平 成 3 年 度 試 験 研 究 成 果 1

平 成 1３ 年 度 試 験 研 究 成 果
区 分
研究
題
名
ウ シの 羊水 浮 遊細 胞を ド ナー と した 核移 植 成績
〔 要約 〕
超 音 波診 断 装 置 を 用い た 腟 経 由 での 羊 水 穿 刺 は 可 能で あ り 、 胎子 を 流 産 さ せる こ とも な
い。
ま た 、 羊 水 浮 遊 細 胞 を 分 離 培 養 後 ド ナ ー と し 、 核 移 植 を 行 っ た 結 果 、 25.7% の 胚 盤 胞 発
生 率と なっ た 。
キー ワー ド
ウ
シ
核 移植
羊 水穿 刺
畜 産研 究所
家畜 工学 研 究室
１ 成果 の 内容
（ １） 超音 波 診断 装置 に よる 経 腟で の羊 水 穿刺 は、 胎 齢 80 ∼ 100 日 の 間で 約 15ml の 羊 水
採 取が 可 能で あり 、 この こ とに よる 流 産等 は認 め られ な い 。（ 表１ ）
（ ２） 羊水 浮 遊細 胞の 分 離培 養 は、 10% ウ シ 胎 子血 清( FCS )加 DMEM （ 5% CO2 95% air ）
で 可 能 で あ り、 マ イ ク ロサ テ ラ イ ト マ ー カー の 多 型 解 析に よ り 胎 子 由来 で あ る こと を 確
認 した 。（ 図１ ）
（ ３） 培養 細 胞を ドナ ー とし た 核移 植に よ る７ 日目 の 胚盤 胞 発生 率は 、 25.7% で あっ た 。
（ 表２ ）
２ 成果 の 活用 方法 及 び留 意事 項
（ １ ） 本技 術 に よ り 生産 さ れ た ク ロー ン ウ シ を 産 肉 能力 検 定 に 供す る こ と に より 、 従来 の 種
雄 牛 造 成 期 間 （ 約 5 年 ） を 、 一 卵 性 双 子 に よ る 直 間 検 同 時 検 定 と ほ ぼ 同 程 度 （ 約 2.7
年 ）に ま で短 縮す る こと が 可能 であ る 。
（ ２ ） 一卵 性 双 子 の 直間 検 同 時 検 定の 場 合 と 異 な り 、同 一 胎 子 から 複 数 の ク ロー ン 産子 を 作
出 す る こ と が可 能 で あ り、 検 定 精 度 を 向 上さ せ る と 共 に、 検 定 中 の 事故 等 に 対 処し 易 く
な る。
（ ３ ） ドナ ー と なっ た 胎子 に つい ては ク ロー ンで は なく 、 現行 の AI お よ び ET な どに よ り
受 胎し て いる ため 、 種雄 牛 とし ての 登 録が 可能 で ある 。
（ ４） クロ ー ンウ シの 表 現型 に つい て、 ド ナー との 相 似性 が 確定 して い ない 。
３ 当該 事 項に 係る 試 験研 究課 題
（ 303 ） 核移 植 技 術に よる 優良 種 畜の 大量 生 産技 術 の開 発（ H10 ∼ 15 、 国補 ）
４ 参考 文 献・ 資料
（ １） M.S.Bellow et al, Application of transvaginal ultrasound for performing amuniocentesis
in cattle 45, 255 ( 1996 )
（ ２） A.Garcia et al, Bovine ultrasound-guided transvaginal amniocentesis, Theriogenology 47,
1003-1008 ( 1997 )
（ ３） 長尾 慶 和ら , ウ シ羊 水 細胞 をド ナ ーと して 用 いた 核 移植 , 日 本畜 産学 会 第 98 回 講 演
要 旨 , 107 ( 2001 )
（ ４） 野口 龍 生ら , 核 移植 技 術に よる 優 良種 畜の 大 量生 産 技術 の開 発 , 平成 12 年 度 試験 成 績
書 （畜 産 研究 所） 岩 手県 農 業研 究セ ン ター , 37-38 ( 2001 )
（ ５） 古川 力 , ク ロ ーン 技術 を 応用 し た肉 牛 の育 種シ ステ ム , 日本 胚 移植 学雑 誌 vol.23 no.3,
88-94 ( 2001 )
５ 試験 成 績の 概要
表１ 羊水穿刺成績および分娩状況
母牛№
穿刺胎齢
成否
分娩状況
1
60
穿 刺 (-)
分娩
2
78
−
分娩
3
79
−
分娩
4
80
＋
分娩
5
81
＋
死産
6
84
＋
分娩
7
87
＋
妊娠継続中
8
88
＋
分娩
9
95
＋
分娩
10
96
＋
分娩
11
100
＋
分娩
12
106
−
分娩
13
113
−
分娩
14
115
−
分娩
15
120
穿 刺 (-)
分娩
図 １ ﾏｲｸﾛｻﾃﾗｲﾄﾏｰｶｰの 多型 解析 に よる 親 子判 定
表２ 培 養 細胞 を ﾄﾞﾅｰとし た 核移 植成 績
Donor
試験回数
供試卵数
融 合 率 (%)
発 生 率 (%)
Lot.
A
5
173
41.6
23.6
B
1
27
37.0
10.0
C
2
86
67.4
31.0
Total
8
286
49.0
25.7
融合 率は 供 試卵 数 に対 する 融 合数
発生 率は 融 合数 に 対す る培 養 ７日 目の 胚 盤胞 発 生胚 数