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公開特許公報 特開2015
(19)日本国特許庁(JP) 〔実 5 頁〕 公開特許公報(A) (12) (11)特許出願公開番号 特開2015-188374 (P2015−188374A) (43)公開日 平成27年11月2日(2015.11.2) (51)Int.Cl. FI テーマコード(参考) A01G 31/00 (2006.01) A01G 31/00 601A 2B022 A01G 1/00 (2006.01) A01G 1/00 301Z 2B314 A01G 7/00 (2006.01) A01G 7/00 605Z 4B065 C12N 1/20 (2006.01) C12N 1/20 E C12N 1/00 (2006.01) C12N 1/20 A 審査請求 (21)出願番号 特願2014-68128(P2014-68128) (22)出願日 平成26年3月28日(2014.3.28) 未請求 請求項の数9 OL (全8頁) 最終頁に続く (71)出願人 507152970 公益財団法人東洋食品研究所 兵庫県川西市南花屋敷4丁目23番2号 (74)代理人 110001818 特許業務法人R&C (72)発明者 青木 俊介 兵庫県川西市南花屋敷4丁目23番2号 公益財団法人東洋食品研究所内 (72)発明者 遠田 昌人 兵庫県川西市南花屋敷4丁目23番2号 公益財団法人東洋食品研究所内 Fターム(参考) 2B022 AA01 AB11 2B314 MA27 MA67 4B065 AA01X AA15X AA43X AC20 CA60 (54)【発明の名称】養液栽培方法および養液栽培に使用する菌株 (57)【 要 約 】 【課題】特定の野菜において、生長を促進することができる養液栽培方法および養液栽培 に使用する菌株を提供する。 【解決手段】野菜を生長促進するバチルス・アミロリケファシエンス、パントエア・アグ ロメランスおよびシュードモナス・フルオレセンスの少なくとも何れかを培養液に添加し て前記野菜を栽培する養液栽培方法。 【選択図】なし ( 2 ) JP 1 2015-188374 A 2015.11.2 2 【特許請求の範囲】 一方、土壌を利用した作物の土壌栽培に対して、土壌を 【請求項1】 使用しない無土壌栽培である養液栽培(水耕栽培)が行 野菜を生長促進するバチルス・アミロリケファシエンス われている。養液栽培は、周年生産が可能、土壌に起因 、パントエア・アグロメランスおよびシュードモナス・ する栽培不適地での生産が可能、連作障害の回避ができ フルオレセンスの少なくとも何れかを培養液に添加して る、などの利点を持っている。一方、養液栽培は土壌が 前記野菜を栽培する養液栽培方法。 持っている緩衝力を持ち合わせていないことから、病原 【請求項2】 菌に対する抗菌作用が働かないため、農薬および肥料の 前記野菜は葉菜類である請求項1に記載の養液栽培方法 種類や使用量が増大する傾向があった。 。 【0004】 【請求項3】 10 例えば特許文献1には、特定の根圏微生物を使用してト 前記葉菜類は、ミツバ、レタス類の群から選択されるも マトの養液栽培を行うことが記載してある。 のである請求項2に記載の養液栽培方法。 【先行技術文献】 【請求項4】 【特許文献】 前記バチルス・アミロリケファシエンスが、受託番号N 【0005】 ITE 【特許文献1】特開平6−311826号公報 P−01825およびNITE P−0182 6の何れかで示される菌株である請求項1∼3の何れか 【発明の概要】 一項に記載の養液栽培方法。 【発明が解決しようとする課題】 【請求項5】 【0006】 前記パントエア・アグロメランスが、受託番号NITE 土壌の持っている緩衝力を持ち合わせていない養液栽培 P−01823で示される菌株である請求項1∼4の 20 では、農薬や肥料のバランス崩れや病原菌に対する危険 何れか一項に記載の養液栽培方法。 が伴うため、短いスパンで一作が完了する野菜の栽培が 【請求項6】 行われることが望ましい。 前記シュードモナス・フルオレセンスが、受託番号NI 【0007】 TE 従って、本発明の目的は、特定の野菜において、生長を P−01824で示される菌株である請求項1∼ 5の何れか一項に記載の養液栽培方法。 促進することができる養液栽培方法、および、養液栽培 【請求項7】 に使用する菌株を提供することにある。 野菜の養液栽培において、生長促進のために使用するバ 【課題を解決するための手段】 チルス・アミロリケファシエンス。 【0008】 【請求項8】 本発明者らは、特定の野菜の養液栽培方法を鋭意検討し 野菜の養液栽培において、生長促進のために使用するパ 30 た結果、バチルス・アミロリケファシエンス、パントエ ントエア・アグロメランス。 ア・アグロメランスおよびシュードモナス・フルオレセ 【請求項9】 ンスを養液栽培の培養液に添加することで、生長を促進 野菜の養液栽培において、生長促進のために使用するシ させることができることを見出した。 ュードモナス・フルオレセンス。 【0009】 【発明の詳細な説明】 即ち、上記目的を達成するため、以下の[1]∼[9] 【技術分野】 に示す発明を提供する。 【0001】 [1]野菜を生長促進するバチルス・アミロリケファシ 本発明は、野菜の養液栽培に関する。 エンス、パントエア・アグロメランスおよびシュードモ 【背景技術】 【0002】 ナス・フルオレセンスの少なくとも何れかを培養液に添 40 加して前記野菜を栽培する養液栽培方法。 土壌を利用した作物の土壌栽培では、土中の腐植により [2]前記野菜は葉菜類である[1]に記載の養液栽培 発生し共存する多種多様な土中微生物や細菌が存在し、 方法。 これら微生物や細菌が作物の生育上不可欠な環境を巧み [3]前記葉菜類は、ミツバ、レタス類の群から選択さ に調節することを利用している。 れるものである[2]に記載の養液栽培方法。 しかし、土中微生物や細菌の中には、作物の病気を誘因 [4]前記バチルス・アミロリケファシエンスが、受託 するものも含まれるため、これらの対策が必要となる。 番号NITE さらに土壌栽培では、特定の種類の作物を連作すること 1826の何れかで示される菌株である[1]∼[3] で引き起こされる連作障害の問題を考慮する必要がある の何れか一項に記載の養液栽培方法。 。 [5]前記パントエア・アグロメランスが、受託番号N 【0003】 50 ITE P−01825およびNITE P−0 P−01823で示される菌株である[1]∼ ( 3 ) JP 3 2015-188374 A 2015.11.2 4 [4]の何れか一項に記載の養液栽培方法。 式水耕方式やNFT(Nutrient Film Technique:薄膜 [6]前記シュードモナス・フルオレセンスが、受託番 水耕法)方式などを適用するとよい。 号NITE 噴霧耕方式は噴霧水耕方式などを適用するとよい。 P−01824で示される菌株である[1 ]∼[5]の何れか一項に記載の養液栽培方法。 固形培地耕方式は無機培地耕方式と有機培地耕方式など [7]野菜の養液栽培において、生長促進のために使用 を適用するとよい。無機培地耕方式における培地として するバチルス・アミロリケファシエンス。 、れき、砂、もみがらくん炭、バーミキュライト、パー [8]野菜の養液栽培において、生長促進のために使用 ライト、ロックウールなどが用いられる。有機培地耕方 するパントエア・アグロメランス。 式における培地として、樹皮、ヤシガラ、ピートモス、 [9]野菜の養液栽培において、生長促進のために使用 するシュードモナス・フルオレセンス。 おがくず、もみがらなどの天然有機物や、ポリウレタン 10 、ポリフェノール、ビニロンなどの有機合成物が用いら 【0010】 れる。特に培養液の保持性向上と気相率向上の観点から 植物が生育する土壌環境である根圏に生息する根圏細菌 ロックウールを用いる無機培地耕方式を行うのが好まし 中に、植物生育促進根圏細菌(PGPR)として植物に い。 対して生育促進効果を持つ細菌の存在が認知されてきた 【0015】 。本発明では、養液栽培において、PGPRであるバチ 養液栽培に使用する培養液は特に限定されるものではな ルス・アミロリケファシエンス、パントエア・アグロメ く、栽培する植物が必要とする養分(必須元素)を吸収 ランスおよびシュードモナス・フルオレセンスの少なく に適した態様および濃度で水に溶かしたものであればよ とも何れかを培養液に添加する。このような培養液を、 い。当該養分は、通常、イオンの状態で存在し、多量要 野菜、特に葉菜類の養液栽培に使用することで、生長を 素および微量要素がある。 促進することができる。当該葉菜類としては、例えばミ 20 【0016】 ツバ、レタス類等を使用するのがよい。後述する実施例 多量要素としては、窒素(N:硝酸態(NO3 −N)と では、これら葉菜類の生長が促進(地上部新鮮重の増大 アンモニア態(NH4 −N)があり養液栽培では硝酸態 )されたことが確認できた。 を主たる窒素源とする)、リン(P:リン酸態(PO4 【0011】 −P))、カリウム(K)、カルシウム(Ca)、マグ 従って、本発明では、野菜の養液栽培において、培養液 ネシウム(Mg)、硫黄(S:硫酸態(SO4 −S)) に特定の微生物を導入することにより、簡便な手法で生 などがある。 長促進効果を得ることができる。 【0017】 【発明を実施するための形態】 微量要素としては、鉄(F)、マンガン(Mn)、ホウ 【0012】 素(B)、銅(Cu)、亜鉛(Zn)、モリブデン(M 以下、本発明の実施形態を図面に基づいて説明する。 30 o)、ケイ素(Si)、塩素(Cl)、アルミニウム( 本発明では、野菜の養液栽培において、PGPRである Al)、ナトリウム(Na)、ニッケル(Ni)などが バチルス・アミロリケファシエンス、パントエア・アグ ある。 ロメランスおよびシュードモナス・フルオレセンスの少 【0018】 なくとも何れかを培養液に添加する。 このような養分を適当な濃度、pH、EC(電気伝導度 【0013】 )に調製して培養液として供する。養液栽培では、培養 (養液栽培) 液のこれらの要因をコントルールする培養液管理が重要 養液栽培は、植物の生長に必要な養水分を液肥として与 となる。 える栽培方法であり、所望の規模を有する栽培槽内に液 さらに、養液栽培では、気温、湿度、光条件などの環境 肥を含んだ培養液を供給し、植物体の一部を当該培養液 要因をコントルールする環境制御も重要なものとなる。 に浸漬した状態で栽培する。当該栽培槽は、通常、温湿 40 【0019】 度や照明の制御を各別に行える閉鎖された空間内に設置 上述した要因の条件は、栽培する野菜の種類に応じて適 され、栽培槽に供給された培養液を循環させながら植物 宜設定すればよい。例えばpHは5.0∼7.0、EC (野菜)の栽培を行うが、このような態様に限定される は0.5∼5.0mS/cm(25℃)、気温は10∼ ものではない。 30℃、湿度は50∼70%、光条件は公知の人工光源 【0014】 を8∼12時間程度照射させるように制御すればよいが 養液栽培の態様は特に限定されるものではなく、水耕、 、これらの範囲に限定されるものではない。 噴霧耕、固形培地耕などの方式を適用することができる 【0020】 。 (根圏細菌) 水耕方式は循環式湛液水耕方式、非循環式湛液水耕方式 根圏とは植物の根から影響を受ける領域のことであり、 、通気式湛液水耕方式、液面上下式湛液水耕方式、毛管 50 根圏細菌は植物が生育する土壌環境である根圏に生息す ( 4 ) JP 2015-188374 A 2015.11.2 5 6 る細菌のことである。本発明では、根圏細菌として、植 いが、例えばミツバ、レタス類(レタス、サニーレタス 物生育促進根圏細菌(PGPR)として植物に対して生 )、キャベツ、コマツナ、ニラ、ネギ、ハクサイ、チン 育促進効果を持つ細菌であり、バチルス属細菌のバチル ゲンサイ、ホウレンソウ、セロリ、パセリ、シュンギク ス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefac 、フキ、ミズナ、ヨモギ等を適用することができる。 iens)、パントエア属細菌のパントエア・アグロメラン 【0025】 ス(Pantoea agglomerans)、および、シュードモナス 本発明では、養液栽培において、PGPRであるバチル 属細菌のシュードモナス・フルオレセンス(Pseudomona ス・アミロリケファシエンス、パントエア・アグロメラ s fluorescens)を使用することができる。 ンス、シュードモナス・フルオレセンスの少なくとも何 【0021】 れかを培養液に添加する。このような培養液を、野菜、 バチルス・アミロリケファシエンスは、植物病害の病原 10 特に葉菜類の養液栽培に使用することで、生長を促進さ 体に対する拮抗微生物として知られており、土壌試料中 せることができる。 によく見られる好気性細菌である。バチルス・アミロリ 【実施例】 ケファシエンスは、例えば受託番号NITE 【0026】 825で示される菌株(#111)、NITE P−01 P−0 本発明の実施例について説明する。 1826で示される菌株(#167)を使用することが 非循環式湛液水耕方式にて、通常の水耕栽培設備(水畑 できる。 、ゼンポー社製)によりミツバ(白茎三ツ葉 【0022】 タキイ種苗)およびサニーレタス(タキイ種苗)の養液 バチルス属細菌以外の細菌では、小麦に常在する共生細 栽培を行った。 菌であるパントエア・アグロメランスや、バチルス・ア 【0027】 ミロリケファシエンスと同様に植物病害の病原体に対す 20 ミツバ種子は、17%(W/V)の塩化ナトリウム水溶 る拮抗微生物として知られており、土壌試料中によく見 液に30分間浸漬して未熟種子や夾雑物などを取り除い られる好気性細菌のシュードモナス・フルオレセンスを た後に、水洗し、1晩流水に漬けおき、アク抜きした。 使用することができる。パントエア・アグロメランスは その後、4℃に2週間保存し予措してから用いた。サニ 、例えば受託番号NITE 関西系、 P−01823で示される ーレタス種子はそのまま用いた。ミツバおよびサニーレ 菌株(#74)、シュードモナス・フルオレセンスは、 タスとも、播種から子葉が展開し始めるまでの期間は水 例えば受託番号NITE P−01824で示される菌 のみで栽培し、その後、定植までの期間は、培養液とし 株(#78)を使用することができる。本発明では、こ て大塚化学A処方(pH6.0、電気伝導度1.2mS れら細菌を単独で用いてもよいし、混合して用いてもよ /cm(20℃)に調整、容量500mL)で栽培した い。 。 上述した受託番号が付された菌株は、何れも独立行政法 30 ミツバ苗およびサニーレタス苗は、播種から14日目の 人製品評価技術基盤機構(NITE)特許微生物寄託セ 苗をそれぞれ定植した。培養液として、大塚化学A処方 ンター(NPMD)に2014年3月12日に寄託され (pH6.0、電気伝導度2.3mS/cm(20℃) ている。 に調整に調整、容量10L)を用いた。 また、本発明においては、上述した菌株の変異株又は派 【0028】 生株であってもよく、このような菌株を養液栽培に使用 このようにして調製した培養液に、2種類のバチルス・ することで後述する作用を有する限り使用することがで アミロリケファシエンス(#111株(受託番号NIT きる。 E P−01825)、#167株(受託番号NITE 5 【0023】 P−01826))をそれぞれ10 cfu/mLの 上述した菌株の培養には、TSB(Trypticase Soy Bro th、BBL社製)やTSA(Trypticase Soy Agar、BBL社 濃度で添加した培養系を構築した(実施例1,2)。ま 40 た、調製した培養液に、パントエア・アグロメランス# 製)などの培地を使用することができるが、これらに限 74株(受託番号NITE P−01823)(実施例 定されるものではない。また、培養後の菌体の洗浄およ 3))、シュードモナス・フルオレセンス#78株(受 び回収(再懸濁)には、遠心分離した後、滅菌水または 託番号NITE PBS(リン酸緩衝生理食塩水)などを使用することが レタスのみ実施)をそれぞれ10 cfu/mLの濃度 できるが、これらに限定されるものではない。 で添加した培養系を構築した。 【0024】 尚、上述した菌株は、TSB液体培地に各菌株を接種し (葉菜類) た後、30℃、16時間、140rpmで振盪培養し、 本発明では、野菜として葉菜類を適用するのがよい。葉 培養後、遠心分離した後にPBSで洗浄、再懸濁を3回 菜類は、主に葉の部分を食用とする野菜のことをいう。 繰り返したものを使用した。 本発明では、葉菜類としては特に限定されるものではな 50 【0029】 P−01824)(実施例4:サニー 5 ( 5 ) JP 2015-188374 A 2015.11.2 7 8 養液栽培は、明期を8000Lxの条件で13時間照射 液に生長促進効果を有する微生物を全く添加せずに栽培 (20℃)し、暗期を11時間(15℃)とし、湿度は したミツバおよびサニーレタス)における草丈、地上部 明期および暗期とも約50%RHの条件で行い、ミツバ 新鮮重、根部新鮮重を1.0とした場合の相対値を示し は定植後41日間、サニーレタスは定植後45日間栽培 た。 した。各実施例について、ミツバは12本×5ウレタン 【0033】 ブロックの計60本を、サニーレタスは1本×5ウレタ 【表1】 ンブロックの計5本を栽培しており、ミツバの草丈は各 ウレタンブロックの最大長の平均値を、ミツバおよびサ ニーレタスの地上部および根部新鮮重はウレタンブロッ ク5個全ての苗の合計値とした。 10 【0030】 また、実施例5として、植物培養用の容器(インキュテ ィッシュ、バイオメディカルサイエンス社製)によりミ ツバ(白茎三ツ葉 関西系、タキイ種苗)の容器内養液 栽培(非循環式湛液水耕方式)を行った。アク抜きおよ び予措した種子をオートクレーブで滅菌(121℃、1 【0034】 5分)したバーミキュライトに使用し、播種から子葉が この結果、ミツバにおいては、実施例1∼5では、可食 展開し始めるまでの期間は水のみで栽培し、子葉が展開 部である地上部の草丈は1.1∼1.4、地上部新鮮重 し始めた後は、培養液として大塚化学A処方(pH6. は1.2∼1.5の値が得られた。また、サニーレタス 0、電気伝導度2.3mS/cm(20℃)に調整、1 20 においては、実施例1∼4では、地上部新鮮重は1.4 00mL)をバーミキュライトに添加した。 ∼1.8の値が得られた。 このようにして調製した培養液に、播種から14日目の 【0035】 時点で、シュードモナス・フルオレセンス#78株(受 従って、ミツバおよびサニーレタスの養液栽培において 託番号NITE 5 P−01824)を10 cfu/m 、PGPRであるバチルス・アミロリケファシエンス、 Lの濃度で添加した培養系を構築した。 パントエア・アグロメランスおよびシュードモナス・フ 【0031】 ルオレセンスの何れかを培養液に添加することで、生長 養液栽培は、明期を10000Lxの条件で16時間照 を促進することができた。 射(20℃)し、暗期を8時間(20℃)とし、湿度は 【産業上の利用可能性】 明期および暗期とも約55%RHの条件で行い、播種か 【0036】 ら39日間栽培した。ミツバは9本を栽培しており、草 30 本発明は、野菜の養液栽培に利用することができる。 丈、地上部および根部新鮮重は全ての苗の平均値とした 【受託番号】 。 【0037】 【0032】 NITE P−01825 実施例1∼5において、養液栽培後、全ての苗を収穫し NITE P−01826 、草丈、地上部新鮮重、根部新鮮重を測定した。結果を NITE P−01823 表1に示した。表1に示す数値は、コントロール(培養 NITE P−01824 ──────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl. FI C12N テーマコード(参考) 1/00 P