Kit 5 - Bio-Rad

Kit 5 DNA Fingerprinting キット；クイックガイド
DNA サンプルの調製
1.
制限酵素混合物を入れたマイクロチューブ
に ENZ の表示をつけて氷上に置きます。
氷 浴
ENZ
2.
各々の色付マイクロチューブに以下のように
表示をつけます：
緑 CS＝犯罪現場
青 S1＝容疑者 1
橙 S2＝容疑者 2
紫 S3＝容疑者 3
赤 S4＝容疑者 4
黄 S5＝容疑者 5
マイクロチューブをマイクロチューブラックに
立てます。
3.
原液の入ったマイクロチューブからDNA サ
ンプルを10µl ずつピペットで採取し、対応
する色付マイクロチューブに移します。各々
の DNA サンプルには別々のチップを使用
してください。サンプルがマイクロチューブの
DNA サンプル
底部に移されていることを確認してください。
＋
酵素混合物
4.
10µl の酵素混合液（
ENZ）
をピペットで分注
し、マイクロチューブの最底部に落とします。
それぞれの ENZ サンプルごとに別のチップ
原 液
を使用してください。
5.
マイクロチューブのキャップを閉め、マイクロ
チューブを穏やかに指で叩いて（タッピング
して）
内容物を混和します。微量遠心分離機
がある場合には、液体をすべてマイクロ
チューブの底部に回収するために、適宜遠
指で叩く
心を行います。遠心分離機を使用しない場
合には、机の上にマイクロチューブを軽く打
ち付けます。
机の上に
打ち付ける
6.
マイクロチューブ立てにマイクロチューブを
立て、37℃で 45 分、または室温にて 37℃
水 浴
に加温した大きな水浴中で一晩インキュ
ベートします。
7.
インキュベーション後、マイクロチューブを水
浴から出し、次の実験時まで冷蔵庫内で保
存します。
ゲルの電気泳動
1. 切断済みの DNA サンプルを冷蔵庫から取り出
します。微量遠心分離機がある場合には、液体
遠心分離機
をすべてマイクロチューブの底部に回収するた
めに、適宜遠心を行います。
2. サンプルごとに別のチップを使用し、5µl のロー
ディングダイ「
LD」
を各マイクロチューブに入れ
ます。マイクロチューブのキャップを閉め、指で
マイクロチューブを穏やかに叩いて内容物を混
和します。
3. アガロースゲルを電気泳動槽にセットします。ゲ
ルを浸すようにして約 275∼300ml の 1×TAE
バッファーを電気泳動槽に満たします。
4. アガロースゲルのウェルが黒い（
-）
電極側に、ゲ
ルの底部が赤い（
+）
電極側になっていることを
確認します。
色素マーカー
5. 以下の順序でサンプルごとに別のチップを使用
し、ゲルの 7 つのウェルに指定の量のサンプル
を入れます。
レーン1：
M、DNA マーカー、10µl
レーン2：
CS、緑、20µl
レーン3：
S1、青、20µl
レーン4：
S2、橙、20µl
レーン5：
S3、紫、20µl
レーン6：
S4、赤、20µl
レーン7：
S5、黄、20µl
5. 電気泳動槽に蓋をします。蓋は装置本体の一
方向にしかはめられません。蓋の上にある赤お
よび黒のジャックは、それぞれ、装置本体の赤
および黒のジャックにはまるようになっていま
す。電極をパワーサプライに差し込みます。
6. 電源を入れ、80V でおよそ 30 分、電気泳動を
行います。泳動初期と終了時の電流値を控え
ておきます。電圧値が 80V でない場合、ロー
ディングダイがゲルの３分の２まで流れたところ
で泳動を止めてください。
7. 電気泳動が終わったら必ずパワーサプライの
電源を切ってから、泳動槽蓋をはずします。泳
動槽から、慎重にゲルトレイおよびゲルをはず
します。注意；
ゲルは非常にもろいものです。
ゲルを滑らせるようにして染色トレイに移しま
す。
9. 染色トレイに Fast Blast DNA 染色液約 60ml
を入れます。染色トレイを食品保存用ラップで
覆います。1 晩染色します。
ゲルの分析
1. Fast Blast DNA 染色液をビンに移します。染色
トレイに 60ml の水を加えて、15 分間、ゲルを脱
色します。
2. 廃液用ビーカーに水を移します。
3. ゲルをサポートフィルム上または実験台の上で
完全に乾燥させます。ゲルが乾燥したら、実験用
ノートにテープで貼り付け、永久記録とします。
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Z4172 0404A