vicalピカード

ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
1
2.6.6 毒性試験の概要文
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
2
目次
略号一覧表 ..................................................................................................................................................... 4
2.6.6
毒性試験の概要文 .................................................................................................................... 6
2.6.6.1
まとめ ................................................................................................................................ 6
2.6.6.2
単回投与毒性試験 ............................................................................................................ 7
2.6.6.3
反復投与毒性試験（トキシコキネティクス評価を含む） ...................................... 13
2.6.6.4
遺伝毒性試験 .................................................................................................................. 31
2.6.6.5
がん原性試験 .................................................................................................................. 31
2.6.6.6
生殖発生毒性試験 .......................................................................................................... 32
2.6.6.7
局所刺激性試験 .............................................................................................................. 32
2.6.6.8
その他の毒性試験（実施している場合） .................................................................. 33
2.6.6.9
考察及び結論 .................................................................................................................. 52
2.6.6.10
図表 .................................................................................................................................. 54
参考文献一覧 ............................................................................................................................................... 55
表
表 2.6.6-1 Extent of toxicity evaluation of BAX 855 ................................................................................... 7
表 2.6.6-2 Dose levels and schedule of the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey
study 1933-017 (Identical to 表 2.6.4-7) ............................................................................................. 8
表 2.6.6-3 GLDH in the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey study 1933-017 .............. 9
表 2.6.6-4 AST in the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey study 1933-017 ................ 10
表 2.6.6-5 aPTT in the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey study 1933-017 .............. 11
表 2.6.6-6 TAT in the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey study 1933-017 ............... 12
表 2.6.6-7 D-dimers in the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey study 1933-017 ........ 13
表 2.6.6-8 Study design of the rat repeated dose toxicity study 8202366 .................................................. 14
表 2.6.6-9 FVIII activity of the rat repeated dose toxicity study 8202366 ................................................. 15
表 2.6.6-10 Incidence and grade of foamy macrophages in the lung the rat repeated dose toxicity
study 8202366 ................................................................................................................................... 16
表 2.6.6-11 TK data of the rat repeated dose toxicity study 8202366 ........................................................ 18
表 2.6.6-12 Range of titers for anti-human FVIII, anti-PEG-rFVIII and anti-PEG antibodies of the
rat repeated dose toxicity study 8202366 .......................................................................................... 19
表 2.6.6-13 Range of Bethesda titers for neutralizing anti-FVIII and anti-PEG-rFVIII antibodies of
the rat repeated dose toxicity study 8202366..................................................................................... 20
表 2.6.6-14 Dose levels and schedule of the repeated dose phase of the cynomolgus monkey study
1933-017 ............................................................................................................................................ 21
表 2.6.6-15 aPTT in the repeated dose phase of the cynomolgus monkey study 1933-017 ....................... 23
表 2.6.6-16 TAT in the repeated dose phase of the cynomolgus monkey study 1933-017 ........................ 24
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
3
表 2.6.6-17 Dose levels and schedule of the repeated dose phase of the cynomolgus monkey study
1933-018 ............................................................................................................................................ 26
表 2.6.6-18 RBC, HGB, HCT, RETI and neutralizing anti-FVIII antibody Bethesda titers of the
animals 25955M, 25958M, 25972F and 25954M in the repeated dose phase of the
cynomolgus monkey study 1933-018 ................................................................................................ 27
表 2.6.6-19 aPTT and neutralizing anti-FVIII antibody Bethesda titers in the repeated dose phase
of the cynomolgus monkey study 1933-018 ...................................................................................... 28
表 2.6.6-20 TK data of the cynomolgus monkey repeated dose toxicity study 1933-018 .......................... 30
表 2.6.6-21 Comparative immunogenicity studies conducted with BAX 855 in mouse models in
the study IMM_R&D_012_11 (Identical to 表 2.4-3) ....................................................................... 39
表 2.6.6-22 Study design of the cynomolgus monkey immunogenicity study 8220805 ............................ 41
表 2.6.6-23 Treatment groups, animal numbers and dose levels - Series 366 and 367 in the two
mouse models immunogenicity study IMM_R&D_025_12.............................................................. 43
表 2.6.6-24 Study design of the PEG2ru20KCOOH rat repeated dose toxicity study 8298494 ................ 45
表 2.6.6-25 PEGylated biopharmaceuticals on the market ......................................................................... 50
表 2.6.6-26 BAX 855: NOAELs from the toxicity studies (Identical to 表 2.4-4) ..................................... 53
表 2.6.6-27 BAX 855: AUC comparison from the Phase I clinical study and cynomolgus monkeys
after first dosing (Based on FVIII activity) (Identical to 表 2.4-5).................................................... 53
表 2.6.6-28 PEG2ru20KCOOH: NOAEL (Identical to 表 2.4-6) .............................................................. 54
図
図 2.6.6-1 IL-1β concentrations in culture supernatants of human whole blood in the study
IVFS_001_10 .................................................................................................................................... 35
図 2.6.6-2 IL-6 concentrations in culture supernatants of human whole blood in the study
IVFS_001_10 .................................................................................................................................... 35
図 2.6.6-3 IL-8 concentrations in culture supernatants of human whole blood in the study
IVFS_001_10 .................................................................................................................................... 36
図 2.6.6-4 TNF-α concentrations in culture supernatants of human whole blood in the study
IVFS_001_10 .................................................................................................................................... 36
図 2.6.6-5 C5a concentrations in human plasma in the study IVFS_0021_10 ........................................... 38
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
4
略号一覧表
略号
英語
日本語
A/G ratio
albumin/globulin ratio
アルブミン／グロブリン比
ALP
alkaline phosphatase
アルカリホスファターゼ
ALT
alanine aminotransferase
アラニンアミノ基転移酵素
ALYM
absolute lymphocyte
リンパ球数の絶対値
ANOVA
analysis of variance
分散分析
APC
antigen presenting cell
抗原提示細胞
aPTT
activated partial thromboplastin time
活性化部分トロンボプラスチン時間
AST
aspartate aminotransferase
アスパラギン酸アミノ基転移酵素
AUC
area under the curve
曲線下面積
AUC0-tlast
area under the curve from 0 to the last
quantifiable sampling time point
時間 0 から測定可能な最終採血時点まで
の曲線下面積
BID
bis in die
1日2回
BU
Bethesda unit
ベセスダ単位
ca
circa
約
CHO
Chinese hamster ovary
チャイニーズハムスター卵巣
CI
confidence interval
信頼区間
Cmax
maximum concentration
最高濃度
DNA
deoxyribonucleic acid
デオキシリボ核酸
ELISA
enzyme-linked immunosorbent assay
酵素標識免疫吸着測定法
FACS
fluorescence-activated cell sorter
蛍光活性化セルソーター
FDA
Food and Drug Administration
米国食品医薬品局
FVIII
factor VIII
血液凝固第 VIII 因子
GLDH
glutamate dehydrogenase
グルタミン酸脱水素酵素
GLP
Good Laboratory Practice
医薬品の安全性に関する非臨床試験の実
施の基準
HCRE
creatinine
クレアチニン
HCT
hematocrit
ヘマトクリット
HDW
haemoglobin distribution width
ヘモグロビン分布幅
HGB
haemoglobin
ヘモグロビン
HRP
horseradish peroxidase
西洋ワサビペルオキシダ-ゼ
HSA
human serum albumin
ヒト血清アルブミン
ICH
International Conference on Harmonisation
日米 EU 医薬品規制調和国際会議
IgG
immunoglobulin G
免疫グロブリン G
IL
interleukin
インターロイキン
IN PHOS
inorganic phosphorous
無機リン
INPT
prothrombin time
プロトロンビン時間
IU
international unit
国際単位
i.a.
intraarterial
動脈内
i.m.
intramuscular
筋肉内
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
5
i.v.
intravenous
静脈内
kDa
kilo dalton
キロダルトン
ko
knock out
ノックアウト
LPS
lipopolysccharide
リポポリサッカライド
LYM
lymphocyte
リンパ球
MHC
major histocompatibility complex
主要組織適合性複合体
MPV
mean platelet volume
平均血小板容積
NCE
normochromatic erythrocyte
正染性赤血球
NEUT
neutrophil
好中球
NOAEL
no observed adverse effect level
無毒性量
PBS
phosphate buffered saline
リン酸緩衝生理食塩液
PCE
polychromatic erythrocyte
多染性赤血球
PCK
pan cytokeratin
パンサイトケラチン
PDW
platelet distribution width
血小板分布幅
PEG
polyethylene glycol
ポリエチレングリコール
PK
pharmacokinetic
薬物動態
RBC
red blood cell
赤血球
RETI
reticulocyte
網状赤血球
rFVIII
recombinant factor VIII
遺伝子組換え型ヒト血液凝固第 VIII 因子
RPMI
Roswell Park Memorial Institute medium
ロズウェルパーク記念研究所培地
SMA
smooth muscle actin
平滑筋アクチン
s.c.
subcutaneous
皮下
TAT
thrombin-antithrombin complex
トロンビン-アンチトロンビン複合体
TK
toxicokinetic(s)
トキシコキネティクス
TNF-α
tumor necrosis factor-α
腫瘍壊死因子-α
TOT CHOL
total cholesterol
総コレステロール
vWF
von Willebrand factor
フォンヴィレブランド因子
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6
2.6.6.1
ペゴル（遺伝子組換え）
6
毒性試験の概要文
まとめ
本項では，ラット及びカニクイザルにおける BAX 855（以下，「本剤」）の毒性試験成績をま
とめる．
ラットは広範な毒性試験に用いられており，規制当局により適切な動物モデルとして一般に認
識されている．カニクイザルは霊長類とヒトの血液凝固系が極めて類似していることから選択し
た．本剤の薬理作用はカニクイザルの用量漸増／PK 試験（1933-017 試験）で認められ，初回投
与後に aPTT が短縮した．
また，本剤の毒性評価においてラット及びカニクイザルが適切な動物種であるかどうかを in
vitro aPTT 試験にて検討した（RD_VB_051203 試験，2.6.2.2.1.1 項を参照）．ラット，カニクイザ
ル及びヒトの希釈血漿試料に本剤を添加すると，aPTT が用量依存的に短縮した．これは本剤が
ラット，カニクイザル及びヒトの血液凝固系と相互作用することを示している．したがって，ラ
ット及びカニクイザルは適切な動物種であると考えられる．更に，ラットは薬物動態試験に，カ
ニクイザルは薬理及び薬物動態試験にも使用した．
毒性試験で用いた処方（溶解後に静脈内投与する凍結乾燥製剤）は，すべての非臨床薬理及び
薬物動態試験で用いた処方と同一であった．特記しない限り，単位は発色法による FVIII 活性を
示す．ウサギでの局所刺激性試験，ヒト組織の交差反応性試験及び本剤の不純物として同定され
た PEG2ru20KCOOH を用いた試験以外のすべての非臨床毒性試験で，本剤 2 ロットについて検討
した．一部の試験では対照物質として非修飾型 rFVIII（アドベイト）を用いた．特性データ
（3.2.P.5.4 項を参照）から，非臨床試験に使用した本剤は構造及び機能において臨床試験用及び
市販予定の本剤と同等であることが示されている．
反復投与毒性試験において，ラットに 350 又は 700 IU FVIII/kg の本剤を 29 日間隔日投与（合
計 15 回）した結果，700 IU FVIII/kg まで血栓形成及び投与に関連する変化のいずれも認められ
なかった．したがって，NOAEL は 700 IU FVIII/kg とした．
カニクイザルでは，用量漸増（350，700 又は 1500 IU FVIII/kg）及び反復投与（700 IU
FVIII/kg）毒性試験において本剤の投与に関連する有害作用の徴候は認められなかった．また，3
用量（150，350 及び 700 IU FVIII/kg）を 5 日毎に 26 日間投与（合計 6 回）した反復投与毒性試
験の結果，本剤の忍容性は良好であり，NOAEL は最高用量の 700 IU FVIII/kg であった．表示力
価 2000 IU FVIII/5 mL バイアルの本剤を静脈内（予定臨床投与経路），動脈内及び静脈周囲投与
した時の忍容性は良好であった．
各種 in vitro 及び in vivo モデルを用いて，本剤とアドベイトの免疫原性を比較評価した．モデ
ルにはヒト全血又は血漿を用いた 2 種類の in vitro モデル，非臨床免疫原性評価のために特別に
開発した 3 種類の新規マウスモデル（E17 FVIII ko マウス，E17 FVIII ko ヒト MHC-クラス II
（HLA DR-15）トランスジェニックマウス及び E17 FVIII ko ヒト FVIII トランスジェニックマウ
ス），並びに 1 種類のカニクイザルモデルを含む．これらの試験結果から，本剤とアドベイトは
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
7
類似した免疫原性プロファイルを有することが示された．また，凝集物含有量の異なる本剤 2 ロ
ットは，2 種類の血友病マウスモデルにおいて類似した免疫原性プロファイルを示した．
本剤に特異的に結合する抗 PEG 抗体の交差反応性を免疫組織化学的解析により評価した結果，
正常ヒト組織のパネルにおいて特異的交差反応性は示されなかった．
本剤のたん白質部分の異化後に遊離すると考えられる 20 kDa の非結合 PEG である
PEG2ru20KCOOH の有害作用の発現及び可逆性をラットでの反復投与毒性試験において評価した．
また，PEG2ru20KCOOH の遺伝毒性を，細菌を用いる復帰突然変異試験及び培養ヒトリンパ球を
用いる染色体異常試験（in vitro 試験），並びにマウス骨髄小核試験（in vivo 試験）において評価
した．
ヒト全血又は血漿を用いた in vitro 免疫原性試験，マウス免疫原性試験及び PEG2ru20KCOOH
の遺伝毒性試験を除いて，すべての試験は GLP に準拠して実施した．
毒性試験を表 2.6.6-1 にまとめる．
表 2.6.6-1 Extent of toxicity evaluation of BAX 855
Study Type and Duration
Single Dose Toxicity (Escalating Dose
Study)
Route of Administration
Species
intravenous
Cynomolgus Monkey
Repeat Dose Toxicity (1 month)
intravenous
Local Tolerance
intravenous
intraarterial
paravenous
Rat
Cynomolgus Monkey
Immunogenicity in vitro
-
Immunogenicity in vivo
intravenous
Tissue Cross Reactivityof Anti-PEG
Antibody in vitro
Repeat Dose Toxicity with
PEG2ru20KCOOH (1 month)
Genotoxicity Studies with
PEG2ru20KCOOH
Rabbit
Human Whole Blood
Human Plasma
Mouse
Cynomolgus Monkeys
-
Human tissue
intravenous
Rat
in vitro, intravenous
Bacteria, Human Lymphocytes,
Mouse
-: not applicable
2.6.6.2
単回投与毒性試験
ICH M3(R2）ガイドライン「医薬品の臨床試験及び製造販売承認申請のための非臨床安全性試
験実施についてのガイダンス」の 4. 急性毒性試験に「いずれかの試験から急性毒性に関する情
報が得られる場合には，別途に単回投与試験を実施することは推奨されない．」と記載されてい
ることから，カニクイザルを用いた用量漸増試験において本剤の単回投与毒性を評価し，別途，
単回投与（急性）毒性試験は実施しなかった．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.2.1
ペゴル（遺伝子組換え）
8
カニクイザルにおける薬物動態を含む本剤の用量漸増及び予備的 4 週間反
復静脈内投与毒性試験（1933-017 試験）
目的：
本試験の目的は，アドベイトと比較した本剤 2 ロットの薬物動態及び安全性プロファイルを明
らかにし，NOAEL を設定し，カニクイザルでの 6 回静脈内反復投与に適した用量レベルを特定
することであった．本試験の用量漸増／PK フェーズ後，反復投与フェーズには無処置動物を選
択した．薬物動態の結果は 2.6.4.3.3 項で考察し，反復投与フェーズの結果は 2.6.6.3.2 項に記載す
る．
方法：
表 2.6.6-2 に示すように，試験 1 及び 8 日目に，雌雄各 2 匹のカニクイザルに各ロットの 350，
700 及び 1,500 IU FVIII/kg を静脈内に単回緩徐ボーラス投与した．アドベイトは試験 1 日目に雌
雄各 2 匹に 350 IU FVIII/kg を静脈内投与した．
表 2.6.6-2 Dose levels and schedule of the escalating dose / PK phase of the cynomolgus
monkey study 1933-017
(Identical to 表 2.6.4-7)
Group
No.
Group description
1
BAX 855 lot 1
2
BAX 855 lot 2
3
4
BAX 855 lot 1
BAX 855 lot 2
ADVATE
a
Nominal dose
(IU FVIII/kg)
700
1500
700
1500
350
350
350
Day of study
1
8
1
8
1
8
1
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
b: Same animals as for 700 IU FVIII/kg (Day 1)
c: Same animals as for 350 IU FVIII/kg BAX 855 lot 1 (Day 1)
Number of animals
Male
Female
2
2
2b
2b
2
2
2b
2b
2
2
2c
2c
2
2
.
毒性評価は，一般状態観察，心血管検査，血液学的検査及び血液生化学的検査，体重測定，器
官重量，並びに肝臓の病理組織学的評価に基づいて行った（13 日目に剖検）．
結果及び結論：
試験期間を通じて，いずれの用量レベルにおいても毒性徴候，死亡例，あるいは本剤又はアド
ベイトに関連した体重変化はなかった．また，投与期間中に本剤又はアドベイトに関連した臨床
徴候は観察されず，本剤投与群とアドベイト投与群との間に差異は認められなかった．
血液生化学的検査及び血液学的検査では，投与に関連した有害所見は認められなかった．
GLDH（試験 2 及び 9 日目の動物番号
2 及び 9 日目の動物番号
F［第 1 群，700/1500 IU FVIII/kg］）及び AST（試験
M［第 1 群，700/1500 IU FVIII/kg］，
M［第 2 群，700/1500
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
IU FVIII/kg］，
ペゴル（遺伝子組換え）
9
F［第 2 群，700/1500 IU FVIII/kg］及び
FVIII/kg］，並びに試験 2 日目の
M 及び
F［第 2 群，700/1500 IU
F［第 3 群，350 IU FVIII/kg］及び
M
［第 1 群，700/1500 IU FVIII/kg］）の軽度上昇が第 1～3 群の個別動物に認められたが，これら
は臨床徴候又は臨床病理検査値の変動，あるいは病理組織学的変化の発生率又は重症度の増加と
相関しなかったことから，この試験期間において毒性学的意義を有する所見はなかった．
本試験で得られた GLDH 及び AST の結果をそれぞれ表 2.6.6-3 及び表 2.6.6-4 に示す．
表 2.6.6-3 GLDH in the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey study 1933017
Group
No.
1
2
3
4
Group
a
description
BAX 855
lot 1
BAX 855
lot 2
BAX 855
lot 1
BAX 855
lot 2
ADVATE
Dose
(IU
FVIII
/kg)
700
1500
700
1500
350
350
350
Animal
No.
M
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
/
Male
Day of
predose
GLDH (U/L)
Day of study
1
2
9
12.50
28.41
8.44
Day of
predose
Female
Day of study
1
2
9
20.28
25.80
49.30
53.70
13.78
18.06
10.43
17.73
20.34
10.47
21.10
19.17
18.12
33.52
37.02
10.69
20.53
21.78
19.40
26.99
26.02
13.48
17.17
25.61
7.51
12.06
14.54
12.09
18.85
23.70
13.46
19.53
20.28
6.66
15.81
13.05
6.76
13.78
13.02
8.40
14.04
16.61
8.37
19.15
13.80
7.53
14.93
14.83
7.57
16.47
13.41
13.57
15.79
18.03
7.27
11.96
9.96
17.87
16.48
17.70
11.75
11.13
12.51
15.72
16.14
17.87
9.51
11.55
11.24
2 animals/goup/sex
Individual GLDH values in bold show slighly elevated compared to the value of predose.
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
.
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
10
表 2.6.6-4 AST in the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey study 1933017
Group
No.
1
2
3
4
Group
a
description
BAX 855
lot 1
BAX 855
lot 2
BAX 855
lot 1
BAX 855
lot 2
ADVATE
Dose
(IU
FVIII
/kg)
700
1500
700
1500
350
350
350
Animal
No.
M
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
/
Male
Day of
predose
AST (U/L)
Day of study
1
2
9
29.54
113.33
34.07
Day of
predose
Female
Day of study
1
2
9
53.89
43.19
67.87
64.98
109.70
110.72
25.45
43.88
51.82
31.81
111.52
82.31
34.32
55.88
58.40
26.04
52.93
49.60
44.75
88.92
77.58
27.58
85.64
106.57
30.23
73.28
61.90
26.81
69.29
78.09
37.49
81.10
69.74
27.41
155.70
40.47
29.15
64.69
46.47
29.74
35.87
35.59
27.48
155.22
40.57
28.58
95.79
38.03
28.32
109.96
43.52
52.72
72.52
55.71
26.10
45.63
53.99
51.71
41.73
38.52
45.67
38.07
34.17
52.22
57.13
47.12
35.89
41.85
44.08
2 animals/goup/sex
Individual AST values in bold show slighly elevated compared to the value of predose.
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
.
用量漸増フェーズにおいて，aPTT の短縮，並びに TAT 及び D-ダイマーの上昇がそれぞれ個別
動物で散見され，これらは薬理学的作用に起因するものであり，被験物質の投与に関連すると考
えられた．
本試験で得られた aPTT，TAT 及び D-ダイマーの結果をそれぞれ表 2.6.6-5，表 2.6.6-6 及び表
2.6.6-7 に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
11
表 2.6.6-5 aPTT in the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey study 1933017
Group
No.
1
2
3
4
Group
a
description
BAX 855
lot 1
BAX 855
lot 2
BAX 855
lot 1
BAX 855
lot 2
ADVATE
Dose
(IU
FVIII
/kg)
700
1500
700
1500
350
350
350
Animal
No.
M
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
/
aPTT (sec)
Male
Day of
predose
Day of study
1
2
9
23.5
22.1
26.1
Day of
predose
Female
Day of study
1
2
9
20.3
25.1
25.4
24.5
25.7
23.5
30.8
26.8
27.0
24.8
23.9
21.9
28.0
26.1
25.8
22.5
19.5
19.6
24.7
23.4
20.2
25.8
22.5
23.8
22.4
20.0
20.5
24.2
21.0
21.7
23.6
21.7
20.4
24.0
22.2
21.4
25.5
26.6
27.4
25.6
24.5
21.5
24.5
23.0
25.3
24.8
23.4
21.5
25.0
24.8
26.4
26.5
29.5
25.4
23.1
24.6
23.4
21.3
23.5
25.1
22.2
21.5
23.0
23.9
26.5
25.3
22.7
23.1
23.2
2 animals/goup/sex
Individual aPTT values in bold show shortenings compared to the value of predose.
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
.
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
12
表 2.6.6-6 TAT in the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey study 1933017
Group
No.
1
2
3
4
Group
a
description
BAX 855
lot 1
BAX 855
lot 2
BAX 855
lot 1
BAX 855
lot 2
ADVATE
Dose
(IU
FVIII
/kg)
700
1500
700
1500
350
350
350
Animal
No.
M
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
/
TAT (μg/L)
Male
Day of
predose
Day of study
1
2
9
15.10
16.86
13.95
Day of
predose
Female
Day of study
1
2
9
9.41
6.45
13.52
15.60
25.03
20.74
4.41
332.45
5.91
14.52
20.95
15.08
5.43
172.98
10.75
26.74
31.94
36.52
14.78
28.85
20.55
32.48
18.63
25.00
6.19
2050.94
56.46
29.61
25.29
30.76
10.49
1039.90
38.51
7.36
16.32
15.28
6.45
14.87
13.14
71.99
6.10
180.08
4.06
36.33
78.39
39.68
11.21
97.68
5.25
25.60
45.76
5.46
40.34
30.05
2.52
8.66
23.42
13.41
8.72
19.26
7.60
9.85
8.85
9.43
24.53
24.65
5.06
9.26
16.13
2 animals/goup/sex
Individual TAT values in bold show exceeded compared to the value of predose.
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
.
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
13
表 2.6.6-7 D-dimers in the escalating dose / PK phase of the cynomolgus monkey study
1933-017
Group
No.
Group
a
description
1
2
3
4
BAX 855
lot 1
BAX 855
lot 2
BAX 855
lot 1
BAX 855
lot 2
ADVATE
Dose
(IU
FVIII
/kg)
700
1500
700
1500
350
350
350
Animal
No.
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
M
/
F
M
/
F
Mean
Day of
predose
Male
D-dimers (μg/mL)
Day of study
1
2
9
0.13
0.22
0.17
Day of
predose
Female
Day of study
1
2
9
1.39
0.15
0.21
1.23
0.41
1.59
0.41
0.31
1.21
0.15
0.32
1.49
0.28
0.26
1.22
0.20
0.30
1.43
0.18
0.25
1.36
0.40
0.53
Clot
0.20
0.91
1.40
0.30
0.42
1.43
0.19
0.58
1.38
0.15
0.35
1.40
0.25
0.45
1.56
0.22
0.22
1.35
0.22
0.22
1.25
0.19
0.29
1.38
0.24
0.34
1.41
0.33
0.32
1.39
0.16
0.16
1.23
0.18
0.31
1.41
0.19
0.14
1.18
0.26
0.32
1.40
0.18
0.15
1.21
2 animals/goup/sex
Individual D-dimers values in bold show maximum increases compared to the value of predose.
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
.
Clot: Sample clotted
心血管系検査，剖検時の肉眼的検査，器官重量及び肝臓の病理組織学的検査について，投与に
関連した所見はなかった．
以上のように，1,500 IU FVIII/kg までの用量漸増フェーズにおいて，本剤の異なる 2 ロットの
投与は忍容性が良好であり，本剤に起因する可能性のある有害な臨床症状又は所見は発現しなか
った．本試験条件下での NOAEL は最高用量の 1,500 IU FVIII/kg であった．
2.6.6.3
2.6.6.3.1
反復投与毒性試験（トキシコキネティクス評価を含む）
ラットにおける雄授胎能に及ぼす影響の評価を含む本剤の 29 日間静脈内
（ボーラス）投与及びその後の 2 週間無投与期間を設定した毒性試験
（8202366 試験）
目的：
本試験の目的は，ラットに本剤を 29 日間静脈内（ボーラス）投与した時の（隔日投与を 15 回
行い，30 日目に剖検）本剤の毒性及び NOAEL を明らかにすることであった．その後 2 週間の無
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
14
投与（回復）期間中，遅発性毒性及び／又は毒性の可逆性の評価を行った．また，本剤の TK プ
ロファイル及び雄の授胎能に及ぼす影響も評価した．
方法：
HsdHan: WIST 系の雌雄ラットを 5 群に割付けた．毒性コホートには雌雄各 10 匹/群，回復コホ
ートには雌雄各 5 匹/群，TK コホートには雌雄各 3 匹/群（対照群）又は雌雄各 9 匹/群（被験
群）を割付けた．また，雌雄各 5 匹/群を抗体解析コホートに割付けた．投与容量 5 mL/kg で対照
群には対照物質（溶媒）を投与し，被験群には 350 又は 700 IU FVIII/kg の本剤（2 ロット）を投
与した．
本試験のデザインを表 2.6.6-8 に示す．
表 2.6.6-8 Study design of the rat repeated dose toxicity study 8202366
Group
No.
1
2
3
4
5
BAX 855
dose (IU
FVIII/kg),
a
lot
0
350, lot 1
700, lot 1
350, lot 2
700, lot 2
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
Toxicity cohort
Number of animals in group
Recovery cohort
Toxicokinetics
Antibody
Male
Female
Male
Female
Male
Female
Male
Female
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
0
5
5
5
5
0
5
5
5
5
3
9
9
9
9
3
9
9
9
9
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
and lot 2 refers to BAX 855 lot
.
毒性評価は，死亡，一般状態観察，眼科学的検査，臨床病理学的検査（血液学的検査，血液凝
固検査，血液生化学的検査及び尿検査），器官重量，並びに病理学的検査（肉眼的及び顕微鏡
的）に基づいて行った．雄授胎能に対する影響の評価は，生殖管（器官重量，精巣及び精巣上体，
前立腺，精嚢の病理組織学的検査）の評価，並びに精子形成ステージ分類，精子数，精子形態及
び精子運動能を含む精液検査パラメータに基づいて行った．全身的 TK プロファイルを求めるた
め，TK コホートにおいて 1 及び 29 日目に一連の血液試料を採取した．
結果及び結論：
投与前後の処方試料で検出された FVIII 活性から，製剤分析結果が良く一致しており，本剤ロ
ット 1 又は 2 の許容可能な安定性が示された．本剤を投与した動物から採取した試料の FVIII 活
性に関する製剤分析から，静脈内投与後の動物の適切な曝露が確認された．
FVIII 活性レベルは 1 日目の静脈内投与直後に上昇した．この上昇は用量に比例しており，適
正に投与されたことを示すものであった．29 日目には，1 日目と比較して明らかな FVIII 活性は
検出されなかった．
1 及び 29 日目に雌雄ラットで測定した FVIII 活性を表 2.6.6-9 に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
15
表 2.6.6-9 FVIII activity of the rat repeated dose toxicity study 8202366
Dose per
day IU
FVIII/kg
Sex
Predose
(day 1)
Predose
(day 29)
5 min
(day 1)
5 min
(day 29)
30 min
(day 1)
30 min
(day 29)
FVIII activity (IU FVIII/mL)
0 (Vehicle)
350 (lot 1 )
a
350 (lot 2 )
a
700 (lot 1 )
a
700 (lot 2 )
M
F
M
F
M
F
M
F
M
F
0.40
0.11
1.14
0.82
2.27
1.69
1.64
0.63
2.10
1.57
0.13
0.79
1.17
0.39
0.00
0.00
0.67
0.07
0.13
0.00
1.76
1.48
5.44
5.58
5.68
4.85
13.24
12.29
13.12
8.73
0.06
0.22
0.08
0.00
0.47
0.17
0.12
0.04
0.17
0.09
1.70
0.76
4.89
4.54
7.73
4.81
11.78
9.32
11.38
8.98
0.54
0.36
0.40
0.29
0.26
0.59
0.48
0.10
0.00
0.00
Median of 1 to 3 animals/sex/time point
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
a
.
試験中に 1 匹が死亡した．第 2 群の 350 IU FVIII/kg 投与の雌 1 匹（No.
，回復コホート）が
試験 27 日目の投与直後に死亡した．剖検では，投与に関連した原因を示す所見は認められなか
った．したがって，この死亡に本剤との関連性はないと考えられた．
本剤に関連した臨床徴候はなかった．
体重，摂餌量，眼科学的検査，血液細胞パラメータ，血液生化学的検査，尿検査，精液検査及
び器官重量に本剤に関連した変化は認められなかった．毒性コホート動物から採取した血液試料
において，血液学的検査値である赤血球数（RBC），ヘモグロビン濃度分布幅（HDW），平均
血小板容積（MPV）及び血小板分布幅（PDW），並びに血液生化学的検査値であるアスパラギ
ン酸アミノ基転移酵素（AST），アラニンアミノ基転移酵素（ALT），アルカリホスファターゼ
（ALP），ナトリウム，カルシウム，無機リン（IN PHOS），アルブミン／グロブリン比（A/G
ratio），総コレステロール（TOT CHOL）及びクレアチニン（HCRE）にわずかな変動が認めら
れ，統計学的に有意であった（表 2.6.7-9）．しかし，これらは背景データの正常範囲内にあり，
用量反応関係は必ずしも明らかではなかったことから，本剤との関連性はないと考えられた．回
復コホート動物から得られたデータは遅発性毒性を示さなかった（表 2.6.7-10）．350 IU FVIII/kg
（-18%；ロット 1）又は 700 IU FVIII/kg（-22%；ロット 2）を投与した雄でのプロトロンビン時
間（INPT）のわずかな短縮（いずれも P<0.05，Dunnett 検定）を除いて，投与に関連した影響は
なかった（表 2.6.7-9）．これらのわずかな短縮は偶発的であり，毒性学的意義はないと考えられ
た．
観察期間終了時の屠殺では，本剤の作用に起因する肉眼的所見はなかった．すべての動物につ
いて，全対象組織の病理組織学的評価を行った．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
16
顕微鏡的には，700 IU FVIII/kg（ロット 1 及び 2）を投与した動物の肺で泡沫化マクロファー
ジの発生率／重症度が軽微に増加していた．350 IU FVIII/kg を投与した動物の肺では，対照動物
と類似していた．様々な背景と対比して，本剤のいずれのロットの 700 IU FVIII/kg を投与した動
物においても，回復が明らかであったと結論付けられる．700 IU FVIII/kg（ロット 1 及び 2）を
投与した動物におけるマクロファージの泡沫化レベルでの軽微な上昇は，この所見に関連する組
織傷害の徴候を伴わず，生存期間中の観察で機能障害がなかったことから，有害なものとは考え
られなかった．
肺での泡沫化マクロファージの発生率及び重症度を表 2.6.6-10 に示す．
表 2.6.6-10 Incidence and grade of foamy macrophages in the lung the rat repeated dose
toxicity study 8202366
Tissue and
findings
Lung
foamy
macrophage
No. examined and
grade
classification
No. examined
Minimal
Grade
Slight
No. examined
Minimal
Grade
Slight
Group and dose (IU FVIII/kg)
0
350
350
700
a
a
a
(Vehicle)
(lot 1 )
(lot 2 )
(lot 1 )
M
F
M
F
M
F
M
F
End of the toxicity cohort
10
10
10
10
10
10
10
10
2
0
1
1
2
2
5
4
0
0
0
0
0
0
0
1
End of the recovery cohort
0
0
5
4b
5
5
5
5
0
0
2
0
1
2
2
2
0
0
0
0
0
1
0
0
700
a
(lot 2 )
M
F
10
6
1
10
3
0
5
1
0
5
0
0
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
.
b: On Day 27, female No.
(350 IU FVIII/kg) died immediately after dosing. The death of this animal was considered
not to be BAX 855-related.
泡沫化マクロファージが肺に増加した原因及び泡沫化マクロファージと本剤との関連性につい
て，以下に考察する．
泡沫化マクロファージは本剤に曝露されていない対照群を含むすべての投与群で観察され，こ
れら肺のマクロファージには泡沫化細胞質が存在した．これらのマクロファージの出現理由は現
時点では不明であるが，以下の理由から PEG 又は本剤の曝露との因果関係は除外される．
(1) 肺の泡沫化マクロファージは対照群にも出現しており，これは泡沫化マクロファージの一部
分が少なくとも環境因子又は動物モデルの飼育状況に関連していることを示している．
(2) 本剤に関連した非結合型 20 kDa モデル PEG を投与したラットの肺には泡沫化マクロファージ
は見られなかった（8298494 試験）．泡沫化又は空胞化マクロファージは動物において高累積
用量の PEG によるマクロファージの過大な負荷後に形成される可能性がある．8202366 試験
における 700 IU FVIII/kg（隔日，15 回投与）の用量レベルでの PEG 曝露量は，0.067 mg
PEG/kg 又は全試験期間にわたる累積 PEG 用量を考慮して 1 mg PEG/kg であった．8298494 試
験においては，PEG 用量は最高用量レベルで 65 mg PEG/kg 又は 4 週間の投与期間（週 2 回，
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
17
8 回投与）を考慮して 520 mg PEG/kg であった．それ故，8202366 試験でのラットについての
累積用量は，泡沫化マクロファージが出現しなかった 8298494 試験と比較して 520 分の 1 倍の
低用量であった．700 IU FVIII/kg までの本剤を投与したカニクイザルにおいては，肺の泡沫化
マクロファージは観察されなかった（1933-018 試験）．更に，rFVIII（リコネイト）について
も，非臨床開発プログラムの間に実施したラット（
出資料ニ-4）及びカニクイザイル（
73-33 試験：リコネイト承認申請時提
73-37 試験：アドベイト承認申請時提出資料 4.2.3.2-1
参）での反復投与試験において，試験した最高用量まで泡沫化マクロファージは見られなか
った．
また，マクロファージ泡沫化は，ヒトにおいては有害な影響を及ぼさないと考える理由につい
て以下に説明する．
肺の泡沫化マクロファージは，光学顕微鏡下で顆粒状又は空胞化細胞質を持った貪食免疫細胞
である．これら肺の泡沫化マクロファージは特徴的に異物の吸入後に適応して出現するが，局所
の炎症を示さない無害反応である[23]．8202366 試験の報告書（40 頁）によると，泡沫化マクロ
ファージは「... showed uniform morphology and there was no syncytial formation or inflammatory cell
infiltration」（均一の形態を示し，融合細胞形成又は炎症細胞浸潤はなかった．）とされ，関連
した炎症はなかった．Nikula ら[24]は最近，薬物吸入後のげっ歯類における肺のマクロファージ
所見の意義の解釈に関するポジションペーパーを公表した．Forbes ら[23]と同様に，肺のマクロ
ファージ所見の有害及び無害の解釈を区別するために役立つ因子を記載している．8202366 試験
におけるように，特定の徴候の欠如は有害と無害変化との決定因子となる．Nikula ら[24]はまた，
組織球炎症又は肉芽腫を含むある種の偶発的な肺のマクロファージ変化は，飼料又は床敷材の吸
引による二次的なものかも知れないと述べている．
以上を総合すると，薬剤を投与した実験動物における肺のマクロファージは，他の病理組織学
的変化と共に観察され有害と結論される場合，及び薬剤の投与との因果関係が見られる場合にの
み，ヒト健康上の安全性評価に関連する．本剤の場合は，他の病理組織学的変化は観察されず，
因果関係も見られなかったことから，ヒトにおける有害作用は想定されない．
更に，PEG 化製剤は，脳や脊髄のような神経組織を含む特定の組織において空胞形成を引き起
こすことに関与している[17][9]（Baxter Expert Report RA13RS22R2）ため，ラットにおいて脳及
び脊髄に PEG に起因する空胞形成が認められるかどうかを詳細に評価した．本剤を投与した動
物の脳又は脊髄には病理組織学的変化を示す所見はなく，これらの器官に空胞形成がないことが
確認された．
雄生殖器に病理組織学的所見はなかった．定性的精巣ステージ分類において，精子形成周期の
各ステージに存在する各種細胞型の完全性に異常は示されなかった．雄生殖器の重量に特記すべ
き所見はなかった．本剤のロット 1 及び 2 のいずれを投与した時も，精液検査パラメータの平均
値に本剤に関連する影響は示されなかった．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
18
TK については，初回投与と比較して反復投与後の Cmax 及び AUC0-tlast の低下は，29 日目／1 日
目の比（雌雄合算）の両側 95% CI が 1 を含まなかったことから，有意水準 5%で統計学的に有意
であった．
試験 1 及び 29 日目に雌雄ラットで測定した TK データを表 2.6.6-11 に示す．
表 2.6.6-11 TK data of the rat repeated dose toxicity study 8202366
Dose per day
IU FVIII/kg
Sex
AUC0-tlast (h·ng
rFVIII-bound
PEG/mL) at
day 1
AUC0-tlast (h·ng
rFVIII-bound
PEG/mL) at
day 29
Ratio of AUCs
(day 29/day 1)
Cmax (ng rFVIIIbound
PEG/mL) at
day 1
Cmax (ng rFVIIIbound
PEG/mL) at
day 29
Ratio of Cmax
(day 29/day 1)
Toxicokinetics based on PEG-rFVIII antigen
0 (Vehicle)
350 (lot 1 )
a
350 (lot 2 )
a
700 (lot 1 )
a
700 (lot 2 )
M
F
M
F
M
F
M
F
M
F
-
-
751
496
1309
869
1730
1251
2911
1932
-
-
15
7
32
6
118
127
183
6
-
-
0.019
0.014
0.024
0.007
0.068
0.102
0.063
0.003
-
-
166
154
180
179
315
361
431
370
-
-
29
9
26
23
78
90
31
10
-
-
0.177
0.059
0.146
0.127
0.246
0.249
0.072
0.027
Mean of 2 or 3 animals/sex
-: not available
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
a
.
反復投与後の Cmax 及び AUC0-tlast の低下は，ヒト FVIII，PEG-rFVIII 及び PEG に特異的な結合
抗体の検出と相関していた．抗体は FVIII 活性及び PEG-rFVIII 活性を中和することが示された．
本剤に対する抗体形成は，ラットへの異種たん白質の反復投与後に予想される免疫反応であり，
これは非 PEG 化 FVIII 製剤においてもよく知られている[4]．
抗ヒト FVIII 抗体，抗 PEG-rFVIII 抗体及び抗 PEG 抗体の力価を表 2.6.6-12 に，また，抗 FVIII
中和抗体及び抗 PEG-rFVIII 中和抗体のベセスダ単位を表 2.6.6-13 に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
19
表 2.6.6-12 Range of titers for anti-human FVIII, anti-PEG-rFVIII and anti-PEG antibodies of
the rat repeated dose toxicity study 8202366
Dose per day
IU FVIII/kg
Sex
Day-1
Day 27
0 (Vehicle)
M
0.03.0b
0.00.5
Week 7
n.a.
Evaluation
N
Day-1
Day 27
0.00.0
0.00.0
Week 7
n.a.
Evaluation
N
Day-1
Day 27
0.00.0
0.00.0
Week 7
n.a.
Evaluation
N
a
350 (lot 1 )
a
350 (lot 2 )
a
700 (lot 1 )
F
M
F
M
F
M
Range of titers for anti-human FVIII antibodies (log 2)
0.00.00.00.00.00.00.0b
0.0b
0.0b
0.0
0.0
0.0
0.010.510.08.59.58.50.0
12.0
13.5
12.0
13.5
12.5
10.010.09.010.09.0n.a.
11.5
13.5
12.5
14.0
12.0
N
P
P
P
P
P
Range of titers for anti-PEG-rFVIII antibodies (log 2)
0.00.00.00.00.00.00.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.08.08.06.07.56.50.0
10.5
12.0
10.0
10.5
10.5
8.56.56.07.57.0n.a.
10.0
11.0
9.5
10.5
10.0
N
P
P
P
P
P
Range of titers for anti-PEG antibodies (log 2)
0.00.00.00.00.00.00.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.06.07.06.05.55.50.0
8.0
8.0
9.0
8.5
8.0
5.06.05.03.03.5n.a.
6.5
7.0
8.0
7.0
7.0
N
P
P
P
P
P
Range of 5 animals/sex/time point
n.a.: not available as the animals were necropsied in Week 4.
N: Negative in all animals
P: Positive in all animals
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
b: Values based on single measurement
c: 0.0 for 2 animals and no sample for 3 animals
.
a
700 (lot 2 )
F
M
F
0.00.0
9.513.0
9.013.0
P
0.0c
0.00.5
9.013.0
9.513.0
P
0.00.0
7.511.0
7.510.5
P
0.00.0
5.08.0
2.56.0
P
8.011.5
9.012.0
P
0.0c
6.08.5
6.08.0
P
0.0c
6.07.5
5.07.0
P
0.00.0
6.510.5
7.010.0
P
0.00.0
5.58.0
3.06.0
P
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
20
表 2.6.6-13 Range of Bethesda titers for neutralizing anti-FVIII and anti-PEG-rFVIII
antibodies of the rat repeated dose toxicity study 8202366
Dose per
day IU
FVIII/kg
Sex
0 (Vehicle)
M
F
Day-1
n.a.
n.a.
Day 27
n.a.
n.a.
Week 7
n.a.
n.a.
Day-1
n.a.
n.a.
Day 27
n.a.
n.a.
Week 7
n.a.
n.a.
a
350 (lot 1 )
a
350 (lot 2 )
a
700 (lot 1 )
M
F
M
F
M
F
Range of titers for anti-FVIII antibodies (BU/mL)
<2.0<2.0<2.0<2.0<2.0<2.03.3
<2.0
2.5
3.3
<2.0
<2.0
179.7336.735.791.1180.9112.1646.0
3511.1
567.5
971.1
1813.6
1495.6
92.769.725.841.164.796.7290.4
938.6
594.4
757.1
553.7
984.8
Range of titers for anti-PEG-rFVIII antibodies (BU/mL)
<2.0<2.0<2.0<2.0<2.0<2.0<2.0
<2.0
<2.0
4.7
<2.0
<2.0
111.792.013.593.034.163.3209.8
1017.3
651.0
957.9
402.3
822.2
77.684.748.096.9104.175.3254.2
1795.1
636.6
1010.4
691.5b
798.2
Range of 5 animals/sex/time point
n.a.: not available
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to BAX 855 lot
b: Range of 3 animals. No sample left for 2 animals
c: Range of 2 animals. No sample left for 3 animals
a
700 (lot 2 )
M
F
<2.0<2.0c
30.0141.2
17.794.4
<2.0<2.0
165.0474.4
92.8321.9
<2.0<2.0c
22.0113.0
59.0274.4
<2.0<2.0
88.7558.7
121.1688.0
.
ロット 2 投与による全身曝露量は，初回投与後の用量補正 AUC0-tlast の比（高用量／低用量）が
雄で 0.892（90% CI：0.806～0.992），雌で 0.891（90% CI：0.801～0.997）であり，両側 90% CI
が生物学的同等性の基準範囲である 0.8～1.25[18]内にあったことから，検討した用量範囲にわた
り用量に比例しているとみなされた．ロット 1 投与による全身曝露量は，初回投与後の用量補正
AUC0-tlast の比（高用量／低用量）が雄で 1.111（90% CI：0.976～1.261），雌で 1.218（90% CI：
1.118～1.321）であり，両側 90% CI が上記生物学的同等性の基準範囲（0.8～1.25）に完全には収
まらなかったが，用量に比例する傾向にあった．
以上のように，ラットに 350 又は 700 IU FVIII/kg の用量で本剤 2 ロットを 29 日間静脈内投与
した結果，忍容性は良好であった．本試験では，いずれのロットの NOAEL も 700 IU FVIII/kg と
された．本剤 2 ロットの毒性プロファイルは類似していることが示された．
NOAEL において，1 日目の単回投与後の雌雄を合わせた Cmax 及び AUC0-tlast は，ロット 1 でそ
れぞれ 338 ng rFVIII 結合 PEG/mL 及び 1505 h·ng rFVIII 結合 PEG/mL，ロット 2 でそれぞれ 407
ng rFVII 結合 PEG/mL 及び 2423 h·ng rFVIII 結合 PEG/mL であった．29 日目の反復投与後の雌雄
を合わせた Cmax 及び AUC0-tlast は，ロット 1 でそれぞれ 55 ng rFVIII 結合 PEG/mL 及び 114 h·ng
rFVIII 結合 PEG/mL，ロット 2 でそれぞれ 23 ng rFVIII 結合 PEG/mL 及び 95 h·ng rFVIII 結合
PEG/mL であった．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
21
用量補正 AUC0-tlast の比較に基づくと，本剤 2 ロットの TK プロファイルは類似しており，各ロ
ットの抗体反応は同様であった．
2.6.6.3.2
カニクイザルにおける薬物動態を含む本剤の用量漸増及び予備的 4 週間反
復静脈内投与毒性試験（1933-017 試験）
目的：
本試験の目的は，カニクイザルに本剤 2 ロットを静脈内投与した時のアドベイトと比較した薬
物動態及び安全性プロファイル，NOAEL，並びに反復投与に適した用量レベルを明らかにする
ことであった．用量漸増／PK フェーズ試験の後，反復投与フェーズには無処置動物を選択した．
薬物動態の結果は 2.6.4.3.3 項に，用量漸増フェーズの結果は 2.6.6.2.1 項に記載する．
方法：
雌雄各 2 匹のカニクイザルに本剤を 700 IU FVIII/kg の用量で 5 日毎に計 26 日間（6 回）静脈内
にボーラス投与した．また，雌雄各 1 匹の無処置動物に処方緩衝液を 5 日毎に計 26 日間（6 回）
投与した．
本試験の反復投与フェーズにおける用量レベル及び投与スケジュールを表 2.6.6-14 に示す．
表 2.6.6-14 Dose levels and schedule of the repeated dose phase of the cynomolgus
monkey study 1933-017
Group No.
5
6
a
Group description
BAX 855 lot 1
Formulation buffer
Dose
(IU FVIII/kg)
700
-
b
Day of study
11, 16, 21, 26, 31, 36
11, 16, 21, 26, 31, 36
Number of animals
Males
Females
2
2
1
1
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
.
b: Corresponding to days 1, 6, 11, 16, 21, and 26 of the repeated dose phase, respectively
-: not applicable
毒性評価及び抗体反応の比較は，それぞれ一般状態観察，血液学的検査，血液生化学的検査，
体重測定，器官重量（38 日目に剖検実施）及び抗体形成検査に基づいて行った．
結果及び結論：
試験期間を通じて，反復投与フェーズ中の毒性徴候，死亡例，あるいは本剤又は処方緩衝液に
関連した体重変動はなかった．また，投与期間中に本剤又は処方緩衝液に関連した臨床徴候は認
められなかった．
血液生化学的検査及び血液学的検査に投与に関連した有害所見は認められなかった．
反復投与フェーズの本剤初回投与後に aPTT の短縮，また，反復投与により TAT の一過性の増
加がそれぞれ個別動物で発現し，これらは薬理学的作用に起因した，本剤の投与に関連するもの
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
22
と考えられた．反復投与フェーズ中に aPTT が延長し，これは抗 FVIII 中和抗体の形成に関連す
る可能性があった．
本試験で得られた aPTT 及び TAT の結果をそれぞれ表 2.6.6-15 及び表 2.6.6-16 に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
23
表 2.6.6-15 aPTT in the repeated dose phase of the cynomolgus monkey study 1933-017
Group
No.
5
6
Group
a
description
BAX 855
lot 1
Formulation
buffer
Dose
(IU
FVIII
/kg)
700
0
Animal
No.
M
M
Mean of
males
F
F
Mean of
females
M
F
aPTT (sec)
Day of
predose
Day of study
1
23
11
15
16
20
21
25
26
30
31
35
36
37
26.1
23.9
29.2
28.7
19.6
21.2
28.7
27.2
Clot
20.0
30.6
26.8
21.8
22.3
34.7
32.0
42.0
34.0
38.8
51.7
39.8
58.6
36.7
62.1
39.9
56.2
37.0
64.3
25.0
29.0
20.4
28.0
20.0
28.7
22.1
33.4
38.0
45.3
49.2
49.4
48.1
50.7
24.1
27.1
28.0
28.5
19.4
23.3
28.0
38.4
18.0
23.5
27.2
34.2
22.5
25.7
40.3
34.5
33.3
28.1
64.8
29.1
47.5
25.7
64.4
32.0
50.5
39.7
69.3
36.1
25.6
28.3
21.4
33.2
20.8
30.7
24.1
37.4
30.7
47.0
36.6
48.2
45.1
52.7
24.2
28.2
26.4
35.8
27.6
34.0
39.4
36.2
36.3
33.2
39.3
34.6
32.8
34.0
37.8
31.9
32.4
32.9
29.2
26.4
32.6
27.2
27.1
25.3
28.0
27.8
27.1
25.4
2 animals/sex for Goup 5, 1 animal/sex for Group 6
Individual aPTT values in bold show shortenings after first dosing of BAX 855 compared to the value of predose.
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
.
Clot: Sample clotted
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
24
表 2.6.6-16 TAT in the repeated dose phase of the cynomolgus monkey study 1933-017
Group
No.
5
6
Group
a
description
BAX 855
lot 1
Formulation
buffer
Dose
(IU
FVIII
/kg)
700
0
Animal
No.
1
M
M
Mean of
males
F
F
Mean of
females
M
F
TAT (μg/L)
Day
of
predo
se
Day of study
b
11
c
b
0.5
12.58
13.82
-24
6.72
17.45
16
c
b
0.5
Clot
91.11
-24
9.36
20.09
21
c
b
-24
14.40
18.14
c
b
0.5
333.70
10.53
-24
50.61
1.72
31
c
b
0.5
19.02
5.75
-24
69.41
5.55
36
c
7.92
6.29
7.10
9.70
13.20
12.09
91.11
14.72
74.94
16.27
172.12
26.17
12.38
37.48
11.46
4.36
6.39
11.47
3.95
31.61
17.81
19.02
185.63
26.90
18.82
5.92
5.59
44.64
10.23
2.46
9.56
11.86
28.16
3.20
71.75
23.93
89.05
18.66
8.12
41.37
9.91
5.38
7.71
24.71
102.32
22.86
5.76
27.44
6.01
20.01
37.48
56.49
13.39
25.64
3.71
13.92
20.65
14.63
18.08
19.03
55.26
66.15
23.49
67.32
13.71
12.54
10.77
18.05
16.42
16.61
10.50
125.94
19.15
12.84
13.39
10.30
55.71
53.34
17.65
24.23
2 animals/sex for Goup 5, 1 animal/sex for Group 6
Individual TAT values in bold show transient increases after dosing of BAX 855 compared to the value of predose.
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
.
b: 24 h prior dosing
c: 0.5 h after dosing
Clot: Sample clotted
0.5
33.75
116.13
26
-24
4.72
14.68
0.5
12.81
10.11
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
25
剖検時の肉眼的検査，器官重量及び肝臓の病理組織学的検査について，投与に関連した所見は
なかった．
反復投与フェーズの本剤を投与したすべての動物は，ヒト FVIII 及び PEG-rFVIII に特異的な結
合抗体を発現した．また，4 匹中 3 匹に抗 PEG 結合抗体が発現した．対照の処方緩衝液を投与し
た動物は，ヒト FVIII，PEG-rFVIII 及び PEG に特異的な結合抗体を発現しなかった．本剤を投与
した 4 匹中 2 匹ではヒト FVIII 活性に対する中和抗体が発現し，4 匹中 3 匹では PEG-rFVIII 活性
に対する中和抗体が発現した．ヒト FVIII 活性及び PEG-rFVIII 活性に対する中和抗体が発現しな
かった，それぞれ 4 匹中 2 匹及び 4 匹中 1 匹の動物における抗体力価は定量限界未満であった．
本剤に対する抗体形成は，カニクイザルへの異種たん白質の反復投与後に予測される免疫反応で
あり，これは非 PEG 化 FVIII 製剤においてもよく知られている[4]．
以上のように，反復投与フェーズにおける 700 IU/kg の用量での本剤の投与は忍容性が良好で
あり，本剤に起因する可能性のある有害な臨床徴候又は所見は発現しなかった．本試験の反復投
与フェーズについて，本試験条件下での NOAEL は 700 IU FVIII/kg であった．
2.6.6.3.3
カニクイザルにおける本剤の 4 週間静脈内投与及び 2 週間の回復期を設定
した毒性試験（1933-018 試験）
目的：
本試験の目的は，カニクイザルに本剤を 4 週間静脈内投与した時の毒性を明らかにし，2 週間
の回復期間中での毒性の可逆性を評価することであった．
方法：
雌雄各 5 匹のカニクイザルに本剤 2 ロット（ロット 1 及び 2）を 150，350 及び 700 IU FVIII/kg
の用量で 5 日毎に 26 日間（計 6 回）投与した．4 週後の主要試験終了以降は，各群の雌雄各 2 匹
を 2 週にわたる無投与期間中に更に観察した．処方緩衝液を対照物質とした．
本試験の反復投与フェーズの用量レベル及び投与スケジュールを表 2.6.6-17 に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
26
表 2.6.6-17 Dose levels and schedule of the repeated dose phase of the cynomolgus
monkey study 1933-018
Group
No.
1
Group
a
description
Formulation
Dose (IU
FVIII/kg)
0
buffer
BAX 855 lot 1
low dose
BAX 855 lot 2
low dose
BAX 855 lot 2
medium dose
BAX 855 lot 1
medium dose
BAX 855 lot 1
high dose
BAX 855 lot 2
high dose
2
3
4
150
150
350
350
700
700
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
b: Corresponding to day 32/33 of study
c: Corresponding to day 46 of study
Day of
study
1, 6, 11, 16,
21, 26
1, 6, 11, 16,
21, 26
1, 6, 11, 16,
21, 26
1, 6, 11, 16,
21, 26
1, 6, 11, 16,
21, 26
1, 6, 11, 16,
21, 26
1, 6, 11, 16,
21, 26
Number of animals
Males
Females
Ncropsy after
b
c
4 weeks
6 weeks
5
5
3M/3F
2M/2F
2
3
1M/2F
1M/1F
3
2
2M/1F
1M/1F
2
3
1M/2F
1M/1F
3
2
2M/1F
1M/1F
2
3
1M/2F
1M/1F
3
2
2M/1F
1M/1F
and lot 2 refers to BAX 855 lot
.
毒性評価は，体重測定，一般状態観察，眼科学的検査，血液学的検査，血液凝固検査，血液生
化学的検査，尿検査，剖検時の肉眼的所見及び病理組織学的所見に基づいて行った．また，TK
評価及び抗体評価も実施した．
結果及び結論：
試験期間を通じて，いずれの用量においても毒性徴候及び死亡例はなかった．投与期間又は回
復期間を通じて，体重推移，臨床徴候，眼科学的検査，血液生化学的検査，血液凝固パラメータ
及び尿検査に毒性学的に意義のある所見はなかった．一部の軽微な所見のパターン及び頻度に用
量相関性はなく，本剤の投与と直接的に関連するとは考えられなかった（表 2.6.7-13 の TAT，
LYM，NEUT，ALYM 及び GLDH）．
投与 26 日目に動物番号
M，
M 及び
F（第 4 群，700 IU FVIII/kg），並びに
M（第 2 群，150 IU FVIII/kg）に認められた赤血球パラメータ（RBC，HGB，HCT）の軽微
な低下所見は，吐血（
F，
M，
M）又は血腫（
M，
M，
F）を伴
う RETI の増加と共に，血液凝固系の変化と考えられ，内因性 FVIII に対して交差反応性を有す
る抗 FVIII 中和抗体の発現に起因する可能性が高い．
動物番号
M，
M，
F 及び
M における RBC，HGB，HCT，RETI 及び抗
FVIII 中和抗体のベセスダ単位を表 2.6.6-18 に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
27
表 2.6.6-18 RBC, HGB, HCT, RETI and neutralizing anti-FVIII antibody Bethesda titers of
the animals
M,
M,
F and
M in the repeated dose phase of the
cynomolgus monkey study 1933-018
Animal No. (Dose: IU FVIII/kg)
Time point
M (150)
M (700)
M (700)
F (700)
12
Predose
Day 26 of study
Day 12 of recoverya
Predose
Day 26 of study
Day 12 of recoverya
Predose
Day 26 of study
Day 12 of recoverya
Predose
Day 26 of study
Day 12 of recoverya
Predose
Day 31 of study
Day 12 of recoverya
RBC (10 /L)
6.95
7.18
2.25
3.52
n.a.
5.00
HGB (mmol/L)
8.2
8.4
8.6
3.5
3.0
4.5
n.a.
n.a.
6.5
HCT (%)
45.5
43.8
50.1
21.9
17.7
29.0
n.a.
n.a.
41.1
RETI (‰)
6.0
7.8
12.1
173.9
175.2
219.9
n.a.
n.a.
35.2
Neutralizing anti-FVIII antibody Bethesda titers (BU/mL)
<2
<2
<2
124.5
29.0
144.9
n.a.
n.a.
34.6
7.65
3.20
n.a.
6.43
2.73
4.94
8.0
3.4
6.4
43.6
19.3
36.4
5.1
27.2
15.3
<2
6.9
3.1
n.a.: not applicable
a: Coresponding to day 42 of study
試験 26 日目（6 回投与後）に，本剤投与群すべての動物において aPTT の延長も検出されたが，
これはカニクイザルの FVIII 活性を部分的に低下させる，内因性 FVIII に対する交差反応性の抗
FVIII 中和抗体が発現したことを示している．回復期の 12 日目までに aPTT の部分的回復が認め
られた．
本試験で得られた aPTT 及び抗 FVIII 中和抗体のベセスダ単位を表 2.6.6-19 に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
28
表 2.6.6-19 aPTT and neutralizing anti-FVIII antibody Bethesda titers in the repeated dose
phase of the cynomolgus monkey study 1933-018
Time point
Predose
Day 26 of study
Day 12 of
recoverya
Predose
Day 31 of study
Day 12 of
recoverya
0 (Formulation
buffer)
M
F
20.8
23.6
21.6
22.7
23.1
23.3
Dose (IU FVIII/kg)
150
350
M
F
M
Mean of aPTT (sec)
20.7
21.0
22.0
39.8**
33.4
44.3**
28.6
23.9
32.0
700
F
M
F
21.1
37.8**
21.2
44.8***
21.1
41.2**
26.4
36.3
29.2
Range of neutralizing anti-FVIII antibody Bethesda titers (BU/mL)
n.a.
n.a.
<2-<2
<2-<2
<2-<2
<2-<2
<2-<2
n.a.
n.a.
3.6-124.5 <2-30.6 3.3-14.8 7.8-61.8 6.6-144.9
n.a.
n.a.
<2, 60.3b
<2, 2.5b
3.1, 7.9b
<2, 54.7b
<2, 34.6b
<2-<2
<2-57.5
2.5, 3.1b
5 animals/sex for predose and day 26 of study, 2 animals/sex for day 12 of recovery
**p<0.01, ***p<0.001 compared to the formulation buffer group (Dunnett's test)
n.a.: not applicable
a: Coresponding to day 42 of study
b: Bethesda titers of 2 animals
剖検時に測定した器官重量から，本剤の影響は示されず，投与期間及び回復期間終了後に本剤
の投与に起因する標的器官毒性の肉眼的又は病理組織学的所見はなかった．カニクイザルの脳及
び脊髄の詳細な病理組織学的検査を実施し，本剤と関連する神経組織での空胞形成の可能性を検
討した．これらの組織の顕微鏡的検査から，これらの器官に空胞形成がないことが確認された．
本剤を投与したすべての動物は，投与に関連したヒト FVIII，PEG-rFVIII 及び PEG に特異的な
結合抗体を発現した．対照の処方緩衝液を投与した動物は，ヒト FVIII，PEG-rFVIII 及び PEG に
特異的な抗体を発現しなかった．中和抗体はタイプ II 抗体の特性を示し，試料の希釈倍率とベセ
スダ単位との関係は非線形的であったことから，正確なベセスダ単位は算出できなかった．任意
に算出したインヒビター力価に基づくと，31 日目に本剤投与群の 30 匹中 28 匹でヒト FVIII に対
する結合及び中和抗体が発現した．結合抗体を発現した動物はすべて本剤に対する中和抗体も発
現した．投与前の試料に中和抗体は検出されなかった．
結合及び中和抗体の形成は，本剤を 6 回投与した動物の大半において曝露量が統計学的に有意
に減少（AUC0-tlast 及び Cmax 共に p<0.0001，ANOVA，両側，有意水準 5%）したことにも反映さ
れた．
FVIII 活性について，本剤の初回投与後の TK 評価から，各動物の Cmax 値（IU FVIII/mL）は，
表示用量 150，350 及び 700 IU FVIII/kg でそれぞれ 2.7～4.1，7.2～8.2 及び 12.0～17.2 の範囲であ
ることが示された．Hummel ら[8]の統計学的基準に基づく探索的評価の結果，雄にロット 2 を投
与した場合の全身曝露量は，用量が 2 倍になった時，AUC0-tlast の増加の 90% CI（1.50～2.15）が
統計学的基準（1.49～2.69）を満たしたことから，検討した用量範囲において用量に比例すると
見なすことができる．一方，雌にロット 1（90% CI：1.08～1.75）及びロット 2（90% CI：1.95～
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
29
3.03）を投与した場合，並びに雄にロット 1（90% CI：1.60～2.88）を投与した場合の結果は，用
量比例性の基準（それぞれ，ロット 1：1.47～2.73 及びロット 2：1.49～2.69）を満たさなかった．
試験 26 日目においては，本剤を投与した 30 匹中 29 匹の動物（96.7%）では，すべての評価時点
においてベースライン値で補正した FVIII 活性濃度が定量できなかった．
PEG-rFVIII 抗原について，本剤の初回投与後の TK 評価から，各動物の Cmax 値（ng rFVIII 結合
PEG/mL）は，表示用量 150，350 及び 700 IU FVIII/kg でそれぞれ 61～120，155～215 及び 331～
436 の範囲であった．前記，Hummel ら[8]の統計学的基準に基づく探索的評価の結果，雌雄にロ
ット 2 を投与した場合及び雄にロット 1 を投与した場合の全身曝露量は，用量が 2 倍になった時，
AUC0-tlast の増加の 90% CI（雄のロット 2：1.69～2.21，雌のロット 2：1.84～2.54 及び雄のロット
1：1.69～2.45）が統計学的基準（それぞれ，ロット 1：1.46～2.75，ロット 2：1.51～2.65）を満
たしたことから，検討した用量範囲において用量に比例すると見なすことができる．一方，雌に
ロット 1（90% CI：2.13～2.90）を投与した場合の結果は，用量比例性の基準（1.46～2.75）を満
たさなかった．試験 26 日目においては，表示用量 150 IU FVIII/kg の本剤を投与した 10 匹中 9 匹
（90%）ではすべての評価時点で PEG-rFVIII 抗原濃度が定量限界未満であり，表示用量 350 及び
700 IU FVIII/kg の本剤を投与した 20 匹中 19 匹（95%）では投与後 30 分までに最大 2 評価時点
（5 及び 30 分）で PEG-rFVIII 抗原濃度の測定が可能であり，以降の評価時点では定量限界未満
となった．試験 1 日目と比較した 26 日目の Cmax の幾何平均値の範囲は，表示用量 350 及び 700
IU FVIII/kg を併せて，ロット 1 では 3.66～10.63%，ロット 2 では 3.83～23.44%であった．初回投
与後と比較した反復投与後の Cmax の低下は統計学的に有意であった（p<0.0001，ANOVA，両側，
有意水準 5%）．
本剤の 6 回投与後の雌雄カニクイザルにおける TK 解析の結果を表 2.6.6-20 に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
30
表 2.6.6-20 TK data of the cynomolgus monkey repeated dose toxicity study 1933-018
Dose per day IU
FVIII/kg
Sex
AUC0-tlast (h·ng
rFVIII-bound
PEG/mL)
at day 1
AUC0-tlast (h·ng
rFVIII-bound
PEG/mL) at day 26
Ratio of AUCs
(day 26/day 1)
Cmax (ng rFVIIIbound PEG/mL)
at day 1
Cmax (ng rFVIIIbound PEG/mL)
at day 26
Ratio of Cmax
(day 26/day 1)
0 (Vehicle)
150
a
(lot 1 )
M
F
150
a
(lot 2 )
M
F
Toxicokinetics Based on rFVIII-bound PEG
350
350
a
a
(lot 1 )
(lot 2 )
M
F
M
F
M
F
-
-
620
489
854
589
1662
1154
1747
1655
-
-
-
-
-
-
0.4
0.3
0.3
-
-
-
-
-
-
0.00023
0.00022
-
-
76
72
101
80
203
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Geometric mean of 2 or 3 animals/sex
-: not available
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
and lot 2 refers to lot
.
M
700
a
(lot 1 )
700
a
(lot 2 )
F
M
F
2936
3839
4292
3904
0.5
7.9
6.2
5.7
38.0
0.00017
0.00030
0.00270
0.00162
0.00133
0.00973
167
190
183
388
382
411
368
9.1
6.1
7.3
12.1
27.0
40.7
73.8
86.3
0.0445
0.0366
0.0383
0.0663
0.0695
0.1063
0.1796
0.2344
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
31
以上のように，本剤の投与はいずれの用量においても忍容性が良好であり，本剤に明らかに起
因すると考えられる有害な臨床徴候又は所見は発現しなかった．本剤に対する抗体形成はカニク
イザルへの異種たん白質の反復投与後に予測される免疫反応であり，これは非 PEG 化 FVIII 製剤
においてもよく知られている[4]．
したがって，本試験の NOAEL は本試験条件下で高用量の 700 IU FVIII/kg であった．
2.6.6.3.4
慢性毒性試験
慢性毒性試験は実施しなかった．
ラット及びカニクイザルの反復投与毒性試験の結果，ラット及びサルにおいてヒト FVIII に特
異的な抗体が誘導されることが示された．抗 FVIII 抗体は FVIII 活性及び PEG-rFVIII 活性に対し
て中和特性を示した．結果として，本剤の全身曝露量は，性別及び投与用量に関係なく，反復投
与後（29 日目）に単回投与後（1 日目）と比較して著明に低下していた．
バクスター社は，ヒト FVIII に対する特異的抗体が本剤の反復投与後にラット及びサルで誘導
されることから，本剤の更なる長期投与毒性試験を実施してもヒトにおける本剤の安全性に関す
る追加情報は得られないと考える．
一方，有効性観察期間の平均値（標準偏差）が定期補充療法群（120 例）で 5.94（1.14）ヵ月，
出血時補充療法群（17 例）で 6.31（0.41）ヵ月である本剤の臨床試験（261201 試験）において
（M2.7.3.2.1），本剤の投与を受けた全 137 例（本剤の累積実投与日数 6,717 日，総投与量
21,803,981 IU FVIII）の忍容性は良好であった（M2.5.5.14）．
2.6.6.4
遺伝毒性試験
ICH S6(R1)ガイドライン「バイオテクノロジー応用医薬品の非臨床における安全性評価」に基
づき，遺伝毒性試験は PEG 化 FVIII 等のバイオテクノロジー応用医薬品の安全性評価には適用さ
れない．本剤の作用機序及び特性から本剤と DNA や他の染色体成分との直接相互作用は示唆さ
れないため，本剤に遺伝毒性はないと考える．したがって，遺伝毒性試験は適用されず，標準的
な組み合わせの in vitro 及び in vivo 試験は実施していない．
2.6.6.5
がん原性試験
本剤は遺伝子組換え型たん白質であり，その薬理作用に基づく突然変異原性，染色体異常誘発
性又はがん原性の可能性（免疫抑制又は増殖作用等）はないと考えられる．ICH S6(R1)ガイドラ
イン「バイオテクノロジー応用医薬品の非臨床における安全性評価」に記載されているように，
がん原性に対する懸念がない限り，生物学的製剤のがん原性試験は不要である．また，本剤の
150，350 及び 700 IU FVIII/kg を 26 日間にわたり投与したサル組織の病理組織学的検査で増殖作
用は認められなかった（1933-018 試験）．したがって，本剤にがん原性の懸念はないため，がん
原性試験は実施しておらず，また実施計画もない．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.6
ペゴル（遺伝子組換え）
32
生殖発生毒性試験
本剤については生殖発生毒性試験を実施していないが，雌雄ラット及び雌雄サルを用いた反復
投与毒性試験において生殖器への影響は認められず，ラット反復投与毒性試験の精液検査におい
て本剤に関連する影響はなかった．また，PEG 化ヒト rFVIII である本剤を生殖発生毒性試験の試
験期間にわたり異種動物へ投与する試験の実施は，抗体形成のリスクがあるため困難である．ラ
ット及びカニクイザルを用いた反復投与毒性試験において本剤に対する中和抗体が産生され，
rFVIII の全身曝露量は，本剤の反復投与（6～15 回投与）後に単回投与（1 日目）後と比較して
著明に低下していた．したがって，抗原抗体反応に基づく両立し難い反応の発現リスクにより，
生殖発生毒性試験の結果はヒトにおける状況を表さないと考えられる．更に，血液凝固第 XII 因
子[19]等の低下による凝固亢進状態が不育症のリスク要因となることが知られており，本剤の過
量投与による凝固亢進により個体発生に関係する毒性が発現するリスクは想定可能と考える．こ
れらのことから，バクスター社は動物を用いた生殖発生毒性試験の実施を省略できると判断し，
妊婦又は妊娠している可能性のある女性患者には治療上の有益性が危険性を上回ると判断される
場合にのみ投与すべきであることを添付文書で注意喚起する．
成人と比較して小児集団での本剤の有害事象のリスクは高くないと推定される．
一般的に，止血については生後 6 ヵ月で完全な成熟に達し，小児と成人でほぼ同等であると推
測される．健康人では，FVIII は出生時及び小児期に成人の値の範囲内にあることが示された
[11][10][1]．また，胎児及び新生児の凝固系たん白質は分布容積が大きく血漿クリアランスが速
いため，成人と比較して曝露の増加がないことが示唆されている[11]．
FVIII 製剤の薬効分類別の薬理作用として，非臨床試験の結果から本剤はアドベイトと類似し
た安全性プロファイルを有することが示唆された．ラット及びカニクイザルにおける本剤の反復
投与毒性試験において有害事象は発現しなかったため，小児においてまだ発達過程にある標的器
官に対する懸念は提起されなかった．したがって，本剤を小児に投与した時の安全性プロファイ
ルはアドベイトと類似していると考えられる．
この評価に基づき，バクスター社は幼若動物における非臨床試験の実施を計画していない．成
人と小児集団との間で本剤の薬理作用，薬物動態及び安全性に関連した又は予期できない差異は
予想されない．本剤の投与に関連した有害事象は未成熟もしくは成熟動物の試験で検出できるか，
又は成人の安全性データから外挿可能である．
2.6.6.7
局所刺激性試験
ラット（8202366 試験）及びカニクイザル（1933-018 試験）における反復投与毒性試験中に局
所刺激性を評価した．本剤を投与した動物の注射部位での顕微鏡的所見は対照動物と同等であり，
静脈内投与後に予想される正常反応と一致していた．ウサギにおける追加試験を 1 試験実施し，
2,000 IU FVIII/5 mL バイアルの力価における本剤の局所刺激性を検討した（PV2651201 試験）．
2.6.6.7.1
目的：
ウサギにおける本剤の局所刺激性の検討（PV2651201 試験）
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
33
本試験の目的は，表示力価 2000 IU FVIII/5 mL バイアルの本剤をウサギの静脈内（臨床投与経
路），動脈内及び静脈周囲（誤投与の可能性のある経路）に投与した時の局所刺激性を評価する
ことであった．
方法：
本剤（表示力価 2000 IU FVIII/5 mL バイアル）を既承認の rFVIII 製剤であるアドベイト（表示
力価 2000 IU FVIII/5 mL バイアル），本剤の処方緩衝液（アドベイトの処方緩衝液でもある，溶
媒対照）及び生理食塩液（陰性対照）と比較した．
各物質をウサギ 4 匹（雌雄各 2 匹）中 1 匹の右耳に 5 mL の容量で静脈内又は動脈内（2 分以
内）に，0.5 mL の容量で静脈周囲（ボーラス投与）に投与した（合計 36 匹）．同容量の生理食
塩液を陰性対照として各ウサギの左耳に同じ経路で投与した．
投与開始後 30 分間，投与後 6 時間まで間欠的に，以降 24，48 及び 72 時間後に動物の行動を
観察し，注射部位の変化を肉眼的に評価した．
観察期間終了時に病理組織学的評価を実施した．
結果及び結論：
投与したいずれの動物にも観察期間中に行動の変化は認められなかった．
どの投与経路においても，本剤（表示力価 2000 IU FVIII/5 mL バイアル）の投与後に肉眼的に
認められる変化はなかった．病理組織学的には，本剤の局所組織刺激性に関して有害な病変は検
出されなかった．したがって，本剤の局所刺激性は，投与経路にかかわらず対照物質（アドベイ
ト，処方緩衝液及び生理食塩水）と類似していた．
以上のように，表示力価 2000 IU FVIII/5 mL バイアルの本剤は，静脈内（臨床投与経路），動
脈内及び静脈周囲投与後の局所忍容性が良好であった．
2.6.6.8
2.6.6.8.1
2.6.6.8.1.1
その他の毒性試験（実施している場合）
免疫原性試験
ヒトin vitroアッセイによる本剤のサイトカイン放出作用の評価
（IVFS_001_10 試験）
目的：
本試験の目的は，本剤がサイトカイン放出を誘発する可能性をアドベイトと比較評価すること
であった．
方法：
健康供血者 8 例（男女各 4 例）から得たヒト全血を用いて，in vitro サイトカイン放出アッセイ
を実施し，本剤がヒトの自然免疫系を活性化する可能性を比較評価した．本試験では本剤 2 ロッ
ト（
［lot
］及び
［lot
］）を用いた．また，アドベイトを標準
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
34
物質，アドベイトの処方緩衝液を陰性対照，LPS を陽性対照として用いた．本試験で検討した本
剤及びアドベイトの用量は，長期間定期補充療法に使用されるアドベイトの臨床用量である 20
～40 IU FVIII/kg に基づいて設定した．1 IU FVIII のアドベイトを 0.1 μg と仮定すると，血液量が
70 mL/kg の場合，in vitro アッセイの用量 40 IU FVIII/kg は濃度 0.05 μg/mL に相当する．更に，臨
床用量の 10 及び 100 倍の濃度も用いた（0.5 μg/mL 及び 5 μg/mL）．LPS はエンドトキシン約 5.0
IU/mL に相当する 500 pg/mL の濃度で用いた．
In vivo での細胞及び血漿の組成を最もよく反映する全血を用いた．各供血者から 9.0 mL の血
液をヘパリンナトリウム添加 9.0 mL 真空チューブ（
）に採取した．200 μL の新鮮全
血を 600 μL の RPMI 培養液で希釈し，本剤，アドベイト，処方緩衝液又は LPS を 200 μL 添加し，
試料の全容量を 1 mL とした．試料を 37°C/5% CO2（設定値）で 20～22 時間インキュベートした．
上清を採取し，bead-based multiplex sandwich immunoassay（
，
）によ
り 4 種類のヒトサイトカイン（IL-1β，IL-6，IL-8 及び TNF-α）を測定した．免疫測定法は製造業
者の試験実施計画書に従い実施し，試料は
（
）により
測定した．測定物質の濃度は既知濃度の各サイトカインから作成した標準曲線を用いて定量した．
各試料につき 3 回分析し，平均値を算出した．定量範囲未満の値は 0 として平均値を算出した．
結果及び結論：
In vitro にてヒト全血とのインキュベーション後，本試験で検討したいずれの本剤ロットにおい
ても，一貫してきわめて低レベルのサイトカインが放出されるのみであった．IL-1β，IL-6，IL-8
及び TNF-α の放出量は，処方緩衝液対照群で認められたそれぞれの放出量と同程度であった．ま
た，サイトカイン放出量は，全血とアドベイトをインキュベートした時と同程度であった．本試
験において，本剤の両ロットから同様の結果が得られた．
IL-1β，IL-6，IL-8 及び TNF-α の結果をそれぞれ図 2.6.6-1，図 2.6.6-2，図 2.6.6-3 及び図 2.6.6-4
に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
35
ADVATE
BAX 855
図 2.6.6-1 IL-1β concentrations in culture supernatants of human whole blood in the study
IVFS_001_10
ADVATE
BAX 855
図 2.6.6-2 IL-6 concentrations in culture supernatants of human whole blood in the study
IVFS_001_10
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
36
ADVATE
BAX 855
図 2.6.6-3 IL-8 concentrations in culture supernatants of human whole blood in the study
IVFS_001_10
ADVATE
BAX 855
図 2.6.6-4 TNF-α concentrations in culture supernatants of human whole blood in the study
IVFS_001_10
以上のように，本剤及びアドベイトは，in vitro ヒト全血サイトカイン放出アッセイにおいてサ
イトカイン放出を誘発しなかった．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.8.1.2
ペゴル（遺伝子組換え）
37
ヒトin vitroアッセイによる本剤の補体活性化作用の評価（Study
IVFS_002_10 試験）
目的：
本試験の目的は，本剤が補体活性化を誘発する可能性をアドベイトと比較評価することであっ
た．
方法：
補体系は代替経路，古典経路及びレクチン経路の 3 種類の経路で活性化される．3 経路共に C5
を C5a と C5b に分解する．膜侵襲複合体の集合は C5b により開始される．C5a は多機能性炎症性
メディエーターであるため，その産生は補体活性化のマーカーとして用いられる．
健康供血者 8 例（男女各 4 例）から得たヒト血漿を用いて in vitro 補体活性化アッセイを実施
した．本試験では本剤 2 ロット（
［lot
］及び
［lot
］）を用い
た．また，アドベイトを標準物質，アドベイトの処方緩衝液を陰性対照，Saccharomyces
cerevisiae の細胞壁から抽出したザイモサンを陽性対照として用いた．本剤及びアドベイトの用
量（0.05，0.5 及び 5 μg/mL）は 2.6.6.8.1.1 項と同じ方法で定量し，ザイモサンの用量は 10 μg/mL
とした．
各供血者から 9.0 mL の血液をヘパリンナトリウム添加 9.0 mL 真空チューブ（
）に
採取し，遠心分離により血漿を分取した．250 μL の新鮮血漿を 250 μL の本剤，アドベイト，処
方緩衝液又はザイモサンとインキュベートし，試料の全容量を 500 μL とした．試料は 37°C（設
定値）で 1 時間インキュベートした．血漿中のヒト C5a の分析には市販の
）（固相サンドイッチ ELISA 法）を用いた．ELISA 法は製造業者の試験実施計画書
（
に従い実施し，試料は
を用いて測定した．測定物質の濃度は既知濃度の C5a
より標準曲線を 2 回作成しその平均値を用いて定量した．各試料につき 2 回分析し，平均値を算
出した．
結果及び結論：
本試験で検討した本剤のいずれのロットにおいても，in vitro でヒト血漿とのインキュベーショ
ン後に低レベルの C5a が一貫して誘発された．C5a レベルは，処方緩衝液対照物質又は標準物質
アドベイトとのインキュベーション後と同程度であった．また，本試験で用いた本剤 2 ロットは，
in vitro でヒト血漿において補体系を活性化する能力に差異がなかった．
C5a の結果を図 2.6.6-5 に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
38
ADVATE
BAX 855
図 2.6.6-5 C5a concentrations in human plasma in the study IVFS_0021_10
以上のように，本剤及びアドベイトは共にヒト血漿を用いた in vitro 補体活性化アッセイで補
体活性化を誘発しなかった．
2.6.6.8.1.3
3 種類のマウスモデルにおける本剤とアドベイトとの比較免疫原性
（IMM_R&D_012_11 試験）
目的：
本試験の目的は，本剤の免疫原性をバクスター社の非修飾型 rFVIII 濃縮製剤であるアドベイト
と比較することであった．FVIII の化学修飾はその免疫原性に影響を与える可能性があるため，
非修飾型 rFVIII（アドベイト）と比較した詳細な非臨床評価は重要である．
方法：
上記目的のため，FVIII 製剤の比較免疫原性を評価するために開発された 3 種類のマウスモデ
ルを用いた．
E17 FVIII ko マウスは，Balb/c 又は C57BL/6 を背景とする，マウス FVIII をノックアウトした
血友病マウスである．
E17 FVIII ko ヒト主要組織適合性複合体（MHC）-クラス II（HLA-DR15）トランスジェニッ
クマウスは，マウス FVIII をノックアウト，マウス MHC-クラス II 複合体を完全ノックアウト及
びヒト MHC-クラス II HLA-DRB1*1501 をノックインした血友病マウスである[15][16]．MHC-ク
ラス II たん白質はプロフェッショナル APC による免疫反応の開始に重要な役割を果たす．この
モデルでは，たん白質に対する抗体反応の誘導はヒト MHC-クラスハプロタイプ HLA-DR15 によ
る FVIII ペプチドの提示に依存する．ヒト MHC-クラスハプロタイプ HLA-DR15 は，血友病患者
での FVIII インヒビター発現リスクの増大に関連することが示されている[13][14]．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
39
E17 FVIII ko ヒト FVIII トランスジェニックマウスは，マウス FVIII をノックアウトし，ヒト
FVIII を遺伝子導入により発現させた血友病マウスである[16]．このマウスはヒト FVIII には免疫
学的に耐性であるが，免疫原性の高いヒト PEG-rFVIII 対照を投与するとヒト FVIII に対して免疫
反応を発現する．
実施した比較免疫原性試験の概要を表 2.6.6-21 にまとめる．
表 2.6.6-21 Comparative immunogenicity studies conducted with BAX 855 in mouse
models in the study IMM_R&D_012_11
(Identical to 表 2.4-3)
Mouse strain
E17 FVIII ko human MHCclass II (HLA-DR15)
transgenic mice
Mice/group
10M
E17 FVIII ko mice on a
Balb/c background
10M
E17 FVIII ko mice on a
C57BL/6 background
10M
E17 FVIII ko human FVIII
transgenic mice
E17 FVIII ko mice on a
C57BL/6 background
E17 FVIII ko human FVIII
transgenic mice
5M+5F
Treatment
ADVATE
BAX 855
Formulation buffer
control
ADVATE
BAX 855
Formulation buffer
control
ADVATE
BAX 855
highly immunogenic
PEG-rFVIII control
ADVATE
BAX 855
highly immunogenic
PEG-rFVIII control
a
Dose
8 or 40 µg/kg (200 or
1000 ng/mouse)
Formulation buffer:
200 µL
8 or 40 µg/kg (200 or
1000 ng/mouse)
Formulation buffer:
200 µL
8 or 40 µg/kg (200 or
1000 ng/mouse)
PEG-rFVIII control:
8 or 40 µg/kg (200 or
1000 ng/mouse)
8 or 40 µg/kg (200 or
1000 ng/mouse)
PEG-rFVIII control:
40 µg/kg (1000
ng/mouse)
Series
245
246
249
275
a: Eight doses in weekly intervals. Doses in ng or µg refer to protein doses. A protein dose of 8 and 40 µg/kg correlates to an
activity-based dose of ca 50 and 250 IU FVIII/kg, respectively.
各マウスモデルにおいて本剤 2 ロットをアドベイトと比較評価した．標準物質であるアドベイ
トの臨床用量に基づいて，各群 10 匹のマウスに本剤（被験物質）又はアドベイト（標準物質）
を週 1 回，8 回（8 又は 40 µg/kg）静脈内投与した．たん白質用量 8 及び 40 μg/kg は，それぞれ活
性用量として約 50 及び 250 IU FVIII/kg に相当する．処方緩衝液は，シリーズ 245 及び 246 にお
いてそれぞれの容量を投与した．また，シリーズ 249 及び 275 においては，E17 FVIII ko ヒト
FVIII トランスジェニックマウスで免疫寛容を破壊することが既に示されている免疫原性の高い
PEG 化 FVIII 変異体を陽性対照として用いた（PEG-rFVIII 対照，シリーズ 249 では 8 又は
40 µg/kg，シリーズ 275 では 40 µg/kg）．初回投与前，4 回目投与後及び最終投与 1 週間後の血液
試料について，ヒト FVIII 及び PEG-rFVIII に対する結合抗体を ELISA 法で測定した．更に，PEG
に対する結合抗体を FACS により分析した．
結果及び結論：
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
40
血友病 E17 FVIII ko マウス（シリーズ 246）及び E17 FVIII ko ヒト MHC-クラス II（HLADR15）トランスジェニックマウス（シリーズ 245）におけるヒト FVIII 及び PEG-rFVIII に対する
結合抗体の力価は，本剤又はアドベイトの投与後にほぼ同じ範囲にあり，同程度の発現率を示し
た．異なるロット間及び異なる動物群間での抗体力価のわずかな差異は，同一群内の個々の動物
間でも認められる正常範囲を反映している．
本剤が免疫寛容を維持するか否かをアドベイトと比較評価するため，ヒト FVIII に対して免疫
寛容である E17 FVIII ko ヒト FVIII トランスジェニックマウスを用いた．FVIII 及び PEG-rFVIII
に対する投与に関連した結合抗体は，アドベイトを投与した 39 匹中 33 匹及び本剤を投与した 38
匹中 34 匹の動物では認められなかった（シリーズ 249 及び 275）．これらのマウスでの抗体産生
の欠如はヒト FVIII に対する中枢性免疫寛容のためである．これらのマウスの免疫能力は，この
マウスモデルにおいてヒト FVIII に対する免疫寛容を破壊することが知られている，高い免疫原
性を有する陽性対照 PEG-rFVIII の投与により示された．高用量の本剤（38 匹中 4 匹）又は高用
量のアドベイト（39 匹中 6 匹）投与後に単一動物での FVIII 及び PEG-rFVIII に対する結合抗体の
産生が認められ，これはこれらのマウスにおいて中枢性寛容の誘導中にクローン除去を回避する，
末梢での低親和性の FVIII に特異的な CD4+ T 細胞の存在に起因すると考えられる．これらの試
験において，本剤とアドベイトは類似した免疫原性プロファイルを示した．異なるロット間及び
異なる動物群間での抗体力価のわずかな差異は，同一群内の個々の動物間でも認められる正常範
囲を反映している．
本剤は，E17 FVIII ko マウス（35 匹中 20 匹；シリーズ 246 及び 275）において PEG に特異的
な抗体を誘導したが，E17 FVIII ko ヒト FVIII トランスジェニックマウスでは誘導しなかった．
これらのデータから，PEG に対する結合抗体の誘導は，免疫原性たん白質のエピトープの存在に
依存することが示された．本剤は，ヒト FVIII に対して免疫寛容を示さないマウスにおいてのみ
PEG に対する抗体を誘導した．一方，ヒト FVIII に対する免疫寛容を破壊することが知られてい
る免疫原性の高い陽性対照 PEG-rFVIII は，これらの試験で用いたすべてのマウスモデルにおい
て PEG に対する抗体を誘導した．
以上のように，本剤及びアドベイトは，検討した 3 種類の血友病マウスモデルのすべてにおい
て，類似した免疫原性プロファイルを示した．
2.6.6.8.1.4
カニクイザルにおける 8 週間免疫原性試験（8220805 試験）
目的：
本試験の目的は，カニクイザルに本剤を週 1 回，8 週間静脈内投与してバクスター社の非修飾
型 rFVIII 濃縮製剤であるアドベイトの免疫原性と比較することであった．臨床投与経路である静
脈内投与を選択した．
方法：
本剤（2 ロット）又はアドベイト（標準物質）を雌雄各 2 匹から成る 2 群に 8 又は 40 µg/kg の
用量で 8 週にわたり週 1 回（合計 8 回）投与した．用量は標準物質であるアドベイトの臨床用量
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
41
に基づいて選択した．たん白質用量 8 及び 40 μg/kg は，それぞれ活性用量として約 50 及び 250
IU FVIII/kg に相当する．
試験デザインを表 2.6.6-22 に示す．
表 2.6.6-22 Study design of the cynomolgus monkey immunogenicity study 8220805
Goup
number
1
2
3
4
Group description
BAX 855, lot 1
low dose
BAX 855, lot 2
low dose
BAX 855, lot 1
high dose
BAX 855, lot 2
high dose
ADVATE
low dose
ADVATE
high dose
a: lot 1 refers to BAX 855 lot
Dose level
(µg/kg)
Day of study
8
1, 15, 29, 43
8
8, 22, 36, 50
40
1, 15, 29, 43
40
8, 22, 36, 50
8
40
1, 8, 15, 22, 29, 36,
43, 50
1, 8, 15, 22, 29, 36,
43, 50
and lot 2 refers to BAX 855 lot
Number of animals
Ncropsy
after 8
weeks
Male
Female
2
2
2M/2F
2
2
2M/2F
2
2
2M/2F
2
2
2M/2F
.
毒性及び抗体反応の評価は，一般状態観察，体重測定，免疫原性解析及び肉眼的観察に基づい
て行った．抗体評価用の血液試料は，初回投与前，5 回目投与直前及び最終投与 1 週後（9 週目
の 1 日目）に採取した．
結果及び結論：
いずれの用量においても毒性徴候はなかった．処方試料から動物に適正に投与されたことを確
認した．
動物
M（第 2 群，40 μg/kg，本剤）は試験 29 日目に瀕死状態に陥り，安楽死させた．本
動物の健康状態不良及び損傷は，ケージ内の同居動物に起因するものであり，本剤の投与と関連
があるとは考えられなかった．
本剤又はアドベイトに関連した体重変動は認められなかった．
投与期間中に本剤又はアドベイトに関連した臨床徴候は観察されず，本剤投与群とアドベイト
投与群との間に差異は認められなかった．
本剤又はアドベイトを投与したすべてのカニクイザルにヒト FVIII 及び PEG-rFVIII に特異的な
抗体が発現した．試験群間での抗体価の著明な差異は，4 及び 8 回目投与後に認められなかった．
また，1 匹を除いて本剤投与群のすべての動物に PEG に特異的な抗体が発現した．CHO たん白
質に特異的な抗体はいずれの動物においても検出されなかった．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
42
8 回目投与後に，FVIII に対する中和抗体がアドベイトを投与した 8 匹すべて及び本剤を投与し
た 8 匹中 7 匹の動物で検出された．8 μg/kg の本剤を投与した 1 匹には FVIII 活性に対する中和抗
体は発現しなかった．
概して，アドベイト及び本剤 2 ロットは，週 1 回，8 又は 40 μg/kg の静脈内投与により良好な
忍容性を示した．
以上のように，本剤及びアドベイトはカニクイザルにおいて類似した免疫原性プロファイルを
示した．
2.6.6.8.1.5
2 種類のマウスモデルにおける低及び高凝集物含有量の本剤の非臨床ロッ
ト，並びにアドベイトの比較免疫原性（IMM_R&D_025_12 試験）
目的：
本試験の目的は，本剤中に存在するたん白質凝集物によるリスクを評価することであった．一
方は凝集物含有量が低く（
%），もう一方は凝集物含有量が高い（
%）本剤 2 ロットの免疫
原性を比較評価した．
方法：
特定の血友病 A 患者集団を反映する 2 種類の血友病マウスモデルである，E17 FVIII ko ヒト
MHC-クラス II（HLA-DR15）トランスジェニックマウス及び E17 FVIII ko ヒト FVIII トランスジ
ェニックマウスを用いた．表 2.6.6-23 に示すように，各モデル（シリーズ 366 及び 367）で計 50
匹のマウスに，本剤のロット 1 又は 2 を 8 又は 40 µg/kg の用量で，アドベイトを 40 µg/kg の用量
で，週 1 回，8 週間（計 8 回）静脈内投与した（5 投与群，10 匹/群）．たん白質用量 8 及び 40
μg/kg は，それぞれ活性用量として約 50 及び 250 IU FVIII/kg に相当する．初回投与前，4 回目投
与後及び最終投与 1 週後に各マウスから採取した血液試料について，ヒト FVIII 及び PEG-rFVIII
に対する結合抗体を ELISA 法で測定し，PEG に対する結合抗体を FACS により分析した．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
43
表 2.6.6-23 Treatment groups, animal numbers and dose levels - Series 366 and 367 in the
two mouse models immunogenicity study IMM_R&D_025_12
Group
number
Animals
a
per group
1
10
2
10
3
10
4
10
5
10
Mouse strain
E17 FVIII ko human MHC-class II
(HLA-DR15) transgenic mice (series
366)
E17 FVIII ko human FVIII transgenic
mice (series 367)
d
Item
Dose
BAX 855 lot 1b
8 µg/kg
(200 ng/mouse)
40 µg/kg
(1000 ng/mouse)
8 µg/kg
(200 ng/mouse)
40 µg/kg
(1000 ng/mouse)
40 µg/kg
(1000 ng/mouse)
BAX 855 lot 1b
BAX 855 lot 2c
BAX 855 lot 2c
ADVATE
a: Series 366: 10 male animals per group; series 367: 5 male and 5 female animals per group
b: aggregate content of
%
c: aggregate content of
%
d: Eight doses in weekly intervals. Doses in ng or µg refer to protein doses. A protein dose of 8 and 40 µg/kg ADVATE
correlates to an activity-based dose of ca 50 and 250 IU FVIII/kg, respectively.
結果及び結論：
本剤 2 ロットは，E17 FVIII ko ヒト MHC-クラス II（HLA-DR15）トランスジェニックマウスに
おいて，ヒト FVIII 及び PEG-rFVIII に対する結合抗体力価の類似した範囲を示した．本剤のロッ
トとアドベイトとの間及び本剤の投与群間での抗体力価のわずかな差異は，同一群内の個々の動
物でも認められる正常範囲を反映している．
ヒト FVIII に対して免疫寛容である E17 FVIII ko ヒト FVIII トランスジェニックマウスを用い
て，凝集物含有量の異なる本剤が免疫寛容を維持するか否かをアドベイトと比較評価した．ヒト
FVIII 及び PEG-rFVIII に対する投与に関連した結合抗体は，アドベイトを投与した 10 匹中 8 匹，
アドベイトと同用量の本剤のロット 1 を投与した 10 匹中 10 匹及び本剤のロット 2 を投与した 10
匹中 9 匹の動物では認められなかった．これらのマウスの免疫能力は，このマウスモデルにおい
てアドベイトよりも高い免疫原性を発現し，ヒト FVIII に対する免疫寛容を破壊することが知ら
れている陽性対照 PEG-rFVIII の投与により既に示されている[20]．個別動物でのヒト FVIII 及び
PEG-rFVIII に対する結合抗体の産生は，高用量の本剤（ロット 1：10 匹中 0 匹；ロット 2：10 匹
中 1 匹）又は高用量のアドベイト（10 匹中 2 匹）の投与後に認められたが，これはこれらのマウ
スにおいて中枢性寛容の誘導中にクローン除去を回避する，末梢での低親和性の FVIII に特異的
な CD4+ T 細胞の存在に起因すると考えられる．これらの試験において，アドベイト及び本剤の
両ロットは類似した FVIII 免疫原性プロファイルを示した．ロット間及び投与群間での抗体力価
のわずかな差異は，同一群内の個々の動物間でも認められる正常範囲を反映している．
以上のように，
及び
%の凝集物を含有する本剤の 2 ロットは，2 種類の血友病マウスモ
デルにおいて類似した免疫原性プロファイルを示し，アドベイトの FVIII 免疫原性プロファイル
と異ならなかった．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
2.6.6.8.2
ペゴル（遺伝子組換え）
44
その他の試験
2.6.6.8.2.1
抗PEG抗体のヒト組織交差反応性の免疫組織化学的解析（
GLP2572 試
験）
目的：
本試験の目的は，本剤に特異的に結合することが示されている高親和性抗 PEG-
モノクロー
ナル抗体と広範な正常ヒト組織との結合性を免疫組織化学的解析を用いて評価することであった．
方法：
組織の選択は，EMEA/CPMP/ICH/302/95 ICH S6(R1)及び FDA 文書「Points to Consider in the
Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products for Human Use」[6]に従った．本試験で検
討した組織パネルを表 2.6.7-23 に示す．組織の種類毎に，3 例の異なるドナーから試料を得た．
PEG の検出のための陽性対照組織は自然には存在しないため，陽性対照組織は，肝ホモジネー
トに
を添加後圧縮し，ヒト肝臓試料由来切片として作製した．対応する陰性対照組織
は，肝ホモジネートに同容量の PBS を添加して調製した．陰性対照は，一次抗体を用いずに二
次抗体のみ又はポリクローナルラット IgG（対照物質）血清での組織染色によることとした．
また，組織の抗原性は，抗ビメンチン抗体及び抗 vWF 抗体で組織切片を試験することにより
確認した．次いで，被験物質（抗 PEG-
ウサギモノクローナル抗体）と PEG との結合の特異性
は，本剤とのプレインキュベーションにより示された．更に，抗 SMA 抗体及び抗 PCK 抗体をア
ッセイ対照として用いた．
被験物質（抗 PEG-
ウサギモノクローナル抗体）及び対照物質（ウサギ IgG アイソタイプ）
の濃度は 0.5 μg/mL とした．この濃度は，ヒト陽性対照組織の抗 PEG-
抗体での最適な染色を
もたらすことにより，事前に決められた．本剤の濃度は 50.16 μg/mL とし，これは被験物質及び
対照物質の約 100 倍であった．抗ビメンチン抗体，抗 vWF 抗体及び抗 SMA 抗体はそれぞれ 0.6，
0.125 及び 0.5 μg/mL の濃度で用いた．抗 PCK 抗体は 1:5000 希釈で用いた．
ヒト組織の凍結切片を作製し，一次抗体（抗 PEG-
抗体，ウサギ IgG アイソタイプ，抗ビメ
ンチン抗体，抗 vWF 抗体，抗 SMA 抗体，抗 PCK 抗体，非免疫ラット IgG 抗体，緩衝液及び抗
PEG-
抗体/本剤又は抗 PEG-
抗体/PBS プレインキュベーション混合液）と 30 分間インキュベ
ートした．洗浄緩衝液で洗浄後，抗ウサギ IgG HRP ポリマー（抗ビメンチン抗体及び抗 PCK 抗
体以外のすべての一次抗体，抗ビメンチン抗体及び抗 PCK 抗体では抗ウサギ/抗マウス IgG HRP
ポリマーを使用）と 30 分間インキュベートし，洗浄緩衝液で洗浄した．その後，組織切片を
HRP の触媒作用により黒褐色に染色する発色試薬，3, 3’-ジアミノベンジジンと 5 分間インキュ
ベートした．解析は顕微鏡下で実施した．
結果及び結論：
免疫組織化学的解析から，抗 PEG ウサギモノクローナル抗体と 3 例のドナーから得た 36 のヒ
ト組織との特異的結合は生じないことが示された．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
45
以上のように，抗 PEG 抗体の特異的交差反応性はすべての組織に対して陰性であった．
2.6.6.8.2.2
PEG2ru20KCOOH：ラットにおける 28 日間静脈内（ボーラス）投与，並
びにその後の 4 及び 13 週間の無投与期間を伴う毒性試験（8298494 試
験）
目的：
本試験の目的は，PEG の評価に適した動物種であるラットに，被験物質である
PEG2ru20KCOOH を週 2 回，28 日間（計 8 回）静脈内（ボーラス）投与して有害作用の発現及び
その可逆性を検討することであった．遅発性毒性又は毒性の可逆性の評価は，4 及び 13 週間の無
投与期間中に行った．また，被験物質の TK プロファイル及び抗薬物抗体の発現も評価した．
方法：
試験デザインを表 2.6.6-24 に示す．
表 2.6.6-24 Study design of the PEG2ru20KCOOH rat repeated dose toxicity study
8298494
Group
No.
Dose
(mg/kg)
1
2
3
4
0
0.65
6.5
65
Toxicity
Male
10
10
10
10
Female
10
10
10
10
Number of animals in group
Treatment-free
Treatment-free
(Week 4)
(Week 13)
Male
Female
Male
Female
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
Tokicokinetics
Male
3
9
9
9
Female
3
9
9
9
PEG2ru20KCOOH は，本剤の代謝によるたん白質部分の異化後に遊離すると考えられるため，
非結合型 20 kDa モデル PEG として用いた．また，PEG2ru20KCOOH は最終製剤の不純物として
特定されている（3.2.S.3.2 項を参照．同項では「PEG2ru20KCOOH」を「PEG2ruButanoic acid20K
(PEG-acid)」と記載．）．
用量は，本剤で通常想定される臨床最高用量（80 IU FVIII/kg/日，週 2 回投与）の生涯投与量
に基づいて設定した．生涯投与期間を 70 年と仮定した．rFVIII 1 IU 当たりの PEG 量は 0.095 µg
であることから，長期間の定期補充療法で予測される最高用量は 7.6 µg/kg となる．
最高用量（65 mg/kg）は平均生涯投与量の約 10 倍又は単回投与量の約 10,000 倍，中用量（6.5
mg/kg）は平均生涯投与量の約 1 倍又は単回投与量の約 1,000 倍，低用量（0.65 mg/kg）は平均生
涯投与量の約 10 分の 1 又は単回投与量の約 100 倍とした．
毒性評価は，死亡，一般状態観察，体重，摂餌量，眼科学的検査，血液学的検査，血液生化学
的検査，血液凝固検査，尿検査，器官重量，並びに肉眼的及び顕微鏡検査に基づいて行った．免
疫原性評価用の血液試料は 13 週間無投与群の全動物の頸静脈から投与前，投与 4 週目（24 日
目），並びに無投与期間 4 週目（54 日目）及び 13 週目（117 日目）に採取した．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
46
TK 用血液試料は，TK 評価用の動物から試験 1 及び 22 日目の投与前，投与後 5 及び 15 分，並
びに 0.5，1，2，4，6，12，24 及び 48 時間に採取した．
結果及び結論：
いずれの用量においても毒性徴候はなかった．PEG2ru20KCOOH に関連する死亡例もなかった．
投与期間又は回復期間を通じて，体重推移，臨床徴候，眼科学的検査，血液学的検査，血液生化
学的検査，血液凝固パラメータ，尿検査及び器官重量に有害な所見は認められなかった．
PEG2ru20KCOOH 投与に関連する肉眼的及び顕微鏡所見もなかった．最高用量の 65 mg/kg にお
いてもマクロファージ又はその他の細胞の空胞化は認められなかった．投与期間終了後の屠殺時
に投与に関連する顕微鏡的所見がなかったことから，回復期間 4 及び 13 週目の組織についての
検査は不要であった．
検査したいずれの試料にも PEG に対する結合 IgG 抗体は検出されなかった．したがって，投
与に関連する抗体産生はすべての動物で陰性と判定された．また，無投与期間 4 週目で抗体産生
が検出されなかったため，無投与期間 13 週目の試料は試験計画に従い分析しなかった．
PEG2ru20KCOOH を投与したすべての動物の曝露は，投与 1 及び 22 日目の TK 評価で確認され
た．
以上のように，PEG2ru20KCOOH を 0.65，6.5 及び 65 mg/kg の用量で 4 週間静脈内投与した時
の忍容性は良好であり，好ましくない臨床徴候，体重又は摂餌量・眼科学的検査・臨床又は解剖
学的病理検査に及ぼす影響はなかった．したがって，静脈内投与時の NOAEL は 65 mg/kg と考え
られた．この NOAEL は，予定臨床最高用量での平均生涯 PEG 投与量（70 年）の約 10 倍又は本
剤により想定される単回臨床 PEG 投与量の約 10,000 倍に近似する．
2.6.6.8.2.3
PEG2ru20KCOOHの遺伝毒性試験
PEG2ru20KCOOH（モジュール 4 の試験報告書［番号：6291-259，6291-260 及び 6291-261］で
は「mPEG2-COOH-20K」と記載．）の遺伝毒性試験として，in vitro の細菌を用いる復帰突然変
異試験及び培養ヒトリンパ球を用いる染色体異常試験，並びに in vivo のマウス骨髄小核試験を実
施した．
（1） ネズミチフス菌及び大腸菌，並びに哺乳類のミクロゾームを用いる確認試験を含む復帰
突然変異試験（6291-259 試験）
目的：
本試験の目的は，数種類のネズミチフス菌株のヒスチジン部位及び大腸菌株 WP2uvrA のトリ
プトファン部位における PEG2ru20KCOOH の復帰突然変異誘発性を，ミクロゾーム酵素を含む
外因性哺乳類代謝活性化系（S9）の存在及び非存在下で評価することであった．
方法：
本試験に先立ち，ネズミチフス菌株 TA100 及び大腸菌株 WP2uvrA を試験菌株として S9 mix の
存在及び非存在下で用量設定試験を実施した．PEG2ru20KCOOH は 6.67～5000 μg／プレートの
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
47
範囲で 10 用量を設定し，各プレートでそれぞれの用量を試験した．5000 μg／プレートの最高用
量まで細胞毒性を調べた．
試験菌株 TA100 で観察される被験物質の細胞毒性は一般的に他のネズミチフス菌株を代表し
ており，この系で比較的高頻度のプレート当たりの自然発生突然変異体が観察されることから，
細胞毒性は通常の試験での変異と容易に識別できる．大腸菌の試験菌株 WP2uvrA にはネズミチ
フス菌株が保有する rfa 壁変異がないため，異なる範囲の細胞毒性が観察される可能性がある．
細胞毒性は，PEG2ru20KCOOH の用量設定試験において観察されなかったため，本試験で用い
た最高用量は用量設定試験と同用量とした．
本試験は，S9 mix の存在及び非存在下でネズミチフス菌株 TA98，TA100，TA1535 及び
TA1537，並びに大腸菌株 WP2uvrA を試験菌株として用い，適切な溶媒対照及び陽性対照と共に
実施した．
試験した PEG2ru20KCOOH の用量は 100，333，1000，3330 及び 5000 μg／プレートとし，用
量当たり 3 枚のプレートを用いた．
結果及び結論：
初回試験の結果は独立した別試験により確認された．本試験結果から，本試験条件下での被験
物質 PEG2ru20KCOOH は，AroclorTM 誘導ラット肝臓（S9）から調製したミクロゾーム酵素の有
無にかかわらず，いずれの試験菌株でもプレート当たりの平均復帰突然変異体数において陽性の
増加を誘発しないことが示された（表 2.6.7-25）．
（2） 培養ヒトリンパ球を用いる染色体異常試験（6291-260 試験）
目的：
本試験の目的は，培養ヒトリンパ球における PEG2ru20KCOOH の染色体異常誘発性を，代謝
活性化系の存在及び非存在下で評価することであった．
方法：
培養開始 2 日後，細胞をあらかじめ設定した濃度の PEG2ru20KCOOH，溶媒及び陽性対照と共
に，S9 mix 非存在下では 3 時間（初回試験）又は約 22 時間（確認試験），S9 mix 存在下では 3
時間（初回及び確認試験），37 ± 2oC でインキュベートし，コルセミドをインキュベーション終
了前 2 ± 0.5 時間に添加した．培養細胞は PEG2ru20KCOOH の添加後約 22 時間で採取した．
初回試験においては 1720，2450，3500 及び 5000 μg/mL，確認試験においては 2500，3200，
4000 及び 5000 μg/mL の PEG2ru20KCOOH で処理した培養細胞の染色体異常について解析した．
結果及び結論：
初回及び確認試験のいずれにおいても，S9 mix の存在及び非存在下での PEG2ru20KCOOH に
は，染色体異常，倍数体又は核内倍加の有意な上昇は観察されなかった（表 2.6.7-26）．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
48
以上のように，PEG2ru20KCOOH は，培養ヒト末梢血液リンパ球において，代謝活性化系の有
無にかかわらず染色体異常の誘発に関して陰性であった．
（3） In Vivoマウス骨髄小核試験（6291-261 試験）
目的：
本試験の目的は，PEG2ru20KCOOH の in vivo 染色体異常及び／又は分裂装置異常の誘発性を，
CD-1®(ICR)BR マウスの骨髄多染性赤血球における小核の検出により評価することであった．
方法：
本試験に先立ち，用量設定試験を実施した．雌雄各 3 匹に PEG2ru20KCOOH の 2000 mg/kg を
緩徐に静脈内投与し（1000 mg/kg を約 1～2 時間の間隔で 20 mL/kg/回の容量にて 2 回投与），毒
性徴候及び／又は死亡について，最終投与後 2 日まで観察した．
2 回目投与直後，雌 1 匹に自発運動のわずかな抑制が認められた以外，他のすべての動物は正
常であったことから，本試験における高用量として規制ガイドライン[12]の上限である 2000
mg/kg（1000 mg/kg，BID）を選択した．本試験では，各群雄 5 匹に PEG2ru20KCOOH の 500，
1000 及び 2000 mg/kg（それぞれ，250，500 及び 1000 mg/kg を約 1～2 時間の間隔で 20 mL/kg/回
の容量にて 2 回投与），生理食塩液（溶媒対照）及びシクロホスファミド（陽性対照）を緩徐に
静脈内投与し，毒性徴候及び／又は死亡について，最終投与後 24 時間（すべての群）又は 48 時
間（PEG2ru20KCOOH の 2000 mg/kg 及び生理食塩液投与群）観察した．骨髄は後肢骨から採取
し，1 動物当たり少なくとも多染性赤血球（PCEs）2000 個について小核の頻度を解析した．細胞
毒性は，各動物で少なくとも最初の全赤血球 500 個について PCEs 及び正染性赤血球（NCEs）の
数をスコア化して評価した．
結果及び結論：
被験物質である PEG2ru20KCOOH は，2000 mg/kg の用量レベルで 10 匹中 1 匹の自発運動をわ
ずかに抑制した以外，2000 mg/kg まで投与した動物において臨床毒性徴候を引き起こさなかった．
PEG2ru20KCOOH は，試験したいずれの用量においても小核を伴う PCEs の有意な増加を誘発し
なかった．また，PEG2ru20KCOOH は，試験したいずれの用量及び時間（24 又は 48 時間）にお
いても PCE：NCE 比を統計学的に有意に減少せず，骨髄に対して細胞毒性を示さなかった（表
2.6.7-27）．
以上から，被験物質である PEG2ru20KCOOH は，本試験条件下でのマウス骨髄小核試験にお
いて陰性と評価された．
2.6.6.8.3
2.6.6.8.3.1
添加物及び不純物
最終製剤に用いた添加物の毒性評価
本剤の処方はアドベイトと同一である（2.3.P 項を参照）．したがって，製剤に用いる添加物
は安全であることが示されている．ポリソルベート 80 に関連する過敏性反応を除き，添加物に
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
49
起因する既知の又は想定される毒性はない．そのため，ポリソルベート 80 に対する過敏性反応
が知られている患者への本剤の使用は避ける必要がある．
2.6.6.8.3.2
最終製剤のPEG関連不純物の毒性評価
本剤の最終製剤に含まれる可能性のある PEG 関連不純物の毒性を PEG の主な代謝物であり，
本剤の主な不純物である PEG2ru20KCOOH のラットにおける 28 日間反復投与毒性試験及び遺伝
毒性試験において評価した（2.6.6.8.2.2 項及び 2.6.6.8.2.3 項を参照）．すべての動物において
PEG2ru20KCOOH の忍容性は良好であり，試験した最高用量の 65 mg/kg でも有害作用は認めら
れず，また，遺伝毒性も示されなかった．また，本剤の最終製剤に含まれる可能性のある PEG
関連不純物の毒性の詳細な評価結果をバクスター社の Expert Report（RA13RS22R2）に記載する．
2.6.6.8.4
PEG及びPEG化生物製剤の安全性
PEG は非イオン性ポリエーテル化合物に属し，消費生活用製品に，また多くの医薬品の添加物
として使用されている．PEG の分子量は，鎖長の違いにより 1,000 未満から数 1,000,000 Da にわ
たる．5～40 kDa の PEG は極めて水に溶けやすく，通常，毒性及び免疫原性が軽微であると考え
られている．過去数十年間，このような PEG による生物製剤の化学的修飾は，薬理学的，薬物
動態学的及び安全性プロファイルを向上させることが示されている．既承認 PEG 化生物製剤の
例を表 2.6.6-25 に示す．2005 年に安全性データの包括的な概要がまとめられ，PEG 単独では幅広
い用量範囲で健康リスクをもたらさないことが示された[7]．PEG 及び本剤の安全性はバクスタ
ー社の Expert Report（報告書 RA13RS22R2）中で更に詳細に評価している．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
50
表 2.6.6-25 PEGylated biopharmaceuticals on the market
Product
Neulasta
(Pegfilgrastim)
Cimzia
(Certolizumab Pegol)
Somavert
(Pegvisomant)
Pegasys
(Peginterferon Alfa-2a)
Pegintron
(Peginterferon Alfa-2b)
Mircera
(Epoetin Beta Pegol)
Oncaspara
(Pegaspargase)
Adagena
(Pegademase bovine)
Macugen
(Pegaptanib sodium)
Krystexxaa
(Pegloticase)
Route of
application
s.c.
PEG
g
dose/occasion
6 mg
s.c.
176 mg
s.c.
ca 5 mg
s.c.
0.12 mg
Hepatitis C
40 kDa
(branched 2x20 kDa)
5 kDa x 5 molecules x 9
residues
40 kDa
(branched 2x20 kDa)
12 kDa
s.c.
ca 0.026 mg
Rochec
Renal anemia
30 kDa
i.v./s.c.
0.018 mg
Sigma-tau
Acute lymphoblastic
leukemiae
Severe combined immuno
deficiency (SCID)f
Age related macular
degeneration (AMD)
Chronic gout
5 kDa x 69-82
i.m./i.v.
5 kDa x 11-17
i.m.
40 kDa
(branched 2x20 kDa)
10 kDa x 32 - 40
intravitreous
n.a.; few mg
estimated
n.a.; few mg
estimated
0.24 mg
i.v.
24 mg
Company
Indication
PEG
Amgenb
Neutropenia
20 kDa
UCB
Articular rheumatism
Pfizer
Acromegaly
Rochec
Hepatitis C
Merckd
Sigma-tau
Pfizer
Savient
n.a.: Information not available
a: Not licensed in Japan
b: Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd. in Japan
c: Chugai Pharmaceutical Co., Ltd. in Japan
d: MSD K. K. in Japan
e: Labeled for pediatric use: Clinical study evaluating safety and efficacy included patients from 1-9 years was performed.
f: Indicated for pediatric use from birth, PK sudy in children from 6 weeks to 12 years performed.
g: PEG dose per single administration calculated based on 60 kg body weight or a body surface of 1.6 m2 according to prescribing information.
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
51
本剤は 20 kDa の PEG で修飾されている．同様のサイズの PEG 単独の安全性は Peg-Intron の非
臨床プログラムに反映されている．この 12 kDa のメトキシ-PEG 単独の安全性は，ラット及びサ
ルにおける単回及び反復皮下投与又は静脈内投与，ラット及びウサギにおける胚･胎児発生毒性
試験，並びに遺伝毒性試験を含む幅広い毒性試験により示された[5]．2.6.6.8.2.2 項に記載したよ
うに，20 kDa の非結合 PEG である PEG2ru20KCOOH の安全性もラットへの週 2 回，28 日間静脈
内投与試験で示された．本試験の最高用量は，予定臨床最高用量での平均生涯 PEG 投与量（70
年）の約 10 倍又は本剤単回投与時の PEG 投与量の約 10,000 倍に基づいている．
PEG 結合体は生物製剤部分でのみ分解され，PEG は代謝を受けずに遊離すると考えられる．ま
た，30 kDa よりも小さい PEG は排泄物を介して速やかに排泄される[22]．安全性プロファイルの
徹底的な検討及び PEG の排泄に関する入手可能なデータに基づき，薬理活性を有する生体分子
に結合した PEG は，PEG-生体分子結合物に関する非臨床試験で適切に確認できない安全上の懸
念をもたらすことはないと想定される[21]．既承認 PEG 化生物製剤の非臨床及び臨床安全性プロ
ファイルに関する公表文献では，薬剤の PEG 成分に起因すると考えられる有害作用は示唆され
ていない．非臨床試験において高用量で発現した有害作用は，一般的には PEG が結合する活性
生体分子の過剰な薬理作用であると考察されている．文献に報告されている PEG に関連する唯
一の所見は，高用量の PEG を反復投与した動物試験で認められた特定の種類の細胞における空
胞化である[17][9][2]（Baxter Expert Report RA13RS22R2）．このような所見の確率，本質及び機
能的意義はまだ完全には理解されていないが，本剤の動物試験ではこのような空胞化は発現しな
かったことを注目することが重要である．本剤に適用されている PEG サイズ（20 kDa）及び
PEG 用量は空胞化の発現が想定されない範囲内にある．マウス，ラット，ウサギ及びカニクイザ
ルにおける本剤の非臨床試験では，rFVIII の PEG 化に関連する有害作用は発現しなかった．
ADME 試験では，標識した本剤の極めて高用量をラットに単回静脈内投与しても，投与後 6 週以
内に完全に排泄されることが示された．
定期補充療法の 80 IU FVIII/kg の予定臨床最高用量を考慮すると，PEG 含量は 7.6 µg/kg 又は
0.456 mg（体重 60 kg の場合）となる．この 1 mg 未満の絶対投与量は，Neulasta（s.c.），Cimzia
（s.c.），Somavert（s.c.）及び Krystexxa（i.v.）のような既承認の PEG 化たん白質製剤の PEG 投
与量よりも低い．特に，Cimzia の月 1 回投与（体重 60 kg の場合，40 kDa の PEG 176 mg）と比
較して，本剤を月 10 回投与した時の 1 ヵ月当たりの PEG 投与量（80 IU FVIII/kg を週 2 回投与す
ると，体重 60 kg の場合，PEG 含量は 76 µg/kg 又は 4.56 mg）は Cimzia[3]の約 38 分の 1 である．
PEG の累積投与量は，in vivo での細胞内の蓄積及び空胞化の可能性の考察について，重要な因
子である．EMA の CHMP Safety Working Party は最近，0.4 μmol/kg/月以上の PEG（主に 40 kDa
超）の投与により発現する上衣細胞の空胞化リスクについて考察した[2]．EMA の CHMP Safety
Working Party は小児集団を対象とした長期臨床試験の実施前にこのリスクを検討することを推奨
した．80 IU FVIII/kg（10 回）投与時の PEG 含量 76 µg/kg は µmol に変換可能である．本剤の
rFVIII に結合している PEG の分子量は 20 kDa である．したがって，1 日当たりの PEG 投与量 7.6
µg/kg は 7.6 µg/20,000 µg/µmol x 10 回/月 = 0.0038 µmol/kg/月と等しく，閾値である 0.4 μmol/kg/月
の 105 分の 1 である．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
52
上記から，1）本剤投与時の 1 ヵ月当たりの PEG 投与量は他の既承認 PEG 化製剤よりも少ない，
2）PEG 投与量は動物試験で認められた上衣細胞の空胞化の閾値（0.4 µmol/kg/月以上）よりも低
い，3）本剤に結合する PEG のサイズ（20 kDa）は蓄積のリスクを伴うことなく，生体からの完
全な消失を可能にする，と結論できる．したがって，長期投与時の PEG 量は現時点で安全上の
懸念をもたらすことは少ないか，全くないと考えられる．
以上のように，PEG 及び本剤の安全性を非臨床試験及び広範な文献調査により評価した．本剤
について PEG に関連する安全上の懸念は特定されなかった．
2.6.6.9
考察及び結論
本剤の毒性をラット及びカニクイザルで評価した．
ラットでの 29 日間反復投与毒性試験において，350 及び 700 IU FVIII/kg の用量で有害作用は
認められなかった．700 IU FVIII/kg を投与した動物の肺では，泡沫化マクロファージの発生率／
重症度が対照群と比較して軽微に増加した．この軽微な増加は炎症又は組織傷害，あるいは器官
機能への影響を伴わず，2 週間の無投与期間に回復が示された．したがって，これらの所見は有
害なものとは考えられなかった．1 日目の TK 評価の結果から，適正に投与されていることが示
された．29 日目に検出された FVIII 活性及び rFVIII 結合 PEG レベルの低下は，中和抗体の存在
と相関した．
ラットに 29 日間，15 回隔日投与した時の本剤の NOAEL は 700 IU FVIII/kg であった．
カニクイザルの用量漸増（350，700 又は 1500 IU FVIII/kg）及び反復投与（700 IU FVIII/kg）毒
性試験において，投与に関連した有害作用を示す徴候はなかった．反復投与フェーズにおいて本
剤投与動物のすべてにヒト FVIII 及び PEG-rFVIII に特異的な抗体が発現した．抗体の中和特性は
サルの内因性 FVIII と交差反応する可能性が高く，反復投与後に認められた aPTT の延長と相関
した．
2 週間の回復期及び TK 評価を含めて，カニクイザルに 150，350 及び 700 IU FVIII/kg の用量で
5 日毎に 26 日間（計 6 回）投与した主要な反復投与毒性試験の結果から，本剤の忍容性は良好で
あることが示された．いずれの用量においても毒性徴候はなく，死亡例もなかった．6 回投与後
に発現した赤血球パラメータの低下は，吐血又は血腫を伴う網状赤血球数の増加と共に，交差反
応性の抗 FVIII 中和抗体の発現に起因する血液凝固系の変化を示している可能性がある．本剤を
投与したすべての動物において aPTT の延長が検出され，カニクイザルの FVIII 活性を部分的に
低下させる可能性のある，交差反応性の抗 FVIII 中和抗体の発現が示された．回復期の 12 日目ま
でに aPTT の部分的回復が認められた．本剤を投与したすべての動物において，投与に関連した
ヒト FVIII，PEG-rFVIII 及び PEG に特異的な結合抗体，また本剤に対する中和抗体が発現した．
1 日目と比較して 29 日目に FVIII 活性及び rFVIII 結合 PEG レベルが低下したことは，本剤に対
する中和抗体の存在とよく相関した．本剤に対する抗体の形成は，カニクイザルへの異種たん白
質の反復投与後に想定される免疫反応であり，これは非 PEG 化 FVIII 製剤においてもよく知られ
ている．したがって，本試験での NOAEL は試験した最高用量の 700 IU FVIII/kg であった．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
53
本剤を反復投与したラット及びカニクイザルにおける病理組織学的評価では，諸組織に有害所
見は発現しなかった．重要な点として，カニクイザル及びラットの脳及び脊髄の詳細な病理組織
学的検査において，これらの器官に空胞形成がないことが確認された．
毒性試験で得られた NOAEL を表 2.6.6-26 にまとめる．
表 2.6.6-26 BAX 855: NOAELs from the toxicity studies
(Identical to 表 2.4-4)
Study Type and Duration
NOAEL (IU FVIII/kg)
Single Dose Toxicity
Cynomolgus Monkey
1500
Repeat Dose Toxicity (1 month)
Rat
700
Cynomolgus Monkey
700
Study Number
Safety Factor
1933-017
15 (18.75)
8202366
1933-017
1933-018
7 (8.75)
7 (8.75)
a
a: Safety Factor in relation to maximum anticipated clinical dose of 100 IU FVIII/kg which may only be used over a limited
amount of days prior or after surgeries. In brackets the safety margin in relation to the maximum anticipated long-term
prophylactic dose of 80 IU FVIII/kg.
ラット及びカニクイザルにおける反復投与時の NOAEL は予定臨床最高用量である 100 IU
FVIII/kg の 7 倍，定期補充療法の予定臨床最高用量である 80 IU FVIII/kg の 8.75 倍であることが
わかる．
ヒトの AUC データは，臨床試験において 30，45 及び 60 IU FVIII/kg 投与により得られている．
最高用量である 60 IU FVIII/kg 投与後（臨床第 I 相試験）とカニクイザルへの初回投与後から得
られた AUC 値の比較を表 2.6.6-27 に示す．
表 2.6.6-27 BAX 855: AUC comparison from the Phase I clinical study and cynomolgus
monkeys after first dosing (Based on FVIII activity)
(Identical to 表 2.4-5)
Cynomolgus monkey
(Study 1933-018)
Dose (IU FVIII/kg)
150
350
700
Cynomolgus monkey (Study 1933-018)
AUC after first dosing
a
(h·IU FVIII/mL)
38
105
161
Safety Factor
b
1.1
3.1
4.7
a: Mean AUC based on FVIII activity, sex and lots pooled
b: Safety Factor in comparison to AUC data after maximum dose in the Phase I clinical study (60 IU FVIII/kg, AUC = 34 h·
IU FVIII/mL)
カニクイザルの NOAEL における AUC 値（FVIII 活性に基づく）は，臨床第 I 相試験での平均
AUC 値の 4.7 倍であった．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
54
局所刺激性はラット及びカニクイザルでの反復投与毒性試験において評価した．本剤を投与し
た動物の注射部位での顕微鏡所見は対照動物と同等であり，静脈内投与後に想定される正常反応
と同じであった．また，表示力価 2000 IU FVIII/5 mL バイアルの本剤のウサギでの静脈内，動脈
内及び静脈周囲投与時の局所忍容性は良好であった．
非臨床 in vitro 及び in vivo 試験から，本剤及びアドベイトは自然又は適応免疫系を同程度に活
性化することが示された．両剤はヒト in vitro サイトカイン放出アッセイ及びヒト in vitro 補体活
性化アッセイにおいて類似した免疫原性プロファイルを示した．また，本剤及びアドベイトは検
討したすべての血友病マウスモデル及びカニクイザルにおいて類似した FVIII 免疫原性プロファ
イルを示した．
組織交差反応性試験から，ヒト組織での高親和性抗 PEG 抗体の交差反応性は生じ難いことが
確認された．
非臨床免疫原性評価に基づくと，本剤はアドベイトと類似した FVIII 免疫原性プロファイルを
示している．
また，本剤のたん白質部分の異化後に遊離すると考えられる非結合型 20 kDa モデル PEG であ
る PEG2ru20KCOOH のラットでの 28 日間静脈内反復投与は忍容性が良好であり，NOAEL は試
験した最高用量の 65 mg/kg に設定された．これは定期補充療法の予定臨床最高用量である 80 IU
FVIII/kg を投与した時の 8553 倍に相当し，安全域が大きい（表 2.6.6-28）．
表 2.6.6-28 PEG2ru20KCOOH: NOAEL
(Identical to 表 2.4-6)
Study Type and Duration
Rat
a
NOAEL (mg/kg)
Study Number
Repeat Dose Toxicity (1 month)
65
8298494
Safety Factor
b
8553
a: Dose was based on a typical worst case upper end clinical life-long dose of PEGylated recombinant FVIII (80 IU
FVIII/kg/day, 2 x per week).
b:Safety Factor is based on a PEG dose of 0.095 µg per IU FVIII. The maximum anticipated long-term prophylactic dose of
80 IU FVIII/kg which results in a PEG application of 7.6 µg/kg.
PEG2ru20KCOOH の in vitro 細菌を用いる復帰突然変異試験及び培養ヒトリンパ球を用いる染
色体異常試験，並びに in vivo マウス骨髄小核試験において，遺伝毒性は示されなかった．
ポリソルベート 80 に関連する過敏性反応を除き，本剤の添加物による既知の，あるいは想定
される毒性はない．また，PEG 及び他の PEG 化生物製剤の安全性プロファイルに基づいて，本
剤による臨床治療に関連する可能性のある有害作用は特定されなかった．
2.6.6.10
図表
図表は適切な項に示す．
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
55
参考文献一覧
1. Andrew M, Vegh P, Johnston M, Bowker J, Ofosu F,,Mitchell L. Maturation of the hemostatic
system during childhood. Blood. 1992;80:1998-2005.
2. EMA. CHMP Safety Working Party’s response to the PDCO regarding the use of PEGylated drug
products in the paediatric population EMA/CHMP/SWP/647258/2012; 16 November 2012, London.
3. EMEA, Assessment Report for CIMZIA; Doc. Ref.: EMEA/664021/2009;47 pages.
4. EMEA, Scientific Discussion for ADVATE. 2005;44 pages.
5. EMEA, Scientific Discussion for PegIntron. 2005;19 pages.
6. FDA document “Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody
Products for Human Use”, February 28,1997
7. Fruijtier-Pölloth C. Safety assessment on polyethylene glycols (PEGs) and their derivatives as used
in cosmetic products. Toxicology. 2005;214:1-38.
8. Hummel J, McKendrick S, Brindley C, French R. Exploratory assessment of dose proportionality:
review of current approaches and proposal for a practical criterion. Pharm stat. 2009;8:38-49.
9. Kronenberg S, Baumann A, de Haan L, Hinton HJ, Moggs J, Theil FP, et al. Current challenges and
opportunities in nonclinical safety testing of biologics. Drug Discov Today. 2013;18:1138-1143.
10. Kuhle S, Male C, Mitchell L. Developmental hemostasis: pro- and anticoagulant systems during
childhood. Semin Thromb Hemost. 2003;29:329-338.
11. Manco-Johnson MJ. Development of hemostasis in the fetus and neonate. Thromb Res. 2007;119
Suppl. 1:S4-S5.
12. OECD Guideline for Testing of Chemicals, Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test, OECD
Guideline 474, updated and adopted 21 July 1997.
13. Oldenburg J, Picard JK, Schwaab R, Brackmann HH, Tuddenham EGD, Simpson E. HLA genotype
of patients with severe haemophilia A due to intron 22 inversion with and without inhibitors of factor
VIII. Thromb Haemost. 1997;77:238-242.
14. Pavlova A, Delev D, Lacroix-Desmazes S, Schwaab R, Mende M, Fimmers R, et al. Impact of
polymorphisms of the MHC-class II, IL-10, TNF-a and CTLA-4 genes on inhibitor development in
severe hemophilia A. J Thromb Haemost. 2009;7:2006-2015.
15. Reipert BM, Steinitz KN, van Helden PM, Unterthurner S, Schuster M, Ahmad RU, et al.
Opportunities and limitations of mouse models humanized for HLA class II antigens. J Thromb
Haemost. 2009;7:Suppl 1:92-97.
16. Reipert B, Arruda V, Lillicrap D. Animal models of inhibitors. Haemophilia. 2010;16 Suppl 5:47-53.
ルリオクトコグ アルファ
2.6.6 毒性試験の概要文
ペゴル（遺伝子組換え）
56
17. Rudmann DG, Alston JT, Hanson JC, Heidel S. High molecular weight polyethylene glycol cellular
distribution and PEG-associated cytoplasmic vacuolation is molecular weight dependent and does not
require conjugation to proteins. Toxicol.Pathol. 2013;41:970-983.
18. Smith BP, Vandenhende FR, DeSante KA, Farid NA, Welsch PA, Callaghan JT, et al. Confidence
interval criteria for assessment of dose proportionality. Pharm Res. 2000;17:1278-1283.
19. Sotiriadis A, Makrigiannakis, A, Stefos T, Paraskevaidis E, Kalantaridou SN. Fibrinolytic defects
and recurrent miscarriage. Obstet Gynecol. 2007;109:1146-1155.
20. van Helden PM, Unterthurner S, Hermann C, Schuster M, Ahmad RU, Schiviz AN, et al.
Maintenance and break of immune tolerance against human factor VIII in a new transgenic
hemophilic mouse model. Blood. 2011;118:3698-3707.
21. Webster R, Didier E, Harris P, Siegel N, Stadler J, Tilbury L, et al. PEGylated proteins: evaluation of
their safety in the absence of definitive metabolism studies. Drug Metab Dispos. 2007;35:9-16.
22. Yamaoka T, Tabata Y, Ikada Y. Distribution and tissue uptake of poly(ethylene glycol) with different
molecular weights after intravenous administration to mice. J Pharm Sci. 1994;83:601-606.
23. Forbes B, O'Lone R, Allen PP, Cahn A, Clarke C, Collinge M, et al. Challenges for inhaled drug
discovery and development: Induced alveolar macrophage responses. Adv Drug Deliver Rev.
2014;71:15–33.
24. Nikula JK, McCartney JE, McGovern T, Miller GK, Odin M, Pino MV, et al. STP position paper:
Interpreting the significance of increased alveolar macrophages in rodents following inhalation of
pharmaceutical materials. Toxicol Pathol. 2014;42:472-486.
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
1
2.6.7 毒性試験概要表
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
2
目次
略号一覧 ......................................................................................................................................................... 4
2.6.7
毒性試験概要表 ........................................................................................................................ 6
2.6.7.1
毒性試験： 一覧表 ........................................................................................................... 6
2.6.7.2
トキシコキネティクス： トキシコキネティクス試験の一覧表 ............................... 9
2.6.7.3
トキシコキネティクス： トキシコキネティクス試験成績の一覧 ......................... 10
2.6.7.4
毒性試験： 被験物質（バッチ毎）一覧 ..................................................................... 11
2.6.7.5
単回投与毒性試験 .......................................................................................................... 12
2.6.7.6
反復投与毒性試験： 重要な試験以外の試験 ............................................................. 12
2.6.7.7
反復投与毒性試験： 重要な試験 ................................................................................. 13
2.6.7.8
In Vitro 遺伝毒性試験 .................................................................................................... 22
2.6.7.9
In Vivo 遺伝毒性試験 ..................................................................................................... 22
2.6.7.10
がん原性試験 .................................................................................................................. 22
2.6.7.11
生殖発生毒性試験： 重要な試験以外の試験 ............................................................. 22
2.6.7.12
生殖発生毒性試験：受胎能及び着床までの初期胚発生に関する試験 .................. 22
2.6.7.13
生殖発生毒性試験： 胚・胎児発生に関する試験 ..................................................... 22
2.6.7.14
生殖発生毒性試験：出生前及び出生後の発生並びに母体の機能に関する試験... 22
2.6.7.15
新生児を用いた試験 ...................................................................................................... 23
2.6.7.16
局所刺激性試験 .............................................................................................................. 23
2.6.7.17
その他の毒性試験 .......................................................................................................... 24
表
表 2.6.7-1 Toxicology Overview - Test Article: BAX 855 .......................................................................... 6
表 2.6.7-2 Toxicology Overview - Test Article: PEG2ru20KCOOH........................................................... 8
表 2.6.7-3 Overview of Toxicokinetics Studies - Test Article: BAX 855 .................................................... 9
表 2.6.7-4 Overview of Toxicokinetics Data - Test Article: BAX 855 ...................................................... 10
表 2.6.7-5 Toxicology: Drug Substance Test Article: BAX 855 ................................................................ 11
表 2.6.7-6 Single dose Toxicity - Test Article: BAX 855 .......................................................................... 12
表 2.6.7-7 Repeat dose Toxicity: Non-pivotal Studies - Test Article: BAX 855 ....................................... 12
表 2.6.7-8 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies – Toxicokinetics - Test Article: BAX 855 ................... 13
表 2.6.7-9 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies - Main Study - Test Article: BAX 855 ......................... 14
表 2.6.7-10 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies – Recovery Phase - Test Articles: BAX 855 .............. 16
表 2.6.7-11 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies - Antibody Assessment - Test Articles: BAX
855 ..................................................................................................................................................... 17
表 2.6.7-12 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies – Toxicokinetics - Test Article: BAX 855 ................. 18
表 2.6.7-13 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies - Main Study - Test Article: BAX 855 ....................... 20
表 2.6.7-14 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies – Recovery Phase - Test Articles: BAX 855 .............. 21
表 2.6.7-15 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies - Antibody Assessment - Test Articles: BAX
855 ..................................................................................................................................................... 21
表 2.6.7-16 Local Tolerance - Test Article: BAX 855 ............................................................................... 23
表 2.6.7-17 Immunogenicity Studies - Test Article: BAX 855 .................................................................. 24
表 2.6.7-18 Comparative Immunogenicity Study conducted with BAX 855 in Mice ................................ 25
表 2.6.7-19 Comparative Immunogenicity Study conducted with BAX 855 in Mice ................................ 25
表 2.6.7-20 Comparative Immunogenicity Study conducted with BAX 855 in Mice ................................ 26
表 2.6.7-21 Comparative Immunogenicity Study conducted with BAX 855 in Mice ................................ 27
表 2.6.7-22 Immunogenicity Study conducted with BAX 855 in Cynomolgus Monkeys ......................... 28
表 2.6.7-23 Tissue Cross Reactivity: In Vitro - Test Article: BAX 855 ..................................................... 29
表 2.6.7-24 Other Studies: Repeat-dose Toxicity - Test Article: PEG2ru20KCOOH................................ 30
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
3
表 2.6.7-25 Other Studies: Bacterial Reverse Mutation Assay - Test Article: PEG2ru20KCOOH ........... 31
表 2.6.7-26 Other Studies: Chromosomal Aberrations Assay - Test Article: PEG2ru20KCOOH............. 32
表 2.6.7-27 Other Studies: Bone Marrow Micronucleus Assay - Test Article: PEG2ru20KCOOH .......... 34
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
4
略号一覧
略号
英語
A/G ratio
albumin/globulin ratio
日本語
アルブミン／グロブリン比
アルカリホスファターゼ
ALP
alkaline phosphatase
ALT
alanine aminotransferase
ALYM
absolute lymphocyte
aPTT
activated partial thromboplastin time
AST
aspartate aminotransferase
AUC
area under the curve
AUC0-tlast
area under the curve from 0 to the last
quantifiable sampling time point
BID
bis in die
ca
circa
Cmax
maximum concentration
dL
deciliter
ELISA
enzyme-linked immunosorbent assay
fL
femtoliter
FVIII
factor VIII
血液凝固第 VIII 因子
GLDH
glutamate dehydrogenase
グルタミン酸脱水素酵素
GLP
Good Laboratory Practice
医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施
の基準
HCRE
creatinine
クレアチニン
HDW
haemoglobin distribution width
ヘモグロビン分布幅
HPLC
high performance liquid
chromatography
高速液体クロマトグラフィー
IgG
immunoglobulin G
IN PHOS
inorganic phosphorous
INPT
prothrombin time
IU
international unit
免疫グロブリン G
無機リン
プロトロンビン時間
国際単位
ko
knock out
ノックアウト
LPS
lipopolysccharide
リポポリサッカライド
LYM
lymphocyte
リンパ球
MPV
mean platelet volume
MTD
maximum tolerated dose
平均血小板容積
最大耐量
NCE
normochromatic erythrocyte
正染性赤血球
NEUT
neutrophils
好中球
NOAEL
no observed adverse effect level
無毒性量
NZW
New Zealand White
PBS
phosphate buffered saline
PCE
polychromatic erythrocyte
PDW
platelets distribution width
PEG
polyethylene glycol
RBC
red blood cell
RDT
repeat dose toxicity
ニュージーランド白色（ウサギ）
リン酸緩衝生理食塩液
多染性赤血球
血小板分布幅
ポリエチレングリコール
赤血球
反復投与毒性
アラニンアミノ基転移酵素
リンパ球数の絶対値
活性化部分トロンボプラスチン時間
アスパラギン酸アミノ基転移酵素
曲線下面積
時間 0 から測定可能な最終採血時点まで
の曲線下面積
1日2回
約
最高濃度
デシリットル
酵素標識免疫吸着測定法
フェムトリットル
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
rFVIII
recombinant factor VIII
S.E.
standard error
TAT
thrombin-antithrombin complex
TK
toxicokinetic(s)
TOT CHOL
total cholesterol
5
遺伝子組換え型ヒト血液凝固第 VIII 因子
標準誤差
トロンビン-アンチトロンビン複合体
トキシコキネティクス
総コレステロール
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
2.6.7
ペゴル（遺伝子組換え）
6
毒性試験概要表
本剤の毒性試験概要を下表に示す．
2.6.7.1
毒性試験： 一覧表
Type of Study
Single-dose Toxicity
Repeat-dose Toxicity
Genotoxicity
Carcinogenicity
Reproductive and
Developmental
Toxicity
Local Tolerance
Species and Strain
Cynomolgus Monkey
Rat
Cynomolgus Monkey
Cynomolgus Monkey
Not conducted
Not conducted
GLP
Compliance
Yes
Yes
Yes
Yes
Testing
Facility
Yes
Covancec
8202366
Yes
Baxter 20d
PV2651201g
b
c
b
b
Study No.
1933-017
8202366
1933-017
1933-018
Not conducted
Rat
15 doses every other day
Cynomolgus Monkey
Intravenous
Intravenous
Intraarterial
Paravenous
Intravenous
Human whole blood
In vitro
Incubation of 20-22 h
Human plasma
In vitro
Incubation of 1 h
Rabbit
(NZW)
Immunogenicity
表 2.6.7-1 Toxicology Overview - Test Article: BAX 855
Method of
Doses (IU
Duration of Dosing
Administration
FVIII/kg)a
Intravenous
Bolus
350, 700, 1500
Intravenous
15 doses every other day
350, 700
Intravenous
6 doses every 5 days
700
Intravenous
6 doses every 5 days
150, 350, 700
bolus
6 doses every 5 days
350, 700
5 mL
5 mL
0.5 mL
150, 350, 700
0.05, 0.5, 5
µg/mL:
ADVATE or
BAX 855, 500
pg/mL: LPS
0.05, 0.5, 5
µg/mL:
ADVATE or
BAX 855, 10
µg/mL:
zymosan
Yes
b
No
Baxter 72f
IVFS_001_10
No
Baxter 72f
IVFS_002_10
1933-018
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
Type of Study
Tissue Cross Reactivity
ペゴル（遺伝子組換え）
7
表 2.6.7-1 Toxicology Overview - Test Article: BAX 855（続き）
Method of
Doses (IU
GLP
Species and Strain
Duration of Dosing
Administration
FVIII/kg)a
Compliance
E17 FVIII ko human
MHC-class II (HLADR15) transgenic mice
E17 FVIII ko mice on a
Balb/c background
Intravenous
8 doses once weekly
8, 40 µg/kgi
No
E17 FVIII ko mice on a
C57BL/6 background
E17 FVIII ko human
FVIII transgenic mice
E17 FVIII ko HLADRB1*1501 mice
Intravenous
8 doses once weekly
8, 40 µg/kgi
No
E17 FVIII ko human
FVIII transgenic mice
Cynomolgus Monkey
Intravenous
8 doses once weekly
8, 40 µg/kgi
Yes
0.5 µg/mL:
Human
In vitro
Yes
Anti-PEG-
a: Unless otherwise specified. For single-dose toxicity and repeat-dose toxicity, the highest NOAEL is underlined.
b:
, Germany
c:
, England
d: Baxter Innovations GmbH, Industriestrasse 20, A-1220 Vienna, Austria
e:
, UK
f: Baxter Innovations GmbH, Industriestrasse 72, A-1220 Vienna, Austria
g: Investigation of BAX 855 with a nominal potency of 2000 IU FVIII/vial
h: Investigation of BAX 855 with different content of aggregates ( % aggregates versus
% aggregates)
i: Protein doses of 8 and 40 µg/kg correlate to activity-based doses of approximately 50 and 250 IU FVIII/kg, respectively.
Testing
Facility
Study No.
Baxter 72f
IMM_R&D_
012_11
Baxter 72f
IMM_R&D_
025_12h
b
e
8220805
GLP2572
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
Type of Study
Repeat-dose Toxicity
Genotoxicity
ペゴル（遺伝子組換え）
8
表 2.6.7-2 Toxicology Overview - Test Article: PEG2ru20KCOOH
Method of
Doses
GLP
Species and Strain
Duration of Dosing
Administration
(mg/kg)a
Compliance
Rat
Intravenous
Twice weekly
0.65, 6.5, 65
Yes
100, 333, 1000,
Salmonella typhimurium
In vitro
52 ± 4 hours
3330, 5000
No
and Escherichia coli
μg/plate
Initial assay:
1720, 2450,
3500, 5000
Cultured human
For 3 or approx. 22 hours
μg/mL
peripheral blood
In vitro
without S9 mix, and for 3
No
Confirmatory
lymphocytes
hours with S9 mix
assay: 2500,
3200, 4000,
5000 μg/mL
BID with an interval of
500, 1000,
Mouse
Intravenous
No
approx. 1-2 hours
2000
a: Unless otherwise specified. For repeat-dose toxicity, the highest NOAEL is underlined.
b:
, England
c:
, USA
Testing
Facility
Study No.
b
8298494
c
6291-259
c
6291-260
c
6291-261
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
2.6.7.2
ペゴル（遺伝子組換え）
9
トキシコキネティクス： トキシコキネティクス試験の一覧表
表 2.6.7-3 Overview of Toxicokinetics Studies - Test Article: BAX 855
Type of Study
Single Dose Toxicity Study
3-month Range-finding Study
2-week Toxicity Study
1-month Toxicity Study
6-month Toxicity Study
9-month Toxicity Study
Carcinogenicity Study
Test System
not conducted
not conducted
not conducted
Rat
Cynomolgus Monkey
Cynomolgus Monkey
not conducted
not conducted
not conducted
Method of Administration
Doses (IU FVIII/kg)
GLP
Compliance
Study
Number
Intravenous
Intravenous
Intravenous
350, 700
700
150, 350, 700
Yes
Yes
Yes
8202366
1933-017
1933-018
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
2.6.7.3
ペゴル（遺伝子組換え）
10
トキシコキネティクス： トキシコキネティクス試験成績の一覧
Dose (IU FVIII/kg)
表 2.6.7-4 Overview of Toxicokinetics Data - Test Article: BAX 855
Rat/8202366a
Cynomolgus Monkey/1933-018a
M: 9
F: 9
150
350
700
-
-
150
350
700
-
-
150
350
700
751
1730
496
1251
150
350
700
166
315
154
361
Rat: Mean of 2 or 3 animals/sex
Cynomolgus Monkey: Geometric mean of 2 or 3 animals/sex
- not available
a: For species comparison, only Day 1 TK data is shown
b: h·IU FVIII/mL
c: IU FVIII/mL
d: h·ng rFVIII-bound PEG/mL
e: ng rFVIII-bound PEG/mL
M: 9
F: 9
M: 2/3
AUC0-tlast - Based on FVIII Activityb
21
71
116
Cmax - Based on FVIII Activityc
3.4
8.0
14.7
AUC0-tlast - Based on rFVIII-bound PEGd
620
1309
869
1662
2911
1932
2936
Cmax - Based on rFVIII-bound PEGe
76
180
179
203
431
370
388
F: 2/3
M: 2/3
F: 2/3
79
141
159
52
136
201
22
90
170
3.4
7.8
14.0
3.4
7.8
13.0
2.7
7.3
13.4
489
1154
3839
854
1747
4292
589
1655
3904
72
167
382
101
190
411
80
183
368
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
2.6.7.4
Lot No.
Proposed
Specification:
ペゴル（遺伝子組換え）
11
毒性試験： 被験物質（バッチ毎）一覧
1
2
IU/mg
表 2.6.7-5 Toxicology: Drug Substance Test Article: BAX 855
Specified Item
3
4
5
6
7
IU/mL
µg/mL
µg/mL
Mol/mol
Study Number
Type of Study
8202366,
1933-017
8202366,
1933-017,
RDT Rat,
MTD Monkey
RDT Rat,
MTD Monkey,
Immunogenicity
Monkey,
8220805,
IMM_R&D_012_11,
IMM_R&D_025_12
1933-018,
8220805,
IMM_R&D_012_11
1933-018,
IMM_R&D_025_12
1
2
3
4
5
6
7
Immunogenicity
Mouse,
Immunogenicity
Mouse
RDT Monkey,
Immunogenicity
Monkey,
Immunogenicity
Mouse
RDT Moneky
Immunogenicity
Mouse
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
2.6.7.5
Species/
Strain
Cynomolgus
Monkey
2.6.7.6
Species/
Strain
Cynomolgus
Monkey
ペゴル（遺伝子組換え）
12
単回投与毒性試験
Method of
Administration
(Vehicle/
Formulation)
Intravenous
表 2.6.7-6 Single dose Toxicity - Test Article: BAX 855
Observed
Doses
Gender and
Maximum Non- Approximate Lethal
(IU FVIII/kg)
No. Per Group
lethal Dose
Dose (IU FVIII/kg)
(IU FVIII/kg)
350, 700, 1500
2M/2F
1500
> 1500
Noteworthy
Findings
Study Number
None
1933-017
反復投与毒性試験： 重要な試験以外の試験
表 2.6.7-7 Repeat dose Toxicity: Non-pivotal Studies - Test Article: BAX 855
Method of
Administration
(Vehicle/
Formulation)
Duration of
Dosing
Doses
(IU FVIII/kg)
Gender and
No. Per Group
NOAEL
(IU FVIII/kg)
Noteworthy
Findings
Study Number
Intravenous
4 weeks
700
2M/2F
700
None
1933-017
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
2.6.7.7
ペゴル（遺伝子組換え）
13
反復投与毒性試験： 重要な試験
表 2.6.7-8 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies – Toxicokinetics - Test Article: BAX 855
Species/ Strain: Rat / HsdHan™WIST
Title: BAX 855: 29 Day Intravenous (Bolus) Administration Toxicity Study in the Rat Followed by a 2
Week Treatment-free Period with an Assessment of Effects on Male Fertility
Duration of Dosing: 15 every other day doses (1 month)
Study No. 8202366
Initial Age: 7-9 weeks
Duration of Postdose: 2 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Intravenous
Special Features: none
Vehicle/Formulation: Formulation buffer
NOAEL: 700 IU FVIII/kg
Dose per day IU FVIII/kg
0 (Vehicle)
350 (Lot 1a)
350 (Lot 2b)
700 (Lot 1a)
700 (Lot 2b)
Number of Animals
M: 3
F: 3
M: 9
F: 9
M: 9
F: 9
M: 9
F: 9
M: 9
F: 9
Died or Sacrificed Moribund
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
Toxicokinetics Based on rFVIII-bound PEG (tlast = 48 h)
AUC 0-tlast (h•ng rFVIII751
496
1309
869
1730
1251
2911
1932
bound PEG/mL) at day 1
AUC 0-tlast (h•ng rFVIII15
7
32
6
118
127
183
6
bound PEG/mL) at day 29
Ratio of AUCs (day 29/day
0.019
0.014
0.024
0.007
0.068
0.102
0.063
0.003
1)
Cmax (ng rFVIII-bound
166
154
180
179
315
361
431
370
PEG/mL) at day 1
Cmax (ng rFVIII-bound
29
9
26
23
78
90
31
10
PEG/mL) at day 29
Ratio of Cmax (day 29/day 1)
0.177
0.059
0.146
0.127
0.246
0.249
0.072
0.027
TK: Mean of 2 or 3 animals/sex
-: not available
a: Lot 1 refers to BAX 855 lot
b: Lot 2 refers to BAX 855 lot
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
14
表 2.6.7-9 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies - Main Study - Test Article: BAX 855
Species/ Strain: Rat / HsdHan™WIST
Title: BAX 855: 29 Day Intravenous (Bolus) Administration Toxicity Study in the Rat Followed by a 2
Week Treatment-free Period with an Assessment of Effects on Male Fertility
Duration of Dosing: 15 every other day doses (1 month)
Study No. 8202366
Initial Age: 7-9 weeks
Duration of Postdose: 2 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Intravenous
Special Features: none
Vehicle/Formulation: Formulation buffer
NOAEL: 700 IU FVIII/kg
Dose per day IU FVIII/kg
0 (Vehicle)
350 (Lot 1a)
350 (Lot 2b)
700 (Lot 1a)
700 (Lot 2b)
Number of Animals
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
Died or Sacrificed Moribund
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
Primary Body Weight, Food Consumption, Observations, Ophthalmic Evaluation
No noteworthy findings.
Primary Hematology, Serum Chemistry, Urinalysis, Macropathology, Sperm Analysis, Organ Weights and Histopathology Evaluation
Hematology
RBC (1012/L)
8.70
7.63
8.91
7.84
8.79
8.36g
8.87
8.15e
8.66
8.46k
g
j
HDW (g/dL)
2.41
1.99
2.59
2.01
2.70
2.25
2.28
1.98
2.75
2.17
MPV (fl)
7.5
7.4
7.8
7.2
7.3 excl
7.7
7.6
7.2
7.5
8.1j
excl
j
PDW (%)
55.3
59.0
60.9
56.5
45.8
51.9
55.9
56.7
47.9
49.6j
c
j
INPT (secs)
12.4
9.6
10.1
8.9
10.3
9.0
10.2
9.3
9.7
8.7
Serum Chemistry
AST (IU/L)
83
59
113
62
74
69
145e
63
81
68
g
ALT (IU/L)
58
40
89
45
78
48
101e
47
61
45
ALP (IU/L)
78
33
94d
35
80
36
76
34
82
33
h
j
Sodium (mmol/L)
143
143
142
144
141
143
144
144
141
142
Calcium (mmol/L)
2.51
2.68
2.55
2.71
2.46
2.54i
2.60f
2.68
2.50
2.54l
IN PHOS (mmol/L)
1.7
2.2
1.7
2.3
1.7
2.1
1.8
2.2
2.1j
2.1
e
A/G ratio
1.9
2.4
1.9
2.6
2.0
2.6
1.8
2.8
1.9
2.6
TOT CHOL (mmol/L)
1.5
1.7
1.5
1.6
1.2
1.3g
1.6
1.8
1.8
1.4
j
HCRE (µmol/L)
31
29
28
30
27
31
28
30
26
32
Urinalysis
No treatment related findings.
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
15
表 2.6.7-9 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies - Main Study - Test Article: BAX 855（続き）
Species/ Strain: Rat / HsdHan™WIST
Title: BAX 855: 29 Day Intravenous (Bolus) Administration Toxicity Study in the Rat Followed by a 2
Week Treatment-free Period with an Assessment of Effects on Male Fertility
Duration of Dosing: 15 every other day doses (1 month)
Study No. 8202366
Initial Age: 7-9 weeks
Duration of Postdose: 2 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Intravenous
Special Features: none
Vehicle/Formulation: Formulation buffer
NOAEL: 700 IU FVIII/kg
Dose per day IU FVIII/kg
0 (Vehicle)
350 (Lot 1a)
350 (Lot 2b)
700 (Lot 1a)
700 (Lot 2b)
Number of Animals
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
Macropathology, Organ Weights
No noteworthy findings.
Sperm Analysis
There was no adverse effect following treatment or at the end of the recovery period on sperm motility, concentration or morphology.
Histopathology
Lung – foamy macrophages
minimal
2
0
1
1
2
2
5
4
6
3
slight
0
0
0
0
0
0
0
1
1
0
Hematology: Mean of 10 animals/sex
a: Lot 1 refers to BAX 855 lot
b: Lot 2 refers to BAX 855 lot
excl: Group excluded from analysis
c: p<0.05 – 350 IU FVIII/kg (Lot 1) compared to vehicle control (Dunnett's test)
d: p<0.01 – 350 IU FVIII/kg (Lot 1) compared to vehicle control (Dunnett's test)
e: p<0.05 – 700 IU FVIII/kg (Lot 1) compared to vehicle control (Dunnett's test)
f: p<0.01 – 700 IU FVIII/kg (Lot 1) compared to vehicle control (Dunnett's test)
g: p<0.05 – 350 IU FVIII/kg (Lot 2) compared to vehicle control (Dunnett's test)
h: p<0.01 – 350 IU FVIII/kg (Lot 2) compared to vehicle control (Dunnett's test)
i: p<0.001 – 350 IU FVIII/kg (Lot 2) compared to vehicle control (Dunnett's test)
j: p<0.05 – 700 IU FVIII/kg (Lot 2) compared to vehicle control (Dunnett's test)
k: p<0.01 – 700 IU FVIII/kg (Lot 2) compared to vehicle control (Dunnett's test)
l: p<0.001 – 700 IU FVIII/kg (Lot 2) compared to vehicle control (Dunnett's test)
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
16
表 2.6.7-10 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies – Recovery Phase - Test Articles: BAX 855
Species/ Strain: Rat / HsdHan™WIST
Title: BAX 855: 29 Day Intravenous (Bolus) Administration Toxicity Study in the Rat Followed by a 2
Week Treatment-free Period with an Assessment of Effects on Male Fertility
Duration of Dosing: 15 every other day doses (1 month)
Study No. 8202366
Initial Age: 7-9 weeks
Duration of Postdose: 2 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Intravenous
Special Features: none
Vehicle/Formulation: Formulation buffer
NOAEL: 700 IU FVIII/kg
Dose per day IU FVIII/kg
0 (Vehicle)
350 (Lot 1a)
350 (Lot 2b)
700 (Lot 1a)
700 (Lot 2b)
Number of Animals
M: 0
F: 0
M: 5
F: 4
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
Died or Sacrificed Moribund
0
0
0
1c
0
0
0
0
0
0
Primary Body Weight, Food Consumption, Observations, Ophthalmic Evaluation
No noteworthy findings.
Hematology, Serum Chemistry, Urinalysis, Macropathology
No noteworthy findings.
Histopathology
Lung – foamy macrophages
minimal
0
0
2
0
1
2
2
2
1
0
slight
0
0
0
0
0
1
0
0
0
0
a: Lot 1 refers to BAX 855 lot
b: Lot 2 refers to BAX 855 lot
c: On Day 27, female No.
(350 IU FVIII/kg) died immediately after dosing. The death of this animal was considered not to be BAX 855-related.
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
17
表 2.6.7-11 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies - Antibody Assessment - Test Articles: BAX 855
Species/ Strain: Rat / HsdHan™WIST
Title: BAX 855: 29 Day Intravenous (Bolus) Administration Toxicity Study in the Rat Followed by a 2
Week Treatment-free Period with an Assessment of Effects on Male Fertility
Duration of Dosing: 15 every other day doses (1 month)
Study No. 8202366
Initial Age: 7-9 weeks
Duration of Postdose: 2 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Intravenous
Special Features: none
Vehicle/Formulation: Formulation buffer
NOAEL: 700 IU FVIII/kg
Dose per day IU FVIII/kg
0 (Vehicle)
350 (Lot 1a)
350 (Lot 2b
700 (Lot 1a)
700 (Lot 2b)
Number of Animals
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
Died or Sacrificed Moribund
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
All animals treated with either of two lots of BAX 855 included in this study developed binding antibodies with specificity for human FVIII, PEG rFVIII and PEG.
Antibody titers were in the same range for both lots of BAX 855 included in this study. All antibodies were neutralizing against FVIII activity and against PEGrFVIII activity.
a: Lot 1 refers to BAX 855 lot
b: Lot 2 refers to BAX 855 lot
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
18
表 2.6.7-12 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies – Toxicokinetics - Test Article: BAX 855
Species/ Strain: Cynomolgus
Report Title: BAX NHL 855: 4-Week Intravenous Administration Toxicity Study in the Cynomolgus
Monkey
Monkey with a Two Week Recovery Phase
Duration of Dosing: Every fifth day doses (1 month)
Study No. 1933-018
Initial Age: 3-4 years
Duration of Postdose: 2 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Intravenous
Special Features: none
Vehicle/Formulation: Formulation buffer
NOAEL: 700 IU FVIII/kg
Dose per day
0
a
150 (Lot 1 )
150 (Lot 2b)
350 (Lot 1a)
350 (Lot 2b)
700 (Lot 1a)
700 (Lot 2b)
IU FVIII/kg
(Vehicle)
Number of
M:0 F:0
M: 2
F: 3
M: 3
F: 2
M: 2
F: 3
M: 3
F: 2
M: 2
F: 3
M: 3
F: 2
Animals
Died or
Sacrificed
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
Moribund
Toxicokinetics Based on rFVIII-bound PEG
AUC0-tlast (h•ng
rFVIII-bound
620
489
854
589
1662
1154
1747
1655
2936
3839
4292
3904
PEG/mL) at
day 1
AUC0-tlast (h•ng
rFVIII-bound
0.4
0.3
0.3
0.5
7.9
6.2
5.7
38.0
PEG/mL) at
day 26
Ratio of AUCs
0.00023 0.00022 0.00017 0.00030 0.00270 0.00162 0.00133 0.00973
(day 26/day 1)
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
19
表 2.6.7-12 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies – Toxicokinetics - Test Article: BAX 855（続き）
Species/ Strain: Cynomolgus
Report Title: BAX NHL 855: 4-Week Intravenous Administration Toxicity Study in the Cynomolgus
Monkey
Monkey with a Two Week Recovery Phase
Duration of Dosing: Every fifth day doses (1 month)
Study No. 1933-018
Initial Age: 3-4 years
Duration of Postdose: 2 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Intravenous
Special Features: none
Vehicle/Formulation: Formulation buffer
NOAEL: 700 IU FVIII/kg
Dose per day
0
a
150 (Lot 1 )
150 (Lot 2b)
350 (Lot 1a)
350 (Lot 2b)
700 (Lot 1a)
700 (Lot 2b)
IU FVIII/kg
(Vehicle)
Number of
M:0 F:0
M: 2
F: 3
M: 3
F: 2
M: 2
F: 3
M: 3
F: 2
M: 2
F: 3
M: 3
F: 2
Animals
Cmax (ng
rFVIII-bound
76
72
101
80
203
167
190
183
388
382
411
368
PEG/mL) at
day 1
Cmax (ng
rFVIII-bound
9.1
6.1
7.3
12.1
27.0
40.7
73.8
86.3
PEG/mL) at
day 26
Ratio of Cmax
0.0445
0.0366
0.0383
0.0663
0.0695
0.1063
0.1796 0.2344
(day 26/day 1)
TK: Geometric mean of 2 or 3 animals/sex
-: not available
a: Lot 1 refers to BAX 855 Lot
b: Lot 2 refers to BAX 855 Lot
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
20
表 2.6.7-13 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies - Main Study - Test Article: BAX 855
Species/ Strain: Cynomolgus Monkey
Report Title: BAX NHL 855: 4-Week Intravenous Administration Toxicity Study in the Cynomolgus
Monkey with a Two Week Recovery Phase
Duration of Dosing: Every fifth day doses (1 month)
Study No. 1933-018
Initial Age: 3-4 years
Duration of Postdose: 2 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Intravenous
Special Features: none
Vehicle/Formulation: Formulation buffer
NOAEL: 700 IU FVIII/kg
Dose per day IU FVIII/kg
0 (Vehicle)
150a
350a
700a
Number of Animals
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
Died or Sacrificed Moribund
0
0
0
0
0
0
0
0
Primary Body Weight, Clinical Observations, Ophthalmic Evaluation
Body Weight
No differences between treatment groups.
Clinical Observations
For animals
M and
M (700 IU FVIII/kg) and
F (350 IU FVIII/kg) emesis of bloody fluid was noted on single days
after the fifth or sixth (last) application, respectively. For animals
M (150 IU FVIII/kg),
M (700 IU FVIII/kg) and
F (350 IU FVIII/kg) large hematoma of different locations were observed during the last week of the dosing phase.
Ophthalmoscopy
No noteworthy findings.
Primary Hematology, Serum Chemistry, Urinalysis, Macropathology, Organ Weights and Histopathology Evaluation
Hematology
TAT (µg/L)
40.91
82.92
22.75
10.64c
32.00
23.92
37.27
25.97
c
aPTT (s)
23.6
22.7
39.8
33.4
44.3e
37.8e
44.8h
41.2g
e
d
g
LYM (%)
34.7
17.7
20.4
16.6
14.5
11.8
16.7
11.2f
NEUT (%)
61.3
77.4
75.1b
79.7
81.3e
84.9e
80.3g
82.3
9
b
e
ALYM (10 /L)
5.45
4.27
3.54
2.88
2.84
2.00
3.88
2.22g
Serum Chemistry
GLDH (U/L)
17.42
80.52
17.81
23.27
13.96
14.58
15.09
12.96f
Urinalysis, Macropathology, Organ Weights, Histopathology
No treatment related findings.
Hematology and Serum Chemistry: Mean of 5 animals/sex
a: Pooled values for both lots of BAX 855, b: p<0.05 – 150 IU FVIII/kg compared to vehicle control (Dunnett's test), c: p<0.01 – 150 IU FVIII/kg compared to vehicle control
(Dunnett's test), d: p<0.05 – 350 IU FVIII/kg compared to vehicle control (Dunnett's test), e: p<0.01 - 350 IU FVIII/kg compared to vehicle control (Dunnett's test), f: p<0.05
- 700 IU FVIII/kg compared to vehicle control (Dunnett's test), g: p<0.01 - 700 IU FVIII/kg compared to vehicle control (Dunnett's test), h: p<0.001 - 700 IU FVIII/kg
compared to vehicle control (Dunnett's test)
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
21
表 2.6.7-14 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies – Recovery Phase - Test Articles: BAX 855
Species/ Strain: Cynomolgus Monkey
Report Title: BAX NHL 855: 4-Week Intravenous Administration Toxicity Study in the Cynomolgus
Monkey with a Two Week Recovery Phase
Duration of Dosing: Every fifth day doses (1 month)
Study No. 1933-018
Initial Age: 3-4 years
Duration of Postdose: 2 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Intravenous
Special Features: none
Vehicle/Formulation: Formulation buffer
NOAEL: 700 IU FVIII/kg
Dose per day IU FVIII/kg
0 (Vehicle)
150a
350a
700a
Number of Animals
M: 2
F: 2
M: 2
F: 2
M: 2
F: 2
M: 2
F: 2
Died or Sacrificed Moribund
0
0
0
0
0
0
0
0
Primary Body Weight, Observations, Ophthalmic Evaluation, Primary Hematology, Serum Chemistry, Urinalysis, Macropathology, Organ Weights and
Histopathology Evaluation
No noteworthy findings.
a: Pooled values for both lots of BAX 855
表 2.6.7-15 Repeat-dose Toxicity: Pivotal Studies - Antibody Assessment - Test Articles: BAX 855
Species/ Strain: Cynomolgus Monkey
Report Title: BAX NHL 855: 4-Week Intravenous Administration Toxicity Study in the Cynomolgus
Monkey with a Two Week Recovery Phase
Duration of Dosing: Every fifth day doses (1 month)
Study No. 1933-018
Initial Age: 3-4 years
Duration of Postdose: 2 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Intravenous
Special Features: none
Vehicle/Formulation: Formulation buffer
NOAEL: 700 IU FVIII/kg
Dose per day IU FVIIIkg
0 (Vehicle)
150a
350a
700a
Number of Animals
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
Died or Sacrificed Moribund
0
0
0
0
0
0
0
0
All animals treated with BAX 855 developed treatment-related binding antibodies with specificity to human FVIII, PEG-rFVIII and PEG. None of the cynomolgus
monkeys treated with formulation buffer control developed antibodies with specificity for human FVIII, PEG-rFVIII or PEG. 28 out of 30 animals from the BAX
855-treated groups developed neutralizing antibodies against human FVIII on day 31. All animals that developed binding antibodies also developed neutralizing
antibodies against BAX 855. No neutralizing antibodies were found in the pre-dose samples.
a: Pooled values for both lots of BAX 855
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
2.6.7.8
ペゴル（遺伝子組換え）
In Vitro 遺伝毒性試験
該当資料なし
2.6.7.9
In Vivo 遺伝毒性試験
該当資料なし
2.6.7.10
がん原性試験
該当資料なし
2.6.7.11
生殖発生毒性試験： 重要な試験以外の試験
該当資料なし
2.6.7.12
生殖発生毒性試験：受胎能及び着床までの初期胚発生に関する試験
該当資料なし
2.6.7.13
生殖発生毒性試験： 胚・胎児発生に関する試験
該当資料なし
2.6.7.14
生殖発生毒性試験：出生前及び出生後の発生並びに母体の機能に関する試験
該当資料なし
22
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
2.6.7.15
ペゴル（遺伝子組換え）
23
新生児を用いた試験
該当資料なし
2.6.7.16
Species/
Strain
Rabbit
(NZW)
局所刺激性試験
Method of
Administration
Intravenous
Intraarterial
Paravenous
表 2.6.7-16 Local Tolerance - Test Article: BAX 855
Doses
Gender and
Noteworthy Findings
(mL/Animal)
No. Per Group
5
5
6M/6F
No clinical and histological findings.
0.5
a: Investigation of BAX 855 with a nominal potency of 2000 IU FVIII/5 mL vial
Study Number
PV2651201a
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
2.6.7.17
24
その他の毒性試験
Test System
Human whole blood
Human plasma
Species/ Strain
Mouse / 3 different
models
Mouse / 2 different
models
Cynomolgus
Monkey
ペゴル（遺伝子組換え）
表 2.6.7-17 Immunogenicity Studies - Test Article: BAX 855
Duration of
Gender and No.
Method
Doses
Noteworthy Findings
Dosing
Per Group
0.05, 0.5, 5 µg/mL:
Human whole blood
BAX 855 and ADVATE
In vitro,
Incubation of
ADVATE or BAX 855,
(4M/4F healthy
induced a similar cytokine
immunoassay
20-22 h
500 pg/mL: LPS
donors)
release
Both BAX 855 and
Human plasma
0.05, 0.5, 5 µg/mL:
ADVATE induced low
(4M/4F healthy
In vitro, ELISA Incubation of 1 h ADVATE or BAX 855,
levels of complement
donors)
10 µg/mL: zymosan
activation
Method of
Duration of
Gender and No.
a
Doses
Noteworthy Findings
Administration
Dosing
Per Group
8, 40 µg/kg: ADVATE,
ADVATE and BAX 855
BAX 855 or highly
expressed a similar
immunogenic PEG8 doses given at
Intravenous
10M or 5M/5F
immunogenicity profile in all
rFVIII control,
weekly intervals
hemophilic mouse models
Formulation buffer
control: 200 μL
Two lots BAX 855
containing different
aggregate levels expressed a
8 doses given at 8, 40 µg/kg: BAX 855.
similar immunogenicty
Intravenous
10M or 5M/5F
weekly intervals
40 µg/kg: ADVATE
profile in both hemophilic
mouse models when
compared to ADVATE
BAX 855 and ADVATE
8 doses given at 8, 40 µg/kg: ADVATE
showed a similar
Intravenous
2Mb/2F
weekly intervals
or BAX 855
immunogenicity profile in
the cynomolgus monkey
a: Protein doses of 8 and 40 µg/kg correlate to activity-based doses of approximately 50 and 250 IU FVIII/kg, respectively.
b: Animal
M (40 μg/kg, BAX 855) was killed in moribund condition on day 29 of the study
c: Investigation of BAX 855 with different content of aggregates ( % aggregates versus
% aggregates)
Study Number
IVFS_001_10
IVFS_002_10
Study Number
IMM_R&D_012_11
IMM_R&D_025_12c
8220805
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
25
表 2.6.7-18 Comparative Immunogenicity Study conducted with BAX 855 in Mice
Mice/Group
Treatment
Dosea
Series
Study Number
ADVATE
8 or 40 µg/kg (200 or
E17 FVIII ko human MHC-class II (HLABAX 855
1000 ng/mouse)
245
IMM_R&D_012_11
10M
Formulation
Formulation buffer:
DR15) transgenic mice
buffer control
200 µL
Incidence of Binding Antibodies against FVIII, PEG-rFVIII and PEG in E17 FVIII ko human MHC-class II (HLA-DR15) transgenic mice
(series 245)
BAX 855
ADVATE
8 µg/kg
40 µg/kg
8 µg/kg
40 µg/kg
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
Animals with Binding Antibodies against FVIII
3/10
4/9b
2/10
0/10
b
Animals with Binding Antibodies against PEG-rFVIII
3/10
2/9
2/10
0/10
Animals with Binding Antibodies against PEG
0/10
0/8b
0/10
0/10
Mouse Strain
a: Eight doses in weekly intervals. Doses in ng or µg refer to protein doses. A protein dose of 8 and 40 µg/kg ADVATE correlates to an activity-based dose of ca 50 and 250
IU FVIII/kg, respectively.
b: n=9 or 8 because of no sample available for 1or 2 animals, respectively.
表 2.6.7-19 Comparative Immunogenicity Study conducted with BAX 855 in Mice
Mouse Strain
Mice/Group
Treatment
Dosea
Series
Study Number
ADVATE
8 or 40 µg/kg (200 or
BAX 855
1000 ng/mouse)
E17 FVIII ko mice on a Balb/c background
10M
246
IMM_R&D_012_11
Formulation buffer
Formulation buffer:
control
200 µL
Incidence of Binding Antibodies against FVIII, PEG-rFVIII and PEG in E17 FVIII ko mice (series 246)
BAX 855
ADVATE
8 µg/kg
40 µg/kg
8 µg/kg
40 µg/kg
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
Animals with Binding Antibodies against FVIII
6/9b
5/9b
8/10
6/9b
b
b
Animals with Binding Antibodies against PEG-rFVIII
6/9
4/9
7/10
6/9b
b
b
b
Animals with Binding Antibodies against PEG
2/7
2/9
0/7
0/8b
a: Eight doses in weekly intervals. Doses in ng or µg refer to protein doses. A protein dose of 8 and 40 µg/kg ADVATE correlates to an activity-based dose of ca 50 and 250
IU FVIII/kg, respectively.
b: n=9, 8 and 7 because of no sample available for 1, 2 and 3 animals, respectively.
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
26
表 2.6.7-20 Comparative Immunogenicity Study conducted with BAX 855 in Mice
Mice/Group
Treatment
Dosea
Series
Study Number
ADVATE
8 or 40 µg/kg (200 or
BAX 855
1000 ng/mouse)
E17 FVIII ko mice on a C57BL/6 background
highly
PEG-rFVIII control: 8 or
249
IMM_R&D_012_11
10M
E17 FVIII ko human FVIII transgenic mice
immunogenic
40 µg/kg (200 or 1000
PEG-rFVIII control
ng/mouse)
Incidence of Binding Antibodies against FVIII, PEG-rFVIII and PEG in E17 ko mice (series 249)
BAX 855
ADVATE
8 µg/kg
40 µg/kg
8 µg/kg
40 µg/kg
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
Animals with Binding Antibodies against FVIII
10/10
10/10
10/10
10/10
Animals with Binding Antibodies against PEG-rFVIII
n.a.
n.a
n.a
n.a
Animals with Binding Antibodies against PEG
n.a
n.a
n.a
n.a
Incidence of Binding Antibodies against FVIII, PEG-rFVIII and PEG in FVIII ko human FVIII transgenic mice (series 249)
BAX 855
ADVATE
8 µg/kg
40 µg/kg
8 µg/kg
40 µg/kg
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
Animals with Binding Antibodies against FVIII
0/10
3/10
0/10
3/10
Animals with Binding Antibodies against PEG-rFVIII
n.a
n.a
n.a
n.a
Animals with Binding Antibodies against PEG
n.a
n.a
n.a
n.a
Mouse Strain
n.a.: not analyzed
a: Eight doses in weekly intervals. Doses in ng or µg refer to protein doses. A protein dose of 8 and 40 µg/kg ADVATE correlates to an activity-based dose of ca 50 and 250
IU FVIII/kg, respectively.
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
27
表 2.6.7-21 Comparative Immunogenicity Study conducted with BAX 855 in Mice
Mice/Group
Treatment
Dosea
Series
Study Number
ADVATE
8 or 40 µg/kg (200 or
BAX 855
1000 ng/mouse)
E17 FVIII ko mice on a C57BL/6 background
highly
PEG-rFVIII control:
275
IMM_R&D_012_11
5M+5F
E17 FVIII ko human FVIII transgenic mice
immunogenic
40 µg/kg (1000
PEG-rFVIII control
ng/mouse)
Incidence of Binding Antibodies against FVIII, PEG-rFVIII and PEG in E17 FVIII ko mice (series 275)
BAX 855
ADVATE
8 µg/kg
40 µg/kg
8 µg/kg
40 µg/kg
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
Animals with Binding Antibodies against FVIII
7/10
9/9b
9/10
10/10
b
Animals with Binding Antibodies against PEG-rFVIII
7/10
9/9
8/10
9/10
Animals with Binding Antibodies against PEG
7/10
9/9b
0/10
0/10
Incidence of Binding Antibodies against FVIII, PEG-rFVIII and PEG in FVIII ko human FVIII transgenic mice (series 275)
BAX 855
ADVATE
8 µg/kg
40 µg/kg
8 µg/kg
40 µg/kg
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
(200 ng /mouse)
(1000 ng /mouse)
Animals with Binding Antibodies against FVIII
0/9b
1/9b
0/10
3/9b
Animals with Binding Antibodies against PEG-rFVIII
0/9b
1/10
0/10
1/9b
b
Animals with Binding Antibodies against PEG
0/9
0/10
0/10
0/9b
a: Eight doses in weekly intervals. Doses in ng or µg refer to protein doses. A protein dose of 8 and 40 µg/kg ADVATE correlates to an activity-based dose of ca 50
and 250 IU FVIII/kg, respectively.
b: n=9 because of no sample available for 1 animal.
Mouse Strain
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
28
表 2.6.7-22 Immunogenicity Study conducted with BAX 855 in Cynomolgus Monkeys
Gender and
Test System
Method
Duration of Dosing
Dosesa
Study Number
No. Per Group
8 doses given at
8, 40 µg/kg: ADVATE or
Cynomolgus Monkey
Intravenous
2Mb/2F
8220805
weekly intervals
BAX 855
Incidence n of Binding Antibodies against FVIII, PEG-rFVIII and PEG in cynomolgus monkeys
BAX 855
ADVATE
8 µg/kg
40 µg/kg
8 µg/kg
40 µg/kg
(200 ng /monkey)
(1000 ng / monkey)
(200 ng / monkey)
(1000 ng / monkey)
Animals with Binding Antibodies against FVIII
4/4
4/4
4/4
4/4
Animals with Binding Antibodies against PEG-rFVIII
4/4
4/4
4/4
4/4
Animals with Binding Antibodies against PEG
3/4
4/4
0/4
0/4
a: Eight doses in weekly intervals. Doses in ng or µg refer to protein doses. A protein dose of 8 and 40 µg/kg ADVATE correlates to an activity-based dose of ca 50 and 250
IU FVIII/kg, respectively.
b: Animal
M (40 μg/kg, BAX 855) was killed in moribund condition on day 29 of the study
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
29
表 2.6.7-23 Tissue Cross Reactivity: In Vitro - Test Article: BAX 855
Report Title: Immunohistocemical analysis of the human tissue cross-reactivity of an antibody to
Study No.
GLP2572
polyethylene glycol (PEG)
Test for induction of: potential tissue cross reactivity (off target binding)
GLP Compliance: Yes
Test System: Frozen human tissue samples (cryo-sections of 3 human donors)
Test item: Anti-PEG- , Control item: Rabbit IgG isotype control, Positive controls items: frozen
liver homogenates, Negative
control items: frozen PBS- (sham-) spiked liver homogenates
Date of study initiation:
Definition of Positive and Negative Tissues:
negative tissue: a tissue for which the degree of binding of the test item (as determined by the intensity of
staining) is no greater than that of the control item in an adjacent section.
positive tissue: a tissue for which the degree of binding of the test item (as determined by the intensity of
staining) is greater than that of the control item in an adjacent section.
Human Tissues:
Adrenal Gland, Bladder, Blood cells (assessed in sections of spleen), Blood vessels (assessed in sections of parathyroid), Bone Marrow, Breast, Brain (cerebellum/
occipital cortex), Colon, Eye (retina), Eye, Fallopian Tube, Heart (left ventricle), Ileum, Kidney (cortex), Kidney, Liver (parenchyma), Lung (bronchus /parenchyma),
Lymph node, Ovary, Pancreas, Pancreas (tail), Parathyroid gland, Parotid, Nerve (peripheral), Pituitary gland, Placenta, Prostate, Skeletal Muscle, Skin, Spinal Cord,
Spleen (parenchyma), Testis, Thymus, Thyroid gland, Lymph gland (tonsil), Ureter, Uterus (cervix/endometrium/myometrium)
Results:
Specific cross-reactivity of BAX 855 was negative for all tissues
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
30
表 2.6.7-24 Other Studies: Repeat-dose Toxicity - Test Article: PEG2ru20KCOOH
Report Title: 28 Day Intravenous (Bolus) Administration Toxicity Study in the Rat Followed by a 4 and 13
Week Treatment-free Period
Duration of Dosing: 4 weeks
Study No. 8298494
Initial Age: 6-8 weeks
Duration of Postdose: 4 and 13 weeks
GLP Compliance: Yes
Date of First Dose:
Method of Administration: Twice weekly Intravenous (bolus) via manual injection
Special Features: none
Vehicle/Formulation: PBS-Buffer
NOAEL: 65 mg/kg
Conclusion: Intravenous administration of PEG2ru20KCOOH at dose levels of 0.65, 6.5 and 65 mg/kg, were well tolerated with no negative
clinical observations, effects on body weight or food consumption, ophthalmoscopy, organ weights, clinical or anatomical pathology, and no
development of binding IgG anti-PEG antibodies.
Dose per day (mg/kg, twice weekly)
0 (Vehicle)
0.65
6.5
65
Number of Toxicity Animals
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
M: 10
F: 10
Number of treatment free Animals
4 weeks
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
13 weeks
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
M: 5
F: 5
Died or Sacrificed Moribund
0
0
0
0
1a
0
0
0
Body Weight, Food Consumption, Clincial Observations, Ophthalmic Evaluation
No noteworthy findings
Hematology, Serum Chemistry, Coagulation, Urinalysis, Organ Weights, Macropathology and Histopathology Evaluation
No noteworthy findings
Toxicokinetics:
Number of Satellite Animals
3
3
9
9
9
9
9
9
AUC(0-48) (h•µg/mL)
Day 1
NA
NA
64
47
609
509
5890
5225
Day 22
NA
NA
68
60
674
657
6903
6101
Cmax (µg/mL)
Day 1
NA
NA
16
17
147
154
2020
1612
Day 22
NA
NA
20
16
199
178
1995
1955
Immunogenicity:
Number of animals evaluated
5
5
5
5
5
5
5
5
Number of animals confirmed anti-drug antibody positiveb
0
0
0
0
0
0
0
0
NA - not applicable, a: Animal (for toxicity evaluation) found dead. Cause of demise considered to be gastrointestinal tract lesion. Possibly related to strangulation of
the colon, and unrelated to treatment with test article, b: Samples analyzed Pretreatment and on Days 24 and 54
Species/ Strain: Rat /
Crl:WI(Han)
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
31
表 2.6.7-25 Other Studies: Bacterial Reverse Mutation Assay - Test Article: PEG2ru20KCOOH
Strain: Salmonella typhimurium TA98, TA100, TA1535 and
Report Title: Salmonella-Escherichia coli/Mammalian-Microsome Reverse Mutation
TA1537, and Escherichia coli WP2uvrA
Assay with a Confirmatory Assay
Metabolic Activation System: Rat Liver S9
Method of Administration: Incubated
Study No. 6291-259
for 52 ± 4 hours in plate
Vehicle: Saline
GLP Compliance: No
Cytotoxicity: None
Number of Independent Test: 1
Date Plated:
Genotoxicity: Negative
Number of Plate: 3
S9 mix
Test Article
Dose
Mean Revertants Per Plate
Back+ or (μg/plate)
ground
TA98
TA100
TA1535
TA1537
WP2uvrA
a
Test 1
Test 2
Test 1
Test 2 Test 1 Test 2 Test 1 Test 2 Test 1 Test 2 Lawn
S9 mix +
Saline
PEG2ru20KCOOH
Positive Controlb
Saline
PEG2ru20KCOOH
S9 mix Positive Controlc
100
333
1000
3330
5000
100
333
1000
3330
5000
9
14
10
11
15
13
123
8
9
7
9
11
10
224
21
23
23
28
20
25
258
14
11
12
15
13
13
222
123
106
132
120
115
146
1178
94
103
82
100
91
88
1240
124
117
114
107
105
119
733
82
99
92
90
93
83
1227
12
10
11
12
13
13
145
14
12
15
17
14
13
920
a: Evaluation Code: N=normal, R=reduced, O=obscured, A=absent, P=precipitate
b: TA98 benzo[a]pyrene 2.5 μg/plate
c: TA98 2-nitrofluorene 1.0 μg/plate
TA100 2-aminoanthracene 2.5 μg/plate
TA100 sodium azide 2.0 μg/plate
TA1535 2-aminoanthracene 2.5 μg/plate
TA1535 sodium azide 2.0 μg/plate
TA1537 2-aminoanthracene 2.5 μg/plate
TA1537 ICR-191 2.0 μg/plate
WP2uvrA 2-aminoanthracene 25.0 μg/plate
WP2uvrA 4-nitroquinoline-N-oxide 1.0 μg/plate
13
12
10
14
14
12
118
15
14
12
9
10
17
849
9
8
7
5
8
6
124
6
1
8
5
7
7
428
6
8
11
9
10
9
90
6
5
7
8
6
5
386
20
16
19
20
17
15
670
16
13
22
13
18
18
256
20
23
14
28
15
20
515
26
19
20
23
19
14
182
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
N
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
32
表 2.6.7-26 Other Studies: Chromosomal Aberrations Assay - Test Article: PEG2ru20KCOOH
Strain: Cultured Human Peripheral Blood
Report Title: Chromosomal Aberrations in Cultured Human Peripheral Blood Lymphocytes
Lymphocytes
Metabolic Activation System: Rat Liver S9
Method of Administration: For 3 or approx. 22 hours for the
Study No. 6291-260
assay without S9 mix, and for 3 hours for the assay with S9 mix
Vehicle: Saline
Number of Independent Test: 2
GLP Compliance: No
Cytotoxicity: None
Number of Plate: 2
Date:
Genotoxicity: Negative
Averageb % of Cells with
Averageb
Averageb %
Averageb % of
Treament
S9 mix
# Cells
Chromosomal Aberrations of Polyploidy Endoreduplication
% Mitotic
Period
Test Article
Concentration
+ or Scoreda
Index
Cells
Cells
(hours)
without gap
with gap
S9 mix +
3
RPMI 1640
200/200
7.4
1.0
4.0
1.5
0.0
Saline
100 μL/mL
200/200
7.3
1.0
4.0
0.5
0.0
Cyclophosphamide
25.0 μg/mL
125/200
no data
28.0
36.0
1.0
0.0
1720 μg/mL
200/200
9.4
1.0
3.0
0.0
0.0
2450 μg/mL
200/200
10.1
0.0
2.5
0.0
0.0
PEG2ru20KCOOH
3500 μg/mL
200/200
8.1
0.5
2.0
0.0
0.0
5000 μg/mL
200/200
8.0
0.5
4.0
0.0
0.0
3
RPMI 1640
200/200
9.1
0.5
1.0
0.5
0.0
Saline
100 μL/mL
200/200
8.3
0.0
1.5
0.0
0.0
Cyclophosphamide
40.0 μg/mL
100/200
no data
40.0
48.0
0.0
0.0
2500 μg/mL
200/200
9.9
0.0
1.0
0.0
0.0
3200 μg/mL
200/200
9.8
0.5
1.0
0.0
0.0
PEG2ru20KCOOH
4000 μg/mL
200/200
9.3
0.0
0.5
0.0
0.0
5000 μg/mL
200/200
8.5
1.5
2.0
0.5
0.0
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
33
表 2.6.7-26 Other Studies: Chromosomal Aberrations Assay - Test Article: PEG2ru20KCOOH（続き）
Strain: Cultured Human Peripheral Blood
Report Title: Chromosomal Aberrations in Cultured Human Peripheral Blood Lymphocytes
Lymphocytes
Metabolic Activation System: Rat Liver S9
Method of Administration: For 3 or approx. 22 hours
Study No. 6291-260
without S9 mix, and for 3 hours with S9 mix
Vehicle: Saline
Number of Independent Test: 2
GLP Compliance: No
Cytotoxicity: None
Number of Plate: 2
Date:
Genotoxicity: Negative
S9 mix
Treament
Test Article
Concentration # Cells
Averageb
Averageb % of Cells with
Averageb %
Averageb % of
+ or Period
Scoreda % Mitotic
Chromosomal Aberrations of Polyploidy Endoreduplication
(hours)
Index
Cells
Cells
without gap
with gap
S9 mix -
3
RPMI 1640
Saline
Mitomycin C
PEG2ru20KCOOH
22
RPMI 1640
Saline
Mitomycin C
PEG2ru20KCOOH
100 μL/mL
1.00 μg/mL
1720 μg/mL
2450 μg/mL
3500 μg/mL
5000 μg/mL
100 μL/mL
0.300 μg/mL
2500 μg/mL
3200 μg/mL
4000 μg/mL
5000 μg/mL
200/200
200/200
100/200
200/200
200/200
200/200
200/200
200/200
200/200
100/200
200/200
200/200
200/200
200/200
a: # Cells Scored for Aberrations / # Cells Scored for Polyploidy and Endoreduplication
b: n=2
8.7
8.8
no data
9.8
10.6
8.9
8.9
10.7
10.1
no data
10.3
10.5
8.6
7.4
1.0
0.5
52.0
0.5
0.0
0.0
0.5
1.0
0.0
44.0
0.0
2.0
0.0
1.0
4.0
4.0
56.0
2.5
1.5
2.0
1.5
2.0
1.0
50.0
0.5
3.5
0.5
1.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.5
0.0
0.0
0.5
1.0
0.5
0.5
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
ルリオクトコグ アルファ
2.6.7 毒性試験概要表
ペゴル（遺伝子組換え）
表 2.6.7-27 Other Studies: Bone Marrow Micronucleus Assay - Test Article: PEG2ru20KCOOH
Animal/Strain: Mouse/CD-1®(ICR)BR
Report Title: In Vivo Mouse Bone Marrow Micronucleus Assay
Age: 10 weeks old
Method of Administration: Intravenous, BID with an
Study No. 6291-261
interval of approx. 1-2 hours
Cells Analyzed: PCEs
Harvest Timepoint: 24 and/or 48 hours after the last dose
GLP Compliance: No
administration
Number of Cells Analyzed per Animal: 2000
Vehicle: Saline
Initiation of Dosing:
Noteworthy Finding: None
Genotoxicity: Negative
% Micronucleated PCEs
Ratio PCE:NCE
Test Article
Dose
Harvest Time (hr)
Mean ± S.E.
Mean ± S.E.
Males
Males
Saline
40 mL/kg
24
0.07 ± 0.02
0.80 ± 0.08
48
0.08 ± 0.03
0.75 ± 0.07
Cyclophosphamide
80 mg/kg
24
1.62 ± 0.28*
0.66 ± 0.03
PEG2ru20KCOOH
500 mg/kg
24
0.06 ± 0.01
0.60 ± 0.04
1000 mg/kg
24
0.06 ± 0.02
0.76 ± 0.03
24
0.05 ± 0.02
0.69 ± 0.07
2000 mg/kg
48
0.02 ± 0.01
0.77 ± 0.04
*p≤0.01 compared to the saline group (Dunnett’s t-test)
a Animals were dosed at 20 mL/kg BID (approx. 1-2 hours between doses) to achieve a total dose volume of 40 mL/kg.
b Animals were dosed at 250, 500, and 1000 mg/kg BID (approx. 1-2 hours between doses) to achieve doses of 500, 1000, and 2000 mg/kg, respectively.
34