの添加により高脂肪食で低下を認めた. Gluは全
ieberman-Burchard法，中性脂肪 (TG):
ル量 (Cho):L
般的に BHT添加群で低下がみられ，標準食，高脂肪食
酵素法，
Y:/脂質 (PL):オキシターゼ法を目立 M-400
で BHT無添加群の値を抑制した
GOTは BHT添
自動分析装置にて測定した.
加の影響がほとんどみられず，高脂肪食で他の群より若
1群 3匹から肝
方形薬左下端部を摘出し，細切後冷 3 %パラホノレムアノレ
干の値の上昇が認められた
デヒド (
0
.1Mリン酸緩衝液， pH7.4)にて前回定を行い，
た ALP は標準食と比べ高脂肪食で著しい増加が，無
電子顕微鏡用試料作製
放血屠殺後，
GPT は無脂肪食での低下
が認められるほか BHT添加により全体的に低下を示し
0
.1Mリン酸緩衝
緩衝液中で洗浄後 1 %オスミウム酸 (
脂肪食で低下が認められ， BHT添加で高脂肪食による
液
， pH7.4)で後固定を1.5
時間行った.定法に従いエタ
上昇を抑制した. Cho
，TG
，PLは高脂肪食で上昇を認
ノーノレで脱水し， Epon 樹脂に包埋した.包埋した電顕
，PLの抑制がみられた.
め BHT の添加により TG
試料の厚さ約 1μm の切片をトルイジ γ青で染色し光顕
電子顕微鏡的所見 標準食では通常の固型飼料〈日本
的に観察後，肝小葉中間帯の超薄切片を作製して酢酸ウ
l
y
c
o
g
e
n穎粒が
クレア， CE-2)摂餌動物に比べ若干の g
ラン・グエン酸鉛二重染色を施し，目立 HU-12A型電
少なく存在するものの他の o
r
g
a
n
e
l
l
e
sはほぼ正常像を示
f
f
e
c
t
so
fBHTonBodyWeightandL
i
v
e
rWeighti
nR
a
t
sFedw
i
t
hD
i
e
t
sD
i
f
f
e
r
e
dFatC
o
n
t
e
n
t
Table2
. E
D
i
e
t
s
No.of
g
r
o
u
p
s
r
a
t
s
に
UFhuRUMhonoru
S
t
a
n
d
a
r
d
H
i
g
h
f
a
t
F
a
t
f
r
e巴
1% BHTs
t
a
n
d
a
r
d
1% BHTh
i
g
h
f
a
t
1% BHT f
a
t
f
r
e
e
L
iv
e
rw
e
i
g
h
t
Bodyw
e
i
g
h
t
I
n
i
t
i
a
l
(
g
)
.
2
0
叫
2
4
7
.
8土 9
0
.
7
7
2
4
2
.
0土 1
.
3
9
2
4
8
.
2土 9
0
.
9
9
2
3
4
.
6土 1
2
.
3
5
2
3
4
.
1土 1
.
7
9
2
4
0
.
4土 7
F
i
n
a
l
(
g
)
Growthr
a
t
e
く%)
A
b
s
o
l
u
t
e
(
g
)
R
e
l
a
t
i
v
e
(
g
/
1
0
Q
g
)
2
7
1
.
8土 1
3
.
2
5
3
0
6
.
0土 9
.
6
7
2
5
6
.
4土 1
2
.
3
2
2
0
2
.
0土 1
2
.
5
9
2
0
5
.
8土 1
1
.
9
5
2
4
6
.
4土 6
.
8
7
.
2
2
1
0
9
.
6土 2
4
*
1
2
6
.
5土1.6
.
8
2
*
1
0
3
.
3土2
.
2
8
*
*
8
6
.1土 5
.
4
3
料
8
7
.
9土 2
1
0
2
.
5土 2
.
6
2
*
11
.8
9土1.1
1
.
6
8
1
2
.
7
3土 0
1
9
.
5
1土1.1
2
1
0
.
3
0土1.1
0
9
.
2
2土1.1
.
4
5
9
.
9
2土 0
.
2
3
4
.
3
7土 0
.
1
5
4
.1
6土 0
.
2
6
*
3
.
7
0土 0
.
3
6
*
*
5
.
0
9土 0
.
3
4
*
4
.
4
7土 0
.1
3
*主
4
.
0
3土 O
a
)V
a
l
u
e
sa
r
et
h
emeans土 SDf
o
rf
i
v
eo
rs
i
xa
n
i
m
a
l
sandt
h
o
s
emarkedw
i
t
ha
s
t
e
r
i
s
k
sd
i
f
f
e
rs
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
y
(
S
t
u
d
e
n
t
'
stt
e
s
t
)fromt
h
es
t
a
n
d
a
r
dd
i
e
t
si
nnon-BHT t
r
e
a
t
m
e
n
to
rBHT t
r
e
a
t
m
e
n
tg
r
o
u
p
s(
*P<O.0
5
)
andfromnon
・
BHTt
r
e
a
t
m
e
n
ti
ne
a
c
hd
i
e
t
sg
r
o
u
p
sd
i
f
f
e
r
e
df
a
tc
o
n
t
e
n
t(
*
*P<0.05).
f
f
e
c
t
so
fBHTonSerumB
i
o
c
h
e
m
i
c
a
lChangesi
nR
a
t
sFedw
i
t
hD
i
e
t
sD
i
f
f
e
r
e
dFatC
o
n
t
e
n
t
Table3
. E
7
0
.
4土 1
0
.
3
3 1
5
9
.
6土 4
0
.
6
5 1
4
3
.
6土 2
6
.
8
8
.
7
9
* 2
2
7
.
4土 1
6
.
8
7
キ 1
8
0
.
4土 1
8
.
6
2
*
9
2
.
8土 7
8
8
.
2土 1
0
.
8
9
* 1
7
9
.
2土 2
6
.
8
0 1
61
.2土 1
4
.
7
3
.
3
7
*
*1
5
2
.
4土 2
5
.
8
2 14
1
.6土 1
8
.
0
2
8
9
.
4土 9
1
.
2
7 1
51
.1土 21
.7
7
*
*1
4
5
.6土 1
2
.
1
6
*
*
9
3
.
3土 1
9
0
.
4土 9
.
1
8 1
9
6
.
4土 3
0
.
8
5
* 1
4
5
.
2土 1
2
.
9
3
2
1
.
8土 4
.
6
0
.
8
0
2
3
.
4士6
.
1
2
1
6
.
4土 5
.
2
2
2
4
.
4土 6
.
1
1
1
9
.
8土 5
.
0
9
*
1
5
.
6土 4
3
6
.
2土 5
.
2
6 4
9
.
8土 2
3
.
7
2
.
3
8 91
.2土 2
6
.
1
1
*
3
4
.
2土 4
.
3
4
* 1
6
.
4土 2
.
4
0
*
2
6
.
0土 2
.
0
8
*
*3
7
.
0土 1
3
.
2
2
2
5
.
0土 3
.
1
1 59.0 土 16.85~*
2
9
.
1土 4
2
2
.
6土2
.
1
9
*
*1
6
.
4土 2
.
8
8
*
mgjdl
mgjdl
mgjdl
m
g
j
d
l
K・Ujml
K-Ujml
mgjdl
1
0
2
.
4土 3
.
2
0
1
0
9
.
0士2
.
6
4
*
1
0
4
.
4土 3
.
4
5
1
0
0
.
0土 3
.
6
0
1
0
5
.
8土 3
.
0
6
*
1
0
3
.
6土 2
.
7
9
1
2
3
.
8土 1
3
.
6
8
1
3
8
.
6士 9
.
5
8
1
0
7
.
2土 4
.
7
6
9
7
.
0土 4
.
3
0
柑
1
01
.1土 5
.
2
6
特
9
8
.
8土 8
.
5
5
6
.
1土 0
.
5
0
叫
.
2
4
6
.
4土 0
.
2
8
6
.
2土 0
.
3
4
6
.0土 0
林
5
.8土 0.14
.
0
8
*
6
.5土 0
S
t
a
n
d
a
r
d
5
H
i
g
h
f
a
t
5
F
a
t
f
r
e
e
5
1%BHTs
t
a
n
d
a
r
d5
1%BHT h
i
g
h
f
a
t6
1%BHT f
a
t
f
r
e
e 5
PL
Cho
TG
UN
ALP
A-Uj
d
l
K・
GPT
GOT
Glu
No.of TP
j
d
l
r
a
t
s g
D
i
e
t
s
g
r
o
u
p
s
湖
~f
遺
書
a
) V
a
l
u
e
sa
r
et
h
emeans土 SDf
o
rf
i
v
eo
rs
i
xa
n
i
m
a
l
sandt
h
o
s
e marked w
i
t
ha
s
t
e
r
i
s
k
sd
i
f
f
e
rs
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
y(
S
t
u
d
e
n
t
'
stt
e
s
t
) from t
h
es
t
a
n
d
a
r
d
d
i
e
t
si
nn
o
r
ト BHTt
r
e
a
t
m
e
n
to
rBHTt
r
e
a
t
m
e
n
tg
r
o
u
p
s(
*P<0.05) and from non-BHT t
r
e
a
t
m
e
n
ti
ne
a
c
hd
i
e
t
sg
r
o
u
p
sd
i
f
f
e
r
e
df
a
tc
o
n
t
e
n
t
(
*
*P<0.05).
主
国
令指
<D
HAVGU山凶ゃん針。営汁・
μ斗HVδ出町会気持掃海同社山wed-H明開
犠沙作一割隣同九υ帥持品開時切戸、汁・
時 wp昨日
占 勺 υ¥
TLT
斗﹁汁説"回一回、﹃九)前知HERL円沼田郡田討議δ蝋蹴札口MH岳連﹂MW悼行鶏
可て謬時一山内中リ持 H守一汁九}JG国町田討議且﹀趣旨砂川賞醤3 R臨時凶
ω
寸亙噂 U70、=
副
総
刷A，劉混同社砧WFH弔今総n
時国町戸、汁⋮旅田刷B蹄
前初回口﹃nh守町内同出品可制同町びNEM44げ・対抽出
溺混同社協仰胃HWRλ商問，d恥md汁・むなお爾吊﹀国町田討議完羽海
，
一
回
、H
罫玲・回国寸前州国ロ劃同時同社協 W作酢剛bDd趣旨札口叫が市 U営 w回
弘
之 H越さ品川越'EVMmuOH
郊 uおやすd汁・冨百oσ0
，d国時営NV
行﹂仕入、討すdtvh-同方首骨骨PHH削拙肝寝食月何代ね70斗HH凶HW列
堕 Mm
H
δ 亙尚 AV活。すぺ討す 4げ・。。-包山知同作湿議官 H
叫明7NVAVδedpHUπ議制開設局)︿FUF溜誇斉剖混同社地W潟強
-位協附陣
rd恥印ア時汁﹂江町帯用B
H山南胃 H山師同附戸、汁のo
出 E b函
M襟
A品町44umHW一m作沼田叩月円四締
調労務抽mM日付制限胃品﹁営議冷蔵 -
0mgH叩edや︿髄Evvγ汁・n70δ 主 hm﹁、首Hω何一mFH
仲畑﹁洲謀説蚤腿戸、汁帯感DdN円議瀦品町出羽斗ω別問砂川間︼可口・
，討すdtvh・luF主瀬戸、パ邑ω58ご河
様沙門詩薄戸、パ bL
可制 ω何一月九﹀爾回附討議吉弘タヴ営汁国同国国寸前知︺日口調
川町如 J
42丘口]巾v河
襲旦)一議吉宗剛関町UO含NHU74汁・。q口omg埼E
時W作一割前回附﹃nm- om叩口調副首UOMW︿瀞判明戸、市hv白川曹人}ノ国部奇
ヨ
封 δMVAVδuUHUTO持04vh・宮山寸務室副国羽田叶山wtqT完副山田町零
︿︽凶
溺嬰胃nzq-04 0 5 5 fags-ロ(︿巴)円、)吊)耳切臨時
ニ
-岡山山術開局)淑榔斉知清eO糊片調吊)輪前吟森時速回持戸、川河護局)
のo
uuu調話国国道局)ゆ薄昇、月円︿・印刷HNAV同‘穂市対品町切﹁汁・
罰毒菌骨骨柚岬九﹀嚇蹴可申叫が町営汁・如何一月完l盛山議wp品町UYMm
馴到底VO含汁・同か常事骨骨H
き今回陪旦)ヨ門口円。σo身旦)越国口融 ν
押
山
守
広岡、球内出HUM44vhwa爾雨対罵食品町除円い汁渉脊事eq昇桝締
巾旦)判明Hm戸、付rJ﹂校時冷
品町議dl出向DdNn速い汚d恥vd汁砂川.口 OH
555ro仏可申H怜森DdR越国口蔵一社説UYV営内局)ゃんFH85
VUO始。斗 J 柑測機地WRRムパ樹﹁﹁JH略国口付切戸、市h-崎市h・
刊
汁時悦斉齢、申品問胸﹁汁可申凶﹂校時間
g
h亦誇骨骨吊UU庁山河悦胃潰吏﹁
執討戸、議HVE--汁今回町田討議。迦国司nww礼可戸、汁・今回郎両社議吊﹀
羽田四国廿同wedaEHm守口 O問g溜誇MOM音寺苫吊)町内冊同国d議行
NV混同廿醤斉鶏様胤WRRλ蒜作ト町到底vvγNEMd汁・
口同oro身δ爾同月門法言旧日目別尚昆VV含汁・巴曲目巾慣行UTO営
δ汁・。。}包縦陣GW即耐附FH﹂仔時間Ddh同時哨dh叩δ迦函胃HBナ
拙陪
4
5
Mタヴ営栄首森寝泊)議wp・-浅口同町田SO 吊﹀湿瀦時開明
調v湾関遺品町胸了同開河内好守一出時含tvhw京博引きHW︿hm
V営汁・糊肺補斗NV如何︼ZHh亦常寺島﹀迦函胃い粉川阿古一切同情Nn
正法制崩EVV営川河議接tq完ω巴凶将棋命 河
叩薄日日目、︿酬明JVU
J川
斉ユゲ085叩G掛師同協・口ロユ山口問付帯d日HHN問問。笈冷蔵
汁ω巴凶M白川帥同淘斗・NV首雷AVタ吊u斗﹁首H・ω巴凶δ議割問盛山ed-
総刷悦斗CLm吊﹀巡回知FH川mRd布団付ぽ深川町胸戸、U庁山明︿野瀬戸、
常吊)潟、伊NvrJ完遂wp胃い諜4パω巴凶吊)掴凪糊討議湯治目蜘副
﹁汁・回目以寸前知国=蒲様玲斉問-可nomg濁 rq向日可口 O問 自 潤
M
I
M
H
∞
。
・由
σ
3
7
0
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，3
1
2，1
9
8
0
無脂肪食では細胞質内の g
l
y
c
o
g
e
n穎粒が減少し，極
れなかった
RERの消失にもかかわらず血清 TP値の
めて散在性に認めるに過ぎない.糸粒体は膨化したもの
r
e
eの
変動がみられなかったことは細胞質内に離脱した f
が多く，その基質は明調化し c
r
i
s
t
a
e の発達が悪く糸粒
r
i
b
o
s
o
m
eが存在するためと思われ， BHT の投与中止
，RER，G
o
l
g
i装置で
体膜の崩壊，消失を認めた. SER
により速やかに SERの減少， RERの再構築が行われる
は顕著な変化がみられなかった. BHT添加無脂肪食の
ものと考える.
l
y
c
o
g
e
n穎粒が減少してほとんど認められず，
変化は g
高脂肪・低蛋白食で脂肪肝の出現することが知られて
その間に SERの増殖がみられた. SERの増殖の程度は
いるが，その原因として脂質の負荷と低蛋自による l
i
p
o
-
BHT添加標準食に比べ軽度であり， SERの拡張とみ
p
r
o
t
e
i
n形成の低下によると述べている的.高脂肪食のみ
られる小空胞の形成を認める細胞もみられた. RERは
の条件で・行った本実験においても中等度ではあるが肝細
糸粒体の取り囲み，層状配列の乱れが軽度に認められる
胞内に脂肪滴の増加がみられ，これは主に脂質の負荷に
が消失は少なく比較的正常像を呈した.糸粒体は長型，
よると考えられる.森らは脂肪肝の発生機序が肝細胞内
r
i
s
t
a
eの変化は少なかっ
くびれ像など異型を認めるが c
で合成された中性脂肪を l
i
p
o
p
r
o
t
e
i
n として排iil!:するに
icrobodyは若干増加傾向を示したが， G
o
l
g
i
た.また m
要する蛋白の量的減少に起因していると述べ，すなわち
装置の発達は認められなかった. D
i
s
s
e腔の脂肪滴は無
食餌中の脂質の負荷などによる遊離脂肪酸の流入過剰に
脂肪食， BHT添加無脂肪食ともほとんどみられなかっ
よって蛋白が不足する時，あるいは RERでの蛋白合成
た.
の障害による絶対的な不足を論じている 10) 高脂肪食で
RERは一部の消失を認めたが正常に近い層状構築を保
考 察
脂溶性の BHT は異なる脂肪含量の摂餌により溶解
持しているため蛋白合成系への障害は少ないと思われ
性，消化管での吸収性，生体内での反応性に差異が生じ
る.このことは m
icrobodyの増加， VLDLを貯留し良
ると想定されるため肝細胞内の形態学的変化を主に把握
好に発達した G
o
l
g
i装置からも l
i
p
o
p
r
o
t
e
i
nの合成が増
する目的で実験を行った.脂質は腸管内で戸ーモノグリセ
大していると思われ，細胞機能の允進がうかがわれる.ま
リドと遊離脂肪酸に分解され胆汁酸の作用でミセルを形
た軽度な糸平立体の膨化は機能充進の表現といわれている
成して小腸粘膜細胞内に取り込まれるが，その時ー飼料中
が，基質に蓄積のみられた晴調物質の意義は明らかでな
の脂質分が多いと活発な脂質路の移動により，
BHT
い.脂質代謝に関与する m
icrobodyの増加は先の報告 11
)
の吸収が増加すると考えられる.また肝臓は脂溶性物質
でもみられ， 比較的小型の形状は N
o
v
i
k
o
f
f らのいう
を代謝し極性化を行って体内に摂取された異物質の解毒
m
i
c
r
o
p巴
r
o
x
i
s
o
m
e
s と考えられる 12) 一般的には中心部
機構を持つとともに多くの栄養素の重要な代謝の場であ
o
r
eが存在するが c
o
r
eの持たない microbodyの増
に c
る.そのため飼料中の脂肪含量の相違により肝臓への影
a
t
a
l
a
s
e， u
r
a
t
eo
x
i
d
a
s
.
e などの酵素的変化に何ん
加は c
響が指摘され，低蛋白食7)，高脂肪食8)等の食餌性因子が
らかの関係があると思われる 11)が明らかでない. Nagao
重要な要因となる.
らは絶食後高脂肪食を与えた r
a
tで徴細構造の変化を観
標準食に BHTを添加した微細構造の変化はこれまで
2時間目から脂肪滴の増加がみられ，同時
察し，投与後 1
の報告と大差がみられず肝重量の増加も認められた 3-6)
o
l
g
i装置， SERの発達を報告しておりへ脂肪滴
に G
Glycogen頼粒は減少しているものの若干の残存がみら
の蓄積は比較的早い時期に起こるものと思われる.血清
れ，その部で v
e
s
i
c
l
e状の SERが増強していた.増殖
，TG
，PL が有
生化学的検査値は標準食に比べて Cho
した SERの形態は一般に投与量，投与期間の増加に伴
意に増加し血液中の脂肪成分と肝細胞内の変化とに相関
e
s
i
c
l
e状から t
u
b
u
l
e状に漸次移行することから，
って v
が認められる.このことは血液中の遊離脂肪酸の濃度と
また g
l
y
c
o
g
e
n穎粒の残存が認、められることからも BHT
肝臓で排池される VLDLの増加が平衡的で l
i
p
o
p
r
o
t
e
i
n
による障害が強く出現しているとは忠われず，これらの
が放出しきれなくなると脂肪滴が蓄積すると考えられ，
変化は代謝過程における解毒機構の充進像と考えられ
高脂肪食の D
i
s
s
e腔に散見された小脂肪消との関与が示
る.血清 Glu値は BHT添加で有意に減少し肝細胞内
唆される.
の g
l
y
c
o
g
e
n穎粒の挙動と比較的一致することから，
BHT添加高脂肪食での著明な変化は，密在した g
l
y
-
SERの増殖の程度を把握するための指標になると思わ
c
o
g
e
n頼粒の聞に散在する伸長した t
u
b
u
J
e状あるいは
れる. RER末端部での移行の充進は SERを増殖させ，
f
i
l
a
m
e
n
t状 SER の増殖が特徴的に観察された. SER
また RERの正常な層状構築を乱し， r
i
b
o
s
o
m
eの脱落，
の増殖は標準食に比べ量的に軽度であり， v
e
s
i
c
l
e状の
RERの消失を惹起せしめるが，血清 TPの減少はみら
SERは少なく，伸長を呈するため r
i
b
o
s
o
m巴を脱落した
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
7
1
RERあるいは G
o
l
g
i装置と類似しているが，層状構築
BHT添加無脂肪食で g
l
y
c
o
g
e
n穎粒は無脂肪食と同
を認めず，離脱した r
i
b
o
s
o
m
eの c
u
r
l
i
n
gがみられない
様に消失し，また SERの増殖は標準食に比べ軽度で一
ことなと。から他の o
r
g
a
n
e
l
l
e
s と識別される. このよう
部拡張を呈した.標準食で BHTの作用は g
l
y
c
o
g
e
n穎
に伸長した SERは BHT の高濃度町長期投与6)の際
粒の消失を伴いつつ SERの増殖が進行するが， BHT
に観察されたが多くは t
u
b
u
l
e状であり相互に n
e
t
w
o
r
k
s
添加無脂肪食での g
l
y
c
o
g
e
n穎粒の消失は SERの増殖
を形成しているため今回みられた伸長とは若干形状が異
程度が軽度であること，すでに無脂肪食で g
l
y
c
o
g
e
n穎
なっている.これらの変化は通常 BHTにより g
l
y
c
o
g
e
n
粒が消失していることから BHTの作用とは考え難い.
穎粒が消失しその分野に SERが著しく増殖するのに対
BHT添加で SERの増殖が軽度である理由として，通
l
y
c
o
g
e
n穎粒が多く密
して， BHT添加高脂肪食では g
l
y
c
o
g
e
n穎粒が SERの膜新生のためのエネノレギー
常 g
在している点が相違しており， BHT の薬物代謝と高脂
源として利用されるが無脂肪食では g
l
y
c
o
g
e
n量が少な
肪食による脂質代謝との相互影響によると推察されるが
いため SERの膜新生が充分に出来なかったこと，さら
明らかでない.一方，高脂肪食で散見された胞体内脂肪
に脂溶性の性状を持つ BHTが無脂肪食では腸管の吸収
滴の増加はみられず標準食と同程度であり，血清 TG
，
が悪かったため BHTの体内摂取量が少なかったことな
PLの高脂肪食での上昇値を BHTが抑制していること
どが考察される.血清 ALP値が無脂肪食， BHT添加
と関連がみられる.しかし， D
i
s
s
e腔の小脂肪滴は残存
無脂肪食ともに低下しているのは，食餌中の脂質量の違
したままであり，この小脂肪滴は胞体内から排湘;された
ものではなく，食餌性に起因する脂質と考えられる.
いが腸管由来の ALPに関与していると思われ興味深い.
RER，糸粒体， G
o
l
g
i装置の変化はともに著しくないこ
BHT はエタノール町やオロチ γ酸 18) 脂肪肝を阻止する
とから細胞の機能尤進はみられないと思われる.また栢
ことが知られているがその機序は未だ明解で、ない.長型
対的肝重量の増加は脂肪を含む他の群に比べ低値を示し
化，膨化した糸粒体を取り囲む RERおよび発達した
た.
G
o
l
g
i装置は機能充進像とみられ，細胞損傷に導くとは
体重に関して高脂肪食で摂餌量の減少がみられたにも
思われない.相対的肝重量は BHTにより若干の増加を
かかわらず標準食，無脂肪食に比ベ増加が大きかったこ
みるが有意でなく，標準食に比べ減少している.このこ
とは脂質の栄養価の高いことを証明している.また BHT
とは必ずしも高脂肪食が BHTの作用を助長するとは限
添加により高脂肪食，標準食で体重増加の抑制がみられ，
らないことを意味しているが，肝重量の増加は SERの
無脂肪食で BHT添加の有無による影響が少なかったこ
増殖と密接に関係するため BHT添加標準食に比べ SER
とは食餌中の脂肪含量の相違が BHTの作用に影響を与
の増殖が軽度であることを反映している.血清 G
luは
えていると示唆される.
BHT添加で高脂肪食に比べ減少しているが，電顕的観
木実験は脂溶性の抗酸化弗UBHTが飼料中の脂肪含量
I
y
c
o
g
e
n穎粒が残存していることとの関
察で細胞内に g
の差異により， BHT の吸収あるいは生体内作用を考慮
係は明らかでない.血清 GOT，ALPは高脂肪食， BHT
に入れ肝細胞での微細構造の変化を比較検索した.摂餌
添加高脂肪食とも他の群より高値を示すが GPTの有意
期聞が 1週間と比較的短期間であるが全ての群で形態学
な上昇は認められないため肝障害によるのではなく，
的，臨床生化学的観点から重度な肝障害の惹起はみられ
ALP の上昇は r
a
tで小腸由来の ALPが多いことから
なかった.食餌の脂肪組成の相違は， BHTによる SER
小腸依存性の ALPと思われ食餌中の脂肪量の変化によ
の増殖様式， g
l
y
c
o
g
e
n穎粒の変動， RERの消失，糸粒
り吸収機構に影響を与えたためと考えられる.
体の変型などに異なる変化を与え，形態的には高脂肪食
無脂肪食の糸粒体は膨化，変型を呈したが，これはエ
で細胞機能の充進，無脂肪食で機能低下の像を呈し，ま
ネルギ{産生を高めるための適応像と思われる.しかし
た高脂肪食に出現した脂肪滴の増加を BHT が抑制し
エネルギー供給源である g
l
y
c
o
g
e
n穎粒の減少のため機
た.総括的見地から比較すると，高脂肪食，標準食に比
能的に負担が加わったと思われ， c
r
i
s
t
a
eの発達が悪〈顕
べ無脂肪食では BHT の影響が軽度であることから，
著なものでは糸粒体膜の崩壊を生じたと考える.血清
BHT の作用発現に飼料中の異なる脂肪組成の関与が示
Gluは無脂肪食で低下をみるが有意でなく， g
l
y
c
o
g
e
n穎
唆される.
粒の消失に比べ変動は少ない. W
iIson らは脂肪酸欠乏
mouseで糸粒体の膨化，中央部 m
a
t
r
i
xの発達を報告し，
この変化は糸粒体の酸化的リ γ酸化に影響を及ぼしすな
わち ATPの欠乏によると示唆した 14)
(本研究の一部は日本電子顕微鏡学会第3
5回学術講演会
1979
年 5月で発表した.)
文
献
1
)F
e
u
e
r，G
.，Gaunt，1
.F
.，
G
o
l
b
e
r
g
，L
.
， a
n
dF
a
i
r
w
e
a
・
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.I
;
?
e
s
.
.L
a
b
.P
.
H
.，3
1
2，1
9
8
0
72
d
.C
o
s
m
e
t
.T
o
x
i
c
o
l
.，3，457，1965
t
h
e
r，F
.A. :F
2
) Botham， C
.M.，Conning， D
.M.，Hayes，，
.
] L
i
.
d
. Co・
t
c
h
f
i
e
l
d，M.H.，andM
c
e
l
l
i
g
o
t
t
，T.F.: F
s
m
e
t
.T
o
x
i
c
o
l
.，8，1，1970
3
)福森信隆，三栗谷久敏，平賀興吾:東京衛研年報，
2
7
2，67，1
9
7
6
4
)福森信隆，高橋省，三栗谷久敏，平賀輿吾:東京
衛研年報， 2
8
2，6
1，1
9
7
7
5
)福森信隆，三栗谷久敏，平賀輿吾:東京衛研年報，
2
9
2，2
4，1
9
7
8
6
)福森信隆，三栗谷久敏，平賀輿吾東京衛研年報，
3
0
2
，31，1979
.P
a
t
h
.，
7
) Svoboda，D
.，andH
i
g
g
i
n
s，]
.
:Amer. ]
5
3
1，1
9
6
4
4
5，3
8
) Nagao，Y.，S
u
z
u
k
i，T.，Yasuda，H.，andTakaki，
F
.:]
i
k
e
iMed. ]
.
， 8，1
1
9，1
9
6
1
9
) Satoh， T.:].C
l
i
n
. E
l
e
c
t
r
o
nM
i
c
r
o
s
c
o
p
e，7，
1
6
1，1
9
7
4
1
0
) Mori，M.，Yokoyama，M.，andOnoe，T.:]a
ρa
n
.
]
.C
l
i
n
.E
l
e
c
t
r
o
nM
i
c
r
o
s
c
o
ρ
'
y，6，2
1，1
9
7
3
1
1
)I
s
h
i
i，H.，Fukumori，N.，H
o
r
i
e， S
.，andSuga，
T.:B
i
o
c
h
i
m
.B
i
o
ρh
y
s
.A
c
t
a
.，
6
1
7，1
，1980
e
n
d
o
p
l
a
s
m
i
cr
巴t
i
c
u
l
u
m(SER) i
nt
h
eg
l
y
c
o
g
e
n
a
r
e
aands
i
n
u
o
u
sc
i
s
t
e
r
n
e
ao
fRERs
u
r
r
o
u
n
d
i
n
g
m
i
t
o
c
h
o
n
d
r
i
a(M) a
r
es
e
e
n
. X1
7
0
0
0
.
F
i
g
.3
.A p
o
r
t
i
o
no
fh
e
p
a
t
o
c
y
t
efromt
h
er
a
tf
e
dw
i
t
h
t
h
eh
i
g
h
.
f
a
td
i
e
t
. S
e
v
e
r
a
ll
i
p
i
dd
r
o
p
l
e
t
s (L)
a
r
es
e
e
ni
nt
h巴 c
y
t
o
p
l
a
s
m
. Glycogen p
a
r
t
i
c
l
e
s
(
G
l
)a
r
ep
r
e
s
e
n
ta
b
u
n
d
a
n
t
l
y
. A
l
t
e
r
a
t
i
o
n
so
f
RER，SERandm
i
t
o
c
h
o
n
d
r
i
a(M)a
r
en
o
ts
e
e
n
s
e
v
e
r
e
l
y
.
X1
4
0
0
0
.
F
i
g
.4
.A p
o
r
t
i
o
no
fh
e
p
a
t
o
c
y
t
efromt
h
er
a
tf
e
dwith
t
h
eh
i
g
h
.
f
a
td
i
e
t
. Manym
i
c
r
o
b
o
d
i
e
s (Mb) a
t
e
o
b
s
e
r
v
e
di
nt
h
eg
l
y
c
o
g
e
na
r
e
a
.Mostm
i
c
r
o
b
o
d
i
e
s
c
o
n
t
a
i
nn
u
c
l
e
o
i
dc
o
r
e
(
n
)， b
u
tt
h
ea
n
u
c
l
e
o
i
d
m
i
c
r
o
b
o
d
i
e
sa
r
ea
l
s
os
e
e
nf
r
e
q
u
e
n
t
l
y(
a
r
r
o
w
s
)
.
x
1
6
0
0
0
.
F
i
g
.5
.A p
o
r
t
i
o
no
fh
e
p
a
t
o
c
y
t
efromt
h
er
a
tf
e
dwith
t
h
eh
i
g
h
.
f
a
td
i
e
tc
o
n
t
a
i
n
i
n
g1% BHT f
o
ra
w
e
e
k
.S
l
i
g
h
tp
r
o
l
i
f
e
r
a
t
i
o
no
fSERi
nt
h
eg
l
y
c
.
ogena
r
e
ai
so
b
s
e
r
v
e
d，and s
e
v
e
r
a
l SER a
r
e
f
i
l
a
m
e
n
t
o
u
sandt
u
b
u
l
o
u
ss
h
a
p
e
s
. x2
1
0
0
0
.
F
i
g
.6
.A p
o
r
t
i
o
no
fh
e
p
a
t
o
c
y
t
efromt
h
er
a
tf
e
dw
i
t
h
t
h
eh
i
g
h
.
f
a
td
i
e
tc
o
n
t
a
i
n
i
n
g 1% BHT f
o
ra
1
2
)N
o
v
i
k
o
f
f，P
.M.，NovikoH，A.B
.，O
u
i
n
t
a
n
a，N.，
week
. Accumulation o
fJ
i
p
i
dd
r
o
p
l
e
t
si
sn
o
t
andD
a
v
i
s，C
.:]
.H
i
s
t
o
c
h
e
m
.C
y
t
o
c
h
e
m
.，
2
1，540，
s
e
e
ni
nt
h
eg
l
y
c
o
g
e
na
r
e
a
.Therea
r
emuchg
l
.
1
9
7
3
y
c
o
g
e
np
a
r
t
i
c
l
e
s(
a
r
r
o
w
s
) among p
r
o
l
i
f
e
r
a
t
i
o
n
1
3
)高橋省，中尾順子，平賀輿吾:東京衛研年報，
2，1
9
7
8
2
9
2，2
1
4
) Wilson，]
.W.，andLeduc，E
.H.:]
.C
e
l
l
.B
i
o
l
.，
8
1，1
9
6
3
1
6，2
. Lengthenedmitochondria(M)
o
fd
i
l
a
t
e
dSER
wass
u
r
r
o
l
m
d
e
dbyRER
. x1
8
0
0
0
.
F
i
g
.7
.A p
o
r
t
i
o
no
fh
e
p
a
t
o
c
y
t
efromt
h
er
a
tf
e
dwith
t
h
ef
a
t
.
f
r
e
ed
i
e
t
. Thel
a
c
ko
fg
l
y
c
o
g
e
np
a
r
t
i
c
l
e
s
ExplanationofFigures
and s
w
e
l
l
i
n
go
fm
i
t
o
c
h
o
n
d
r
i
a (M) a
r
es
e
e
n
.
F
i
g
.1
.A p
o
r
t
i
o
no
fh
e
p
a
t
o
c
y
t
efromt
h
巴 r
a
tf
e
dw
i
t
h
The c
h
a
n
g
e
so
fo
t
h
e
ro
r
g
a
n
e
l
l
e
sa
r
es
J
ig
h
t
.
t
h
es
t
a
n
d
a
r
dd
i
e
t
. Th
巴r
ea
r
em
i
t
o
c
h
o
n
d
r
i
a(M)，
l
a
m
e
l
l
ao
froughs
u
r
f
a
c
e
de
n
d
o
p
l
a
s
m
i
cr
e
t
i
c
u
l
u
m
(RER) andg
l
y
c
o
g
e
np
a
r
t
i
c
l
e
s(
G
l
)
. x1
7
0
0
0
.
x1
5
0
0
0
.
F
i
g
.8
.A p
o
r
t
i
o
no
fh
e
p
a
t
o
c
y
t
efromt
h
er
a
tf
e
dw
i
t
h
t
h
ef
a
t
.
f
r
e
ed
i
e
tc
o
n
t
a
i
n
i
n
g 1%BHT f
o
ra
F
i
g
.2
.A p
o
r
t
i
o
no
fh
e
p
a
t
o
c
y
t
efromt
h
er
a
tf
e
dw
i
t
h
w
e
e
k
. There i
sg
l
y
c
o
g
e
n d
e
p
l
e
t
i
o
n
. S
l
i
g
h
t
t
h
es
t
a
n
d
a
r
dd
i
e
tc
o
n
t
a
i
n
i
n
g1%BHT f
o
ra
p
r
o
l
i
f
e
r
a
t
i
o
no
fSERand l
e
n
g
t
h
e
n
e
dd
e
f
o
r
m
a
.
week
. Extremep
r
o
l
i
f
e
r
a
t
i
o
no
fv
e
s
i
c
u
l
a
rsmooth
t
i
o
no
fmitochondria(M) a
r
es
h
o
w
e
d
. x1
6
0
0
0
.
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，3
1
2，1
9
8
0
8
0
オールを混合した.使用したラットの数は各群 5匹であ
れた.したがって，以上の結果からエストログシ投与に
り，すべてのラットは一匹がいとし 2週間実験飼料を自
より BHT誘発のピタミ γK欠乏，プロトロンピン量の
由摂取させた.
減少および出血を阻止しうることが示唆された.そこで
4
. 実験方法
BHT摂取雌ラットのビタミン K欠乏症の抵抗性の原因
血媛プロトロンビン量前報3)に従い測定した.
結果および考察
としてエストロゲ γ の濃度の高いことが考えられる.
o
l
l
yら4)はエストロゲンの作用の一つにピタミ γ
一方， J
1
.5%BHT投与群では飼料摂取開始後 1
3日自に 5匹
Kの腸管からの吸収を増加させることを報告している.
中 3匹のラットが出血死した.生き残った 2匹のラット
そこで現在，ビタミン Kの吸収に対する BHTの影響
はプロトロンピン量が著しく減少し，出血死寸前である
について検討中である.
と思われた.ところが1.5%BHT+エストロゲ γ投与群
文 献
では実験期間中死亡したラットはなくプロトロンピン量
1
)米山允子ら:東京衛研年報， 2
4，4
5
0，1
9
7
3
も1.5%BHT投与群に比べ比較的多かった .0.5%BHT
2
) Metta，V.C
.，andJohnson，B
.C
.:]
.N
utr.，7
2，
投与群では死亡例はなかったがすべてのラヅトにおいて
プロトロシピ γ量は著しく減少していた. 0.5%+エス
トロゲシ投与群でのプロトロンピン量はそのような著し
い減少は観察されなかった
BHTを投与しない群でも
エストロゲン投与によりプロトロンビン量の増大はみら
4
5
5，1
9
6
0
3
)S
u
z
u
k
i，H.，Nakao， T.，and H
i
r
a
g
a，K
.
:T
o
x
i
ρl
. Pharmacol.，
5
0，2
6
1，1
9
7
9
c
o
l
. Aρ
4
)J
o
l
l
y，D
.W.，C
a
r
o
l
y
n，C
.，
andThomas，E
.N，J
r
.:
Amer. ]
.P
h
y
s
i
o
l
.，2
3
2，H12，1
9
7
7
東京衛研年報 A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，8
1
8
4，1
9
8
0
ジブチルヒドロキシトルエン (BHT) の幼若マウス赤血球膜浸透圧抵抗におよ{ます影響
市川久次*，小林博義ペ中尾
1
I
原
子*
EffectsofButylatedHydroxytoluene (BHT) onOsrnotic F
r
a
g
i
l
i
t
i
e
sofErythrocytes
inInfantMice
HISATSUGU ICHIKAW A
，
* HIROYOSHIKOBAYASHI*a
n
dTOSHIKONAKAO*
Keywords:CPC，赤血球膜 e
r
y
t
h
r
o
c
y
t
e
sm巴mbrane，ジ 7'チノレヒドロキシトルェ γbutylatedh
y
d
r
o
x
y
t
o
l
u
e
n
e，
仔マウス i
n
f
a
n
tm
i
c
e
著者らは，これまで CPC(
c
o
i
lp
l
a
n
e
tc
e
n
t
r
i
f
u
g
e
)法
による赤血球膜浸透圧抵抗(溶血抵抗〉の訊u
定について，
毒性試験・研究への応用を企図し，基礎的，応用的検討
を行ってきた 1-6) 今回，応用的研究の一環として，予備
2
，4，6
，8
，1
0，1
2日目は雌雄区別なく測定し，出生日
の平均体重を 100%として成長率で示した.
i
i
i
)肝臓重量:断頭採血後すみやかに肝臓を摘出し，
重量を秤量，体重比重量として表わした.
以下 BHT
的ではあるがジプチルヒドロキシトルエ γ (
と略す〉を経母乳投与により新生 幼若マウス(仔マウ
実験結果ならびに考察
BHT を経母乳により仔マウス (7，1
4日間〉に投与
ス〉に投与し，その赤血球膜浸透庄抵抗におよぼす影響
し，その赤血球膜浸透圧抵抗におよぼす影響について検
を検討したので報告する.なお，体重増加，肝臓重量に
討した. T
able1
1
こ示した如く， 7日間投与の全雄群と雌
およぼす影響についても付加的に言及した.
実験材料ならびに方法
.
5
0，1
.0%投与群において，溶血終了値 (HEP) が
の0
対照群に比して有意に上昇したのが認められた.これは
1
. 使用動物:日本グレア生産の ICRマウスを日本
溶血最大抵抗値が上昇したことであり，溶血抵抗の減少
P レア製の CE-2飼料にて自家繁殖(兄妹交配Jして得
を意味すると考えられる.また，溶血開始値にはほとん
た母仔を実験に供した.実験に供するに当っては，出生
ど差が認められず，溶血幅が投与群全体において減少す
仔数 9匹以上，雌雄 4匹以上，母マウス 1匹につき 9あ
る傾向が認められたことから， BHT はマウスの乳児期
るいは 1
0
匹の仔マウスを保持するよう出生時に選んだ.
の初期に経母乳投与した場合，赤血球膜の浸透庄抵抗を
2
. 試料 :BHTは和光純薬製 (
L
o
tN
o
. KIK5562)
結品性粉末， m
p. 6
9
.
5Cのものを使用した.
0
弱くする作用があることが示唆された.これまでの成熟
ラットに BHTを投与して検討した結果では，むしろ溶
3 投与方法ならびに期間:試料 (BHT)をそれぞれ
血抵抗を増加すると報告されている%の.今回の実験は投
0，0
.
0
8， 0
.
2
5， 0
.
5
0， 1.0%の割合で日本グレア製粉
与経路が経母乳であり.また動物の種類も仔マウスであ
ー
2
)に混合し，固型飼料として経母的に仔マ
末飼料 (CE
る.この相反する結果を考察するに，仔マウスが摂取し
4日群に分けた.
ウスに投与した.投与期聞は， 7，1
たものが BHTそのものというよりも，代謝乳汁分泌物
4 飼育条件:室温 2
5土1'
C，湿度 5
5土 5%，照明時間
と考えた方が妥当であり，成熟ラットに経口的に投与し
午前 6時より午後 5時に調整された飼育室にて，母マウ
た場合と異なった結果を得たのは，種差もそうではある
スとともにプラスチックケージにカンナクズ床敷にて飼
が，経母乳投与ということも理由のーっとして考えられ
育した.
5
. 検査項目ならびに方法
る.したがって， BHT投与の母乳中の存在状態につい
ては，今後の検討課題であると考えられる.
i
)赤血球膜浸透圧抵抗:仔マウスを断頭し，流出し
一方， F
i
g
.1
，T
able2に実験期間中の体重推移ならび
てくる血液をへパリ γ処理したヘマトクリット管に採取
に実験終了時の体重増加率，肝臓重量の体重比重量を示
し，市 )
1
1ら1)の方法に準じ， 1
7
0-30m
OsM の濃度勾配を
した(体重の実験開始時における絶対重量を意図的にそ
もつ食塩液の CPCコイルを使用して行った.
ろえることが不可能であるので，体重増加については成
i
i
) 体重:実験開始後 0，7，1
4日目は雌雄個体別に，
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
h
i
n
j
u
k
u
・
ku， Tokyo，1
6
0J
a
p
a
n
2ι1，Hyakunincho3chome，S
*東京都立衛生研究所毒性部
ネ
長率，肝臓重量は体重比重量で示した). BHTl
.O%
投与
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，3
1
2，1
9
8
0
82
. O
smoticF
r
a
g
i
l
i
t
i
e
so
fE
r
y
t
h
r
o
c
y
t
e
si
nt
h
eI
n
f
a
n
tMice
Table1
A
d
m
i
n
i
s
t
e
r
e
dw
i
t
hBHT t
h
r
o
u
g
ht
h
巴 M
otherMice
Days
Sex
M
7
F
C
o
n
t
r
o
l
4)
.
0
1
1
5土 3
(5)5)
BHT0.08%
BHT0.25%
BHT0.50%
BHT1.00%
1
1
8土 2
.
3
.
6
1
1
5土 2
1
1
9土1.1
.
2
1
1
7土 2
(6)
C
o
n
t
r
o
l
崎広
BHT0
.
0
BHT0.25%
BHT0.50%
.00%
BHT 1
C
o
n
t
r
o
l
M
14
1
)
2
)
3
)
4
)
5
)
BHT0.08%
BHT0.25%
BHT0.50%
BHT 1
.00%
C
o
n
t
r
o
l
F
HEp2)
HSpll
Dose
BHT0.08%
BHT0.25%
BHT0.50%
.00%
BHT 1
HW3)
(6)
(5)
(4)
74土1.1
*
*
*
79土1.9
*
*
76土1.0
.
0
*
*
8
0土 3
.
6
*
*
79土 0
42土 2.4
.
0
*
3
9土 2
.
2
38土 3
38土 2
.
5
*
3
9土1.7
1
1
5土 3
.
0
1
1
5土1.9
.
7
1
1
2土 3
.
5
1
1
7土 3
.
2
*
1
2
0土 2
(5)
(4)
(4)
(5)
(5)
74土1.6
74土 2
.
1
7
6土1.5
78土 2
.
4
*
77土 0
.
4
*
4
1土1.4
4
1土1.3
36土 3
.
6
.
5
3
9土 2
.
3
43土 2
1
1
2土1.5
.
6
1
0
8土 3
.
5
*
1
0
8土 2
1
1
2土1.9
1
1
2土1.5
(6)
(5)
(6)
(5)
(5)
77土 2
.
2
79土 2
.
8
77土 2
.
0
.
2
7
9土 3
77土1.5
.
7
35土 2
.
0
*
2
9土 3
.
7
*
30土 2
3
3土1.7
34土 0
.
8
.
3
1
1
0土 3
1
0
9土1.9
1
0
9土1.5
.
5
1
0
5土 5
1
0
7土1.3
(4)
(5)
(4)
(5)
(4)
77土 0
.
5
79土1.7
*
78土1.5
77土1.5
77土1.3
35土 3
.
7
30土 0
.
7
3
1土 2.4
27土 4
.
6
2
9土 2
.
2
S
t
a
r
tp
o
i
n
to
fh
e
m
o
l
y
s
i
s
Endp
o
i
n
to
fh
e
m
o
l
y
s
i
s
Widtho
fh
e
m
o
l
y
s
i
s
mOsM，mean土 S.D.
No.ofi
n
f
a
n
tmice
*p<0.05料 p<O.Ol* 料 p<O.OOl
f
f
e
c
t
so
fBHTonBodyWeightsGainandL
i
v
e
rWeightsi
nI
n
f
a
n
tM
i
c
e
.
Table2
. E
Sex
Dose
C
o
n
t
r
o
l
M
BHT0.08%
BHT0.25%
BHT0.50%
.00%
BHT1
，
C
o
n
t
r
o
l
F
1
)
2
)
3
)
4
)
BHT0.08%
BHT0.25%
BHT0.50%
.00%
BHT 1
7d
a
y
s
BodyW
e
i
g
h
t
s
l
)
L
i
v
e
rW
e
i
g
h
t
s
2
)
1
4d
a
y
s
BodyWeights
L
i
v
e
rWeights
2
7
9土 7
.
13
) (5)4)
3
.
5 (6)
2
6
9土 1
0
.
0 (6)
2
5
1土 3
1
.1 (5)
2
6
3土 2
1
7
0土 8
.
7
*
*
*(4)
3
0
3
6土 2
91
.2
2
9
3
1土 1
61
.3
2
9
0
5土 2
5
9
.
8
2
7
5
7土 1
8
7
.
2
0
9
.
1
2
7
7
6土 1
.8
3
5
5土 41
6
.
7
4
7
1土 2
8
.
4
4
0
0土 1
4
1
9土 3
4
.
4
3
4
3土 3
3
.
6
1
.1 (5)
2
9
0土 3
(4)
.
9
2
7
8土 9
2
5
0土 1
0
.
0
* (4)
5
.
1 (5)
2
7
8土 2
1
6
8土 2
3
.
9
*
*
*
(5)
3
3
3
9土 1
9
2
.
2
2
9
9
5土 3
7
9
.
1
3
1
0
9土 2
3
0
.
8
2
9
8
7土 1
2
8
.
3
*
2
8
.
6
*
2
9
1
3土 2
3
6
5土 3
5
.
8 (5)
8
.
5 (5)
4
9
7土 2
4
1
5土 2
4
.
9
*
*
*
(4)
2
.
3 (5)
4
3
8土 2
3
2
3土 5
7
.
8
料
(4)
Growthr
a
t
e
s (%)
mg/100g
. Bodyw
e
i
g
h
t
s
mean土 S.D.
巴
No.o
fi
n
f
a
n
tmic
*p<0.05料 p<O.Ol* 料 p<O.OOl
(5)4)
(5)
(6)
(5)
(5)
4
1
6
0土 3
6
3
.
8
.1
*
*
3
4
5
8土 71
81
.4
*
*
3
4
4
6土 1
8
3
.
0
*
*
3
3
6
5土 1
1
6
.
4
4
0
7
4土 5
3
.
5
*
3
5
9
2土 7
5
4
.
7
*
3
3
0
1土 1
3
5
3
9土 1
1
0
.
7
*
東 京 衛
1
2，1
9
8
0
研 年報 3
8
3
400
300
200
100
500
400
300
200
{岬)
ω川恒同出ぷけ V，
hro h H O
100
工40
120
C
100
80
140
120
100
80
。
1
2
3
4
5
6
7
day
8
9
10 11 12 13
・
司
T
e
i
g
h
t
so
fI
n
f
a
n
tandMotherMice
hangeso
fBodyi
F
i
g
.l
. C
oControlム BHT0.08%x BHT0.25%ロBHTO
.50%
A 7d
a
y
si
n
f
a
n
tm
i
c
e
B 1
4d
a
y
si
n
f
a
n
tm
i
c
e
C 7d
a
y
smotherm
i
c
e
D 1
4d
a
y
smotherm
i
c
e
BHT1.00%
工4
8
4
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，1
9
8
0
群，とくに 7日間投与において体重増加の抑制が著しく
初期において溶血終了値が上昇し，溶血幡が減少する傾
(雌雄ともに)，また，肝臓の体重比重量も投与群は全体
向を認めた.
的に減少ないし減少傾向が認められ，赤血球膜浸透圧抵
文
献
実験の結果は，仔マウスに対してはむしろ肝臓重量増加
1
)市川久次，小林博義，中尾順子:東京衛研年報， 2
6
2，2
0
3，1
9
7
5
2
)市川久次，小林博義，中尾順子..東京衛研年報， 2
7
2，5
3，1
9
7
6
3
)市川久次，小林博義，中尾順子:東京衛研年報， 2
8
2，2
3
0，1
9
7
7
を抑制し，赤血球膜浸透圧抵抗に対しては溶血抵抗を減
4
) 市川久次，小林博義，中尾順子，平賀輿吾，中川茂
抗の変化とを合せ考えると相関性が推定される.
これまで多くの研究者により BHTのラットに対する
肝重量増加作用は報告され，広く知られている.また，
小林も BHTを経母乳投与により仔ラ
y
トに投与し，仔
ラットの肝臓重量の増加を報告している的. しかし，本
少させる作用があることを示唆している. このように
BHT を経母乳により仔マウスに投与した場合，ラ
y
ト
とは異なった作用を示す結果を得たが，今後①種差，②
母乳中の存在状態，③赤血球膜浸透庄抵抗と血清中コレ
ステロール量的等について考慮しつつ，今回は動物数が
少なかったので今後詳細なる検討を企図してみたい.
結 論
BHT を経母乳により仔マウスに投与し，その赤血球
膜浸透圧抵抗に対する影響を検討したところ，投与開始
男:日本血液学会誌， 4
1
2，1
0
2，1
9
7
8
5
)市川久次，小林博義，中尾順子:東京衛研年報， 3
0
2，1
5
1，1
9
7
2
6
)市川久次，小林博義，中尾)1原子，中 )
1
1茂男:日本血
液学会誌， 4
3
2，2
9
5，1
9
8
0
7
)長井二三子，鈴木英子，中尾順子:東京衛研年報，
2
7
2，1
3
7，1
9
7
6
8
)小林博義:東京衛研年報， 3
0
2，5
，1
9
8
0
9
)北島和彦:山口医学， 2
3，6
7，1
9
7
4
東京衛研年報
Ann. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
..
La
b
.P
.
H
.，3
1
2，8
5
8
8，1
9
8
0
血液の保存期間延長に関する研究
長井二三子*，中尾 j
原子*，中尾
真料
Studies onProlongationofPreservativePeriodofBlood
FUMIKONAGAI*，TOSHIKONAKAO*and MAKOTONAKAO
判
Keyword
自:保存血 p
r
e
s
e
r
v
a
t
i
v
eb
l
o
o
d， アデ、ニン a
d
e
n
i
n
e，イノシ γinosine，ATP，2
，
3-DPG，浸透圧溶血
抵抗 o
s
m
o
t
i
cf
r
a
g
i
l
i
t
y，平均赤血球容積 MCV
緒
ー
百
し，コストが高くなることなどもあり，最近にいたって
血液の保存には一般には凝固阻止作用と緩衝作用をか
比較的簡単に保存期聞を数週間延長できるアデニ円イ
ねたグエン酸，グエ γ酸ソ{ダおよびエネルギー源とし
ノシ γを添加する保存法の実用化を考えた.実用化に際
てブドウ糠を含んだ ACD液または上記の添加物のほか
しては添加物およびその代謝産物の尿酸の毒性が問題に
にリ γ酸塩を含んだ CPD液が用いられている.保存血
なるので保存後に赤血球を洗浄してこれらのものを除去
の有効期聞は 4C保存で2
1日間と決められているが，こ
しなければならない.そのためには洗浄操作に耐えられ
の期聞を過ぎると輸血後の寿命が70%に減少してしまう
からでありトペ赤血球の ATP レベルの減少 1
，
4
)，解糖
るように膜を強化する必要があった.膜を強化しかっ代
0
謝や物理的生物的活性に変化を生ぜしめない方法を探
5
)，浸透圧溶血抵抗の減弱 1，
6
)なども生じる.
速度の低下 1，
し，等浸透圧下で赤血球の内と外のコロイド浸透圧を近
血液の保存期間延長に関する研究としては G
a
b
r
i
o7-9)
ずけることによって溶血をおさえることを目的として膜
等のイノシン等のヌクレオシドを添加して保存する方法
0
)において予備実験
難透過物質の煎糖を利用した.前報2
があげられるが，この方法は ATP レベルの維持にはあ
ではあるが血液に煎糖を加えて保存すると赤血球の代謝
る程度の効果を示したが，最終目的とする輸血後寿命の
その他の性状にはあまり影響を与えずに MCVが小さく
改善にはいたらなかったことがのちに多くの人の追試
なり，それに伴って膜が強化されること，また，アデニ
1
0ー切によって証明されている.次に中尾らは ACD血に
γ，イノシ γに加えて煎糖を添加した血液では MCV，
アデニ γ とイノシンを同時に添加して保存することによ
浸透圧溶血抵抗の変化とともに 1
0
0日間保存後も ATPレ
って比較的簡単に保存期間を数週間延長できることを報
，
3-DPG含量が相当量
ベルが正常の範囲にあること， 2
告した 6，
1
5
1
8
) すなわち 8週間保存後も ATP量，浸透
残存していることなどについて報告した.しかしこの保
圧溶血抵抗が正常に保たれていること，解糖活性が ACD
aCl2を含むため僅かながらフィプロシの析出が
存液は C
血より感んであること，輸血後寿命が十分長いことなど
ris-HClの大量使用については問題が
認められ，また T
である.その後輸血後の代謝産物尿酸の出現をおさえる
ある.そこでこれらの物質を除き，実際に輸血用血液の
ために少量のアデニシを添加する報告 19)もされた.その
保存に適当であると考えられる組成の混合液を作製して
後一時血液の凍結および解凍技術などの進歩により超低
血液を保存し，予備実験と同様なことについて検討を加
温保存により赤血球の代謝を完全に停止して保存する方
えた.本報ではその結果を報告する.またウサギ血液の
法が開発されたことなどからアデニ人イノシンを添加
自家輸血による輸血後寿命の測定についても試みたが別
して数週間保存期聞を延長する方法の実用化については
の機会に報告する予定である.
発展していないが，アデュ γ添加法はスエ{デ γ，西独，
米国で国家的に検定を通り広く実用化されている.しか
方 法
血液は日赤血液セ γ タ{より供与された赤血球濃厚液
しこの方法は原理的には中尾らの言う趣意にそわず，実
(PC)21)を用いた.赤血球数， ヘモグロピ γ量
， MCV
，
験的にもアデ、ニン，イノシシ同時添加ほどの効果はなか
ATP，2
，
3-DPG の測定は前報2
0
)に示した通りに行っ
った.また，凍結血液は低温保存のため特別な設備を要
た.次に血液の保存法を示す
*東京都立衛生研究所毒性部薬理研究科
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
，H
yakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
k
u，Tokyo，1
6
0J
a
p
a
n
2
4
1
料東京医科歯科大学医学部第一生化学
2mMクエシ酸， 10mM
一
、
¥
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2
，1980
8
6
表 1
. 赤血球濃厚液 (PC)および S-CPD，AISCPD，AS-CPD保存血の MCVの変動
議プ
PC
S-CPD
AIS-CPD
AS-CPD
1
0日
1
7日
μ
8
p
s
.
9
3
8
7
8
6
8
7
9
2
.
5
8
6
8
1
8
6
.
5
3
3日
5
3日
7
8日
μ
8
μs
μ
8
9
3
8
5
8
1
8
3
.
5
9
3
8
6
8
2
8
4
.
5
8
2
.
5
7
9
7
9
PC:赤血球濃厚液， S-CPD，AIS-CPD，AS-CPD
の添加液は次のとおりである. S-CPD:2mMクェ γ
酸
， 10mMクエシ酸ソ{ダ， 4mMNa2HPO
・
，12H
0，
2
15mMブドウ糖， 250mM煎糖， AIS-CPD;S-CPD
十8mMアデニシ +40mMイノシシ， AS-CPD:S
CPD+0.6mMァデニン.
0
0r
5
0
¥
~\~
0
ウ糖， 250mM薦糖液を作り S-CPD液とした.この液
に 8mMアデニン， 40mMイノシシを加えた液を AIS-
"
、
.
、
、
.
‘
、
・
ー
、
一旬
、
・
・
・
・
-.
_~~...-
1
0
0
ー
一
S-CPD
5
0
主
更
ト
長
クエン酸ソ{ダ， 4mMNa2HPO
・
，12H
0，15mM ブド
2
PC
。
Iで
ふ
司 100
A工S-CPD
1
.
<
:
0
CPD液
， 0.6mMアデニンを加えた液を AS-CPD液と
した.各々の液を滅菌後無菌操作で血液 10mlに対して
5
0
7.7ml加え， 4
'C無菌的に保存した.保存中は一定期間
， 2
，
3-DPG量，赤血球
毎に浸透圧溶血抵抗， ATP量
数
， MCV
，ヘモグロビン量を測定した.
結果ならびに考察
0
100
中尾らのアデユシ，イノシシを添加する赤血球の保存
法を実用化するには保存赤血球が洗浄に耐えられるよう
に赤血球膜を強化する必要があると考え，等浸透圧の煎
(CPD保存液)
2
2
)を基礎とし，
。
これにアデニ γ ，イノシ
γ，煎糖を添加して保存した.表 1は保存日数と MCV
の関係を示したものである. AIS-CPD 保 存 血 の
MCVは S-CPDおよび AS-CPDに比べて早い時期に
小さくなる傾向にあった.最近 CPD保存液に少量のア
デェ γを加える方法が用いられるようになったが，煎糖
と共にアデユンを加えた保存を試みた. この AS-CPD
AS-CPD
‘
¥
込¥
¥、
・
¥
弘
、
が可能であると考えられる保存液を使って血液の保存を
最近使われるようになったリシ酸塩を混合した保存液
、
¥
¥
¥¥
5
0
糖液を用いた.今回の実験では輸血用血液として実用化
試みた.グエン酸，グエ γ酸ソ{ダ，ブドウ糖，それに
一一一ーー一
一
一一一一
“
¥
、
、
¥
三
三iナ ニ ご ゴ ー 一 一 二
0
.
2
0.4
0.6
0.8
NaC1濃度(%)
図1. 4'
C保存によるヒト赤血球浸透圧溶血抵抗の
変動
5日間保存，・…・・:2
6日間保存，一日一:4
5
一一:1
日間保存，一一:8
1日間保存
保存液および保存方法については『方法』に示し
た.
の MCVは S-CPDと AIS-CPDの中間の値であっ
定を試みた 6
0日の間，新鮮血のレベノレを保っており，予
た.保存日数と浸透圧溶血抵抗の変化の関係安図 1に示
備実験の結果と合わせるとさらに相当日数の間，新鮮血
した. PC の浸透圧溶血抵抗は保存中徐々に減弱するの
のレベルを保つことが示唆された. AS-CPDの ATP
に対して煎糖添加保存血は徐々に増強された.また AIS
量は PCや S-CPD よりは高レベルであったが， AIS-
-CPDは一番増強されており，次に AS-CPD，S-CPD
CPD のように新鮮血の値を保つというようなことはな
の順であった.図 2は ATP量，図 3は 2
，
3-DPG
量の
かった. 2
，
3-DPGについては AIS-CPDは S-CPD，
変動を示したものである. AIS-CPDの ATP 量は測
PCに比べてかなり多く残っていたが， AS-CPDは S-
東京衛研年報 3
ト2
，1
9
8
0
A
T
P
8
7
2，
3・DPG
J
.
lm
ol/Hb.(g)
ロ
mo1/Hb.(g)
6
15
4
10
2
5
。
20
40
60
保存日数
. 4C保存によるヒト血中 ATP含量の変動
図 2
大:赤血球濃厚液 (PC)，ム:S-CPD
，0:AISCPD，ロ:AS-CPD 保存液および保存方法につ
いては『方法』に示した.
0
CPD，PC と同じように6
0日保存後にはほとんど消失し
。
40
20
60
保存日数
図 3
. 4C保存による血中 2
，
3-DPG含量の変動
，O:AIS-CPD
，
交:赤血球濃厚液 (PC)，ム:S-CPD
口: AS-CPD. 保存液および保存方法については『方
法』に示した.
0
ていた.煎糖の効果をまとめると赤血球の容積が小さく
なること，浸透庄溶血抵抗が増強されること，これらの
またここでは示さなかったが，ウサギの自家輸血によ
効果には時間がかかることなどがあげられる.しかし，
る輸血後寿命の結果も合わせて考えると，この方法は輸
ATP量，糖代謝，形態などにはほとんど影響しなかった.
血用血液の保存期間延長法として実用化が有望である.
煎糖に加えてアデニ人イノシンを添加して血液を保存
， 2
，
3-DPG量が長期間保持
することによって ATP量
されたのはアデニ九イノシ γの添加によって赤血球内
の代謝が ATP拡大再生産の方向に働いたことと細胞外
の煎糖の影響で細胞膜が強化され溶血しにくくなったこ
と，細胞内の容積が小さくなづて赤血球内の物質の濃度
が上昇したことなどにより代謝に好影響をおよぼしたた
文 献
1
)R
a
p
o
p
o
r
t，S
.
:J
.C
l
i
n
.I
n
v
e
s
t
，26，591，1947
2
)R
o
s
s，J
.F
.，Finch， C
.A.，Peacok， W.C
.，and
S
a
r
n
r
n
o
n
s，M.E
.:J
.C
l
i
n
.I
n
v
e
s
t
.，26，687，1
9
4
7
3
)S
t
r
u
r
n
i
a，M.M.，B
l
a
k
e，A.D
.J
r
. andMacGraw
，
r
.:J
.C
l
i
n
.I
n
v
e
s
t
.，26，678，1947
J
.J
4
) Nakao， M.， Nakao， T.， T
a
t
i
b
a
n
a， M.， a
n
d
めであろう.熊糖とともにアデニンのみを加えた保存は
Yoshikawa，H.:J
.B
i
o
c
h
e
m
.4
8，4
7
2，1
9
6
0
ATP量に関してはやや効果を示したが， 2
，
3-DPG量
.
:J
.C
l
i
n
.I
n
v
e
s
t
.，26，616，1
9
4
7
5
)R
a
p
o
p
o
r
t，S
に関しては全く効果がなく，酸素解離能 23)の維持という
Nakao，T.，
A
r
i
r
n
a
t
z
uY.，
andYoshikawa，
6
) Nakao，M.，
ことについては疑問がある.いずれにしろアデニン，イ
H.:P
r
o
.J
a
p
a
n
.A
c
a
d
.，3
6，4
3，1
9
6
0
7
)G
a
b
r
i
o，B
.W.，
Donohue，D
.M.，andFinch，C
.A.:
ノシン，煎糖添加のようなめざましい結果は得られなか
J
.C
l
i
n
.I
n
v
e
s
t
.，3
4，1
5
0
9，1
9
5
5
った.
要 約
.W.，Donohue，D
.M.，Hunnekens，F
.
8
)G
a
b
r
i
o，B
アデニン，イノシ γ，煎糖を添加する血液の保存法は
，C
.A.: J
.C
l
i
n
.I
n
v
e
s
t
.，3
5，5
6
2
，
M.，andFinch
① 保 存 中 の MCVを小さくしそれに伴って赤血球
1
9
5
6
.W.，Donohue，D.M.，Hunnekens，F
.
9
)G
a
b
r
i
o，B
膜を強化し，洗浄に耐えられる赤血球にした.
②
ATP含量は 8週間以上の保存後も新鮮血のレベ
2
，
3-DPG含量も対照に比べると有意
ルを保っており，
に高かった.
M.，a
n
dF
i
n
c
h， C
.A.:J
.C
l
i
n
.I
n
v
e
s
t
.，
3
5
，6
5
7，
1
9
5
6
1
0
)P
r
a
n
k
a
r
d，T.A.:B
r
i
t
.J
.Haemat.，1
，4
0
6，1
9
5
5
8
8
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2
，1
9
8
0
1
1
)K
a
s
h
k
e
t，S
.，R
u
b
i
n
s
t
e
i
n，D
.，andD
e
n
s
t
e
d
t，O
.F
.:
C
a
n
.]
.B
i
o
c
h
e
m
.P
h
y
s
i
・
0
1
.，35，8
2
7，1
9
5
7
1
2
) Lange，R
.D
.，Grosby， W.H.，Donohue， D
.M.，
Finch，C
.A.，
G
i
b
s
o
n，]
.G
.，
l
I MacManus，T.，
.
]
l
i
n
.I
n
v
e
s
t
.，3
7，1
4
8
5，
andS
t
r
u
m
i
a，M.M.:]
.C
1
9
5
8
1
3
)S
t
r
u
m
i
a，M.M.，
E
u
s
e
b
i，A.，
.
]a
n
dS
t
r
u
m
i
a，P
.V
.
:
]
.Lab，C
l
i
n
. Med.，7
1，1
3
8，1
9
6
8
1
4
)橘正道，中尾真，吉川春寿:生化学， 3
1，6
7
9，
1
9
5
9
1
5
)羽T
a
d
a，T.，Takaku，
F
.，Nakao， K
.
， Nakao，M.，
r
o
. ]atan
Nakao， T.，a
n
dYoshikawa，H.: P
Acad.，3
6，6
1
8，1
9
6
0
1
6
)中尾喜久，和田武久，神山照秋，中島真:日本内
科学会誌， 5
1，1
9，1
9
6
2
1
7
) Nakao，M.，Nakao，T.，Yoshikawa， H.，Wada，
r
o
.8
t
hC
o
n
g
r
.
T
.，Takaku，H.，
andNakao，K
.:P
5
5
，1962
I
n
t
.S
o
c
.B
l
o
o
dT
r
a
n
s
f
.，4
1
8
) Nakao，M.，O
z
a
k
i，T.，Nagano，K
.
， a
n
dNakao，
T
.
:P
r
o
. XIC
o
n
g
r
.I
n
t
.S
o
c
.B
l
o
o
dT
r
a
n
s
f
.
7
4
6，1
9
6
6
1
9
) Simon，E
.R
.
， Chapman，，P
.G
.，a
n
d Finch， C
.
A.:]
.C
l
i
n
.I
n
v
e
s
t
.4
1，3
5
1，1
9
6
2
2
0
)長井二三子，中尾順子，中尾真:東京衛研年報，
3
0
2，1
4
0，1
9
7
9
2
1
)長井二三子，中尾順子，中尾真:東京衛研年報，
5
5，1
9
7
8
2
9
2，1
2
2
)安田純一:血液製剤，近代出版， 6
1，1
9
7
9
2
3
)B
e
n
e
s
c
h，R
.
，B
e
n
e
s
c
h
，R
.E
.，a
n
dYu，C
.I
.:P
r
o
.
N
a
t
. Acad. S
c
i
.，5
9，5
2
6，1
9
6
7
東京衛研年報
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
..
3
1
2，8
9
9
5，1
9
8
0
培養細胞を用いた変異原物質スクリ一二ンゲのための代謝活性化法の検討
既 知 変 異 原 物 質 に よ あ 染 色 体 異 常 及 び 姉 妹 染 色 分 体 交 換 (SCE) 誘 発 へ の 代 謝 活 性 化 の 影 響
縄井寿美子ぺ吉岡誠二*，中尾順子*，平賀輿吾*
Exarninationof Methodsby Metabolize Activation withS-9 MixforScreeningof
MutagensonCHOKlCe
l
ILine
同
InducedSisterChrornatidExchange (SCE) and
Chrornosorne AberrationbyMetabolized Mutagens
SUMIKONAWAI*，SEIJI YOSHIDA
ペ TOSHIKONAKAO*andKOGOHIRAGA*
n
it
r
o
s
o
a
m
i
n
e， シクロホスフアミド c
y
c
l
o
p
h
o
s
p
h
a
m
i
d
eCHO-K1
Keywords:ジメチルニトロソアミ γdimethyl
細胞 CHO-K1c
e
l
ll
i
n
e，姉妹染色分体交換 s
i
s
t
e
rc
h
r
o
m
a
t
i
de
x
c
h
a
n
g
e， 染色体異常 chromosome a
b
e
r
r
a
t
i
o
n，
S-9mix
c
y
c
l
o
p
h
o
s
p
h
a
m
i
d
e(CP):ICNp
h
a
r
m
a
c
e
n
t
r
i
c
a
l
s，I
n
c
はじめに
環境中の発癌性，変異原性物質のうちには. B
e
n
z
o
(
a
)
p
y
r
e
n
eや d
i
m
e
t
h
y
l
n
i
t
r
o
s
o
a
m
i
n
e(DMN)等のように，体
来の CHO
・
K1株を 10%仔牛血清添加 F12培養液を用
内で代謝活性化を受けて初めてその作用を現わす物質が
い，角型培養ピンにて密桧培養した.
あることが知られている.細胞レベルでの i
nv
i
t
r
oの変
2
. 細胞および培養 チャイニーズノ、ムスター卵巣由
3
. S-9mixの調整 S-9は矢作りの方法に基づいた.
(
A
r
o
c
l
o
r1
2
5
4
)
異原物質検索のための短期スグリーニングにおいては，
SD 系雄ラット
近年酸素誘導したラット肝ミクロゾームフラグション
100mg/kgで 1回腹腔内投与し，酵素誘導した肝ホモジ
(
S
9
m
i
x
) を薬物と同時に作用させて代謝活性化を図る
-9フラグションを，
ネートの S
i
v
o試験によらなければ検出で
方法が行われ，従来初 v
急速凍結させ， -80で保存したものを用いた.
S-9mixは N
a
t
a
r
a
j
a
n らの方法1)に従い調整した.
きなかったような物質の変異原性をも簡単に検出できる
ようになった.培養細胞での染色体異常および SCE誘
(5~6 週令〉に PCB
ドライアイスアセトシで
0
4
. 薬物調整および処理 DMNおよび CPは培養液
発の検索にも代謝活性化法は用いられているが，それら
に溶解して用いた.薬物処理は， DMNについては細胞
は S-9mixおよび薬物の細胞への処理方法において，
浮遊液に作用させる方法〈浮遊細胞処理法〉と，培養ピ
浮遊させた細胞に処理させる方法 1，
2
)と，付着した細胞に
ンに付着した細胞に直接処理する方法〈直接処理法〕と
そのまま処理させる方法ト町との 2つに大別でき，また処
の 2つを試み，また処理時聞についても検討した. CP
理時間についてもそれぞれ異っている.そこでわれわれ
・
K1細胞
は，チャイニ{ズノ、ムスター卵巣由来の CHO
には DMNでの実験の結果決定した処理方法，処理時聞
を用い， 代謝活性化により強力な変異原性を示す DMN
および c
ychrophosphamide(CP)を指標として，これま
でわれわれが行って来た SCEおよび染色体異常誘発に
を用いた.
2)等の
1)浮遊細胞処理法石館島町および Matsuoka
8時間培養し，培養ピ
方法に基づき行った.細胞播種後4
よる変異原物質のスグり{ニ γ グに代謝活性化法を導入
γに付着増殖した細胞を 0.25%トリプシン液で剥し， 2x
.2ml
，S-9mix
1
07/mlの細胞浮遊液 0.2ml，薬物溶液 O
すべく，その基礎実験として， S-9mixおよび薬物の細
あるいは培養液 1mlの割にスピッツ管に加え， 3
70 の温
胞への処理方法，処理時聞を検討することとした.
50 に傾けていれ，軽く振滋しながらそれぞれ
浴槽に約 3
材料および方法
3
0
分
， 6
0
分
， 1
8
0分間代謝活性化を行った.後 ，5mlの
1
. 試薬 F12培養液:日水製薬，仔牛血清:極東製
B
r
o
m
o
2
'
d
e
o
x
y
u
r
i
d
i
n
e (BUdR): SIGMA，
薬工業， 5
培養液を加え， 遠沈し上清を捨てて， 先に培養液 10ml
3
3
2
5
8H
o
e
c
h
s
t:和光純薬工業， ギムザ液: MERCK，
BUdR0
.
5
μg/mlを添加して 2
7
時間培養した.
NN
i
t
r
o
s
o
d
i
m
e
t
h
y
l
a
m
i
n
巴 (
DMN) :和光純薬工業，
2)直接処理法細胞を播種し 4
8
時間培養した後，培
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
41
，H
yakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
.
k
u，Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
2
*東京都立衛生研究所毒性部
ネ
を加えアルミホイルで被っておいた培養ピ γ に播き，
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.，R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
9
8
0
9
0
Table1. Frequency o
f SCEs p
e
rC
e
l
li
n
CHOK1 C
e
l
lL
inebyMethodo
f
C
e
l
lS
u
s
p
e
n
s
i
o
n Treatment w
i
t
h
V
a
r
i
o
u
sC
o
n
c
e
n
t
r
a
t
i
o
n
so
f DMN
f
t
e
r
andw
i
t
ho
rw
i
t
h
o
u
tS 9Mixa
D
i
f
f
e
r
e
n
tExposureTerm.
養液を捨て，薬物を溶かした培養液 5mlおよび S-9mixま
たは培養液 0
.25mlを加え，それぞれ 3
0
分
， 6
0
分
， 1
2
0
分
，
1
8
0分間培養し， 培養液 3mlで洗い，培養ピシをアルミ
ホイノレで被って， BUdRO.5μ g/mlを加えた培養液 1
0
回
mlで2
7
時間培養した.
5
. 標本作成 培養終了 2時間前に 0
.
1
μ g/mlのコノレ
セミドを加え，中期細胞を集めた.常法に従い，低張，
固定操作を行い，火焔乾燥法で標本を作った.染色は染
t
r
e
a
t
m
e
n
t
t
e
r
m
(
m
i
n
.
)
色体異常観察には 2 %ギムザ液を用い，また SCE観察
には先に報告した方法 10)で分染を行った.
0
0個の中期細
6
. 観察染色体異常検索については 1
30-S1)
胞を目安とし，異常保有細胞数および異常の種類を調べ
た. SCEについては 3
0の中期細胞を観察し，各々の細
No.of
c
e
l
l
s S
.E
.
C
E
s
/
c
e
l
l土 S
b
s
e
r
v
e
d
(mg/ml) o
d
o
s
e
8
0
4
0
2
0
1
0
1
9
3
0
3
0
3
0
3
0
3
0
1
8
.
3
3土 2
.
8
1
*
*
8
1
1
.
7
8土1.1
1
0
.
9
3土 0
.
7
8
6
.
8
7土 0
.
5
9
5
.
4
3土 0
.
4
9
.
2
2
4
.
6
0土 0
8
0
4
0
2
0
1
0
1
4
3
0
3
0
3
0
3
0
3
0
2
0
.
0
0土 0
.
8
2
*
*
1
3
.
2
7土 0
.
8
1
1
0
.
9
7土 0
.
6
8
7
.
8
0土 0
.
6
3
.
4
0
5
.
2
0土 0
4
.
6
3土 0
.
4
2
8
0
4
0
2
0
1
0
3
0
3
0
3
0
3
0
3
0
.
4
3
5
.
1
0土 0
.
4
1
5
.
0
0土 0
.
4
9
5
.
8
0土 0
4
.
9
7土 0
.
4
0
.
4
4
4
.
6
0土 0
8
0
4
0
2
0
1
0
3
0
3
0
3
0
3
0
3
0
5
.
8
0土 0
.
3
7
5
.
0
0土 0
.
3
9
5
.
2
6土 0
.
3
7
5
.
8
0土 0
.
4
8
5
.
9
0土 0
.
4
1
胞について SCE数を記録した.
結 果
DMNを用いて行った浮遊細胞処理法による SCE試
験の結果を T
able1に
， 染色体異常誘発試験の結果を
60-S
8
0分は細
Table2に示す. いずれにおいても処理時間 1
胞の状態が悪く，観察が十分にできなかったため除外し
た.結果を SCEについて見ると， S-9mixを加えない
ものでは， 3
0
分
， 6
0
分ともに DMNのどの用量でも対照
との差は認められなかったのに対し， S-9mixを加えた
3
0
ものでは， DMN10mgで 3
0
分処理が 6
.
8
7，6
0
分処理が
7
.
8
0と対照よりやや高い値を示し，それぞれ2
0，4
0，8
0
mgと用量の増加とともに SCEの増加が認められた.し
かし最高用量の 80mgでは， 3
0
分
， 6
0
分ともに分染され
ていない細胞がほとんどで，観察できたのは 9および 4
6
0
細胞だけであり，また 5 %以下の危険率で対照との聞に
有意差を示したのは，この 80mg群のみであった.処理
0
分より 6
0
分の方がどの用量でも幾分
時聞については， 3
高い SCE値を示した.染色体異常誘発試験について
S
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yd
i
f
f
e
r
e
n
tfromc
o
n
t
r
o
l (p<0.01)
1
) A
d
d
i
t
i
o
no
fS-9mix
料
は
， S-9mixを加えていないものでは高用最でも染色体
異常保有細胞の増加は見られなかったが， S-9mix
添加の
S-9mix添加群では，各処理時間の S-9mixのみの対照
もので、は， 6
0分処理で対照の 4 % (すべて g
a
p
) に対
に4.8~7.3 とややばらつきが見られた .DMN は S-9mix
し，異常保有細胞は 2
0，4
0，80mgでそれぞれ 6，1
1，
添加で SCE の大きな増加を示し，それぞれの処理時間
13.7%と増加の傾向を示し， b
r
e
a
kも 40mgで 2 %，8
0
以下の危険率で対照との聞に有意差を示して
群とも 5 %
mgで 7 %とやや増加した.しかし 3
0
分処理では 4
0，8
0
いるが，その用量は3
0
分では 3
0
r
h
g以上から， 6
0
分では
r
e
a
kが若干出現しているものの，異常保有細胞
mgで b
20mg以上から， 1
2
0分および 1
8
0分では 5mg以上から
r
e
a
kに用量一作用関係は見られなかった.
および b
で
， 1
2
0
分
， 1
8
0
分は 5mgですで、に 1 %以下の危険率とい
次に直接法により得られた SCE と染色体異常誘発試
2
0
分
， 1
8
0
分の 40mgでは，
う高い有意性を示した.なお 1
験の結果を T
able3および Table4に示す. S-9mix無添
分染像が得られなかった.染色体異常誘発試験の結果は
加群はどの処理時間でもいずれも対照との闘に有意な差
Table4に示したが， 3
0
分
， 6
0
分
， 1
2
0分は S-9mix添加
2
0
分 30mgで8
.
7とやや高い値
は見られなかった.ただ 1
群についてのみ， 1
8
0
分では S-9mix添加，無添加両方に
を示した.また 6
0分
， 1
2
0
分の 40mgでは，細胞毒性によ
ついて調べた. 3
0
分
， 6
0
分
， 1
2
0
分では， 1
2
0
分 40mgで
る分裂周期の遅れのため，分染像、が得られなかった.
0
分
， 6
0
分では
異常保有細胞出現率31%と高かったが， 3
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
9
1
t
r
e
a
t
m
e
n
t
term
(
m
i
n
.
)
9
0
1
0
0
5
0
5
0
5
0
7
.
8
8
.
0
6
.
0
6
.
0
1
0
.
0
95
1
0
0
1
0
0
7
1
5
0
1
3
.
7
1
1
.
0
6
.
0
1
.4
4
.
0
1
)
C!
2)
C2
。h q O
く%)
宮内
e
x
.3)
1
o
t
.4l
1
1
iτi
噌
GqO
四
b
4ntaa-
勿
1
7
2
1
1
“
，
。
i
唱
L
400O
L4
ununU
凸
004告の
7
0
1
0
0
7
0
8
8
b
r
e
a
k
E-a守・ム
a
b
e
r
r
a
n
t
1s
c
el
A戸 噌
噌E
No.of
c巴
l
1s
a
n
a
l
y
s
e
d
。04a
nunununu
o o a告 の 必 噌 i
民υ 9
“ 1。
4
h
za4L
n u q o a告 の 6
8
978
凸
U n U Aリ
ooa4aQG
6
0
UAUAunU
3
0
向
6
08
(mg/ml)
004告の必噌ム
3
085)
d
o
s
e
⋮
一
抑
Table2
. ChromosomeE
OK1Cel
1LinebyMethodo
fC
e
l
l8
u
s
p
e
n
s
i
o
n
f
f
e
c
t
so
fDMNonCH
Treatmentw
i
t
ho
rw
i
t
h
o
u
t8-9Mixa
f
t
e
rD
i
f
f
巴r
e
n
tExposure Term.
1
3
2
1
1
1
1
唱止内
3
、
，
ノ
、
、
ノ
、
ノ
、
、
ノ
、ノ
4qoaaτ ロリ
E
A
b
e
r
r
a
t
i
o
no
fc
h
r
o
m
a
t
i
dt
y
p
e
A
b
e
r
r
a
t
i
o
no
fchromosomet
y
p
e
Exchange
Othera
b
e
r
r
a
t
i
o
n
A
d
d
i
t
i
o
no
f8-9mix
最高40mgでも 6 %， 7 %という値で，この 1
2
0分処理群
8CE57を記録した 25μgで
， CPのみの場合の用量の 4
0
0
分
を含めていずれの群でも明確な用量一作用関係は認めら
の1
であった.また 7用量閉すべてに濃度による 8CEの増
れなかった.これに比べ 1
8
0分処理では，異常保有細胞
加が明確に現われ， 5μg以上から 3用量で 1 %以下の危
数は 40mgで30%という高い値を示し，また用量に伴う
険率を持って対照との間に高い有意差を示した.一方染
増加が認められ， b
r
e
a
kについても対照で 0， 5， 10mg
無
色体異常誘発については， 8CEの結果と異り， 8-9mix
でそれぞれ 1であるのに対し， 30mgで 1
2，40mgで 1
9と
処理群では異常保有細胞は 1
0，5mgとも増加は全く見ら
やはり用量に伴い急激な増加を見せた.また 40mgでは
-9mix処理により， 5
0，
75μgで22%，57%
れなかったが， 8
e
x
c
h
a
n
g
e も 9出現している.
と高い増加を示した.異常の種類についても b
r
e
a
kが 1
5
次に以上述べた DMNでの代謝活性化の結果から，最
も適当と思われた直接処理，
1
8
0分の代謝活性化で行っ
%
， 32%と高頻度で出現し，
%と高い値であった
また e
x
c
h
a
n
g
eも 6 %，2
3
100μgでは観察できたのは 3細 胞
た CPの実験結果を 8CEについては T
able5に，染色
のみであったが，そのいずれも臭常保有細胞であった.
体異常誘発についてはT
able6に示す. 8CEについては
考 察
DMN と異り， 8-9mix無添加群においてもわずかづつ
8-9mixを用いた代謝活性化法の 8CEおよび染色体
ではあるが用量に伴う増加が認められ， lOmgでは 8CE
異常誘発試験への導入は， Na
t
a
r
a
j
a
nllおよび Matsuoka
1
8
.
7と
， 1 %以下の危険率で対照4
.
5との聞に有意差が認
ヘ石館品目が深遊細胞処理法で，また 8
t
e
t
k
aと Wolff3，
4
)
められたが， 20mgでは分裂像は得られなかった. 8
-9
およびその他の人々 h引が付着した細胞に直接処理する
mlxを加えたものでは細胞への毒作用が強まって， 5
0
方法で試み，処理時間はそれぞれ異っているが，いずれ
μgでは分染像は見られず，
も良い結果を報告している.しかし浮遊細胞処理による
観察できた最大用量は突に
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
9
8
0
92
Table3
. Frequency o
f SCEs p
e
r C
e
l
li
n
CHO-K1 C
e
l
lL
i
n
ebyMethod o
f
C
e
l
lS
e
a
tTreatmentw
i
t
hV
a
r
i
o
u
s
C
o
n
c
e
n
t
r
a
t
i
o
n
so
fDMN，andw
i
t
h
o
rw
i
t
h
o
u
tS-9Mixa
f
t
e
rD
i
f
f
e
r
e
n
t
Exposure Term.
t
r
e
a
t
m
巴n
t
d
o
s
e
term
(
m
i
n
.
)
(mg/ml)
。
内
nUAUAUnUAUnunu一AUAUAU
qO
nanonoqδηo-qoqo
*p<0.05
料
p<O;Ol
1
) A
d
d
i
t
i
o
no
fS-9mix
3
0
30
却叩一叩鈎却一回
1
8
0
。
向
1
2
0
nunUAUnUAunu
ooqoqoqoqoqo
60
40
3
0
20
1
0
5
1
0
.
5
凸
UAUAU一nununu
nunり
一nununU一，佐
一AUq
a告 nO の
L一a
A官 qO 円
L-aA-qonL
oη6
3
0
Aリ AUnunu-hd i
噌
1
80S
A-no 。，白噌 i
1
2
0
S
40
3
0
2
0
1
0
5
1
Aり のUAUAUEU i
唱
A
“百円。。 L 唱土
60-S
nUAUAUnunununu一nunUAUAUAUnunu
oa o
内 qoqoqoqoqo
一noqonoqaqonδqo
30-S1)
No. o
f
c
e
l
l
s
o
b
s
e
r
v
巴d
SCEs土 S.E.
2
0
.
3
6土1.1
0
*
.
9
8
*
2
0
.1
3土 0
1
9
.
5
7土1.36
1
7
.
8
0土1.0
0
.
9
1
1
4
.
0
3土 0
1
0
.
2
0土 0
.
5
5
.
5
1
6
.
4
0土 0
2
8
.
4
0土1.4
8
*キ
2
9
.
8
3土1.3
7
*
*
3
4
.
3
0土 2
.
0
9
*
2
1
.
0
0土1.54
2
3
.
6
0土 1
.
6
6
.
6
9
9
.
2
0土 0
5
.
5
3土 0
.
4
5
1
8
0
分の代謝活性化は， Matsuoka，石館が推奨している
にもかかわらず，われわれの DMNを指標とした実験では
分析不能であった.これは用いた細胞種，処理後の培養方
法などの違いによるものかとも考えられる .
3
0
分
，6
0
分処
0分処理の高用量で
理についても染色体異常誘発では， 6
0
分では特に差は見られず (
T
a
b
l
e
やや増加したものの 3
2
)，また SCEでは 3
0
分
，6
0
分ともに用量一作用関係が見
られたが，有意差の見られたのは最高用量 80mgの 1点
8，20とそれ程高くはなかった
のみであり， SCE値も 1
(
T
a
b
l
e1
)のに対し，直接処理法の場合には，染色体異常
8
0分処理が他の 3
0分
， 6
0分
， 1
2
0分
誘発については， 1
処理に比べ異常細胞出現喜界も高く (
T
a
b
l
e4
)，F
i
g
.
1に示
したように明確な用量一作用関係を示した
SCEにつ
0
分処理はその増加のカ{ブもなだらかで
いて見ると， 3
SCEの最高値も余り高くはないが， 6
0
分
， 1
2
0
分
， 1
8
0
分
は
，
1~5mg の間で急激な増加が見られ，特に 120 分，
1
8
0
分では SC E4
0以上を示す飽和と思われるような高
い SCEを有する細胞の出現も認められた (
T
a
b
l
e3
)
.ま
た処理時聞に比例して，より低用量から対照との聞で有
3
0
.
2
0土 1
.
8
7
キ*
2
7
.
1
7土1.6
9
*
2
4
.
9
0土1.4
3
*
7
*
*
3
1
.
1
3土1.5
1
.4
3土 1
.
3
2
2
7
.
3
0土0
.
5
3
31
.1
3土1.2
9
料
2
3
.
3
7土1.3
3
*
2
*
2
6
.
7
7土1.7
2
6
.
5
7土1.3
4
*
*
1
4
.
2
3土1.22
.
5
9
9
.
5
3土0
4
.77土 0
.
3
8
意差を示す傾向が見られ，これらのことを先の染色体異
常での結果と考え合わせると，処理方法では直接処理，
処理時間では 1
8
0分を用いるのが適当であると考えた.
この条件で次に行った CPの結果も， F
i
g
.
2に示したよ
うに SCE，染色体異常誘発の両試験とも，代謝活性化に
より急激な上昇カーブが認められ，強い用量一作用関係
を示して満足できるものであった.また CPは S-9mix
無添加の場合にも， SCEに関してはゆるやかではある
が用量に伴う増加が認められ， CHO細胞での P
e
r
r
yl
)
，
S
t
e
t
k
a3)らの結果と一致した.これは DMNが肝細胞に
よってのみ活性化されるのに対し， CHO細胞自身がわ
6
.
3
3土 0
.
3
6
6
.1
3土 0
.
6
1
6
.
7
7土 0
.
4
9
ずかながらも CPを活性化できることを示すものと思わ
7
.
1
3土 0
.
5
8
5
.
5
3土 0
.
4
6
われの結果は，
れる.しかしわれわれの実験では， S-9mixの有無によ
り用量に約 2，
0
0
0倍の大きな開きが見られた.またわれ
CP の SCE 誘発を調べた S
t
e
t
k
aと
Wolff
めの報告に比べても， S-9mix処理を行った場合に
0倍感度が高いが，これは彼らの行った処理
は用量で約 1
.
6
6
8
.
7
0土 0
7
.
0
3土 0
.
5
1
5
.
2
0土 0
.
4
0
.
3
6
5
.
1
3土 0
.
4
4
5
.
4
0土 0
5
.
2
0土 0
.
4
7
時間が 2
0
分と短いためかとも考えられる. DMN も CP
も代謝活性化により DNAをアルキル化して変異原とな
るが，われわれの実験ではその強さは，染色体臭常誘発
では約 1
0
0
倍の用量差， SCE誘発では約 1
0
0
0倍の用量差
で CPの方が強く，また染色体異常および SCE誘発数
でも， CP の方がかなり上まわっていた. DMNに比べ
C Pは強力な変異原であるといえる.
ところで，薬物の用量に関して SCE と染色体異常誘
発とを比べてみると， CP では染色体異常の増加がみら
9
8
0
1
2，1
来 京樹 研 年報 3
93
. ChromosomalE
Table4
f
f
e
c
t
so
fDMNonCHO
一K1C
e
l
lL
i
n
ebyMethodo
fC
e
l
lS
e
a
t
Treatmentw
i
t
ho
rw
i
t
h
o
u
tS-9Mixa
f
t
e
rD
i
f
f
e
r
e
n
tExposureTerm.
一のよ“
一﹀
2
一C
au-
1K一
1
1
1
2
1131
90 の
L
4
14
4
.
0
a
噌E
噌E
白
目
1
1
2
1
9
4
4
6
4
1
9
1
1
2
1
5
1
1
1
1
1
1
。G a
告
。
円
q
δ
に
ununUAU
nUAUnu
a佳 qono
Z4aa
5
.
3
5
.
0
唱 止 の4
10.3
8
.
1
8
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
o
t
.4)
a白目
1
0
.
4
2
噌E目 白 司
96
75
1
0
0
1
EA
30.0
22.0
1
7
.
0
1
1
.0
噌 ' 目 白 内γ“ 噌
1
0
0
100
1
0
0
1
0
0
4
内a
ιτ
ooqO 噌よ 0600 o
3
1
.0
6
.
0
e
x
.3)
1
ηoqoη6
n u n u n u n U E臼 守 よ
aazηon4 i
噌
2
9
100
3
9
1
1
1
1
0
0
qonO i
噌
100
1
0
0
5
0
E
E
a
100
100
γA-
1
5
.
0
2.0
1
.
7
ρし
6
.
0
2
)
C2
v-
100
1
0
0
1
0
0
5
9
一噌
C111
一1
く%)
nUAUnununu
可
'ηononoqG
nunununu
dιzqO の 必 唱i
180
nUAUnUAU
aaτnana i
噌
180-S
“
，
120-S
a
b
e
r
r
a
n
t
c
e
l
l
s
一﹀
A U Aリ ハ リ
dιτ o
内 n
6
0
S
gap
No.of
c
e
l
l
s
a
n
a
l
y
s
e
d
一C
30-S5)
噌
(mg/ml)
d
o
s
e
b
t
r
e
a
t
m
e
n
t
term
(
m
i
n
.
)
14ηGnoaqFb
、ノ、ノ、︼ノ、︼ノ、ノ
A
b
e
r
r
a
t
i
o
no
fc
h
r
o
m
a
t
i
dt
y
p
e
A
b
e
r
r
a
t
i
o
no
fchromosomet
y
p
e
Exchange
Othera
b
e
r
r
a
t
i
o
n
A
d
d
i
t
i
o
no
fS-9mix
れるより約 1
0分の lの用量で SCE の有意な上昇が見ら
謝活性化に要する時間と活性化の程度 13九および活性化
れ，また DMNでは交換型の異常の誘発に着目すると，
された物質の保持時聞は薬物により異り，たとえば 2
-
SCEはこの約 8分の 1の用量である
AAFでは， SCEに関して，代謝活性化時間30
分では全
SCEに関するこ
れまでの報告ω でも， SCE試験は染色体異常誘発試験
く増加は見られないが， 2
.
5時間で 2倍
より薬物の低い濃度で検出できるといわれ，このことは
と，処理時間の長さに応じて増加することが報告りされ
5時間で 3倍
SCE検索の利点の lつとされているが， 今回の直接法
ており，彼らはその中で，陰性の結果を得たものについ
による 1
8
0分の代謝活性化試験でも，結果は良く符合し
ては処理時閣をさらに延ばして再検査することが必要で
た.またこの方法は浮遊細胞処理法に比べて簡便で，時
あると述べている. この代謝活性化時間の問題の他に
間も短縮できるので，この点もスクりーニシグとして用
も
， S-9を作成する際の誘導物質および用いる動物の種
いる場合には大きな利点となると考えられる.しかし代
類 L 薬物および用いる細胞の種類によりその代謝活性
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，1
9
8
0
94
10 20
5
00
2
50
1
00
A U n u n U A U n u n u n u nリ
qoqoqO o
内 qanoqoqo
5
0.5
d
o
s
e
No. o
f
t
r
e
a
t
m
e
n
t
t
e
r
m
(
μg/ml)。 c
e
l
l
s
S
C
E
s
/
c
e
l
l土 S.E.
b
s
e
r
v
e
d
(
m
i
n
.
) (mg/ml) o
一
一
1
。
H
H
M
M
W
H
H
ω
A
M
ω
(ω}ωロO
ω民 自 由ogoN﹄O ﹄#叶BmHHωo
20
勺ム胆・
3
0
u
︽
nu
HHOO¥ω 同U田
30
・
K1
fSCEsp
e
rC
e
l
li
nCHO
Table5
. Frequencyo
C
e
l
lL
i
n
e by Method o
fC
e
l
lS
e
a
t
Treatmentw
i
t
hV
a
r
i
o
u
sC
o
n
c
e
n
t
r
a
t
i
o
n
s
o
fCP and w
i
t
ho
rw
i
t
h
o
u
t S-9 mix
f
o
r1
8
0Min.
50
40
1
8
0
δ 1)
DMN (mg/ml)
2
.
50
0
1
.0
F
i
g
.1
.I
n
c
r
e
a
s
eo
fSCEsandchromosomala
b
e
r
r
a
t
i
o
n
si
n CHO-K1c
e
l
l
st
r
e
a
t
e
dw
i
t
hS-9mixand
v
a
r
i
o
u
sc
o
n
c
e
n
t
r
a
t
i
o
n
so
fDMNf
o
rd
i
f
f
e
r
e
n
tt
e
r
m，
30(0)，6
0
(
ム
)
， 1
2
0
(
口
)
， 1
80(x) m
i
n
.E
x
p
r
e
s
s
i
o
n
t
i
m
ei
s27h
r
. Thes
巴 f
i
g
u
r
e
sa
r
es
u
b
t
r
a
c
t
e
de
a
c
h
c
o
n
t
r
o
l
'
sfromp
r
a
c
t
i
c
a
l
'
s
. Breakl
i
n
ei
sp
e
r
c
e
n
to
f
c
e
l
l
sw
i
t
hchromosomala
b
e
r
r
a
t
i
o
n
s
.
0
.
50
0
.
2
50
i
n U A U A U A U Aリ AU
-qdqo o q o n O
一
0の 必0
521a
噌
。
内
れ，代謝活性化法を用いたスクリーニシグの際には十分
1
8
.
7
3土 0
.
8
7
*
*
.
6
9
1
2
.
8
0土 0
1
0
.
1
0土 0
.
6
3
.
5
3
6
.
6
0土 0
.
4
5
5
.
5
0土 0
.
4
5
4
.
5
3土0
。
に
UAUFD
1
8
0
化に大きな影響を及ぼす要因となり得ることが考えら
5
6
.
9
7土1.6
1
*
ホ
3
3
.
5
0土1.3
8
*
*
8
*
*
2
3
.
1
7土1.0
.
8
1
1
3
.
7
3土 0
.
6
3
9.37土 0
.
4
8
7
.
0
3土 0
.
4
5
6
.
2
0土 0
.
4
8
5
.
5
7土 0
注意すべき要素である.われわれは今回の実験から ，i
n
v
i
t
r
o での染色体異常誘発および SCE試験に，代謝活
性化法として 1
8
0分間の代謝活性化時聞による直接処理
を導入することを決めたが，陰性の結果を得たものにつ
料
S
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yd
i
f
f
e
r
e
n
tfromc
o
n
t
r
o
l (p<O.Ol)
1
) A
d
d
i
t
i
o
no
fS-9m
i
i
x
Table6
. ChromosomeE
f
f
e
c
t
so
fCP onCHO-K1C
e
l
lL
i
n
ebyMethodo
fC
e
l
lS
e
a
t
Treatmentw
i
t
ho
rw
i
t
h
o
u
tS-9Mixf
o
r1
8
0Min.
・u
obnB
J0
gi.-G
、
く%)
x
.3)
守Eim
1
01
.4)
142
2
2)
C2
i
噌
1
C11)
目υ P O τ 上
E
、ーノ、，ノ、 ノ、 ノ、 ノ
1
2345
E
1
A
b
e
r
r
a
t
i
o
no
fc
h
r
o
m
a
t
i
dt
y
p
e
A
b
e
r
r
a
t
i
o
no
fchromosomet
y
p
e
Exchange
Othera
b
e
r
r
a
t
i
o
n
A
d
d
i
t
i
o
no
fS-9mix
1
1
04
1
.0
4
.
0
2
.
8
2)
C2
ー ム 内0
1
0
0
1
0
0
72
。
1 4 dせ 9
“
1
0
0
.
0
5
7
.
1
2
2
.
0
3
.
0
2
.
4
4
.
2
3
.
b
r
e
a
k
巴
ム
6
3
1
0
0
1
0
0
85
95
1
0
0
gap
C11)
nuzunG
n4 i
噌
3
a
b
e
r
r
a
n
t
c
e
l
l
s
2441241
1
0
5
一一日u
噌E4
1
8
0
ψmyψATψmTψATψmTψAT
叩
nURυnuronUEU
0
7521
1
8
0S
5
)
‘
， HHVd
d
o
s
e
(
μg/ml)*
(mg/ml)
hα ，M
t
r
e
a
t
m
e
n
t
t
巴r
m
(
m
i
n
.
)
東 京 術
研 年報
3
1
2，1
9
8
0
95
謝活性化により強い変異原性を示す発癌物質， DMNを
60
指標として，細胞への薬物および S-9mixの処理方法，
処理時聞を検討した結果，培養ピ γに付着した細胞に直
{
t
。
到
50
ωロO
J
﹄附
30
10
20
ωHHωυ
40
白川恒叶与
20
ωaomO民ON﹄045
HHωυ¥ω 同U 目
M
h
H
ω
伺
門川W
40
接 S-9mixおよび薬物を 1
8
0分間作用させる方法が最も
適当で、あると結論した.このことは，この条件で行った
代謝活性化により同様に強い変異原性を示すことが知ら
れている CP の実験で，顕著な染色体異常および SCE
の誘発が，強い用量一作用関係を伴って現われたことか
ら確かめられた.
文 献
1
)N
a
t
a
r
a
j
o
n，A.T.，Tates，A.D
.，andVanBuul，
P
.P
. W.: M
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，37，83，1976
s
h
i
d
a
t
e，M.:
2
) Matsuoka，A.，Hayashi，M.，and I
MutatronR
e
s
.，66，277，1979
5075
CP
(0) ~g/m1
(・) mg/m1
F
i
g
.2
.I
n
c
r
e
a
s
eo
fSCEsandchromosomala
b
e
r
r
a
.
t
i
o
n
si
n CHO.K1c
e
l
l
st
r
e
a
t
e
dw
i
t
hv
a
r
i
o
u
sc
o
n
.
c
e
n
t
r
a
t
i
o
n
so
fCP，andw
i
t
h(0)o
rw
i
t
h
o
u
t(
・
〉
S-9mixf
o
r1
8
0
m
i
n
. Break l
i
n
ei
sp
e
r
c
e
n
to
f
c
e
l
l
sw
i
t
hchromosomal a
b
e
r
r
a
t
i
o
n
s
. Thesef
i
g
u
r
e
s
a
r
es
u
b
t
r
a
c
t
e
de
a
c
hc
o
n
t
r
o
l
'
sfromp
r
a
c
t
i
c
al
's
.
.G
.，and W o
l
f
f， S
.
:M
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，
3
)S
t
e
t
k
a，D
4
1，3
4
3，1
9
7
6
4
)S
t
e
t
k
a
，D
.G
.，a
n
dWolff，S
.
:M
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，5
8，
1
0
3，1
9
7
8
.，
Katy，M.L
.，andKazmar，S
.:Mu.
5
)W
e
i
n
s
t
e
i
n，D
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，46，297，1977
6
) DERaat，W.K
.:M
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，6
6，2
5
3，1
9
7
9
7
)矢作多貴江蛋白質核酸酵素， 20，1
6，1
9
7
5
いては，以上述べたようなことをふまえて，さらに実験
を重ねる必要があると思われる.
要 旨
培養細胞を用いた i
nv
i
t
r
oでの発癌性および変異原性
物質のスグリーユソグにおいて， S-9mix を用いて薬物
の代謝活性化を図ることは，薬物の変異原性を考える上
8
) 石館基:変異原と毒性， 4
，6
4，1
9
7
8
9
) 石館基:組織培養， 5，1
1
5，1
9
7
9
1
0
)縄井寿美子，吉田誠二，益淵正典:東京衛研年報，
2
9
2，1
6
7，1
9
7
8
.，andEvans，H.J
.:
Nature
，258，121，
1
1
)P
e
r
r
y，P
1
9
7
5
でより正確な知見をもたらすものである.われわれは，
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，2
8，
1
2
) Kato，H.，andShimada，H.:M
これまで行って来た CHO.K1細胞を用いた i
nv
i
t
r
oで
4
5
9，1
9
7
5
e
s
k
e
t
e，L
.C
. :M
u
t
a
t
i
o
n
1
3
) White
， A.D
.， and H
の SCEおよび染色体異常誘発物質の検索のスグリーニ
シグに， S-9mixによる代謝活性化法を導入すベく，代
R
e
s
.，6
9，2
8
3，1
9
8
0
東京衛研年報
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，9
6
9
8，1
9
8
0
ジブチルヒドロキシトルエン (BHT) 投与ラ・y卜の肝 9，
000xg上清 (S・
9
)
分画による突然変異物質の代謝活性化について
小嶋昭江*，藤田
f
専*，平賀輿吾*
MutagenicActivationofMutagenicChemicalsbyLiver9，
000xgSupernatantFractions
from ButylatedHydroxytoluene(BHT)treatedRats
幽
n
dKOGOHIRAGA*
AKIEKO]IMA*，HIR05HIFU]ITA*a
Keywords:突然変異性 m
u
t
a
g
e
n
i
c
i
t
y
，ジブチルヒドロキシトル.:r.:/ b
u
t
y
l
a
t
e
dh
y
d
r
o
x
y
t
o
l
u
e
n
e
日
・
ー
肝臓の肥大および薬物代謝酵素の誘導を起すフェノバ
ルピタール (PB)や，ポリ塩化ピフェニ{ノレ (PCB)を
和光純薬)， PB(フェノパルピタール，吉田製薬)， PCB
投与したラットの肝ホモジネ{ト 9
，
000xg上清 (
5
9
)
メチルスルホキサイド，和光純薬〕
緒
分画が，投与しないラットの 5-9に比べて ，
i
nv
i
t
r
oにお
(アロクロール 1
2
5
4
， 三 菱 モ γサ γ ト化成)，シクロヘ
キセ γオキサイド (
A
l
d
r
i
c
hC
h
e
m
i
c
a
lC
o
.
)，DM50(
ジ
2
. 動物および投与方法
ける突然変異物質の突然変異性を増強することを Ames
]CL-5D系雄ラットを 4週令で購入し， 1週間，予備飼
ら1) が報告して以来，この方法は突然変異性の検出試験
育後実験に供した.飼料は日本グレア製固型飼料 CE-2
に広く用いられている.
を与えた.
ジブチルヒドロキシトルエン (BHT)はラットに組織
3
におよび
障害を伴わない PB型の肝重量の増加 2，
aml・
BHTはコーンオイル溶液として， 400mg，
800mg/kg
B.W.を 2日間隔で 2回経口投与し，投与後 2日自に屠
n
o
p
y
r
i
n
ed
e
m
e
t
h
y
l
a
s
e，c
y
t
o
c
h
r
o
m
eP-45
0などの薬物代
殺して肝臓を摘出した
謝酵素を誘導するらぬことが知られている.また， BHT，
日間飲水の代りに投与し，
PBはO
.1%水溶液を屠殺前の 7
PCB はコー γオイル溶液と
フーチルヒドロキシアニソ{ル，エトキシキ γ などの酸化
.W.を腹腔内に投与し，投与後 5日
して， 500mg/kgB
防止剤が発がん物質による発がんを抑制するという報告
自に肝臓を摘出した.なお，対照として無処理群とコー
nv
i
t
r
oにおける作用とし
もあるト町.一方， BHT の i
ンオイル投与群をもうけた.
ω ， あるいは増
て，突然変異物質の突然変異性を減少 9，
3
. 8-9分画および 8-9Mixの調製
加1りさせるという報告がある.
矢作の方法 12)に従って行った.
これらのことから，われわれは突然変異試験の 5
-9を
調製する動物に投与する薬物代謝酵素誘導剤として，
4
. 突然変異性試験
AAF，AA，B(a)Pは DM50に溶解し ，S
a
l
m
o
n
e
l
l
a
BHT を使用する可能性を検討するために， BHT を投
t
y
ρhimuriumTA98株を用いて Amesの方法 1，
1
8
)に2
0
-9を 調 製 し こ の 5
9を用いて 2
ーアセ
与したラットの 5
分間の前培養を加えた変法 12)で突然変異性を試験した.
チルアミノフルオレン， 2
-アミノア γ トラセン，ベシツ
DMNは滅菌生理食塩水に溶解し， TA100株を用いて
(
a
)ピレン， ジメチルニトロサミンの突然変異性を試験
同様の方法で、試験を行った.結果は各々プレート 3枚の
し
， PBあるいは PCBを投与したラットの 5
9を用い
平均値で示した.
た場合の突然変異性と比較した.
実験材料および方法
5
. シクロヘキセンオキサイドの添加
e
p
o
x
i
d
eh
y
d
r
a
t
a
s巴の阻害剤であるシクロヘキセシオ
1
. 試薬
キサイドは DM50に溶解し，その 0
.05mlを B(α)Pの
BHT (ジブチノレヒドロキシトノレエン，和光純薬)，
試験系に加えた. この実験のプレート当りの 5-9量は
AAF (
2
ーアセチルアミノフルオレシ， 和光純薬)， AA
(
2
-アミノアントラセン，和光純薬)， B(α)P (ベンツ
(
a
)ピレ γ ，和光純薬)， DMN(ジメチルニトロサミン，
1
5
0
μ
Jとした.
結果および考察
T
a
b
l
e1に各投与群の屠殺時の体重および肝重量を示
1
6
0 東京都新宿区百人町 3ー 24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
2
41
，H
yakunincho3chome，5
h
i
n
j
u
k
u
k
u， Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
*東京都立衛生研究所毒性部
東 京 衛
研
1
2，1
9
8
0
年報 3
i
v
e
rWeights o
fR
a
t
s
Table1
. BodyandL
T
r
e
a
t
e
dw
i
t
hBHT，PBandPCB
Treatment
No.of Body
w
e
i
g
h
t
r
a
t
s (g)
g
/
1
0
0
gB
.W.
戸
O
氏V 氏U
4
け
dA 惜
h
戸 u A官
9uoAH
1
2
.
4
1
1
.5
1
1
.
9
1
3
.
3
9
.
8
8
.
6
1
8
5
1
6
7
1
7
8
1
7
4
1
8
2
1
8
1
常に低かった
797648
。“。ゐヴ
BHT(
4
0
0mg)
BHT(
8
0
0mg)
PB
PCB
Corno
i
l
C
o
n
t
r
o
l
よび無処理群の 3-9を使用した時に高く， PCB投与群
を使用した場合にはいずれの 3-9
量においても非
の 3-9
L
i
v
e
rw
e
i
g
h
t
g
9
7
PB群の 3-9による突然変異性は 3-9の
量が増えるに従って減少し BHT800mg群の 3-9によ
る突然変異性も PBの場合よりは高いが 3-9の増加に伴
って減少傾向を示した.
B(α)P の場合は PCB投与群の 3-9による突然変異
性が 3-9150μJで高く， PB群の 3-9の場合は全体に低
かった
BHT両群の 3-9による突然変異性はいずれの
3-9
量においても，コ{ンオイルおよび無処理群の場合
より低かった.
した.体重 1
0
0
g当りの肝重量は無処理群の 4
.
8
g， コ {
γオイル投与群の 5
.
4
gに比較して， BHT400mg/kgB.
W.投与群 (BHT400mg群〉は 6
.
7
g，BHT800mg/l
沼
B.W.投与群 (BHT800mg群〉は 6
.
9
gと増加傾向を
DMNの突然変異性は PBおよび PCB投与群の 3-9
を使用した場合にコーシオイルおよび無処理群の 3-9を
使用した場合より高かった. BHT両群の 3-9による突
-9と比較してほとんど差は認め
然変異性は両対照群の 3
られなかった.
.
6
gよりは低いが， PB
示した.この値は PCB投与群の 7
投与群 (
6
.
7
g
) とほぼ同じであった.
F
i
g
.
1に各 3-9Mix中の 3-9の量を変えて行った 4
種類の突然変異物質の突然変異試験の結果を示した.
AAF の場合，無処理群の 3-9に比較して，コー γ オイ
ルおよび PCB投与群の 3-9による突然変異性は低く，
PB投与 3-9による突然変異性はいずれの 3-9量におい
ても非常に高かった. BHT400mg群の 3-9による突然
BHT投与群の 3-9は 4種の突然変異物質に対して PB
投与群の 3-9とほぼ同じ型の突然変異性を示したが，
AAF と DMNに対しては PB投与群の 3-9より低い
突然変異性を示した.また， PCB投与群の 3-9を使用
した場合に高かった B(a)Pに対する突然変異性も BHT
投与群の 3-9を使用した場合低かった.これらの結果か
ら従来の薬物代謝酵素誘導剤の代りに突然変異試験に
変異性は無処理群の場合よりやや低く， BHT800mg群
BHT を投与したラットの 3-9を用いる著しい利点は見
による突然変異性は無処理群および BHT400mg群の場
い出されなかった.
BHT，ブチルヒドロキ、ンアニソールおよびエトキ、ンキ
合より高かった.
A A の突然変異性はコ { γ オイル， BHT400mg群お
1
0
0
AAF 10
]
lg
1
0
0
ンなどの酸化防止剤が肝ミグロソームの e
p
o
x
i
d
eh
y
d
r
a
.
5
AA 2]
lg
5
B
(
a
}
P 工0υq
DMN 5mg
N
o
.
1
80
4
4
3
3
40
2
2
1
-
20
工
l
ム
x
i
6
0
向
、
、
t
J
)
~ 4
0
4
E
t
E
国
間
520
。
5
0
1
0
0
1
5
0
。
0
5
0
1
0
0
1
5
0
5
0
1
0
0
1
5
0
0
5
0
1
0
0
1
5
0
S-9/PLATE 日
( 1)
h
e3-9F
r
a
c
t
i
o
n
sfromBHT4
0
0
c
t
i
v
a
t
i
o
no
fAAF，A A，B(a)P andDMNbyt
F
i
g
.
1
. MutagenicA
nd Corn O
i
l(
口
〕
ーt
r
e
a
t
e
dR
a
t
s and U
n
t
r
e
a
t
e
d
・
〉
一
， PB(
ム
〉
一
， PCB(企)-a
，
一 BHT 800mg(
mg(0)
〈・)R
a
t
s
.
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1
9
8
0
98
フルオレ γ，2
ーアミノアントラセシ，ベンツ〈α〕ピレ γ，
8
A98，T A1
0
0株に対する突然変異性を調べた. 現在使
用されているフェノパルピタ{ノレるるいはポリ塩化ピフ
roA-
白
つ
F 凶向
¥ωhzdh肖同
N 1 0 H X 凶 U︿
﹀同肖
ジメチノレニトロサミ γの S
a
l
m
o
n
e
l
l
at
y
ρhimuriumT
ェニ{ルを使用した場合と比較して，高い突然変異性は
得られなかった.
文 献
1
) Ames，B
.N.，D
u
r
s
t
o
n，羽T
.E
.，Yamasaki，E
.，and
Lee，F
.D.: P
r
o
c
.N
a
t
. Acad. S
c
i
.U
.S
.A
.，
7
0，2
2
8
1，1
9
7
3
.，Clemmer
，J
.J
.，Rokoczy
，R
.
，
2
)Deichman， W.B
andB
i
a
n
c
h
i
n
e，J
.
:A
r
c
h
s
.i
n
d
. Hyg.，1
1，93，
1
9
5
5
。
。
3)Brown，W.D
.，Johnson，A.R
.
， a
ndO
'
H
a
l
l
o
r
a
n，
M.W.:A
u
s
t
.]
.E
x
t
.B
i
o
l
. Med. S
c
i
.，3
7，
7
10-
10-6
工O5
CYCLOHEXENE OX工DE (
mo1e)
四
F
i
g
.2
. E
f
f
e
c
to
fC
y
c
l
o
h
e
x
e
n
e Oxide on t
h
eB
(
a
)P M
u
t
a
g
e
n
i
c
i
t
yMediatedbyt
h
eS-9F
r
a
c
t
i
o
n
s
from BHT 8
0
0mg(・)-and PCB(
企
〉
ーt
r
e
a
t
e
d
R
a
t
sandU
n
t
r
e
a
t
e
d(圃)R
a
t
s
.
1
5
) e
p
o
x
i
d
eh
y
d
r
a
t
a
s
eを誘導するという報告がある 14，
t
a
s
eはエポキシドを加水分解する酵素で ，B(a)Ph
y
d
r
o
x
y
l
a
s
e とともに B(a)Pの代謝に関与する 16)といわれて
いる.精製したこの酵素を加えることにより B(α)P の
突然変異性は減少する 17) そこで B(a)P の突然変異試
験系に e
p
o
x
i
d
eh
y
d
r
a
t
a
s
eの阻害剤で、あるシクロヘキセン
F
i
g
.
2
)
. シクロヘキ
オキサイドを加える実験を行った (
セシオキサイドを
5
3
3，1
9
5
9
5m
1
0
ole加えた場合，無処理および
.，and G
o
l
b
e
r
g，L.: FdC
o
s
m
e
t
.T
o
4
)G
i
l
b
e
r
t，D
x
i
c
o
l
.，3，417，1965
5
) 有吉敏彦，高畠英伍:食衛誌， 1
4，7
5，1
9
7
3
6
)S
p
e
i
e
r，J
.L
.
， Lam， L
.K. T.，and Wattenberg
，
L
.W.: ]
.N
a
t
l
. CancerI
n
s
t
.，6
0，6
0
5，1
9
7
8
a
t
t
e
n
b
e
r
g，L.羽T.: ]
.N
a
t
l
. CancerI
n
s
t
.，5
4，
7
)羽T
1
0
0
5，1
9
7
5
.K
.
， E
v
a
r
t
s， R
.P
.， and Wenk，
8
) Weisburger， E
M.L.: FdC
o
s
m
e
t
.T
o
x
i
c
o
l
.，1
51
3
9，1
9
7
7
9
)Rahimutula，A.D
.，Z
a
c
h
a
r
i
a
h，R
.K
.
，a
ndO
'
B
r
i
e
n，
P
.J
.:B
i
o
c
h
e
m
.]
.
， 1
6
4，4
7
3，1
9
7
7
.M.，S
u
l
l
i
v
a
n， P
.D
.，Nettleman，M.D
.，
1
0
)C
a
l
l
e，L
O
c
a
s
i
o，1
.J
.，B
l
a
z
y
k，J
.，and J
o
l
l
i
c
k，J
.
: B
.B
.
R.C
.，8
5，3
5
1，1
9
7
8
PCB投与群の S-9による B(a)Pの突然変異性はほとん
1
1
)藤田博，平賀輿吾東京衛研年報， 2
9
2，40， 1
9
7
8
ど変化がなかったが， BHT800mg投与群の S-9による
1
2
) 矢作多貴江:蛋白質核酸酵素， 2
0，1
1
7
8，1
9
7
5
突然変異性は 3倍に増加した.この結果により BHT投
.N.，McCann，J
.C
.，andYamasaki，.
E
.:
1
3
) Ames，B
与群の S-9による B(a)P の突然変異性の低下は BHT
MutationR
e
s
.，3
1，3
4
7，1
9
7
5
1
4
)Kahl，R
.
， a
nd N
e
t
t
e
r， K.J
.
: T
o
x
i
c
o
l
. A
.
ρ
ρ1
.
投与により e
p
o
x
i
d
eh
y
d
r
a
t
a
s
eが誘導されたためと考え
られる.シクロヘキセシオキサイドを添加した BHT投
0，4
7
3，1
9
7
7
P
h
a
r
m
a
c
o
l
.，4
与ラットの S-9を代謝活性化に用いれば ，B(a)Pの突然
.
:F
e
d
. P
r
o
c
.，3
7，
1
5
) Cha，Y.N.，and Martz，F
変異性は PCB投与 S-9を用いた場合より高い値が得ら
5
9
6，1
9
7
8
.M.，andDaly， J
.W.: S
c
i
e
n
c
e，1
8
5，
1
6
)J
e
r
i
n
a，D
れる.
要
旨
ジプチルヒドロキシトルエ γ(BHT)400mg，
800mg
/kgB
.W. を投与した SD系ラットの肝ホモジネ{ト
9，
OOOxg上清 (S-9)分画を用いて， 2-アセチルアミノ
5
7
3，1
9
7
4
.，B
e
n
t
l
e
y， P
.，andG
l
a
t
t，H.R
.:I
n
t
.
1
7
) Oesch，F
]
. Cancer
，18，448，1976
東京衛研年報 A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，3
1
2，9
9
1
0
1，1
9
8
0
培養細胞によあ変異原スクリーニンゲテスト
佐々木美枝子*，中尾順子へ平賀輿吾*
InvitroScreening Testof MutagensonCulturedCells
n
dKOGOHIRAGA*
MIEKOSASAKI*，TOSHIKONAKAO*a
S
c
r
e
e
n
i
n
go
fm
u
t
a
g
e
n
i
cs
u
b
s
t
a
n
c
e
s，morer
a
p
i
danda
tl
o
w
e
rc
o
s
t，i
so
n
eo
ft
h
ei
m
p
o
r
t
a
n
tp
r
o
b
l
e
m
s
i
nt
o
x
i
c
o
l
o
g
i
c
a
lr
e
s
e
a
r
c
h
. Thea
s
s
a
yo
fm
u
t
a
g
e
n
i
c
i
t
yu
s
i
n
gc
u
l
t
u
r
e
dmammalianc
e
l
l
sh
a
sb
e
e
nr
e
c
o
g
n
i
z
e
d
o
fi
t
su
s
e
f
u
l
n
e
s
sr
e
c
e
n
t
l
yandmanymored
a
t
aa
r
eb
e
i
n
gp
r
e
s
e
n
t
e
donmanys
u
b
s
t
a
n
c
e
s
.
，abbreviated
M
u
t
a
g
e
n
i
c
i
t
yo
fa
c
e
t
a
m
i
n
o
p
h
e
n(
o
n
eo
fp
o
t
e
n
ta
n
t
i
p
y
r
e
t
i
c and a
n
a
l
g
e
s
t
i
cs
u
b
s
t
a
n
c
e
巴 (
p
o
t
e
n
tmutagen，a
b
b
r
e
v
i
a
t
e
da
sMNNG)wasa
s
s
a
y
e
di
nv
i
t
r
o
a
sAAP) andm
e
t
h
y
l
n
i
t
r
o
n
i
t
r
o
s
o
g
u
a
n
i
d
i
n
byt
h
emethodu
s
i
n
gc
u
l
t
u
r
e
dc
h
i
n
e
s
eh
a
m
s
t
e
rc
e
l
l
; CHO-K1c
e
l
l
. Themutatedc
e
l
l
sweres
e
l
e
c
t
e
dby
nwhicho
n
l
yo
u
a
b
a
i
n
r
e
s
i
s
t
a
n
tmutantc
e
l
l
swerea
b
l
et
og
r
o
w
.
c
u
l
t
u
r
i
n
gi
no
u
a
b
a
i
n
c
o
n
t
a
i
n
i
n
gmedium，i
巴 f
rom t
h
i
se
x
p
e
r
i
m
e
n
t
a
lm
e
t
h
o
d
. How
巴v
e
r，t
h
e
r
e
AAPwasn
o
te
s
t
i
m
a
t
e
da
sam
u
t
a
g
e
n
i
cs
u
b
s
t
a
n
c
r
e
m
a
i
n
sap
o
s
s
i
b
i
l
i
t
yt
h
a
t AAP c
a
ne
n
h
a
n
c
et
h
em
u
t
a
g
e
n
i
cp
o
t
e
n
t
i
a
l
i
t
yo
f MNNG. Whether t
h
i
s
，andhowi
tw
i
l
lbe a
H
e
c
t
e
di
nt
h
eo
t
h
e
rt
e
s
ts
y
s
t
e
m
s，
phenomenonc
a
nbec
e
r
t
i
f
i
e
de
x
p
e
r
i
m
e
n
t
a
l
l
y
m
i
c
r
o
s
o
m
e
-o
rc
e
l
l
m
e
d
i
a
t
e
dm
u
t
a
g
e
n
i
ca
s
s
a
ya
r
enowu
n
d
e
ri
n
v
e
s
t
i
g
a
t
i
o
n
.
，Acetaminophen，CHO-K1c
e
l
l
Keywords:M
u
t
a
g
e
n
i
c
i
t
y
緒 言
ための統一されたテストシステムの確立には到っていな
環境汚染物質・医薬品等の変異原性・発癌性の有無の
いが，鎮痛解熱剤であるアセトアミノフ
"，
Yの変異原性
検討は，これらの物質の毒性試験のなかでもかなり重要
検索を目的としていくつかの実験を行なったのでその結
な位置を占めている.この問題に関する最終的な結論は
果を報告する.
材料および方法
実験動物を用いた変異原性試験・発癌性試験によって得
られており，現時点では動物実験に代りうる方法は開発
細胞は当研究部において継代維持されている CHO
・
K1
されていない.しかしながら近年これら環境汚染物質の
細胞(チャイニーズハムスター卵巣由来株化細胞〉を用
加速度的な増加がみられるのに対し，動物実験を行うた
いた.細胞は， HamF
-12培養液(ユッスイ製品〉に 1
0
めには，時間・労力・費用などの点で大きな制限がある
%に仔牛胎児血清 (GIBCO製品，以下 FCSと略す〉を
ために，短時間・低労力・低費用で結論の得られる各種
加えた培養液で培養した.
スグリーユシグ法が開発されている.培養細胞を用いた
変異原性検出のためには，培養瓶のガラス表面に生育
変異原性試験も，毒性物質のスクリーニング法として近
した細胞を 0.25%トリプシン溶液によって剥離し，ピベ
年さかんに用いられるようになった方法の一つである
5
ッティ γグにより浮遊細胞の状態にして，約 1
0
の細胞
これは試験管内で培養細胞に被検物質を処理し，
を 4mlの培養液を入れた滅菌プラスチヅクシャーレ
1)
こ
の処理により生じてくる突然変異細胞を選択培養液によ
(FALCON-3002，
60mmx15mm) に播種し ，3TC，5%
り分離し，その出現頻度を指標として変異原性を検索す
CO
2に調整した細胞培養器中で一夜培養した . 16~24時
る方法である.
間後に被検物質を培養液に加え， 2時間静置培養したの
当研究部では変異原性物質の検出のために，微生物に
も，培養液を捨てて細胞を洗浄し，再び正常培養液を入
よる変異原性試験および培養細胞の染色体異常の検索が
れて 2日間培養した.その後，再び細胞をトリプシンに
i
nv
i
t
r
oの方法として現在用いられているが，さらに培
よって剥離し， 105~106 細胞を選択培養液を入れたプラ
養細胞による変異原性試験を合わせて行うために予備実
スチックシヤ{レに再播種し， 1
4日間培養したのち，生
験をすすめてきた.未だ各種検体をスクローユシグする
じた薬剤耐性コロニ{をメイグリュンワルド染色液で固
*東京都立衛生研究所毒性部
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
2
41
，Hyakunincho3chome
，S
h
i
n
j
u
k
u
・
ku， Tokyo， 1
6
0]
a
p
a
n
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H..
3
1
2，1
9
8
0
1
0
0
定染色しコロニー数を調べた.同時に 1
0
0個の細胞を正
常培養液を入れたシヤ{レに播種し
7日後にコロニ{
を数え，細胞生存率(コロニ{形成率〉を求めた.コロ
ニーの計数には 1 群 5~10 シャーレを用い，その平均値
を出した.コロニー形成率および突然変異率は次式によ
Table1
. C
o
l
o
n
yE
f
f
i
c
i
e
n
c
yandA
p
p
e
a
r
a
n
c
e
fO
u
a
b
a
i
n
.
r
e
s
i
s
t
a
n
tC
e
l
l
so
fAAP
a
n
d
/
o
rMNNG T
r
e
a
t
e
dCHO-K1
C
e
l
l
。
C
o
l
o
n
y
E
f
f
i
c
i
e
n
c
y
*
2
T
r
e
a
t
m
e
n
t
*
l
り求めた.
AAP5
0
0
μ g/ml
1
0
0
5
0
1
0
正常培養液中でのコロニー数
ロニ{形成率=
最初にまいた細胞数
選択培養液中でのコロニ{数
突然変異率=
最初にまいた細胞数
41
.2%
6
8
.
7
7
2
.
6
6
2
.
6
1
0
0
.
0
1
.7
2
3
.
0
3
5
.
8
。
十コロニー形成率
被検物質としてはアセトアミノフェ γ (厚生省がん研
究班試料として国立衛試より分与された精製試料 .AAP
と略記する)，陽性コシトロールとしてメチルニトロニ
トロソグアニジン (
Aldrich1299ι1，MNNG と略す〉
を用いた.また選択培養液としては，ウアバイン (SIG
句
MAO-3125，Ouaと略す〉を 1mM濃度に添加した培養
液を用いたい)
結 果
AAPおよび MNNGの各濃度で 2時間処理した CHO
・
O
u
a
.r
e
s
i
s
t
.
c
e
l
l
s
/
1
05
MNNG5p
.g/ml
1
0
.
5
O
.1
109~2
AAP50+MNNG0
.
5
AAP10+MNNGO.1
1
0
0
.
3
3
.
0
7
9
.1
。
。
。
。
。
。
。
1
4
9
.
4
1
3
.
1
1
9
.7
0
.
5
。
1
2
.
8
3
.
1
本1C
e
l
l
sw
e
r
et
r
e
a
t
e
dbyt
e
s
tc
h
e
m
i
c
a
l
sf
o
r2h
r
.
*
2C
o
l
o
n
ye
f
f
i
c
i
e
n
c
yo
fu
n
t
r
e
a
t
e
dc
o
n
t
r
o
lwasr
e
g
a
r
.
n
dt
h
o
s
eo
ft
r
e
a
t
e
dg
r
o
u
p
s
d
e
da
s 100.0%，a
w
e
r
eshowna
sr
e
l
a
t
i
v
ep
e
r
c
e
n
t
a
g
e
s
.
K1細胞におけるコロニ{形成率および Oua耐性変異
細胞出現頻度を T
able1に示す.変異原物質として知ら
現頻度をみた.同時に AAP単独処理， AAP・
MNNG
れる MNNGで処理した場合には， 5
，1
，
O
.5
，
O
.1
μ g/ml
同時処理， MNNG単独処理の場合を比較した (
T
a
b
l
e
の各濃度で Oua耐性細胞が出現した. Oua耐性細胞の
2
)
. この実験でも， AAP単独では Oua耐性細胞の出
s
自然発現率は 5x1
0
/
c
e
l
l
/
g
e
n
e
r
a
t
i
o
nとされているので
現はみられなかったが， AAP で前もって処理した細胞
ベ表に示した変異細胞は明らかに MNNG処理によっ
では， AAP1
0
0
μ g/mlで前処理した場合に MNNGによ
て生じたものである. MNNG5μ g/mlで処理した細胞
るOua耐性細胞の出現頻度が特に高かった.また前処理
の突然変異率が最も高いが，この濃度では細胞毒性のた
じない細胞に AAP と MNNGを同時に投与した場合
ロ
めに細胞の生存率が非常に低下するので，陽性コ γ ト
にも， AAP100μ g/ml+MNNG1
μg/mlで高い変異細
{ルとしての MNNG 濃度は 0.5~1μ g/ml が最適と思
胞出現がみられた. この点を確かめるために，直径 1
0
0
われた. AAP では， 5
0
0，1
0
0，5
0，1
0
μ g/mlAAP で処
m mの大型シヤ{レを用い， Oua(+)培養液に播種する
理した細胞のいずれにも Oua耐性細胞は生じなかった.
細胞数をシヤ{レあたり 2x1
06に増して再実験を試みた
り
， AAP には
したがってこの処理方法で判断するかさf
able2，E
x
p
.2
) Oua耐性細胞の出現頻度は相対的
がくT
CHOK1細胞に対する変異原性はないものと思われた.
には Exp.1よりも減少し，変異細胞コロユー数にもはっ
闘
また AAP と MNNG とで同時に処理した場合にも，
きりした差は認められなかった.従ってこの実験からは
MNNG単独処理の場合と変異細胞出現に大差は認めら
AAPに MNNGによる変異細胞の発現を促進する効果
れなかった. しかしながら，
AAP を MNNG と同時
があるか否か，実験的確証は得られなかった.
考 察
に加えた場合，コロニーの大きさなどの点で何らかの相
乗効果があるようにも思われたので， MNNG濃度を 1
AAPの変異原性について，吉田らは同じく CHO.K1
μg/mlと一定にして， AAPで前処理した細胞の MNNG
細胞を用いて染色体異常誘発性について検索し，
感受性と AAP.MNNG
同時処理細胞の感受性を検討し
で処理した細胞に染色体異常が増加することを報告して
T
こ.
1
0
0
μg/ml
，5
0
μg/mlの AAPを加えた培養液で 4時
いる日.しかしながら，
間細胞を培養したのち細胞を洗浄し，新たに加えた培養
る変異原性は認められなかった.また， AAP で前処理
/mlを加え，細胞生存率と変異細胞出
液に MNNG1μ g
した細胞，あるいは AAP と MNNGで同時処理した
るかぎりにおいては，
AAP
Oua耐性細胞の出現を指標とす
AAP には CHO.K1細胞に対す
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
1
0
1
Table2
. E
f
f
e
c
to
fAAP.PretreatmentonM
u
t
a
g
e
n
i
c
i
t
yo
fMNNG
P
r
e
t
r
e
a
t
m
e
n
t
*
l
E
x
p
.1
AAP1
0
0
μg
/ml
5
0
。
T
r
e
a
t
m
e
n
t
料
MNNG1p
.g/m
1
1
1
0
0
5
0
。
MNNG1μg+AAP 1
0
0
μg
/ml
/ml
MNNG1μg+AAP 5
0
μg
/ml
AAP 1
0
0
μg
AAP 5
0
E
x
p
.2
AAP 1
0
0
μg
/ml
5
0
1
0
。
。
C
o
l
o
n
yE
f
f
i
c
i
e
n
c
y
ls
/
1
05
O
u
a
.r
e
s
i
s
t
.c
e1
19.2%
2
4
.
4
3
5
.
3
8
5
.
3
9
3
.
1
9
9
.
3
2
3
.
5
31
.1
8
9
.
3
9
4
.
0
1
1
.
8
4
.
4
7
.
2
。
。
。
1
5
.
3
6
.
4
。
。
O
u
a
.r
e
s
i
s
t
.c
e1
ls
/
d
i
s
h
判
MNNG1
μg
/ml
1
1
1
。
MNNG1μg+AAP 1
0
0
μg
/ml
NT
NT
NT
NT
88.3%
NT
9
.3
3
/
1
.8
5x1
06
.8
0x1
06
7
.0
0
/1
1
3
.7
5
/1
.8
8x1
06
1
.7
9x1
06
1
1
.6
7
/
0
/
2
.99x106
1
0
.3
3
/
2
.0
5x1
06
*
1 Ce1
lsw
e
r
ep
r
e
t
r
e
a
t
e
dbyAAP f
o
r4
h
r，j
u
s
tb
e
f
o
r
eMNNGt
r
e
a
t
m
e
n
t
.
1
Isweret
r
e
a
t
e
dbyt
e
s
tc
h
e
m
i
c
a
l
(
s
)f
o
r2
h
r
.
*
2 C巴
水3 M
eanv
a
l
u
e
sfrom3d
i
s
h
e
so
fOua(+) c
u
l
t
u
r
e
.
細胞では， MNNGの変異原性が増強される傾向がみら
AAP を被検物質とし，ウアパィ
れるが，実験的な確証をもつにはいたっていない.この
を指標としてこれらの物質の変異原性を調べた .MNNG
γ耐性細胞の出現頻度
点に関しては統計処理が可能なデ{タを得るよう検討を
には0.5~1μg/ml の濃度で、十分な変異原性が認められた
すすめている.
が
， AAPには，この方法では， CHO
・K
1細胞に対する
今回の実験では細胞を直接被検物質で処理する方法を
変異原性は認められなかった.しかしながら AAPには
用い(直接法)，薬物代謝酵素を含む肝ミグロゾーム分画
MNNGの活性を増強させる効果があるかもしれないこ
と被検物質とで細胞を処理する方法(ミクロゾーム経由
とが示唆された.
突然変異試験〉や，フィーダー細胞を用いて代謝活性化
を行わせる方法(細胞経由試験〉は行なっていないが，
直接法では変異原性が認められない物質でも代謝活性化
酵素の存在する実験条件では変異原性が発現される可能
性がある. AAP についても，これらの方法を併用して
さらに詳しくその変異原性の有無を検討すべく，目下実
験をすすめている段階である.
要 約
チャイニーズハムスター由来の培養細胞である CHO.
K1細胞を用いて変異原性試験を行なった. 強力な変異
原であることが知られている MNNG
，および鎮痛解熱剤
参考文献
1
)黒田行昭:組織培養， 5(
5
)，1
3
7，1
9
7
9
2
)A
r
l
e
t
t，C
.F
.，Turnbu
，
l
1D
.，e
ta
l
:M
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，
3
3，2
6
1，1
9
7
5
3
) Trosko，]
.E
.，Chang
，C
.C
.，Y
o
t
t
i， L
.P
.，and
.H.Y: C
a
n
c
e
rR
e
s
.，37，1
8
8，1
9
7
7
Chu，E
.，A
r
l
e
t
t， C
.F
.，and G
r
e
e
n， M.H.L
.:
4
)C
o
l
e，J
1，3
7
7，1
9
7
6
M
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，4
5
)吉田誠二，縄井寿美子，平賀輿杏.-東京衛研年報，
3
1
2，1
0
2，1
9
8
0
東京衛研年報
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，3
ト2
，1
0
2
1
0
8，1
9
8
0
アセトアミノフェンおよびその関連物質の細胞遺伝学的研究
吉田誠二六縄井寿美子六平賀輿吾*
Cytogenetic Studies of Acetaminophen and I
tsRelated Compounds
]IYOSHIDA汽 SUMIKONAWAI*a
n
dKOGOHIRAGA*
SEI
巴t
aminophen，フェナセチ γPhenacetin，アセトアニリド A
c
e
t
a
n
i
l
i
d
巴，i
n
Keywords:アセトアミノフ zγAc
v
i
t
r
oandi
nv
i
v
o，染色体分析 ChromosomeA
n
a
l
y
s
i
s
緒
BudR と略す〉を 0
.
5
μg
/
m
lの割合で添加し 27時間培養
ヰ
冒
アニリン誘導体の解熱・鎮痛薬 Acetaminophen (
以
した.標本の作製および染色と結果の判定は縄井らの前
下 AAP と略す〉の変異原性については厚生省がん特
報 3)に 準 じ た 先 の i
nv
i
t
r
o試験 (1)同様に 4NQOを
別研究班1)により種々の試験系で行なわれており，その
陽性対照として用いた.
nv
i
t
r
oおよび i
nv
i
v
o 染色体試験の結果のみ
中で i
が陽性と報告されているが，
より詳細な検討を同属の
5
. i
nv
i
t
r
o試験 (3):特に代謝活性化について.
代謝活性化には PCBにより薬物代謝酵素系を誘導し
P
h
e
n
a
c
e
t
i
n (以下 APT と略す〉と A
c
e
t
a
n
i
l
i
d
e (以下
，
000xg
，1
0
た SD系ラット雄の肝臓ホモジネ{トの 9
AAL と略す〉についても併せて行なった.
分間遠心の上清分闘(以下回と略す〉を用いた.また，
S9mix (NADP産生系と肝ホモジネ{トの S9を合わせ
材料および方法
1
. 薬物:Acetaminophen (以下 AAPと略す〉は日
本薬局方のものを用いた. P
h
e
n
a
c
e
t
i
n (以下 APTと略
9
6
9を用いた
す)，和光純薬製の LotNo. Alk0
Ace-
たもの〉の調整は N
a
t
a
r
a
j
a
nら4)の方法に従った.
細胞播種後 2日目に検体添加培養液と先のようにして
調整した S9mixとを同時に添加し培養を行なった .3時
t
a
n
i
l
i
d
e (以下 AAL と略す)，和光純薬製の LotNo.
間後に先の混和液をすて，培養液で細胞商を 1閉洗浄し
W A G0
6
2
0
2を用いた.
培養瓶をアルミホイルで、被い， BudR添加培養液を添加
2
. 細胞および培養:チャイニ{ズハムスタ{卵巣由
し2
7
時間培養を行なった.なお，この実験には代謝活性
来の CHιK1細胞を用いた.培養液は F12培養液に仔
化を受けることにより染色体異常および SCE誘発が見
牛血清 10%および抗生物質として p
e
n
i
c
i
l
l
i
n(
10
0，
u/
m
l
)
られる D
i
m
e
t
h
y
l
n
i
t
r
o
s
a
m
i
n
e (以下 DMNと略す〕を陽
とs
t
r
e
p
t
m
y
c
i
n(100μg/mめを加えたものを用いた.
性対照物質として用いた. この DMN の代謝活性化に
3
. i
nv
i
t
r
o試験(1):細胞を播種， 培養 2日目に
よる染色体異常および SCE の誘発の詳細は別に報告白
薬物を D
i
m
e
t
h
y
l
s
u
l
f
o
x
i
d
e (以下 DMSO と略す〉に溶
する.染色体および SCE標本の作製と結果の判定は前
報 2，
3
)に準じた.
解し培養液に添加した.このようにして作製した各濃度
4
時間細胞を処理後，常法
の薬物添加培養液で 6および 2
6
. i
nv
i
v
o試験(1):日本チヤールスリパ{株式
により染色体標本を作製，ギムザ染色を行ない分裂中期
会社育生の ICRマウス雄を 5週令で購入し， 8週令の
のよく拡がった細胞について染色体分析を行なった.異
時点で以下の実験に供した.
常細胞の分類および結果の判定は前報2) に準じた. な
各薬物を DMSOで溶解し各種濃度の薬物溶液を作製
お，陽性対照には既知 C
l
a
s
t
g
e
n として知られている 4-
0
m
l
/
k
gとし腹腔内注射および胃
した.投与容量は全て 1
N
i
t
r
o
q
u
i
n
o
l
i
n
←N-Oxide (以下 4NQOと略す〉を用い
ゾンデにより経口投与を行なった.なお，対照は DMSO
た.
を同容量腹腔内注射および経口投与した.投与後 6，2
4
4
. i
nv
i
t
r
o 試験 (2) :特に S
i
s
t
e
r Chromatid
Exchange (以下 SCEと略す〉の誘発の有無について.
細胞播種後 2日自に薬物添加培養液を添加し，培養j
慌
をアルミホイルで被い， 5
-Bromodeoxyuridine (以下
ないし 4
8時間自に各群 4lAの動物を放血により屠殺後常
法により骨髄細胞を採取し染色体標本を作製した.異常
細胞の分類および結果の判定は i
nv
i
t
r
o 試験と同様に
行なった.
1
6
0 東京都新宿区百人町 3ー 2
4
ー 1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
241
，Hyakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
k
u，Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
*東京都立衛生研究所毒性部
【
東 京 衛研 年報
9
8
0
3
1
2，1
1
0
3
D
u
r
a
t
i
o
n
o
fT
r
e
a
t
- C
h
e
m
i
c
a
l
s
m
e
n
t
s
(
h
r
.
)
2
)
C2
i
.4)
E
x
.8) D
日υ 白unU
唱ム
inUAU
唱よ唱
nunuhUAUnununu
iAUAUAU
AUAUAU 唱iAUAUnununUAUAU
円。噌
凋佳
UAununununUAUnunununu
凸
nunU
noηdnHun01i4AT
AUAUnununununuAUnununu
円。
A
噌E
唱ム ηooonu
qd 唱i
E
a
守B
aム ﹃ 噌E4
噌'ム唱
i 噌i Aリ nリ nunununuhUAUAUAUAU
i A U Aり AUAUAUAUnUAU
唱ム司
。
。
噌
司'A
U 咽A n u n u n u n U A U n u n u n u n U A U A U nり
凸
噌E4
凸
U A U A U A U 凸UnUAUAUAUAU
噌E4
a佳 作'η01i 噌i n u n U A U 噌inUFDRυAUAU
民
uqOAunυ
E
a
四4 1 2 3 2 8 5 5 3 4 4 3 3
-合 唱
守E
6
)
24
1
86)
5
3
4
2
8
5
6
3
2
96)
1
66)
6
4
C11)
EU
噌E4
4NQO
唱EA
AAL
EA
噌
2
4
噌EA
APT
nU4伎 のUnunDqδnununOAUnunUAUPo
nunununuoOAUqonU 唱i O
内 AUAUAUno
AAP
1
0
0
7
0
5
0
2
5
1
0
0
5
0
1
0
1
0
0
5
0
1
0
0
.
5
0
.
2
5
0
.
1
0
0
A
b
e
r
r
a
t
i
o
n
s
法
AAL
6
2
1
0
0
1
0
6
1
1
0
1
3
8
1
6
7
1
3
5
1
0
0
1
0
8
1
0
0
1
2
1
Gap
T
o
t
a
l
。O A
APT
No. o
f
C
e
l
l
s
A
n
a
l
y
s
e
d
64866797244
6
nununununUAUnununUAUAU
AuntEU 噌i n U E D 唱i n U E O 句よ
-A14
i
唱
AAP
Treatment
Dose
〈
μg
/
m
l
)
山
一
⋮
Table1
. ChromosomeE
f
f
e
c
t
so
fAAP，APT，AALand4NQOon CHO-K1 C
e
l
l
s
) Exchange
hromatid Type 2
) ChromosomeType 3
1
) C
) pS
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yHighert
h
a
n0
.
0
5
4
) D
t
r
i
c 5
) Ring 6
i
c巴n
7
. i
nv
i
v
o試験 (2): 日本チヤールスリパー株式
めなかった.しかし 2
4
時間処理において AAP の1
0
0
会社育生の ICRマウス雄と当部で繁殖を行なったチャ
および 7
0
μg
/
m
l処理で Gap，Break，Exchangeの構造
イニ{ズハムスター雄を用いた. マウスは 4週令で購
異常が有意な増加を示し，さらに無処理ではほとんど出
入
， 5週令の時点で以下の実験に供した.なお，飼育は
i
c
e
n
t
r
i
cChromosomeや RingChromosome
現しない D
nv
i
v
o実験とも温度 2
5土 10，湿度 55%，照明午前 6
両 i
なども見られた .50
および 2
5
μg
/
m
l処理で Gapや Break
時 午後 5時，換気毎時 10回の飼育室にて行なった.ま
が見られているが，いずれも有意な増加とはなっていな
た，飼料は日本クレア株式会社製固型飼料 CE-2を水と
0
0，7
0，5
0，2
5
μg
/
m
l処理
かった.また，数的異常は 1
ともに自由に与えた.
のいずれも有意な増加を示してないことから， AAP は
AAP を日本クレア株式会社製飼料 CE-2に種々の割
本実験条件下では切断型と交換型異常を含む染色体の
合で添加し自由摂取させた. 1， 6ないし 7週自に各群
構造異常を誘発することが認められた.一方， APT と
4~5 匹の動物を放血により屠殺後，常法により骨髄細
AAL は，いずれの処理量においても染色体の構造およ
胞を採取し染色体標本を作製した.異常細胞の分類およ
び数的異常の有意な増加を示してないことから本実験条
び結果の判定は i
nv
i
t
r
o試験と同様に行なった.
件下では染色体異常誘発性は無いものと思える.なお，
結果と考察
1
) i
nv
i
t
r
o試験(1)
染色体分析の結果を Table1に示す. 6時間処理群で
陽性対照として用いた 4NQOは切断型および交換型異
常を高頻度で誘発した.
2
) i
nv
i
t
r
o試験 (2)
は AAP，APT，AAL のいずれも染色体の構造およ
結果を Table2に示す. AAPの4
0
0，
3
0
0，
2
0
0
μg
/
m
l処
び数的異常は無処理コ γ トロールに比し有意な増加を認
理のいずれも染色体の分染像がほとんど見られず， SCE
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，1
9
8
0
1
0
4
K1T
r
e
a
t
e
d
fSCEsi
nCHOTable2
. Frequencyo
w
i
t
hAAP，APT，AALand4NQO
C
h
e
m
i
c
a
l
s
十
+
および AALの両者は最高濃度である 4
0
0
μg
/
m
l処理に
十
AAL
い分裂阻害作用を有するものと思える.
AAP の 150~25μ g/ml 処理の SCE 誘発頻度は無処
+
+
理コ γ トロ{ルに比しいずれも有意な増加を認めていな
0
0および 1
5
0
μg
/
m
l処理の SCE誘発頻度は7.22，
いが， 1
十
を示さなかったのに対し弱いながら用量一相関があるよ
DMN
+++++一
9
.
0
0とやや高い値で APT と AALが全く増加の傾向
1
6
0
0
1
6
0
0
8
0
0
8
0
0
4
0
0
4
0
0
2
0
0
2
0
0
1
0
0
1
0
0
5
0
5
0
2
0
0
0
0
5
0
0
0
1
0
0
0
5
0
0
o
p
e
s
c
uら6)の報告と
を示した.この 4NQOの結果は P
よく一致していた.
3
) i
nv
i
t
r
o試験 (3)
染色体分析の結果を T
able3に示す. AAP の 1600~
r
e
s
e
n
c
e
1
) S9p
。
。
AUAUAUnUAUAUAUAunununUAリ nUAUnunununU
RURurDEUEGRuraFDrDEUEuraqoηoqoqORυEU
十
DDO00000700000
NN555555455555
+
凸
UAUAUnUAUAunununUAUAUnu
mhurDCUE-vrDEURURυEuroFUr-v
+
+
の分析は不可能であった. この AAP に比し APT
は用量一相関のある増加を示しており強い SCE誘発性
nUAUAUAUAUAUnunUAUAUAUAUAUAu
nununununununununununUAり rD ロu
nonona の4 0 0 0 6 4佳 凋 告 の L 0 4 唱よ Tよ
i
i
噌ム噌i
噌
噌
+
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yHighert
h
a
n0
.
0
5
1
) pS
うにも考えられる.また，陽性対照として用いた4NQO
a
噌E
十
71)
3
6
.
3
0土1.6
3
2
.
2
3土 2
.
7
01)
1
9
.
5
3土1.8
6
.
5
1
R37土 0
.
3
5
4
.
4
4土0
おいてもよく分染されていた.このことは， AAP は強
唱EA
十
APT
nunUAUAUAUnUAUAUnunUAUAu
︽ AUnUAUFDFD
nunununununU U
aunO0000 訓告 a告 の4 n A 噌i 咽A
AAP
.
3
0
4
.
8
6土 0
.
3
3
5
.
0
6土 0
.
3
2
5
.
2
4土 0
.
2
9
4
.
3
4土0
4
.
5
4土0
.
2
8
4
.
5
6土 0
.
3
3
.
3
1
5
.
3
0土 0
.
3
1
4
.
8
6土 0
.
3
2
4
.
7
8土 0
.
2
8
4
.
3
2土 0
4
.
5
8土 0
.
2
9
.
3
2
4
.
7
4土0
Treatment No. o
f
Dose
C
e
l
l
s
(
μg
/
m
l
) Analysed
官品。‘
9
.
0
0土 0
.
5
9
7
.
2
2土 0
.
4
4
.
3
4
4
.
9
0土 0
5
.
3
4土0
.
3
8
5
.
0
2土 0
.
3
3
.
3
4
4
.
9
8土 0
C
h
e
m
i
c
a
l
s
+一+一+一十一+一+
EURUEUzuzurDUNnonoηoqOEU
4NQO
4
0
0
2
0
0
1
0
0
75
5
0
2
5
0
.
5
0
.
2
5
0
.
1
0
0
.
0
5
0
.
0
1
0
SCE土 SE
ND
5
0
5
0
5
0
5
0
5
0
5
0
00000oD0000O
AAL
4
0
0
2
0
0
1
0
0
7
5
5
0
2
5
No. o
f
C
e
l
l
s
A
n
a
l
y
s
e
d
AUAUAUnunUAU
RυRUFDRυFDFD
APT
(
μg
/
m
l
)
nununURUAUEUAU
nUFUAundpbob-n414 i
唱
AAP
Treatment
Dose
Table4
. F
r
e
q
u
e
n
c
yo
fSCEsi
nCH
OK1T
r
e
a
t
e
d
w
i
t
hAAP，APT，AALandDMN
SCE土 SE
.
4
2
5
.
9
6土 0
5
.
1
0土 0
.
3
2
5
.
2
4土 0
.
3
2
4
7
.
0
6土1.1
7
.
6
8土 0
.
7
0
7
.
4
0土1.04
.
3
4
7
.
1
6土0
.
3
4
5
.
6
4土 0
.
3
7
6
.
7
2土 0
4
.
5
6土 0
.
2
9
.
3
5
6
.
0
0土 0
4
.
8
4土 0
.
3
3
.
3
8
5
.
5
8土 0
.
3
1
5
.
1
4土 0
.
3
7
6
.
4
8土 0
.
3
2
5
.
4
2土 0
6
.
2
6土 0
.
3
7
4
.
8
8土 0
.
3
4
.
3
6
4
.
9
4土 0
5
.
2
2土 0
.
3
0
.
3
2
5
.
0
4土 0
.
2
4
4
.
1
6土 0
6
.
2
6土 0
.
4
0
.
3
2
5
.
6
2土 0
.
3
6
5
.
5
0土 0
.
3
6
5
.
0
8土 0
.
3
5
6
.
6
2土 0
.
3
0
5
.
1
0土 0
.
3
3
5
.
4
4土 0
.
3
7
5
.
6
8土 0
.
3
7
5
.
3
8土0
.
3
1
5
.
1
2土 0
.
3
0
6
.
4
0土 0
.
2
9
4
.
5
8土 0
.
2
8
5
.
3
8土 0
.
2
7
4
.
6
6土 0
73)
3
0
.
5
7土1.4
2
4
.
1
0土1.683)
1
2
.
9
0土 0
.
9
6
.
4
8
5
.
5
7土 0
.
3
2
5
.
7
4土 0
5
.
0
8土 0
.
3
4
b
s
e
n
c
e
2
) S9a
と同様の結果であり染色体異常誘発は見られなかった.
2
0
0
μg
/
m
lのいずれの処理量においても代謝活性化の有
一方，代謝活性化試験の陽性対照に用いた DMNは S9
無にかかわらず染色体の構造および数的異常の有意な増
mix存在下において強い染色体異常を誘発した.次に，
SCE誘発試験の結果を Table4に示す. AAP，APT
加は認められなかった.また， APTと AAL も AAP
東 京 衛 研
1
2，1
9
8
0
年報 3
1
0
5
Table3
. ChromosomeE
f
f
e
c
t
so
fAAP，APT，AALandDMNon CHO-K1 C
e
l
l
s
a
f
t
e
rS
h
o
r
t TermE
x
p
o
s
u
r
e
sw
i
t
handw
i
t
h
o
u
tM
e
t
a
b
o
l
i
cA
c
t
i
v
a
t
i
o
n
s
Treatment No. o
f
T
o
t
a
l
Gap
Dose
C
e
l
l
s
Analysed A
b
e
r
r
a
t
i
o
n
s C1 C2
〈
μg/ml)
C
h
e
m
i
c
a
l
s
Ununununり のuhunununu
nUAUAUAUAUnunUAり nUAリ
0
0
凸
nununununUAUnUAUAU
白
unununU 凸 リ 凸ununvnunu
守よ
nuAU
。。
。。
。
。
nu 凸UAUnunり 凸Unununり nu
唱 止 噌B4nU 唱 よ れU n u nり
inU 噌
inununU 凸 り 日 り
唱
AUnunu
nunUAUAUAUAUnununUAU
AUAU 白U
0
唱 ム ハU 凸
υnuAUnunり
0
nununり AunUAUhunununu
凸
UnunUAUAUAUnununり の り
。
。
凸 リ ハU 凸り
・ nunUAUnUAU
τ4
i n u n u nリ ハ リ AU
nunり の り の GAUAUnυAUAU
凸
u n u nり 噌
nununua告 白U Aり nuhunu
nununuponununUAUAり
nUAUAUAU 。，unUAUAUAU
2
3
nunり AUnunununU 凸UAUAU
72
t 晶 司 Eム
0
噌
+
1
3
AU 噌i n U 噌i A U n u n u n G Aり
0
0
0
2
守ム
4
3
8)
2
9
1
88)
。
。。
。
凸り
None
4
Tム 噌i A U
DMSO
4
。 。 凸UAU 噌
iqO 噌
i
+++
DMN
0
4) O
3) Pu
2
t5)
) Ma
E
x
l
l Di
C2
03030v11102
+
0
nu 白u nり の U A U A U A U n U
+
29
93
ND
93
1
0
0
1
0
0
5
0
1
0
0
1
0
0
95
1
0
0
233781312
AAL
1
6
0
0
1
6
0
0
1
2
0
0
1
2
0
0
8
0
0
8
0
0
4
0
0
0
0
氾0
0
0
2
AUAUnununonununu 噌inU
+
C1
凸 AUAUAUAUAUnunUAU
nU U
+
円 。 。 。 。 ， 白 守i
+
qO
+
必品百凸υ n o a告 。 白
APT
1
5
0
46
99
θ2
1
0
8
92
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
品
+
1
6
0
0
1
6
0
0
1
2
0
0
1
2
0
0
8
0
0
8
0
0
4
0
0
4
0
0
2
0
0
2
0
0
ヴ
+
崎 Qda'
da
+
せ
+
9 A-9uMndqdqU9h
η O A 9 U“
+
82
92
90
1
0
0
47
1
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
。。
AAP
1
6
0
0
1
6
0
0
1
2
0
0
1
2
0
0
8
0
0
8
0
0
4
0
0
4
0
0
2
0
0
2
0
0
dAUEUE0004佳 qoqoqo
+
8
7
ATnb のhFDA-quλ
+6)
Break
巴r
s
) Oth
e
l
lw
i
t
hM
a
l
t
i
p
l
eA
b
e
r
r
a
t
i
o
n
s 4
) P
u
l
v
e
r
i
z
a
t
i
o
n 5
) D
i
c
e
n
t
r
i
c 3
) C
1
) Exchange 2
) pS
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yHighert
h
a
no
.05
r
e
s
e
n
c
e 7
) S9Absence 8
6
) S9P
および AALのいずれも代謝活性化の有無にかかわらず
がうかがわれる増加を示していた.腹腔内投与群の誘発
SCEの誘発は見られなかった.
する異常は4
8時間処理においても見られ600mg/kg処理
4
)i
nv
i
v
o試験(1)
AAP の結果を Table5に示す.経口投与群の 6時間
で異常細胞の有意な増加が認められた.一方，経口投与群
2
0
0および 600mg/kg処理のいずれも異常細胞の有意
の1
処理のいずれにおいても染色体異常保有細胞の有意な増
な増加は見られなかった.次に， APTの結果を Table6
加は見られなかったのに対し腹腔内投与の 600mg/kg処
に示す.腹腔内投与群の 6時間処理で 1
2
0
0および600mg
理において異常細胞の有意な増加が認められた.また，
/kgの用量で異常細胞の有意な増加が見られた.同様に
1200mg/kg も有意な差とはなっていないが増加の傾向
24
および4
8
時間においても有意な増加を示した.一方，
2
4
時間処理においても同様の結果であり，腹
が見られた .
4
および4
8
時間処理のいずれも有意な
経口投与群の 6，2
腔内投与の 6
0
0および 300mg/kgのいずれも異常細胞の
増加は見られなかった，次に， AALの結果を Table7
に
有意な増加が見られた.また，経口投与群も用量一相関
示す.経口投与および腹腔内投与群の 6ないし 2
4
時間処
1
0
6
Ann.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，1980
nunuτょ nUAU
nununununu
nununu
nuhunu
nunU 噌ムハリ nUAU
凸
unu
。bnununUAUAU
開
b d 告 QunuO
nUAUAUAU
4
叫
一
一
01
.
unU
内
唱止の
UAU
nUAUAUAUAUAUnu
の
AAUAU
UAU
凸
nuAUnu--AUnunU
unununUAUAUnu
白
句E田 市 唱 目
qdtin汐 qozununu
U A U n u n u nり
凸
nununununu
nununununu
ハununununu
に
U の
oaιτnwυTi
2
0
のよ“司
inununu
。
。
5
1
21)
1
11)
1
4
1)
1
01)
u n u nリ ハuhunUAU
1
8
0
2
0
0
1
5
0
2
0
0
2
0
0
1
0
0
1
0
0
3
1
01)
1
61)
3
白
1
8
0
0
1
2
0
0
1
2
0
0
6
0
0
3
0
0
6
nununununu
PO
l
p
2
0
0
1
0
0
2
0
0
2
0
0
1
2
4
nUAUAU 噌よ AU
l
p
48
1
8
0
0
1
2
0
0
1
2
0
0
6
0
0
3
0
0
。
，
“ tin4nuzon4AU
PO
2
0
0
1
8
3
1
5
2
1
8
0
1
0
0
11472
l
p
1
8
0
0
1
2
0
0
1
2
0
0
6
0
0
3
0
0
の
LFhuoOAU
2
4
O
t
.2)
。
。
。。
。。
R
i
.
。d
PO
No. o
f
T
o
t
a
l
C
e
l
l
s
b
e
r
r
a
t
i
o
n
s
Analysed A
に
-uqanonUAリ
l
p
句
一
一
D
u
r
a
t
i
o
no
f Routeo
f Treatment
Treatment AdminiDose
(
h
r
.
)
s
t
e
r
e
d
(mgjkg)
6
R
i.
D
3
) pS
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yHighert
h
a
n0
.
0
5
巴6
. ChromosomeE
f
f
e
c
t
so
fAPTon CD-1Mice
Tabl
PO
nU 凸UAU
2
0
nunuAUnunu
-白
噌E
L
唱 nGRυ
。
。
nunり の U i
噌 nunu
5
3)
1
2
6
2
0
209320
8
。，“白り噌iAUAU
6
5
UAUAU
8
5
凸
1
18)
98)
5
AununU 唱ムハυ
占
t
h
e
r
s
2
) O
υAUAU
。
。
060
戸
A
l
p
守ム門
・
吋
ND
2
3
7
1
5
1
292
1
8
3
1
0
0
1
0
0
1
8
0
0
1
2
0
0
6
0
0
6
0
0
3
0
0
PO
l
p
ing
1
) R
nunU
ム 司 EEh
48
AUEU D 引山 nunu
品
、 r 1 14
nG141
噌E
PO
AUAUAUAUAUnu
MAUnu
nununU 山
oO の
Laundnoqo
l
p
10430
l
p
30640
1
8
0
0
1
2
0
0
1
2
0
0
6
0
0
3
0
0
PO
24
nununUAUAU
9 t A 9白 市 ム ー ム
“
6
No. o
f
T
o
t
a
l
C
e
l
l
s
Analysed A
b
e
r
r
a
t
i
o
n
s
0401o
PO
匂
一
⋮
f Treatment
D
u
r
a
t
i
o
no
f Routeo
Treatment AdminiDose
s
t
e
r
e
d
(
h
r
.
)
(mgjkg)
日
一
⋮
f
f
e
c
t
so
fAAP on CD-1Mice
Table5
. ChromosomeE
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yHighert
h
a
n0
.
0
5
1
) pS
理のいずれにおいても異常細胞の有意な増加は認められ
がわれる増加を示した.
なかった. しかし， 腹腔内投与群の 48時間処理におい
5
) i
nv
i
v
o試験 (2)
て，有意な増加とはなっていないが，用量一相関のうか
結果を T
abl巴 8に示す. 1週間摂取群のみマウスとチ
東 京 衛
1
2，1
9
8
0
研 年報 3
1
0
7
Table7
. ChromosomeE
f
f
e
c
t
so
fAALonCD-1Mice
nununり nunLnununリ
Ununuhununununり
内リ
凸
AU
開
AUnunUAUAUAU ハ
U nリ
AU
n
K
M 噌
inu
のりのり
nUAUnunu
unununυ
凸
ム
d
月 QunU1
G nリ ハ U A U d告 AU 噌
inu
hdnununU
晶
-
，
。
nunununu
1
11)
1
01)
2
1
唱ょの必のりのり
1
5
0
1
5
0
1
5
0
1
0
0
り nu
nuqOAU i
咽 nUAUn
2
.
5
1
.2
5
0
.
6
2
0
ゐ
7
Mo.
Mo.
Mo.
乱1
0
.
5
3
1
O
t
.
C2
A qU9h“日り
1
5
0
1
2
1
1
0
0
1
0
0
，“。。
2
.
5
1
.2
5
0
.
6
2
0
1
31)
2
Mo.
Mo.
Mo.
Mo.
l
同
0
0
1
9
3
1
5
0
1
6
6
1
5
0
1
5
0
74
1
0
0
1
0
0
C1
円 1ム
ワムM 1ょ
4
ND
ND
Gap
dtndqO b n υ q o o
2
.
5
2
.
5
1
.3
1
.3
0
.
9
0
0
.
9
0
0
.
6
5
0
.
6
5
No. o
f
T
o
t
a
l
C
e
l
l
s
Analysed A
b
e
r
r
a
t
i
o
n
s
aunuqaP04ιτqoqδηL
T
E
A 噌'ム
OLOLOLOLOL
MGMαMαMαMU
T
r
e
a
t
m
e
n
t
Dose
く%)
山
一
一
(W)
Animals
Ununununu
nunununvnuq白 nunu
iqυqonLAUAU
唱止噌
D
u
r
a
t
i
o
no
f
Treatment
O
t
.
凸
U
日
i
唱 AUAUAUAU
nU
unununUAUAUT4nu
Table8
. ChromosomeE
f
f
e
c
t
so
fAAP onMiceandC
h
i
n
e
s
eHamster
R
i
.
nununU
C2
nuτinunUAUnu
C1
T41inUAUnunu
C2
凸
l
p
Tinrua告 のA q o n U i
噌
。
。
PO
ム
。
l
p
2
0
0
1
5
0
2
0
0
2
0
0
2
0
0
2
0
0
2
0
0
1
5
0
M O白 qdnund にd 1 4 1ム
24
1
8
0
0
1
2
0
0
600
1
2
0
0
6
0
0
3
0
0
ム
ワ
PO
Break
n U 1 品 nU 円
LnU i
噌
l
p
2
0
0
2
0
0
1
0
0
2
0
0
2
0
0
2
0
0
qO i
nunk“ 吋i
噌 nり
6
1
8
0
0
1
2
0
0
6
0
0
1
2
0
0
6
0
0
3
0
0
C1
450222
PO
Gap
No. o
f
T
o
t
a
l
C
e
l
l
s
b
e
r
r
a
t
i
o
n
s
Analysed A
nununUAUnUAり
D
u
r
a
t
i
o
no
f Routeo
f Treatment
巴n
t AdminiTreatm
Dose
(
h
r
.
)
s
t
e
r
e
d
(mgjkg)
i
g
n
i
f
i
c
a
n
t
l
yHighert
h
a
n0
.
0
5
1
) pS
ャイニーズノ、ムスターを用い， 2および 7週間摂取群はマ
週間摂取の 2
.5%ないし1.25%で異常細胞の有意な増加
ウスだけを用いた. 1
.3%群のマウスおよびチャイニー
が見られた.
ズハムスターに有意ではないが異常細胞がコントローノレ
AAP，APT および AAL の i
nv
i
t
r
oにおける染色
に比し増加を示した.染色体異常誘発については 2種の
7
)の報告によると AAP の
体異常誘発の有無は石館ら 1，
差は見られないが，誘発された異常細胞は，マウスでは
みが陽性となっており， APT は偽陽性， AAL は陰性
Gapおよび Break を示し，チャイニーズハムスタ{は
の結果を示しており，我々の結果とよく一致していた.
Gap のみであった.また
>，i
nv
i
t
r
o 代謝活性化試
近年，培養細胞に却を導入 8
2週間摂取の 2
.5%および 7
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，
3
1
2，1980
1
0
8
験として盛んに用いられている.この方法を用いること
により DMNのように代謝活性化されることにより強い
2
. i
nv
i
t
r
oSCE (
S
i
s
t
e
rC
h
r
o
m
a
t
i
dExchange)誘
発試験
染色体異常誘発を示す物質の検出が可能となった.松岡
AAP， APT， AALのいずれも陰性であった.
ら9)は，この代謝活性化試験を用いて先の APTを試験
3
. i
nv
i
t
r
o代謝活性化試験
，B
r
e
a
k，T
r
a
n
s
l
o
c
a
t
i
o
nなどの異常を含む構造
し
， Gap
異常を誘発することを報告している.従来，薬物を直接
培養細胞に処理し，その染色体異常を検出(いわゆる直
接試験〉するのみであったが，今回，この代謝活性化試
験を現在用いている CH
OK1細胞で検討を行ない十分
に使用可能であることを確認したの. このことにより，
APT の代謝活性化試験を行なったが，先述の松岡らが
報告する所の染色体異常誘発は見られなかった.このこ
とについては今後さらに検討を続けたい.一方 ，i
nv
i
v
o
AAP， APT， AAL のいずれも染色体異常および
SCE誘発は陰性であった.
4
. i
nv
i
v
o 試験(マウスを用いた経口および腹腔内
1回投与試験〉
AAP および APTの陽性を認めた. AALは陰性で
あった.
5
. i
nv
i
v
o 試験 (AAP添加飼料によるマウスおよ
びチャイニーズノ、ムスターの染色体試験〕
AAP の陽性を認めた.
の給果で AAPの染色体異常誘発性が見られ，この結果
は杉山ら 1) の報告とよく一致していた.また， AAP添
加飼料摂取動物の染色体分析の結果で陽性を示している
ことに対し，経口 1回投与では染色体異常が見られなか
った.このことは， AAP の暴露量によるものと考えら
れた.また， APT についても異常細胞の誘発頻度が用
量一相闘の見られる増加を示していることから， APTの
染色体異常誘発性が認められた.一方， AALは i
nv
i
t
r
o
および i
nv
i
v
o試験のいずれにおいても異常細胞の増加
文 献
1
) AnnualR
e
p
o
r
to
ft
h
eC
a
n
c
e
rR
e
s
e
a
r
c
hM
i
n
i
s
t
r
y
。
fH
e
a
l
t
ha
n
dW
e
l
f
a
r
e，1
9
7
6
2
) 吉田誠二，縄井寿美子，平賀輿吾東京衛研年報，
3
0
2，4
8，1
9
7
9
3
) 縄井寿美子，吉田誠二，中尾順子，平賀輿吾東京
衛研年報， 3
0
2，5
1，1
9
7
9
4
)N
a
t
a
r
a
j
a
n
，A
_P
.，Tat
巴s
，A
.D
.，a
n
d Vogel， N_
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，3
7，8
3，1
9
7
6
D
. :M
を認めていない.このことにより， AAL の染色体異常
5
) 縄井寿美子，吉国誠二，中尾順子，平賀輿吾:東京
誘発は無いものと考えられた.
衛研年報， 3
1
2，8
9，1
9
8
0
6
)P
o
p
e
s
c
u，N
.C
.，T
u
r
n
b
u
l
l，D
.，a
n
dD
i
p
a
o
l
o，J
.A_:
まとめ
Acetaminophen (AAP)，P
h
e
n
a
c
e
t
i
n (APT)，A
c
e
-
J
.N
a
t
l
.C
a
n
c
e
rI
n
s
t
.，Vo.
l5
9，No・ 1
，July1977
1
id
e (AAL) の染色体異常誘発性の有無を i
nv
i
t
r
o
t
a
ni
r
.，a
n
d Odashima， S
. :M
u
t
a
t
i
o
n
7
)I
s
h
i
d
a
t
e， M.J
および i
nv
i
v
oの両系を用いて調べた.
8，3
3
7，1
9
7
7
R
e
s
.，4
8
)W
e
i
n
s
t
e
n， D
. K
a
t
z， L
.M.，a
n
d Kazm
巴r
，S
.
:
1
. i
nv
i
t
r
o試験 (CHO-K1細胞を用いた直接試験〉
AAP のみが陽性であり， APTと AALは陰性であっ
た.
M
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，4
6，2
9
7，1
9
7
7
.，H
a
y
a
s
h
i， M.，and I
s
h
i
d
a
t
e， M.
9
) Matsuoka， A
u
t
a
t
i
o
nR
e
s
.，6
6，2
7
7
，1979
J
r
_ :M
東京術研年報
Ann. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，1
0
9
1
1
4，1
9
8
0
LAS に よ る マ ウ ス 抗 体 産 生 の 抑 制 に つ い て
佐々木美枝子汽中尾順子*
IrnrnunosuppressiveEffectofLAS・treatedAntigenonMice
MIEKOSASAKI*andTOSHIKONAKAO*
li
n
e
a
ra
l
k
y
l
b
e
n
z
e
n
es
u
l
f
o
n
a
t
e
)ona
n
t
i
b
o
d
yp
r
o
d
u
c
t
i
o
nwasexaminedw
i
t
hmice
Thee
f
f
e
c
to
fLAS(
r
e
a
t
e
dwithLASo
n
edayb
e
f
o
r
e
immunizedw
i
t
hSRBC (
s
h
e
e
pr
e
db
l
o
o
dc
e
l
l
)
. Animals，whichweret
i
dn
o
tshowany d
i
f
f
e
r
e
n
c
ei
na
n
t
i
b
o
d
yp
r
o
d
u
c
t
i
o
n
，t
h
a
t was a
s
s
a
y
巴d b
y
o
ra
f
t
e
rSRBCi
n
j
e
c
t
i
o
n，d
t
h
et
i
t
r
a
t
i
o
no
fserumi
m
m
u
n
o
g
l
o
b
l
i
no
rbyc
o
u
n
t
i
n
go
ft
h
eh
e
m
o
l
y
t
i
cp
l
a
q
u
ef
o
r
m
i
n
gc
e
l
l
s (PFC) o
f
h
ec
o
n
t
r
o
la
n
i
m
a
l
s immunized w
i
t
h SRBC a
l
o
n
e
. On t
h巴 o
t
h
e
rhand，a
n
i
m
a
l
s
t
h
es
p
l
e
e
n，from t
巴a
s
ei
nbothhumoral
t
h
a
tweres
i
m
u
l
t
a
n
e
o
u
s
l
ya
d
m
i
n
i
s
t
e
r
e
dw
i
t
hSRBCand LASshowedmarkedd
e
c
r
e
v
e
lo
fmicei
n
j
e
c
t
e
dw
i
t
hSRBC・LASd
i
d
anti.SRBCa
n
t
i
b
o
d
yt
i
t
e
randPFCp
r
o
d
u
c
t
i
o
n
. S巴rumIgGl
h
i
l
ei
ns
u
c
hmice，IgG
n
o
tshowanyr
e
s
p
o
n
s
ee
v
e
na
tt
h
es
e
c
o
n
d
a
r
yandt
e
r
t
i
a
r
ya
n
t
i
b
o
d
yr
e
s
p
o
n
s
e
s，w
p
r
o
d
u
c
t
i
o
nwasenhanceda
f
t
e
rs
t
i
m
u
l
a
t
i
o
nw
i
t
hSRBCa
l
o
n
e
.
sas
u
rf
a
:c
t
a
n
t，c
a
u
s
e
sh
e
m
o
l
y
s
i
so
ft
h
ee
r
y
t
h
r
o
c
y
t
e
. But a
n
t
i
b
o
d
yp
r
o
d
u
c
t
i
o
no
fa
n
i
m
a
l
s
LAS，a
l
1ed w
a
t
e
r wasn
o
ts
u
p
p
r
e
s
s
e
da
sg
r
e
a
t
l
ya
sLAS・t
r
e
a
t
e
d
immunizedw
i
t
hSRBChemolyzedw
i
t
hd
i
s
ti
r
o
b
a
b
l
y some s
u
r
f
a
c
巴 m
arkerwi
l
1
SRBC. I
ti
ss
u
g
g
e
s
t
e
dt
h
a
tLASm
o
d
i
f
i
e
sa
n
t
i
g
e
n
i
c
i
t
yo
fSRBC，p
bed
i
g
e
s
t
e
dp
a
r
t
i
a
l
l
ybyLAS，b
u
ti
t may be t
h
a
tt
h
ei
m
m
u
n
o
l
o
g
i
c
a
l memory f
o
r IgG p
r
o
d
u
c
t
i
o
n
.
r
e
m
a
i
n
si
n
t
a
ct
Keywords:LAS
，MiceimmunizedwithSRBC，Suppressiono
f IgGp
r
o
d
u
c
t
i
o
n
のための有効な実験系となりうるかも知れない.
緒 言
直鎖型アルキルベンゼシスルホン酸塩(Lin
e
a
rA
l
k
y
l
.
b
e
n
z
e
n
巴 S
u
l
f
o
n
a
t
e，以下 LAS と略す〉の毒性について
は当研究部においてこれまで種々の実験がなされ，低濃
度の LASにはほとんど毒性はないとの結論が得られて
いる 1ーの.我々は LAS毒性試験の一環としてその免疫
材料および方法
実験動物としては自家繁殖した ICR マウス
8週令
および 16~20週令の雌を用いた.
予備実験として，
LASを抗原と同時あるいは抗原投
与の前後に投与した場合の抗体産生を比較した.抗原と
反応に対する影響について調べた.実験系としては，マ
しては PBS (リン酸緩衝生理食塩水)に 10%に懸濁し
s
h
e
e
pr
e
db
l
o
o
dc
e
l
l，以下
ウスに対するヒツジ赤血球 (
た SRBC (日生研製〉を用いた.この 10%SRBC0
.
1
SRBC と略す〉免疫系を用いた
mlを腹腔内注射してマウスを免疫し，
LASを抗原投与の前
さらに 1週間後
後に投与した場合には抗 SRBC 抗体の産生には何ら変
に追加免疫を行った. LAS (花王アトラス KK
， Lot
化はみられず，抗原と同時に投与した場合にのみ抗体産
No.141) は0.4%
溶液とし，その 0.1mlを抗原と同時，
生の抑制がおこることが予備実験により判明したので，
あるいは抗原投与の 1日前，
SRBC と LAS を同時投与した場合の抗 SRBC 抗体
LASに対するコ γ トロールとしては PBSを用い，対
1日後に腹腔内注射した.
産生の経時的変化を中心に実験を行なった.この結果，
照動物には LAS の代りに PBSO.1mlを注射した.こ
1群 4匹とした.
LASによる抗体産生の抑制j
は抗原である SRBCの抗原
の実験には 16~20週令のマウスを用い，
性が LAS によって修飾されるためであろうとの結論が
初回免疫後 4日目に半数のマウスを屠殺して血清抗体価
得られた.またこの実験系でみられた抗体産生の抑制は
と牌臓の抗体産生細胞数を調べ， 1
4日自に全てのマウス
免疫動物の免疫記憶能には影響しないことが推察され
を屠殺して血清抗体価のみを調べた.
た.この現象の作用機{乍についてはさらに検討が必要で
抗原 SRBC と LASを同時投与した場合についてさ
あるが，抗体産生機序の解明や SRBC の抗原性の検索
らに詳しく検討した. 8週令の ICRマウス 35
匹を用い
*東京都立衛生研究所毒性部
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH巴a
l
t
h
2ι1，Hyakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u・ku，Tokyo，1
6
0J
a
p
a
n
Ann. Re
ρ.TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
. P.H，3ト2
，1
9
8
0
1
1
0
Table1
.S
c
h
e
d
u
!巴 f
o
rI
m
m
u
n
i
z
a
t
i
o
n
Code
AA
AC
BB
BC
CA
CB
CC
1
s
tAg (
0wk)
SRBC-LAS
SRBC-LAS
SRBC-DDW
SRBC-DDW
SRBC
SRBC
SRBC
2ndAg (
1wk)
3
r
dAg(
5wk)
4
t
hAg(
7wk)
SRBC-LAS
SRBC
SRBC-DDW
SRBC
SRBC-LAS
SRBC-DDW
SRBC
SRBC-LAS
SRBC
羽r
SRBC-DD
SRBC
SRBC-LAS
SRBC-DDW
SRBC
SRBC
SRBC
SRBC
SRBC
SRBC
SRBC
SRBC
1群 5匹づっ 7群に分け， Table1に示した免疫スケジ
ュールに従って免疫を行った.抗原としては 10%SRBC
と0.4%LAS (抗原 A)，SRBCと再蒸留水(抗原 B)，
SRBC と PBS (抗原 C) を各々等量混合し 4'Cに 1夜
静置したのちょく撹伴しその 0
.
2
m
lをマウスに腹腔内
注射した.初回免疫後 1週
5週
， 7週自に追加免疫を
行った.採血は初回免疫後1， 2，3，5，7，8週自に行
なった. 1~7 週目まではマウスの尾を鋭利なカミソり
で軽く傷つけることにより部分採血をした.血液はヘマ
トクリット管(ガラス毛細管〕にとり，採血後ただちに
ヘマトクリット遠心器により遠心し，血清部分のみを管
Cに保存した. 8週目は心
内に封じ，抗体価判定まで 4'
臓穿刺により全採血を行なった.
Table2
. D
i
r
e
c
t PFC o
fS
p
!
e
e
n
s from Mice
f
f
e
c
to
f LASImmunized w
i
t
h SRBC， and E
t
r
e
a
t
m
e
n
t
PFCj106 c
e
l
l
s
PFCjsp!een
SRBC+LAS 4
3
.
8
1
8
0X 1
02
SRBC
3
9
.6
2
7
0x1
03
LAS
02
1 - 9X1
PBS
2
.5
4
.5x1
02
SRBC
一
一LAS 3
3
.6
6
4
.2x1
08
7
.
8
1
2
.
5x1
0
2
.
6
1
5
.
3X1
02
0
.
3
-1
.4x10
0
.
6 0.7x10
2
4
.2-4
.5X 1
0
司
SRBC+LAS:Mice w
e
r
ei
n
j
e
c
t
e
dw
i
t
h SRBC
andLASt
o
g
e
t
h
e
r
.
SRBC--LAS:Mice w
e
r
ei
n
j
e
c
t
e
dw
i
t
h LAS，
adaya
f
t
e
rSRBC.
血清抗体価はヒツジ赤血球凝集反応をミクロタイトレ
{ショシ法により行なって判定した.ミクロプレート上
後に投与した場合の抗体産生は SRBC のみを投与した
で0
.
0
2
5
m
lの血清をダイリユ{ターを用いて 2倍段階希
コントロールと同様であった
LAS単独では PBS と
釈し， 10%SRBCO
.0
2
5
m
lを各ホールに加え，撹持した
同様パックグラウンドの抗体産生を促進，あるいは抑制j
のち室温に数時間静霞し，赤血球の凝集の有無を判定し
する効果はないものと思われた.
た.判定は一，土+，十十，十件の 5段階に記載し十十以
界面活性剤である LASによってもたらされる SRBC
上の凝集価を示した希釈倍率をもってその血清の抗体価
の溶血がこの抗体産生抑制の原因であると予想されたの
とした. 2メルカプトエタノ{ル (2MEと略す〉耐性
で
， LASによる溶血と，蒸留水による溶血とを比較し
抗体価の判定には，血清を O.lMの 2MEを含む希釈液
た. Fig.2~3 にこの実験の結果を示す.
この結果から
0
分静置したのち 10%SRBCO
.0
2
で段階希釈し，室温に 3
LASによる抗体産生抑制には次のような傾向が認めら
mlを加え，同様に判定した.
れた. 1) LAS処理 SRBCで免疫したマウスではコシ
牌臓の抗体産生数はカニンガム法による直接プラーグ
トロール群 (C群〉および蒸留水により SRBCを溶血さ
せた群 (B群〉に比べて血中抗体価が低下する.特に 2
数によって算定した.
結
果
M E抵抗性抗体 (IgG) の産生抑制が著しい. 2) IgG
SRBC免疫と LAS 投与の経時的関係をみるために
産生の抑制は，第 2次，第 3次抗原刺激によって抗体産
行なった予備実験の結果を T
ab!e2
および F
i
g
.
1に示す.
生が促進された時点でもみられる (AA-2W
，7W). し
F
i
g
.
lは各群のマウス血清中の抗 SRBC抗体価の変化
たがってこの抗体はほとんどが IgMであり， IgM産生
を
， T
able2は牌臓の抗体産生細胞数を示したものであ
はあまり抑制されていないことがわかる. 3) このよう
る.動物数が各群 4匹と少ないために個体聞のばらつき
な動物を SRBC のみで追加免疫すると，それまで産生
が大きいが，この実験により SRBC と LASを同時に
が抑えられていた IgG産生は他の群と大差なく促進さ
投与した場合にのみ抗体産生の抑制がみられることが判
れる. 4) 蒸留水により溶血させた SRBCで動物を免疫
明した. LASを SRBC 投与の 1日前，あるいは 1日
した場合には，抗体産生は溶血させない SRBC で免疫
東 京 衛 研 年 報 31-2
，1980
，
.
.
.
.
. 10
1
1
1
SRBC+LAS
N
QO
S8
、開ノ
E
.
q出
円。﹄・刊ω
h
工gG
IgM
凋﹃
94
OH)
N切
︿
AMWRM
・
・
~
LAS
PBS
6
Q)
-
+
'
詰
4・
4
出
c
2
•
r
~ι
︾
i
、
0
1 LAS 圃・ SRBC
，
ー
、 1
SRBCー皿 LAS
れ1
~
8
~
6
.
1
、
_
.
斗3
・
r
I
τ4-1
g
2
4
6小 崎
12
day
O A t勾
6 →い吋
PD
O →A
4
12
day
F
i
g
.l
. A
nti-bodyP
r
o
d
u
c
t
i
o
nonMiceImmunizedw
i
t
h
'SRBC
SRBC+LAS:Micew
e
r
eimmunizedw
i
t
hSRBCandLAS t
o
g
e
t
h
e
r
.
SRBC--LAS:LASi
n
j
e
c
t
i
o
n1d
a
ya
f
t
e
rSRBC.
LAS--SRBC:LASi
n
j
e
c
t
i
o
n1d
a
yb
e
f
o
r
eSRBC.
した場合とあまり変らない.
考 察
これらの実験成績から考えて，抗原 SRBCの LAS処
理による IgG産生の抑制は， LAS によってヒツジ赤血
球の抗原構造が化学的に変化させられるためであること
が推察される.蒸留水により溶血させた抗原〈これは基
a
-
112
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，1
9
8
0
ABC
ABC
10
9
r、
、
~B
。
r
l
、
、J
~
ω
.
p
7
6
叶
斗J
4
出
5
4
3
2
T
1
0・
91
-I S~
れ
。7
、
ー
.
，
。
ふ
+ 6
2
oAA
3
4
n
七
2ME-resis七a
A BB
5
6
7
weeks
3
an
七ibody (IgG)
ロcc
Q
O
rl
~
-叶
.
p
4
同
5
4
3
2
豆/ト
2
Ag
3
4
5
Ag
Ag
6
3
72weeks
Ag
F
i
g
.
2
. A
n
t
i
b
o
d
yP
r
o
d
u
c
t
i
o
no
nMiceImmunizedw
i
t
hSRBC，L
A
S
t
r
e
a
t
e
dSRBCa
n
dDDW-treated
SRBC
本的には F
orssman抗原とみなしでよく，ほぼ完全な抗
われる.しかしながら，このような IgG産生の抑制され
LAS処理に
ている動物を無処理の抗原で刺戟すると IgG産生は対照
よって赤血球の膜構造はかなりの変化をうけるものと思
群とほとんど変りなく促進されることから， IgG産生細
原性を有していると思われる〉と異なり，
東 京 衛
1
2，1
9
8
0
研 年報 3
1
1
3
10
•
9
AC
圃CA
(Nω0 ﹂ 門 )
8
7
れ門
ω -Hf14国
6
﹄
円
5
4
3
2
。
T
2
3
5
4
6
7
10
9
、
oA C
ロC A
8
2ME-resistant antibody
Q
O
O
rl
、
、
.
.
/
8
weeks
7
f
.
1
ω 6
+
'
.
汁
コ
+
〈
出
5
豆
4
3
z
T
。
2
A
C
:
J
A9
3
4
5
A9
6
7
A9
F
i
g
.
3
. AntibodyP
r
o
d
u
c
t
i
o
nonMice I
r
n
r
n
u
n
i
z
e
dw
i
t
hSRBC andSRBC-LAS
8
weeks
A
n
n
.R
e
t
. TokyoM
e
t
r
.R
e
sL
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，1
9
8
0
114
目
胞あるいは免疫記憶細胞はすでに準備されていることが
た LASを抗原である SRBCと同時にマウスに腹腔内
予想される.抗体産生は一般に免疫初期には IgM産生
注射すると，血中抗体価および牌臓の抗体産生細胞数が
が主で，抗原刺戟が持続すると IgG産生が主流になるこ
顕著に減少した.血中免疫グロプリンの IgGは第二次，
とが知られているが， IgM産生から IgG産生に切り換
第三次抗原刺戟を行ってもほとんど増加しなかった.蒸
えられる機構のどの部分かが， LAS処理 SRBCによる
留水により溶血させた SRBC ではこのような現象はみ
免疫では抑制されるのではないだろうか.
界面活性剤によって赤血球の膜抗原がどのような変化
られないので，この抗 SRBC抗体の抑制は LASによる
SRBCの抗原性の変化に起因するものと思、われる.
をうけるか，化学的な検索は未だ行っていない.今後，
LAS以外の界面活性剤についても検討する予定である.
また今回の実験結果から判断するかぎりにおいては，
この現象は抗原の変化に起因するものであり; LAS投
与は動物の免疫能あるいは抗体産生細胞の機能に直接影
響はしないものと考えられるが，この点に関しても今後
さらに検討をすすめてゆきたい.
要 約
LAS のマウス抗体産生におよぼす影響について調べ
参考文献
1
) 米山允子，伊川三枝子，中尾順子:東京衛研年報，
25，655，1974
2
) 高橋昭夫，佐藤蕪，安藤弘，久保喜一，平賀輿
吾:東京衛研年報， 26-2，6
7，1
9
7
5
3
) 米山允子，馬淵依子，伊川三枝子，小林博義，市川
久次:東京衛研年報， 27-2，1
0
5，1
9
7
6
東京衛研年報
Ann. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
. P.
I
，
王3
12
，1
1
5
1
1
7， 1
9
8
0
【
リン酸トリーn
-ブチルの雄性ラットにおよ{ます影響
大石向江ぺ大石真之ぺ平賀輿吾*
Toxicityof Tri・
n・
butylPhosphate inMaleRats
HISAEOISHI*，SHINSHIOISHI*andKOGOHIRAGAホ
Keywords: P;/酸トリ -n
ーブチル t
r
i
n
b
u
t
y
lp
h
o
s
p
h
a
t
e， 雄性ラット maler
a
t
s， 毒性 t
o
x
i
c
i
t
y， 血液凝固時
間 b
l
o
o
dc
o
a
g
u
l
a
t
i
o
nt
i
m
e
緒
言
リシ酸トリエステル類は難燃剤，ガソリン添加剤およ
びプラスチックの可塑剤などとして広く使用されてい
時間の測定4) と解剖による肉眼的観察，ならびに脳，肝
臓および腎臓の重量測定を行なった.
c. 血清生化学的検査総タンパグ質量 (TPと 略 す -
る. M
巴i
j
e
r
sおよび Vand
e
rL
e
e
r
口は 1
9
7
4
年に Waal
B
i
u
r
e
t法)，グルコ{ス量 (Glu-Glucose-Oxidase法
)
，
川の B
r
a
k
e
l の地点でリン酸ブチノレが検出されたことを
)
，
尿素窒素量 (UN-Urease-Indophenol法
報告し，
Grob2)も環境からのリ
γ酸トリエステルの検出
を報告している.また，わが国においても 1
9
7
7
年に日本
コレステ
ー L
iebermann-Burchard 法
)
，
ロ{ル量 (Cho
グルタ
ミγ酸オキサロ酢酸トラシスアミナーゼ活性 (GOT-
近海に棲息する魚類の組織中からリ γ酸トリエステルの
Reitman-Frankel法
)
，
発見された例が環境庁から報告されている町. このよう
スアミナーゼ活性 (GPT-Reitman-Frankel 法)，アル
に
，
リγ酸トリエステルは環境中に徐々に蓄積，増加し
グルタミシ酸ピルピン酸トラン
Z
つつあり，近い将来に環境汚染物質の一群になることが
450
懸念される.
今回リシ酸トリエステルの一つであるリシ酸トリブチ
400
ルのラットに対する毒性を検索し，以下の知見を得たの
で報告する.
350
実験材料ならびに実験方法
1
. 実 験 動 物 実 験 に は 生 後 4週令の JCL: Wistar
系 SPF雄性ラット〈日本クレア〉を使用した.ラット
体
300
は環境馴化のため一週間予備飼育した後，以下の実験に
用いた.動物は一般動物飼育室〈室温 22~250 ，湿度 55
~60% ，照明 11 時間〉にて個別に飼育した.
2
. 試料実験には和光純薬工業株式会社製リン酸ト
・
リn
-アーチノレ (Lot No.PKG7991，以下 TBPと略す〉
投与方法および期間
重 200
150
を使用した.
3
.
250
TBP をラット飼育用粉末
飼料(グレア CE-2) に 0 % (対照群)， 0.5%，または
1
0
0
1 %の割合で添加し， 1
0週間自由摂取させた.飲水も自
由に行なわせた.
50
4
. 検索方法
1
0
2
0
察を行なった.
b
.1
0週間経過後，ラットを断頭，採血し，血液凝固
3
0
40
50
60
70
実験期間(臼)
a
. 体重，飼料摂取量，飲水量を毎日測定し，症状観
図1.
P
;
/酸トリ n
-フ*チルを投与された雄性ラッ
トの体重の変化
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*東京都立衛生研究所毒性部薬理研究科
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
4-1
，Hyakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u
k
u， Tokyo， 1
6
0J
a
p
a
n
2
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，1
9
8
0
1
1
6
表1.雄性ラットの体重および臓器重量におよぽすリシ酸トリー何一ブチノレの影響イ
対照群
体
0
.
5% 群
1% 群
重
初期値
最終値
臓器重量
悩
目
肝
臓
腎
臓
91
.1
土 5
.
7
4
4
6
.
5土3
7
.
2
8
9
.
7土 8
.
3
3
6
8
.
8土2
2
.
8
*
*
*
9
0
.
6土 7
.
0
3
0
9
.
4土2
8
.
8
ホ
*
本
2
.
1土O
.1
(
0
.
4
6土0
.
0
4
)
1
7
.
4土1.7
.
2
0
)
(
3
.
9
0土0
3
.
1土0
.
3
.
0
3
)
(
0
.
7
0土0
.
1
*
2
.
0土0
.
0
3
)料*
(
0
.
5
3土0
1
9
.
0土2
.
2
(
5
.
1
3土0
.
3
4
)
*
*
*
2
.
8土0
.
3
*
.
0
4
)料*
(
0
.
7
7土0
1
.9土0
.
1
*
*
(
0
.
6
1土0
.
0
7
)
*林
1
8
.
9土2
.
6
.
3
6
)料*
(
6
.
0
7土0
2
.
6土0
.
2
*
*
*
(
0
.
8
5土0
.
0
6
)
*料
g
) を示す.動物数は，対照群は 1
0
匹
， 0.5%および 1 %
群は 1
1匹である.
イ {直は平均土標準偏差 (
カッコ内は体重比重量 (
g
j
1
0
0
g
体重〉を示す.星印は対照群との統計学的有意差を示す.
本:P<0.05
， 料 :P<O.Ol
， 料*:P<O.OOl
表 2
. 雄性ラットの血液成分および血液J
疑問時聞におよぼすリン酸トリー炉プチノレの影響イ
対照群
0
.
5% 群
7
.1土0
.
4
1
3
6
.
2土7
.
8
1
1
.2土1.3
8
6
.
8土1
0
.
7
7
.
5土0
.
6
.
8
*
1
2
6
.
8土7
料
1
3
.
6土1.7
9
2
.
0土1
1
.0
ナトリウム量 (
m
E
q
j
l
)
カリウム量 (
m
E
q
j
l
)
カルシウム量 (
m
g
j
d
l
)
1
3
9土3
7
.
6土0
.
7
1
4
.
8土5
.
4
1
3
7土5
7
.
3土0
.
5
1
7
.
8土7
.
5
1
3
8土2
8
.
1土0
.
5
1
4
.
7土2
.
4
血液凝固時間(秒〉
1
0
2土2
0
1
5
1土4
0
*
*
2
1
0土5
0
*
*
*
総タンパク質量 (
g
j
d
l
)
グノレコ{ス量 (
m
g
j
d
l
)
尿素窒素量 (
m
g
j
d
l
)
コレステロ{ル量 (
m
g
j
d
l
)
1% 群
8
.
2土0
.
7
料*
1
1
5
.
7土1
1
.
2
*
*
*
1
4
.
7土2
.
1
*材
1
0
5
.
5土1
6
.
2
*
*
イ 値は平均土標準偏差を示す.動物数は，対照群は 1
0
匹
， 0.5%および 1 %
群は 1
1匹である.
星印は対照群との統計学的有意差を示す.
*:P<0.05
， 料 :P<O.Ol
， 料*:Pく0
.
0
0
1
カリ性ホスファターゼ活性 (AI-P-Kind-King法〉の
結果ならびに考察
0
0 Automatic
測定は自動分析装置 (HITACHI M-4
体重の変化を図 lに示す.体重〈初期値および最終値〉
A
n
a
l
y
z
e
r
)で行なった.コリンエステラーゼ活性 (ChE)
ならびに臓器重量の結果を表 1に示す.投与群の最終体
arry-Routh法5) により測定した.血清ナトリウム
は G
重は対照群に比較して有意に減少していた.投与群の飼
量 (
Na) とカリウム量 (
K
)は炎光光度計により，また
料摂取量は実験期間中，対照群より有意に少なかった.
カルシウム量 (
C
a
)は C
o
n
n
e
r
t
yおよび B
r
i
g
g
s の方法
平均飼料摂取量は対照群，
で測定した.
6)
0.5%群
， 1%
群についてそ
れぞれ2
2
.
9，1
9
.
5および 1
7
.
4
g
j日/ラットであった.飲
d
. 脳および肝臓は P
o
t
t
e
r
E
l
v
e
j
h
e
m型のホモジナイ
水量は有意差がなかった. 1 %
群の脳と腎臓の絶対重量
ザ{により 0.2Mトリス一塩酸緩衝液 (
pH7.4)中でホモ
は対照群に比べて有意に軽かった.脳の相対重量の増加
ジナイズした.ホモジネ{トは 3
，0
0
0回転で 1
0
分間冷却
は飼料摂取量が減少したために体重増加が抑制された結
遠心し上清をコロ γエステラ{ゼ活性測定に用いた.測
呆と考えられる 8)
定は血清 ChE活性測定と同様に行なった.
血清成分および血液凝固時間の結果を表2に示す. TP
巴.体重および臓器重量は，正規化のため立方根をと
と Choは 1 %
投与群において，また U Nは TBP投与
り
， TP，G
lu，U N，GOT，GPT，Al-P，Naおよび
両群とも対照群より有意に上昇していた.これらから腎
Kは正規化のために対数変換を行なったり. 結果はすべ
臓傷害の生じたことが考えられる.血液凝固時聞は TBP
て S
t
u
d
e
n
t
'st
t
e
s
t により推計学的検討を行なった.
投与の両群において対照群より有意に延長していた.こ
東京衛研年報 3
1
2，1
9
8
0
表 3
. 雄性ラ γ トの血清酵素活性におよぽす日 γ酸
n
-プチノレの影響イ
ト
リ対照群
GOT
1
3
5土 2
2
GPT'
、 3
7
.
6土 7
.
4
AI_PO 2
4
.
4土 7
.
7
ロ
0.5%群
1
0
7土 1
5
*
*
.
0
本
3
0
.
6土 4
1
7
.
6土 4
.
8
*
表 4
. 雄性ラットのコリシエステラ{ゼ活性におよ
ぼすリン酸トリ n
-フーチルの影響イ
1 %群
1
0
4士 1
1
*
*
*
3
0
.
6土 3
.
9
*
1
8
.
9土 5
.
5
値は平均土標準偏差を示す.動物数は，対照群
0
匹
， 0.5%
および 1 %
群は 1
1匹である.
は1
星印は対照群との統計学的有意差を示す.
*:P<0.05，料:P<0.0
1，*
*
*
:P<0.0
0
1
ロ グノレタミ γ酸オキサロ酢酸トラ γスアミナ{ゼ
活性 (Karmen単位〉
グルタミ γ酸ピノレピ γ酸トラシスアミナ{ゼ活
性 (
Karmen単位〉
ニ
アルカリ性ホスファターゼ活性 (
K
i
n
g
A
r
m
s
t
r・
ong単位〉
イ
1
1
7
対照群
血清"
H
首
、
肝 臓o
イ
ロ
ハ
ニ
1
.5土 0
.
5
8
.
2土1.7
4
.
5土1.9
0.5%群
1 %群
1
.9土0
.
7
1
.7土0
.
6
1
1
.7土 3
.
2
*
* 1
0
.
3土 2
.
5
キ
5
.
3土 2
.
4
3
.
9土 2
.
4
値は平均土標準偏差を示す.動物数は，対照群
0
匹
， 0.5%および 1%
群は 1
1匹である.
は1
星印は対照群との統計学的有意差を示す.
*:P<0.05， **:P<O.Ol
μMSH/
分/ml血清
x10
→μMSH/分/mg タシパク質
μ
1MSH/
xlO分
ノmg タ γ パ グ 質
自由摂取させた. コロ γェステラ{ゼ活性は阻害され
ず，血液凝固時聞が延長した.
のことから TBPは血液J
疑問系に直接に作用するかまた
は肝臓傷害を介して間接的に凝固系に影響を与えること
が示唆される.
血清酵素活性の結果を表 3に示す. TBP投与両群の
GOTおよび GPT活性，かっ 0.5%
投与群の AレP活
謝辞血液凝固時間測定に御協力いただいた高橋省氏
に感謝いたします.
文 献
1
)M
e
i
j
e
r
s，A.P
.，a
n
dvanDerL
e
e
r，
R
.C.: Water
R
e
s
.，1
0，5
9
7
，1976
K
.:J
.C
h
r
o
m
a
t
o
g
r
.，9
0，3
0
3，1
9
7
4
2
)Grob，
性が対照群より有意に低下していた.
血清，脳および肝臓の ChE活性の結果を表 4に示す.
群とも対照群より有意に上
脳の ChE活性は 0.5%， 1 %
昇していた.肝臓と血清の ChE活性は有意差がなかっ
た. TBP は有機リシ化合物であることから ChE活性
3
)環境庁環境保健調査部保健調査室編:化学性物質と
3
年版) 9
4
，1978
環境(昭和 5
9
6
9，金原出版，
4
) 松岡松三:出血性素因と血栓症， 1
東京
が阻害されることが考えられたが，今回の実験ではラッ
5
)G
a
r
r
y
，P
.J
.，andRouth，J
.I
.
:C
l
i
n
. Chem.，1
1，
トの ChE活性は TBP によっては阻害されなかった.
9
1，1
9
6
5
6
)C
o
n
n
e
r
t
y， H.V
.，and Briggs， A.R.: Am. J
.
しかし S
a
b
i
n
eおよび Hayes9)は TBPはヒトの赤血球
および血幾 ChE活性を阻害すると報告している.著者
C
l
i
n
.P
a
t
h
o
l
.，4
5，2
9
0，1
9
6
6
らも i
nv
i
t
r
oの実験でヒトの血清 ChE活性が TBPに
7
)大石向江，大石真之，平賀輿吾:東京衛研年報， 2
9
より阻害されることを確認したが，牛血清 ChE， ラッ
2，1
7
5，1
9
7
8
8
)O
i
s
h
i，S
.，O
i
s
h
i，H.，and H
i
r
a
g
a，K
.
:T
o
x
i
c
o
l
.
nv
i
t
r
o では阻害さ
ト血清および肝臓の ChE活性は i
れなかった〈大石，未発表データ). 以上のことから，
TBP の ChE 阻害作用には種差が考えられる.脳の
ChE活性が上昇した理由は現在のところ不明である.
要 旨
リγ酸トリー侃ープチノレを飼料に添加して雄性ラ
γ
トに
ゆl
.P
h
a
r
m
a
c
o
l
.，4
7，1
5，1
9
7
9
A1
.C
.，a
n
d Hayes， F
.N.: A
r
c
h
.I
n
d
.
9
)S
a
b
i
n
e，J
7
4
，1952
O
c
c
u
t
. Med.，6，1
東京衛研年報
Ann. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2
，1
1
8
1
2
6，1
9
8
0
低温下におけあラ・y ト 死 後 変 化 の 経 時 的 観 察
多田幸恵*，矢野範男*，湯?撃勝康ぺ長?早明道*
藤井
孝ヘ平賀興吾*
Observations ofPostmortem ChangesinCourse ofTime on Rats kept in
Low Temperature
YUKIETADA
，
* NORIOYANO*
，KATSUHIROYUZA
W Aペ AKEMICHINAGASAW A汽
TAKASHI FU]lI
*a
n
dKOGOHIRAGA*
e
m
p
e
r
a
t
u
r
e
Keywords:死後変化 PostmortemChanges，ラット Rat，低温 LowT
緒 言
表1.死後時間経過に伴う，直腸湿および
体重の変動
毒性試験では試験途中での死亡動物の検索が重要であ
るが，死亡例検索の場合死後変化の発現は肉眼的・光顕
時間。庫内温度湿度直腸温
(
0
)
育施設に死亡ラットが放宣された場合の条件を設定し，
行を遅らせるためにはすみやかに冷所に保存することが
実験方法
実験動物および飼育環境
日本チヤ{ルスリパ{育生
0
344ラ γ ト雄を 4週令で購入し，室温2
5土 1
，湿度
の F
かった個体を選出し実験に用いた.
実 験 方 法 一 群 6匹 5群，計3
0匹のラットをデシケー
唱A
タ内でエ{テル麻酔により致死させ，各ラットごと 32x
ームーム 14
を与え 4週間予備飼育した.試験前日に異常がみられな
O
床面の網に伏臥位に載せ1.0~5. 5
0の冷蔵庫内に放置し
9 白 A 官 Aせ
た.冷蔵庫は試験途中に死亡個体を発見した際解剖まで
の間保存するのに利用しており，前面がガラス張りのス
テシレス製である. 5群のうち 1群 6匹については，死
5
分，死亡時，死後3
0
分
， 1時間， 1
.5
，2
，2
.5
，3
，
亡前 1
4，5，6，8
，1
0，1
2， 1
5，1
8，2
1，2
4
，4
2，4
8時聞に(以
白
38cmのビニール袋に入れ密封し， ステンレス製ケージ
- - - - - - の--4 8 告唱止噌 i a 4 E U
5
0土 5%の環境下で飼育用固型飼料(日本クレア・ CE-2)
，
・ q o q o z u q O T i q o nb
4
凋
死後変化をラットを用いて実験的に観察した.
DqO
間冷所保存することとしているが，今回低温下における
品開﹂
望ましい.当部でも死亡動物を発見した際は解剖までの
同
同
b
左右され，特に温度による影響が大きいようであり，進
K U A U A U E U A U n u n u n U A U Z U Aり z u o o n u z u F D A U r a n U F h u z u
2
).死後変化は様々な外的条件によりその進行速度が
た1，
n O R υ d告 の 4 4 4
死後変化を解剖・組織学的に検索し，その結果を報告し
RUFhU
2
25755
ao 仏仏 alL2Z3456802581428
的観察を困難にする事が多い.前回私達は，当部動物飼
1
) 死後経過時間
(
%
)
5
1
6
5
5
1
5
4
5
1
5
5
6
0
6
5
4
9
4
9
6
8
5
1
6
0
5
5
6
7
6
7
6
8
(
0
)
3
6
.
3土 0
.
32)
3
4
.
8土 0
.
7
2
8
.
8土 2
.
1
2
6
.
2土0
.
8
2
3
.
5土1.0
21
.6土 0
.
4
1
8
.
0土 0
.
4
1
5
.
4土 0
.
7
.
8
1
5
.
7土 0
1
4
.
8土0
.
6
1
1
.8土 0
.
5
1
0
.
7土0
.
6
9
.
3土 0
.
2
8
.
5土 0
.
2
.
2
6
.
7土 0
8
.
3土 0
.
1
5
.
6土 0
.
4
5
.
4土 0
.
2
.
2
5
.
5土 0
5
.
1土 0
.
1
5
.
9土 0
.
1
6
.
4土0
.
1
体 重
(g)
1
9
7
.
1土 3
.
82)
1
9
7
.
0土 3
.
9
1
9
6
.
6土 4
.
5
1
9
7
.
8土4
.
5
1
9
8
.
1土4
.
0
1
9
8
.
1土 4
.
7
1
9
8
.
5土 3
.
4
1
9
8
.
1土 3
.
8
1
9
8
.
6土 4
.
3
1
9
7
.
8土 3
.
6
1
9
8
.
6土 3
.
0
1
9
8
.
3土4
.
3
1
9
8
.
1土4
.
0
1
9
8
.
0土 4
.
1
1
9
7
.
6土 3
.
8
1
9
8
.
5土 2
.
8
1
9
7
.
8土 3
.
1
1
9
8
.
1土 3
.
8
1
9
7
.
8土3
.
9
1
9
8
.
1土 4
.
2
1
9
7
.
5土 4
.
2
1
9
7
.
6土 3
.
8
2
) 平均値土標準偏差
るが，死体硬直については観察部位を躯幹，前肢，後肢
下死後時聞を hとする〉体重，体温(直腸温)，冷蔵庫内
の 3カ所に限定した.他の 4群については 6，1
2，2
4
，
定を行い，合わせて外表部，死体硬直
の温度・湿度の狽u
48hにそれぞれ 1群ずつ解剖し肉眼的検索を行った後器
の観察を行った.観察法，使用器具は前回。と同様であ
官・組織を摘出した.器官・組織は緩衝ホルマリ γ中に
1
6
0 東京都新宿区百人町 3-24-1
*TokyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
41
，H
yakunincho3chome，S
h
i
n
j
u
k
u・1m， Tokyo， 1
6
0J
a
p
a
n
2
*東京都立衛生研究所毒性部
一
一
⋮
東 京 衛 研年報 3
1
2，1
9
8
0
表 2
. 死後時間経過に伴う死体硬直および寛解
時 間1)
躯 幹
+#
一
一 + +十掛
+i
十
十
件
一5 6 6 6 3
90EU 唱 ム 噌i
一1 1 5 1
一4 4 4 4 1
告噌
一5 5 6 6 3
qua
i
一1 5 1 1
一3 4 4 5 1
一2 5 6 5 6
2
a u p o n o n o n o 。。の。
晶
1
一6 6 6
一6 6 6
1
1
) 死後経過時間
固定し，通常のパラフィ γ切片作製法により組織標本を
2
) 動物数/総動物数 6
赤色涙液の流出は低温放置のラットでは少数にみられた
のみであった.眼以外の変化として 6h以降に鼻周囲に
作製し，光顕的に観察した.
淡赤色液の付着が観察された.
実験結果
体 重 表 1に示したように，死後経過時間とは無関係
内部器官・組織の観察
皮下組織皮下血管内の血液凝固を前回の方法1)によ
にほぼ一定の値を示した.
体 温 表 1に示したように，
ム
2
) 動物数/総動物数 6
EURUFD
O白
9M R d n d R b R d
6
6
6
ー
n u n u n U A U A U 唱止唱えの，向。，“内0 4 4 F D n o o O A U O G F D 0 0 噌4 4 告 η600
ーム唱・ 4 唱A t ム ヮ “ ヮ “ d せ A
4
一6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6
一1 3 6
一1 5 3
aunononocOEU
死後経過時間
由
6
44666666664
2
6
6
州
左眼球
時 間1)
66662211a
+十
一
t49hMF09hM9u
10
12
1
5
18
2
1
24
42
48
後 肢
一1 5 4
2
.
5
3
4
5
6
8
一6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6
一1 3 5
一1 1 4 3 1
1
.
5
2
表 3
. 死後時間経過に伴う眼球の白濁
前 肢
666665
﹀
2
6
666551
-0
.
2
5
0
0
.
2
5
0
.
5
0
.
7
5
1
十
件
1
1
9
0hから 3hの間で急速
8
り検索したところ， 24hまで血液の流動性がみられ， 4
な低下がみられ，以後徐々に低下し 42hで庫内温度と近
hで流動性がみられなかった.室温放置のラットでみら
似温に低下した.
れた鼠径部の黒色斑は，低温放置の場合48hまでの観察
死体硬直および寛解
ではみられなかった.黒色斑とは別に， 24h以降の腹部
前回。の動物飼育室と同条件に放置く以下室温放置と
皮下に淡緑色，淡黒色の着色がみられた.着色は時間経
する〉したラットと比較し，硬直の発現に遅れがみられ
過と共に濃さを増し，暗緑色，赤褐色を呈した.また腹
た.硬直は 1hで始まり 3hで最高に達し，その後長時
筋にも同様の着色が観察された.
腹 水 室 温 放 置 で は 12hで全例に腹水の貯留がみられ
間持続し 42hで寛解の開始が観察された.
たが，低温放置では 48hまでの観察で認められなかった.
外表部の観察
前回の実験で変化のみられた眼球の観察を中心に行っ
5
分で白濁の出現がみられ，
た.両眼球ともに死後4
3h
で白濁が顕著となった. 8hで白濁の中心部に透明な部
分が現われ白濁は徐々に淡くなり 24hで消失した.白濁
以外の変化として室温放置でみられた涙液の流出および
腐敗臭
室温放置では 24hで腐敗臭顕著となったが，
低温放置では48hまでで認められなかった.
腹腔内脂肪脂肪組織は不透明な乳白色を呈し，透明
感および軟化はみられなかった.
牌臓
48hで辺縁が黒色に変化し，並行して軟化がみ
1
2
0
Ann. R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，1
9
8
0
表 4
. 内部器官・組織の観察結果
〉
時 間
後 経 過 時 間 (
死
肉
限
的
観
察
1
2
6
所 見
+
inO 唱
i
咽
一1 1 2
i
噌 d 佐 popononOEUFD44
一5 5 2
5
晶
噌上自
1
2
1
2
1
一2 3 3 2 3 3 4
3
2
4
2
1
3 1 1
一2 3 3 2 2 3 3 2
ponononononorD i
噌 noρ0
3
川市
，
“
円
。
仏
dZ
1
Lη6η
“
ヮ
の
Gn，uponono
3 1
3 1
3432635
4
2
d
3
5
t
++
ti作
。
。
“
，
。A-"b。
2
一1 1 4 3 1 2 3 2 2 2
D T ム n b a u G u n u n O H D 8官
c o n o q L a佳 nO
4
川町
3
白戸
3
9
3
H廿
胃4
一6 6 6 6 6 6 6 6 6
nononononononononoraaunOranonononononono
1
戸
b
O
戸 F D
auoonoqo
噌よ
1
+
一1 1 5 3 1 5
t
++
川市
川市
aupononO
4 1
3
i
噌
1
川廿
+
2
1
4
。 必 噌A
胸水貯留
腹水貯留
胃・前胃一敏援の消失
腺胃一被援の消失
前胃ー透明感
-
5
nOFDnoηoaucuponononono
腐敗臭顕著
牌臓・尾部黒色
辺縁軟化
鮮紅色
肺臓・陪赤色斑
肝臓・帯灰赤色の虎斑模様
辺縁黒色
軟化
腸管・胃ーガス貯留
十二指腸ーガス貯留
空腸，回腸ーガス貯留
盲腸ーガス貯留
結腸，直腸ーガス貯留
胃ー血液の惨み
十二指腸ー血液の珍み
g
g
腸，回腸ー血液の渉み
盲腸ー血液の惨み
結腸，直腸ー血液の惨み
腸管膜・血液の惨み
腎臓・軟化
緑褐色
精巣・軟化
血管走行不明瞭化
精褒・着色(赤褐色〉
脳・軟化
血管走行不明瞭化
4
6
6
6
6
6
6
6
6
4
6
5
+
噌よ
21)
鼻周閤淡赤色液付着
皮下組織・鼠径部の黒色擁
着色(緑色，黒色，赤褐色〉
皮下血管内の血液凝固
腹筋・着色(黒色，赤褐色〉
脂肪組織・透明感
-
264556666666
ー +
48h
4
1
1
2
1
1)動物数/総動物数 6
られた.また 6例中 3例で全体の色調が淡くなり鮮紅色
を呈する変化がみられた.
肺時間経過に伴い崎赤色斑が多くみられた.
肝臓
時間経過に伴い黒色調を増し黒赤色となり，斑
状に血液の抜けたような灰色調を帯びた部分がみられ
た. 24h以降では肝臓の辺縁部が黒色に変化していた.
東 京
1
2，1
9
8
0
街 研 年報 3
表 5
1.光鎖的観察結果
表 5
2
. 光顕的観察結果
死後経過時間
死後経過時間
光鎖的観察所見
++
++
粘膜固有層結合繊細胞の核濃縮
リンパ節
十
リシパ球核濃縮
++
+
組織構築崩壊
髄質に広汎性出血
++
リシパ球核濃縮
粘膜の表在上皮剥離
腺細胞の解離
胃腺主細胞萎縮および核濃縮
胃腺壁細胞核消失
空・回腸
++
繊毛粘膜上皮剥離
心臓
+
筋細胞核萎縮
+
+
腸腺脱落
染色性低下および組織の無構造化
肺
腕胞毛細血管内に血球
++
気管粘膜上皮萎縮
肺胞腔内にエオジ γ淡染の残i
澄
+++
肺胞上皮核濃縮
肺胞上皮剥離
分泌管および導管萎縮
+
染色性低下および組織の無構造化
腎臓
皮髄境界部に赤血球集族
尿細管上皮の脱落(腎迷路〉
遠位尿細管上皮の腫脹
苦下腺
++
+
腺房細胞核濃縮
尿細管上皮核濃縮(皮質部〉
(皮髄境界部〉
〈髄質〉
耳下腺
分泌管および導管萎縮
+
+
粘膜の表在上皮剥離
+
分泌管上皮核委縮
++十
腺房細胞萎縮
腺房細胞核濃縮
十
+
+
肝臓
十
4
十
十+
件
件
十
十
十
+ ++
++
++十
+
++廿ト
*
精巣
精細胞の局所性消失
間質細胞核濃縮
++
++
*
下垂体
類洞の拡張および類j
同内に血球
染色性低下および組織の無構造化
肝細胞核萎縮
++++
+
+十
+
類洞内皮細胞核濃縮
腺房細胞核濃縮
勝島細胞崩壊
+
後葉細胞核濃縮
副腎
細胞の萎縮および核濃縮
細胞の局所性消失
+ +
血管腔拡張
神経謬細胞核萎縮
*
++
脳
+
++
H
腺房細胞萎縮
+十
++
+ +
廿+
染色性低下および組織の無構造化
前葉細胞崩壊
ト
十
++++
+++
勝臓
+
結腸
+++
*
+
++
+
+
十
*
腸腺脱落
染色性低下および組織の無構造化
分泌管および導管崩壊
分泌管および導管萎縮
*
+*
*
+
++
+十
+什
粘膜の表在上皮剥離
*
+
+++
++
十
件
盲腸
廿
川
肺胞壁非薄化
顎下腺
十
4
十
+++
+++
+++
胸腺
胃(腺胃〉
斗H H廿
皮質および髄質に小円形の空際
H
粘膜上皮基底層細胞の核濃縮
粘膜上皮中間層細胞の核濃縮
川
廿
什
廿 廿
N
廿++
++
+
2 24 48h
6 1
胃(前胃〉
H
+H 廿
廿+
りシパ球核濃縮
光顕的観察所見
6 1
2 24 48h
牌臓
皮質および髄質に小円形の空隙
1
2
1
貯留が，低温放置では 48hまでの観察でみられなかった.
胃
6hで 6例 中 2例の前胃に徽援の消失がみられ，
盲腸の血管走行が 24hで不明瞭となり， 48hで再び明瞭
48hで 6例 中 1例の前腎および腺胃に問様の変化が観察
となった.また腸管の血管に沿った血液の惨みが 24hで
された.また48hでは前胃に透明感がみられた.
みられ，空・回腸ではこの変化が顕著にみられた. 48h
腸管
室温放置で 3hより観察された腸管内のガスの
のラ
γ
ト全例で腸管壁の軟化がみられ， !場管は弾力性を
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.
H
.，
3
1
2，1
9
8
0
1
2
2
失い透明感を増した.
に染色されない，いわゆる融解壊死の像が全例にみられ
腸管膜腸管でみられたと同様の血液の惨みが 6hよ
4および48hでは全例にみられた.
り観察され， 2
12h以降で軟化が観察され， 2
4および48hで軟
腎臓
包hで 2
1
7
1
Jに み ら れ た の み で あ っ
たが，低温放置では4
た.
感臓
6hで腺房細胞の崩壊および染色性の低下が限
化に加え色調が淡くなり緑褐色を塁する変化が観察され
局性にみられた.室温放置ではこの染色性の低下が時間
た.
の経過と共に程度を増したが，低温放置では48hにおい
精巣
24h以降で精巣表面の血管走行の不明瞭化およ
陰嚢
6h以降で陰嚢壁の血管走行が顕著にみられ，
陰袈全体として暗赤色ないし紫赤色を呈した.
脳
2
4および48hで 6例中 3例に軟化がみられた.ま
た血管走行の不明瞭化が数例に観察された.
組織の光顕的観察
牌臓・リンパ節・胸腺
ても 6h同様軽度にみられたのみであった. 48hで勝島
の境界が不明際となり一部の勝島細胞は崩壊し核の消失
び軟化がみられた.
がみられた.
胃(前胃〉
前胃粘膜と食道とはほぼ同様の変化を示
し
， 6hで基底層および中間層細胞の核濃縮がみられ時
間の経過と共に程度を増した. 24h以降で粘膜固有層の
結合繊細胞の核濃縮が軽度にみられた.
12hでロンパ球の核濃縮が軽
度にみられ，核のク口マチン網工が不明瞭となった .48h
胃〈腺宵)
6hで粘膜表在上皮の剥離が軽度にみら
れ，時間の経過と共に程度を増した. 24h以降で胃腺主
でリシパ球の核濃縮は程度を増したが，濃縮を示さない
細胞の萎縮および核濃縮がみられ，主細胞は好塩基性を
リγ パ球および骨髄系細胞も多数みられ， 48hの標本に
増した.壁細胞は個々に解離し腫脹および核の消失が認
おいてもリンパ球と骨髄系細胞との識別が可能であっ
められた.
た.また染色性の低下はほとんどみられなかった.以上
腸 管 空 ・ 回 ・ 結 腸 :12hで粘膜の表在上皮の剥離お
リンパ節では 12h以降
よび腸腺の脱落が軽度にみられ， 24h以降で組織の染色
で赤牌髄および白牌髄に小円形の空隙がみられ，その部
性低下が限局性に認められた.盲腸:12h以降で腸腺の
分にエオジ γ淡染の物質が存在するという変化が散在し
脱落がみられ，この変化が顕著な部位では筋層と粘膜固
の血球の変化と並行して，牌臓，
間性
て認められた.胸腺では 6h以降で髄質に広汎な浸 i
有層のみが残存していた.また 24h以降で組織の染色性
の出血が認められた.
低下がみられた.
心臓・骨格筋顕著な変化がみられず，染色性の低下
もほとんどみられなかった.
肺
12h以降で肺胞上皮の剥離がみられ，肺胞腔内に
腎臓
6hで腎迷路にあたる主部尿細管上皮の細胞質
が細穎粒状となり，エオジン染色性が低下し核が濃縮す
る変化がみられた. この変化は尿細管の崩壊へと移行
エオジン淡染の無構造物質が認められた. 24h以降で気
し，時間の経過と共に腎迷路では尿細管の崩壊像が多数
管支粘膜上皮の萎縮がみられ，気管支粘膜が固有層より
観察された.この変化と並行して，皮質部の遠位尿細管
遊離していた.
上皮が腫脹し細胞質が脱落，核が消失する変化が散在し
口腔腺顎下腺・耳下腺では腺房に比較し導管・分泌
管で顕著な変化がみられ， 6h以降で分泌管の萎縮， 24h
以降で分泌管の崩壊が観察された. 48hで耳下腺腺房細
胞の萎縮がみられ，細胞は好塩基性を増し腺房聞に空隙
て認められた.髄質では集合管および乳頭管上皮の核濃
縮が 24h以降で顕著に認められた.
精巣
24h以降で精細胞の局所性消失が軽度にみら
れ，精細管の細胞集団の中にエオジ γ淡染の無構造物質
を生じていた.舌下腺では腺房と導管の変化が並行して
を満した小笠隙が認められた. 12h以降で間質細胞の核
みられ， 48hで導管の萎縮および腺房細胞の核濃縮が軽
濃縮が軽度にみられたが室温放置でみられた解離および
度に認められた.
細胞の消失はみられなかった.
肝臓
6hで類洞の拡張がみられ，拡張した類洞には
脳
12hで神経謬細胞の核濃縮がみられ，核の周囲の
多数の赤血球が存在した.この変化は中心静脈付近で顕
細胞質に空隙を生じていた.また 24hで血管腔の拡張が
著にみられたが，時間の経過と共に赤血球が小葉中間部
みられた.
に集族する傾向がみられた. 24hで肝細胞核の萎縮がみ
総括および考察
られ，萎縮した核の周囲の細胞質には空隙がみられた.
死後経過時聞により多様な変化が観察されたが，個体
この変化と並行し苧て肝細胞の細胞質に空胞が認められ
聞の差なくみられた変化をまとめると次のようである.
た.室温放置では 24h以降で，肝細胞の核が消失し組織
5
分:眼球の白濁出現
死後4
が崩壊し無構造となり，ヘマトキシリシおよびエオジン
死後 1時間:死体硬直の発現
東京衛研年報 3
1
2， 1
9
8
0
1
2
3
死後 6時間:胸腺髄質に広汎性出血，顎下腺・耳下腺
今回の観察から，死亡動物はなるべくすみやかに低温
で分泌管萎縮，腺胃粘膜の表在上皮剥離，勝臓で限局性
保存すべきであると考えられるが動物実験においては発
に染色性低下，腎臓で尿細管の散在性崩壊
見までの間死亡個体が室温放置されるのが実情である.
2
時間:盲腸で腺組織の脱落，肺胞上皮の剥離
死後 1
死後2
4時間:腹部皮下の着色，肝臓・牌臓で辺縁部が
黒色に変化
今後の検討課題として，死亡個体を一定時間室温放置し
た後低温下に保存し，その際の死後変化を経時的に観察
することが重要で、あると思われる.
死後4
8
時間:皮下血管内の血液凝固，牌臓・肝臓・腎
臓・脳・腸管の軟化，死体硬直の寛解開始
以上のように低温下放置のラヅトでは死後 6時間で軽
度に発現した変化が，その後も軽度ないし中等度の変化
で継続する傾向がみられ，時間の経過と共に著変した室
温放置での死後変化とは大いに異なっていた.
文 献
1
)阿部幸恵ら:東京衛研年報， 2
9
2，1
8
0，1
9
7
8
0
2，1
6
0，1
9
7
9
2
)多国幸恵ら:東京衛研年報， 3
1，1
9
7
2，南江堂
3
)錫谷徹:法医診断学， 4
4
) Chandra，J
a
g
d
i
s
h，andS
a
b
h
a
r
w
a
l，K
.:
J
.lndian
Med. A
s
s
.，5
1 (7)，3
3
6，1
9
6
8
今回観察された変化と前回の室混放置での死後変化と
を比較すると，室温放置のラットでみられ，低温放置の
ラットではみられなかった変化として次のようなものが
写真説明
写真1. 死後4
8
時間:腹部皮下に着色がみられ，内部器
官は帯黒色を呈する.
掲げられる.腐敗臭，腹水の貯留，腸管内ガス貯留，組
写真2
8
. :ヘマトキシリ γ ・エオジン重染色標本
織構築の崩壊，組織の広汎な染色性低下.これらの変化
写真 2
. 牌臓〈死後2
4
時間， x2
0
0
):Yンパ球の核濃縮
2
時間以降にみられ
はいずれも室温放置のラットで死後1
が軽度にみられ，赤牌髄および白牌髄に円形の
た変化であり，自家融解から腐敗へと進行する死後変化
の行程3-4)が，低温下に保存されることにより， 死後 48
時間で、は腐敗に至る前の状態に保たれたものと考えられ
る.これは室温放置で大部分の組織にヘマトキシリン染
性の粁菌が観察されたのに対し，低温放置では腸管でし
かみられなかった点，また解剖時に腐敗臭，腸管内ガス
貯留が観察されなかった点からも推測できる.このよう
小空隙がみられる.
写真 3
. 顎下腺(死後2
4時間， x1
0
0
):分泌管の萎縮お
よび崩壊がみられる.
写真4
. 肝臓〈死後2
4
時間， x
200):類洞の拡張および
肝細胞の空胞化がみられる.
写真 5
. 胃(死後2
4時間， x1
0
0
):腺細胞の萎縮および
粘膜表在上皮の剥離がみられる.
に死亡個体を低温下に保存することは不可欠であると思
写真 6
. 盲腸〈死後2
4
時間， x1
0
0
):腸腺の脱落がみら
われる.ただし腐敗に至る前の個体，すなわち組織の広
れ粘膜周有層と筋層のみが残存する.
汎な染色性低下，組織の無構造化がみられず軽度の死後
写真7
. 腎臓〈死後2
4
時間， x1
0
0
):腎迷路の主部尿細
変化のみが観察される個体の検鏡においては，ラット固
管で尿細管上皮の脱落および核の消失がみられ
有の病変と死後変化との識別が困難であると思われ，そ
の際，腎迷路における主部尿細管の変性および顎下腺の
分泌管変性などは，死後経過時聞に相応して出現するた
め判断の一助となることと思われる.
る.
写真 8
. 脳〈死後2
4時間， x
2
0
0
)
:神経謬細胞の核萎縮
および核の周囲の細胞質に空隙がみられる.
。、
l1j
αD
t、
.
東京衛研年報
A
n
n
.R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，1
2
7
1
3
0，1
9
8
0
経胎盤法・新生仔投与法によ~マウス発癒試験(予備的考察〉
佐々木美枝子ペ中尾
j
原子汽平賀興吾*
CarcinogenBioassayin Mice-Preliminary ExperimentsonTransplacental and
NeonatalTreatmentsof TestSubstance
MIEKOSASAKI*，TOSHIKONAKAO*andKOGO HIRAGA*
a
r
c
i
n
o
g
e
n
i
c
i
t
y，ICR マウス ICRr
n
i
c
e，経胎盤発癌 T
r
a
n
s
p
l
a
c
e
n
t
a
lC
a
r
c
i
n
o
g
e
n
i
c
i
t
y，
Keywords:発痕性 C
新生仔投与法 T
r
e
a
t
r
n
e
n
tonN
e
o
n
a
t
a
lMice，チアベンダゾ{ル T
h
i
a
b
e
n
d
a
z
o
l
e
緒
に化学物質を投与することにより催奇形性の検討がなさ
百
化学物質の発癌性の検索は毒性研究のきわめて重要な
れているが，これらの実験成績に合わせて，経胎盤・新
部門の一つである.最近，発癌性と突然変異誘起性，染
生仔投与発癌試験を行うべく準備をすすめている.今回
色体異常誘起性との関連性がしだいに明らかになり，微
防カピ剤であるチアベ γ ダゾールを被検物質として，こ
生物や培養細胞を用いた i
nv
i
t
r
o の系で発癌性のスグ
れらの方法による発癌試験のための予備実験を行ったの
リーニングがさかんに行われるようになった.しかし現
で，その結果について報告する.
在でも，最終的には動物を用いて発癌性の有無をテスト
することが必要であるとされている.
材料および方法
実験動物としては当部動物飼育室において自家繁殖さ
動物を用いる実験方法として，成熟動物を使う試験の
せた 8~12週令の ICR マウス，雌58匹，雄 18匹を用い
他に，経胎盤法と新生仔法とが知られている.前者は妊
た.雌マウスは発情周期を観察して 1
8
匹
， 1
8
匹
， 2
4
匹の
娠中の母体に化学物質を投与してその子孫動物における
3群に分け， 1群づっ 3固に分けて交配させた.雌マウ
腫湯発生の有無をみるものであり，後者は化学物質を出
スと雄マウスを 1:1あるいは 3 :1に同居させ毎朝雌
生直後の新生仔期の動物に投与しその腫場発生をみるも
マウスの睦栓の有無を観察した.腫桧の認められたもの
のである.化学物質を妊娠動物に与えた場合，その物質
を妊娠マウスとみなし，妊娠 0日とした.妊娠マウスは
あるいはその代謝物が胎盤を通過して胎仔に作用し，生
雄と分離してプラスチッグケ{ジに個別飼いとした. 4
2
後腫湯を発生させることは経胎盤発癌として知られてい
匹の妊娠マウスのうち，経胎盤発癌試験に 3
5
匹を，新生
る.妊娠時期の母体がある種の化学物質にさらされた場
仔投与発癌試験に 7匹を用いた.新生仔マウスは出産後
合に，その子供に特異的な腫療が発生する例は臨床医学
2
4時間以内に体重を測定し，そのまま母マウスに晴乳さ
的にもいくつかの症例がある.また妊娠のどの時期に化
0日目に仔マウスを母マウスと分離し，体
せた.出生後3
学物質にさらされるかによって，妊娠中期では奇形の発
重を測定したのち雌雄に分けて，大型のアルミケ{ジに
生が，妊娠後期では腫湯発生がみられる例も動物実験に
移して飼育を続けた.ケージあたりの匹数は 5~10匹と
おいて知られている 1-3) 新生仔投与発癌試験は，
出生
した.動物は全実験期間中，温度 2
5土 1
0，湿度 5
5土 5%，
直後， 2
4
時間以内に動物に被検物質を投与する方法であ
照明午前 9時 午後 5時，換気毎時 1
0回の動物飼育室で
み一般に新生仔期の動物は発癌物質に対する感受性が
飼育し，日本グレア製固型飼料 CE-2および水道水を自
高い.これは，新生仔期は各組織器官が急速に増大する
由摂取させた.
時期であること，また内分泌務官や免疫機能が未発達で
被検物質として用いたチアベ γダゾール (
T
h
i
a
b
e・
あることにも起因していると思われるり. このような点
n
d
a
z
o
l
e，東京化成 TCI-E.P
.L
o
t
.AL01，以下 TBZ
から考えて，経胎盤発癌試験や新生仔投与発癌試験は，
と略記する〉は，経胎盤投与の場合にはオリ{ブ油に懸
奇形の発生や小児がんの問題などと密接な関係がある.
濁させ胃ゾ γデによって娃娠マウスに強制経口投与を行
当研究部では，化学物質の慢性毒性試験の一環として
った.投与量は小燃らの行った催奇形性実験の量を参考
成熟動物に対する発癌性について検索し，また妊娠動物
にしたが，詳細は結果の項に記す.また，新生仔投与の
1
6
0 東京都新宿区百人町 3
ー 2
4-1
*東京都立衛生研究所毒性部
キ T
okyoM
e
t
r
o
p
o
l
i
t
a
nR
e
s
e
a
r
c
hL
a
b
o
r
a
t
o
r
yo
fP
u
b
l
i
cH
e
a
l
t
h
2
4
1，Hyakunincho3c
h
o
r
n
e，S
h
i
n
j
u
k
u
.
k
u，Tokyo，1
6
0]
a
p
a
n
Ann R
e
p
. TokyoM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P
.H
.
，3
1
2，1
9
8
0
1
2
8
目
表1. 妊娠後期 TBZ投与の出産におよぼす効果(1)
〈実験 1)
No.
1
5
0
0
rF
FF
F
F
123456
EEa
789012
噌E田 直 司
噌目・晶
1
3
新生仔数
(出産数〉
TBZ (mg/kg)*1
7
5
0
f
f
"
"
"
0
(
5
5
1
9
)
*
3
(
5
5
1
8
)
(
5
5
2
0
)
(
5
5
1
8
)
(
5
5
2
1
)
(
5
5
1
7
)
母体死亡
出 産
母体死亡
出 産
流 産
出 産
(
5
5
1
7
)
(
5
5
2
0
)
(
5
5
1
7
)
(
5
5
2
0
)
(
5
5
1
7
)
(
5
5
2
1
)
出
産 (
5
5
1
9
)
新生仔平均体重*
2
1
.
5
7
g
9
1
1
.
6
8
6
6
1
1
8
8
1
2
1
。
。 。
。
。 。
1
5
1
.90
1
.90
NT
料
1
.
6
3
間四
i
守 AUAU
凡噌
A
TTT 江
UNNNU
nunU
Aa
唱
nununununU
i
7
噌
E4
(
5
5
2
0
)
(
S
5
1
8
)
2wk以内
。 。
唱ム唱 ipa ・唱ム唱
" (55-20)
Ff
FF
F
F
FF
FF
F
F
4ゐ 噌 目 品 噌 目 品 噌
" ((5555--2109))
hr以内
2
4
9
a
。
噌Eム 吋
45678
〈オリ{プ油〉
出 産
流 産
出 産
流 産
出 産
母体死亡
新生仔死亡
284
*
**
*
1 妊娠 1
6日目のマウスに 1
5
0
0
m
g
/
1
0
m
lO
l
i
v
eo
i
l
j
k
g，750mg/kg の TBZおよび 1
0
m
lOliveoiljkgを強制
経口投与した.
新生仔体重は出生後2
4
時間以内に測定した.
( )内は妊娠日数を示す.
測定せず.
場合には，
TBZ50mgを 1
m
lの DM50 (Dimethyl
からのみであった. TBZ750mg/kg投与群でも母体死
s
u
l
f
o
x
i
d
e
) に溶解し，この原液を 3倍段階希釈して原液
亡 2，流産 1，出産後新生仔の 5
/
8
が死亡したもの 1と
，
の1
/
3，1
/
9，1
/
2
7
濃度の溶液を作成した.各濃度の溶液
妊娠マウスに対する急性毒性が認められた.オロ{プ油
および浴媒として用いた DM50の各 O
.
O
l
m
lを生後24時
のみの投与では母体死亡，流産はなく，出生した新生仔
間以内の新生仔マウスの背部皮下に注射した.
の死亡もほとんど認められなかった(表1).
結 果
経胎盤発癌試験:実験 1として， 18
匹の妊娠マウスを
6匹づっの 3群に分け，妊娠 1
6日目にオ日{プ治に懸濁
実験 1の投与方法では経口投与容最がマウスにとって
多量すぎ，そのための影響も考えられたので，つぎに投与
容量をマウスあたり O
.1
m
lに限定し，マウスあたり 25
した TBZおよびオ p-ブ油のみを胃ゾシデにより強制j
6，1
7
，1
8日自に 3日間連
mg，12.5mgの TBZを妊娠 1
経口投与した.投与量は 1
500mgTBZ/10mlo
l
i
v
eo
i
l
j
k
g，
50mg/mlo
l
i
v
e
続投与する方法を試みた (TBZ濃度は 2
750mgTBZ/10mlo
l
i
v巴 o
i
lおよび 1
0
m
l
o
l
i
v
eo
i
l
/
k
gで
2
5
r
n
g
/
m
lo
l
i
v
eo
i
l
)
. TBZ投与量は体重あ
o
i
lおよび 1
ある.この投与方法は催奇形性試験において用いられて
たりの量に換算すると 500~600mg および 250~350mg/
6日目のマウスでは投与容量は
いる方法であるが，妊娠 1
kg/day となる(実験 2
)
.
マウスあたり 0
.
5
m
lに達した.この方法で TBZを投与
各投与量につき 1群 6匹の妊娠マウスにこの投与方法
したマウスの出産への影響，新生仔の生死，および新生
で TEZ連続投与を行ったところ，母体死亡，流産は全
4
時間以内の平均体重を表 lに示した. TBZ
仔の出生後2
くみられなかった.出産新生仔数は母マウスあたり 7~
1500mg/kg投与群では， 1匹が翌日死亡， 2匹が妊娠
1
2
匹，総数 1
0
8
匹で，このうち 12.5mgTBZ投与群の 2
1
8日自に流産， 1匹では出産の遅延がみられた上に新生
匹の仔マウスが離乳期に死亡した以外に仔マウスの死亡
仔は出産後死亡し，生仔が得られたのは 2匹の母マウス
もみられなかった.
1
2，1
9
8
0
東 京 衛研 年報 3
1
2
9
表 2
. 妊娠後期 TBZ投与の出産におよぼす効果 (2)
(実験 2)
TBZ量 *
1
生仔数/出産仔数料
25mg/mouse
w
(非妊〉
No.
1
2
.5mg/mouse
H
Fr
Fy
FF
F
。L
内。
TBZ量制
595~470
mg
560~475
555~480
640~540
560~480
295~250
300~260
330~292
335~318
320~290
離乳前死亡*
8
hununuhunu
f
i
唱
ヲ nunU04
i
i
i
噌
i
噌
咽
噌
官
ψ叩 や や
ψmTψATψaT
12845
"
pd
G
内O S A
"
"
"
生仔数/出産仔数料
TBZmg/kg/1
ヨ
料
325~272
/ゾ///
噌ょの
4 4 4 4 4ZU
50mg/mouse
11/11
7/7
9/9
9/9
11/11
10/10
8/8
10/10
11/11
12/12
7muuu
〈実験 3)
No.
。
10/10
一0 0 0 0 0 O G I G -
守
ム 04ηoaaτranonroonudAU 噌
i
4 のρ η L の
A o
nG の
よ
“ ηLndqG の
内 qRU
"
"
離乳前死亡判
TBZmg/kg
料
1
3
0
0mg
1
1
0
0
1
1
0
0
1
3
0
0
1
2
0
0
TBZ25mg または 1
2
.5mg/0.1mlオリープ油/マウスを妊娠 1
6，1
7および 1
8日自に 3日連続経口投与した.
生後2
4時間以内の生存新生仔数/出産仔数
生後 3週間以内の死亡
体重あたりの TBZ投与量
TBZ5
0
m
g
/
0
.2mlォロープ油/マウスを妊娠 1
7日自に投与.
TBZ量制
inunU
A
唱
(DMSO)
12/13
9/12
11/11
14/14
13/13
唱
o
U
凸
1:1(50mg/ml)
1
:3
1:9
1
:2
7
. 新生仔期 TBZ投与結果
表 3
生存仔数/新生仔数料
離乳前死亡
TBZ/kg料
300mg
1
0
0
3
0
1
0
0
*
1 50mg/ml溶液およびその 1/3，1/9，1/29濃度の希釈液を DMSOを溶媒として作成した.出生後24時間以
.01mlを注射した.
内の新生仔マウスの背部皮下に各濃度溶液の 0
*
2 注射後 2
4時間以後の生存仔数/投与新生仔数.
*
8 新生仔体重1.5gと仮定した場合の TBZ投与量/kg体重.
実験 1では 750mg/kgの TBZの単回投与で半数の母
れず，全例が正常に出産した.出産仔数は母マウスあた
マウスの死亡または流産がみられている.投与容量を減
り 7~12匹，総数 52匹で，このうち同一の母マウスから
らした場合にも同じ現象がみられるかどうかを検討する
生れた 2匹の新生仔(このマウスの出産仔数は 1
2
) が出
l
i
v
eo
i
l懸濁液
ため，実験 2と同じく 250mgTBZ/mlo
4
時間以内に死亡したが，他の 5
0
匹は離乳時まで正
生後2
をつくり，その 0
.2mlを妊娠 1
7日目の 5匹のマウスに単
常に生育した.
回投与した (50mgTBZ/マウス).この投与量を体重あた
実験 2，実験 3の成績から考えて，これらの投与方法
りの量に換算すると 1100~1300mg/kg に相当した(実験
で妊娠マウスに対する TBZの最大耐量を求めることは
3
)
. この場合にも母マウスの死亡および流産は全くみら
できず，さらに方法の検討が必要と思われた.
1
3
0
A
n
n
.R
e
p
.T
o
k
y
oM
e
t
r
.R
e
s
.L
a
b
.P.H，3
1
2，1
9
8
0
新生仔投与発癌試験新生仔投与法での TBZの最大
の吸収が不完全なのかも知れず，また多量の経口投与で
耐量を決定するために ，50mg/mlの TBZ溶液およびそ
は母体に対する物理的・生理的効果が加味されるかも知
/
3，1
/
9，1
/
2
7
希釈溶液を作成し，その O.Olmlを出
の1
れない.投与容量， TBZ濃度の問題や， 懸濁液とする
生後2
4時間以内の新生仔マウスの背部皮下に注射した.
際の溶媒の問題等，さらに検討をすすめている.
この投与量は，新生仔マウスの体重を1.5
gと仮定した場
新生仔投与試験に関しては，この投与量では新生仔マ
0
0，1
0
0，3
0，10mg/kg に相当する.コント
合，各々 3
ウスに対する最大耐量を決定できなかったので，投与量
ロールとして TBZを溶解させるために用いた溶媒であ
を増やして LDを決め，発癌試験における投与量を決定
る DMSOO.Olmlを同様に注射した.この結果， TBZ
する必要があり，
1
/
1溶液 (50mg/ml) のO.Olmlを注射した 1
3
匹の新生仔
る.
に 1匹，その 1
/
3希釈液を注射した 1
2
匹に 3匹の 2
4
時間
この点に関しても実験を計画中であ
胎仔期あるいは新生仔期に TBZの投与をうけたこれ
以内の死亡がみられた. 1
/
3，1
/
2
7
希釈液および DMSO
らのマウスはすでに 7~8 カ月間飼育観察中である.こ
の注射によっては 1 群 11~14匹のマウスに死亡は全くみ
の間，死亡例，屠殺例について剖検所見，血清の生化学
られなかった. TBZ または DMSO の皮下注射によっ
的検査および骨髄細胞の染色体分析などの検索を行って
て注射部位は発赤し，さらに壊死をおこすものもあった
いる.これらのマウスには，雄マウスにアミロイドージ
が，発毛の時期にはしだいに回復し，離乳期以後には注
スと思われる皮膚炎および勝目光の結石，雌マウスに胸腺
射局所には何ら所見は認められなかった.
肥大および白血病が多発する傾向がみられるが，対照群
考 察
当研究部の小燃らは， TBZ を妊娠中期の ICRマウ
との比較検討が未だ不十分のため結論を出すにいたって
いない.これらの各種検索および組織学的所見を検討し
TBZ の
スに経口投与するとその胎児に奇形が発生することを観
この予備実験から得られた成績を参考にして，
察している(私信).経胎盤投与試験においては小燃らの
経胎盤発癌試験，新生仔投与発癌試験の本実験を行うべ
投与方法を参考にして投与量を決めたが，妊娠後期には
く，準備をすすめている.
マウスの体震がいちぢるしく増加するために投与容量が
参考文献
多量になる.この点を考慮して経口投与の容量を減らし
1
)L
a
r
s
e
n，C
.D
.:J
.N
a
t
l
.Cancer I
n
s
t
.，
8，6
3，1
9
4
7
た実験で、は TBZの急性毒性は顕著に低下した.実験 1
2
) Aaron， H.H
.，S
c
h
n
e
i
e
r
s
o
n，S
.，
.
] e
ta
l:
J
.Am.
では TBZ濃度は 1
5
0，75mg/mlであり，実験 2および
MedA
s
s
o
c
.，1
5
9，8
4
8，1
9
5
5
3
) Nomura，T
.，
a
n
dOkamoto，E
.
: Gann
，6
3，7
3
1，
3では 2
5
0，125/mg/mlとしたが，この懸濁液の濃度お
よび経口投与容量が毒性に大きく影響することが考えら
れる.高濃度の懸淘液を少量投与した場合には投与物質
1
9
7
2
4
) Toth，B
.
:C
ancerR
e
s
.，2
8，7
2
7，1
9
6
8
他誌発表
SUMMARIESOFPAPERSINOTHERPUBLICATIONS
(
1
9
7
9
.
7
1
9
8
0
.
6
)
1
3
2
Concentrations
S
.
O
i
s
h
iandK
.H
i
r
a
g
a
:T
o
x
i
c
o
l
o
g
y，1
5(3)，1
9
7，
1
9
8
0
肺ミグロゾームと UC-BHT の結合について，
BHT
前処置による影響を i
nv
i
t
r
o で調べた. BHT を前処
置したラットにおいて， ミクロゾーム高分子と結合した
フタル酸エステノレ類のラットにおける主要代謝物であ
るフタル酸モノエステノレの精巣萎縮作用をウイスター系
放射能は顕著に減少した.この減少はチトクロム P-4
5
0
量と BHTo
x
i
d
a
s
e活性の減少を伴い，さらにこれらの
雄ラットを用いて実験した.使用したモノエステルは，
3成分の挙動は BHT投与量に依存した.一方，プ
ー
モノブチノレ (MBP)，モノイソブチノレ (MIBP)，モノー2
ノミノレピタ{ルを前処置したラットではこのような変化は
エチルヘキシノレ (MEHP) およびモノオクチル (MOP)
みられなかった.
z
ノ
であり，これらは無水フタル酸と当該アルコ{ルより合
成し，
2%
濃度でラット飼料に添加して 1週間摂取させ
た. MBP，MIBPおよび MEHP は精巣萎縮作用を示
したが， MOP は萎縮を生じなかった.精巣萎縮群の精
巣中テストステロンは上昇し，亙鉛濃度は減少していた
これらの結果はジエステルの結果と一致しており，フタ
E
f
f
e
c
to
f Dietary Protein D
e
f
i
c
i
e
n
c
y on Rat
HepaticDrug-Metabo
I
izingEnzymeSystem
SumieKawanoandKogo H
i
r
a
g
a
:]
a
t
a
n
.]
.Phar
・
m
a
c
o
l
.，30，75，1980
Wehave examined t
h
ee
f
f
e
c
to
fd
i
e
t
a
r
yp
r
o
t
e
i
n
ル酸エステルの精巣萎縮作用はジエステルそのものよ
d
e
f
i
c
i
e
n
c
yon r
a
th
e
p
a
t
i
cd
r
u
g
m
e
t
a
b
o
l
i
z
i
n
g enzyme
り，その代謝物であるモノエステルによるものと考えら
s
y
s
t
e
mf
o
rap
e
r
i
o
do
ftwom
o
n
t
h
s
. CytochromeP-
れた
450andbsc
o
n
t
e
n
t
si
nl
i
v
e
rm
i
c
r
o
s
o
m
e
s，whichwere
p
l
o
t
t
e
dons
e
m
i
l
o
g
a
r
i
t
h
m
i
cp
a
p
e
ra
saf
u
n
c
t
i
o
no
ft
h
e
B
i
o
l
o
g
i
c
a
l f
a
t
e of b
u
t
y
l
a
t
e
d hydroxytoluene
(BHT)-Bindingo
fBHTt
on
u
c
l
e
i
ca
c
i
di
nv
i
v
o
YoshioNakagawa，KogoH
i
r
a
g
aandTetsuyaSuga:
B
i
o
c
h
e
m
.P
h
a
r
m
a
c
o
l
.，29 (9)，1304，1980
UCで標識した BHT をラットに経口投与した後，肝
i
p
h
a
s
i
c
a
lr
e
d
u
c
t
i
o
n
sd
u
r
i
n
g
t
i
m
eo
fd
e
f
i
c
i
e
n
c
y，showedb
p
r
o
t
e
i
nd
e
f
i
c
i
e
n
c
y
:r
a
p
i
dd
e
c
r
e
a
s
e
si
nt
h
ef
i
r
s
t3weeks
weref
o
l
l
o
w
e
dbymore g
r
a
d
u
a
ld
e
c
r
e
a
s
e
s
. However
，
t
h
et
h
r
e
ee
n
z
y
m
a
t
i
ca
c
t
i
v
i
t
i
e
s examined，.
ie
.a
m
i
n
o
p
y
r
i
n
ed
e
m
e
t
h
y
l
a
s
e， a
n
i
l
i
n
eh
y
d
r
o
x
y
l
a
s
ea
n
ep
n
i
t
r
o
-
のタンパグおよび核酸と結合した放射能について検討し
a
n
i
s
o
l
ed
e
m
e
t
h
y
l
a
s
e， weren
o
tr
e
d
u
c
e
da
tauniform
た.タンパク分画の全放射能は投与 6時間後に最高にな
r
a
t
e
.I
nt
h
ee
a
r
l
i
e
rp
h
a
s
e，a
c
t
i
v
i
t
i
e
so
ft
h
ef
o
r
m
e
r
り，以後減少した.一方，核酸分画の放射能は経時的に
twoenzymeswerer
e
d
u
c
e
dmorer
a
p
i
d
l
yt
h
a
nt
h
a
to
f
1週間後においても一定の値を維持した.特に
t
h
el
a
s
tp
h
a
s
e
. This b
i
p
h
a
s
i
c
a
l and non-uniform
増加し
RNA中の比放射能は経時的な増加を示し， 1週間後で
r
e
d
u
c
t
i
o
no
fe
n
z
y
m
a
t
i
ca
c
t
i
v
i
t
i
e
ss
u
g
g
e
s
t
st
h
ee
x
i
s
t
e・
は DNA の1
8
倍，タンパクの 3
5倍であった.さらにこ
n
c
eo
ftwoo
rmore cytochromeP-45
0s
u
b
s
p
e
c
i
e
si
n
れらの高分子と結合した放射能はフェノパルピタ{ノレ前
n
o
n
d
e
p
l
e
t
e
dmaler
a
t
s
.I
n
t
r
a
p
e
r
i
t
o
n
e
a
la
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
n
処置ラットにおいていずれも増加 (RNA で170%，
DNA
o
fwell-knowne
n
v
i
r
o
n
m
e
n
t
a
lp
o
l
l
u
t
a
n
t
s，p
o
l
y
c
h
l
o
r
i
n
a
-
で153%，タ γパクで 154%) した
t
e
dd
i
b
e
n
z
o
f
u
r
n
sandb
i
p
h
e
n
y
l
s (100μg a
n
d 100mg/
e
s
p
e
c
t
i
v
e
l
y
)t
ot
h
ed
e
p
l
e
t
e
dr
a
t
sr
e
s
u
l
t
e
di
na
kg，r
Effecto
fpretreatmentwithbutylatedhydroxy.
markedi
n
d
u
c
t
i
o
no
fd
r
u
g
m
e
t
a
b
o
l
i
z
i
n
ge
n
z
y
m
e
s
. How-
t
o
l
u
e
n
e(BHT)onbindingo
fuCBHTt
olungmi.
e
v
e
r，a
st
h
ed
e
f
i
c
i
e
n
c
y became more s
e
v
e
r
e(2mo
crosomes
n
t
h
s
)，t
h
ei
n
d
u
c
t
i
o
nd
e
c
l
i
n
e
dt
oac
o
n
s
i
d
e
r
a
b
l
巴 d
e
g
r
e
e，
u
g
a
:
YoshioNakagawa，KogoHiraga~and TetsuyaS
]
.Pharm. D
y
n
.，3 (6)，314，1980
圃
e
s
p
e
c
i
a
l
l
yi
nt
h
ec
a
s
eo
fp
o
l
y
c
h
l
o
i
i
n
a
t
e
db
i
p
h
e
n
y
l
a
d
m
i
n
i
s
t
r
a
t
i
o
n
.
学会発表
THEMESPRESENTEDATCONFERENCESAND SOCIETY MEETINGS
(
1
9
7
9
.
7
1
9
8
0
.
6
)
1
3
3
神谷信行，坂本義光，中尾I
J
原子，平賀輿吾:クロム鉱
さい粉じんのラットによる 1および 3ヶ月間持続吸入実
験〈クロムの体内分布について〕
市川久次，小林博義，中尾I
J
照子，中川茂男:幼若ラッ
トにおいて出現した CPC高張部瞬時溶血についての検
討
9
年会 (
1
9
7
9
.
8
)
日本薬学会第9
第4
2回日本血液学会総会 (
1
9
8
0
.
4
)
中川敦子，中尾I
J
照子:アデニレー卜シクラーゼにおよ
中尾順子，長井二三子，中尾 真:i
蒸糖添加新保存液
I
ますパナジウムの影響
2
回日本生化学会大会 (
1
9
7
9
.
1
0
)
第5
中尾順子，中尾真:Na，K
.ATPase の高速液クロ
による分薗とサブユ二ッ卜構造
第5
2回日本生化学会大会 (
1
9
7
9
.
1
0
)
中尾真，道源正子，中尾順子，長井二三子，田端介
富:赤血球膜の強化法とその機序
AIS-CPDの保存効果
第2
8回日本輸血学会 (
1
9
8
0
.
6
)
大石真之，3f賀輿吾:フタ)(.酸エステル類の精巣萎縮
作用
第5
3回日本薬理学会総会 (
1
9
8
0
.
3
)
中川好男，平賀輿吾，須賀哲弥:ジブチルヒドロキシ
トルエン (BHT) と肝高分子の結合
2回日本生化学会大会(19
7
9
.
1
0
)
第5
日本薬学会第 1
0
0
年会(19
8
0
.
4
)
原 し げ 子 ， 原 諭 吉 ， 中 尾 順 子 ， 中 尾 真 :Na，K.
高橋省，平賀興吾:B
u
t
y
l
a
t
e
dh
y
d
r
o
x
y
t
o
l
u
e
n
eの
ATPa
日eの S
howdomycin阻害
第5
2回日本生化学会大会 (
1
9
7
9
.
1
0
)
出血致死効果:肝臓ミクロソーム内でのフィロキノンヱ
ポキシド依存プロテインカルポキシル化反応に対する
2
，
6
d
i
t
e
r
t
b
u
t
y
l
4
m
e
t
h
y
l
e
n
e
2，
5
c
y
c
l
o
h
e
x
a
d
i
e
n
o
副
神谷信行，坂本義光，中尾順子，平賀輿善:クロム鉱
さい粉じんのラ・y 卜による
7日間持続吸入実験(クロム
の体内挙動〉
日本薬学会第1
0
0年会 (
1
9
8
0
.
4
)
neの阻害作用
第6
2回日本薬理学会関東部会(19
8
0
.
6
)
東京都立衛生研究所研究年報編集委員
木村康夫(委員長〉
五味測弘平
寺山
武
薮内
清
下平彰男
原田裕文
村上
西垣
進
石川隆章
中尾順子
昭和 5
5
年1
2月 1日 発 行
:規格表第 2類 i
;印刷番号 (
5
5
)8
1
4:
j刊行物番号 (
H)24:
東京都立衛生研究所研究年報第 3
1
2
号
編集
発行
東京都立衛生研究所
〒1
6
0東京都新宿区百人町3-24-1
電話 0
3(
3
6
3
)3231(代)
印刷所:大東印刷工業株式会社
千1
3
1東 京 都 墨 田 区 向 島 3-33-5
電話 0
3(
6
2
5
)7481(代)