Agilent 6460

Agilent 6460 による食用油中
グリシドール脂肪酸エステル類の分析
＜要旨＞LC/MS-MS 法を用いて食用油中 3 種類のグリドール脂肪
酸エステルンの高感度分析法を検討しました。その結果イ
オン源に ESI を使用し、プリカーサーイオンにアンモニ
ウム付加体を選択することで標準品 0.1ppb 以下での測定
が可能でした。また、綿実油、コーン油、食用油中 0.1μ
g/g 以下で各グリシドールイ脂肪酸エステルの検出が可
能であり回収率は 79～103%であった。
Key Words: グリシドール脂肪酸エステル、食用油、発がん性、LC/MS-MS
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脱離したイオンが特異的に観察され安定であったこと
1. はじめに
から SRM トランジションは表.2 の通りとしました。
グリシドール脂肪酸エステルはジアシルグリセロー
ルの製造工程中で生成される物質と推定されています
食用油は 10 倍量のヘキサンで溶解した後、ヘキサン
が、この物質自体が遺伝毒性を持つ発がん性物質であ
飽和アセトニトリル 5mL で 1 分間、激しく振とう抽出
るかどうかの毒性学的データは得られていません。し
し、アセトニトリル相を LC/MS で測定しました。
かし、この物質が生体内で分解されて発がん性が指摘
表.1 LC/MS-MS 条件
されているグリシドールを遊離する可能性があること
LC
: Agilent 1290 infinity LC
Column
: Inertsil ODS4 (150mm,2.1mm, 2um)
から注目されています。また、綿実油、コーン油など
Mobile phase
: A:10mMHCOONH4 ,B: MeOH
の食用油にも僅かに存在することから食用油中グリシ
80%B---(10min)---100%B/5min
Column temp
: 40℃
ドール脂肪酸エステルの高感度分析法の開発が急がれ
Injection volume
: 3uL
Flow rate
: 0.3mL/min
ています。そこで今回、三連四重極型質量分析計を使
用した LC/MS-MS による食用油中グリシドール脂肪
MS
: Agilent 6460 Triple Quad LC/MS
Ionization
: AJS (Positive)
酸エステルの微量分析法について紹介します。
2. 装置及び測定条件
グリシドール脂肪酸エステルの標準品は林純薬製パ
ルミチン酸グリシジル、オレイン酸グリシジル及びリ
ノール酸グリシジルを使用しました。LC/MS-MS には
Agilent6460 triple quadrupole LC/MS を使用しカラ
ム に は GL サ イ エ ン ス 製 Inertsil ODS4
(150mm,2mm,2μm)を使用しました。分析条件は表.1 に
示しましたが、移動相にメタノール及び 0.1%ギ酸
+10mM ギ酸アンモニウム水溶液を用いたグラジエント
溶出を行い、
移動相の流速は 0.25mL/min としました。
イオン源には AJS を使用し、正イオンモードで測定し
ました。図.1 にグリシドール脂肪酸エステル類の質量
スペクトルを示しましたが、フル scan スペクトルから
プリカーサーイオンにはプロトン化分子とアンモニウ
ム付加体が考えられますが、プロトン化分子を選択し
た場合、強度の強い特異的なプロダクトイオンが観察
されませんでした。一方、アンモニウム付加体を選択
した MS-MS スペクトルは図.1 の通り、アンモニアが
Sheath gas
Drying gas
Nebulizer gas
Fragmentor
: 12L/min at 200℃
: 10L/min at 300℃
: 345kPa
: 120V
グリシドールエステル
プリカーサー
プロダクトイオン
コリジョンエネルギー
定量用
確認用
定量用
1 リノール酸グリシジル
イオン
354
337
81
5
20
2 パルミチン酸グリシジル
330
323
57
5
20
3 オレイン酸グリシジル
356
339
57
5
20
(A)
x106
1.5
354.3005(M+NH4)+
リノール酸グリシジル
1.0
337.2744(M+H)+
0.5
8
(B)
x106
1.0
337
リノール酸グリシジル
0.6
354(M+NH4)+
0.2
x105
x105
313.2743(M+H)+
5
6
パルミチン酸グリシジル
4
330.3004(M+NH4)+
2
313
パルミチン酸グリシジル
3
330(M+NH4)+
1
x105
356.3161(M+NH4)+
339.2898(M+H)+
1.0
0.6
確認用
オレイン酸グリシジル
x105
339
6
4
オレイン酸グリシジル
356(M+NH4)+
2
0.2
270
290
310
330
m/z
350
370
50
100
150
200
250
m/z
300
350
400
図.1 グリシドールエステル類の MS-MS スペクトル
プリカーサーイオン (A):(M+H)+, (B):(M+NH4)+
3.結果
グリシドール脂肪酸エステル類の SRM クロマトグ
ラムは 1000 及び 0.1ng/mL 標準液の結果を図.2 に示し
ました。このクロマトグラムから各グリシドール脂肪
酸エステルの S/N 比は図.2 の通り 8～32 であり、
S/N=3 を検出限界とした場合の各グリシドール脂肪酸
エステルの検出限界は 0.009～0.038ng/mL でした。ま
た、検量線は図.3 に示しましたが、決定係数は 0.999
以上と良好な結果でした。
で非常に良く一致しました。
また、今回、示しませんでしたが試料マトリックスに
よる顕著なオン化抑制も認められませんでした
(A)
X103
5
リノール酸グリシジル
1
1000ppb
4
0.1ppb
800
リノール酸グリシジル
3
600
2
22.4%
300
1.3
パルミチン酸グリシジル
1.1
0.9
0.7
m/z=354>337
x103
700
パルミチン酸グリシジル
5
x103
1.6
900
1.2
700
オレイン酸グリシジル
0.8
0.4
300
m/z=358>39
1
2
3
オレイン酸グリシジル
(S/NR=11)
500
4
5 6 7
保持時間(分)
8
9
10
1
2
3
4
5
6
保持時間(分)
7
8
9
10
図.2 代表的グリシドール脂肪酸エステルの SRM ク
ロマトグラム 濃度:0.1ng/mL
x106
8
リノール酸グリシジル
x106 パルミチン酸グリシジル
5
4
6
3
4
2
1
2
0
0
x106
r2 = 0.9999
20 40 60 80 100
0
0
r2 = 1.0000
20 40 60 80 100
オレイン酸グリシジル
6
4
2
0
0
m/z=330>57
7.8%
1.0
800
600
オレイン酸グリシジル
オレイン酸グリシジル
400
m/z=356>339
2
3
200
4
5
6
保持時間(分)
7
8
9
m/z=356>57
1
2
3
4
5
6
保持時間(分)
7
8
9
表.2 各グリシドール脂肪酸エステルの確認用イオン
の相対強度(%)
300
m/z=330>313
1
パルミチン酸グリシジル
(S/NR=8)
500
3
180
m/z=330>313
X103
図.4 綿実油中各グリシドール脂肪酸エステルの SRM
クロマトグラム(添加量:0.1μg/g)
(A) : 定量用 (B) : 確認用
200
7
パルミチン酸グリシジル
260
220
1
400
1
m/z=354>81
X103
0.2
リノール酸グリシジル
(S/NR=32)
200
m/z=354>337
0.6
x103
リノール酸グリシジル
400
3
10.3%
(B)
600
r2 = 1.0000
20 40 60 80 100
図.3 グリシドール脂肪酸エステル類の検量線
食用油は装置及び測定で示した通り、0.1g をヘキサン
(10mL)で溶解し、ヘキサン飽和アセトニトリルで抽出
しました。0.1μg/g 相当のグリシドール脂肪酸エステ
ルを添加したコーン油の結果は図.4 に定量用及び確認
用 SRM クロマログラムを示しました。また、添加量の
異なる試料での確認用イオンの定量用イオンに対する
相対強度は表.2 に示しましたが、100～0.1μg/g の範囲
グリシドール脂肪酸エステル
リノール酸グリシジル
パルミチン酸グリシジル
オレイン酸グリシジル
100
10.3
21.2
7.7
50
10.4
22.3
7.6
10
9.8
19.5
7.3
グリシドール脂肪酸エステル
リノール酸グリシジル
パルミチン酸グリシジル
オレイン酸グリシジル
1
10.1
19.8
8.2
0.5
9.4
21.2
7.4
0.1
9.2
22.1
8.3
5
9.1
20.3
8.1
今回、確立した方法に従ってグリシドール脂肪酸エス
テルを添加した 3 種類の食用油中各グリシドール脂肪
酸エステル類を測定した際の回収率は表.3 に示しまし
たが、76～103%と良好な結果でした。
表.3 食用油中各グリシドール脂肪酸エステル類の
回収率 (%)
グリシドール脂肪酸エステル
リノール酸グリシジル
パルミチン酸グリシジル
オレイン酸グリシジル
添加量:0.1ppm
綿実油
88
91
103
コーン油
79
85
91
ごま油
83
76
88
4.まとめ
今回、食用油中 3 種類のグリシドール脂肪酸エステ
ルの微量分析に LC/MS-MS 法を用いた高感度分析法
を確立しました。その結果、簡便な試料前処理により
食用油中 3 種類のグリシドール脂肪酸を 0.1μg/g 以下
での測定が可能でした。
【LCMS-201008TK-002】
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