Comments
Transcript
幹細胞研究用製品カタログB版 - Thermo Fisher Scientific
STEM CELL PORTFOLIO driving breakthroughs in research through innovations in process 幹細胞研究用製品カタログ 次の発見へ:成功を約束するシステム 研究の各タッチポイントを最適化 ライフテクノロジーズは、幹細胞研究に伴う様々な課題に対処するための重要なリソースを10年以上にわたり提供してきまし た。これらの技術革新の力を活用して、現在では研究範囲の全体をカバーするトータルシステムを提供しています。あらゆる 幹細胞製品・サービスを取りそろえた当社のポートフォリオは、連続性、効率および精度を実現し、発見の原動力となります。 当社のワークフローソリューションをご紹介します。 Go to lifetechnologies.com/stemcell 2 Contents 4 培養 16 分化 8 幹細胞の継代と解離 18 遺伝子操作 9 幹細胞の分離と除去 21 分析 10 初代細胞 26 製品紹介ページ 10 幹細胞 11 細胞外マトリックス 12 継代用酵素選択表 14 幹細胞研究用細胞外マトリックス(ECM)選択表 Differentiate Culture cGMP条件下で製造された無血清、 当社のキット、増殖因子および 無フィーダー細胞、 サプリメントを使用して、 異種成分不含の培地系で ご希望の系統に分化します 幹細胞を培養および増殖させます 幹細胞研究・実験に使用可能な 革新的なソリューション Engineer Analyze ご希望の方法で幹細胞を 様々な免疫蛍光法および分子法を利用して、 簡単に遺伝子操作します 幹細胞の分析・キャラクタリゼーション を行います 3 培養 KnockOut™ Serum Replacement (SR) ESC/iPSC培養用のゴールドスタンダード組成 KnockOut™ SR は、300報以上の論文で参照されており、安定した増殖条件でヒトおよびマウス ESC/iPSC を培養できます。KnockOut™ SR添加培地で培 養した ESC/iPSC は、FBS添加培地で増殖したものよりも分化が大幅に抑制されます。KnockOut™ SR の性能は、KnockOut™ DMEM または KnockOut™ DMEM/F-12と共に使用することでさらに向上します(図1)。 • FBS に代わる既知組成の無血清製剤です • 凍結保存と回復をサポートします • 適切な増殖因子の添加により分化誘導をサポートします――別の培地に移行する必要はありません Go to www.invitrogen.com/ksr KnockOut™ SR XenoFree CTS™ ヒトESC/iPSC培養のために開発された初の xeno-free(異種成分不含)サプリメント KnockOut™ SR XenoFree は、従来の KnockOut™ SR と同じ性能を有し、hESC/hiPSC の分化誘導とルーチンな維持をサポートします。この画期的な xeno-free(異種成分不含)サプリメントは、hESC の多分化能、通常の形態、核型を維持することができます。 • 多能性遺伝子の発現と分化能を維持することができます • フィーダー細胞(ヒト)と共に使用するか、無フィーダー環境でCELLstart™ CTS™およびKnockOut™ SR GF Cocktail と共に使用してください(図2) • ヒト由来タンパク質、またはヒト組換えタンパク質を含む既知組成の製剤です Go to www.invitrogen.com/ksrxf 表1. ESC/iPSC培養用製品セレクションガイド Culture system 100 従来の DMEM Basal media KnockOut™ DMEM 未分化の ESC コロニーの割合(%) Complete media Supplements Human ESC/iPSC 80 60 Serum + feeders KnockOut™ DMEM KnockOut™ DMEM/F-12 ESC-Qualified FBS Mouse embryonic fibroblasts Serum-free + feeders KnockOut™ DMEM KnockOut™ DMEM/F-12 KnockOut™ SR Mouse embryonic fibroblasts Serum-free + feeder-free 40 Xeno-free + feeders (human) StemPro® hESC SFM Geltrex™ hESC-Qualified/ CELLstart™ CTS™ KnockOut™ DMEM KnockOut™ SR XenoFree Human foreskin fibroblasts CELLstart™ CTS™ KnockOut™ DMEM KnockOut™ SR XenoFree + KnockOut™ SR Growth Factor Cocktail CELLstart™ CTS™ 20 Xeno-free + feeder-free 0 ESC用 FBS KnockOut™ Serum Replacement 図1. 未分化の ESC の増殖。 ESC用 FBS ま た は KnockOut™ SR、お よ び 従 来 の サ プリメントを 添 加した DMEM または KnockOut™ DMEM中でマウス D3 ESC を低密度培養しました。 LIF(白血球阻害因子)は使用しませんでした。7日後にコロニーを固定し、未分化 の ESC のマーカーであるアルカリホスファターゼを染色しました。未分化のコロ ニーの形態および染色特性を評価しました。 4 Feeders and extracellular matrices Mouse ESC/iPSC Serum + feeders KnockOut™ DMEM DMEM/F-12 ESC-Qualified FBS Mouse embryonic fibroblasts Serum-free + feeders KnockOut™ DMEM KnockOut™ SR Mouse embryonic fibroblasts KnockOut™ SR Growth Factor Cocktail フィーダー細胞使用条件下で増殖させたESC/iPSC の移行を簡単に KnockOut™ DMEM/F-12 ESC/iPSC の増殖を促進 KnockOut™ SR Growth Factor Cocktail(GFC)を使用すれば、フィー ダー細胞使用条件下で増殖させた ESC/iPSC をフィーダー細胞なしの条件 KnockOut™ DMEM/F-12は、化学組成が既知で浸透圧が低い基礎培地 で、従来の DMEM/F-12と比較して ESC とiPSC の増殖を促進します。 下に簡単で効率的に移行することができます。しかもフィーダー細胞がもた らす変動を排除することができます。 • ヒト ESC/iPSC をフィーダー細胞なしの条件下で培養できます(図2) • KnockOut™ SR または KnockOut™ SR XenoFree CTS™と共に使用 できます • ヒト由来タンパク質またはヒト組換えタンパク質しか含まれないため、 ESC/iPSC を用いた応用研究に最適です KnockOut™ DMEM 未分化の ESC/iPSC の培養に最適化 • ESC/iPSC の多能性を維持できます • 酵素的手法による継代後でも、手作業で継代されたhESC と同様の形態 を維持できます • 自発的な分化はないか、ほとんどありません • L-グルタミン不含です KnockOut™ SR MEF Kit and Gibco® Mouse Embryonic Fibroblasts (MEFs) フィーダー細胞使用条件下におけるESC/iPSC培養の時間を短縮し 変動を低減 KnockOut™ 無血清条件下での胚細胞培養における増殖の促進と分化の抑制に役立つ 組織に近い環境を実現します。 Gibco Mouse Embryonic Fibroblast ( MEF )は、単 体 ま た は KnockOut™ Serum Replacement との便利なキットとして販売してい DMEM は、化学組成が既知で浸透圧が低い基礎培地で、 ESC とiPSC の形態が改善され、標準的な DMEM培地と比較して天然の胚 • ESC/iPSC の分化を抑制することにより、KnockOut™ SR、KnockOut™ SR XenoFree CTS™およびESC用 FBS の性能を改善します • L-グルタミン不含;必要に応じてL-グルタミンまたはGlutaMAX™サプリ メントを添加してください ® ます。 • マウス(ICR系)から胎生13.5日目(E13.5)に単離しました • 増殖およびガンマ線照射による不活化後に2継代目(P2)で凍結保存しま した • 解凍後の生存率は80%以上です Go to www.invitrogen.com/knockout Go to www.invitrogen.com/mef A B C 図2. フィーダー細胞なしの条件下において KnockOut™ SR Growth Factor Cocktail を用いて維持したiPS細胞。iPSCコロニーをGeltrex™コートされたプ レ ー ト 上 で20% KnockOut™ SR お よ び KnockOut™ SR Growth Factor Cocktail を用いて培養し、2 mg/mLディスパーゼ溶液で継代しました。(A)位相 (B)DAPI染色(100倍)、 (C)抗 SSEA4抗体染色 差顕微鏡での細胞像(40倍)、 (100倍) データ提供:国立成育医療センター 阿久津英憲先生 フィーダー 細 胞 なしの 条 件 下にお い て、KnockOut™ SR XenoFree を CELLstart™ CTS™ xeno-free substrate お よ び KnockOut™ SR GF Cocktail と共に用いて誘導、増殖および培養されたヒト iPSC。ヒト iPSC を 誘導し5継代目まで増殖しました。 5 培養 StemPro® hESC SFM hESC/hiPSC培養のために調製された既知組成でフィーダー細胞不 要の無血清培地 StemPro® hESC SFM は、hESC/hiPSC増殖に優れた効果を発揮し、多 。StemPro® 能性、正常な核型および形態と分化能を維持します(図3) hESC SFM は、Geltrex™ RGF Matrix、Geltrex™ hESC-Qualified、 CELLstart™ CTS™などの様々なマトリックスを使用してhESC/iPSC の増 MesenPRO RS™ Medium MSC培養用の血清使用量低減(2%)培地 MesenPRO RS™培地は、クラシカル培地(DMEM + 10% FBS)を使用 した場合よりも MSC の増殖を改善し、三血球系への分化能を維持します。 • 三血球系への分化能を保持し、クラシカル培地と同等の遺伝子発現プロ ファイルが得られます 殖をサポートします。 (クラシカル培地で一般に使用される)10 ∼ • 2% FBS を含有しており、 20% FBS の添加によるばらつきが低減されます • フィーダー培養からの馴化はほとんど必要ないか不要です • 塩化リチウムなどの催奇性化合物は含まれていません Go to www.invitrogen.com/mesenpro Go to www.invitrogen.com/stempro/hesc StemPro® MSC Serum Free Medium (SFM) MSC の増殖と培養のために調製された初の無血清培地 StemPro® MSC SFM は、高密度でのヒト MSC の増殖効率を改善し、ク ラシカル培地(DMEM(低グルコース)+ 10% FBS)を使用した場合より 外胚葉 も培地の使用量、表面積と培養時間を削減できます。 • CFU-F および三血球系への分化能を6継代以上維持します • 血清含有培地を使用した場合よりも増殖効率が改善されます • ヒト MSC表面マーカー発現プロファイルと正常な遺伝子発現プロファイ ルを維持します p63 ニューロン特異的エノラーゼ 中胚葉 Go to www.invitrogen.com/stempro/msc StemPro® MSC SFM XenoFree ヒト MSC の無血清、xeno-free(異種成分不含)培養を可能に StemPro® MSC SFM XenoFree を使用して増殖させたヒト MSC およ び脂肪由来幹細胞(ADSC)の増殖特性は、クラシカル培地(DMEM + 10% MSC用 FBS)を使用した場合と同等です。StemPro® MSC SFM XenoFree をCELLstart™ Substrate と共に使用すると、完全に異種動物 由来成分を含まない系となるため、さらに生理的に類似した環境で細胞を 増殖でき、従来よりも臨床的に重要な結果を得ることができます。 軟骨 硬骨 • 三血球系への分化能を6継代以上維持します • MSC表面マーカー発現プロファイルと正常な遺伝子発現プロファイルを 外胚葉 維持します Go to www.invitrogen.com/mscxenofree ee パンサイトケラチン 皮内腺 図3. StemPro® hESC SFM はhESC の多分化能性を維持します。 StemPro®hESC SFM を使用して増殖させたhESC は、3つの胚葉のすべてに分 化します。StemPro® hESC SFM を使用して25継代で増殖させた BG02細胞か ら形成したテラトーマの分析により、外胚葉、中胚葉および内胚葉への分化能が証 明されました。 6 StemPro® LipoMAX™ Supplement 既知組成で xeno-free(異種成分不含)の液体サプリメント StemPro® LipoMAX™サプリメントは、ヒト由来リポタンパク質を含む幹 細胞培養用サプリメントです。リポタンパク質は細胞増殖と代謝の調節、お よ び 維 持 に 重 要 な 役 割 を 果 た し ま す。無 血 清 条 件 で StemPro® LipoMAX™ サプリメントを添加すれば、ADSC の増殖効率を3継代後に約 50%改善することができます。 • MSC および脂肪由来幹細胞(ADSC)の増殖をサポートします • 培養細胞にサプリメント液とコレステロールを提供します • 無血清条件下でADSC の増殖を改善します Go to www.invitrogen.com/stemcell/msc StemPro® NSC SFM StemPro ® NSC SFM は、ヒト神経幹細胞(hNSC)の無血清培養 と増殖のために特別に調製された培地(図4) • 正常な NSC の多分化能性と表現型/核型を維持します • 汎用性が高く、NSC の接着培養と浮遊培養の両方をサポートします • 競合品よりも高い増殖効率 • StemPro® NSC SFM を使用して培養したNSC は、生理活性を有する ニューロンおよびグリア細胞への分化能を維持します Go to www.invitrogen.com/stempro/nsc Neurobasal® and Neurobasal®-A Media 海馬細胞など中枢神経系の神経細胞の長期培養に使用可能な無血清 Synth-a-Freeze® Medium 基礎培地 既知組成でタンパク質不含の凍結保存用培地 Neurobasal® Medium は 胎 児 お よ び 胚 由 来 ニ ュ ー ロ ン に、 Neurobasal®-A Medium は出生後および成体由来の脳ニューロン Synth-a-Freeze®培地は、10%ジメチルスルホキシド(DMSO)を含有す に最適 る既知組成で無菌の凍結保存用液体培地です。Synth-a-Freeze®培地に 抗生物質、抗真菌薬、ホルモン、増殖因子、血清やタンパク質は含まれてお らず、便利で使いやすい凍結保存用液体培地です。 • あらゆる標準的な凍結プロトコールに使用できる便利な1液タイプの凍結 保存用液体培地です • MSC、ESC、iPSC、ケラチノサイト、線維芽細胞、上皮細胞、内皮細胞 などの様々な幹細胞と初代細胞に対するSynth-a-Freeze®培地の性能 アストロサイト(星状細胞)のフィーダー層を使用せずに、均質な神経細胞 集団の長期および短期維持培養に使用できます。 • お客様のニーズに応じたサプリメントを添加してください • フェノールレッド含有または不含培地をお選びください Go to www.invitrogen.com/neurobasal は、通常の血清含有凍結保存用培地と同等です StemPro®-34 SFM ヒト造血幹細胞(CD34+)の発生をサポートする無血清培地(SFM) StemPro®-34 SFM は、以下に由来する造血細胞の研究に使用可能です。 • 骨髄 • 末梢血 • 新生児臍帯血 StemPro®-34 SFM は、正常ヒト骨髄を用いた性能テストが行われてい ます。ヒト由来成分、組換えタンパク質や合成成分を使用して製造されて います。 Go to www.invitrogen.com/stempro34 図4. StemPro® NSC SFM を使用して培養したニューロスフェア。 7 培養 幹細胞の継代と解離 StemPro® EZPassage™ Tool 幹細胞の継代を簡単に ® StemPro EZPassage™ ツールはガンマ線で滅菌処理され、1本ずつ梱包されており、すぐに使用可能です。使いやすく、特別なトレーニングを受けること なく、一貫性の極めて高いコロニーを得られます。 • 材質は細胞培養に安全な独自の不活性物質――既存の手作業および酵素的手法による継代法よりも優れています • hESC/hiPSCコロニーを同一のサイズに切断できるため、再現可能で最適な継代が可能です(図5) • 6ウェルプレート1枚の継代が1分以内に終了します ® Go to www.invitrogen.com/stempro/ezpassage to watch the StemPro EZPassage™ Tool video. 1回目の操作 2回目の操作 シャーレを90度回転させて、 もう一度ローラーを 動かします ローリング方向 培地 細胞 図5. StemPro® EZPassage™ ツールを使用するhESC/hiPSCコロニーの切断手順。StemPro® EZPassage™ ツールの小さな溝により、胚性幹細胞コロニーを簡単に 切断できます。 Gibco® TrypLE™ Select CTS™ StemPro® Accutase® 便利な細胞解離酵素 デリケートな細胞に使用可能な穏やかな解離剤 細胞への影響が少ない便利な細胞解離剤です。Invitrogen™ TrypLE™ StemPro Accutase 解離剤は、タンパク質分解活性とコラーゲン溶解活性 Select CTS™細胞解離酵素は室温でも安定で、動物由来成分は含まれて を有する初代細胞、幹細胞および組織の解離用の海洋生物由来酵素です。 ® いません。 ® • hESC およびヒト神経幹細胞(hNSC)を、接着培養またはニューロスフェ ア浮遊培養するときに使用可能な標準的なプロトコールです(図6) • 数分で接着細胞を穏やかに解離できます • 凍結保存後の hESC の単一細胞の継代と高い細胞生存率をサポートし • 細胞への影響が少なく、プレーティング効率が向上します • 回収時間をずらす必要性を最小限に抑えることができます • 室温でも安定です ます Go to www.invitrogen.com/gibcocts Go to www.invitrogen.com/accutase B A 図6. ヒトニューロスフェアの解離。 StemPro® Accutase®試薬1 mL を10分間使用して、ヒトニューロスフェア(A) を単細胞(B)に解離しました。 8 幹細胞の分離と除去 Dynabeads® SSEA-4 幹細胞の分離と除去が簡単に 細胞分離用 Dynabeads®研究用グレード製品 Dynabeads® SSEA-4は、分化誘導後の細胞集団からSSEA-4+未分化 ESC細胞を除去することで、細胞の純度を向上することが可能な磁気ビー ズです(図7) 。純化された分化後の細胞は、ビーズと抗体が付いていない これらの製品は、細胞培養、生物学的アッセイ、フローサイトメトリー解析な どのin vitro 研究のために細胞の分離や刺激を必要とする科学者に使用され ています。研究用グレードの Dynabeads® はISO 9001:2008認証施設で製 造されています。 ため、様々な下流のアプリケーションに使用可能です。 • 分化した細胞を高純度、高収率、高生存率で回収します • hESC のコンタミネーションをなくし、下流アプリケーションへの影響を 防ぎます Dynabeads® CTS™製品 これらの製品は、研究用として、または細胞、遺伝子、組織ベースの製品を臨 床研究目的で非商用製造するために使用されています。また、十分にバリデー ションされた「Class 100」クリーンルーム内において、無菌条件下でガンマ 線滅菌済み Dynabeads®製品を使用して cGMP に準拠して製造されていま Go to www.invitrogen.com/dynal ※株式会社ベリタスのお取扱いになります。 す。すべてのプロセスがバリデーションされています。無菌性試験およびエン ドトキシン試験は米国薬局方に準拠して実施されています。Dynabeads® CTS™はISO 13485:2003認証施設で製造されています。 Dynal® CD34 Progenitor Cell Selection System • ビーズ除去によりヒト CD34+前駆幹細胞をポジティブ磁気分離します • 幹細胞を全血、臍帯血や骨から直接分離できます • 分離したCD34+細胞は様々な下流のアプリケーションに使用可能(すな わち、樹状細胞(DC)に分化させることが可能)です 細胞分離・増殖用 Dynabeads®カスタム製品 Dynabeads® は、Invitrogen Dynal からカスタム製品の販売も行っていま す。Dynabeads® をお客様指定のリガンドと結合させることができます。当 社の品質システムは、ISO 9001:2008およびISO 13485:2003(医療機器‐ 品質マネジメントシステム‐規制目的のための要求事項)に準拠しています。 必 要に応じて、医 療 機 器に関する品 質システム規 則(21 CFR 820、US ※株式会社ベリタスのお取扱いになります。 cGMP)の要件にも準拠します。 DynaMag™ CTS™ Dynabeads ® の分離に最適なマグネット • ビーズに結 合した細 胞を分 離します(例、Dynabeads® CD3/CD28 CTS™マグネットを使用してT細胞を刺激または増殖したり、増殖プロト コール後にビーズを除去したりできます) • 市販の密閉滅菌血液バッグやチューブ内での磁気分離に理想的です • 磁気ビーズに結合した細胞をマグネットで回収して廃棄することで、不要 なタイプの細胞を除去できます 除去後 105 105 104 104 Alexa 594-A Alexa 594-A 除去前 103 103 102 102 101 101 100 50 100 150 FSC-A (x 1,000) 200 250 100 50 100 150 200 250 FSC-A (x 1,000) 図7. 細胞の除去。hESC(BG01細胞)から分化誘導した神経幹細胞を、Dynabeads® SSEA-4による除去前および除去後に抗 SSEA-4抗体で染色した後、フローサイトメ トリーにより解析しました。 9 培養 初代細胞 幹細胞 再プログラムに最適な高品質の体細胞 当社の幹細胞用培地での増殖に最適化された高品質の幹細胞 初代細胞は生体組織(例、生検試料)から直接採取され、in vitro での増殖 Gibco® Human Neural Stem Cells (H9-Derived) が確認されています。これらの細胞は、生じた分裂回数が極めて少ないた 正常なヒトの核型を有する一貫した高純度の細胞を提供 め、由来組織の主な機能成分を忠実に反映します。 • 生存率と増殖能力の性能テスト済みです • 各種細胞に最適化された、完全な細胞培養システムです • 使いやすいシングルショットのサプリメント構成です • 特殊な研究用途へのカスタム細胞・培地ソリューションもご提供しています 線維芽細胞 • 初代ヒト成人皮膚線維芽細胞(HDFa)または初代ヒト新生児皮膚線維芽 細胞(HDFn) ケラチノサイト (角化細胞) • 初代ヒト成人ケラチノサイト(HEKa)または初代ヒト新生児ケラチノサ イト(HEKn) メラノサイト (メラニン細胞) • 初代ヒト成人メラノサイト(HEMa)または初代ヒト新生児メラノサイト (HEMn) 平滑筋細胞 • 初代ヒト大動脈血管平滑筋細胞、初代ヒト冠状動脈血管平滑筋細胞また は初代ヒト肺動脈血管平滑筋細胞 内皮細胞 • ヒト微小血管内皮細胞(成人または新生児由来)、ヒト大動脈血管内皮細 胞、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞(プールまたは非プール)、ヒト肺動脈血 管内皮細胞 Go to www.invitrogen.com/primarycells • 検証済みのプロトコールでニューロン、オリゴデンドロサイトとアストロサ イトへの分化が可能です • StemPro® NSC SFM を使用する接着培養で一貫して増殖します StemPro® Human Adipose-Derived Stem Cell Kit • ヒト脂肪吸引組織から単離され、初代培養後に凍結保存したヒト ADSC • キットにはADSC の培養・増殖に最適なヒト ADSC とMesenPRO RS™培 地が含まれています Gibco® Rat Fetal Neural Stem Cells • 接着培養またはニューロスフェア浮遊培養において増殖可能です • 増殖中にNSC の75%以上が未分化の表現型を保持します • ニューロン、アストロサイトとオリゴデンドロサイトへの分化をサポートし ます Gibco® Mouse (C57BL⁄6) Mesenchymal Stem Cells • 妊娠8週以内の C57BL/6マウス骨髄から単離されました • 骨細胞、脂肪細胞と軟骨細胞への分化が可能です Gibco® Rat (SD) Mesenchymal Stem Cells • 妊娠8週以内の Sprague-Dawley(SD)ラット骨髄から単離されました • 骨細胞、脂肪細胞と軟骨細胞への分化が可能です StemPro® Rat Alk Phos Expressing Mesenchymal Stem Cells これらの細胞には、移植研究および分化研究において細胞を追跡で きるというユニークな機能があります ヒト ROSA26調節エレメントのコントロール下でヒト胎盤アルカリホスファ ターゼ遺 伝 子を発 現するように遺 伝 子 操 作されたトランスジェニック Fisher 344ラット骨髄から単離されました(図8)。 Go to www.invitrogen.com/stemcell/msc 図8. ELF® 97 Endogenous Phosphatase Kit によるStemPro® Rat Alk Phos Expressing Mesenchymal Stem Cell の蛍光可視化。 10 細胞外マトリックス Geltrex™ hESC-Qualified より高いロット間でのタンパク質品質の一貫性 Geltrex™ hESC-Qualified の各ロットは、StemPro® hESC SFM を使用 して hESC を無血清、無フィーダー条件で培養できることをPCR により事 前にテストしています。Geltrex™ hESC-Qualifiedマトリックスはすべての hESC/hiPSC株に使用可能で、各ロットはこれらの幹細胞の多能性を維持 します。 • フィーダー培養から無フィーダー培養への馴化はほとんど必要ないか不 要です • 組織工学による血管、筋肉、骨および軟骨形成にも使用可能です CELLstart™ CTS™ 完全に既知組成の初の xeno-free(異種成分不含)細胞培養基質 CELLstart™ CTS™は、ヒト由来成分のみを含む初の xeno-free(異種成 分 不 含)基 質です。CELLstart™ CTS™ 基 質は、無 血 清 培 地において、 hESC/hiPSC、ヒト間葉系幹細胞(hMSC)、ヒト神経幹細胞(hNSC)の 接着培養および無フィーダー培養を可能にします(図9) 。 次の利点があります。 データ提供:Children’ s Memorial Research Center (イリノイ 州シカゴ) E. Seftor先生 CELLstart™ CTS™ でコートしたシャーレを使 用して StemPro® hESC SFM で培養したhESC は正常な形態を示します。H9細胞(60継代)の位相 コントラスト画像(10倍)。 • hESC/hiPSC の多能性、形態、分化能を維持します • フィーダー基質や動物由来の無フィーダー基質からの馴化はほとんど必 要ないか不要です • ヒト包皮線維芽細胞の接着を可能にするマトリックスとして使用できます Go to www.invitrogen.com/3D-cellculture Natural Mouse Laminin ヒトまたはラット神経幹細胞および初代神経細胞の増殖をサポートします。 本製品の主な機能は、細胞接着、細胞伸展、細胞増殖と運動性の調節です。 •自身または他のマトリックス成分に結合します •上皮の分化を促進します •神経突起増殖を刺激します A B 図 9. ヒト MSC の複数継代にわたる CELLstart ™ CTS ™ 基質上での培養。 4ドナーに由来する4継代目のヒト MSC のプールを、CELLstart™ CTS™ 基質で コートしたフラスコを使用して StemPro® MSC SFM XenoFree で9継代培養し たところ、血清含有培地を使用した場合(B)よりも平らな軸状の形態を示しました (A)。 11 継代用酵素選択表 StemPro® Accutase® TrypLE™ Select CTS™ TrypLE™ Express StemPro® Accutase® は、タンパ 動物由来のトリプシンに代わる組換 動物由来のトリプシンに代わる組換 ク質分解活性とコラーゲン溶解活性 え酵素で、哺乳類の接着細胞をプラ え酵素で、哺乳類の接着細胞をプラ を有する初代細胞、幹細胞株の解離 スチックプレートから解離するとき スチックプレートから解離するときに 用の海洋生物由来酵素です。素早く に使 用します。TrypLE™ 酵 素は動 使用します。TrypLE™酵素は動物お 穏やかな解離を必要とするデリケー 物およびヒト由来成分は含んでおら よびヒト由来成分は含んでおらず、細 トな ESC、iPSC および NSC株に対 ず、細胞への影響が少ない非常に 胞への影響が少ない非常に高純度の して特に有効です。 高純度の試薬です。トリプシンイン 試薬です。トリプシンインヒビターに ヒビターによる不活化の必要はあり よる不 活 化 の 必 要 は ありませ ん。 ません。TrypLE™ CTS™ 酵 TrypLE™ Express酵 素 は 素は、動物由来成分を使用しない専 TrypLE™ Select CTS™ 酵素と同じ 用の施設で製造されています。 酵素がベースとなっていますが、大 説明 Select 規模で経済的に製造されています。 PSC 3 MSC 3 既知組成の培養系に推奨 3 3 3 既知組成の培養系に推奨 推奨 増殖および分化 NSC 3 推奨 HSC は静置した懸濁液中で HSC 培養するため、 継代用ツールは必要ありません。 動物由来成分を 含有 3 フォーマット 100 mL 12 3 100 mL フェノールレッド含有または不含、 100 mL、500 mL、5 Lバッグ Dispase Collagenase IV StemPro® EZPassage™ ディスパーゼは細胞膜を傷つけないた コ ラ ゲ ナ ー ゼ( C l o s t r i d i u m StemPro® EZPassage™ツールの材 め、組織の解離と継代培養に適してい histolyticum 由 来)は、Pro-X-Glyc- 質は細胞培養に安全な独自の不活性物 ます。ディスパーゼは細菌に由来するた Pro配列中の中性アミノ酸(X)とグリシ 質で、フィーダー細胞やその他の基質 め、マイコプラズマおよび動物ウイルス ンの間の結合に対して特異的なプロテ 上で培養した ESC および iPSC のコロ による汚染がありません。ディスパーゼ アーゼです。この配列はコラーゲン中 ニーを均一なサイズに切断できるため、 は、フィーダー細胞を使用しない ESC に多く見られ、結合組織で一般的に見ら 最適な継代が可能です。 培養および iPSC培養での解離に推奨 れる三重らせんのネイティブコラーゲン されます。 線 維を分 解できるユニ ークなプロテ アーゼです。 3 推奨 3 3 手作業での継代に推奨 1g 10本入 3 5g 13 幹細胞研究用細胞外マトリックス (ECM) 選択表 1998 年にヒト胚性幹細胞( ESC )が最初に単離されて以来、Gibco ®の培地および試薬は幹細胞培養用のゴールドスタン ダードとされています。 Gibco®の培地を使用すれば、馴化時間が最小限に、細胞のパフォーマンスが最大限になり、規制要件の遵守が容易になりま す。メンブレンをECMと共に培養すれば、細胞に必須栄養素が供給されるため、in vitro幹細胞培養系がさらに改善されます。 Laminin 説明 Fibronectin Geltrex™ Collagen ラミニンは 基 底 膜 の 主 要 フィブロネクチンは、大型の コラーゲンは細胞培養に最 G e l t r e x ™ は 、マ ウ ス な糖タンパク質成分です。 細胞表面タンパク質および も広く使用される細胞外マ Engelbreth-Holm-Swarm このマウス由来ラミニンは 血漿タンパク質で、細胞関 トリックス(ECM)タンパク (EHS)腫瘍から精製した、 Engelbreth-Holm- 連の原線維マトリックス中で 質で、細胞接着、増殖、分化、 hESC/hiPSC 培 養 用 の Swarm(EHS)肉 腫 より 構造特性および接着特性を 移動と組織形態形成を促進 Matrigel® に代わる基底膜 単離されました。マウス由 示します。 します。 マトリックスです。Geltrex™ 来ラミニンは ESC、iPSC、 マトリックスはロット間でタ NSC の接着と増殖を促進し ンパク質 の 一 貫 性が高く、 ます。 各ロットについて機能テスト が行われています。 PSC 3 3 3 推奨 MSC 増殖および分化 動物由来成分を 含有 フォーマット 14 NSC 3 HSC 3 3 3 3 3 マウス、1 mgバイアル •マウス血漿由来 •ヒト血漿由来 •ヒト組換え型 •コラーゲン I、ウシ由来:10 mLバイアル •コラーゲン I、ラットテール由 来:20 mLバイアルおよび24 ウェルコート済みプレート 3 •増殖因子低減、hESC用 •増殖因子低減、LDEVフ リー CELLstart™ CTS™ AlgiMatrix® Gelatin Vitronectin CELLstart™ CTS™は、ヒト由 AlgiMatrix®アルギン酸塩ス ゼラチンは、培養表面をコート ビトロネクチンは、一部の細 来成分のみを含む初の xeno- ポンジは、3次元細胞培養環境 するための接着因子として使 胞タイプの細胞接着、移動、 free(異種成分不含)基質で を提供します。純度が高く化 用されます。接着因子はゼラ 増 殖 と 分 化 に 関 与しま す。 す。CELLstart™ CTS™ 基 質 学組成が既知で毒性のない多 チン0.1% を含む無菌の溶液 Recombinant Vitronectin は hESC 、hiPSC 、hMSC 、 孔質構造は、ロット間の一貫性 (1倍)であり、微小血管内皮 Natural Human は、生物活 hNSC の接着、増殖と分化を が改善され、優れた細胞ロー 細胞の増殖を促進するだけで 性を有する細胞培養用のタン 可能にします。 ディングと養分供給を実現し、 なく、MEF播種用にも推奨さ パク質です。 細胞にダメージを与えません。 れます。 AlgiMatrix®スポンジは生分 解性で、室温で安定です。 3 既知組成の培養系に推奨 3 3 MEF播種用に推奨 3 3 3 既知組成の培養系に推奨 3 既知組成の培養系に推奨 3 2 mL 6ウェル、24ウェル、 96ウェルプレート 3 3 100 mL 100 mg、ヒト組換え型 15 分化 Gibco ® の増殖因子は、お客様の幹細胞研究に必要な活性、安定性 神経幹細胞用サプリメントは、幹細胞から様々な神経細胞株への とバリデーションを提供します 分化をサポートし、分化細胞を維持する目的でも継続的に使用可 能です • 高い生物活性と純度――少ないタンパク質で、より多くの結果を得ること ができます • 適合性テスト済み――Gibco® のタンパク質は、Gibco®培地を使用して バイオアッセイが行われています 幹細胞研究用増殖因子のラインアップは増え続けています。その例 を以下に挙げます • 多能性幹細胞 ‐FGF-basic Full Length CTS™ ‐LIF • 間葉系幹細胞 ‐BMP-4 ‐SCF CTS™ • 神経幹細胞 ‐BDNF ‐EPO • 造血幹細胞 ‐IL-2、IL-4、IL-7 CTS™ ‐TNF-α CTS™ Go to www.invitrogen.com/growthfactors B-27™ Supplement B-27™ Supplement は、海馬ニューロンの増殖と長期生存用の50倍液体 サプリメントです。Gibco® の B-27™ Supplement は神経生物学研究用サ プリメントのゴールドスタンダードであり、無血清タイプとxeno-free(異 種成分不含)タイプの両方を提供しています。 N-2 Supplement N-2 Supplement は、神経芽細胞腫の増殖・発現と、末梢神経系(PNS) および中枢神経系(CNS)由来初代細胞培養における分裂後のニューロン の増殖・発現に推奨されます。 G-5 Supplement G-5 Supplement はアストロサイトの表現型を示す(正常および腫瘍)グ リア細胞(アストロサイト)の増殖・発現用に推奨されます。 これらのサプリメントは、Neurobasal®培地などの基礎培地と共に使用し ます。 Go to www.invitrogen.com/stemcell/nsc Gibco ® の MSC用分化キットは、ヒト間葉系幹細胞を脂肪生成、軟骨 生成および骨生成の細胞へ分化させるための標準的なプロトコール を使用しています • StemPro® MSC SFM、MesenPRO RS™ 培地および MSC用 FBS細 胞培養システムの補助として使用します • cGMP条件下で製造し、PCR を使用した性能テストを行っているため、よ り優れたパフォーマンスと一貫性を実現します StemPro® Adipogenesis Differentiation Kit 脂肪細胞への完全な分化をサポートします(図10) StemPro® Chondrogenesis Differentiation Kit 軟骨細胞への完全な分化をサポートします StemPro® Osteogenesis Differentiation Kit 骨細胞への完全な分化をサポートします 図 10. 脂肪細胞に分化した間葉系幹細胞(脂溶性色素オイルレッド O で染色し Go to www.invitrogen.com/stempro/mscdiff 16 ました)。 Gibco®製品の製造品質とカスタム製造 Gibco® Cell Therapy Systems (CTS™) 大規模cGMPカスタム培地 Gibco® Cell Therapy Systems(CTS™ )ブ ラ ンド は、21 CFR Part 820 大規模な cGMP培地製造のご用命は、Gibco®細胞培養用培地受託サ ービス Quality System Regulation に準拠して製造された、または ISO 13485/ISO (Cell Culture Custom Media Services)にお任せください。10,000 L まで 9001認証施設で製造された培地、試薬、増殖因子、酵素、分離ビーズ、機器など の液体培地を製造でき、オプションで最大1,000 L の大容量培地バッグへのパッ の細胞療法アプリケーションに必要な高品質の製品を幅広く揃えて提供します。 ケ ー ジ ン グ を 行 い ま す。乾 燥 粉 末 培 地 お よ び Advanced Granulation Technology™(AGT™)培地は、最大7,500 kg のバッチ生産にご利用いただけ ます(正確には利用する粉末のバルク密度に依存します)。 Gibco®増殖因子の品質保証 Gibco® の組換えタンパク質が最高品質であることを保証する目的で、各タンパ ク質について純度だけでなくリフォールディングおよび構造的均一性も分析し、製 Gibco® MediaExpressSMで研究を迅速に 造されたタンパク質が生物学的活性を有することを確認しています。細胞増殖、 スピードが最重要視される小規模な非 cGMP のカスタム注文向けに開発されま 細胞走性、カルシウム流量、二次的サイトカイン増加機構、表面抗原発現誘導、 した。Gibco®品質を小規模バッチで提供していますので、所要時間の短縮と プロテアーゼアッセイなどの生物活性試験を社内で実施しています(表2)。 cGMP準拠のスケールアップへのスムーズな移行に役立ちます。 プロセス開発受託サービス 特性 試験方法 合格基準 純度 SDS-PAGE >95% リフォールディング バイオアッセイ 生物活性を示すこと 構造的均一性 SDS-PAGE きれいなバンドが得られること とができます。PD-Direct®バイオプロセスサービス(Bioprocess Services) 生物活性 公表済みのバイオアッセイ ED50が他社製品以下であること チームは、技術的な専門知識と規制に関する高度な知識を提供して、各開発 安定性 凍結/融解 損失がごくわずかであること エンドトキシン LAL(Limulus Amoebocyte Lysate)法 <0.1 μg/mg PD-Direct® は、プロセス開発のための合理化されたソリューションを提供する 統合化されたサービスです。当社の最新技術とリソースを組み合わせれば、プロ セス開発の非効率性を改善させ、時間とコストのパフォーマンスを向上させるこ フェーズにおける製造プロセスに伴う課題を解決します。 ® 表2. Gibco 増殖因子の品質保証試験。 Gibco®のcGMPグレード試薬 当社は、最も広範な cGMP準拠の幹細胞研究用製品ポートフォリオを提供してい ます。当社の Gibco®細胞培養用培地、平衡塩溶液、動物血清は、体外診断用医 療 機 器、ク ラ ス I、細 胞 組 織 培 養 用 に 分 類 さ れ ま す(21 CFR Part 864, subpart C)。これらの規制ガイドラインに準拠して cGMP条件下で製造すること により、ロット間での一貫性が高くトレーサビリティを有する高品質の製品を提供 し、再現性、信頼性の高い結果が確実に得られるようにサポートします。さらに、 これらの規制要件は臨床用途に必須であるため、cGMP条件下で製造された製 品を最初から使用することで臨床への移行が円滑になります。 カスタム幹細胞サービス 幹細胞培養のニーズはすべて同じではないため、ライフテクノロジーズは、お客 様と協力してお客様のご要望にあわせた幹細胞培養用培地を調製・製造するカス タム製品サービス(Custom Products Services)グループを設置しています。 組成をカスタマイズできるだけでなく、お客様のご要望にあわせて包装や試験に 関する要件もカスタマイズできます。 17 遺伝子操作 Jump-In™ TI™ expression Gateway® Cloning 「R4 attP部位」として知られる Jump-In™ TI™ Gateway®システムは、 特異的ターゲット遺伝子座に目的遺伝子(GOI)を安定的かつ不可逆的に Gateway®組換えクローニングテクノロジーは、制限酵素を利用する従来 のクローニングの制約を回避して、あらゆる発現系の構築を可能にします。 組み込むことにより、アイソジェニックな哺乳類 細胞を遺伝子操作するた Gateway®テクノロジーは分野を横断しての共同研究を促進し、これらの めのシステムです。このシステムを使用することで、クローンのスクリーニ 研究グループが多数のベクターを利用できるようになり、真の学際的な科 ング時間の削減と、サイレントな遺伝子座への組み込みを避けることが可 学研究を実現します。 能です。 次の利点があります。 次の利点があります。 • 発現のばらつきをなくします(染色体の位置による効果はありません) • 1コピーを組み込むことで、生理学的レベルでの発現を可能にします • 長期間発現します(少なくとも20継代以上) • 安定細胞株を簡単かつ迅速に樹立できます • 用途には、幹細胞などの安定したアイソジェニックな細胞を遺伝子操作 してタンパク質を生理学的レベルで長期間発現させる(例、GPCRタン パク質など)、薬剤スクリーニングアッセイを実施するなどの用途があり ます • 室温での迅速な(1時間)クローニング反応により、目的のクローンを最 大99% の効率で回収できます • 制限酵素消化とライゲーションを行わずに方向とリーディングフレームが 維持されるので、容易に発現するクローンを構築することができます • リシーケンシングを最小限にすることにより、ターゲットの同定からバリ デーションまで実験全体で同一のクローンを使用して一貫した結果を得 ることができます • 1つの発現ベクターから別のベクターに挿入 DNA を移動できるので、フ レキシビリティが高まる一方で、クローニングワークフローは単純化され ます Go to www.invitrogen.com/jumpin Go to www.invitrogen.com/gateway Jump-In™ TI™ Gateway®システムは、目的遺伝子を2ステップで組み込みます。ステップ1ではR4 attP部位を持つ細胞株(Jump-In™ TI™細胞株) を作製し、ステップ2ではR4インテグラーゼを用いて目的遺伝子をR4 attP部位へ特異的に組み込みます(リターゲティング効率は>95%)。これらはい ずれも、特定部位をターゲットとする安定で不可逆的なステップです(図11)。 Zeocin SV40 pA HS VT K omycin Hygr PhiC3 1a ttB S UM pJTI™/Zeo 6597 bp UMS Phi C31 Integrase Step I R4 att P R4 attP Zeo TK-Hyg pUC ori Amp pi c KP A Am ili n HS p U C o ri attR2 CmR ccdB V T attR1 ri Co pU Step II EF 1a Retargeting (+) R4 integrase R4 or 5583 bp Expression construct att B GO I cil Ampli in Multisite Gateway cloning pUC pJTI R4 DEST a EF1 ™ i Amp pUC ori GOI EF1a R4 att L UMS R4 att R A m p i c ili n R 4 at t B Zeo TK-Hyg pUC ori Amp 図 11. 安定な Jump-In ™ TI ™ 細胞を作製するためのワークフロー。 幹細胞株、HEK 293細胞とCHO-S細胞でバリデーションされています。ステップ : I プラットフォーム細胞株の作製。(1)phiC31インテグラーゼによるターゲットベクターの 導入、 (2)Hyg による選別、 (3)各クローンのピックアップ、増殖および保存、 (4)組み込み部位の決定、 (5)サザンブロット、 (6)マーカーの発現、 (a)Hyg の qPCR、 (b)マー カーによるリターゲティング。ステップ II:発現細胞株の作製。(7)ドナーベクターとR4インテグラーゼによるプラットフォーム細胞株への導入、 (8)Zeo/G418/Bsd による 選別、 (9)コロニーまたはプールのピックアップ 18 Lentiviral iPSC Reprogramming Particles Neon™ Transfection System レンチウイルスによる遺伝子導入は、十分に理解および実証されている細 驚くほど簡単な幹細胞への遺伝子導入 胞リプログラミングのためのテクノロジーで、多くのタイプの体細胞に有効 です。 • これらの高力価の遺伝子とレポーターを有するiPSC を生成します • hOct4、hSox2、hKlf4、hc-Myc、hLin28、hNanog からお選びください • CMV-GFP遺伝子導入レポーターにより、目的遺伝子の導入を確認する ことができます • hOct4-GFP多能性レポーターにより、iPSC の多能性を確認することが できます Go to www.invitrogen.com/lenti ライフテクノロジーズは、核酸(プラスミド DNA および siRNA)をほとんど すべてのタイプの動物細胞へ高効率(約80%)で導入する次世代エレクト ロポレーションテクノロジー Neon™ Transfectionシステムを提供します (図12)。 • Neon™ Transfectionシステムは、幹細胞などの遺伝子導入が困難な多 くの細胞に導入できることが証明されています(表3) •インストールされている最適条件検討用プログラム(24条件)を使用する 事により、条件を簡単に調整して導入効率と細胞生存率を最大限に高め ることができます Go to www.invitrogen.com/neon pEBNA DEST Vector Kit pEBNA-DEST は、MultiSite Gateway®テクノロジーに利用されている エピソーム哺乳類発現ベクターで、複数の目的遺伝子を決められた順序と Protocol Exchange(プロトコール交換フォーラム)にご参加ください。 protocolexchange.community.invitrogen.com 方向で迅速かつ高効率にクローニングすることができます。 次の利点があります。 • エピソームで複製するため、目的遺伝子の一時的な高発現を可能にします • Epstein-Barrウイルスの複製起点(oriP)と核抗原(EBNA-1遺伝子 によりコードされています)を保有しているため、染色体外での複製が可 能です • ヒグロマイシン B耐性遺伝子を持つため、遺伝子導入された哺乳類細胞 および幹細胞の安定的な選択と維持が可能です Go to www.invitrogen.com/vectors BacMam Technology BacMamテクノロジーは、哺乳類細胞への遺伝子の効率的な導入と発現 を支援する昆虫ウイルス (バキュロウイルス)ベースのシステムです。バキュ ロウイルスには、 導入遺伝子を哺乳類細胞内で発現させるための発現カセッ トが遺伝子操作により組み込まれています。 次の利点があります。 • 初代細胞(線維芽細胞、肝細胞、心血管細胞および上皮細胞)、幹細胞(神 経幹細胞および間葉系幹細胞)などの哺乳類細胞株への効率的な遺伝 図12. Neon™ Transfectionシステムは、初代細胞、幹細胞、遺伝子導入が困難 な細胞に遺伝子を導入するためのブレークスルーとなる技術です。 子導入が可能です • 安全(哺乳類細胞内では複製しません)で、細胞変性効果は観察されま せん • 遺伝子導入前の細胞を凍結保存すれば、そのままアッセイに利用可能です • アッセイ開発を迅速に行えます(安定細胞株の樹立に時間を費やす必要 細胞株 由来組織 遺伝子導入効率(%) 細胞生存率(%) ヒト神経幹細胞 ES 53 97 はありません) Go to www.invitrogen.com/bacmam 間葉系幹細胞 骨髄 54 90 マウス胚性幹細胞 マウス胚 88 96 ヒト脂肪由来幹細胞 脂肪吸引組織 88 96 H9ヒト胚性幹細胞 胚盤胞 29 99 表3. Neon™ Transfectionシステムによる遺伝子導入が成功した幹細胞の例。 遺伝子導入効率は生細胞数と死細胞数から算出しています。 19 遺伝子操作プラットフォーム プラットフォーム 細胞のタイプと用途に応じて選択してください 一時的/組み込みなし 安定的/組み込みなし 安定的/部位特異的 BacMam EBNAベクター インテグラーゼテクノロジー • ASC のスクリーニングプラットフォーム • スクリーニングプラットフォーム • 発生レポーター • 発生レポーター 利点 • 迅速な遺伝子操作 • 幅広い宿主への効率的な感染 欠点 • 一時的発現 • スクリーニングプラットフォーム • 発生レポーター • 移植片の追跡 • 迅速な遺伝子操作 • 安定的な組み込み • 安定発現 • 均一な発現 • コピー数の変更が可能 • 遺伝子座のサイレンシングがないこと を確認可能 • 組み込みなし • 不均一な発現 • 不均一な発現 • ゲノムに永続的に挿入される • ウイルス粒子の調製が必要 • サイレンシングの変動がある • サイレンシングの変動がある 遺伝子操作済みの幹細胞 StemPro® TARGET™ hESC BG01V Kit には、Jump-In™ TI™ Gateway®システムを使用して遺伝子操作されたBG01Vヒト胚性幹細胞が含まれて います。 部位特異的組換えにより、導入遺伝子を発現するようにプラットフォーム細胞株を遺伝子操作することができます(図13)。遺伝子導入された細胞は、 導入遺伝子の発現を保ちながら、3胚葉への分化能を維持します(図14)。 ※日本国内でのお取扱いはございません。 Pseudo attP PhiC31 ネスチン β3チューブリン SMA AFP pJTI/Zeo pTK R4-attP Hyg Zeo R4 pTK Hyg pEF1a Zeo pJTI/EG pEF11 GFP R4-attL R4-attR 図13. 部位特異的インテグラーゼを使用した BG01V の遺伝子操作。R4インテグ ラーゼの基質となる部位を含むプラスミドをphiC31偽部位に導入することにより、 StemPro® TARGET™ BG01V細胞株を作製しました。この細胞株は、プロモー ターのない Zeocin™耐性遺伝子の上流にR4 attP部位を持っています。リターゲ ティングベクターは、R4 attB部 位 の 上 流にEF1aプロモ ーターと、MultiSite Gateway®テクノロジーにより実現されたDESTカセットを持っています。R4イン テグラーゼと共にTARGET™細胞株に導入すると、R4 attB部位とattP部位の組換 え反応が起こり、Zeocin™ 耐性遺伝子上流にEF1aプロモーターが組み込まれま す。Zeocin™で選択すれば、部位特異的組換え反応が起こった細胞のみが生存し ます。MultiSite Gateway® DESTカセットを使用すれば、目的プロモーターによ り発 現 さ れるマ ーカー にクロ ー ニング することが できます。写 真 は 未 分 化 StemPro® BG01V/EG細胞におけるEmGFP の発現を示しています。 20 図14. 安定的にリターゲティングされた EF1a-EmGFP StemPro® TARGET™ BG01V細胞株のクローンでは、胚様体形成を経て分化する間、22日間にわたり GFP発現が持続しました。代表的な3つの胚葉に特異的なマーカーに対する抗体で GFP陽性細胞を二重染色しました。 分析 Alkaline Phosphatase Live Stain (AP Live Stain) お客様の幹細胞について遺伝子発現およびタンパク質発現解析を行 細胞の生存率を維持したままアルカリホスファターゼ染色が出来る市販で えば、分化または脱分化に固有の発現プロファイルをモニターするこ 唯一の試薬で、細胞を殺すことなく多能性のスクリーニングを可能にしま とが可能 す。従来のエンドポイント検出試薬と異なり、この新しい無毒性の試薬は、 多能性と増殖性を維持させたまま、強力な蛍光検出を可能にします。 また、増殖中の ES細胞及び iPS細胞のコロニーの完全性を損なうことなく、 簡単にいつでも染色することができます。蛍光は使用後すぐに消え、細胞は 引き続き培養可能です。 Go to lifetechnologies.com/aplivestain Gene Expression 幹細胞は、細胞状態、細胞タイプ、疾患に特有の分子プロファイルを示しま す。TaqMan®法による遺伝子発現解析(mRNA の定量および定性分析) では、複数の生物学的活性を評価することができます。 • 迅速なターンアラウンドで、通常は4時間以内に結果を得ることができ ます • 高感度で、数 mL の細胞溶解液中に含まれる1コロニー形成単位まで検 Cell Line Contamination 培養幹細胞は、ウイルスやバクテリア(例、マイコプラズマ)などの外来生 物によるコンタミが起こりやすくなっています。細胞株が感染すると、馴化 のために自発的分化や機能変更が起こる可能性があり、実験結果に重大な 影響が生じる可能性があります。幹細胞ラボでは、幹細胞培養をモニター 出可能です • 配列特異的な PCRプライマーとプローブを使用するため、複雑な生物学 的サンプル中に存在する目的の病原体を明確に識別することができます • 複数の生物に対して1つの標準的プロトコールを使用する簡単なワーク フローです することが推奨されます。TaqMan®プローブベースのリアルタイム PCR TaqMan®プローブベースのリアルタイム PCRアッセイは、わずか1コロ アッセイは、細胞溶解液中に存在する特定の微生物を簡単かつ高感度に検 ニー形成単位でも、アップレギュレートまたはダウンレギュレートされた遺伝 出することができます。 子を高い感度で迅速かつ定量的に検出することができます。 Go to www.appliedbiosystems.com/cell-contamination 柔 軟 性を高めるために、TaqMan® Human および Mouse Stem Cell Pluripotency Assay は1本のチューブ、または分注済みの96ウェルもしく Genomic Instability 培養幹細胞を何回も継代すると、ゲノムの不安定化と染色体異常が自然に 生じることがあります。ゲノムが不安定化する原因は不明ですが、これらの 異常は細胞培養条件への馴化、ウイルスの感染、分裂によるストレスや は384ウェル TaqMan® Arrayフォーマットで提供しています。384ウェル TaqMan® Arrayカードは、Applied Biosystems® 7900HT およびViiA™ 7リアルタイム PCRシステムに対応しています。 Go to www.appliedbiosystems.com/gene-expression DNA損傷などの複数の因子に反応して生じる可能性があることが広く知ら れています。STR、SNP、リシーケンシング解析などの分子法は核型分析 を補完するツールであり、核またはミトコンドリア DNA の遺伝子コピー数 や点変異の変化をルーチン解析する際に利用可能です。 Go to www.appliedbiosystems.com/genomic-instability 図15. AP Live Stain は多性能幹細胞に対して強力な染色能力を持っています。 MEFフィーダーで培養したH9ヒト胚性幹細胞。多性能幹細胞コロニーを特異的に 染色します。 21 分析 Protein Expression タンパク質バイオマーカーは、細胞状態、細胞タイプ、機能による幹細胞のキャラクタリゼーションにルーチンに利用されています。多能性細胞および分化細 胞に存在する単一タンパク質の同定、濃縮、発現部位特定および定量には免疫染色、ウェスタンブロットや FACS などの方法が利用されてきました。 Go to www.appliedbiosystems.com/protein-expression Western-SuperStar™ Immunodetection System Western-SuperStar™ Immunodetectionシステムは、非常に高感度で便利な化学発光免疫検出システムです。 Western-SuperStar™システムは、siRNA による遺伝子サイレンシング実験におけるタンパク質のノックダウンの確認に理想的です。 TaqMan® Protein Assays TaqMan® Protein Expression Assay は、ゴールドスタンダードの TaqMan® 5’ヌクレアーゼ技術を応用して、すべての TaqMan® Gene Expression お よび MicroRNA (miRNA) Assay と同じワークフローとサンプル量によるタンパク質発現量の定量を行えます。タンパク質発現の結果が同じ分析プラット フォームで得られるため、これらの革新的なアッセイは mRNA または miRNA発現量をタンパク質発現量と直接相関させることが可能です(図16) 。または、 TaqMan® Protein Assays Open Kit を使用すれば、お客様の抗体を使用してTaqMan® Protein Assayプローブを作製することも可能です。 Go to www.appliedbiosystems.com/taqman Cell Lysis Protein Expression Sample Preparation Kit Ligation/Inacti vation TaqMan ® Protein Expression Core Reagents Kit (includes Fast Master Mix) Binding TaqMan ® Protein Assay Kit 3´ oligo connector 5´ oligo Target Fresh cells– total protein epitope 1 30 min Target epitope 2 60 min 10 min Data Analysis TaqMan ® Protein Assay Data Analysis So ftware v1.0 (beta1) TaqMan ® Fast Real-Time PCR Applied Bios ystems® Fast Real-Time PCR System 100 10 Fo ld c hang e Fluo resc enc e High concentration Intermediate concentration Low concentration Background 1 0.1 0.01 Cycle number 45 min 図16. TaqMan® Protein Assayワークフローの概要。 22 1 4 10 14 Day 28 Final 15 min Qtracker® Labels Alexa Fluor® Dyes Qtracker® Cell Labeling Kit は、カスタムターゲットペプチドを用いて蛍 Alexa Fluor®色素は、現在入手可能な蛍光色素の中で最も信頼されてい 光 Qdot®ナノクリスタルを生細胞の原形質に導入します。いったん細胞内 る代表的な色素です。性能が優れているだけでなく、問題を解決してきた に入ると、Qtracker®ラベルは強力で安定した蛍光を発し、複数の世代を 経験豊かなテクニカルサポートチームと公表済みの30,000以上の参考文 通して追跡可能で、しかもポピュレーション内で近接する細胞に移ることは 献、アプリケーションノート、実験メモやプロトコールが実験計画を支援しま ありません。 す。Alexa Fluor®色素には次のような性質があります。 • 細胞の移動、運動、形態、その他の機能分析をはじめとする幹細胞の長 • 簡単な単一励起多色分析用として、複数の色が入手可能です • 他の色素よりも強力で光安定性が高い蛍光を示します • スペクトルが広範囲にわたるため、実験計画に便利です(図18) • 一般的なすべての励起光源と機器に適合しています Go to www.invitrogen.com/qdots Go to www.invitrogen.com/alexa 期研究に最適な優れたツールです PrestoBlue™ Cell Viability Reagent わずか10分で細胞生存率を高い信頼性で測定可能 します。 • わずか10分で信頼性の高い結果を得られます • 幹細胞などの貴重な細胞に理想的です(図17) • 広いアッセイウィンドウとZ’値で高品質な結果を得られます • 細胞を溶解せずに生細胞のモニタリングとダウンストリームアッセイを実 400 500 450 550 施可能です 13 14 15 16 17 18 600 650 700 750 800 850 波長(nm) Go to www.invitrogen.com/prestoblue A 9 10 11 12 蛍光放出 ンベースの溶液で、生細胞の還元力を利用して細胞増殖を定量的に測定 4 35 687 2 1 PrestoBlue™試薬は、添加して読み取るだけの簡単な細胞生存率アッセ イで、わずか10分後には測定が可能です。PrestoBlue™試薬はレサズリ B 1. Alexa Fluor® 350 2. Alexa Fluor® 405 3. Alexa Fluor® 430 4. Alexa Fluor® 488 5. Alexa Fluor® 514 6. Alexa Fluor® 532 7. Alexa Fluor® 546 8. Alexa Fluor® 555 9. Alexa Fluor® 568 10. Alexa Fluor® 594 11. Alexa Fluor® 610 12. Alexa Fluor® 633 13. Alexa Fluor® 647 14. Alexa Fluor® 660 15. Alexa Fluor® 680 16. Alexa Fluor® 700 17. Alexa Fluor® 750 18. Alexa Fluor® 790 ® 図18. Alexa Fluor 色素シリーズの蛍光スペクトルは近紫外領域から可視および 近赤外領域にわたっています。 図17. Geltrex™マトリックスでコートした96ウェルプレート内にH9ヒト胚性幹細胞 (A)と 脂 肪 由 来 幹 細 胞(B)を 記 載 の 細 胞 密 度 で プレ ー ティン グした 後、 PrestoBlue™試薬を使用して分析しました。 23 分析 Click-iT® EdU Cell Proliferation Assay Kits Click-iT® EdUアッセイは新規に合成されたDNA を検出・定量するための、従来法よりも優れたアッセイです。Click-iT® EdUアッセイはクリック反応(銅が 触媒する、アルキンとアジドの間の共有結合反応)を利用しています。Click-iT® EdUアッセイでは、EdUヌクレオチドにアルキンが、蛍光検出試薬にアジド が含まれています(図19) 。 検出試薬は抗 BrdU抗体よりもサイズが小さいので、DNA を変性しなくても取り込まれたヌクレオチドに接近します。過酷な変性のステップ(抗原認識部位と サンプル形態を破壊することも多いステップ)が不要であるため、デリケートな幹細胞に対しても容易に実施可能な信頼性の高い方法となっています。 Go to www.invitrogen.com/clickitedu Premo™ Autophagy Sensors ready-to-use の CellLight®ターゲット蛍光タンパク質をPremo™ Autophagy Sensor などのオートファジー特異的マーカーと組み合わせれば、オートファ ゴソームが形成されてリソソームと融合する際にオートファゴソームと相互作用する細胞成分の多色イメージングが可能です(図20)。 Premo™ FUCCI Cell Cycle Indicator 細胞周期の様々な段階を可視化できれば、有糸分裂の生理学的および病理学的な解析に役立ちます。これまでは細胞周期の様々な段階の可視化が困難でし たが、Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor が細胞周期の進行を赤色から緑色へのダイナミックな変化により追跡することを可能にしました。ライフテクノロ ジーズでは、FUCCIコンストラクト技術を強力な BacMam遺伝子導入システムに組み込み、簡単で効率的な細胞標識および分裂追跡法を開発しました。 CellLight® Reagents CellLight®試薬は蛍光タンパク質とシグナルペプチドの融合タンパク質で、生細胞骨格などの細胞構造を正確かつ特異的にターゲティングして、生細胞イ メージングやホルムアルデヒド固定細胞の解析を実施することができます(図21)。 CellLight®試薬による細胞標識にはBacMamテクノロジーが採用されています。このテクノロジーでは、哺乳類のプロモーターを遺伝子操作により組み込 んだ昆虫細胞バキュロウイルスが、幹細胞などの哺乳類細胞へ遺伝子を効率的に導入および発現する媒体として使用されています。発現ベクターとは異なり、 BacMam試薬は発現の定量性と再現性が良好で、同時形質導入効率が高いため、複数の BacMam試薬を同一の細胞に使用することができます。 図19. ヒト間葉系幹細胞内で新規に合成された DNA 図20. ヒト大動脈血管平滑筋細胞内におけるオート 図21. CellLight®試薬と幹細胞。ヒト間葉系幹細 を Click-iT® EdU Alexa Fluor® 647 Imaging ファジ ー。Cascade Biologics ® HASMC と 胞 と CellLight ® Histone 2B-RFP お よ び Kit で可視化しました。ビメンチンを抗ビメンチン標 Premo ™ Autophagy Sensor LC3B-GFP 、 CellLight® Golgi-RFP およびHoechst 33342。 CellLight® MAP4-GFP。 識した後、Alexa Fluor® 488二次抗体とHoechst 33342で可視化しました。 24 機能解析 転写・翻訳調節機構の研究のための RNAi およびタンパク質検出 Gene Regulation with TaqMan® miRNA Assays microRNA(miRNA)による転写後の調節は、幹細胞研究において調べられている機構の一つです。miRNA は、メッセンジャー RNA(mRNA)の切断や mRNA からタンパク質への翻訳を阻害することによりmRNA の翻訳と安定性を調節することが知られています。一部の miRNA は幹細胞内での発現パター ンが異なるため、生物学的プロセス、細胞タイプ(胚性細胞か、腫瘍細胞か、組織特異的細胞)および生物種ごとに固有の「分子署名」を得ることができます。 Go to www.appliedbiosystems.com/gene-regulation Gene Knockdown with siRNA 翻訳後の遺伝子発現サイレンシングは、遺伝子の機能、生物学的経路、疾患の生理学的機序を評価する幹細胞研究において、強力な分子ツールとなります。 ライフテクノロジーズの siRNA解析ワークフローは、遺伝子サイレンシングの誘導に最適化されています。 Go to www.appliedbiosystems.com/gene-knockdown Epigenetic Monitoring エピジェネティックな要因は、転写因子がプロモーターなどの調節エレメントに結合するタイミングとメカニズムを制御することにより、幹細胞の分化調節にお いて重要な役割を果たすことが知られています。この調節機構を解明できれば、同じ遺伝子を持つ細胞がどのようにして顕著に異なる特性を示すかについて 深く理解できるようになります。ライフテクノロジーズの methylSEQr™ Bisulfite Conversion Kit のワークフローは、PCR増幅とダイレクトシーケンシング をベースとしているため高分解能を実現し、固有の「分子署名」を同定することができます。 Go to www.appliedbiosystems.com/epigenetic-monitoring タンパク質検出 Applied Biosystems® Attune® Acoustic Focusing Cytometer 単一細胞解析を組み合わせた高感度のアコースティックフォーカシング技術 Attune® Acoustic Focusing Cytometer を使用すれば、幹細胞研究において 様 々 なタイプ の 細 胞 を 簡 単に同 定 することができます。Attune® Acoustic Focusing Cytometer は、流速に左右されずに細胞を1列にフォーカシングするこ 。Attune® Cytometer の とを、市販の装置としては初めて可能にしました(図22) フォーカシング機能は、感度を犠牲にすることなくレアイベントの解析を可能にしま す。サンプルの流速を変更できるため、高流速でもピークを最適に分離可能です。 主な特長: • 細胞やビーズをターゲットにする革新的なアコースティック技術 • 市販されている中で最高のサンプル導入率 • 自動補正およびユーザー定義補正 • 簡単な蛍光補正 • 研究室の実験台に設置可能――標準的な研究室の実験台上やクリーンベンチ内 への設置に適しています Go to www.appliedbiosystems.com/attune 図22. Attune® Acoustic Focusing Cytometer 25 Ordering Information ESC および iPSC 培養製品 製品名 CELLstart ™ CTS ™ 製品番号 サイズ A1014201 17104-019 17105041 11885-084 10565-018 10439024 13256029 A1048002 12760021 10829018 12660012 10828028 A1058001 A1099202 PHC9461 A1110501 A1000701 23181010 12605-010 15400-054 10 ユニット 100 mL 100 mL 製品名 製品番号 サイズ B-27 ™ Serum-Free Supplement (50X) B-27 ™ Supplement Minus AO (50X) B-27 ™ Supplement Minus Insulin (50X), liquid (Custom) B-27 ™ Supplement Minus Vitamin A (50X) B-27 ™ Supplement XenoFree (50X) N-2 Supplement (100X), liquid G-5 Supplement (100X), liquid FGF-basic (recombinant human) Geltrex ™ hESC-Qualifi ed Geltrex ™ RGF Matrix KnockOut ™ DMEM KnockOut ™ DMEM/F-12 KnockOut ™ SR KnockOut ™ SR GF Cocktail KnockOut ™ SR XenoFree MesenPRO RS ™ Medium Neurobasal ™ -A Medium Neurobasal ™ -A Medium, without Phenol Red Neurobasal ™ Medium Neurobasal ™ Medium, without Phenol Red StemPro ® Adipogenesis Differentiation Kit StemPro ® Chondrogenesis Differentiation Kit StemPro ® Osteogenesis Differentiation Kit StemPro ® hESC SFM StemPro ® LipoMAX StemPro ® MSC-SFM StemPro ® MSC-SFM XenoFree StemPro ® NSC-SFM StemPro ® -34 SFM StemPro ® Human Adipose Derived Stem Cells StemPro ® Human Adipose Derived Stem Cell Kit 17504-044 10889-038 10 mL 10 mL 0050129SA 10 mL 12587-010 A11576-SA 17502-048 17503-012 13256-029 A1048002 12760021 10829018 12660012 10828028 A1058001 A1099202 12746-012 10888-022 12349-015 21103-049 12348-017 A10070-01 A10071-01 A10072-01 A1000701 A10850-01 A10332-01 A10675-01 A10509-01 10639-011 R7788-115 R7788-110 10 mL 10 mL 5 mL 1 mL 10 µg 5 mL 5 mL 500 mL 500 mL 500 mL 10 mL 500 mL 1 kit 500 mL 500 mL 500 mL 500 mL 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 5 ml 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 1 vial 1 kit Collagenase Type IV Dispase DMEM DMEM/F-12 ESC–Qualifi ed FBS FGF-Basic (recombinant human) Geltrex ™ hESC-Qualifi ed Geltrex ™ RGF Matrix KnockOut ™ DMEM KnockOut ™ DMEM/F-12 KnockOut ™ SR KnockOut ™ SR GF Cocktail KnockOut ™ SR XenoFree LIF (recombinant human) StemPro ® Accutase ® StemPro ® hESC SFM StemPro ® EZPassage ™ Tool TrypLE ™ Express with Phenol Red Trypsin-EDTA 2 mL 1g 5g 500 mL 500 mL 500 mL 10 µg 5 mL 5 mL 500 mL 500 mL 500 mL 10 mL 500 mL 100 µg 100 mL 1 kit 幹細胞培養・増殖および分化用培地 凍結培地 製品名 Synth-a-Freeze ® Medium 製品番号 A12542-01 サイズ 50 mL 幹細胞 製品名 製品番号 Mouse (C57BL ⁄ 6) Mesenchymal Stem Cells Rat (SD) Mesenchymal Stem Cells Rat Fetal Neural Stem Cells Rat Fetal Neural Stem Cell Kit Human Neural Stem Cells (H9-Derived) Human Neural Stem Cell Kit (H9-Derived) StemPro ® Rat Alk Phos Expressing Mesenchymal Stem Cells S1502-100 S1601-100 N7744-100 N7744-200 N7800-100 N7800-200 1 mL 1 mL 1 mL 1 kit 1 mL 1 kit R7789-120 1 mL 26 サイズ 製品名 製品番号 StemPro ® Human Adipose Derived Stem Cells StemPro ® Human Adipose Derived Stem Cell Kit R7788-115 R7788-110 サイズ 1 vial 1 kit 細胞外マトリックス 製品名 AlgiMatrix ™ 3D Culture System 6-well (+ 50mL Firming Buffer) AlgiMatrix ™ 3D Culture System 6-well (+ 50mL Firming Buffer) AlgiMatrix ™ 3D Culture System 24-well AlgiMatrix ™ 3D Culture System 24-well AlgiMatrix ™ 3D Culture System 96-well plate AlgiMatrix ™ 3D Culture System 96-well plate AlgiMatrix ™ Firming Buffer AlgiMatrix ™ Dissolving Buffer Attachment Factor(Gelatin) CELLstart ™ CTS ™ Collagen I, Bovine Collagen I, Rat tail Fibronectin Human, Plasma Fibronectin Natural Human Fibronectin, Bovine Plasma Geltrex ™ hESC-Qualifi ed Geltrex ™ LDEV Free RGF Matrix Geltrex ™ RGF Matrix Natural Mouse Laminin 製品番号 サイズ A10982-01 1 plate A10982-02 4 plates 12684-023 12684-049 12684-015 12684-031 A10915-01 A11340-01 S-006-100 A1014201 A10644-01 A10483-01 33016-015 PHE0023 33010-018 A1048002 A1134301 12760021 23017-015 1 plate 4 plates 1 plate 5 plates 50 mL 50 mL 100 mL 2 mL 10 mL 20 mL 5 mg 1 mg 1 mg 5 mL 5 mL 5 mL 1 mg GIBCO® recombinant growth factors 製品名 Activin A (human) Activin R1b (human) Angiopoietin-2 (human) B-DNF (human) BMP-2 (human) BMP-4 (human) BMP-7 (active) (human) BMP-7 (inactive) (human) Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF) (human) CNTF (human) Cripto (human) CTGF (human) EGF (human) EGF (Murine, Natural) EPO (human) FGF-10 (human) FGF-16 (human) FGF-17 (human) FGF-18 (human) FGF-19 (human) FGF-4 (human) FGF-6 (human) FGF-7 (KGF) (human) FGF-8 (human) FGF-8b (human) FGF-9 (human) FGF-basic (full length) (human) FGF-basic (full length) (human) FGF-basic (full length) (human) FGF-basic (full length) (human) FGF-basic (human) FGF-basic, AA 10-155 (human) FGF-basic, AA 10-155 (human) FGF-basic, AA 10-155 (human) FGF-basic, AA 10-155 (human) Flt-3L (human) GDNF (human) IL-10 (human) IL-2 CTS ™ (human) IL-4 CTS ™ (human) IL-6 (human) IL-7 CTS ™ (human) LIF (human) 製品番号 PHG9014 PHC9284 PHC1524 PHC7074 PHC7145 PHC7914 PHC7204 PHC7104 サイズ 5 µg 10 µg 10 µg 10 µg 10 µg 5 µg 10 µg 10 µg 10908-010 5 µg PHC7015 PHC8014 PHG0286 PHG0315 53003-018 PHC2054 PHG0204 PHG0214 PHG0224 PHG0234 PHG0244 PHG0154 PHG0174 PHG0094 PHG0184 PHG0274 PHG0194 PHG0264 PHG0266 PHG0261 PHG0263 13256-029 PHG0024 PHG0026 PHG0021 PHG0023 PHC9414 PHC7045 PHC0105 CTP0021 CTP0041 PHC0065 CTP0071 PHC9464 20 µg 10 µg 20 µg 25 µg 100 µg 500 IU 25 µg 25 µg 25 µg 25 µg 25 µg 25 µg 25 µg 10 µg 25 µg 10 µg 20 µg 10 µg 25 µg 100 µg 1 mg 10 µg 10 µg 50 µg 100 µg 1 mg 10 µg 10 µg 10 µg 100 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 製品名 LIF (human) Midkine (human) Neurturin (human) NT-4 (human) Oncostatin M (human) SCF ⁄ c-Kit Ligand (human) SDF-1a (human) Sonic Hedgehog C25II (mouse) TGF-α (human) TGF-β1 (human) TGF-β2 (human) TNF-α CTS ™ (human) Wnt-1 (human) 製品番号 PHC9461 PHC7084 PHC7064 PHC7024 PHC5015 PHC2116 PHC1344 PMC8034 PHG0051 PHG9204 PHG9114 CTP3011 PHC1804 サイズ 100 µg 20 µg 10 µg 5 µg 10 µg 25 µg 10 µg 10 µg 100 µg 5 µg 5 µg 100 µg 10 µg 幹細胞の継代培養 製品名 StemPro ® Accutase ® StemPro ® EZPassage ™ Tool TrypLE ™ Express with Phenol Red TrypLE ™ Select CTS ™ Trypsin-EDTA 製品番号 サイズ A11105-01 23181-010 12605-010 A12859-01 15400-054 100 mL 10 ユニット 100 mL 100 mL 100 mL 製品番号 サイズ 幹細胞の分離および除去 製品名 Dynabeads ® SSEA-4* (* 株式会社ベリタス社のお取り扱いになります。 ) DynaMag ™ CTS ™ 111-60D 1 kit 12102 1式 初代細胞・培地・サプリメント 製品名 Human Dermal Fibroblasts, adult (HDFa) Human Dermal Fibroblasts, neonatal (HDFn) Human Epidermal Keratinocytes, adult (HEKa) Human Epidermal Keratinocytes, neonatal (HEKn) Medium 106 EpiLife ® Medium EpiLife ® Defi ned Growth Supplement (EDGS) Human Keratinocyte Growth Supplement (HKGS) Low Serum Growth Supplement (LSGS) Supplement S7 Keratinocyte AOF Growth Kit 製品番号 サイズ C-013-5C C-004-5C C-005-5C 1 vial 1 vial 1 vial C-001-5C 1 vial Neon ™ Transfection System 製品名 製品番号 Neon ™ Transfection System Starter Pack Neon ™ Transfection System MPK5000S MPK5000 サイズ 1 セット 1 ユニット Neon ™ Transfection System Kits 製品名 Neon ™ Transfection System Kit (100 µL) Neon ™ Transfection System Kit (10 µL) 製品番号 サイズ MPK10096 MPK1096 1 kit 1 kit Neon ™ Transfection System accessories 製品名 製品番号 Neon ™ Transfection System Pipette Neon ™ Transfection System Pipette Station Neon ™ Transfection Tubes(100 本入) MPP100 MPS100 MPT100 サイズ 1 ユニット 1 ユニット 1 パック Secondary antibody conjugates (selected) Host donkey anti-goat IgG (H+L) goat anti-mouse IgG (H+L) goat anti-mouse IgM (µ chain) goat anti-rabbit IgG (H+L) goat anti-rat IgG (H+L) rabbit anti-mouse IgG (H+L) Label 製品番号 A11055 A11001 A21042 A11008 A11006 A11059 Alexa Fluor ® 488 Alexa Fluor ® 488 Alexa Fluor ® 488 Alexa Fluor ® 488 Alexa Fluor ® 488 Alexa Fluor ® 488 Qtracker®Cell Labeling Kits 製品名 Qtracker ® 525 Cell Labeling Kit Qtracker ® 565 Cell Labeling Kit Qtracker ® 585 Cell Labeling Kit Qtracker ® 605 Cell Labeling Kit Qtracker ® 655 Cell Labeling Kit Qtracker ® 705 Cell Labeling Kit Qtracker ® 800 Cell Labeling Kit 製品番号 Q25041MP Q25031MP Q25011MP Q25001MP Q25021MP Q25061MP Q25071MP サイズ 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit 1 kit M-106-500 500 mL M-EPI500 mL 500-CA S-012-5 5 mL, 100 X S-001-5 5 mL, 100 X S-003-10 10 mL, 50 X S-0175 5 mL A1051501 1 kit 細胞生存率アッセイ用試薬 製品名 PrestoBlue ™ Cell Viability Reagent PrestoBlue ™ Cell Viability Reagent 製品番号 A13261 A13262 サイズ 25 mL 100 mL 幹細胞の遺伝子操作 製品名 Jump-In ™ TI ™ Platform キット Jump-In ™ TI ™ Gateway ® ベクターキット Jump-In ™ TI ™ Gateway ® システム pEBNA DEST Gateway ® ベクターキット 製品番号 A10897 A10896 A10895 A10898 サイズ 1 kit 1 kit 20 反応 1 kit iPSC 作製用レンチウイルスベクター 製品名 Lentiviral iPSC Reprogramming Particles HOCT4 Lentiviral iPSC Reprogramming Particles HSOX2 Lentiviral iPSC Reprogramming Particles HKLF4 Lentiviral iPSC Reprogramming Particles HC-MYC Lentiviral iPSC Reprogramming Particles HNANOG Lentiviral iPSC Reprogramming Particles HLIN28 Lentiviral iPSC Reprogramming Particles CMV-GFP REPORTER Lentiviral iPSC Reprogramming Particles OCT4-GFP REPORTER 製品番号 サイズ A1357101 100 uL A1357201 100 uL A1357301 100 uL A1357401 100 uL A1357501 100 uL A1357601 100 uL A1357701 100 uL A1357801 100 uL 27 研究用にのみ使用できます。診断目的およびその手続き上での使用は出来ません。 記載の社名および製品名は、弊社または各社の商標または登録商標です。 ©2012 Life Technologies Japan Ltd.All rights reserved.The trademarks mentioned herein are the property of Life Technologies Corporation or their respecitve owners. B-27 is a registered trademark of Southern Illinois University. Taqman is a registered trademark of Roche Molecular Systems,Inc. For research use only. Not intended for any animal or human therapeutic or diagnostic use. ライフテクノロジーズジャパン株式会社 本社 〒108-0023 東京都港区芝浦4-2-8 ■ ■ ■ ■ ■ ■ コールセンター テクニカルサポート カスタマーサービス カスタムプライマーについて サービスラボ 営業部 販売店 www.lifetechnologies.com 0120-650591 (携帯からでもご利用いただけます) 0120-477-392 FAX:0120-477-120 TEL:03-6832-6980 FAX:03-6832-9584 TEL:03-6832-6980 FAX:03-6832-9585 TEL:03-5753-3006 FAX:03-5753-3007 TEL:03-6832-9300 FAX:03-6832-9580 10-28 大阪営業所 〒564-0052 大阪府吹田市広芝町 TEL:06-6339-8165 FAX:06-6339-8138 GIB024-B1203OB