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Citation
Issue Date
Distinct tissue distribution and cellular localization of two
messenger ribonucleic acids encoding different subtypes of rat
endothelin receptors( Abstract_要旨 )
Hori, Seiji
Kyoto University (京都大学)
1994-11-24
URL
https://doi.org/10.11501/3098577
Right
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Type
Thesis or Dissertation
Textversion
author
Kyoto University
氏
名
l
%
A
学位 (
専攻分野)
博
学 位 記 番 号
学位授与 の要件
1
4
9
1号
1月 2
4日
平 成 6年 1
学 位 規 則 第 4 条 第 2項 該 当
学位論文題 目
Di
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学位授与 の 日付
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(2種類 のエ ン ドセ リン受容体 メ ッセ ンジャー RNA の異 な る組織
分布 と細胞局在 に関す る研究)
(
主 査)
論文調査委員
教 授 寅 崎知生
論
文
内
教 授 中尾-和
容
の
要
教 授 中西重患
旨
エ ン ドセ リンは強力な血管収縮活性を もつペプチ ドで,血管系以外の組織 において も様 々な生理作用を
ETAと ET｡
)c
DNA を単離 し,各受容体 の性質 を
示す｡本研究 はラッ トの 2種類のエ ン ドセ リン受容体 (
明 らかにす ると共 に, mRNA の組織分布 と細胞局在を明 らかに した ものである｡
先 にアフ リカツメガェル卵母細胞遺伝子発現系 を用 いて クローニ ング した ウシ ETA
C
DNA をプローブ
として,ラッ ト肺 c
DNA ライブラリーより 4
6個 の c
DNA クロー ンを単離 した｡制限酵素解析,塩基配列
DNA が コ- ドす る蛋 白は
の解析 の結果 これ らは 2つのグループに分類で きた｡ それぞれのグループの c
2
6ア
いずれ も 7回の細胞膜貫通領域を持つ ロ ドプシンファミリーに属す る受容体 の構造を有 し,一方 は 4
1
.
1
% の高 いホモロジーを示 し, ラッ トETAと結論 された｡ もう一方の受
ミノ酸か らな り, ウシ ETAと 9
4
2ア ミノ酸か らな り, ウシ ETAとのア ミノ酸 の一次配列上 のホモロジーは 5
0% 程度で,独立 に
容体 は 4
報告 された ラッ トエ ン ドセ リン受容体, ETBに相当す ることが明 らか とな った｡ ラッ トETAと ETB間の
3
.
3
% であった｡
ホモロジーは 5
各受容体 を動物細胞 に発現 させ結合様式 を調べ ると,
Ⅰ
]で標識 したエ ン ドセ リン 1 (
ET-1)の ETA
[1
2
5
細胞膜分画 に対す る結合 を阻害する各 ペプチ ドの活性 は ET-1>ET2>サ ラフォ トキシン S6b>ET-3
の順で差が見 られ,又,ETBに対 しては各 ペプチ ドはほぼ同等の活性で
が明か とな った｡
Ⅰ
]ET-1の結合を阻害す ること
[1
2
5
Ⅰ
]ET1の ETA
,ETBに対す る結合 の Kd値 はそれぞれ 0
.
l
lnM,0
.
0
4nM であ った｡
[1
2
5
ET-1,ET-2,ET-3,サ ラフォ トキシン S6bの ETAに対す る Ki値 はそれぞれ 0
.
2
7nM,1
.
2nM,6
3
8
3
,
2nM であ り,一方,ETBに対 しては 7
1pM, 1
1
3pM, 1
1
3pM, 9
0pM であ った｡
nM, 2
ノザ ンプロッ ト法 によって, ETAmRNA の発現 は肺や子宮 といっだ平滑筋 の豊富 な組織 に多 く, 心臓
で も強い発現がみ られ,一方, ETBmRNA は脳や肺,腸,腎臓で発現が多 いことが明 らかにな った｡
i
ns
i
t
u- イブ リダイゼ-シ ョン法 による mRNA の発現解析 によって, ETAmRNA の主要 な発現部位
-1
2
2
9
-
は様 々な組織 の血管平滑筋細胞であるが,この細胞 における ETBの発現 は多 くない｡一方 ,ETB
mRNA の
発現細胞 は ETAに比 して多岐 に亙 り,脳 の グ リア細胞,脈絡叢 の上皮細胞,心筋細胞,腎糸球体,へ ンレ
のループの上皮細胞 などにみ られた｡従 って,種 々の組織でみ られ るエ ン ドセ リンによる血管収縮作用 は,
ETAを介 していると結論 された｡一方 ,ET｡
mRNA の発現 は特 に小脳 のプルキニ ェ細胞層 のグ リア細胞 と
腎糸球体 の内皮細胞 には強 い局在 がみ られ これ らの組織 において重要 な役割 を果 た して いると結論 され
た｡
本研究 によ って, 2
種類 のエ ン ドセ リン受容体 の神経系 や末梢組織 にお ける特徴 的 な分布 を明か と し
た｡又, これ らの受容体 はエ ン ドセ リンファ ミリーのペプチ ドに対す る親和性 の様式 も異 な っていること
か ら, エ ン ドセ リンの多彩 な生理作用 は親和性 と局在 を異 にす る 2種類 の受容体 の役割分担 あるいは共同
作用で担 われていることが示 された｡
論 文 審 査 の 結 果 の 要 旨
本研究 はエ ン ドセ リンの生体 内での作用 を明 らか にす る目的で, 2種類 の ラ ッ トエ ン ドセ リン受容体
ETA,ETBを単離 し,その分子的な特徴 を明 らか にす ると共 に,mRNA の分布 を組織 レベルおよび細胞 レ
ベルで明 らか に した ものである｡
動物細胞 にお ける遺伝子発現系 を用 いて,ETAは ET-1に対す る特異性が高 く,ETBはエ ン ドセ リンの
各 アイ ソペ プチ ドに対 して同程度 の高親和性 を示す ことを明 らか に した｡ また, ノザ ンプロ ッ ト法,i
n
s
i
t
u- イブ リダイゼーシ ョン法を用 いて,ETAは各組織 の血管平滑筋 の他 に心臓,脳下垂体前葉 に強 く発
現 していること, ETB は神経系 の グ リア細胞 や脈絡叢,心臓,腎糸球体 の内皮細胞 などに強 く発現 してい
ることを明 らかに した｡
以上 の研究 はエ ン ドセ リンの機能 を分子生物学 的に解 明す ることに貢献す ることが多 い｡従 って本論文
は博士 (
医学)の学位論文 として価値 あるもの と認 める｡なお,本学位授与 申請者 は平成
施 の論文 内容 とそれに関連 した試問を受 け,合格 と認 め られた ものである｡
-1
2
3
0
-
6年 9月 2
6日実