詳細はこちら - JCCLS－特定非営利活動法人 日本臨床検査標準協議会

リウマトイド因子（RF)の標準化の試み
神戸大学大学院医学研究科客員教授
神鋼病院 膠原病リウマチセンター
熊谷 俊一
2010年日本臨床検査標準協議会学術集会（H22. 8. 28)
図3. 臓器非特異的自己免疫疾患と自己抗体
SLE
LE cells
(1948
Hargraves）
RAHA
病因的診断ではない
診断の補助
感度：>95%
抗核抗体
（蛍光抗体法）
（ロイマ反応）
（1948 Rose）
感度：80%
特異度が低い
RA
リウマト゗ド因子
RF (LA-NIA, TIA)
抗核抗体（ANA）
膠原病
疾患特異的抗核抗体（Smなど）
抗リン脂質抗体
リン脂質抗体症候群
カルジオリピン、β2GP I
リウマト゗ド因子(RF)
関節リウマチ
シトルリン化ペプチド(CCP)
抗好中球細胞質抗体
血管炎
PR-3, MPOなど
臓器非特異的自己抗体→病態と関連し、診断に有用あるいは必須
RFの臨床的意義
1. 陽性、陰性が重要→診断、予後予測
• 関節リウマチの診断：1987年改訂ACR分類基準7項目中の1項目
感度は70-80％、特異度は70-80％程度で、尤度比は3程度
• クリオグロブリン血症（Ⅱ型）の診断に必要
• 血清反応陰性脊椎関節症や成人スチル病：これらの疾患では、陰性であるこ
とが診断に重要である
• RF陽性RA患者は陰性RA患者に比べて関節破壊が進行しやすい
2. 抗体価が重要→診断、活動性や治療効果の判定
• ACR/EULAR 2009年改訂分類新基準では4項目中の1項目で、低値陽性の場合
は2点、高値陽性（カットオフ値の3倍以上）の場合は3点
• RF低値陽性（20-100 IU/ml）の場合の尤度比は2.0、中値（101-300 IU/ml）
では2.9、高値（301 IU/ml以上）では4.8との報告がある
• RF高値陽性（100 IU/ml以上）の多発関節炎の患者は低値陽性者や陰性者に
比べて、RAである、あるいは将来RAになる確率が高い
• 長期的には活動性や治療効果判定の指標となる
関節リウマチの分類基準
＇米国リウマチ学会、1987年（
症例1 症例2
○
○
1) １時間以上の朝のこわばり＇>6週間（
○
○
2) ３関節以上の関節炎＇>6週間（
×
3) 手関節, PIP, MCP関節の少なくとも一個所の ○
軟部組織の腫脹か関節液の貯留＇>6週間（
○
×
4（対称性の関節炎＇>6週間（
○
×
5) リウマトイド結節
○
○
*
6) リウマトイド因子陽性
○
×
7) 典型的X線像
☆以上のうち4項目を満たすもの
＇感度91.7%、特異度89.3%（
RA
*正常人コントロールでの陽性率が5％未満の測定法による
？
リウマトイド因子測定値の標準化について
0~1,595 unit/ml の10検体を、国内12施設で測定
3種類のmRF (日水mRF、ヤマサ C28株とD13株）を標準品として検討
各施設の標準品によるキャリブレーション
変動係数
21~46%
mRFをキャリブレーションに使用し
た時
変動係数
34~66%
mRFは施設内の精度管理には使用可能だが、施設間の標準化には---（吉野谷定美ら：リウマチ. 36：819-829, 1996）
リウマトイド因子の標準化と問題点 （RF測定改善検討会2002年ミニサーベイ）
社内標準品
プール血清
社内標準品
mRF
（今福裕司、吉田 浩：臨床病理. 54：853-860,2006）
リウマト゗ド因子（RF）標準化の試みの歴史
• 標準血清、WHO標準品、ヒト型モノクローナルRFを用いた標準化の試み
→標準化はほぼ不可能と思われてきた（吉野谷定美、吉田
浩、今福裕司 先生ら）
• 2004年 厚生労働省科学研究『自己免疫検査の効率的利用法の研究』（主任研究者
熊谷俊一）で、RFの精度管理や標準化と効率的利用法の検討を行った。
• 2004年 日本リウマチ学会にRF測定小委員会（委員長
吉田浩先生）が設置。
• 日本臨床検査医学会、日本リウマチ学会、厚生労働省科学研究班との合同で、リウ
マチ学会認定356施設に対してゕンケートによる現状調査を行った。
• 2005-6年、日本臨床検査医学会プロジェクト研究「自己免疫検査の全国サーベ゗と
それに基づく標準化の検討」(代表 熊谷俊一)で、協力頂ける81施設に4種類のプー
ル血清を配布し測定を依頼した（全国サーベ゗） 。
• 2005-8年、日本臨床検査標準協議会(JCCLS)にRFと抗核抗体についての基本検討委
員会（柱1のワーキンググループC3）が設置され標準化を推進。
(吉田 浩先生との共同研究)
リウマチ学会教育認定施設へのアンケート調査
日本臨床検査医学会、日本リウマチ学会、厚生労働省科学研究班との合同
① RF の全国アンケート調査
各施設のRF基準値＇IU/ml（
30
期間：2004年12月〜2005年1月
全国356施設、回収187件(回収率53%)
院内実施：152
外注実施：25
施
設
数
20
10
0
0
5
測定法原理
ラテックス凝集免疫法
(70)
15
20
25
30
35
40
各施設のRFカットオフ値(IU/ml)
免疫比濁法
(50)
RF基準値の設定について
自施設作成
(45)
10
ﾗﾃｯｸｽ比濁法
免疫比ろう法
(25)
ﾗﾃｯｸｽ比ろう法
メーカー指定値
(112)
文献値
(18)
②RF の全国サーベイ
全国81施設
４種類のプール血清
試料A： 陰性
6.2 U/ml
試料B ：低値
29.9 U/ml
試料C ：中等値 59.4 U/ml
試料D ：高値 154.9 U/ml
25
偽陽性
20
陰性
試料A
6.2 IU/ml
15
10
5
0
低値陽性
試料B
29.9 IU/ml
0
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0 0
10
20
30
基準範囲上限＇カットオフ値（
40
偽陰性
10
20
30
基準範囲上限（カットオフ値）
40
90
80
70
60
試料C： 5 0
59.4
40
U/ml
30
20
10
0
0
6 0
5 0
4 0
3 0
試料D： 2 0
154.9
U/ml 1 0
0
0
○LA-NIA法
○LA-TIA法
○TIA法
中等値
陽性
n=82
r=0.812
p<0.0001
低値
陽性
5 1 01 52 02 53 03 54 04 5
試料B： 29.9 U/ml
0
n=82
r=0.119
0
P=0.289
高値
0陽性
0
0
0
低値
陽性
5 1 0
1 5
2 0
2 5
3 0
3 5
4 0
4 5
試料B： 29.9 U/ml
日本臨床検査医学会プロジェクト研究「自己免疫検査の全国サーベ゗とそれに基づく標準化の検討」(代表
熊谷俊一)
結果
1. 各施設の基準値の設定方法は様々で、健常人での陽性率５％未満
の検証が必ずしもなされていない
2.
RF陰性血清は1施設を除く全ての施設で陰性と判定されたが、RF低
値試料は約１割の施設(9施設)にて陰性と判定された
• カットオフ値が６〜36U/mlと幅広く設定
• 陰性と判定した９施設のうち、３施設のカットオフ値は30以上
と高値に設定されており、カットオフ値の見直しが必要
3. RF低値試料と中等度値試料の測定値は正相関を示し系統誤差を認
めた。しかし、RF高値試料と低値試料では相関性はみられず、系
統誤差も認めなかった
• 100 U/ml未満の検体では試薬間差および機器間差の影響は大き
くないが、100 U/ml以上の検体は相関性および系統誤差も認め
ないことから収束は不可能
リウマト゗ド因子（RF）はゕメリカリウマチ学会の関節リウマ
チ分類基準（診断基準）の1項目に採用され診断に必須である
カットオフ値の統一化
可能なら100IU/mlまでの整合性（WHO標準品?）
1. 17試薬の基礎データの収集と検証
検診検体 250名、RA 200名、慢性疾患 200名
2. カットオフ値の設定方法の検討
検診検体1,000例から潜在基準値除外法で選別した各年代の男女
健常人258検体での陽性率 ＜5％
3. 100 IU/mlまでの標準化の可能性の追求
RF値 100 IU/ml前後の検体を収集
2005-8年、日本臨床検査標準協議会(JCCLS)にRFと抗核抗体についての
基本検討委員会（柱1のワーキンググループC3）が設置され標準化を推進。
WG会議 14回 (H15-18)
同時測定 2回 (H16, H17)
今回検討した17種類のRF試薬
の測定原理とメーカー13社
メ-カー
N o
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
3
4
5
6
7
8
9
0
1
2
3
4
5
6
7
Ｍ Ｋ
Ｉ
A&T
ﾆ ｯｽ ｲ
ﾃ ﾞﾝ ｶ
ｼ ｽ ﾒｯｸｽ
栄 研
ﾆ ｯ ﾄ ｰ ﾎ ﾞｰ
ｾ ﾛﾃ ｯｸ
極 東
ｼ ｽ ﾒｯｸｽ
ﾆ ｯ ﾄ ｰ ﾎ ﾞｰ
ﾆ ｯｽ ｲ
ﾍ ﾞｯ ｸ ﾏ ﾝ
栄 研
ｵ ｰ ｿ
ﾃ ﾞｲ ﾄ ﾞ
M KI
原理
ＬIA
ＬIA
ＬIA
ＬIA
ＬIA
ＬIA
ＬIA
ＬIA
ＬIA
T IA
T IA
T IA
ＬIA
ＬIA
ＬIA
JCCLS 柱1Ｃ３ ＷＧ 委員
氏名
責任者
運営 管理者（臨薬 協）
所属
斉藤 憲祐
山本 茂一
デイド・ベーリング株式会社
株式会社カイノス
柱 1／C3 担当
技術アドバイザー
嶋本 三利
熊谷 俊一
株式会社三菱化学ヤトロン
神戸大学大学院
教授
技術アドバイザー
小柴 賢洋
技術アドバイザー
桑
技術アドバイザー
森下 芳孝
三重大学病院中央検査部技師長
技術担当者
技術担当者
新井 次郎
松内 和洋
株式会社医学生物研究所
株式会社エイアンドティー
技術担当者
小林
克彦
隆
兵庫医科大学
筑波大学大学院
教授
助教授
栄研化学株式会社
技術担当者
技術担当者
技術担当者
技術担当者
技術担当者
技術担当者
技術担当者
技術担当者
技術担当者
技術担当者
技術担当者
倉持 啓一
大塚 一郎
日向 隆
北村 竜太郎
船越 國宏
根占 哲也
斉藤 憲祐
鎌田 祥子
高橋 義孝
松坂 啓之
波多野 裕通
株式会社エスアールエル
ｵｰｿ･ｸﾘﾆｶﾙ･ﾀﾞｲｱｸﾞﾉｽﾃｨｯｸｽ株式会社
株式会社カイノス
極東製薬工業株式会社
シスメックス株式会社
株式会社セロテック
デイド・ベーリング株式会社
デンカ生研株式会社
日水製薬株式会社
日東紡
株式会社日本凍結乾燥研究所
技術担当者
技術担当者
技術担当者
藤居 賢
伊東 理絵
野村 昭夫
日本ﾊﾞｲｵ・ﾗｯﾄﾞﾗﾎﾞﾗﾄﾘｰｽﾞ株式 会社
ベックマン・コールター株式会社
株式会社三菱化学ヤトロン
標準化 柱１ Ｃ３ＷＧ（ＲＦ）
検体測定方法説明 【詳細】
平成１８年６月１６日
C3WG
1：実験手順・検体測定フロー
2：検体測定詳細（省略）
3：WHO標準品測定法案
4：試薬・検体リスト（省略）
RF責任者
実験手順＇素案（
1
2
3
4
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
6
＜全体＞
専用試薬２機種はＯＹＣ内で実施するが、残りの３機種は検体を移動して測定を行う。
承認
汎用使用装置は日立７１７０に統一する。＇機種差を懸念して東芝は使用しない（
承認
各試薬のクロスコンタミを防ぐため、データ取りはバッチ方式で取る。
承認
1試薬につき３時間、１日4試薬がＭＡＸ、12試薬のため最大限できて3日間＇可能であれば5日ほしい（
⇒ 毎日の実施時間が１０時間程度なので、準備１日、４日間とする。
＜測定対象＞
健常検体　２５０検体
250
患者群検体　４００例
400
各社キャリブレーター
60
WHO標準品　希釈列＇100，50，25，12.5　IU/mL（
4
産業医大　プール血清
5
719 合計
＜サンプルについて＞
承認
各検体＇２ｍＬ（を５本のサンプリングチューブに小分けし、一度凍結する。⇒開始前日にＭＫＩが実施
専用2機種分に1本使用し、残余検体をベックマンに発送する。
Ｎｏ．１
初日検体の残余検体をオーソに発送する。
Ｎｏ．２
2日目検体をＭＫＩに発送する。
Ｎｏ．３
3日目検体を神戸大学へ発送する。
Ｎｏ．４
4日目検体の残りは予備として保存する。
Ｎｏ．５
専用装置の検体は　栄研チューブ５号になる見込み
作業分担案
）技術者が当日測定→翌日文書でサポート引継ぎを実施 実働丸1日
７
７／３＇月（ ７／４＇火（ ７／５＇水（ ７／６＇木（ ７／３＇金（
作業内容 試料分注
入力作業
サポート
技術派遣
測定試薬
MKI 4
測定-3
測定－４
予備日
A&T 1
デンカ 1
ｾﾛﾃｯｸ 2
栄研 1
極東 1
ﾆｯﾄｰﾎﾞｰ 1
デンカ 1
ｾﾛﾃｯｸ 2
日水
極東 1
ﾆｯﾄｰﾎﾞｰ 1
MKI LTX
デンカ LTX
ﾆｯﾄｰﾎﾞｰ LTX
ｼｽﾒｯｸTIA
A&T LTX
ｼｽﾒｯｸLTX
ｾﾛﾃｯｸ LTX
ﾆｯﾄｰﾎﾞｰ TIA
日水 LTX
栄研 LTX
極東 LTX
日水 TIA
測定-１
測定-2
MKI 4
A&T 1
ﾃﾞｲﾄﾞ BNⅡ
栄研 LX2000
2
各社RF試薬の基準範囲の設定と統一化へ向けて（JCCLS 柱1C3)
各社算出健常値に対する
R OCによるcutoff値
各社設定の
健常検体
陽性率％
ROC
感度
特異度
健常検体
ﾉﾝﾊﾟﾗﾒﾄﾘｯｸ法によ 健常検体
るCut off値
陽性率％
(片側上方5%)
0.0
～ 22.4
5.0
No
原理
Cut
Off値
1
ＬＩＡ
20
5.6
8.9
73.5
88.4
11.6
2
ＬＩＡ
5
5.2
1.6
76.5
92.0
8.0
0.0
～
4.2
3
ＬＩＡ
15.3
12.4
4.7
76.5
82.4
17.6
0.0
～
4
ＬＩＡ
18
3.2
5.7
74.5
85.6
14.4
0.0
5
ＬＩＡ
11.2
24.4
22.0
75.0
89.2
10.8
6
ＬＩＡ
10
6.8
11.8
74.5
89.6
7
ＬＩＡ
11
7.2
2.5
81.0
8
ＬＩＡ
23
5.2
5.9
9
ＬＩＡ
20
3.2
10
TIA
20.9
11
TIA
12
TIA
13
ＬＩＡ
14
ＬＩＡ
15
Cut off値
％
％ 陽性率％
慢性疾患
ＲＡ群
陽性率％ 陽性率％
16.5
62.5 ☆
5.0
24.0
67.0
22.6
5.0
15.5
61.5
～
14.4
5.0
12.0
60.0 ☆
0.0
～
45.5
5.0
21.0
61.5
10.4
0.0
～
23.0
5.0
13.5
60.5
81.2
18.8
0.0
～
18.5
5.0
15.5
57.5
75.5
88.8
11.2
0.0
～
20.5
5.0
13.5
61.0 ☆
1.3
77.0
87.6
12.4
0.0
～
14.6
5.0
13.2
5.6
2.8
72.0
86.4
13.6
0.0
～
17.5
5.0
18.0
61.0 ☆
58.0 ☆
10
8.4
6.2
74.0
89.2
10.4
0.0
～
15.3
5.0
16.0
62.0
15
8.8
9.8
74.5
89.6
10.4
0.0
～
19.7
5.0
20.0
65.5
9.2
10.0
69.4
90.7
9.3
0.0
～
37.7
5.0
19.6
51.0
10
15.2
12.1
74.0
88.0
12.0
0.0
～
28.2
5.0
18.0
58.0
ＬＩＡ
12
8.8
10.9
74.5
81.0
19.0
0.0
～
17.6
5.0
11.0
60.5
16
NＩＡ
15
5.6
6.8
79.0
82.8
17.2
0.0
～
16.7
5.0
11.0
57.5 ☆
17
ＬＩＡ
10
8.8
4.2
82.5
81.2
18.8
0.0
～
18.1
5.0
15.5
61.5
健常人での陽性率は5％以内
＇アメリカリウマチ学会診断基準（
健常人、ＲＡ、慢性疾患、各200人
ROCによるcut off値設定は困難
健常人の陽性率5％を
Cut off値とする
WHO標準品測定法案
）WHO標準品100,50,25,12.5 IU/mlの３重測定実施
により各試薬WHO単位との相違確認
具体的手順
＇１３本入手予定 ３本ﾄﾚｻﾋﾞﾘﾃｨｰ用に未溶解で-40℃凍結保存（
WHO標準品4ml/瓶＝25 IU/ml
①1ｍｌのﾎｰﾙﾋﾟﾍﾟｯﾄを用いて20℃の生理食塩水で１０本溶解
＝１００ IU/ml １０ｍｌ POOL ＇0.5ｍｌｘ10本小分け凍結（
②５０ IU/ml作製 １００ IU/ml ：生食＝2.5ｍｌ：2.5ｍｌ＇連続ﾋﾟﾍﾟｯﾄ（
③２５ IU/ml作製 1００ IU/ml ：生食＝1.25ｍｌ：3.75ｍｌ＇連続ﾋﾟﾍﾟｯﾄ（
④ １２．５ IU/ml作製 1００ IU/ml ：生食＝0.75ｍｌ：5.25ｍｌ＇連続ﾋﾟﾍﾟｯﾄ（
④各0.5mlx 9本小分け凍結保存 残りは冷蔵保存
⑤各試薬に対してN=3測定 １日１本使用
＇測定初日のみ冷蔵と冷凍の測定値比較（
WHO直線性　1－5
各社試薬のＷＨＯ測定値
160
140
ＷＨＯ標準品測定法
＊WHO標準品100, 50, 25,
12.5 IU/mlの３重測定実施
により各試薬WHO単位との
相違確認
測定値　IU/mL
120
100
80
R1
R2
R3
R4
R5
R6
60
40
20
0
0
20
40
60
80
100
WHO表示値　IU/mL
WHO直線性　13－17
160
160
140
140
120
120
100
80
R7
R8
R9
R10
R11
R12
60
40
20
0
0
20
40
60
WHO表示値　IU/mL
80
100
測定値　IU/mL
測定値　IU/mL
WHO直線性　7－12
各社の各試薬とも、
WHO標準品は表示値に
近い値で測定されていた。
（例外はある）
100
80
60
R13
R14
R15
R16
R17
40
20
0
0
20
40
60
WHO表示値　IU/mL
80
100
各社のキャリブレーター
も、標準化の候補品とし
て上げられるものは無
かった。
カットオフ値の比較・WHO標準品による補正
WHO標準品（12.5,25,50,100 n=12)の測定値と理論値との回帰式で求めた。
RF各社試薬基準範囲一覧
級幅： 1.0
データ数： 249＇F87を除く（
No メーカー 原理
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
ＭＫＩ
ＬＩＡ
Ａ＆Ｔ
ＬＩＡ
ﾆｯｽｲ
ＬＩＡ
ﾃﾞﾝｶ
ＬＩＡ
ｼｽﾒｯｸｽ ＬＩＡ
栄研
ＬＩＡ
ﾆｯﾄｰﾎﾞｰ ＬＩＡ
ｾﾛﾃｯｸ ＬＩＡ
極東
ＬＩＡ
ｼｽﾒｯｸｽ TIA
ﾆｯﾄｰﾎﾞｰ TIA
ﾆｯｽｲ
TIA
ﾍﾞｯｸﾏﾝ
栄研
ＬＩＡ
ｵｰｿ
ﾃﾞｲﾄﾞ
ＬＩＡ
MKI
ＬＩＡ
Sysmex
ﾉﾝﾊﾟﾗﾒﾄﾘｯｸ
試薬名
(片側上方5%)
ｲｱﾄﾛ
ＲＦⅡ
0.0 ～ 21.6
ｲﾑﾉﾃｨｸﾙｽｵｰﾄＲＦ
0.0 ～ 4.6
ｵｰﾄＬＩＡＲＦ「ﾆｯｽｲ」
0.0 ～ 22.6
ＲＦ-ﾗﾃｯｸｽＸ１「生研」
0.0 ～ 14.3
ﾘｱｽｵｰﾄ・ＲＦ
0.0 ～ 45.2
ＬＺﾃｽﾄ栄研ＲＦ
0.0 ～ 31.6
N-ｱｯｾｲＬＡ　ＲＦ
0.0 ～ 17.8
ｾﾛﾃｯｸLAT-RFN
0.0 ～ 21.6
ﾗﾝﾋﾟｱﾗﾃｯｸｽＲＦⅢ
0.0 ～ 14.6
ＲＦ免疫比濁試薬｢ｺｸｻｲ｣0.0 ～ 23.6
N-ｱｯｾｲＴＩＡ　RF
0.0 ～ 15.8
ｵｰﾄTIA RF N96「ﾆｯｽｲ」 0.0 ～ 22.6
IMMAGE RF
0.0 ～ 37.6
LX試薬栄研RF-Ⅲ
0.0 ～ 31.6
ﾋﾞﾄﾛｽﾏｲｸﾛﾁｯﾌﾟＲＦ
0.0 ～ 17.7
N-ﾗﾃｯｸｽRFⅡ
0.0 ～ 16.3
ｴﾙﾋﾟｱｴｰｽRFⅡ
0.0 ～ 18.5
ﾊﾟﾗﾒﾄﾘｯｸ法
0.3
0.4
0.1
0.7
0.1
2.1
0.1
0.1
0.4
0.1
0.1
0.6
0.1
2.1
1.0
3.5
0.3
～ 32.9
～ 1.1
～ 12.0
～ 18.1
～ 73.0
～ 28.7
～ 10.1
～ 15.4
～ 1.1
～ 9.5
～ 15.5
～ 25.0
～ 25.5
～ 28.7
～ 16.6
～ 13.8
～ 37.9
ROC
Cut off値
8.9
1.6
4.7
5.7
22.0
11.8
2.5
5.9
1.3
2.8
6.2
9.8
10.0
12.1
10.9
6.8
4.2
参考
健常値
20.0
5.0
15.3
18.0
11.2
20.0
11.0
23.0
20.0
21.0
10.0
15.0
20.0
10.0
12.0
15.0
10.0
データ数：250 MedCalc
ﾉﾝﾊﾟﾗﾒﾄﾘｯｸ ROC分析
(95Percentiles) Cut off値
0.0 ～ 22.4
6.8
0.0 ～ 6.9
1.6
0.0 ～ 23.1
5.5
0.0 ～ 14.4
9.1
0.0 ～ 45.5
22.0
0.0 ～ 23.2
11.2
0.0 ～ 18.5
6.9
0.0 ～ 24.4
6.4
0.0 ～ 15.2
1.7
0.0 ～ 24.7
6.3
0.0 ～ 17.8
6.2
0.0 ～ 23.3
9.8
0.0 ～ 40.4
10.0
0.0 ～ 32.5
11.2
0.0 ～ 17.6
11.0
0.0 ～ 16.7
6.8
0.0 ～ 18.2
5.7
9.47
CV(%) 41.8
WHO換算式で補正
データ数：250 MedCalc
ﾉﾝﾊﾟﾗﾒﾄﾘｯｸ ROC分析
(95Percentiles) Cut off値
0.0 ～ 20.4
5.3
0.0 ～ 6.2
2.4
0.0 ～ 17.2
4.8
0.0 ～ 15.3
10.1
0.0 ～ 36.6
18.0
0.0 ～ 18.4
9.0
0.0 ～ 20.6
8.5
0.0 ～ 21.8
7.0
0.0 ～ 15.3
1.7
0.0 ～ 31.1
12.7
0.0 ～ 16.7
5.6
0.0 ～ 29.5
16.6
0.0 ～ 33.2
13.8
0.0 ～ 29.9
12.1
0.0 ～ 16.1
10.1
0.0 ～ 14.4
7.1
0.0 ～ 16.1
2.6
8.15
CV(%) 38.6
ROCからのカットオフ値： 1.6～22.0 IU/ｍL
WHOで補正してもROC解析カットオフで1.7～18.0 IU/ｍLとやや縮まるものの、
WHOを基準とすることに無理があることが示唆された。
各社RF試薬の基準範囲の設定と統一化へ向けての検証（2007年）
１．健診群の規定は、潜在基準値除外法（市原清志教授）を実施。
１） 日本人成人の血清であること
２） 肝機能検査（AST,ALT,GGTP,LDH）が正常であること
３） グロブリン（TP,ALB,ZTT）が正常であること
４） 炎症(CRP)が正常であること
５） 男女同数で目標検体数は男女各500例
２. 健診パネルおよびボランテイアパネルの作製
健常人プール検体：99本作成
１）1000人分の健診検体（各2mL）を使用した。
２）10社の試薬で測定後、試薬間のCVが100％未満の検体を選択。
３）10社の平均値が大きい順に並べ替えた。
４）平均値が大きい順に、約5-10本毎にプール血清（約20mL）を作製。
５）99本のプール血清パネルが作製された（うち5本はRF陽性）。
６）同じ方法で、ボランテイア検体293人分からパネル検体44本を作製。
ボランテゖゕ検体：44本作成
３. RA患者パネルの作製
１）72人分のRA検体（抗体価50~200 IU/ml）を収集。
２）10社の試薬で測定後、試薬間のCVが50％未満の検体を選択。
３）10社の平均値が大きい順に並べ替えた。
４）平均値が大きい順に、約10本毎にプール血清（約20mL）を作製。
５）6本のプール血清が作製された。
RF陽性プール検体：11本作成
各社RF試薬の基準範囲の設定と統一化へ向けて（臨床病理 57（1）：31-41, 2009 )
健常人＇1,000人（の陽性率は5％以内
＇アメリカリウマチ学会診断基準（
健常人、ＲＡ、慢性疾患、各200人
ROCによるcut off値設定は困難
健常人の陽性率5％の平
均値 をCut off値とする
各社RF試薬の基準範囲の設定と統一化へ向けての検証
１．
１）
２）
３）
４）
５）
健診群の規定は、潜在基準値除外法（市原清志教授）を実施。
日本人成人の血清であること
ノンパラメトリック法に
肝機能検査（AST,ALT,GGTP,LDH）が正常であること
よるcut off値（片側上方
グロブリン（TP,ALB,ZTT）が正常であること
5％）
炎症(CRP)が正常であること
検診検体：
14.8 IU/ml
男女同数で目標検体数は男女各500例
ボランティア：14.3 IU/ml
２. 健診パネルおよびボランテイアパネルの作製
１）1000人分の健診検体（各2mL）を使用した。
２）10社の試薬で測定後、試薬間のCVが100％未満の検体を選択。
３）10社の平均値が大きい順に並べ替えた。
４）平均値が大きい順に、約5-10本毎にプール血清（約20mL）を作製。
５）99本のプール血清パネルが作製された（うち5本はRF陽性）。
６）同じ方法で、ボランテイア検体293人分からパネル検体44本を作製。
健常人
陽性率5％
(15 IU/ml)
パネル検体： 14.8 IU/ml
３. RA患者パネルの作製
１）72人分のRA検体（抗体価50~200 IU/ml）を収集。
健常人パネルの陽性率
２）10社の試薬で測定後、試薬間のCVが50％未満の検体を選択。
を5％ととするcut off値
３）10社の平均値が大きい順に並べ替えた。
４）平均値が大きい順に、約10本毎にプール血清（約20mL）を作製。
５）6本のプール血清が作製された。
②RF の全国サーベイ
全国81施設
４種類のプール血清
試料A： 陰性
6.2 U/ml
試料B ：低値
29.9 U/ml
試料C ：中等値 59.4 U/ml
試料D ：高値 154.9 U/ml
偽陽性
20
低値陽性
試料B
29.9 IU/ml
陰性
試料A
6.2 IU/ml
10
5
0
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0 0
10
20
30
基準範囲上限＇カットオフ値（
偽陰性
20
30
基準範囲上限（カットオフ値）
15
10
5
0
40
低値陽性
試料B
29.9 IU/ml
10
偽陽性
20
15
0
カットオフ値を15 IU/mlに変更したら
25
25
陰性
試料A
6.2 IU/ml
○LA-NIA法
○LA-TIA法
○TIA法
0
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0 0
10
20
30
基準範囲上限＇カットオフ値（
40
偽陰性
10
20
30
基準範囲上限（カットオフ値）
日本臨床検査医学会プロジェクト研究「自己免疫検査の全国サーベ゗とそれに基づく標準化の検討」(代表
熊谷俊一)
RFの臨床的意義
1. 陽性、陰性が重要→診断、予後予測→健常人陽性率 5％を15 U/ml
• 関節リウマチの診断：1987年改訂ACR分類基準7項目中の1項目
感度は70-80％、特異度は70-80％程度で、尤度比は3程度
• クリオグロブリン血症（Ⅱ型）の診断に必要
• 血清反応陰性脊椎関節症や成人スチル病：これらの疾患では、陰性であるこ
とが診断に重要である
• RF陽性RA患者は陰性RA患者に比べて関節破壊が進行しやすい
2. 抗体価が重要→診断、活動性や治療効果の判定
• ACR/EULAR 2009年改訂分類新基準では4項目中の1項目で、低値陽性の場合
は2点、高値陽性（カットオフ値の3倍以上）の場合は3点
• RF低値陽性（20-100 IU/ml）の場合の尤度比は2.0、中値（101-300 IU/ml）
では2.9、高値（301 IU/ml以上）では4.8との報告がある
• RF高値陽性（100 IU/ml以上）の多発関節炎の患者は低値陽性者や陰性者に
比べて、RAである、あるいは将来RAになる確率が高い
• 長期的には活動性や治療効果判定の指標となる
RFの抗体価とRAの診断
RA患者と慢性疾患患者の抗体値
抗体値と尤度比
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
RA_RF
林 伸英、熊谷俊一ら
CF_RF
Bossuyt, X et al. Ann Rheum Dis,
68:287-289, 2009
ACR/EULARによる
関節リウマチの新しい分類基準（2009年10月）
腫脹関節 ≧1
No
現時点ではRA
と診断できない
Yes
他の疾患である
No
Yes
通常の画像診断で典型的なRA
のびらんが確認できるか?
No
RAの診断基準表が
適応される
現時点ではRA
と診断できない
Yes
RAと診断
73rd ACR Scientific Meeting 2009 in Philadelphia
日経メディカルオンライン ACR2009速報（2009年10月19日）
2009 ACR/EULAR Classification Criteria for Rheumatoid Arthritis
関節病変（腫脹または圧痛のある関節数）
中・大関節に1ヶ所あり
0点
中・大関節に2～10ヶ所あり
1点
小関節に1～3ヶ所あり
2点
小関節に4～10ヶ所あり
3点
1つの小関節を含む11ヶ所以上
5点
血清学的検査（自己抗体）
中・大関節：肩、肘、膝、股、足関節 小関節：手関節、MCP、PIP、MTP (2-5)
RF、ACPAがともに陰性
0点
RF、ACPAのいずれかが低値陽性
2点
RF、ACPAのいずれかが高値陽性
3点
ACPA: anti-citrullinated peptide/protein
antibodies
6週未満
0点
高値陽性: > 3x (基準範囲の上限)
6週以上
1点
滑膜炎の持続期間
炎症反応検査
CRP、ESRともに正常
0点
CRP、ESRのいずれかが異常
1点
Score ≥ 6 indicates
“Definite RA”
25歳女性
関節病変（腫脹または圧痛のある関節数）
中・大関節に1ヶ所あり
0点
中・大関節に2～10ヶ所あり
1点
小関節に1～3ヶ所あり
2点
小関節に4～10ヶ所あり
3点
1つの小関節を含む11ヶ所以上
両手手指関節痛･腫脹 両膝関節痛･腫脹
5点
血清学的検査（自己抗体）
RF、ACPAがともに陰性
0点
RF、ACPAのいずれかが低値陽性
2点
RF、ACPAのいずれかが高値陽性
3点
3
1
( 2/3)
( 2/3)
0
0/1
1
1
6/7
4/5/6
滑膜炎の持続期間
6週未満
0点
6週以上
1点
炎症反応検査
CRP、ESRともに正常
0点
CRP、ESRのいずれかが異常
1点
2009 ACR Clinical Symposium (Oct 18, 2009)
各社RF試薬の基準範囲の設定と統一化へ向けての検証
１．
１）
２）
３）
４）
５）
健診群の規定は、潜在基準値除外法（市原清志教授）を実施。
日本人成人の血清であること
肝機能検査（AST,ALT,GGTP,LDH）が正常であること
グロブリン（TP,ALB,ZTT）が正常であること
炎症(CRP)が正常であること
男女同数で目標検体数は男女各500例
２. 健診パネルおよびボランテイアパネルの作製
健常人プール検体：99本作成
１）1000人分の健診検体（各2mL）を使用した。
２）10社の試薬で測定後、試薬間のCVが100％未満の検体を選択。
３）10社の平均値が大きい順に並べ替えた。
４）平均値が大きい順に、約5-10本毎にプール血清（約20mL）を作製。
５）99本のプール血清パネルが作製された（うち5本はRF陽性）。
６）同じ方法で、ボランテイア検体293人分からパネル検体44本を作製。
ボランテゖゕ検体：44本作成
３. RA患者パネルの作製
１）72人分のRA検体（抗体価50~200 IU/ml）を収集。
２）10社の試薬で測定後、試薬間のCVが50％未満の検体を選択。
３）10社の平均値が大きい順に並べ替えた。
４）平均値が大きい順に、約10本毎にプール血清（約20mL）を作製。
５）6本のプール血清が作製された。
RF陽性プール検体：11本作成
各社で算出されたRFカットオフ値と共通のRFカットオフ値15IU/mLとの比で補正したところ、
カットオフ値前後から57 IU/mlまでの測定値には補正効果が見られた。65〜138 IU/mLの間で
は補正効果が見られなかったが、高低順位は比較的保たれていた。
RFパネル検体の反応性
RFパネル検体の反応性＇補正後（
45 IU/ml
400
各社のＲＦ濃度＇IU/mL)
350
300
250
200
150
100
50
0
157 146 138 103 82 77 65 57
17試薬の平均値
40
22
18
L
E
K
H
I
C
M
G
D
J
P
F
Q
N
A
O
B
400
350
各社のRF濃度(IU/mL)
45 IU/ml
300
250
200
150
100
50
0
157 146 138 103 82 77 65 57
17社の平均値
陽性プール検体（50 IU/ml)を用いた補正が可能？
40
22
18
L
E
K
H
I
C
M
G
D
J
P
F
Q
N
A
O
B
新しい標準化のシステムの提案
1（カットオフ値15 IU/mlに設定と統一
1,000人以上の検診検体から健常人を選別
試薬間のCVが100％未満の検体を選択
抗体価順に数検体ずつまとめ、プール血
清100以上からなるパネルを作成、陽性率
5％を15 IU/mlとする
1）パネル血清の作成
a) 日本人成人の検診検体で、肝機能検査やグロ
ブリン、CRPが正常であること
b) 高齢者は除外し、各年代男女各500例
c) 試薬間のCVが100％未満の検体を選択
d) 健常人プールパネルを作成し、陽性率5％
（以内）を15 U/mlとする
3）検診検体プールパネルの維持
ボランテゖゕ 300人パネルを凍結保存し、健常
人パネルを更新した場合の検証に使用
2（100 IU/mlの設定と統一
RA患者血清＇100 U/ml前後（を集め、CVが
50％未満の検体を選別する
数本ごとにプールして、50 U/ml, 100 U/ml, 150
U/mlの標準リファレンス血清を作成し、これをもと
に、100 U/mlまでの値を決定
4）RF陽性リフゔレンス血清（100 U/ml前後）
関節リウマチ患者血清（100 U/ml前後）を収
集し、6社以上の試薬の変動係数が少ない検体
を、10本ごとにプールして、50 U/ml, 100
U/ml, 150 U/mlのリフゔレンス血清を作成
プール血清パネルの作成と配布が急務