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Page 1 (19)日本国特許庁(JP) (12)公表特許公報(A) (11)特許出願公表
JP 2013-540803 A 2013.11.7 (57)【要約】 デュピュイトラン病のような骨格筋線維増殖性疾患は、 TNF-αアンタゴニストを局所的に投与することにより処 置され得る。TNF-αアンタゴニストは、初期段階のデュ ピュイトラン病及び他の骨格筋線維増殖性疾患進行を抑 制し、細胞外マトリックス分解剤（コラゲナーゼやマト リックスプロテイナーゼIのような）と共に、進行した 段階のデュピュイトラン病の処置、特に再発の抑制に有 用である。 【選択図】図２３ 10 (2) JP 2013-540803 A 2013.11.7 【特許請求の範囲】 【請求項１】 治療、予防又は進行抑制に効果的な量のTNF-αアンタゴニストを含む、骨格筋線維増殖 性疾患の処置用組成物。 【請求項２】 前記骨格筋線維増殖性疾患が線維腫症である請求項１記載の組成物。 【請求項３】 前記骨格筋線維増殖性疾患が、デュピュイトラン病、足底線維腫症、癒着性関節包炎及 びペロニー病から成る群より選ばれる請求項１又は２記載の組成物。 【請求項４】 10 疾患部位又はその症状が発現している部位に局所投与するためのものである請求項１∼ ３のいずれか１項に記載の組成物。 【請求項５】 初期段階の骨格筋線維増殖性疾患の処置用である請求項１∼４のいずれか１項に記載の 組成物。 【請求項６】 TNF-αアンタゴニストと、細胞外マトリックス分解、枯渇又は開裂剤とを含む請求項５ 記載の組成物。 【請求項７】 前記細胞外マトリックス分解、枯渇又は開裂剤が、マトリックスメタロプロテイナーゼ 20 及び／又はコラゲナーゼである請求項５記載の組成物。 【請求項８】 確立した病状の骨格筋線維増殖性疾患の処置用である請求項１∼４のいずれか１項に記 載の組成物。 【請求項９】 外科的筋膜切除、外科的筋膜切開、外科的皮膚筋膜切除、針筋膜切開及び酵素媒介細胞 外マトリックス分解から選択されてもよい、他の骨格筋線維増殖性疾患の処置と共に行わ れる付属的及び／又は併用処置用である請求項８記載の組成物。 【請求項１０】 TNF-αアンタゴニストと、細胞外マトリックス分解、枯渇又は開裂剤とを含む請求項８ 30 又は９記載の組成物。 【請求項１１】 前記細胞外マトリックス分解、枯渇又は開裂剤が、マトリックスメタロプロテイナーゼ 及び／又はコラゲナーゼである請求項１０記載の組成物。 【請求項１２】 患部組織に直接注射するために製剤された請求項１∼１１のいずれか１項に記載の組成 物。 【請求項１３】 局所投与のために製剤された請求項１∼１１のいずれか１項に記載の組成物。 【請求項１４】 40 前記骨格筋線維増殖性疾患がデュピュイトラン病である請求項１∼１３のいずれか１項 に記載の組成物。 【請求項１５】 前記TNF-αアンタゴニストが、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴ ール、ゴリムバム及びエタネルセプトから選ばれる１又は複数である請求項１∼１４のい ずれか１項に記載の組成物。 【請求項１６】 TNF-αアンタゴニストの、骨格筋線維増殖性疾患の処置のための薬剤の製造のための使 用。 【請求項１７】 50 (3) JP 2013-540803 A 2013.11.7 前記骨格筋線維増殖性疾患が線維腫症である請求項１６記載の使用。 【請求項１８】 前記骨格筋線維増殖性疾患が、デュピュイトラン病、足底線維腫症、癒着性関節包炎及 びペロニー病から成る群より選ばれる請求項１６又は１７記載の使用。 【請求項１９】 使用及び薬剤が請求項１∼１５のいずれか１項によりさらに規定される請求項１６∼１ ８のいずれか１項に記載の使用。 【請求項２０】 効果量のTNF-αアンタゴニストを単独で、又は細胞外マトリックス分解、枯渇又は開裂 剤と共に、骨格筋線維増殖性疾患の処置を必要とする患者に投与することを含む、骨格筋 10 線維増殖性疾患の処置方法。 【請求項２１】 前記細胞外マトリックス分解、枯渇又は開裂剤が、マトリックスメタロプロテイナーゼ 及び／又はコラゲナーゼである請求項２０記載の方法。 【請求項２２】 前記骨格筋線維増殖性疾患が、デュピュイトラン病、足底線維腫症、癒着性関節包炎及 びペロニー病から成る群より選ばれる請求項２０又は２１記載の方法。 【請求項２３】 前記骨格筋線維増殖性疾患がデュピュイトラン病である請求項２２記載の方法。 【請求項２４】 20 前記TNF-αアンタゴニストを、任意に細胞外マトリックス分解、枯渇又は開裂剤と共に 局所投与することによる、請求項２０∼２３のいずれか１項に記載の方法。 【請求項２５】 治療、予防又は進行抑制に効果的な量のDAMPアンタゴニスト及び／又はAGE阻害剤を含 む、骨格筋線維増殖性疾患の処置用組成物。 【請求項２６】 前記骨格筋線維増殖性疾患が、デュピュイトラン病、足底線維腫症、癒着性関節包炎及 びペロニー病から成る群より選ばれる請求項２５記載の組成物。 【請求項２７】 疾患部位又はその症状が発現している部位に局所投与するためのものである請求項２５ 30 又は２６記載の組成物。 【請求項２８】 初期段階の骨格筋線維増殖性疾患の処置用である請求項２５∼２７のいずれか１項に記 載の組成物。 【請求項２９】 DAMPアンタゴニスト及び／又はAGE阻害剤と、細胞外マトリックス分解、枯渇又は開裂 剤とを含む請求項２８記載の組成物。 【請求項３０】 確立した病状の骨格筋線維増殖性疾患の処置用である請求項２５∼２７のいずれか１項 に記載の組成物。 40 【請求項３１】 外科的筋膜切除、外科的筋膜切開、外科的皮膚筋膜切除、針筋膜切開及び酵素媒介細胞 外マトリックス分解から選択されてもよい、他の骨格筋線維増殖性疾患の処置と共に行わ れる付属的及び／又は併用処置用である請求項３０記載の組成物。 【請求項３２】 DAMPアンタゴニスト及び／又はAGE阻害剤を、細胞外マトリックス分解、枯渇又は開裂 剤 (例えばマトリックスメタロプロテイナーゼ及び／又はコラゲナーゼ)と共に含む、請 求項３０又は３１記載の組成物。 【請求項３３】 患部組織に直接注射するために製剤された請求項２５∼３２のいずれか１項に記載の組 50 (4) JP 2013-540803 A 2013.11.7 成物。 【請求項３４】 局所投与のために製剤された請求項２５∼３２のいずれか１項に記載の組成物。 【請求項３５】 前記DAMPアンタゴニストは、アラーミンアンタゴニスト、例えば、HMGB1、S100A8、 S1 00A9、 S100A8/9及びS100A12のアンタゴニストの１種又は２種以上である請求項２５∼３ ４のいずれか１項に記載の組成物。 【請求項３６】 TNF-αアンタゴニストをさらに含む請求項２５∼３４のいずれか１項に記載の組成物。 【請求項３７】 10 DAMPアンタゴニスト及び／又はAGE阻害剤を、任意に細胞外マトリックス分解、枯渇又 は開裂剤 (例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ及び／又はコラゲナーゼ）と共に 骨格筋線維増殖性疾患の処置を必要とする患者に投与することを含む骨格筋線維増殖性疾 患の処置方法。 【請求項３８】 前記骨格筋線維増殖性疾患が、デュピュイトラン病、足底線維腫症、癒着性関節包炎及 びペロニー病から成る群より選ばれる請求項３７記載の方法。 【請求項３９】 デュピュイトラン病の処置のためのものである請求項３８記載の方法。 【請求項４０】 20 DAMPアンタゴニスト及び／又はAGE阻害剤を、任意に細胞外マトリックス分解、枯渇又 は開裂剤 (例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ及び／又はコラゲナーゼ）と共に 骨格筋線維増殖性疾患の処置を必要とする患者に局所投与することによる、請求項３７∼ ３９のいずれか１項に記載の方法。 【請求項４１】 DAMPアンタゴニスト及び／又はAGE阻害剤の、骨格筋線維増殖性疾患の処置のための薬 剤の製造のための使用。 【請求項４２】 DAMPアンタゴニスト及び／又はAGE阻害剤とマトリックスメタロプロテイナーゼとの、 骨格筋線維増殖性疾患の処置のための薬剤の製造のための使用。 30 【請求項４３】 DAMPアンタゴニスト及び／又はAGE阻害剤及び／又はTNF-αアンタゴニストと、任意に マトリックスメタロプロテイナーゼとの、骨格筋線維増殖性疾患の処置のための薬剤の製 造のための使用。 【請求項４４】 使用、疾患又は薬剤が、請求項２５∼３５のいずれか１項によりさらに規定される、請 求項４１∼４３のいずれか１項に記載の使用。 【請求項４５】 効果量の筋線維芽細胞活性低下剤及び／又は筋線維芽細胞産生阻害剤を患者に局所投与 することを含む、外科的筋膜切除後、針筋膜切開後又は酵素媒介細胞外マトリックス分解 40 後のデュピュイトラン病の再発の低減又は予防方法。 【請求項４６】 治療、予防又は再発抑制に効果的な量の筋線維芽細胞活性低下剤及び／又は筋線維芽細 胞産生阻害剤（例えばTNF-αアンタゴニスト）を、骨格筋癒着、例えば癒着性関節包炎、 又は関節周囲の線維症近位指節間関節の治療、予防又は再発防止を必要とする患者に投与 することを含む、骨格筋癒着、例えば癒着性関節包炎、又は関節周囲の線維症近位指節間 関節の治療、予防又は再発防止方法。 【請求項４７】 筋線維芽細胞活性低下剤及び／又は筋線維芽細胞産生阻害剤（例えばTNF-αアンタゴニ スト）を含む、骨格筋癒着、例えば癒着性関節包炎、又は関節周囲の線維症近位指節間関 50 (5) JP 2013-540803 A 2013.11.7 節の治療、予防又は再発防止用の、好ましくは患部又はその近傍に局所投与するための、 組成物。 【発明の詳細な説明】 【技術分野】 【０００１】 本発明は、線維腫症、特にデュピュイトラン病(Dupuytren's disease)などの骨格筋線 維増殖性疾患(musculoskeletal fibroproliferative disorder)の治療に関する。特に、 本発明は、骨格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン病）の治療、予防若しくは進 行防止のための、組成物若しくは治療剤、又はかかる組成物若しくは治療剤の組合せ、骨 格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン病）の治療、予防若しくは進行防止のため 10 のかかる組成物／治療剤の使用、及び、骨格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン 病）の治療方法に関する。 【背景技術】 【０００２】 デュピュイトラン病は、手掌線維腫症として（又は、その既存の病状(established dis ease state)のデュピュイトラン拘縮で）も知られており、最も一般的には、薬指及び小 指を曲げる物理的影響によって手（手掌筋膜）の結合組織を厚くさせ短くさせる、手（手 掌筋膜）の結合組織におけるコラーゲンなどの細胞外マトリックス物質の構造に関連する 疾患である。 【０００３】 20 デュピュイトラン病は、白人コーカサス人の人口のおよそ５％が罹患している。最も一 般的な症状は、手の指の進行性屈曲拘縮であり、これは、顕著な機能障害を生じる。進行 性屈曲拘縮は、男性と女性とが共に罹患するが、発病率は男性において高い。 【０００４】 デュピュイトラン病の原因は十分に理解されておらず、また、基礎疾患は一般に治療可 能ではない。 【０００５】 デュピュイトラン病の治療は、伝統的に侵襲性の外科技術であった。主として、該治療 は、不快感を与える組織の外科的切除を含む。重篤疾患又は再発性疾患において、外科的 切除は、被覆する手掌の皮膚の切除と併用され、全層植皮術によって皮膚欠陥が再び表面 30 化する場合がある。外科手術は、通常、長期のリハビリテーション（通常、３ヶ月）を伴 い、また、事例の最大２０％で合併症が報告されている。腱及び関節への二次的変化が生 じた場合、かかる外科的矯正は、後期疾患の主な治療である。それほど侵襲性でない外科 的処置は、結合組織中の線維帯（拘縮）が針の傾斜を用いて分割される針筋膜切開である 。 【０００６】 患部組織の酵素的開裂は、外科手術に関連する侵入性を低減し、回復時間を改善させる 開発の中心であった。このアプローチによって、コラゲナーゼの試験に至った。細菌コラ ゲナーゼ（クロストリジウム(Clostridial)のコラゲナーゼ）はファイザー(Pfizer)社及 びオキシリウム社(Auxilium)のキシアフレックス(Xiaflex)（商標）としてＦＤＡに承認 40 されている。米国再発行特許第３９９４１号、米国特許第５５８９１７１号、及び同６０ ８６８７２号は、デュピュイトラン病の治療における結合組織の酵素的開裂のための細菌 コラゲナーゼの使用について記載する。細菌コラゲナーゼは、特定の不都合の影響を受け る。すなわち、これは、例えば、血管に関連するコラーゲンＩＶ型を含む種々のコラーゲ ン物質の非選択的開裂の欠乏；キシアフレックス(Xiaflex)（商標）の場合、アレルギー 反応及び潜在的免疫性の可能性があること；並びに、投与によって出血がもたらされる場 合があり、薬剤が分散すると、副作用の危険性により、コラゲナーゼの長期活性が、局所 的に投与することができる用量を制限することである。 【０００７】 国際公開公報第２０１０／１０２２０２号は、新規の温度感受性組換えコラゲナーゼを 50 (6) JP 2013-540803 A 2013.11.7 記載し、その活性は、体温より低い温度でみられるが、体温では比較的不活性である。し たがって、デュピュイトラン症候群は、より低い温度でかかる組換えコラゲナーゼを投与 することによって治療することができ、該組換えコラゲナーゼは、活性の持続時間を制限 し、考えられる局所用量を増加させ、コラゲナーゼ関連副作用を低減することが要求され る。 【０００８】 現在まで、コラゲナーゼ治療は、中手指節関節(metacarpophalangel joint)の拘縮の治 療に比較的効果があると考えられているが、近位指節間関節の矯正がそれほど十分ではな かった。さらに、外科的処置でのように、再発が予想され得るが、酵素により筋を切断す ることを含む、初期コラゲナーゼ試験の場合には、再発が、特に近位指節間関節に罹患す 10 る疾患において高い。 【０００９】 提案されている他の外科以外の治療には、Ｘ線治療及び電子線治療などの（初期疾患の 進行を遅延させるための）局所治療、超音波治療、及び低線量放射線治療として適用され る、ビタミンＥクリームの塗布が含まれる。 【００１０】 デュピュイトラン病の治療のほとんどの研究は、デュピュイトラン病（例えば、米国特 許出願公開第２００４／０１６１７６１号）の素因の検出、及び産生された細胞外マトリ ックスに焦点を置かれており、これによって、コラゲナーゼに基づく治療が生じた。デュ ピュイトラン病の生化学的経路への研究から得られた潜在的治療に対する決定的な洞察は 20 ほとんどなかった。 【００１１】 デュピュイトラン病及び他の骨格筋線維増殖性疾患の治療及び／又は予防（例えば、進 行の防止）における新しい治療的処置の必要性が残されている。 【先行技術文献】 【特許文献】 【００１２】 【特許文献１】米国再発行特許第３９９４１号 【特許文献２】米国特許第５５８９１７１号 【特許文献３】米国特許第６０８６８７２号 30 【特許文献４】国際公開公報第２０１０／１０２２０２号 【特許文献５】米国特許出願公開第２００４／０１６１７６１号 【発明の概要】 【発明が解決しようとする課題】 【００１３】 本発明者らは、驚くべきことに、ＴＮＦ‐αアンタゴニストの投与が、初期デュピュイ トラン病の進行防止、及び後期デュピュイトラン病の回復、並びに疾患の再発の低減にお いて、単独で又は別のデュピュイトラン病の治療と併用して効果的であることを見出した 。 【００１４】 40 デュピュイトラン病及び他の骨格筋線維増殖性疾患、足底線維腫症（又は、レダーホー ス病(Ledderhose's disease)）、癒着性関節包炎（五十肩）及びペロニー病（陰茎の線維 腫症）を含み、これらから選択されることが好ましい、特定の線維腫症及び同様の疾患の 治療における改善の必要性が残されている。 【００１５】 本発明は、デュピュイトラン病、足底線維腫症、癒着性関節包炎及びペロニー病のうち の１以上の治療又は予防（例えば、進行若しくは再発の防止）のための、組成物及び方法 を提供することを目的とする。 【課題を解決するための手段】 【００１６】 50 (7) JP 2013-540803 A 2013.11.7 本発明の第１の局面において、（例えば、治療、予防又は進行抑制に効果的な量の）TN F-αアンタゴニストを含む、骨格筋線維増殖性疾患の処置用組成物が提供される。 【００１７】 本発明の第２の局面において、骨格筋線維増殖性疾患の処置用のTNF-αアンタゴニスト が提供される。また、TNF-αアンタゴニストの、骨格筋線維増殖性疾患の処置のための薬 剤の製造のための使用が提供される。 【００１８】 本発明の第３の局面において、（例えば、治療、予防又は進行抑制に効果的な量の）DA MPアンタゴニスト及び／又はAGE阻害剤を含む、骨格筋線維増殖性疾患の処置用組成物が 提供される。 10 【００１９】 本発明の第４の局面において、DAMPアンタゴニスト及び／又はAGE阻害剤の、骨格筋線 維増殖性疾患の処置のための薬剤の製造のための使用が提供される。 【００２０】 本発明の第５の局面において、（例えば、治療、予防又は進行抑制に効果的な量の）DA MPアンタゴニスト及び／又はAGE炎症経路阻害剤を含む、骨格筋線維増殖性疾患の処置用 組成物が提供される。 【００２１】 本発明の第６の局面において、DAMPアンタゴニスト及び／又はAGE炎症経路阻害剤の、 骨格筋線維増殖性疾患の処置のための薬剤の製造のための使用が提供される。 20 【００２２】 本発明の第７の局面において、効果量の１又は複数のDAMPアンタゴニスト及び／又はAG E炎症経路阻害剤を単独で、又は細胞外マトリックス分解、枯渇又は開裂剤と共に、骨格 筋線維増殖性疾患の処置を必要とする患者に投与することを含む、骨格筋線維増殖性疾患 の処置方法が提供される。 【００２３】 本発明の第８の局面において、効果量の、TNF-αアンタゴニストのような、筋線維芽細 胞活性低下剤及び／又は筋線維芽細胞産生阻害剤を、単独で又は細胞外マトリックス分解 、枯渇又は開裂剤と共に、骨格筋線維増殖性疾患の処置を必要とする患者に投与すること を含む、骨格筋線維増殖性疾患の処置方法が提供される。 30 【００２４】 本発明の第９の局面において、効果量の筋線維芽細胞活性低下剤及び／又は筋線維芽細 胞産生阻害剤を患者に局所投与することを含む、外科的筋膜切除後、針筋膜切開後又は酵 素媒介細胞外マトリックス分解後のデュピュイトラン病の再発の低減又は予防方法が提供 される。 【発明の効果】 【００２５】 本発明の組成物及び方法は、デュピュイトラン病（並びに他の線維症及び類似疾患）の 進行を遅延又は停止させることができる。本発明は、初期段階のデュピュイトラン病（並 びに他の線維症及び類似疾患）が、確立した段階の疾患に進行することを防止することが 40 でき、外科的処置及びそれに伴う回復時間を回避することができるという特別な利点を有 する。 【００２６】 本発明の組成物及び方法は、癒着性関節包炎及び腱癒着（確立した段階のデュピュイト ラン病における近位指節間関節の癒着のような）の進行を防止及び抑制することができる 。 【図面の簡単な説明】 【００２７】 【図１】図１は、手術時の観察における結節及び筋の像を示す。 【図２】図２は、デュピュイトラン病患者の種々の部分の患部組織から切除された組織に 50 (8) JP 2013-540803 A 2013.11.7 おけるα‐ＳＭＡを多く含む細胞の分布を示すチャートである。 【図３】図３は、三次元コラーゲンマトリックスにおける細胞の収縮挙動を評価するため のインビトロ試験に使用される培養力モニター(Culture Force Monitor)の写真である。 【図４】図４は、２４時間にわたる種々の細胞培養時間（図３の培養力モニターにおける ）に対する収縮のグラフを示す。 【図５】図５は、デュピュイトラン病患者とは異なる組織由来の細胞における収縮の平均 割合を示すチャートである。 【図６】図６は、デュピュイトラン病患者とは異なる組織由来の細胞における収縮の平均 割合、メッセンジャーＲＮＡの量、収縮性タンパク質α‐平滑筋アクチン（α‐ＳＭＡ） の量及び細胞内分布のチャートである。 10 【図７】図７は、デュピュイトラン病患者の結節及び筋における炎症細胞（マクロファー ジ、ＣＤ６８、マスト細胞、マスト細胞トリプターゼ）の像を示す。 【図８】図８は、α‐ＳＭＡ及びＲＡＧＥが染色されたデュピュイトラン病患者の筋試料 の断面の像を示す。 【図９】図９は、ＲＡＧＥが染色されたデュピュイトラン病患者皮膚試料の断面の像を示 し、非手掌皮膚及び手掌皮膚における異なった分布を示す。 【図１０】図１０は、ＲＡＧＥ発現における、結節、非手掌皮膚及び手掌皮膚線維芽細胞 由来の細胞のＦＡＣＳ分析を示すチャートである。 【図１１】図１１は、ＲＡＧＥ発現における、適合した１組の非手掌皮膚及び手掌皮膚由 来の細胞のＦＡＣＳ分析を示すチャートである。 20 【図１２】図１２は、ＴＮＦ‐α、ＨＭＧＢ１又はＴＧＦ‐β１によって処理された手掌 皮膚真皮線維芽細胞の収縮性のチャートである。 【図１３】図１３は、抗ＴＮＦ‐αの有無における（デュピュイトラン病患者の）初代継 代結節由来細胞の収縮性を示すチャートである。 【図１４】図１４は、ＡＧＥに暴露した手掌真皮線維芽細胞の収縮性を示すチャートであ る。 【図１５】図１５は、特定のＤＡＭＰに暴露したヒト単球からのＴＮＦ‐αの産生を示す チャートである。ＬＰＳは、正の対照として示すＰＡＭＰである。 【図１６】図１６は、特定の受容体遮断薬の存在下における特定のＤＡＭＰに暴露したヒ ト単球からのＴＮＦ‐αの産生を示すチャートである。 30 【図１７】図１７は、Ｓ１００ Ａ８存在下でのＴＬＲ‐４欠損及びＭｙＤ８８欠損細胞 におけるマウス骨髄細胞からのＴＮＦ‐αの産生を示すチャートである。 【図１８】図１８は、特定のＤＡＭＰ単独で、及びＬＰＳと組み合わせて暴露したヒト単 球からのＴＮＦ‐αの産生を示すチャートである。 【図１９】図１９は、デュピュイトラン病の病因における外傷及びアラーミンの役割の提 案されたメカニズムの概略図である。 【図２０】図２０は、抗ＴＮＦ‐αの有無での、ＡＧＥによって刺激された単球の上清へ の暴露に対する手掌線維芽細胞の収縮におけるシワ誘発のチャートである。 【図２１】図２１は、手掌真皮線維芽細胞の収縮性、及びＴＧＦ‐β１に対する用量反応 を示すチャートである。 40 【図２２】図２２は、ＴＮＦ‐αに暴露したデュピュイトラン病患者の手掌真皮線維芽細 胞が、より収縮性になるが、非掌真皮線維芽細胞は、収縮性にならないことを示すチャー トである。 【図２３】図２３は、ＴＮＦ‐αアンタゴニストに暴露したデュピュイトラン病患者の結 節由来(form)細胞の収縮性の用量関連阻害を示すチャートである。 【図２４】図２４は、ファロイジンで染色され、応力の軸における配列を示す、対照Ｉｇ Ｇ抗体のみに暴露した三次元コラーゲンゲル中のデュピュイトラン病患者の結節由来細胞 を示す像である。 図２４ｂ及び２４ｃはそれぞれ、ファロイジン及びα‐ＳＭＡで染色 され、ＴＮＦ‐αアンタゴニストによって処理され、応力の軸の配列の損失を示す、デュ ピュイトラン病患者の結節由来細胞を示す像である。 50 (9) JP 2013-540803 A 2013.11.7 【図２５】図２５は、線維増殖性疾患の病因における高度糖化最終産物、損傷及びアラー ミンの提案された役割の概略図であり、最終一般的経路におけるＴＮＦ‐αの重要な役割 を強調する。 【発明を実施するための形態】 【００２８】 本発明は、骨格筋線維増殖性疾患、特にデュピュイトラン病（若しくは、足底線維腫症 、癒着性関節包炎、及びペロニー病などの他の線維腫症及び同様の疾患）の治療の改善を 提供し、これは、その必要のある患者（特に、初期病状の徴候を示す患者）に、治療量、 予防量、若しくは進行抑制量の筋線維芽細胞活性低下剤(myofibroblast activity down-r egulating agent)、及び／又は筋線維芽細胞産生阻害剤を投与することを含み、治療量、 10 予防量、若しくは進行抑制量のＴＮＦ‐αアンタゴニストを患者に投与することを含むこ とが好ましい。さらに、本発明は、デュピュイトラン病進行の徴候を有するか若しくは示 す患者に、任意に、初期外科的処置（例えば、筋膜切開若しくは筋膜切除(fasciectomy) ）、又は初期の治療的処置（例えば、細胞外マトリックス分解剤(extracellular matrix degradation agent)、枯渇剤(depletion agent)、又は、マトリックスメタロプロテイナ ーゼ、若しくはコラゲナーゼなどの開裂剤(cleaving agent)）に対する補助療法（若しく は併用療法）として、ＴＮＦ‐αアンタゴニストを投与することによる、疾患発現及び／ 又は進行の防止を提供する。さらにまた、本発明は、ＴＮＦ‐αアンタゴニストを患者に 投与することによる、初期外科的処置又は既存の疾患の治療的処置に対する補助療法とし て、疾患の再発の防止を提供する。 20 【００２９】 骨格筋線維増殖性疾患は、筋骨構造と関連する（多くの場合、後期疾患において拘縮に 関連する）、細胞外マトリックスの過剰産生又は非制御産生が特徴である。上述のとおり 、骨格筋線維増殖性疾患には線維腫症が含まれる（文脈が認める箇所で、「骨格筋線維増 殖性疾患」及び「線維腫症」という用語は、区別なく本明細書に使用することができる。 ）。本発明は、かかる疾患の治療、特に、（例えば、外科手術又は治療による初期治療後 の）該疾患の進行及び再発の抑制に関係がある。特に、本発明は、デュピュイトラン病、 足底線維腫症、癒着性関節包炎、及びペロニー病から選択される疾患（特に、デュピュイ トラン病）に関係がある。本文書の残りは、概して、デュピュイトラン病の特別参照と共 に、骨格筋線維増殖性疾患の治療のための組成物及び方法について論じる。文脈が認める 30 箇所で、本開示が、デュピュイトラン病に代わる一般疾患又は他の特定疾患で理解されて もよいことが理解される。 【００３０】 本発明の治療におけるＴＮＦ‐αアンタゴニストの効果は、筋線維芽細胞への線維芽細 胞分化のＴＮＦ‐αによるものであると考えられ、これは、デュピュイトラン病（及び他 の線維腫症）における収縮活動、及び非制御細胞外マトリックス発生誘発の主な原因であ ると理解される。本発明者らは、（筋線維芽細胞分化のＴＮＦ‐α抑制を示した、Goldbe rg et al, J Invest Dermatol. 2007 November ; 127(11): 2645-2655の教示に反して） このＴＮＦ‐α依存性を実証し、また、ＴＮＦ‐αアンタゴニストを生存可能な治療とし て確認している。 40 【００３１】 臨床的コンセンサスは、一般に、臨床的な結節が、既存のデュピュイトラン病の前駆体 であるということである。デュピュイトラン病は、遺伝性素因を有する人に生じ、また、 デュピュイトラン病の発現に対するさらなる危険因子には、局所的外傷、不適切なライフ スタイル（例えば、喫煙、飲酒、及び不適切な食事）、肝臓病、並びに糖尿病が含まれる 。既存の疾患は、中手指節関節(metacarbophalangeal joint)（ＭＣＰＪ）単独の拘縮と して通常発症し、近位指節間関節（ＰＩＰＪ）単独の拘縮としてあまり頻繁に発症せず、 両者を発症することが多い、屈曲拘縮として発症する。細菌コラゲナーゼを使用する酵素 筋膜切開のフェーズＩＩＩ臨床試験は、ＰＩＰＪ拘縮の４０％に対して、ＭＣＰＪ拘縮の ７７％が効果的に治療される（最大５°の完全な伸張）ことを報告した(Hurst et al, N. 50 (10) JP 2013-540803 A 2013.11.7 Engl J. Med, 2009, 361, 968-979)。初期試験(Badalamente et al, J Hand Surg Am, 2 007, 32, 767-774)は、２年の追跡調査で、ＰＩＰＪ拘縮患者において５７％の再発率を 示した。 【００３２】 研究の多くは、筋線維芽細胞が、初期で活動的な疾患と同時に存在し、かかる細胞は、 増殖性細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の発生又は堆積（特に、コラーゲン堆積）に関係す ることを示している。ＴＧＦ‐β１は、筋線維芽細胞表現型を発達させる。また、筋線維 芽細胞も収縮挙動の原因であると考えられている。筋線維芽細胞は、特徴として、血管平 滑筋細胞に特有のアクチンアイソフォームである、α‐平滑筋アクチン（α‐ＳＭＡ）を 発現させる。α‐ＳＭＡは、筋線維芽細胞の収縮性の原因であるタンパク質であると考え 10 られ、筋線維芽細胞の最も信頼できるマーカーである。 【００３３】 上述するように、本発明は、治療量、予防量又は進行抑制量のＴＮＦ‐αアンタゴニス トを患者に投与することによって、線維腫症（特に、デュピュイトラン病）などの骨格筋 線維増殖性疾患を治療するための組成物及び方法を含むことが好ましく、骨格筋線維増殖 性疾患の進行若しくは再発を抑制するか、又は停止させるための組成物及び方法を含むこ とがより好ましい。投与は、局所投与（例えば、注射によって、又は患部組織に隣接して ）であることが好ましい。 【００３４】 本発明には２つの主な実施態様がある。 20 【００３５】 本発明の第１の主な実施態様は、効果的な量のＴＮＦ‐αアンタゴニストを、（例えば 、触診可能な筋を示す前の）初期病状を示す患者に投与することによって、初期病状の骨 格筋線維増殖性疾患（特に、初期病状のデュピュイトラン病）を治療するための組成物及 び方法を含む。 【００３６】 第１の実施態様によれば、ＴＮＦ‐αアンタゴニストを含む組成物は、（既存の病状へ の）疾患の進行を防止し、これにより生じる屈曲拘縮を予防するために、患者に投与する ことができる。該方法は、臨床的な結節への直接的な局所投与（例えば、注射による）を 含むことが好ましい。好ましい実施態様において、該方法は、細胞外マトリックス分解剤 30 、枯渇剤、又は開裂剤（コラーゲン分解剤、枯渇剤、又は開裂剤が好ましく、また、例え ば、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、及び／又はコラゲナーゼであっても よい。ただし、例えば、ＭＭＰ若しくはコラゲナーゼ低下剤、又は誘発剤であってもよい 。）を、好ましくは局所的に（より好ましくは、確認された臨床的な結節に直接）、患者 に投与することをさらに含む。マトリックスメタロプロテイナーゼ、又はコラゲナーゼは 、臨床的な結節に対して局所的である、コラーゲン及び細胞外マトリックスを破砕でき、 これによって、増殖性線維症の病巣に対する投与されたＴＮＦ‐αアンタゴニストの接近 が促進され、このため、治療の有効性を高めることができると考えられる。本方法のＴＮ Ｆ‐αアンタゴニストの投与は、予防又は進行停止又は抑制治療と考えられる。本実施態 様によれば、初期治療は、ＴＮＦ‐αアンタゴニストであり、これに、細胞外マトリック 40 ス分解剤又は開裂剤を付加することが好ましい。 【００３７】 ＴＮＦ‐αアンタゴニスト、及び細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は、開裂剤（ 例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、及び／又はコラゲナーゼ）との、初期病状 の骨格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン病）を示す患者の複合療法を含む、好 ましい実施態様において、ＴＮＦ‐αアンタゴニスト、及び細胞外マトリックス分解剤、 枯渇剤、又は開裂剤（例えば、コラゲナーゼ）は、同時に、又は連続して、一緒に、又は 別々に投与することができる。ＴＮＦ‐αアンタゴニスト、及び細胞外マトリックス分解 剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、コラゲナーゼ）は共に、例えば注射によって、局所的 に投与されることが好ましい。任意に、これらは同時に投与されてもよく、例えば、ＴＮ 50 (11) JP 2013-540803 A 2013.11.7 Ｆ‐αアンタゴニスト及びコラゲナーゼの両方を含む組成物を（例えば、注射剤によって ）投与されてもよく、又は、２つの別々の組成物を同時に適用することによって、投与さ れてもよい。又は、ＴＮＦ‐αアンタゴニスト、及び細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤 、又は開裂剤（例えば、コラゲナーゼ）は、別々に投与される。別々に投与される場合、 これらは、いずれかの順序、適切な時間間隔で投与されてもよい。別々に投与される場合 、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、コラゲナーゼ）が、最初に 投与され、続いて、ＴＮＦ‐αアンタゴニストが投与されることが好ましく、細胞外マト リックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤は、ＴＮＦ‐αアンタゴニスト投与後の適切な時間 、例えば、最低５分後、好ましくは４８時間以内、より好ましくは２４時間以内、さらに より好ましくは６時間以内、及び最も好ましくは１５分から３時間以内に投与されてもよ 10 い。 【００３８】 ＴＮＦ‐αアンタゴニスト、及び細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤は、 初期病状の骨格筋線維増殖性疾患の治療のために、同時に投与されることが好ましい。組 成物は、初期病状の骨格筋線維増殖性疾患（好ましくはデュピュイトラン病）の治療のた めに、局所投与（例えば、注射剤、徐放性組成物又はインプラント）で提供されることが 好ましく、該組成物は、任意に、好ましくは補助的な量の、細胞外マトリックス分解剤、 枯渇剤、又は開裂剤（好ましくは、マトリックスメタロプロテイナーゼ、及び／又はコラ ゲナーゼ）と、医薬として許容し得る担体とを併用して、効果的な量のＴＮＦ‐αアンタ ゴニストを含む（又は、例えば、該組成物が徐放性組成物である場合、効果的な量のＴＮ 20 Ｆ‐αアンタゴニストを放出するように構成される。）。 【００３９】 本実施態様によれば、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、全身合併症を誘発せずに、疾患進 行を抑制するのに効果的な量で提供されることが好ましい。したがって、任意に、ＴＮＦ ‐αアンタゴニストは、例えば、少なくとも１０％、好ましくは少なくとも３０％、より 好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは、少なくとも７５％、及び最も好ま しくは少なくとも９０％の臨床的な結節組織中の平均α‐ＳＭＡ陽性筋線維芽細胞集団に よって示すように、臨床的な結節組織における筋線維芽細胞活性を、少なくとも１０％、 好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは 、少なくとも７５％、及び最も好ましくは少なくとも９０％低下させる量で提供され、活 30 性低下又は細胞集団の減少は、投与から、４８時間以内で顕著であることが好ましく、２ ４時間がより好ましい。効果的な量のＴＮＦ‐αアンタゴニストは、投与後２週以内で臨 床的な結節サイズの低減（例えば、突起又は側面又は縦方向の範囲によって測定される、 少なくとも２０％、又は少なくとも５０％の大きさの低減）が生じることが好ましい。Ｔ ＮＦ‐αアンタゴニスト治療の有効性は、疾患の進行の全体的な低減によって顕著である ことが好ましい。 【００４０】 ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、（例えば、販売許可又はＦＤＡ承認の参照によって）慢 性関節リウマチの全身治療で示される（又は、示されるであろう）０．０１∼０．５、好 ましくは０．０５∼０．２、及びより好ましくは０．０９５∼０．１５の用量範囲の量で 40 投与できることが好ましい。ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、インフリキシマブ、アダリム マブ、セルトリズマブペゴール、ゴリムバム、若しくはエタネルセプトのうちの１つ又は これらの組合せから選択されることが好ましく、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、セルトリ ズマブペゴールであることが最も好ましく、例えば、臨床的な結節への注射として、１∼ １００ ｍｇ、好ましくは５∼５０ ｍｇ、及び最も好ましくは１０∼４０ ｍｇの量で投 与されることが好ましい。（例えば、２つの別個の臨床的な結節に）１を超える注射が提 供される場合、その用量は、分割されることが好ましく、このため、提供される全用量は 、上述の範囲にある。 【００４１】 本実施態様によれば、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マト 50 (12) JP 2013-540803 A 2013.11.7 リックスメタロプロテイナーゼ、及び／又はコラゲナーゼ）は、ＴＮＦ‐αアンタゴニス トの補助的な量で提供されることが好ましく、このことは、ＴＮＦ‐αアンタゴニストの 効能を高めるのに効果的な量を意味する。いずれの場合であっても、最大１ ｍｇの量で 、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテ イナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）が提供されることが好ましい。細胞外マトリックス分 解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラ ゲナーゼ）は、既存の病状の線維腫症において酵素筋膜切開を達成するのに必要である、 細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテイ ナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）の用量よりも顕著に少ない量（例えば、０．０１∼０． ５倍）で、投与されることが好ましい。細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤 10 （例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）は、０．０１∼ ０．５ ｍｇの量で提供されることが好ましく、０．０５∼０．２ ｍｇで提供されること がより好ましい。 【００４２】 細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテ イナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）は、細胞集団の接近において、ＴＮＦ‐αアンタゴニ ストを支援することができ、さらに、臨床的な結節の細胞外マトリックスの分解も支援す ることができる。 【００４３】 本発明の第２の主な実施態様は、好ましくは、外科的筋膜切除、外科的筋膜切開、及び 20 ／又は細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、若しくは開裂剤（例えば、マトリックスメタ ロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）治療（好ましくはコラゲナーゼ治療）と併用 して、同時に、連続して、共同して、付随して、併用投与して、又は補助的にこれらと共 に、効果的な量のＴＮＦ‐αアンタゴニストを患者に投与することによって、既存の病状 のデュピュイトラン病（若しくは、他の骨格筋線維増殖性疾患）を治療するための組成物 及び方法を含む。該方法は、外科的筋膜切開、針筋膜切開、又は細胞外マトリックス分解 剤、枯渇、若しくは開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラ ゲナーゼ）投与を含むことが好ましく、該方法は、既存の疾患の改善（すなわち、患部の 指のより大きな伸張が可能になる）、より好ましくは矯正（すなわち、最大５°の完全な 伸張）、及び最も好ましくは完全な矯正（完全な伸張）を提供する。該方法は、患部に対 30 する局所的部位への、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリ ックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）の投与を含むことが最も好ましい 。治療が、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタ ロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）を含む場合、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、 同時に、連続して、又は別々の投与によって、複合治療（例えば、複合療法、併用療法、 若しくは補助療法）で提供することができる。本実施態様において、ＴＮＦ‐αアンタゴ ニストは、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタ ロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）治療に対して補助的であることが好ましい。 本実施態様によれば、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤 、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）の 40 投与前後に、例えば、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリ ックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）の投与前後４∼６週以内に、好ま しくは、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロ プロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）の投与前後１４日以内に、さらにより好ましく は、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロ テイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）の投与の少なくとも３０分前後に、及び、より好ま しくは、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロ プロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）の投与後に、例えば、細胞外マトリックス分解 剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラゲ ナーゼ）の投与４時間から７日後に、別々に投与することができる。これによって、ＴＮ 50 (13) JP 2013-540803 A 2013.11.7 Ｆ‐αアンタゴニストの投与は、患部へのより良好な接近を獲得することができるが、筋 線維芽細胞を最適に抑制することができる時点で投与されてもよい。 【００４４】 本実施態様によれば、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、全身合併症を誘発せずに、疾患再 発を抑制するのに効果的な量に提供されることが好ましい。したがって、任意に、ＴＮＦ ‐αアンタゴニストは、例えば、少なくとも１０％、好ましくは少なくとも３０％、より 好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは、少なくとも７５％、及び最も好ま しくは少なくとも９０％の筋組織又は臨床的な結節組織中の平均α‐ＳＭＡ陽性筋線維芽 細胞集団によって示すように、手術後又は筋膜切開（針筋膜切開若しくは酵素筋膜切開） と比較して、筋組織又は臨床的な結節組織における筋線維芽細胞活性を、少なくとも１０ 10 ％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好まし くは、少なくとも７５％、及び最も好ましくは少なくとも９０％低下させる量で提供され 、活性低下又は細胞集団の減少は、投与から、４８時間以内で顕著であることが好ましく 、２４時間がより好ましい。再発抑制効果は、全細胞集団の５０％未満、好ましくは３０ ％未満、及び最も好ましくは１５％未満の筋、組織学的な結節、又は臨床的な結節中のα ‐ＳＭＡ陽性筋線維芽細胞の集団を、例えば投与２週以内、維持することによって達成す ることができることが好ましい。 【００４５】 効果的な量のＴＮＦ‐αアンタゴニストは、投与後２∼４週以内において、触診可能な 、又は（例えば、超音波走査によって）測定される、臨床的な結節の症状、及び／又は臨 20 床的な結節サイズの増加（例えば、突起若しくは側面若しくは縦方向の範囲によって測定 される、サイズの２５％の増加）を防止するものであることが好ましい。ＴＮＦ‐αアン タゴニスト治療の有効性は、疾患（例えば、既存の病状）の再発の全体的な防止によって 顕著であることが好ましい。効果的な量のＴＮＦ‐αアンタゴニストを投与することによ って、ＴＮＦ‐αアンタゴニスト投与後の期間内に（例えば、最大６週、好ましくは最大 ６ヶ月）、屈曲拘縮によって発現される既存の病状（例えば、矯正治療後の範囲と比較し て、１０°未満に維持された屈曲拘縮、より好ましくは、５°未満のさらなる拘縮）の再 発を管理できるか、又は防止できることが好ましい。任意に、これ（例えば２∼４週）を 達成するために、反復投与が提供されてもよい。 【００４６】 30 ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、（例えば、販売許可又はＦＤＡ承認の参照によって）慢 性関節リウマチの全身治療で示される（又は、示されるであろう）０．０１∼０．５、好 ましくは０．０５∼０．２、及びより好ましくは０．０９５∼０．１５の用量範囲の量で 投与できることが好ましい。ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、インフリキシマブ、アダリム マブ、セルトリズマブペゴール、ゴリムバム、若しくはエタネルセプトのうちの１つ又は これらの組合せから選択されることが好ましく、ＴＮＦ‐αアンタゴニストはセルトリズ マブペゴールが最も好ましく、ＴＮＦ‐αアンタゴニスト（例えば、セルトリズマブペゴ ール）は、例えば、臨床的な結節への注射として、０．１∼１００ ｍｇ（例えば、０． １若しくは０．５ ｍｇ∼１０若しくは２０ ｍｇ）、好ましくは１∼１００ ｍｇ、より 好ましくは５∼５０ ｍｇ、及び最も好ましくは１０∼４０ ｍｇの量で投与されることが 40 好ましい。（例えば、２つの離れた、若しくは別個の臨床的な結節に）１を超える注射が 提供される場合、その用量は、分割されることが好ましく、このため、提供される全用量 は、上述の範囲にある。さらに、最適な用量は、使用されるＴＮＦ‐αアンタゴニストに よって変更できることに留意すべきである。最適な用量は、（筋線維芽細胞の活性及び産 生に対する）最大の抑制効果を奏する用量が好ましい。このため、同じ用量のアイソタイ プ抗体は、最小の効果又は許容し得るわずかな効果ではない。 【００４７】 本発明のこの主な実施態様によれば、治療は、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又 は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）の、患 部に対して局所的な投与を含むことが好ましい。細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又 50 (14) JP 2013-540803 A 2013.11.7 は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）は、投 与の２４時間又は４８時間以内に、疾患に関連する拘縮（例えば、デュピュイトラン病の 場合では、全範囲の５°未満）の改善及び／又は矯正を可能にするのに十分な量で投与さ れる必要がある。コラゲナーゼ（例えば、クロストリジウム(Clostridium)のコラゲナー ゼ）などの細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤は、各拘縮に沿って１以上の 箇所に投与される、最大１０ ｍｇ、好ましくは投与当たり０．１∼５ ｍｇ、より好まし くは０．１５∼２ ｍｇ、及び最も好ましくは０．５∼１ ｍｇの量で、局所投与されるこ とが好ましい。 【００４８】 細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテ 10 イナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）が拘縮改善のために投与され、ＴＮＦ‐αアンタゴニ ストが再発抑制のために投与される、一実施態様において、細胞外マトリックス分解剤、 枯渇剤、又は開裂剤（例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナー ゼ）と、ＴＮＦ‐αアンタゴニストの単一併用用量を提供することができる。 【００４９】 一実施態様において、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤は、効果的な量 で、患部筋組織に投与する（例えば、注射する）ことができ、ＴＮＦ‐αアンタゴニスト は、再発抑制量で、臨床的な結節及び／又は筋組織に投与する（例えば、注射する）こと ができる。 【００５０】 20 いずれかの公知のＴＮＦ‐αアンタゴニストは、本発明の実施に利用することができ、 その広い種類は、当該分野で公知であり、開示されている。ＴＮＦ‐αアンタゴニストは 、ヒトＴＮＦ‐αアンタゴニストが好ましい。任意に、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、モ ノクローナル抗体又はその断片などの抗体；キメラモノクローナル抗体（ヒト‐マウスキ メラモノクローナル抗体など）；完全ヒトモノクローナル抗体；組換えヒトモノクローナ ル抗体；ヒト化抗体断片；サリドマイド若しくはその相似体又はＰＤＥ‐ＩＶ阻害剤など の小分子ＴＮＦ‐α遮断薬を含む、可溶性ＴＮＦ‐αアンタゴニスト；ＴＮＦ受容体、又 はＴＮＦ受容体融合タンパク質（例えば、可溶性ｐ５５若しくはｐ７５ ＴＮＦ受容体、 又はＴＮＦ受容体融合タンパク質）であってもよい。 【００５１】 30 任意に、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、モノクローナル抗体の機能性断片（例えば、Ｆ ａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなどの上述の種類のもの、好ましくはＦａｂ）を含む、機能 性断片又は融合タンパク質である。断片は、（例えば、安定性及び／又は徐放性のために ）ペグ化されるか、又は封入されることが好ましい。 【００５２】 任意に、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、二機能性（若しくは二重特異性）抗体、又は二 機能性（若しくは二重特異性）抗体断片として提供される。二機能性ＴＮＦ‐αアンタゴ ニスト抗体又はその断片は、例えば、モノクローナル抗体若しくはその断片、キメラモノ クローナル抗体（ヒト‐マウスキメラモノクローナル抗体など）、完全ヒトモノクローナ ル抗体、組換えヒトモノクローナル抗体、ヒト化抗体断片などの抗体であってもよい。Ｔ 40 ＮＦ‐αアンタゴニストが、二機能性抗体断片又は二機能性抗体部分を含む場合、二機能 性Ｆ（ａｂ’）２断片又は二価ＳｃＦｖ（例えば、二重特異性タンデム(tandem)ジ‐Ｓｃ Ｆｖ）が好ましい。いずれの場合であっても、二機能性（若しくは二重特異性）抗体又は その断片は、一方の可変領域（例えば、抗原結合部分）ＴＮＦ‐αアンタゴニスト（例え ば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムバム、若しくはエタネル セプトのＴＮＦ‐αアンタゴニスト部分）として、及び、他方の可変領域（例えば、抗原 結合部分）ＴＮＦ‐αアンタゴニスト以外の第２可変領域として、含まれていてもよい。 任意に、該第２の可変領域は、抗体移動阻害剤を含んでいてもよく、該阻害剤は、例えば 、細胞外マトリックス（例えば、コラーゲン、バインダー、又はアンタゴニスト）であっ てもよい。これによって、抗体又はその断片が、自己集中し、全身取込みを最小化し、こ 50 (15) JP 2013-540803 A 2013.11.7 のため、全身性副作用があるので、高用量のＴＮＦ‐αアンタゴニストを投与することが できる。任意に、該第２の可変領域は、ＤＡＭＰアンタゴニスト（Ｓ１００Ａ８及び／又 はＳ１００Ａ９のアンタゴニストなど、例えば、米国特許第７５５３４８８号に記載され ているもの）、又はＡＧＥ阻害剤（例えば、ＤＡＭＰアンタゴニスト抗体若しくはＡＧＥ 阻害剤抗体の可変領域である）を含んでいてもよい。二機能性抗体及び二機能性抗体断片 の生産方法は、当該分野で公知であり、該方法は、本目的に適用されてもよい。 【００５３】 ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、投与（例えば、臨床的な結節若しくは筋への注射などの 局所投与）で、患者の４０％未満、好ましくは２０％未満、及びより好ましくは１０％未 満において、触診可能な局所的腫脹、発赤及び心因掻痒として発現される、投与部位刺激 10 をもたらすものから選択されることが好ましい。 【００５４】 ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズ マブペゴール、ゴリムバム、若しくはエタネルセプト、又はその機能性断片のうちの１つ 又はこれらの組合せから選択されてもよい。注射部位反応及び痛みが少ないことから、Ｔ ＮＦ‐αアンタゴニストは、セルトリズマブペゴールであることが最も好ましい。 【００５５】 局所刺激が患者の許容性を制限し、さらに局所的炎症が疾患の再発に至る場合があるの で、本発明によって、投与に関連する炎症、刺激及び痛みを最小化するのが特に有利であ る。一実施態様において、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ） 20 分解剤、若しくは開裂剤（例えば、コラゲナーゼ）と共に、又はその投与前に投与するこ とができ、これによって、ＥＣＭ分解に対する炎症反応が最小化され、このため、再発を 誘発する治療の可能性を低減させる。 【００５６】 細胞外マトリックス（ＥＣＭ）分解剤、枯渇剤、又は開裂剤は、フィブロネクチン及び コラーゲンを含み、分解し、開裂するか、又は細胞外マトリックスの分解若しくは開裂を もたらすか又は誘導することが可能である、いずれかの適切な薬剤であってもよい。例え ば、ＥＣＭ分解剤又は開裂剤は、ＥＣＭ分解酵素、又はＥＣＭ分解酵素発現上昇剤(ECM d egradation enzyme expression up-regulator)（例えば、リラキシン）であってもよい。 ＥＣＭ分解剤又は開裂剤は、マトリックスメタロプロテイナーゼ、又はコラゲナーゼであ 30 ることが好ましく、細菌コラゲナーゼ（例えば、クロストリジウムのコラゲナーゼ）、ヒ ト若しくはヒト化コラゲナーゼ、又は突然変異若しくは組換えコラゲナーゼ、又は組換え マトリックスメタロプロテイナーゼ（例えば、組換えマトリックスメタロプロテイナーゼ Ｉ、好ましくは、ヒト組換えマトリックスメタロプロテイナーゼＩ)などのコラゲナーゼ がより好ましい。コラゲナーゼは、時間若しくは温度に依存するか、又は、光力学的に活 性化されるか、若しくは非活性化されて、高い局所用量によって、全身性若しくは永続的 副作用がなく、投与することができることが好ましい。任意に、コラゲナーゼは、カテプ シン(Cathespin)Ｌ又はその突然変異体若しくは組換え体である。本発明に使用される適 切なコラゲナーゼの例には、次に示すものに記載されているものが含まれる。すなわち、 英国特許第２３２３５３０Ａ号、米国特許第５５８９１７１号、米国再発行特許第３９９ 40 ４１号、米国特許第６０８６２７２号、及び国際公開公報第２０１０／１０２２６２号（ 及び、任意に、これらの文献に記載されている量で、既存の疾患において、コラゲナーゼ 、及び投与量と投与様式に関するこれらの開示は、引用により本明細書中に組み込まれる 。）である。 【００５７】 初期病状とは、例えば、触診可能な筋若しくは重篤な拘縮のない状態で、疾患の徴候、 例えば、組織学的マーカー、又は、特に組織中の臨床的な結節を示すことを意味する。初 期病状のデュピュイトラン病とは、重篤な（例えば、少なくとも５°）屈曲拘縮（又は、 例えば、触診可能な筋）がない状態で、デュピュイトラン病の徴候、例えば、組織学的マ ーカー、又は、特に手掌及び／又は指組織中の臨床的な結節を示すことを意味する。 50 (16) JP 2013-540803 A 2013.11.7 【００５８】 既存の病状とは、臨床的な結節を示すことを意味し、触診可能な筋が存在し、また、拘 縮が明らかである。既存の病状のデュピュイトラン病とは、手掌及び手の指において臨床 的な結節を示すことを意味し、また、屈曲拘縮が明らかである（例えば、少なくとも５° ）。 【００５９】 デュピュイトラン病の組織学的段階の変化は、次に示すように、３つの別々の段階に、 文献で、Rombouts (J Hand Surg Am, 14, 644-652, 1989)とその後の筆者によって最も簡 潔に分類されている。すなわち、１）高い細胞性による増殖段階、及び有糸分裂像の存在 、２）高い細胞性であるが無有糸分裂像がないことが特徴である線維細胞性段階、及びレ 10 チクリンネットワークの存在、並びに、３）膠原線維の広い束によって分離された少ない 細胞による線維性段階である。段階１）疾患は、上に論ずる（すなわち、結節は存在する が、拘縮は存在しない）ように、初期病状に相関すると考えられる。また、デュピュイト ラン病の段階２）及び３）は、本発明者らの既存の病状（指拘縮が特徴）に相関すると考 えられる。本発明者らは、初期病状において、活性のある筋線維芽細胞が、特にＭＣＰ及 びＰＩＰ関節に関して、既存の結節及び筋に集中し、また、これらが、指の屈曲拘縮の進 行をもたらすことを見出した。 【００６０】 臨床的な結節とは、触診可能な皮下の塊として明らかな手掌又は指の結節を意味する。 【００６１】 20 組織学的な（又は組織病理学的な）結節とは、通常渦巻きパターンで、細胞の小さな病 巣から細胞の大きな集中まで及び得るが、臨床的に触診可能ではない、細胞（主として、 マクロファージ及びマスト細胞などの一部の炎症細胞を有する筋線維芽細胞）の集中を意 味する。 【００６２】 理論によって拘束されることなく、初期の臨床的に触診可能な結節は、疾患進行時に増 殖する線維芽細胞の病巣であるが、多くの組織学的な結節は、筋の形成、拘縮、及び屈曲 拘縮の根本的な原因である、手掌及び／又は指の種々の箇所に形成されることが考えられ る。 【００６３】 30 「結節」が本明細書に使用される場合、文脈から明らかであるのと同様に、臨床的な又 は組織学的な結節（又は、これらのいずれか）であってもよい。 【００６４】 デュピュイトラン病に対して特異的な２つの他の実施態様によれば、第１の実施態様は 、２０°未満の関節性拘縮を特徴とする、デュピュイトラン病の治療のための組成物及び 方法に関してもよい。また、第２の実施態様は、少なくとも２０°未満の関節性拘縮を特 徴とする、デュピュイトラン病の治療のための組成物及び方法に関してもよい。２０°の 拘縮は、過渡期であるとみなされる。これは、２０°未満の拘縮では、手の移動及び動作 が、依然として概ね十分であるので、多くの患者は、手術を受けずに、疾患の進行を停止 することを選択できるが、２０°よりも大きい拘縮では、多くの患者は、手の完全な機能 40 を回復させるのに不可欠な外科手術又は他のコラーゲン枯渇療法（酵素筋膜切開など）を 受けるからである。 【００６５】 本発明者らの調査は、ＴＮＦ‐αが、初期デュピュイトラン病(Dupuyten's disease)（ すなわち、初期病状）に対する最適な治療標的であることを示す。既存の病状のデュピュ イトラン病において、理想的な組合せは、再発を抑制する、ＴＮＦ‐αアンタゴニストと 、コラゲナーゼなどのマトリックスメタロプロテイナーゼとであり、これは、通常、酵素 筋膜切開に関係する。 【００６６】 上述するように、筋線維芽細胞は、骨格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン病 50 (17) JP 2013-540803 A 2013.11.7 ）の進行において、２つの方法に関係する。筋線維芽細胞は、細胞外マトリックス産生又 は堆積、及び収縮挙動の原因である。筋線維芽細胞の活性は、活性のある筋線維芽細胞に 過剰発現される、α‐ＳＭＡによって媒介されると考えられる。理論によって拘束される ことなく、本発明者らは、ＴＮＦ‐αが、少なくとも２つの方法（その１つは、筋線維芽 細胞の活性の低下によるもの、及び、もう１つは、筋線維芽細胞の産生又は誘引の増強に よるもの）において、デュピュイトラン病の筋線維芽細胞の活性に関連することを見出し た。 【００６７】 それぞれの実施態様において、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、疾患進行又は再発を防止 するか又は抑制するために、延長された（又は連続的な）期間において複数回の投与で提 10 供される。再発が無効にされる場合、例えば、低用量で隔週、毎月又は６ヶ月毎の投与に よって、断続的な治療を提供することができる。又は、連続的な治療は、低用量徐放又は 断続的遅延放出性(delayed intermittent release)インプラント又はパッチによって提供 することができる。又は、初期病状における疾患進行の徴候によって、併用投与を開始す ることができ、また、該併用投与は、任意に、細胞外マトリックス分解剤又は開裂剤（例 えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ）とＴＮＦ‐αアンタ ゴニスト治療（例えば、上述の第１の実施態様と一致する）の組合せを含んでいてもよい 。 【００６８】 本発明の一実施態様において、初期病状の疾患（例えば、デュピュイトラン病）の進行 20 は、ＴＮＦ‐αアンタゴニストの局所投与によって、防止するか、抑制するか、又は停止 させることができる。 【００６９】 ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、コラゲナーゼ、及び／又はマトリックスメタロプロテイ ナーゼと併用して、又は補助的にこれらと共に、別々に又は同時に投与できることが好ま しい。コラゲナーゼ（特に、光反応性又は温度依存性コラゲナーゼ）は、初期段階の細胞 外マトリックス形成を開裂することによって治療部位への接近を増強することによる、Ｔ ＮＦ‐αアンタゴニスト疾患進行抑制効果を高める、局所効果のために投与することがで きる。温度依存性コラゲナーゼは、温度に依存するコラゲナーゼ活性を有し、通常、体温 よりも低い温度（例えば、２５℃以下）で活性のあるコラゲナーゼ（通常、組換え又は突 30 然変異コラゲナーゼ）であり、このため、（例えば、作用の寿命と関連するいかなる全身 作用又は他の副作用なしで、約２０℃で、患部に注射することによって）非常に高い用量 のコラゲナーゼが、非常に局所的に作用することができる。結節部位で炎症を低減し、こ のため、さらなる筋線維芽細胞の発達及び動員を低減するので、ＴＮＦ‐αアンタゴニス トには、さらなる有益な効果がある。 【００７０】 本発明の組成物及び方法は、局所的であることが好ましい、いずれかの適切な投与手段 を利用することができる。特に、ＴＮＦ‐αアンタゴニストは、例えば、手術時において 、外科的切開に直接適応することによって、注射（好ましくは、直接、臨床的な結節及び ／又は筋組織へ）によって、移植されるか、若しくは患部に接近し得る徐放及び／又は遅 40 延放出性ロゼンジ若しくはデバイス、又は、徐放及び／又は遅延放出性パッチ製剤からの 放出によって、局所適用又は他の適切な経路によって、局所的に投与する必要がある。組 成物は、適切に製剤されることが好ましく、通常、医薬として許容し得る担体又は賦形剤 と共に、ＴＮＦ‐αアンタゴニストの必要な用量を含む。 【００７１】 非経口投与用の製剤は、通常、活性成分の無菌水性調製物を含んでいてもよく、これは 、レシピエントの血液によって等張されることが好ましい。関節内投与用の製剤は、活性 成分の無菌水性調製物の形態であってもよい。局所投与に適した製剤には、リニメント剤 、ローション剤、及び塗布剤などの液体及び半液体の調製物；クリーム、軟膏及びペース トなどの水中油型及び油中水型エマルション；並びに、液剤及び懸濁剤が含まれ得る。 50 (18) JP 2013-540803 A 2013.11.7 【００７２】 さらなる局面において、例えば、疾患進行又は再発の抑制のための初期病状又は手術後 の患者による使用のために、例えば、毎日、定期的、又は不定期（好ましくは毎日）の頻 度の、骨格筋線維増殖性疾患の患部（例えば、手、特に、デュピュイトラン病の場合には 、手掌及び指）に局所適用する製剤が提供され、該製剤は、（例えば、上に定義する、か かるＴＮＦ‐αアンタゴニストから選択される）局所投与に適したＴＮＦ‐αアンタゴニ ストと、適切な賦形剤とを含む。該製剤は、クリーム剤若しくはローション剤、パッチ剤 若しくは薬用グローブ（該グローブは、内面からの活性成分の放出のために、浸漬される ）として提供されてもよい。該製剤は、例えば、ＴＮＦ‐αアンタゴニストの全身投与の ０．００１∼０．０５、好ましくは０．００１∼０．０１のような低用量の局所適用によ 10 る投与における濃度のＴＮＦ‐αアンタゴニストを含むことが好ましい。任意に、該製剤 は、ＤＡＭＰアンタゴニスト及び／又はＡＧＥ阻害剤をさらに含む。 【００７３】 任意に、本発明の組成物及び方法は、デュピュイトラン病のなどの骨格筋線維増殖性疾 患の治療又は進行抑制に効果的であり得る、活性成分をさらに含んでいてもよい。例えば 、ＴＮＦ‐αアンタゴニストと、血管内皮成長因子ファミリー（ＶＥＧＦ‐Ａ、ＶＥＧＦ ‐Ｂ、ＶＥＧＦ‐Ｃ、若しくはＶＥＧＦ‐Ｄなど）、又は前述のＶＦＧＦをコードした薬 剤若しくはその機能性断片の薬剤（国際公開公報第２００４／０８２７０５号に記載され ているものなど）との複合療法又は併用投与若しくは補助的な共投与において、組合せは 、外科手術、針筋膜切開、又は酵素筋膜切開と共に使用するための進行遅延組合せ（若し 20 くは組成物）であることが好ましい。さらに、又は代替的には、本明細書に記載する、か かる方法又は組成物は、患部に対して局所的に筋線維芽細胞集団を低減する（及び、ＴＮ Ｆ‐αアンタゴニスト活性を高める）ために、ＰＰＡＲγの活性化剤（ピオグリタゾンな ど）をさらに含んでいてもよい。 【００７４】 骨格筋線維増殖性疾患（好ましくはデュピュイトラン病）の治療において、さらなる局 面として、筋線維芽細胞活性低下剤、及び／又は筋線維芽細胞産生（若しくは分化）阻害 剤と併用して、好ましくは、上に論じるそれぞれの実施態様に従ってそれぞれの適切な治 療量で、マトリックスメタロプロテイナーゼ、若しくはコラゲナーゼ（又は、マトリック スメタロプロテイナーゼ若しくはコラゲナーゼ低下剤）を含む治療に使用するための組成 30 物が提供される。好ましい筋線維芽細胞活性低下剤、及び／又は筋線維芽細胞産生（若し くは分化）阻害剤は、ＴＮＦ‐αアンタゴニストである。 【００７５】 さらなる局面において、骨格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン病）の再発を 低減又は防止するための方法が提供され、該方法は、外科手術、針筋膜切開、又は酵素筋 膜切開後、患部への局所的な、筋線維芽細胞非活性化剤、及び／又は産生阻害剤の投与を 含む。該薬剤は、ＴＮＦ‐αアンタゴニストであることが好ましく、前述の用量（関連す る第２の主な実施態様）で投与されることが好ましい。 【００７６】 本発明のさらなる局面において、骨格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン病） 40 の治療のための方法及び組成物が提供され、該方法及び組成物は、ＤＡＭＰ（損傷関連分 子パターン）アンタゴニストを含む。骨格筋線維増殖性疾患は、線維腫症であり、足底線 維腫症、癒着性関節包炎、ペロニー病、又はデュピュイトラン病から選択され得ることが 好ましく、デュピュイトラン病が好ましい。該方法は、効果的な量のＤＡＭＰアンタゴニ ストを、例えば、臨床的な結節の初期病状組織、結節及び／又は筋の既存の病状組織への 注射、又は徐放性パッチ若しくはインプラントの適用、又はクリーム（若しくは、他のか かる局所用製剤）の塗布によって、患部へ局所的に投与することを含むことが好ましい。 本局面による組成物は、効果的な量のＤＡＭＰアンタゴニストと、医薬として許容し得る 賦形剤とを含むことが好ましい。 【００７７】 50 (19) JP 2013-540803 A 2013.11.7 筋肉労働者におけるデュピュイトラン病の高い発病率を支持する、幾つかの証拠が認め られており、損傷、外科手術、及び感染と、デュピュイトラン病との間の関係が認められ ている。理論によって拘束されることなく、手（又は、疾患に罹患する局所的部位）への 外傷の結果として放出される、ＤＡＭＰ（特に、サブグループのＤＡＭＰ、アラーミン） は、特に疾患に遺伝的に罹患しやすいものにおいて、筋線維芽細胞産生、及び／又は筋線 維芽細胞活性（収縮を含む）を触媒するか、又は誘導すると考えられる。アラーミンは、 活性のある筋線維芽細胞への線維芽細胞の分化の直接的な生化学的経路による、筋線維芽 細胞活性及び／又は産生を、直接及び／又は間接的に誘導し、ＴＮＦ‐α産生をアップレ ギュレートすることによって、間接的に誘導すると考えられる（ＴＮＦ‐α産生自体は、 上に論じるような炎症誘発応力を介して、筋線維芽細胞活性及び産生の指示を促進する。 10 ）。アラーミンには、ＨＭＧＢ‐１（高移動度群ボックスタンパク質）、Ｓ１００ Ａ８ 、Ｓ１００ Ａ９、Ｓ１００ Ａ８／９、及びＳ１００ Ａ１２が含まれ、包含される大部 分はＳ１００ Ａ８である。本発明の本態様の方法及び組成物によるＤＡＭＰアンタゴニ ストは、アラーミンアンタゴニストが好ましく、また、１以上の、ＨＭＧＢ‐１、Ｓ１０ ０ Ａ８、Ｓ１００ Ａ９、Ｓ１００ Ａ８／９、及びＳ１００ Ａ１２のうちの１以上のア ンタゴニストがより好ましく、Ｓ１００ Ａ８アンタゴニスト（例えば、Ｓ１００ Ａ８受 容体遮断薬として作用するＳ１００ Ａ８の不活性の断片）が最も好ましい。理論によっ て拘束されることなく、Ｓ１００ Ａ８（及び他のアラーミン）は、結合ＴＬＲ ４（ｔｏ ｌｌ様受容体４）によるこれらの炎症作用を誘発すると考えられる。したがって、ＴＬＲ ４遮断薬は、Ｓ１００ Ａ８アンタゴニストと考えることができる。 20 【００７８】 本局面のＤＡＭＰアンタゴニストは、罹患する前の及び初期病状の患者、特に、外傷か ら誘発した初期病状の患者（特に、デュピュイトラン病）における疾患の発症及び／又は 進行の防止又は抑制に使用することが好ましい。代替的に又はさらに、本局面のＤＡＭＰ アンタゴニストは、例えば、かかる初期治療に対して補助的に、（例えば、手術、又は針 筋膜切開若しくは酵素筋膜切開後の）既存の病状を有する治療後の患者における疾患の再 発の防止又は抑制に使用する。これは、該初期治療が、外傷から誘発されたＤＡＭＰアッ プレギュレーション及び放出をもたらす危険性があり、筋線維芽細胞活性化に関連するの で、特に有益である。したがって、ＤＡＭＰアンタゴニストは、全身合併症を誘発せずに 、疾患発症、進行、若しくは再発を防止するか又は抑制するのに効果的な量で使用される 30 ことが好ましい。よって、任意に、ＤＡＭＰアンタゴニストは、例えば、少なくとも１０ ％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好まし くは、少なくとも７５％、及び最も好ましくは少なくとも９０％の筋組織又は臨床的な結 節組織中の平均α‐ＳＭＡ陽性筋線維芽細胞集団によって示すように、外傷後又は手術後 又は筋膜切開（針筋膜切開若しくは酵素筋膜切開）と比較して、筋組織又は臨床的な結節 組織における筋線維芽細胞活性を、少なくとも５％、好ましくは少なくとも１０％、より 好ましくは少なくとも３０％、及び任意に５０％以上、７５％以上、若しくは９０％以上 低下させる量で提供され、活性低下又は細胞集団の減少は、投与から、４８時間以内で顕 著であることが好ましく、２４時間がより好ましい。再発抑制効果は、全細胞集団の５０ ％未満、好ましくは３０％未満、及び最も好ましくは１５％未満の筋、組織学的な結節、 40 又は臨床的な結節中のα‐ＳＭＡ陽性筋線維芽細胞の集団を、例えば投与２週以内、維持 することによって達成することができることが好ましい。 【００７９】 効果的な量のＤＡＭＰアンタゴニストは、投与後２∼４週以内において、触診可能な臨 床的な結節の症状、及び／又は臨床的な結節サイズの増加（例えば、突起若しくは側面若 しくは縦方向の範囲によって測定される、サイズの２５％の増加）を防止するものである ことが好ましい。ＤＡＭＰアンタゴニスト治療の有効性は、外傷後の患者における疾患の 発症若しくは進行の全体的な防止によって、又は、手術後の患者の疾患（例えば、既存の 病状）の再発の全体的な防止において、顕著であることが好ましい。効果的な量のＤＡＭ Ｐアンタゴニストを（局所的外傷に応じて、初期治療後に及び断続的に）投与することに 50 (20) JP 2013-540803 A 2013.11.7 よって、ＤＡＭＰアンタゴニスト投与後の期間内に（例えば、最大６週、好ましくは最大 ６ヶ月）、屈曲拘縮によって発現される既存の病状（例えば、矯正治療後の範囲と比較し て、１０°未満に維持された屈曲拘縮、より好ましくは、５°未満のさらなる拘縮）の再 発を管理できるか、又は防止できることが好ましい。任意に、これ（例えば２∼４週、又 は局所的外傷に応じて）を達成するために、反復投与が提供されてもよい。 【００８０】 任意に、本発明の本局面のＤＡＭＰアンタゴニストは、ＴＮＦ‐αアンタゴニストと併 用して（例えば、同時に又は連続して）、共投与されてもよく、これによって、筋線維芽 細胞活性化の２つの経路を制御することができる。一実施態様において、デュピュイトラ ン病などの骨格筋線維増殖性疾患の治療のための組成物が提供され、該組成物は、効果的 10 な併用量のＤＡＭＰアンタゴニストと、ＴＮＦ‐αアンタゴニストと、医薬として許容し 得る賦形剤とを含む。該組成物は、患部（例えば、臨床的な結節若しくは筋組織）への注 射（若しくは他の適用）、又はパッチの適用、又は、局所投与（例えば、インプラント） 若しくは局所適用のための遅延放出及び／又は徐放によって、投与することができる。 【００８１】 任意に、本発明の本局面の活性成分及び組成物は、前述する方法（例えば、ＴＮＦ‐α アンタゴニストの代わりに、及び／又はこれに加えて）として、及び該方法で、細胞外マ トリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤と共に、複合治療、併用治療、又は補助治療(adj unctive treatment)として提供されてもよい。 【００８２】 20 本発明の別の局面において、ＤＡＭＰアゴニズム／アンタゴニズムによる（例えば、Ｄ ＡＭＰアゴニスト又はアンタゴニストの投与による）筋線維芽細胞活性の調節方法が提供 される。また、ＤＡＭＰアゴニストを含む、筋線維芽細胞活性を上昇させるための組成物 、及び、ＤＡＭＰアンタゴニストを含む、筋線維芽細胞活性を低下させるための組成物も 提供される。ＤＡＭＰアゴニスト又はアンタゴニストは、筋線維芽細胞を調節する量で提 供され、任意に、局所投与のために製剤される。 【００８３】 任意に、ＤＡＭＰアンタゴニストは、二機能性（若しくは二重特異性）抗体、又は二機 能性（若しくは二重特異性）抗体断片として提供される。二機能性ＤＡＭＰアンタゴニス ト抗体又はその断片は、例えば、モノクローナル抗体若しくはその断片、キメラモノクロ 30 ーナル抗体（ヒト‐マウスキメラモノクローナル抗体など）、完全ヒトモノクローナル抗 体、組換えヒトモノクローナル抗体、ヒト化抗体断片などの抗体であってもよい。ＤＡＭ Ｐアンタゴニストが、二機能性抗体断片又は二機能性抗体部分を含む場合、二機能性Ｆ（ ａｂ’）２断片又は二価ＳｃＦｖ（例えば、二重特異性タンデムジ‐ＳｃＦｖ）が好まし い。いずれの場合であっても、二機能性（若しくは二重特異性）抗体又はその断片は、一 方の可変領域（例えば、抗原結合部分）ＤＡＭＰアンタゴニスト（例えば米国特許第７５ ５３４８８号に記載されている、Ｓ１００Ａ８及び／又はＳ１００Ａ９のアンタゴニスト など）として、及び、他方の可変領域（例えば、抗原結合部分）ＤＡＭＰアンタゴニスト 以外の第２可変領域として、含まれていてもよい。任意に、該第２の可変領域は、抗体移 動阻害剤を含んでいてもよく、該阻害剤は、例えば、細胞外マトリックス（例えば、コラ 40 ーゲン、バインダー、又はアンタゴニスト）であってもよい。これによって、抗体又はそ の断片が、自己集中し、全身取込みを最小化し、このため、全身性副作用があるので、高 用量のＤＡＭＰアンタゴニストを投与することができる。任意に、該第２の可変領域は、 ＡＧＥ阻害剤（例えば、ＤＡＭＰアンタゴニスト抗体又はＡＧＥ阻害剤抗体の可変領域） を含んでいてもよい。二機能性抗体及び二機能性抗体断片の生産方法は、当該分野で公知 であり、該方法は、本目的に適用されてもよい。 【００８４】 任意にＴＮＦ‐αアンタゴニストと併用する、ＤＡＭＰアンタゴニストによる患者の治 療は、任意に、（疾患進行の抑制のために）初期病状を有する患者、又は、（再発抑制の ために）デュピュイトラン病の場合における、ゴルファー、建築者、若しくは運転手など 50 (21) JP 2013-540803 A 2013.11.7 の患部（例えば、デュピュイトラン病の場合における手は、局所的外傷に受ける）を有す る手術後の患者に示されてもよい。 【００８５】 任意に、例えば、局所的外傷が、骨格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン病） の原因である患者のために、例えば、疾患進行又は再発の抑制のために、初期病状又は手 術後の患者によって、例えば、毎日、定期的、又は不定期（好ましくは毎日）の頻度の、 骨格筋線維増殖性疾患の患部（例えば、手、特に、デュピュイトラン病の場合には、手掌 及び指）に局所適用する製剤が提供され、該製剤は、局所投与に適したＤＡＭＰアンタゴ ニスト（例えば、Ｓ１００ Ａ８及び／又はＡ９アンタゴニスト）と、適切な賦形剤とを 含む。該製剤は、クリーム剤若しくはローション剤、パッチ剤若しくは薬用グローブ（該 10 グローブは、内面からの活性成分の放出のために、浸漬される）として提供されてもよい 。該製剤は、例えば、ＤＡＭＰアンタゴニストの全身投与の０．００１∼０．０５、好ま しくは０．００１∼０．０１のような低用量の局所適用による投与における濃度のＤＡＭ Ｐアンタゴニストを含むことが好ましい。任意に、該製剤は、ＡＧＥ阻害剤をさらに含む 。 【００８６】 本発明のさらなる局面において、骨格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン病） の治療のための方法及び組成物が提供され、該方法は、ＡＧＥ（高度糖化最終産物）阻害 剤を含む。骨格筋線維増殖性疾患は、線維腫症であり、足底線維腫症、癒着性関節包炎、 ペロニー病、又はデュピュイトラン病から選択され得ることが好ましく、デュピュイトラ 20 ン病が好ましい。該方法は、効果的な量のＡＧＥアンタゴニストを、例えば、臨床的な結 節の初期病状組織、結節及び／又は筋の既存の病状組織への注射、又は徐放性パッチ若し くはインプラントの適用、又はクリーム（若しくは、他のかかる局所用製剤）の塗布によ って、患部へ局所的に投与することを含むことが好ましい。本局面による組成物は、効果 的な量のＡＧＥアンタゴニストと、医薬として許容し得る賦形剤とを含むことが好ましい 。 【００８７】 デュピュイトラン病は、喫煙、飲酒、及び糖尿病と統計的に有意な関係がある。本発明 者らは、ＡＧＥが、喫煙、飲酒、又は糖尿病の遺伝的な傾向がある患者における関連性及 びデュピュイトラン病をもたらす生化学的経路に関係し得ることを提案する。ＡＧＥ修飾 30 タンパク質は、還元糖とポリペプチドの間の不可逆非酵素グリケーションから形成された 最終産物であり、細胞外マトリックス構造を変化させ、さらに、細胞表面受容体と相互作 用する、タンパク質架橋を形成することによって、これらの影響を及ぼすことが示されて いる。理論によって拘束されることなく、ＡＧＥとこれらの受容体ＲＡＧＥは、デュピュ イトラン病の初期段階及び進行に関係し、ＡＧＥは、筋線維芽細胞活性を直接及び間接的 に上昇させると考えられる。罹患する前の又は初期疾患の手掌組織（ライフスタイル選択 又は糖尿病に関連するレベルの増加により存在する）に含まれるＡＧＥは、特に、遺伝的 に疾患に罹患しやすい患者において、筋線維芽細胞産生、及び／又は筋線維芽細胞活性（ 収縮を含む）を触媒するか、又は誘導すると考えられる。ＡＧＥは、活性のある筋線維芽 細胞への線維芽細胞の分化の直接的な生化学的経路による、筋線維芽細胞活性及び／又は 40 産生を、直接及び／又は間接的に誘導し、ＴＮＦ‐α産生をアップレギュレートすること によって、間接的に誘導すると考えられる（ＴＮＦ‐α産生自体は、上に論じるような炎 症誘発応力を介して、筋線維芽細胞活性及び産生の指示を促進する。）。 【００８８】 本局面のＡＧＥ阻害剤は、罹患する前の又は初期病状の患者（特に、デュピュイトラン 病の患者）における疾患の発症及び／又は進行の防止又は抑制に使用することが好ましい 。代替的に又はさらに、本局面のＡＧＥ阻害剤は、例えば、かかる初期治療に対して補助 的に、（例えば、手術、又は針筋膜切開若しくは酵素筋膜切開後の）既存の病状を有する 治療後の患者における疾患の再発の防止又は抑制に使用する。したがって、ＡＧＥ阻害剤 は、全身合併症を誘発せずに、疾患発症、進行、若しくは再発を防止するか又は抑制する 50 (22) JP 2013-540803 A 2013.11.7 のに効果的な量で使用されることが好ましい。よって、任意に、ＡＧＥ阻害剤は、例えば 、少なくとも１０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも５０％、 さらにより好ましくは、少なくとも７５％、及び最も好ましくは少なくとも９０％の筋組 織又は臨床的な結節組織中の平均α‐ＳＭＡ陽性筋線維芽細胞集団によって示すように、 手術後又は筋膜切開（針筋膜切開若しくは酵素筋膜切開）と比較して、筋組織又は臨床的 な結節組織における筋線維芽細胞活性を、少なくとも５％、好ましくは少なくとも１０％ 、より好ましくは少なくとも３０％、及び任意に５０％以上、７５％以上、若しくは９０ ％以上低下させる量で提供され、活性低下又は細胞集団の減少は、投与から、４８時間以 内で顕著であることが好ましく、２４時間がより好ましい。再発抑制効果は、全細胞集団 の５０％未満、好ましくは３０％未満、及び最も好ましくは１５％未満の筋、組織学的な 10 結節、又は臨床的な結節中のα‐ＳＭＡ陽性筋線維芽細胞の集団を、例えば投与２週以内 、維持することによって達成することができることが好ましい。 【００８９】 効果的な量のＡＧＥ阻害剤（例えば、ピマジェディン）は、投与後２∼４週以内におい て、触診可能な臨床的な結節の症状、及び／又は臨床的な結節サイズの増加（例えば、突 起若しくは側面若しくは縦方向の範囲によって測定される、サイズの２５％の増加）を防 止するものであることが好ましい。ＡＧＥ阻害剤治療の有効性は、外傷後の患者における 疾患の発症若しくは進行の全体的な防止によって、又は、手術後の患者の疾患（例えば、 既存の病状）再発の全体的な防止において、又は初期疾患の進行の防止において顕著であ ることが好ましい。効果的な量のＡＧＥ阻害剤を（初期治療後に）投与することによって 20 、ＡＧＥ阻害剤投与後の期間内に（例えば、最大６週、好ましくは最大６ヶ月）、屈曲拘 縮によって発現される既存の病状（例えば、矯正治療後の範囲と比較して、１０°未満に 維持された屈曲拘縮、より好ましくは、５°未満のさらなる拘縮）の再発を管理できるか 、又は防止できることが好ましい。任意に、これ（例えば２∼４週、又は局所的外傷に応 じて）を達成するために、反復投与が提供されてもよい。 【００９０】 本発明の本局面に従って、いずれかの適切なＡＧＥ阻害剤を利用することができる。 【００９１】 任意に、本発明の本局面のＡＧＥ阻害剤は、ＤＡＭＰアンタゴニスト及びＴＮＦ‐αア ンタゴニストのうちの１つ又は両方と併用して、共投与又は投与されてもよく、これによ 30 って、筋線維芽細胞活性化の２つの経路を制御することができる。一実施態様において、 デュピュイトラン病などの骨格筋線維増殖性疾患の治療のための組成物が提供され、該組 成物は、効果的な併用量のＡＧＥ阻害剤、及び／又はＴＮＦ‐αアンタゴニストと、医薬 として許容し得る賦形剤とを含む。該組成物は、患部（例えば、臨床的な結節若しくは筋 組織）への注射（若しくは他の適用）、又はパッチの適用、又は、局所投与（例えば、イ ンプラント）若しくは局所適用のための遅延放出及び／又は徐放によって、投与すること ができる。 【００９２】 任意に、本発明の本局面の活性成分及び組成物は、前述する方法として、及び該方法で 、細胞外マトリックス分解剤、枯渇剤、又は開裂剤と共に、複合治療、併用治療、又は補 40 助治療として提供されてもよい。 【００９３】 任意に、ＡＧＥ阻害剤は、二機能性（若しくは二重特異性）抗体、又は二機能性（若し くは二重特異性）抗体断片として提供される。二機能性ＡＧＥ阻害剤抗体又はその断片は 、例えば、モノクローナル抗体若しくはその断片、キメラモノクローナル抗体（ヒト‐マ ウスキメラモノクローナル抗体など）、完全ヒトモノクローナル抗体、組換えヒトモノク ローナル抗体、ヒト化抗体断片などの抗体であってもよい。ＡＧＥ阻害剤が、二機能性抗 体断片又は二機能性抗体部分を含む場合、二機能性Ｆ（ａｂ’）２断片又は二価ＳｃＦｖ （例えば、二重特異性タンデムジ‐ＳｃＦｖ）が好ましい。いずれの場合であっても、二 機能性（若しくは二重特異性）抗体又はその断片は、一方の可変領域（例えば、抗原結合 50 (23) JP 2013-540803 A 2013.11.7 部分）ＡＧＥ阻害剤として、及び、他方の可変領域（例えば、抗原結合部分）ＡＧＥ阻害 剤以外の第２可変領域として、含まれていてもよい。任意に、該第２の可変領域は、抗体 移動阻害剤を含んでいてもよく、該阻害剤は、例えば、細胞外マトリックス（例えば、コ ラーゲン、バインダー、又はアンタゴニスト）であってもよい。これによって、抗体又は その断片が、自己集中し、全身取込みを最小化し、このため、全身性副作用があるので、 高用量のＡＧＥ阻害剤を投与することができる。二機能性抗体及び二機能性抗体断片の生 産方法は、当該分野で公知であり、該方法は、本目的に適用されてもよい。 【００９４】 任意にＴＮＦ‐αアンタゴニストと併用する、ＡＧＥ阻害剤による患者の治療は、任意 に、（疾患進行の抑制のために）初期病状を有する患者、又は、（再発抑制のために）糖 10 尿病の、或いは喫煙若しくは飲酒をする（ＷＨＯ推奨量よりも多い）手術後の患者に示さ れてもよい。 【００９５】 任意に、例えば、糖尿病又はライフスタイル（例えば、喫煙及び／又は過度の飲酒）が 、骨格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン病）の原因であると考えられる患者の ために、例えば、疾患進行又は再発の抑制のために、初期病状又は手術後の患者によって 、例えば、毎日、定期的、又は不定期（好ましくは毎日）の頻度の、骨格筋線維増殖性疾 患の患部（例えば、手、特に、デュピュイトラン病の場合には、手掌及び指）に局所適用 する製剤が提供され、該製剤は、局所投与に適したＡＧＥ阻害剤と、適切な賦形剤とを含 む。該製剤は、クリーム剤若しくはローション剤、パッチ剤若しくは薬用グローブ（該グ 20 ローブは、内面からの活性成分の放出のために、浸漬される）として提供されてもよい。 該製剤は、例えば、ＡＧＥ阻害剤の全身投与の０．００１∼０．０５、好ましくは０．０ ０１∼０．０１のような低用量の局所適用による投与における濃度のＡＧＥ阻害剤を含む ことが好ましい。 【００９６】 本発明の別の局面において、ＡＧＥ促進／阻害による（例えば、ＡＧＥ促進剤又は阻害 剤の投与による）筋線維芽細胞活性の調節方法が提供される。また、ＡＧＥ阻害剤を含む 、筋線維芽細胞活性を低下させるための組成物も提供される。 【００９７】 それぞれの実施態様において、反復投与が必要であり得る（例えば、注射）。さらに、 30 再発若しくは発症の徴候が検出される場合に（又は、当然のことながら）、治療を繰り返 して、数ヶ月間若しくは数年間、疾患進行若しくは再発を管理するか、又は制御すること が必要であり得る。 【００９８】 さらなる局面において、治療、予防又は進行抑制量の筋線維芽細胞活性低下剤（例えば 、筋線維芽細胞の非活性化のための薬剤、及び／又は筋線維芽細胞産生を阻害するための 薬剤）を、骨格筋癒着の治療、予防又は進行抑制を必要とする患者に投与することによる 、骨格筋癒着の治療、予防又は進行抑制のための組成物及び方法が提供される。 【００９９】 該組成物は、筋線維芽細胞の非活性化のための薬剤、及び／又は筋線維芽細胞産生を阻 40 害するための薬剤として、ＴＮＦ‐αアンタゴニスト、ＤＡＭＰアンタゴニスト、ＡＧＥ 阻害剤、若しくはＤＡＭＰ、及び／又はＡＧＥ炎症経路阻害剤のうちの１つ又はこれらの 組合せを含むことが好ましい。該方法及び組成物は、ＴＮＦ‐αアンタゴニストを含むこ とが好ましい。任意に、他の薬剤は、血管内皮成長因子ファミリー（ＶＥＧＦ‐Ａ、ＶＥ ＧＦ‐Ｂ、ＶＥＧＦ‐Ｃ、若しくはＶＥＧＦ‐Ｄなど）、又は前述のＶＦＧＦをコードし た薬剤若しくはその機能性断片の薬剤（国際公開公報第２００４／０８２７０５号に記載 されているものなど）、及び／又はＰＰＡＲγ（ピオグリタゾンなど）を含む、かかる治 療に使用されてもよい。 【０１００】 本明細書で言うＤＡＭＰ及び／又はＡＧＥ炎症経路阻害剤には、いずれかの受容体又は 50 (24) JP 2013-540803 A 2013.11.7 上流若しくは下流シグナリング成分の阻害剤又はアンタゴニストが含まれる。例えば、Ｔ ＬＲ‐４及びＭｙｄ８８は、ＤＡＭＰ媒介炎症経路に関係すると考えられるので、ＤＡＭ Ｐ炎症経路阻害剤には、ＴＬＲ（ｔｏｌｌ様受容体）アンタゴニスト（例えば、ＴＬＲ‐ ４アンタゴニスト）、又はＭｙｄ８８アンタゴニスト、又はＭｙｄ８８低下剤が含まれて いてもよい。例えば、ＡＧＥ炎症経路阻害剤には、ＲＡＧＥ阻害剤又はアンタゴニストが 含まれていてもよい。任意に、本発明のさらなる局面によれば、上述の局面及び実施態様 は、ＤＡＭＰ及び／又はＡＧＥ炎症経路阻害剤によるＴＮＦ‐αアンタゴニストの置換、 又はＤＡＭＰ及び／又はＡＧＥ炎症経路阻害剤とＴＮＦ‐αアンタゴニストの添加によっ て、修飾されてもよい。 【０１０１】 10 骨格筋癒着とは、骨格筋線維増殖性疾患の下位集合を意味し、該骨格筋癒着は、過剰の 線維性組織若しくは瘢痕組織が隣接して、又は、癒着をもたらす、腱、筋肉、関節、靭帯 若しくは筋膜と共に形成される。かかる骨格筋癒着の例には、関節周囲の線維症（例えば 、近位指節間関節の周囲）及び癒着性関節包炎が含まれる。本局面によれば、関節周囲（ 例えば、近位指節間関節の周囲）の線維症(perarticular fibrosis)、脊髄癒着（例えば 、手術後）、及び癒着性関節包炎から選択される、症状のための組成物及び治療が提供さ れることが好ましい。 【０１０２】 一特定実施態様において、結節及び／又は筋に、ＴＮＦ‐αアンタゴニストを、（例え ば、手術後、針筋膜切開後、又は酵素筋膜切開後、若しくはこれと共同して）投与するこ 20 とと、近位指節間関節に隣接する組織に、ＴＮＦ‐αアンタゴニストを投与することとを 含む、デュピュイトラン病の再発防止方法であり、これによって、デュピュイトラン病（ 及び指拘縮）の再発を防止するための治療と、関節周囲の線維性瘢痕組織の形成及び持続 性の低減とを同時に達成することができる。例えば、デュピュイトラン病のコラゲナーゼ 治療の有効性（特に、近位指節間関節の周囲において高い再発率がある）は、臨床的な結 節及び／又は筋組織と、近位指節間関節に隣接する皮下組織（例えば、線維性瘢痕組織） への同時投与による、ＴＮＦ‐αアンタゴニスト（又は、筋線維芽細胞の非活性化のため の他の薬剤、及び／又は筋線維芽細胞産生を阻害するための他の薬剤）による共療法によ って、高めることができると考えられる。 【０１０３】 30 癒着性関節包炎（又は五十肩）において、治療は、ＴＮＦ‐αアンタゴニスト、及びＡ ＧＥ阻害剤又はＤＡＭＰアンタゴニストのうちの１つ又は両方を含むことが好ましい。 【０１０４】 上述のそれぞれの局面及び実施態様中の他の実施態様において、ＴＮＦ‐α産生又は活 性阻害剤は、ＴＮＦ‐αアンタゴニストの代わりに、又はこれと共に使用することができ る。 【０１０５】 該組成物は、（例えば、注射、手術時の堆積によって、若しくは、好ましくは局所適用 によって）患部組織に、及び／又は該組織に隣接して投与するために製剤することができ 、これによって、骨格筋線維増殖性疾患（例えば、デュピュイトラン病）に関して上述す 40 る範囲の用量が達成される／提供される。 また、上述する局所用製剤及び組合せも含まれる。 【０１０６】 本発明を、次に示す実施例に言及して、限定することなく、より詳細に説明し例示する 。 【実施例】 【０１０７】 次に示す試験は、デュピュイトラン病の進行をより理解するために取り組まれた。組織 は、デュピュイトラン病患者の結節及び筋から採取し、同じ患者の罹患していない手掌組 織と比較した。試験を、開発された培養力モニターで行い、患部組織と非常に類似する環 50 (25) JP 2013-540803 A 2013.11.7 境中で、筋線維芽細胞集団を監視できることを確認した（Verjee et al, J Hand Surg Am , 34, 1785-1794 and J Cell Physiol 224, 681-690の設定に従った）。４つの実施例を 下に説明する。実施例１は、患部組織中の筋線維芽細胞の存在、分布及び挙動に関する。 実施例２は、デュピュイトラン病における炎症の役割に関する。実施例３は、デュピュイ トラン病における高度糖化最終産物を検討する。また、実施例４は、デュピュイトラン病 におけるＤＡＭＰの役割を検討する。 【０１０８】 実施例１ １００人を超えるデュピュイトラン病患者の試料を収集して、筋線維芽細胞分布につい て検討した。１００人を超えるデュピュイトラン病患者の筋に関する本発明者らのデータ 10 は、大多数の患者において、筋線維芽細胞が、患部の関節レベルで、手掌に位置する結節 に集中することを示す（図１を参照）。図１によれば、筋線維芽細胞に多く存在する結節 は、指関節の近傍に位置する。図１は次のことを示す。Ａ：デュピュイトラン病患者の筋 の手術時の観察。印をつけたのは、近位指節間関節（ＰＩＰＪ； １）の位置である。Ｂ ：平滑筋アクチンが染色された組織切片の低倍率の顕微鏡写真。結節におけるα‐ＳＭＡ を多く含む細胞の集合は、ＰＩＰＪの近傍に位置する。Ｃ：α‐ＳＭＡ陽性細胞（筋線維 芽細胞）を示す、結節部位の高倍率写真。 【０１０９】 分析された１００を超える筋のうち、６０％超は結節を含んでいた。顕著な不均一性が あったが、結節は非常に細胞性であり、１ ｍｍ２当たりおよそ２５００の細胞が渦巻き 20 状に並んでいた。平均で、細胞の９９％はα‐ＳＭＡ陽性であった。結節周囲の部位では 、細胞は、１ ｍｍ２当たりおよそ８００と非常に少なく、平均でその３分の１がα‐Ｓ ＭＡ陽性であった。 【０１１０】 図２は、結節がほとんど細胞性であり、α‐ＳＭＡ陽性細胞が多く含まれることを示す 。電子顕微鏡による２４のデュピュイトラン患者の試料の検査は、臨床的な再発が、疾患 の発症、持続期間、又は重症度において、患者の年齢と関係がないことを示した。組織学 的な結節は、初期疾患及び再発性疾患（各事例において筋の３分の２）両方由来の試料に 多くみられ、また、初期疾患と再発性疾患の間の指拘縮に有意差もなかった。さらに、再 発性疾患後の、初期皮膚筋膜切除試料、初期筋膜切除、二次的筋膜切除又は皮膚筋膜切除 30 の間の結節表面積にも相違がなかった（ｐ＝０．５）。初期疾患と再発性疾患は共に、同 様の病因であると考えられ、また、結節は、従来の手術後にダウンレギュレートしないと 考えられる。実際には、初期手術後の運動の増加によって、筋線維芽細胞の分化及び持続 性が促進され得る。筋膜切開又は筋膜切除、及びファイアブレーク(firebreak)皮膚筋膜 切除後の残余の切除されていないデュピュイトラン病患者の組織が、再発のきっかけとな り得る。筋線維芽細胞の持続性によって、外科的筋膜切開又はコラゲナーゼ注射後にみら れた高い再発率を明らかにすることができる。したがって、再発性疾患を予防する重要な 要素は、残存する筋線維芽細胞をダウンレギュレートすることができる。 【０１１１】 結節の９５％（３６／３８）は、ＰＩＰＪの近傍にあり、また、結節も、ＭＣＰＪの手 40 術時に印をつけた２つのみの事例、及びＤＩＰＪで印をつけた１つの事例においてＭＣＰ Ｊでみられた。初期又は活動性の疾患において、ＰＩＰＪの活動的な伸張が、手掌筋膜の 厚化、収縮に対して抵抗するので、緊張は、デュピュイトラン病患者の組織において断続 的に作用し得る。細胞によって感知された緊張の増加は、ＴＧＦ‐β１の厳密な制御下で 、α‐ＳＭＡの動員によるストレス線維への筋線維芽細胞の分化、及び特殊化された付着 部位の形成を促進し得る。そして、これは、大きな力の発生をもたらす。次いで、密に詰 まった細胞性結節は、理論上、指拘縮を促進するか又は維持するのに十分な力を及ぼすこ とが可能であった。その後、細胞は、周囲マトリックスをさらに短くなった形態へ再構築 する。生じる屈曲部変形の増加によって、機能が低下し、そして、関節での動作の低減に よって、結節の筋線維芽細胞により感知された緊張が低減する。進行した指拘縮によって 50 (26) JP 2013-540803 A 2013.11.7 、活動的な関節の有限の伸張による緊張の低減が、筋線維芽細胞アポトーシスをもたらす 可能性があり、これによって、筋線維芽細胞が多く含まれる結節は持続することができな い。このことは、結節から結節のない筋への進行を明らかにし、また、結節のない筋を有 する患者が、重篤な屈曲部変形を有する傾向があった理由も明らかにする。したがって、 関節近傍の結節における筋線維芽細胞の凝集は、指拘縮をもたらし、その後のマトリック ス再構築によって、患部の筋膜が短縮される。最終的に、屈曲部変形の治療は、緊張の喪 失、筋線維芽細胞アポトーシスによる機械的環境の変化を発展させ、このため、残余の結 節のない筋が明らかになり得る。筋線維芽細胞表現型(phenotye)が、周囲マトリックス中 の緊張によって変化することを結論付けることができる。 【０１１２】 10 利用された培養力モニター（ＣＦＭ）及び培養条件を図３に示す。（Ａ）矩形状の接種 されたコラーゲンゲルを培地に供し、培地中に浮かせて、２つのフローテーションバー(f lotation bar)の間に拘束し、該バーの一方は、静止するように保持し、他方は、力変換 器に取り付けた。（Ｂ）コラーゲンゲル中の細胞によって発生した張力を、力変換器によ って検出し、生存データを１５秒毎に記録し、発生した力（ダイン、１×１０５Ｎ）の連 続出力を提供する。（Ｃ）２４時間の収縮後、ゲルを採取し、α‐ＳＭＡ ｍＲＮＡ、タ ンパク質、及び免疫蛍光分析のために処理する。（Ｄ）高アスペクト比コラーゲンを有す る格子ゲルに、細胞を規定どおりに接種したが、縦横比格子（Ｅ）も、細胞収縮性に対す る少ない歪みの影響を比較するために、試験に用いた。 【０１１３】 20 外科的に切除された筋を二分し、その半分を細胞培養のために処理し、もう一方の半分 の切断面を処理して、免疫組織化学法によって、α‐ＳＭＡを多く含む結節（細胞の凝縮 ）により、試料を確認した。免疫蛍光分析によるその後の定量は、結節のない試料におけ る１０％のα‐ＳＭＡストレス線維に対して、組織学的に確認された結節試料におけるα ‐ＳＭＡストレス線維を発現した平均３５％の細胞で実証された。このことは、筋線維芽 細胞の均質な集団を未だ構成することではないが、α‐ＳＭＡを多く含む細胞をサンプリ ングする本方法は、臨床的に定義され、組織学的に定義されていない結節から単離された 、平均９．７％∼１５％のα‐ＳＭＡ陽性細胞に関して報告されている、従来の試験にお ける顕著な改善を表す。真皮線維芽細胞の１∼４％は、α‐ＳＭＡ陽性ストレス線維を有 することが分かった。 30 【０１１４】 図４は、真皮線維芽細胞及びデュピュイトラン病患者の結節由来細胞によるコラーゲン ゲルの等尺性収縮を示す。コラーゲンゲルに、１５０万の非手掌線維芽細胞（Ａ）、手掌 線維芽細胞（Ｂ）、又はデュピュイトラン病患者の結節由来細胞（Ｃ）を接種し、ＣＦＭ に２４時間培養し、リアルタイム等尺性力収縮を定量した。示されたデータは、１人の患 者由来の細胞を使用した３回の試験を表す。本発明者らのＣＦＭにおいて線維芽細胞が存 在するコラーゲン格子（ＦＰＣＬ）中の真皮線維芽細胞は、安定水準に達したが、結節由 来細胞は、２４時間の試験期間において、用量依存的に収縮を継続した。 【０１１５】 図５は、結節から単離された細胞が、手掌又は非手掌真皮線維芽細胞と比較して、非常 40 に高い割合の収縮（ＣＦＭにおいて６∼２４時間の収縮の平均割合として測定された）で あったことを示す。高い収縮性は、筋線維芽細胞の特性のうちの１つであり、デュピュイ トラン病における指拘縮の原因である。 【０１１６】 図６では、デュピュイトラン病患者の結節由来細胞の収縮性が、α‐ＳＭＡの転写後の 変化によって調節されることを示す。（Ａ）［収縮の割合（ダイン／時間）］２４時間（ ±ＳＥＭ）の、結節由来筋線維芽細胞（結節）、非手掌（ＮＰＳ）、及び手掌真皮線維芽 細胞（ＰＳ）を含む、コラーゲンゲルにおける等尺性の力。２４時間後、（Ｂ）ＳＭＡ ｍＲＮＡを、定量的ＲＴ‐ｐｃｒによってＲＰＬＰＯと比較し、（Ｃ）α‐ＳＭＡ ｍＲ ＮＡをＧＡＰＤＨと比較し、また、（Ｄ）α‐ＳＭＡタンパク質をビメンチンと比較した 50 (27) JP 2013-540803 A 2013.11.7 。試験を３回反復して行い、全３つの異なる結節及び結節のない適合した患者試料の平均 （±ＳＥＭ）として、データを示す。 【０１１７】 ＣＦＭにおいて２４時間の収縮後、ＦＰＣＬを回収した後に、適合した細胞型の免疫蛍 光分析によって、α‐ＳＭＡ ｍＲＮＡレベル、α‐ＳＭＡタンパク質発現、及びα‐Ｓ ＭＡタンパク質局在化間の比較を行った。α‐ＳＭＡ ｍＲＮＡレベルの相違は、結節由 来細胞と真皮線維芽細胞の間でみられなかったが、適合した真皮線維芽細胞と比較して、 およそ３倍のα‐ＳＭＡタンパク質レベルが結節由来細胞で確認された。さらに、免疫蛍 光分析を用いて、真皮線維芽細胞において、α‐ＳＭＡが、通常、核周囲(peri-nucleur) の細胞質内で「ハロ」に分布することが分かったが、結節由来細胞では、図６Ｅにみられ 10 るように、α‐ＳＭＡが、細胞マトリックス付着部位までの細胞過程全体にわたって、ス トレス線維に多く局在化した。 【０１１８】 また、細胞を、２４時間、ガラスカバーグラス上に培養し、固定し、次いで、α‐ＳＭ Ａ抗体（赤色）、ファロイジン（緑色）及びＤＡＰＩ（青色）を使用して免疫蛍光標識し た。本発明者らの免疫分析データは、単層に培養した場合、手掌及び非手掌線維芽細胞が 、新たな細胞質ゾルα‐ＳＭＡの発現と共に、原筋線維芽細胞(proto-myofibroblast)表 現型を獲得することを示す。対照的に、ストレス線維を導入したα‐ＳＭＡを有する顕著 に分化した筋線維芽細胞が、結節由来細胞でみられた。適合試料からの結節由来皮膚細胞 、非手掌皮膚細胞、及び手掌皮膚細胞間でみられたこれらの相違は、過去に報告されてい 20 ない。同じ患者から単離された細胞のα‐ＳＭＡタンパク質レベル、タンパク質局在化、 及びｍＲＮＡレベルを同時に検討した。本発明者らの知見は、α‐ＳＭＡの転写後の変化 が、遺伝的に適合した細胞で生じ、デュピュイトラン病患者の筋線維芽細胞表現型を媒介 することを示唆する。 【０１１９】 実施例２ デュピュイトラン病の炎症の役割 次いで、結節を、他の細胞型、具体的には炎症細胞の存在において検討した。マクロフ ァージ及びマスト細胞の多くが共に、筋の結節のない部位ではなく、結節に含まれること が分かった。 【０１２０】 30 図７は、デュピュイトラン病患者の結節及び筋の炎症細胞を示す。指の筋部位は、α‐ ＳＭＡ、ＣＤ６８陽性マクロファージ、及びマスト細胞トリプターゼについて連続的に染 色した。像は１５の患者試料を表す。 【０１２１】 １０の患者試料中の切除されたデュピュイトラン病患者の筋組織において、炎症細胞の 数を系統的に定量した。各部位（結節、結節から遠位にある筋、及び結節のない筋）にお いて、全細胞数、α‐ＳＭＡ陽性細胞の数、及び好中球エラスターゼが染色された細胞の 数、マスト細胞トリプターゼ、ＣＤ３陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、ＣＤ６８陽性マク ロファージを計測した（２０倍拡大）（表１）。 【０１２２】 40 (28) JP 2013-540803 A 2013.11.7 【表１】 10 20 【０１２３】 これらのデータは、ＣＤ６８陽性マクロファージ、ＣＤ３ Ｔ細胞、及びマスト細胞ト リプターゼ陽性細胞が、細胞性結節内でよくみられ、筋組織内ではわずかであることを示 す。好中球エラスターゼ陽性細胞、及びＣＤ４陽性Ｔ細胞が、デュピュイトラン病患者の 組織全体にわたって希に観察された。デュピュイトラン病患者の結節は、多数のマスト細 胞を含み、これは、ＴＮＦ‐αを多く含む供給源である(Krishnaswamy et al., 2006)。 デュピュイトラン病患者の結節組織には、非常に収縮性のある筋線維芽細胞が存在するが 、炎症細胞の存在は、炎症が疾患の病因に重要であり得ることを示唆する。結節のない筋 において、炎症細胞はほとんど観察されなかった。また、実際に、結節のある筋又は結節 30 のない筋中の好中球エラスターゼに対して陽性に染色された細胞がなかったことも関心を 惹く。これは、創傷時の炎症と対照的であり、好中球がよくみられ、好中球は、砕片及び 細菌の除去に関係し、筋線維芽細胞に依存する創傷の収縮を発生させる。しかしながら、 切除された指の筋の試料が結節を含むが、該試料は、必ずしも、最も初期の疾患における 処理を表さないことに留意することが重要である。 【０１２４】 実施例３ 高度糖化最終産物とこれらの受容体 デュピュイトラン病患者の組織、及び手掌皮膚と非手掌皮膚の両方でＲＡＧＥの分布に ついて検討した。本発明者らは、デュピュイトラン病患者の結節中のＲＡＧＥに対する多 くの染色を発見し、これは、筋線維芽細胞と共に局在化していた（図８を参照）。指の筋 40 の試料を縦方向に二分し、ホルマリンに固定した。組織切片を筋切断面から採取し、連続 切片を、（Ａ、Ｃ）α‐ＳＭＡ及び（Ｂ、Ｄ）ＲＡＧＥ抗体について染色した。スケール バーを示す。像は、１５の患者試料のものを表す。ＲＡＧＥは、デュピュイトラン病患者 の結節のα‐ＳＭＡ分布と共に局在化する。 【０１２５】 また、本発明者らは、非手掌皮膚と比較して、手掌皮膚の表皮表層におけるＲＡＧＥの 染色が増加することも見出し、ＦＡＣＳ染色は、非手掌皮膚と比較して、手掌皮膚由来の 真皮線維芽細胞によって、顕著に高いＲＡＧＥ発現を示した。図９を参照されたい。 【０１２６】 非手掌及び手掌皮膚試料をホルマリンに固定した。組織切片を、ＲＡＧＥについて染色 50 (29) JP 2013-540803 A 2013.11.7 した。（Ａ、Ｃ）非手掌皮膚、及び（Ｂ、Ｄ）手掌皮膚。スケールバーを示す。像は、６ つの適合した患者試料のものを表す。図９は、非手掌及び手掌皮膚内のＲＡＧＥの異なっ た分布を示す。 【０１２７】 また、結節由来細胞が、適合した真皮線維芽細胞よりも、高いレベルの細胞表面ＲＡＧ Ｅを発現することも実証した。結節由来細胞、手掌、及び非手掌線維芽細胞（１試験当た り１×１０４細胞）を、ＲＡＧＥ抗体で染色し、蛍光標識し、また、ＦＡＣＳ分析によっ て平均蛍光強度を評価した。（図１０Ａ、Ｃ）適合した真皮線維芽細胞に対する結節由来 細胞の細胞表面ＲＡＧＥ発現レベル。（Ｂ、Ｄ）適合した真皮線維芽細胞に対する結節の ない細胞の細胞表面ＲＡＧＥ発現レベル。Ａ及びＢの結果は、４つの適合した結節患者の 10 試料及び結節のない試料について示す（±ＳＥＭ）。＊はｐ＝０．０１を表す。（Ｅ）１ つの代表的な結節のある適合した患者試料の結節由来細胞、非手掌線維芽細胞、手掌線維 芽細胞、及びアイソタイプ対照、並びに、（Ｆ）１つの代表的な結節のない適合した患者 試料のもの。図１０を参照されたい。 【０１２８】 ＲＡＧＥ細胞表面発現が、非手掌線維芽細胞よりも、手掌線維芽細胞で大きいことを実 証した。適合した手掌及び非手掌皮膚由来の線維芽細胞（１×１０４）を、ＲＡＧＥ抗体 で染色し、蛍光標識し、また、ＦＡＣＳ分析によって平均蛍光強度を評価した。細胞表面 ＲＡＧＥ発現レベルは、非手掌線維芽細胞よりも、手掌線維芽細胞で常に高かった。デー タは、８つの適合した患者試料のものを示す。図１１を参照されたい。 20 【０１２９】 筋線維芽細胞形成に対するＡＧＥの影響について調査するさらなる試験において、コラ ーゲンゲルを１５０万の手掌線維芽細胞に接種し、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（１５ μｇ／ｍｌ）の存在下、若しくはこれがない状態（ＰＳ単独）で、２４時間、又は、Ａ ＧＥ‐ＢＳＡ（１５０ μｇ／ｍｌ）の存在下で、種々の時間培養し、また、等尺性の力 収縮を培養力モニターで定量した。データを、図１４において、３人の異なる患者の試料 による３回の試験の＋／−ＳＥＭとして示す。手掌真皮線維芽細胞の収縮性が、ＡＧＥへ の暴露によって影響を受けないことは、図１４から明らかである。 【０１３０】 高度糖化最終産物が、炎症細胞によっても作用するか否かについて次に調査を行った。 30 他の系においては、高度糖化最終産物は、炎症性サイトカインの放出をもたらすことが示 されている(Uribarri et al., 2005)。手掌線維芽細胞を接種したコラーゲンゲルを、抗 ＴＮＦ‐α（１０ μｇ／ｍｌの存在下、又はこれがない状態で、ＡＧＥ（１００ μｇ／ ｍｌ）刺激単球（Ｍ）からの上清と共に、２４時間培養し、また、等尺性の力収縮を定量 した。試験を２回行った。興味深いことに、ＡＧＥと共に培養したヒト単球からの上清は 、ＴＮＦ‐αに依存して、手掌線維芽細胞の収縮を刺激した（図２０）。 【０１３１】 実施例４ 手掌線維芽細胞への外因性ＨＭＧＢ１の添加の影響について検討した。手掌線維芽細胞 に接種したコラーゲンゲルを、ＴＮＦ‐α（１ ｎｇ／ｍｌ）若しくはＨＭＧＢ１（１ ｎ 40 ｇ／ｍｌ）若しくはＴＧＦ‐β１（１０ ｎｇ／ｍｌ）の存在下、又はこれがない状態（ ＰＳ単独）で、２４時間培養し、また、（Verjee et al, Hand Surg Am, 34, 1785-1794, 2009、及びVerjee et al, J Cell Physiol, 2010に記載されているような培養力モニタ ー技術を利用して）等尺性の力収縮を定量した。試験データを、３回の試験（２回のＨＭ ＧＢ１以外）の＋／−ＳＤとして図１２に示す。 【０１３２】 収縮の増加傾向がＨＭＧＢ１から生じたが、これは、統計的に有意ではなかった（図１ ２）。本発明者らのデータは、未処理の手掌線維芽細胞と比較して、１０ ｎｇ／ｍｌ Ｔ ＧＦ‐β１による手掌線維芽細胞の収縮性の有意な増加（ｐ＝０．０００１）を示した。 【０１３３】 50 (30) JP 2013-540803 A 2013.11.7 図１５に示すように、本発明者らは、Ｓ１００Ａ８に暴露したヒト単球、及びＳ１００ Ａ９（他のアラーミン）にある程度暴露したヒト単球が、用量依存的にＴＮＦ‐αを産生 することを見出した。図１５から理解されるように、Ｓ１００Ａ８は、試験範囲内のＳ１ ００Ａ９及びＳ１００Ａ１２よりも活性がある。病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）で あるＬＰＳを、正の対照として示す。 【０１３４】 Ｓ１００Ａ８の公知の受容体は、高度糖化最終産物（ＲＡＧＥ）の受容体、並びにＴｏ ｌｌ様受容体２及び４である。１×１０５／ｍｌのヒト単球を、いずれかの抗体にＴＬＲ ４、ＴＬＲ２若しくはアイソタイプ対照（図示せず）を添加したヒトＳ１００ Ａ８（０ ．５ μｇ／ｍｌ）、又は可溶性ＲＡＧＥ（ｓＲＡＧＥ）と共に、１０％ＦＣＳに１４時 10 間インキュベートした。ＴＮＦ‐αレベルをＥＬＩＳＡによって決定した。本発明者らは 、ＴＮＦ‐α産生をもたらす単球上に、Ｓ１００Ａ８を結合する主な受容体が、ＴＬＲ‐ ４であり、ＲＡＧＥ又はＴＬＲ‐２ではないことを見出した（図１６）。 【０１３５】 Ｓ１００Ａ８がＴＬＲ‐４に主に結合し、また、単球によるＴＮＦ‐α産生をもたらす 細胞内シグナリングが、野生型Ｃ５７Ｂｌ／６動物の骨髄由来細胞を有するＴＬＲ‐４又 はＭｙＤ８８欠損マウス由来の骨髄細胞によるＴＮＦ‐α産生に対する、マウスＳ１００ Ａ８の影響を比較することによって、アダプタータンパク質ＭｙＤ８８に完全に依存する ことを確認した（図１７）。図１７において、マウスＳ１００Ａ８に対する暴露における 野生型のＴＬＲ４−／−及びＭｙＤ８８−／−マウス骨髄細胞によって産生されたＴＮＦ 20 ‐αを、ＥＬＩＳＡによって測定した。 【０１３６】 ＨＭＧＢ１も単球上で作用して、炎症性サイトカインが放出されることをインビトロで 示すことは非常に困難である。これは、インビボで、他のＴＬＲリガンドと共に作用し、 高度に精製されたＨＭＧＢ１単独では、インビトロで、単球によるＴＮＦ‐α産生をもた らさないからである（図１８）。図１８に結果を示す本発明者らの試験は、１×１０５／ ｍｌのヒト単球を、ＨＭＧＢ１と共に、又はＬＰＳ単独若しくはＬＰＳ及びＨＭＧＢ１と 共に、示される濃度で１４時間、１０％ＦＣＳにインキュベートすることを含む。ＴＮＦ ‐αレベルをＥＬＩＳＡによって決定した。ＨＭＧＢ１が単独では、単球によるＴＮＦ‐ α産生を刺激しないが、ＬＰＳとの併用で活性化されることが分かった。 30 【０１３７】 図１９は、デュピュイトラン病の病因における外傷及びアラーミンの役割の提案された メカニズムの概略図を示す。理解することができるように、外傷（１０１）によって、細 胞傷害（１０３）が生じ、また、Ｓ１００Ａ８などのアラーミン（１０５）が放出し、該 アラーミンは、ＴＮＦ‐αなどの炎症性サイトカインがＭｙｄ８８（１１１）を介してシ グナル伝達をすることができる（１１３）、マクロファージ（１０９）などの炎症細胞の ＴＬＲ‐４（１０７）に結合する。その後、ＴＮＦ‐αは、筋線維芽細胞（１１９）が形 成される線維芽細胞前駆体（１１７）上でＴＮＦＲ（１１５）に結合することができる。 【０１３８】 実施例５ 40 デュピュイトラン病患者の結節（筋線維芽細胞を含む）由来の初代継代培養細胞を、上 述の培養力モニターを使用して、１０ μｇ／ｍｌの量で、モノクローナルヒトＴＮＦ‐ α抗体（モノクローナルＩＧＧ１培養物＃１８２５、Ｒ＆Ｄシステムズ社(R&D Systems) （カナダ）から入手可能）によって処理した。かかる初代継代細胞の対照培養物と比較し て、抗ＴＮＦ‐α処理細胞は、３０％以上の量の対照によって、２４時間にわたり収縮す ることが分かった（対照と比較して、３０％を超える効果的な筋線維芽細胞失活に相当す ると考えられる。）。このことを図１３に示し、２４時間にわたる勾配（又は収縮の割合 ；ダイン／時間）を、対照細胞及びＴＮＦ‐α抗体処理細胞のそれぞれについて示す。 【０１３９】 これは、ＴＮＦ‐αアンタゴニストによって２４時間のみ処理する場合、デュピュイト 50 (31) JP 2013-540803 A 2013.11.7 ラン病患者から臨床的に培養された筋線維芽細胞の活性が低下すること（例えば、収縮挙 動の低減及び／又は存在量の低減）を直接示す。臨床的な状況における筋線維芽細胞に対 するＴＮＦ‐αアンタゴニストの効果が持続し、患者の治療レジメが反復適用を含むので 、本試験は、効果的に筋線維芽細胞活性を管理でき、これによって、患部へのＴＮＦ‐α アンタゴニストの局所適用により、骨格筋線維増殖性疾患（特に、デュピュイトラン病） の進行を低減し、及び／又はこの再発を抑制すると考えられる。 【０１４０】 等尺性条件下において、コラーゲン格子からのＴＧＦ‐β１ヒト手掌線維芽細胞の添加 によって、収縮性が高まることを確認することができた（図２１）。手掌線維芽細胞を接 種したコラーゲンゲルを、ＴＧＦ‐β１のない状態（ＰＳ単独）、又はＴＧＦ‐β１（１ 10 ０ ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、２４時間培養した。データを、３人の患者の細胞を使用し た３回の試験の＋／−ＳＤとして示す。 【０１４１】 その後、デュピュイトラン病患者の手掌皮膚及び非手掌皮膚における収縮割合に対する ＴＮＦ‐αの影響を比較した。手掌線維芽細胞を接種したコラーゲンゲルを、ＴＮＦ‐α のない状態（ＰＳ若しくはＮＰＳ単独）、又は、ＴＮＦ‐α（１ ｎｇ／ｍｌ）の存在下 で、２４時間培養した。データを、手掌皮膚について３人の患者由来の細胞、及び非手掌 皮膚について１人の患者由来の細胞を使用した３回の試験の＋／−ＳＤとして示す。本発 明者らは、手掌皮膚へのＴＮＦ‐αの添加で、培養力モニターにおける収縮を有意に高め る（図２２）ことを見出した。しかしながら、デュピュイトラン病において皮膚筋膜切除 20 を受ける患者から得た、非手掌真皮線維芽細胞に、ＴＮＦ‐αを加えた場合、収縮割合に 変化がないか、又は該割合はわずかな低減であった。デュピュイトラン病が手掌にのみ罹 患し、めったに足の裏又は陰茎の白膜（ペロニー病）に罹患しないことに留意することは 興味深い。 【０１４２】 重要な次の問題は、用量依存的に抗ＴＮＦ‐αを添加することによって、デュピュイト ラン病患者の筋線維芽細胞の収縮性を回復させることができる否かであった。デュピュイ トラン病患者の筋線維芽細胞／線維芽細胞（１５０万）を接種したコラーゲンゲルを、抗 ＴＮＦ‐α（マウス抗ヒト、Ｒ＆Ｄシステムズ社製、ＭＡＢ２０１０）の存在下で、２４ 時間培養し、また、等尺性の力収縮を定量した。試験を、５人の非選択患者由来の細胞を 30 使用して、３回反復して行った。アイソタイプ対照抗体又は０．１ μｇ／ｍｌの抗ＴＮ Ｆ‐αによる効果はなかった。値は平均±ＳＥＭを表す。結果を図２３に示す。デュピュ イトラン病患者の筋由来の筋線維芽細胞への抗ＴＮＦ‐αの添加（１∼１０ μｇ／ｍｌ の用量範囲）は、用量依存的に、培養力モニターにおける収縮をダウンレギュレートした （図２３）。 【０１４３】 次に、筋線維芽細胞形態に対する抗ＴＮＦ‐αの影響を評価した。未処理ゲル中の細胞 又はＩｇＧアイソタイプ対照抗体に暴露した細胞はすべて、紡錘状であり、最大応力の軸 に並んだ（図２４ａ）。しかしながら、１０ μｇ／ｍｌ抗ＴＮＦ‐αによって処理した ゲルでは、細胞の多くは、応力の方向に並ぶことなく、星状の形態を示した（図２４ｂ、 40 ｃ）。 【０１４４】 図２４の試験において、図２３に示す試験のゲルを、３％パラホルムアルデヒドに固定 し、α‐平滑筋アクチン抗体（赤色）、ファロイジン（緑色）、及びＤＡＰＩ（核‐青色 ）を使用して免疫蛍光標識した。図２４ａは、アイソタイプ対照ＩｇＧ抗体に暴露したゲ ルの細胞を示す。図２４ｂ及び２４ｃはそれぞれ、ファロイジンで染色された、１０ μ ｇ／ｍｌ抗ＴＮＦ‐α抗体、及びα‐平滑筋アクチンに対する抗体に暴露したゲルの細胞 を示す。もとの像は１００倍で撮影した。 【０１４５】 図２５は、線維増殖性疾患の病因における高度糖化最終産物、損傷及びアラーミンの提 50 (32) JP 2013-540803 A 2013.11.7 案された役割の概略図を示し、最終一般的経路におけるＴＮＦ‐αの重要な役割を強調す る。ここで、ＴＮＦ‐αは、初期デュピュイトラン病のための、及びコラゲナーゼによる 治療後の再発を防止するための、重要な治療標的である。 【０１４６】 これらの実施例は、活性のある筋線維芽細胞の役割及び挙動に特に関係のある、デュピ ュイトラン病(Duputren's)患者の結節物質及び収縮挙動についての理解を高める初めての 知見を示す。これらの知見は、筋線維芽細胞活性、並びにＤＡＭＰ及びＡＧＥにおけるＴ ＮＦ‐αに関係し、これは、初期病状から既存の病状への発症若しくは進行を防止するか 又は抑制し、かつ、患者が初期矯正治療を受けた、既存の疾患の疾患再発を防止するか又 は抑制するのに、ＴＮＦ‐αアンタゴニスト、ＤＡＭＰアンタゴニスト、及び／又はＡＧ Ｅ阻害剤を使用することができるという知見を支持する。 【０１４７】 本発明は、好ましい実施態様に関して説明されている。しかしながら、当業者が、本発 明の範囲から逸脱することなく、変更及び改良できることが認識される。 【図１】 10 (33) 【図２】 【図３】 【図４】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (34) 【図５】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (35) 【図６】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (36) 【図７】 【図８】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (37) 【図９】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (38) 【図１０】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (39) 【図１１】 【図１２】 【図１３】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (40) 【図１４】 【図１５】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (41) 【図１６】 【図１７】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (42) 【図１８】 【図１９】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (43) 【図２０】 【図２１】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (44) 【図２２】 【図２３】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (45) 【図２４】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (46) 【図２５】 JP 2013-540803 A 2013.11.7 (47) JP 2013-540803 A 2013.11.7 【国際調査報告】 10 20 30 40 (48) JP 2013-540803 A 2013.11.7 10 20 30 40 (49) JP 2013-540803 A 2013.11.7 10 20 30 40 (50) JP 2013-540803 A 2013.11.7 10 20 30 40 (51) JP 2013-540803 A 2013.11.7 10 20 30 40 (52) JP 2013-540803 A 2013.11.7 10 20 30 40 (53) JP 2013-540803 A 2013.11.7 フロントページの続き (51)Int.Cl. ＦＩ テーマコード（参考） Ａ６１Ｋ 38/46 (2006.01) Ａ６１Ｋ 37/54 Ａ６１Ｋ (2006.01) Ａ６１Ｋ (2006.01) Ａ６１Ｋ 39/395 Ｎ 9/08 Ａ６１Ｋ 39/395 9/08 (81)指定国 AP(BW,GH,GM,KE,LR,LS,MW,MZ,NA,RW,SD,SL,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,MD,RU,T J,TM),EP(AL,AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,R O,RS,SE,SI,SK,SM,TR),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA, BB,BG,BH,BR,BW,BY,BZ,CA,CH,CL,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,H U,ID,IL,IN,IS,JP,KE,KG,KM,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LT,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI ,NO,NZ,OM,PE,PG,PH,PL,PT,QA,RO,RS,RU,RW,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TH,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US, UZ,VC,VN Ｆターム(参考) 4C076 AA11 AA17 AA72 AA94 BB11 BB31 CC09 CC29 4C084 AA02 AA03 AA17 AA19 AA20 AA21 DC09 MA02 MA66 NA14 ZA942 ZA962 ZC412 ZC422 ZC752 4C085 AA14 AA16 BB43 BB50 GG01 GG10 10