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Matrixxxナイメーヘン
デュアック配合ゲル 製造販売承認申請書添付資料 第２部（モジュール２）CTDの概要（サマリー） 2.6. 非臨床試験の概要文及び概要表 2.6.4. 2.6.5. 薬物動態試験の概要文 薬物動態試験概要表 グラクソ・スミスクライン株式会社 Dec 15 2014 13:45:46 非臨床概要 薬物動態試験の目次 項目 - 頁 2.6.4. 薬物動態試験の概要文 ..................................................................... 2.6.4 - p.1 2.6.4.1. まとめ ........................................................................................ 2.6.4 - p.1 2.6.4.2. 分析法 ........................................................................................ 2.6.4 - p.2 2.6.4.3. 吸収............................................................................................ 2.6.4 - p.2 2.6.4.4. 分布............................................................................................ 2.6.4 - p.4 2.6.4.5. 代謝............................................................................................ 2.6.4 - p.8 2.6.4.6. 排泄............................................................................................ 2.6.4 - p.9 2.6.4.7. 薬物動態学的薬物相互作用 ........................................................ 2.6.4 - p.10 2.6.4.8. その他の薬物動態試験 ............................................................... 2.6.4 - p.10 2.6.4.9. 考察及び結論 ............................................................................. 2.6.4 - p.10 2.6.4.10. 図表.......................................................................................... 2.6.4 - p.11 2.6.4.11. 参考文献 .................................................................................. 2.6.4 - p.11 2.6.5. 薬物動態試験概要 ............................................................................ 2.6.5 - p.1 2.6.5.1. 薬物動態試験：一覧表 ............................................................... 2.6.5 - p.1 2.6.5.2. 分析方法及びバリデーション試験 ............................................. 2.6.5 - p.4 2.6.5.3. 薬物動態試験：単回投与後の吸収 ............................................. 2.6.5 - p.5 2.6.5.4. 薬物動態試験：反復投与後の吸収 ............................................. 2.6.5 - p.5 2.6.5.5. 薬物動態試験：分布................................................................... 2.6.5 - p.9 2.6.5.6. 薬物動態試験：蛋白結合 ........................................................... 2.6.5 - p.10 2.6.5.7. 薬物動態試験：妊娠又は授乳動物における試験 ........................ 2.6.5 - p.10 2.6.5.8. 薬物動態試験：その他の分布試験 ............................................. 2.6.5 - p.11 2.6.5.9. 薬物動態試験：In Vivo における代謝......................................... 2.6.5 - p.18 2.6.5.10. 薬物動態試験：In Vitro における代謝 ...................................... 2.6.5 - p.19 2.6.5.11. 薬物動態試験：推定代謝経路 .................................................. 2.6.5 - p.19 2.6.5.12. 薬物動態試験：薬物代謝酵素の誘導／阻害 ............................. 2.6.5 - p.20 2.6.5.13. 薬物動態試験：累積排泄 ......................................................... 2.6.5 - p.22 2.6.5.14. 薬物動態試験：胆汁中排泄 ...................................................... 2.6.5 - p.22 2.6.5.15. 薬物動態試験：薬物相互作用 .................................................. 2.6.5 - p.22 2.6.5.16. 薬物動態試験：その他 ............................................................. 2.6.5 - p.22 Dec 15 2014 13:45:46 2.6.4 及び 2.6.5 の略号等一覧 略語（略称） AUC BCRP BPO CLDM Cmax CYP F GC-MS HEK293 細胞 HPLC-UV IC50 LC-MS/MS LLC-PK1 細胞 LSC M MCT MDA-MB231 細胞 MRP4 mOat/rOat/hOAT rOatp/hOATP PCG Pgp SD SD ラット SE tmax t1/2 Dec 11 2014 11:20:33 内 容 血漿中濃度－時間曲線下面積 ヒト breast cancer resistance protein 過酸化ベンゾイル クリンダマイシン 最高血漿中濃度 チトクローム P450 雌 ガスクロマトグラフ／質量分析 ヒト胎児由来腎臓 293 細胞 紫外吸光検出器付き高速液体クロマトグラフ 最大阻害作用の 50%の阻害作用を示す濃度 液体クロマトグラフ／タンデム質量分析 ブタ腎臓近位尿細管由来上皮細胞 液体シンチレーション計数法 雄 Monocarboxylate transporter ヒト乳腺癌由来上皮細胞 ヒト multidrug resistance associated protein 4 マウス／ラット／ヒト organic anion transporter ラット／ヒト organic anion transporting polypeptide ベンジルペニシリン P-糖蛋白質 標準偏差 Sprague-Dawley ラット 標準誤差 最高血漿中濃度到達時間 消失半減期 2.6.4. 2.6.4. 2.6.4.1. 薬物動態試験の概要文 薬物動態試験の概要文 まとめ 本剤は、クリンダマイシン（CLDM）リン酸エステルを 1.2%（CLDM として 1%）と過 酸化ベンゾイル（BPO）を 3%含有する外用配合剤（CLDM 1%-BPO 3%配合ゲル）である。 国内において 1%CLDM の外用剤は販売されており（ダラシン T ゲル 1%、ファルマシア 株式会社：2002 年 7 月製造販売承認）、CLDM の動物における薬物動態については既に 評価済みである[ダラシン T ゲル 1%公開資料概要, 2002]。そのため、本項では、BPO、 CLDM 1%-BPO 3%配合ゲル及び CLDM 1%-BPO 5%配合ゲルを経皮投与したときの BPO 又は CLDM の薬物動態並びに in vitro での皮膚透過性について示す。また、BPO は皮膚内 で安息香酸に分解すること及び安息香酸は馬尿酸に代謝されることから、安息香酸及び馬 尿酸のトランスポーターに対する影響並びに馬尿酸の CYP に対する影響についても検討 した。 BPO ヘアレスラットに[14C]BPO の 10 mg を単回経皮投与したとき、投与 3～24 時間後の皮 膚中薬物関連物質は角層が最も高く、投与量の約 11～17%であった。ウサギに BPO の 500 mg/日を反復経皮投与したとき、血漿中に安息香酸が検出され、血漿中安息香酸は反 復投与しても蓄積しなかった。ラットにおける安息香酸の血漿蛋白結合率は 72～87%で あった。アカゲザルに[14C]BPO の 139 μg を単回経皮投与したとき、尿中には投与量の約 45%が排泄され、大部分は安息香酸であり、馬尿酸は検出されなかった。 ヒト皮膚を用いた in vitro 皮膚透過性試験において、[14C]BPO をヒト皮膚に塗布したと き、塗布量の 4.5%が皮膚中に浸透し、残りは BPO として皮膚表面に残った。 また、in vitro において安息香酸は mOat1 及びラット MCT1 の基質であり、馬尿酸は rOat1 及び hOAT1 の基質であった。安息香酸は mOat1 を、馬尿酸は rOat1/hOAT1、 rOat3/hOAT3、OATP1B1、MRP4 及び BCRP を阻害した。馬尿酸は CYP3A4 を阻害し、 IC50 は 129～241.9 μg/mL であった。 CLDM 1%-BPO 5%配合ゲル マウスに CLDM 1%-BPO 5%配合ゲルの 4/20～80/400 mg/kg/日（CLDM/BPO）を 1 日 1 回 28 日間反復経皮投与したときの血漿中に安息香酸は 12/60 mg/kg/日以上の群の投与 7 日目に検出された。血漿中 CLDM の曝露量は 40/200 mg/kg/日群まではおおむね投与量増 加に伴い増加し、80/400 mg/kg/日群では投与量増加の割合を上回って増加した。 ヒト腹部皮膚（約 0.25 mm 厚）に CLDM 1%-BPO 3%配合ゲル及び CLDM 1%-BPO 5% 配合ゲルをいずれも 15.63 mg/cm2 塗布したとき、安息香酸、CLDM リン酸エステル及び CLDM として皮膚を透過した。 Jan 14 2015 14:17:55 2.6.4 - p. 1 2.6.4. 2.6.4.2. 2.6.4.2.1. 薬物動態試験の概要文 分析法 被験物質 BPO の吸収、分布、代謝及び排泄試験では、BPO 及び[14C]標識した BPO（[14C]BPO） を使用した（図 2.6.4-1）。 O * O O * O * 標識位置 図 2.6.4-1 2.6.4.2.2. [14C]BPO の構造式 分析法 BPO は皮膚中で安息香酸に分解されることから、血漿及び尿では BPO を測定せずに安 息香酸を測定した。配合ゲルを用いた試験では CLDM 濃度も測定した。また、日本人患 者に本剤を塗布したときに血漿及び尿中に馬尿酸が検出されたこと（2.7.2.2.2.1.1.及び 2.7.2.2.2.1.3.）から、サル尿中馬尿酸も測定した。 マウス及びウサギ血漿中安息香酸濃度は、HPLC-UV 法により測定した。定量限界は 250 ng/mL であり、定量範囲は 250～10000 ng/mL であった。 マウス血漿中 CLDM 濃度は、液／液抽出後に LC-MS/MS 法により測定した。定量限界 は 0.5 ng/mL であり、定量範囲は 0.5～500 ng/mL であった。 2.6.4.3. 2.6.4.3.1. 吸収 経皮投与 BPO 雌雄 New Zealand ウサギに BPO の 500 mg/日を 33 日間反復経皮投与したときの 0（投 与開始前日）、5、12、19、26 及び 33 日の投与前（投与 30 分前）、30 分後及び 3 時間後 の血漿中安息香酸（主代謝物）の薬物動態について検討した（Sahut, 1985）。なお、安息 酸の内因性濃度は、内因性濃度の変動を考慮して、投与開始前の連続した 2 日間の平均値 を用いた。 試験成績を 2.6.5.4.2.に示した。安息香酸の内因性濃度の平均値は 882±208 ng/mL であ った。BPO は経皮投与後、速やかに吸収され、33 日までの投与 30 分後の血漿中安息香酸 濃度は、投与 30 分前及び 3 時間後より高く、BPO 投与により安息香酸濃度は内因性濃度 より平均 1656±718 ng/mL 増加した。5～19 日の投与前値は内因性濃度より高かった。33 日の血漿中濃度は内因性濃度をわずかに上回ったのみであったことから、33 日間反復投 与により安息香酸は蓄積しないと考えられた。 Jan 14 2015 14:17:55 2.6.4 - p. 2 2.6.4. 薬物動態試験の概要文 CLDM 1%-BPO 5%配合ゲル 雌雄 CD-1 マウスに CLDM 1%-BPO 5%配合ゲルの約 4/20、12/60、40/200 及び 80/400 mg/kg/日（CLDM/BPO）を 1 日 1 回 28 日間反復経皮投与したときの血漿中安息香 酸及び CLDM の薬物動態について検討した（0470MS50.001）。 試験成績を 2.6.5.4.1.に示した。安息香酸は投与 7 日目では 12/60～80/400 mg/kg/日群で、 投与 28 日目では 80/400 mg/kg/日群で血漿中に検出された。投与 7 日目の安息香酸の曝露 量はおおむね投与量増加に伴い増加した（表 2.6.4-1）。雌の曝露量は雄より高かった。 しかしながら、安息香酸が検出できた時点が少なかったため、反復投与による薬物動態へ の影響は評価できなかった。 試験を通していずれの血漿中にも CLDM が検出された。tmax はおおむね投与 0.5～1 時 間後であった（表 2.6.4-2）。曝露量（Cmax 及び AUC(0-t)）は、4/20～40/200 mg/kg/日群 では、おおむね投与量に比例して増加し、80/400 mg/kg/日群では投与量増加の割合を上回 って増加した。投与 7 日目と 28 日目の曝露量は同程度であったことから、反復投与によ り蓄積しないと考えられた。雄の曝露量は雌よりわずかに高かった。 表 2.6.4-1 マウスに CLDM 1%-BPO 5%配合ゲルを 1 日 1 回 28 日間反復経皮投与し たときの血漿中安息香酸の薬物動態パラメータ 投与量#1 (mg/kg/日) 7 M 4/20 12/60 40/200 80/400 F 4/20 12/60 40/200 80/400 28 M 4/20 12/60 40/200 80/400 F 4/20 12/60 40/200 80/400 各時点 (n=3)、NA: 適用なし、#1：CLDM/BPO Data source: 0470MS50.001 の Table 12 投与日 性別 Cmax (ng/mL) tmax (hr) AUC(0-t) (ng･hr/mL) NA NA 346 665 NA 461 712 951 NA NA NA 1997 NA NA NA 2924 NA NA 3.0 0.5 NA 3.0 1.0 3.0 NA NA NA 1.0 NA NA NA 1.0 NA NA 962 757 NA 882 2401 6306 NA NA NA 4654 NA NA NA 7387 Jan 14 2015 14:17:56 2.6.4 - p. 3 2.6.4. 表 2.6.4-2 薬物動態試験の概要文 マウスに CLDM 1%-BPO 5%配合ゲルを 1 日 1 回 28 日間反復経皮投与し たときの血漿中 CLDM の薬物動態パラメータ 投与日 性別 7 M F 28 M F 投与量#1 (mg/kg/日) 4/20 12/60 40/200 80/400 4/20 12/60 40/200 80/400 4/20 12/60 40/200 80/400 4/20 12/60 40/200 80/400 Cmax (ng/mL) tmax (hr) AUC(0-t) (ng･hr/mL) 18.19 41.5 141.7 260.3 7.87 36.62 75.34 305.6 14.74 42.83 102.1 350.1 12.33 56.73 50.18 256.7 0.5 0.5 0.5 0.5 1.0 1.0 0.5 1.0 1.0 1.0 1.0 0.5 0.5 0.5 1.0 3.0 42.97 134.2 429.8 1652 19.20 88.83 362.5 1156 25.51 116.9 351.2 1500 23.56 63.04 163.9 1113 各時点 (n=3)、#1：CLDM/BPO Data source: 0470MS50.001 の Table 11 2.6.4.4. 2.6.4.4.1. 分布 皮膚透過性 BPO In vitro における BPO のヒト皮膚透過性について検討した（Nacht, 1981）。ヒト腹部皮 膚（700～800 μm 厚）をチャンバー拡散セルに挟み、角層側チャンバー（5.08 cm2）に [14C]BPO の約 4556 μg（10%懸濁液）を添加し、8 時間後の皮膚表面、皮膚中及び真皮側 の薬物関連物質を測定した。 試験成績を 2.6.5.8.1.に示した。塗布 8 時間後の皮膚表面、皮膚中及び真皮側溶液からそ れぞれ塗布量の 95.5、2.6 及び 1.9%が回収された。塗布 8 時間後までの皮膚中に塗布量の 4.5%が吸収されたことが示された。 CLDM 1%-BPO 3%配合ゲル In vitro で CLDM 1%-BPO 3%配合ゲル及び CLDM 1%-BPO 5%配合ゲルを塗布したとき の CLDM 及び BPO のヒト皮膚透過性について検討した（2008-350-MB）。ヒト腹部皮膚 を皮膚表面から約 0.25 mm 厚にスライスし、スライスした皮膚をインライン拡散セルに 挟み、表面（0.64 cm2）に CLDM 1%-BPO 3%配合ゲル及び CLDM 1%-BPO 5%配合ゲルを いずれも 15.63 mg/cm2（BPO 3%：0.469 mg/cm2、BPO 5%：0.780 mg/cm2、CLDM： 0.156 mg/cm2）塗布した。皮膚を透過し、レセプターチャンバーに移行した CLDM リン酸 エステル、CLDM、BPO 及び安息香酸を 6 時間後まで測定した。また、これらについて は 6 時間後の表皮及び真皮中濃度も測定した。 試験成績を 2.6.5.8.1.2.及び図 2.6.4-2 に示した。CLDM 1%-BPO3 %配合ゲル及び CLDM 1%-BPO 5%配合ゲルのいずれにおいても安息香酸、CLDM リン酸エステル又は Jan 14 2015 14:17:56 2.6.4 - p. 4 2.6.4. 薬物動態試験の概要文 CLDM として経時的に皮膚を透過し、レセプターチャンバーに回収されたが、BPO は定 量限界未満であった。6 時間後の表皮及び真皮中には CLDM リン酸エステル、CLDM、 BPO 及び安息香酸が検出された。 平均値±標準誤差 (n=26 又は 28) 図 2.6.4-2 ヒト皮膚における CLDM 1%-BPO 3%配合ゲル及び CLDM 1%-BPO 5%配 合ゲルを塗布したときの CLDM (#1)及び BPO の累積透過量 Data source: 2008-350-MB の Table 3 及び 6 #1: CLDM リン酸エステル及び CLDM の透過量を CLDM 換算した。 以上のことから、両製剤を塗布した際に CLDM リン酸エステルは CLDM リン酸エステ ル及び CLDM として、BPO は表皮及び真皮中で安息香酸に分解され、安息香酸として皮 膚を透過すると考えられた。 2.6.4.4.2. 皮膚内分布 雄のヘアレス SD ラットに[14C]BPO の 10 mg（5.3 cm2）を単回経皮投与し、投与 3、8 及び 24 時間後の投与部位の皮膚を角層、表皮、真皮（上部）及び真皮（深部）に分離し、 各部位中の薬物関連物質を LSC により測定し、皮膚中の分布について検討した （Wepierre, 1986）。 試験成績を 2.6.5.5.1.及び表 2.6.4-3 に示した。投与 3 時間後の角層、表皮、真皮（上 部）及び真皮（深部）中薬物関連物質は投与量のそれぞれ 11.4、0.14、0.40 及び 0.47%で あり、角層中濃度が最も高かった。投与 3～24 時間後の角層中の薬物関連物質は投与量の 約 11～17%であった。投与 24 時間後の皮膚全体での薬物関連物質は投与量の 18.2%であ った。 Jan 14 2015 14:17:56 2.6.4 - p. 5 2.6.4. 表 2.6.4-3 薬物動態試験の概要文 ヘアレス SD ラットに[14C]BPO の 10 mg を経皮投与したときの 皮膚中薬物関連物質 皮膚 投与 3 時間後 投与 8 時間後 投与 24 時間後 角層 表皮 真皮（上部） 真皮（深部） 皮膚全体 11.4 2.3 0.14 0.03 0.40 0.03 0.47 0.06 12.4 2.4 14.4 5.6 0.17 0.05 0.49 0.06 0.65 0.14 15.7 5.5 17.1 6.1 0.09 0.01 0.50 0.03 0.53 0.09 18.2 6.0 平均値±標準誤差 (n=6, 角層: n=3) 投与量に対する割合 (%) 2.6.4.4.3. 蛋白結合 安息香酸 ラット血漿に安息香酸の 0.004～700 μM（0.0005～85.5 μg/mL）を添加した時の血漿蛋 白結合率を検討した（Chiba, 1994）。 ラット血漿における安息香酸の非結合形分率は 0.13～0.28 であったことから、蛋白結合 率は 72～87%であった。 馬尿酸 透析患者から得た血清中の馬尿酸の蛋白結合率について検討した（Itoh, 2012）。 馬尿酸の血清蛋白結合率は 48.3%であった。 2.6.4.4.4. 2.6.4.4.4.1. トランスポーターによる輸送 Oat1/3 及び OAT1/3 による輸送 安息香酸 生体は摂餌等により安息香酸に曝露されている[国立医薬品食品衛生研究所 安全情報部, 2007]ことから、mOat1 ノックアウトマウス及び野生型マウスの血漿及び尿中安息香酸濃 度を比較することにより、安息香酸の mOat1 による輸送について検討した（Eraly, 2006）。 試験成績を 2.6.5.8.2.1.に示した。血漿中安息香酸濃度は、野生型マウスでは定量限界未 満であったが、ノックアウトマウスでは 16.91 μM（2.07 μg/mL）であった。尿中安息香酸 濃度は、野生型マウスでは 6.01 mmol/mol クレアチニンであり、ノックアウトマウスでは 8.80 mmol/mol クレアチニンであった。 馬尿酸 rOat1 又は 3 を発現させた LLC-PK1 細胞（rOat1-LLC-PK1 又は rOat3-LLC-PK1 細胞）及 び hOAT1 又は 3 を発現させた HEK293 細胞（hOAT1-HEK293 又は hOAT3-HEK293 細 胞）における馬尿酸の取込みを検討した（Deguchi, 2004）。 試験成績を 2.6.5.8.2.3.に示した。rOat1-LLC-PK1 細胞における馬尿酸の Vmax/Km は 18.9 μL/min/mg 蛋白であったが、rOat3-LLC-PK1 細胞では算出可能な取り込みは認められ Jan 14 2015 14:17:57 2.6.4 - p. 6 2.6.4. 薬物動態試験の概要文 なかった。また、hOAT1-HEK293 細胞における馬尿酸の Vmax/Km は 18.3 μL/min/mg 蛋白 であったが、hOAT3-HEK293 細胞では算出可能な取り込みは認められなかった。 2.6.4.4.4.2. MCT1 による輸送 安息香酸 ラット MCT1 を発現させた MDA-MB231 細胞を用いて細胞内への安息香酸輸送につい て検討した（Tamai, 1999）。 ラット MCT1 を発現させていない MDA-MB231 細胞に比べて pH6.0 以下で顕著な細胞 内への安息香酸の取り込みがみられた。 2.6.4.4.4.3. OAT2 による輸送 安息香酸 rOat2 又は hOAT2 を発現させた HEK293 細胞を用いて細胞内への安息香酸輸送につい て検討した（Pfennig, 2013）。 いずれにおいても、rOat2 及び hOAT2 を介した安息香酸（0.1 μM、0.01μg/mL）の輸送 はみられなかった。 2.6.4.4.4.4. Oatp1a4 による輸送 馬尿酸 rOatp1a4 を発現させたアフリカツメガエル卵母細胞を用いて、細胞内への馬尿酸輸送に ついて検討した（Deguchi, 2006）。 rOatp1a4 を発現させた細胞への特異的な馬尿酸の取り込みはみられなかった。 以上のことから、BPO の代謝物である安息香酸は mOat1 の基質であり、馬尿酸は rOat1 及び hOAT1 の基質であると考えられた。また、安息香酸はラット MCT1 の基質であった が、ヒト MCT1 の基質であるのかは不明である。なお、安息香酸は rOat2 及び hOAT2 の 基質ではなく、馬尿酸は rOat3、hOAT3 及び rOatp1a4 の基質ではないと考えられた。 2.6.4.4.5. 2.6.4.4.5.1. トランスポーターに対する影響 Oat1/3 及び OAT1/3 輸送阻害 安息香酸 mOat1 を発現させたアフリカツメガエル卵母細胞を用いて、Oat1 の基質であるパラア ミノ馬尿酸輸送に対する安息香酸の影響を検討した（Eraly, 2006）。 試験成績を 2.6.5.8.2.2.に示した。安息香酸はパラアミノ馬尿酸の輸送を阻害し、Ki は 253 μM（30.9 μg/mL）であった。 馬尿酸 rOat1-LLC-PK1 細胞、rOat3-LLC-PK1 細胞、hOAT1-HEK293 細胞及び hOAT3-HEK293 細胞におけるパラアミノ馬尿酸（rOat1/hOAT1 の基質）又は PCG（rOat3/hOAT3 の基質） の取込みに対する馬尿酸の影響について検討した（Deguchi, 2004）。 Jan 14 2015 14:17:57 2.6.4 - p. 7 2.6.4. 薬物動態試験の概要文 試験成績を 2.6.5.8.2.3.に示した。馬尿酸はパラアミノ馬尿酸の輸送を阻害し、rOat1 及 び hOAT1 輸送に対する Ki はそれぞれ 27.5 及び 18.8 μM（それぞれ 4.93 及び 3.37 μg/mL）であった。また、馬尿酸は PCG の輸送も阻害し、rOat3 及び hOAT3 輸送に 対する Ki はそれぞれ 18.6 及び 30.8 μM（それぞれ 3.33 及び 5.52 μg/mL）であった。 2.6.4.4.5.2. MCT 輸送阻害 安息香酸 ウサギ角膜上皮細胞を用いて、ケトプロフェン輸送に対する安息香酸の影響を検討した [Fujii, 2013]。なお、ウサギ角膜上皮細胞において、ケトプロフェンは少なくとも 2 種類 （低親和性及び高親和性）のトランスポーターにより輸送され、低親和性のトランスポー ターにはウサギ MCT が関与していると考えられている。 安息香酸は 20 mM で低親和性のトランスポーターによるケトプロフェン輸送を選択的 に阻害した。しかしながら、本試験では安息香酸によるウサギ MCT 阻害を直接評価して いないことから、本試験成績のみで安息香酸のウサギ MCT 阻害能を明らかにすることは できなかった。 2.6.4.4.5.3. OATP1B1 輸送阻害 馬尿酸 OATP1B1 を発現させた HEK293 細胞を用いて、SN-38 輸送に対する馬尿酸の影響を検 討した（Fujita, 2014）。 馬尿酸は OATP1B1 を介した SN-38 輸送を阻害し、IC50 は 6710 μM（1202 μg/mL）であ った。 2.6.4.4.5.4. MRP4 及び BCRP 輸送阻害 馬尿酸 MRP4 又は BCRP を過剰発現させた HEK293 細胞を用いて、それぞれメトトレキサート 又はエストロン硫酸輸送に対する馬尿酸の影響について検討した（Mutsaers, 2011）。 馬尿酸は MRP4 を介したメトトレキサート輸送及び BCRP を介したエストロン硫酸輸 送を阻害し、IC50 はそれぞれ 990 及び 3670 μM（それぞれ 177 及び 658 μg/mL）であった。 以上のことから、in vitro において安息香酸は mOat1 を、馬尿酸は rOat1/hOAT1 及び rOat3/hOAT3、OATP1B1、MRP4 及び BCRP を阻害した。安息香酸のウサギ MCT 阻害能 については明らかにすることはできなかった。 2.6.4.5. 2.6.4.5.1. 代謝 皮膚中代謝物 雄のヘアレス SD ラットに[14C]BPO の 10 mg を単回経皮投与したときの薬物関連物質の 角層、表皮及び真皮中代謝物について検討した（Wepierre, 1986）。 Jan 14 2015 14:17:57 2.6.4 - p. 8 2.6.4. 薬物動態試験の概要文 試験成績を 2.6.5.9.1.に示した。角層中に BPO は投与量の 9～14%が透過し、安息香酸は 2～4%であった。表皮及び真皮中では BPO はわずかであり、安息香酸は投与量の 0.8～ 1.1%であった（表皮及び真皮中薬物関連物質のそれぞれ約 59 及び 74%）。皮膚のいずれ の部位でも投与 3～24 時間後の安息香酸／BPO 比はおおむね一定であった。 2.6.4.5.2. 尿中代謝物 アカゲザルに[14C]BPO の 139 μg を単回経皮投与したときの尿中代謝物について検討し た（Nacht, 1981）。 試験成績を 2.6.5.9.2.に示した。BPO を経皮投与したときの尿中薬物関連物質の少なく とも 95%が安息香酸であった。安息香酸以外に 3 種の極性の高い代謝物が検出された （尿中薬物関連物質の 5%未満）。尿中に馬尿酸は検出されなかった。 2.6.4.5.3. 推定代謝経路 BPO は皮膚中で安息香酸に分解され、その後血中に移行し、尿中に排泄された。また、 ヒト血漿中では馬尿酸が検出された（2.7.2.2.2.1.1.）。BPO の推定代謝経路を図 2.6.4-3 に 示す。 過酸化ベンゾイル：BPO 図 2.6.4-3 2.6.4.5.4. 2.6.4.5.4.1. BPO の代謝経路 薬物代謝酵素に対する影響 酵素阻害 馬尿酸 ヒト肝ミクロソームを用いて、CYP1A2 及び 2D6 に対する馬尿酸の影響についてそれ ぞれフェナセチン O-脱エチル活性及びメトプロロール O-脱メチル活性を指標として検討 した（Tsujimoto, 2014）。また、ヒト肝ミクロソームを用いて、CYP3A4 に対する馬尿酸 の影響についてテストステロン代謝を指標として検討した（Volpe, 2014）。 馬尿酸はフェナセチン O-脱エチル活性及びメトプロロール O-脱メチル活性に影響を及 ぼさなかった。また、馬尿酸はテストステロン代謝を阻害し、IC50 は 129～241.9 μg/mL （非結合形濃度 116.1 μg/mL より算出）であった。 2.6.4.6. 排泄 アカゲザルに[14C]BPO の 139 μg を単回経皮投与したときの投与 7 日後までの安息香酸 の尿中排泄率について検討した（Nacht, 1981）。 Jan 14 2015 14:17:57 2.6.4 - p. 9 2.6.4. 薬物動態試験の概要文 試験成績を 2.6.5.13.1.に示した。投与 7 日後までの安息香酸の尿中排泄率は投与量の約 45%であった。投与後 12～24（2/3 例）及び 24～48 時間（1/3 例）に薬物関連物質が最も 多く排泄され、投与 6 日後でも 2/3 例で尿中に薬物関連物質が排泄された。なお、投与 7 日後の尿中に薬物関連物質は検出されなかった。 2.6.4.7. 薬物動態学的薬物相互作用 実施していない。 2.6.4.8. その他の薬物動態試験 実施していない。 2.6.4.9. 2.6.4.9.1. 考察及び結論 考察 ヒト皮膚を用いた in vitro 皮膚透過性試験において、[14C]BPO をヒト皮膚に塗布したと き、塗布量の 4.5%が皮膚中に浸透し、皮膚中で安息香酸に分解された。ヘアレスラット に BPO を経皮投与したとき、角層中薬物関連物質は投与量の約 11～17%であり、大部分 は角層中に存在した。ウサギに経皮投与したときの血漿中及びアカゲザルに経皮投与した ときの尿中に安息香酸が検出された。以上のことから、BPO を経皮投与した時、一部が 皮膚から吸収されて、皮膚中で安息香酸に分解され、その後血中に移行し、尿中に排泄さ れると考えられた。また、BPO の薬物動態にラット、ウサギ及びサルでは明らかな種差 はみられなかった。 マウスに CLDM 1%-BPO 5%配合ゲルの 4/20～80/400 mg/kg/日（CLDM/BPO）を 28 日 間反復経皮投与したときの CLDM の曝露量は投与量増加に伴い増加した。また、投与 7 日目と 28 日目の CLDM の曝露量に明らかな差はみられなかったことから、CLDM は反復 投与により蓄積しないと考えられた。血漿中に安息香酸はほとんど検出されなかった。 安息香酸は mOat1 の基質であり、馬尿酸は rOat1 及び hOAT1 の基質であったことから、 安息香酸及び馬尿酸の尿中排泄には OAT1 が関与していると考えられた。更に、安息香 酸はラット MCT1 の基質であったが、ヒト MCT1 の基質であるのかは明らかではない。 また、馬尿酸は rOatp1a4 の基質ではなかったが、hOATP1A に相同する rOatp1a は存在し ていないこと[本橋, 2009]から、馬尿酸が hOATP の基質であるのかは明らかではない。In vitro において安息香酸は mOat1 を阻害し、Ki は 253 μM（30.9 μg/mL）であった。しかし ながら、日本人患者に CLDM 1%-BPO 3%配合ゲルの約 0.7 g/回を 1 日 2 回 7 日間反復塗 布したときの血漿中安息香酸濃度が定量可能であったのは 12 例中 2 例であり、その他の 患者では定量限界（100 ng/mL）未満であったことから（2.7.2.2.2.1.1.）、臨床では安息香 酸が hOAT1 を阻害しないと考えられた。また、馬尿酸も in vitro で hOAT1、hOAT3、 OATP1B1、MRP4 及び BCRP を阻害し、Ki 又は IC50 はそれぞれ 18.8、30.8、6710、990 及び 3670 μM（それぞれ 3.37、5.52、1202、177 及び 658 μg/mL）であった。しかしなが ら、日本人患者に CLDM 1%-BPO 3%配合ゲルの約 0.7 g/回を 1 日 2 回 7 日間反復塗布し Jan 14 2015 14:17:58 2.6.4 - p. 10 2.6.4. 薬物動態試験の概要文 たときの血漿中馬尿酸濃度は最大 342.5 ng/mL であった（2012N140072_00 の Table3.04） ことから、BPO 由来により生成した馬尿酸が hOAT1、hOAT3、OATP1B1、MRP4 及び BCRP を阻害しないと考えられた。なお、馬尿酸は Pgp を阻害しなかった[Sun, 2004]。安 息香酸は 20 mM でウサギ角膜上皮細胞におけるケトプロフェン輸送を阻害したが、ウサ ギ MCT 阻害能については明らかにすることはできなかった。 馬尿酸はヒト肝ミクロソームにおいて CYP1A2 及び 2D6 を阻害しなかった。CYP3A4 を阻害し、IC50 は 129～241.9 μg/mL であったが、血漿中馬尿酸の最大値（342.5 ng/mL） より低値であったことから、臨床で馬尿酸は CYP3A4 を阻害しないと考えられた。 以上の成績から、BPO は皮膚表面では安定であり、塗布量の 4.5%が BPO として皮膚か ら吸収され、皮膚中で安息香酸に分解されると考えられた。また、臨床において BPO の 主代謝物である安息香酸及び馬尿酸はトランスポーター及び CYP 阻害作用を示さないと 考えられたことから、薬物相互作用を引き起こさないと考えられた。 2.6.4.9.2. 結論 BPO はヒト皮膚表面から塗布量の 4.5%が吸収され、皮膚中で安息香酸に分解され、そ の後血中に移行した。安息香酸はサルではそのまま、ヒトでは馬尿酸に代謝された後、尿 中に排泄された。 CLDM 1%-BPO 3%配合ゲルにおいても、CLDM 及び BPO は皮膚より吸収され、それぞ れ CLDM 及び安息香酸として皮膚を透過した。CLDM 1%-BPO 5%配合ゲルの 4/20～ 80/400 mg/kg/日（CLDM/BPO）を 28 日間反復経皮投与したときの CLDM の曝露量は 4/20 ～40/200 mg/kg/日の投与量範囲ではおおむね投与量に比例して増加したが、反復投与によ り蓄積しなかった。また、血漿中に安息香酸はほとんど検出されなかった。 2.6.4.10. 図表 図表は本文中に記載した。 2.6.4.11. 参考文献 Fujii S, Hayashi H, Itoh K, et al. Characterization of the carrier-mediated transport of ketoprofen, a nonsteroidal anti-inflammatory drug, in rabbit corneal epithelium cells. J Pharm Pharmacol. 2013;65:171-80. Mutsaers HAM, van den Heuvel LP, Ringens LHJ, et al. Uremic toxins inhibit transport by breast cancer resistance protein and multidrug resistance protein 4 at clinically relevant concentrations. PLoS one. 2011;6:1-10. Sun H, Huang Y, Frassetto L, et al. Effects of uremic toxins on hepatic uptake and metabolism of erythromycin. Drug Metab Dispos. 2004;32:1239-46. ダラシン T ゲル 1%公開資料概要. (リン酸クリンダマイシン)へ項. 平成 14 年 7 月 5 日承 認. 2002:. Jan 14 2015 14:17:58 2.6.4 - p. 11 2.6.4. 薬物動態試験の概要文 国立医薬品食品衛生研究所 安全情報部. 国際化学物質簡潔評価文書 No.26 安息香酸およ び安息香酸ナトリウム. 国際化学物質安全性計画, 東京; 2007. . 本橋 秀之, 乾賢一. 第 1 章トランスポーター研究の基礎. In: 杉山雄一､金井好克, editor. 遺伝子医学 MOOK12 創薬研究者必見! 最新トランスポーター研究 2009. 大阪:メディカル ド, 2009:36-66. Jan 14 2015 14:17:58 2.6.4 - p. 12 2.6.5. 薬物動態試験概要 2.6.5.1. 薬物動態試験：一覧表 Test Article: Clindamycin + Benzoyl peroxide Type of Study Species (strain) No./Sex/ Group Method of Administration Dose (mg/kg) or Concentration Duration of Dosing GLP Mouse (CD-1) 3M/3F Transdermal 28 days Yes Rabbit (New Zealand) 6M/6F Transdermal Duac Topical Gel : 4/20, 12/60, 40/200, 80/400 10%Benzoyl peroxide Distribution Skin penetration Human skin NA In vitro Skin penetration Human skin NA In vitro Skin distribution 3M Transdermal Protein binding Hairless rat (Sprague Dawley) Rat NA In vitro Protein binding Human NA Oat1 knock-out mouse (C57BL/6J) 4 - 5M Absorption Toxicokinetic Pharmacokinetics 2.6.5 - p. 1 Dec 11 2014 11:20:24 0470MS50.001 4.2.2.2. No NA No NA No Single No Benzoic acid 0.004 - 700 μM NA No In vitro Hippuric acid NA No NA NA NA No P.O.S. Lab Sahut, 1985 4.2.2.2. 2008-350-MB 4.2.2.3. RichardsonMerrell Universite Paris Nacht, 1981 4.2.2.3. Wepierre, 1986 4.2.2.3. University of Toronto Kureha Corporation University of California Chiba, 1994 4.2.2.3. Itoh, 2012 4.2.2.3. Eraly, 2006 4.2.2.3. 薬物動態試験概要表 M: Male, F: Female, NA: Not applicable Location in CTD 2.6.5. Substrate of transporter Report No. (US) 33 days 1%Clindamycin3%benzoyl peroxide 1%Clindamycin5%benzoyl peroxide 10%Benzoyl peroxide: 4556 μg 10%Benzoyl peroxide: 10 mg Testing Facility 2.6.5.1. 薬物動態試験：一覧表（続き） Test Article: Clindamycin + Benzoyl peroxide Type of Study Distribution Substrate of transporter Substrate of transporter 2.6.5 - p. 2 Substrate of transporter Transporter inhibition NA: Not applicable Dec 11 2014 11:20:25 Method of Administration Dose (mg/kg) or Concentration Duration of Dosing GLP Testing Facility Report No. Location in CTD Rat MCT1expressing MDA-MB231 cells rOat2 or hOAT2expressing HEK293 cells rOatp1a4expressing Xenopus laevis oocytes mOat1expressing Xenopus oocytes rOat1 and rOat3expressing LLC-PK1 cells hOAT1 and hOAT3expressing HEK293 cells Rabbit corneal epithelium cells NA In vitro Benzoic acid Up to 50 mM NA No Kanazawa University Tamai, 1999 4.2.2.3. NA In vitro Benzoic acid 0.1 μM NA No University of Cologne Pfennig, 2013 4.2.2.3. NA In vitro Hippuric acid 10 μM NA No Kumamoto University Deguchi, 2006 4.2.2.3. NA In vitro Benzoate 0.1 - 10 mM NA No University of California Eraly, 2006 4.2.2.3. NA In vitro Hippuric acid 0.1 - 1000 μM NA No University of Tokyo Deguchi, 2004 4.2.2.3. NA In vitro Benzoic acid 20 mM NA No Santen Pharmaceutical Fujii, 2013 4.2.2.3. 薬物動態試験概要表 Transporter inhibition No./Sex/ Group 2.6.5. Transporter inhibition Species (strain) 2.6.5.1. 薬物動態試験：一覧表（続き） Test Article: Clindamycin + Benzoyl peroxide Type of Study Distribution Transporter inhibition Transporter inhibition 2.6.5 - p. 3 Metabolism Skin metabolite Urinary metabolite CYP1A2 and CYP2D6 inhibition Method of Administration Dose (mg/kg) or Concentration Duration of Dosing GLP Testing Facility Report No. Location in CTD hOATP1B1expressing HEK293 cells MRP4 or BCRPexpressing HEK293 cells NA In vitro Hippuric acid Up to 30000 μM NA No Fujita, 2014 4.2.2.3. NA In vitro Hippuric acid 0.1 - 3.5 mM NA No Saitama Medical University Radboud University Nijmegen Medical Centre Mutsaers, 2011 4.2.2.3. Hairless rat (Sprague Dawley) Monkey (rhesus) Human liver microsomes 3M Transdermal 10%Benzoyl peroxide: 10 mg Single No Universite Paris Wepierre, 1986 4.2.2.4. 2M/1F Transdermal Single No 4.2.2.4. In vitro NA No RichardsonMerrell Kyoto Pharmaceutical University Nacht, 1981 NA Tsujimoto, 2014 4.2.2.4. Human liver microsomes NA In vitro Benzoyl peroxide 139 μg Hippuric acid CYP1A2; 130, 250, 500 μM CYP2D6; 130, 180, 250 μM Hippuric acid 1 - 1000 μg/mL NA No Food and Drug Administration Volpe, 2014 4.2.2.4. Monkey (rhesus) 2M/1F Transdermal Benzoyl peroxide 139 μg Single No RichardsonMerrell Nacht, 1981 4.2.2.5. M: Male, F: Female, NA: Not applicable Dec 11 2014 11:20:25 薬物動態試験概要表 No./Sex/ Group 2.6.5. CYP3A4 inhibition Excretion Urinary excretion Species (strain) 2.6.5.2. 分析方法及びバリデーション試験 Location in CTD (Report No.) Matrix Analyte Method Quantifiable range Calibration standard Precision (%CV) Accuracy (%Difference) QC samples Precision (%CV) Accuracy (%Difference) CV: Coefficient of variance, NA: Not applicable 4.2.2.1. (0470MS50.001) Mouse plasma Clindamycin LC-MS/MS 0.500 - 500 ng/mL 4.2 -9.7 -3.3 - 2.5 6.7 - 10.5 -7.0 - 4.2 4.2.2.1. (0470MS50.001) Mouse plasma Benzoic acid HPLC-UV 250 - 10000 ng/mL NA -6.6 - 10 NA -2.5 - 12 2.6.5 - p. 4 2.6.5. 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:25 2.6.5.3. 薬物動態試験：単回投与後の吸収 該当する試験はない。 2.6.5.4. 2.6.5.4.1. 薬物動態試験：反復投与後の吸収 マウス Test Article: Clindamycin + Benzoyl peroxide 2.6.5 - p. 5 Location in CTD: Report No.: Species (Strain): No. of animals/gender: Vehicle/formulation: Method of administration: Dose (mg/kg): Dosing period: Sample: Analyte: Assay: Data source: 4.2.2.2. 0470MS50.001 Mouse (CD-1) 3M/3F 1% clindamycin as clindamycin phosphate and 5% benzoyl peroxide Transdermal 4/20, 12/60, 40/200, 80/400 (CLDM/BPO) 28 days Plasma Clindamycin, Benzoic acid LC-MS/MS (clindamycin), HPLC-UV (benzoic acid) Table 11, 12 （続く） 2.6.5. 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:25 2.6.5.4.1. Administered Day 7 マウス（続き） compounds Sex M Dose (mg/kg/day)#1 2.6.5 - p. 6 4/20 12/60 40/200 80/400 F 4/20 12/60 40/200 80/400 28 M 4/20 12/60 40/200 80/400 F 4/20 12/60 40/200 80/400 NA: Not available, less than 3 quantifiable data points #1: CLDM/BPO Benzoic acid Cmax (ng/mL) tmax (hr) NA NA 346 665 NA 461 712 951 NA NA NA 1997 NA NA NA 2924 NA NA 3.0 0.5 NA 3.0 1.0 3.0 NA NA NA 1.0 NA NA NA 1.0 AUC(0-t) (ng･hr/mL) NA NA 962 757 NA 882 2401 6306 NA NA NA 4654 NA NA NA 7387 （続く） 2.6.5. 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:26 2.6.5.4.1. Administered Day 7 マウス（続き） compounds Sex M Dose (mg/kg/day)#1 Cmax (ng/mL) 2.6.5 - p. 7 4/20 18.19 12/60 41.5 40/200 141.7 80/400 260.3 F 4/20 7.87 12/60 36.62 40/200 75.34 80/400 305.6 28 M 4/20 14.74 12/60 42.83 40/200 102.1 80/400 350.1 F 4/20 12.33 12/60 56.73 40/200 50.18 80/400 256.7 ND: Not determined (insufficient data point for characterization of terminal phase #1: CLDM/BPO Clindamycin tmax (hr) 0.5 0.5 0.5 0.5 1.0 1.0 0.5 1.0 1.0 1.0 1.0 0.5 0.5 0.5 1.0 3.0 AUC(0-t) (ng･hr/mL) 42.97 134.2 429.8 1652 19.20 88.83 362.5 1156 25.51 116.9 351.2 1500 23.56 63.04 163.9 1113 t1/2 (hr) ND 3.74 4.58 ND ND 5.42 ND ND ND ND ND 3.08 ND ND ND 3.70 2.6.5. 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:26 2.6.5.4.2. ウサギ Test Article: Benzoyl peroxide Location in CTD: Report No.: Species (Strain): No. of animals/gender: Vehicle/formulation: Method of administration: Dose: Dosing period: Sample: Analyte: Assay: Results 2.6.5 - p. 8 4.2.2.2. Sahut, 1985 Rabbit (New Zealand) 6M/6F 10% benzoyl peroxide/gel Transdermal 500 mg/day 33 days Plasma (0.5 hours pre-dose (pre-dose), 0.5 and 3 hours post-dose on days 0, 5, 12, 19, 26 and 33) Benzoic acid HPLC-UV Mean plasma concentration of endogenous benzoic acid was 882 208 ng/mL. BPO was rapidly absorbed after administration.The plasma concentration of benzoic acid at 0.5 hours post-dose on days 5 to 33 was higher than at pre-dose and 3 hours post-dose. The mean increases in benzoic acid concentration at 0.5 hours post-dose on days 5 to 33 was 1656 718 ng/mL. Plasma benzoic acid concentration at pre-dose on days 5 to 19 was higher than endogenous concentration. On day 33, plasma benzoic acid concentration was slightly higher than endogenous concentration. 2.6.5. Dec 11 2014 11:20:26 薬物動態試験概要表 (Data source: Figure 3) t-1/2: 0.5 hours pre-dose, t+1/2: 0.5 hours post-dose, t+3: 3 hours post-dose 2.6.5.5. 薬物動態試験：分布 2.6.5.5.1. 皮内分布 Test Article: Benzoyl peroxide Location in CTD: Report No.: Species (Strain): No. of animals/gender: Vehicle/formulation: Method of administration: Dose: Dosing period: Analyte: Assay: Data source: 2.6.5 - p. 9 Cutaneous structure Horny layer Epidermis Upper dermis Deeper dermis Whole skin 3h 11.4 2.3 0.14 0.03 0.40 0.03 0.47 0.06 12.4 2.4 Duration of application 8h 14.4 5.6 0.17 0.05 0.49 0.06 0.65 0.14 15.7 5.5 24h 17.1 6.1 0.09 0.01 0.50 0.03 0.53 0.09 18.2 6.0 2.6.5. Mean SE (n=6, horny layer: n=3) 4.2.2.3. Wepierre, 1986 Hairless rat (SD) 3M 10% Benzoyl peroxide/gel Transdermal 10 mg Single 14 C LSC Table 1 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:26 2.6.5.6. 2.6.5.6.1. 薬物動態試験：蛋白結合 ラット Test Article: Benzoic acid Location in CTD: Report No.: Species (Strain): Concentration: Method: Data source: Results: 2.6.5 - p. 10 2.6.5.6.2. 4.2.2.3. Chiba, 1994 Rat 0.004 - 700 μM Equilibrium dialysis was carried out for 3 hr for the initial plasma concentration range of 0.004 to 700 μM. The equilibrium plasma and buffer concentrations of labeled and unlabeled benzoic acid were determined by LSC and HPLC, and the unbound fraction in plasma perfusate was estimated as the ratio of the benzoate concentration in buffer side (unbound) to the concentration in plasma side (total benzoate). Results Section "Protein binding and red cll partitioning" Unbound fraction; 0.13 - 0.28 Plasma protein binding; 72 - 87% ヒト Test Article: Hippuric acid Location in CTD: Report No.: Species (Strain): Method: 薬物動態試験：妊娠又は授乳動物における試験 該当する試験はない。 Dec 11 2014 11:20:27 薬物動態試験概要表 2.6.5.7. 2.6.5. Data source: Results: 4.2.2.3. Itoh, 2012 Human Serum samples were obtained from 45 patients on hemodialysis. A microscale and rapid ultracentrifugation method was carried out. Serum and buffer concentration of hippuric acid were determined by LC/MS-MS. Table 4 Plasam protein binding; 48.3 2.5% 2.6.5.8. 2.6.5.8.1. 2.6.5.8.1.1. 薬物動態試験：その他の分布試験 皮膚透過性 過酸化ベンゾイル Test Article: Benzoyl peroxide Location in CTD: Report No.: Species (Strain): Vehicle/formulation: Method of administration: Analyte: Assay: Data source: 2.6.5 - p. 11 Rinse (skin surface) Soaks (skin layers) Buffer (dermal side) Total 4.2.2.3. Natch, 1981 Human skin Benzoyl peroxide In vitro 14 C LSC Table 1 μg (average of two diffusion cells) 4350 120 86 4556 % of the total amount recovered 95.5 2.6 1.9 100 2.6.5. 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:27 2.6.5.8.1.2. クリンダマイシンリン酸エステル－過酸化ベンゾイル配合ゲル Test Article: Clindamycin + Benzoyl peroxide Location in CTD: Report No.: Species (Strain): Vehicle/formulation: Method of administration: Analyte: Assay: Data source: Test articles 4.2.2.3. 2008-350-MB Human skin 1% clindamycin as clindamycin phosphate and 3 or 5% benzoyl peroxide In vitro Clindamycin, Benzoic acid LC-MS/MS (clindamycin), HPLC-UV (benzoyl peroxide, benzoic acid) Table 3, 4, 6, 7 Analyte 2.6.5 - p. 12 CLDM1%-BPO5% Clindamycin#1 CLDM1%-BPO3% Clindamycin#1 CLDM1%-BPO5% Benzoyl peroxide CLDM1%-BPO3% Benzoyl peroxide CLDM1%-BPO5% Benzoic acid CLDM1%-BPO3% Benzoic acid Mean SE (CLDM1%-BPO5%: n=26, CLDM1%-BPO3%: n=28) BQL: Below the limit of quantitation #1: Clindamycin and clindamycin phosphate Epidermis 6.73 2.04 12.47 2.48 18.43 6.75 18.22 4.38 2.11 0.29 1.70 0.17 skin distribution (μg) Dermis 1.14 0.30 1.78 0.43 2.65 0.74 2.64 0.62 1.81 0.35 1.37 0.20 Receptor fluid 0.17 0.07 0.19 0.07 BQL BQL 2.49 0.25 1.13 0.11 2.6.5. 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:27 2.6.5.8.2. トランスポーターによる輸送 2.6.5.8.2.1. 2.6.5.8.2.1.1. Oat1 による輸送 安息香酸 Test Article: Benzoic acid Location in CTD: Report No.: Species (Strain): No. of animals/gender: Analyte: Assay: Data source: 4.2.2.3. Eraly, 2006 Oat1 knock-out mouse (C57BL/6J) 4 - 5M Benzoic acid GC-MS Table 3 2.6.5 - p. 13 Plasma (μM) Urine (mmol/mol creatinine) Mean SE (n=4～5） 2.6.5.8.2.1.2. Wild type 0.00 6.01 0.85 Knock-out 16.91 6.86 8.80 1.35 馬尿酸 Test Article: Hippuric acid 4.2.2.3. Deguchi, 2004 rOat1 and rOat3-expressing LLC-PK1 cells, hOAT1 and hOAT3-expressing HEK293 cells rOat1/hOAT1; p-aminohippurate, rOat3/hOAT3; benzylpenicillin Table 1, 5 Dec 11 2014 11:20:27 Vmax/Km (μL/min/mg of protein) 18.9 18.3 - 薬物動態試験概要表 rOat1-LLC-PK1 rOat3-LLC-PK1 hOAT1-HEK293 hOAT3-HEK293 2.6.5. Location in CTD: Report No.: Test system: Substrate: Data source: 2.6.5.8.2.2. MCT1 による輸送 Test Article: Benzoic acid Location in CTD: Report No.: Test system: Concentration: Data source: Results: 2.6.5.8.2.3. 4.2.2.3. Tamai, 1999 Rat MCT1-expressing MDA-MB231 cells Up to 50 mM Results The estimated Km and Vmax values were 3.05 0.38 mM and 168 14.3 nmol/min/mg protein, respectively. The uptake of [14C]benzoic acid by mock cells increased from pH 7.5 to 6.5, but was constant at pH<6.5. In contrast, uptake of [14C]benzoic acid by rat MCT1-transfected cells increased continuously from pH 7.5 to pH 5.5, distinctly different from the uptake by mock cells. rOat2 及び hOAT2 による輸送 Test Article: Benzoic acid 2.6.5 - p. 14 Location in CTD: Report No.: Test system: Concentration: Data source: Results: 4.2.2.3. Pfennig, 2013 rOat2 or hOAT2-expressing HEK293 cells 0.1 μM Fig 3 Benzoic acid is not transported by OAT2. 2.6.5. 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:28 2.6.5.8.2.4. rOatp1a4 による輸送 Test Article: Hippuric acid Location in CTD: Report No.: Test system: Concentration: Data source: Results: 4.2.2.3. Deguchi, 2006 rOatp1a4-expressing Xenopus laevis oocytes 10 μM Results There was no significant difference over a period of at least 60 min in uptake of [14C]hippuric acid between oocytes injected with rOatp1a4 cRNA and those injected with water. 2.6.5 - p. 15 2.6.5. 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:28 2.6.5.8.3. トランスポーター輸送阻害 2.6.5.8.3.1. Oat1 輸送阻害 Test Article: Benzoic acid Location in CTD: Report No.: Test system: Analyte: Result: 2.6.5.8.3.2. 4.2.2.3. Eraly, 2006 mouse OAT1-expressing Xenopus oocytes p-aminohippurate The Ki of benzoic acid was 253 μM. Oat1/3 輸送阻害 Test Article: Hippuric acid 2.6.5 - p. 16 Location in CTD: Report No.: Test system: Substrate: Data source: 4.2.2.3. Deguchi, 2004 rOat1 and rOat3-expressing LLC-PK1 cells, hOAT1 and hOAT3-expressing HEK293 cells rOat1/hOAT1; p-aminohippurate, rOat3/hOAT3; benzylpenicillin Table 2, 6 Mean SD (n=3) Ki (μM) 27.5 4.3 18.6 10.7 18.8 4.7 30.8 6.5 2.6.5. Transporter rOat1 rOat3 hOAT1 hOAT3 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:28 2.6.5.8.3.3. MCT 輸送阻害 Test Article: Benzoic acid Location in CTD: Report No.: Test system: Substrate: Data source: Results: 2.6.5.8.3.4. 4.2.2.3. Fujii, 2013 Rabbit corneal epithelium cells [3H]Ketoprofen (0.3 μM) Table 3 Benzoic acid at high concentration (20 mM) reduced the uptake of [3H]ketoprofen by rabbit corneal epithelium cells. (MCTs contribute to the membrane transport and pharmacokinetics of drugs with monocarboxylic acid structures such as ketoprofen.) OATP1B1 輸送阻害 Test Article: Hippuric acid 2.6.5 - p. 17 Location in CTD: Report No.: Test system: Substrate: Data source: Results: 2.6.5.8.3.5. 4.2.2.3. Fujita, 2014 hOATP1B1-expressing HEK293 cells SN-38 (0.03 μM), estrone-3-sulfate (1.6 nM) Table 1 Hippuric acid inhibitd OATP1B1-mediated uptake of SN-38 and [3H]estrone-3-sulfate, IC50 values were 6710 and >3000 μM, respectively. MRP4 及び BCRP 輸送阻害 Dec 11 2014 11:20:28 4.2.2.3. Mutsaers, 2011 MRP4 or BCRP-expressing HEK293 cells Methotrexate (MTX, 218, 468 and 718 nM), estrone-1-sulfate (E1S, 50, 125 and 200 nM) Results Hippuric acid dose-dependently inhibited MRP4-mediated [3H]-MTX uptake and BCRP-mediated [3H]-E1S uptake in a concentration range of 0.1 mM to 3.5 mM. The compound did not completely inhibit transport by MRP4, as depicted by the plateau at 50% of the inhibition curve, whereas uptake of [3H]-E1S by BCRP was completely blocked by hippuric acid. Hippuric acid inhibited MRP4mediated transport in a non-competitive manner, with a Ki of 2.5 mM, and also inhibited transport by BCRP in a non-competitive manner with a Ki of 4 mM. 薬物動態試験概要表 Location in CTD: Report No.: Test system: Substrate: Data source: Results: 2.6.5. Test Article: Hippuric acid 2.6.5.9. 薬物動態試験：In Vivo における代謝 2.6.5.9.1. 皮膚中代謝物 Test Article: Benzoyl peroxide Location in CTD: Report No.: Species (Strain): Vehicle/formulation: Method of administration: Dose: Dosing period: Analyte: Assay: Data source: 4.2.2.4. Wepierre, 1986 Hairless rat (SD) 10% Benzoyl peroxide/gel Transdermal 10 mg Single 14 C LSC Table 1 2.6.5 - p. 18 Cutaneous structure Horny layer Epidermis Upper dermis Deeper dermis Whole skin Benzoic acid 2.1 0.07 0.29 0.32 2.8 24h Benzoyl peroxide Benzoic acid 13.8 3.3 0.04 0.05 0.18 0.32 0.12 0.41 14.1 4.1 2.6.5. Mean (n=6, horny layer: n=3) 3h Benzoyl peroxide 9.3 0.07 0.11 0.15 9.6 Duration of application 8h Benzoyl peroxide Benzoic acid 10.1 4.3 0.05 0.12 0.09 0.40 0.12 0.53 10.4 5.3 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:29 2.6.5.9.2. 尿中代謝物 Test Article: Benzoyl peroxide 2.6.5 - p. 19 Location in CTD: Report No.: Species (Strain): No. of animals/gender: Vehicle/formulation: Method of administration: Dose : Dosing period: Sample: Analyte: Assay: Data source: Results: 2.6.5.10. 4.2.2.4. Natch, 1981 Rhesus monkey 2M/1F Acetone Transdermal 139 μg Single Urine (Male; 6-24 hour urines, Female; 6-12 hour urines) 14 C Thin layer chromatography and autoradiography Table II When the urine collected following topical application was extracted with ethyl acetate at pH 9.0, 7.2% of the 14C label was recovered in the organic fraction; 92.8% remained in the aqueousphase. Re-extracting the aqueous fraction at pH 1.0 transferred 97.0% of the radioactivity to the organicfraction; only 3.0% remained in the aqueousphase. When this second organic extract was analyzed by TLC and autoradiography, one major metabolite with a relative Rf, identical to benzoic acid was found. There were three minor, more polar metabolites, but the quantity of these was too small-less than 2% of the total-to permit their identification. However, their mobility did not coincide with that of hippuric acid. 薬物動態試験：In Vitro における代謝 該当する試験はない。 薬物動態試験：推定代謝経路 O O O O OH O 過酸 化 ベン ゾ イル 安 息 香酸 N H 馬 尿酸 OH O 薬物動態試験概要表 O Dec 11 2014 11:20:29 2.6.5. 2.6.5.11. 2.6.5.12. 2.6.5.12.1. 薬物動態試験：薬物代謝酵素の誘導／阻害 CYP 阻害 2.6.5.12.1.1. CYP1A2 及び 2D6 阻害 Test Article: Hippuric acid Location in CTD: Report No.: Test system: Data source: Results: 4.2.2.4. Tsujimoto, 2014 Human liver microsomes Fig. 3 and Fig. 6 Hippuric acid did not inhibit the CYP1A2-mediated metabolism of phenacetin to acetaminophen and CYP2D6-mediated metabolism of metoprolol to O-demethylmetoprolol. Effects of hippuric acid on CYP1A2 activity in human liver microsomes. (Acetaminophen formation rate (% of control) vs Hippuric acid concentration (μM)) 2.6.5 - p. 20 2.6.5. Effects of hippuric acid on CYP2D6 activity in human liver microsomes. (O-desmethylmetoprolol formation rate (% of control) vs Hippuric acid concentration (μM)) 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:29 2.6.5.12.1.2. CYP3A4 阻害 Test Article: Hippuric acid Location in CTD: Report No.: Test system: Data source: Results: 4.2.2.4. Volpe, 2014 Human liver microsomes Table 3 Hippuric acid inhibited the CYP3A4-mediated metabolism of testosterone,. the IC50 value was 116.1 μg/mL as protein-unbound concentration, 129 to 241.9 μg/mL as total concentration. 2.6.5 - p. 21 2.6.5. 薬物動態試験概要表 Dec 11 2014 11:20:30 2.6.5.13. 2.6.5.13.1. 薬物動態試験：累積排泄 ラット Test Article: Benzyl peroxide 2.6.5 - p. 22 Location in CTD: Report No.: Species (Strain): No. of animals/gender: Vehicle/formulation: Method of administration: Dose : Dosing period: Sample: Analyte: Assay: Results: 2.6.5.14. 4.2.2.5. Natch, 1981 Rhesus monkey 2M/1F Acetone Transdermal 139 μg Single Urine (Male; 6-24 hour urines, Female; 6-12 hour urines) 14 C LSC When 14C-benzoyl peroxide dissolved in acetone was applied in a dose of 139 μg of the ventral forearm of these same monkeys, about 45% of the applied radioactivity was recovered in the urine. 薬物動態試験：胆汁中排泄 該当する試験はない。 2.6.5.15. 薬物動態試験：薬物相互作用 薬物動態試験：その他 該当する試験はない。 Dec 11 2014 11:20:30 薬物動態試験概要表 2.6.5.16. 2.6.5. 該当する試験はない。