Cryofilmによる凍結切片作製法

2010/12/12 病理検査研究班基礎講座
病理検査研究班基礎講座
藤田保健衛生大学病院病理部
平澤 浩
藤田保健衛生大学病院
はじめに
迅速標本作製は脂肪との戦い
迅速標本作製は脂肪との戦い
凍結切片作製法は術中迅速診断に必須の方法であり、
クリオスタットを用いた切片作製が行われる。
脂肪組織を含む検体は薄切が困難である。
→ 脂肪は薄切温度で凍結しない。
→ 包埋剤（コンパウンド）は超低温では薄切できない。
（切片にならずパウダー状に削れてしまう）
クリオスタットを使用した通常の凍結切片作製法では、脂肪
を含む組織の切片作製は困難であるが、かろうじて得られた
切片で診断しているのが現実であろう。
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脂肪組織
乳腺穿刺で得られた脂肪組織
（パパニコロー染色）
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なぜ脂肪が切れないか？ （１）
リンパ節
脂肪組織
凍結したセンチネル
リンパ節
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なぜ脂肪が切れないか？ （２）
組織、脂肪がコンパンウドを介して連続性のある切片であることが条件
薄切
脂肪が凍結し、リンパ節と支持体（コンパウンド）と連続
して一体化していると切片となる。
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なぜ脂肪が切れないか？ （３）
脂肪組織が切片とならないため、連続性のある切片とならない
薄切
脂肪は凍結できないため、リンパ節と支持体（コンパウ
ンド）が一体化できず、１枚の切片とならない。
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脂肪を含む組織の薄切法
脂肪を含む組織の作製法は古くより多くの検討が行われて
きたが、脂肪を除去する方法に主眼がおかれた検討が中心。
脂肪の除去法
脂肪の除去法
・ 組織から脂肪を押し出して切片を作製する。
・ コンパウンド中でモミモミして脂肪を押し出す。
・ 界面活性剤、家庭用洗剤を通して脂肪を除去する。
・ 超音波を利用して脂肪除去を促進する。
コンパウンドの脂肪組織への浸透法
コンパウンドの脂肪組織への浸透法 （置換法）
・ コンパウンドにグリセリン、生理食塩水を添加。
・ アラビアゴムを添加したコンパウンドで薄切。
再現性のある良好な方法はないのが現状？
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クライオフイルムによる薄切法
クライオフイルム
フイルムが支持体となって切片とすることができる。
薄切
薄切面にクライオフイルム（粘着テープ）を密着させて
薄切を行う。
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従来法とクライオフイルム法
従来法
脂肪が抜けている
クライオ
フイルム法
フイルム貼り付けと密着
脂肪組織も切片となる
クライオフイルムによる凍結切片作製の実際
① クライオフイルムの準備
→ シート状のフイルムを使用サイズにカット
② 薄切・切片採取
→ ブロックにフイルムを貼って薄切
③ 切片を貼り付けたフイルムのプロセスカバーへの
取り付け
④ 染色
⑤ 封入 → フイルムを封入
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クライオフイルムの準備
フイルムシートはA4サイズ
22mm幅でカット
切り分け
番号記入用シールの貼り付け
従来法による薄切
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クライオフイルムによる薄切
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バスケットを用いたクライオフイルムの染色
キングサイズカセットプロセスカバーに
クリップでフイルムを留める
6枚程度まとめて染色可能
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染色
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封入
フイルムをスライドに
載せる
フイルムの両端をカット
封入する
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従来法とクライオフイルム法の比較
従来法
センチネルリンパ節
クライオフイルム
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従来法とクライオフイルム法の比較
従来法
センチネルリンパ節
クライオフイルム
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従来法とクライオフイルム法の比較
従来法
センチネルリンパ節
クライオフイルム
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従来法とクライオフイルム法の比較
従来法
乳腺断端
クライオフイルム
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通常法とクライオフイルム法の比較
＊ ：脂肪組織
＊
＊
＊
＊
通常法
＊
＊
通常法とクライオフイルム法の比較
＊ ：脂肪組織
＊
＊
＊
＊
通常法
＊
クライオフイルム法 SLN 微小転移例
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Post Frozen SLN転移例
SLN転移例
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従来法とクライオフイルム法 ： 皮膚検体
従来法
クライオフイルム
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従来法とクライオフイルム法 ： 皮膚検体
従来法
クライオフイルム
従来法とクライオフイルム法 ： 皮膚検体
従来法
クライオフイルム
クライオフイルム法でみられるアーチファクト
クライオフイルム法による標本作製は通常の方法と
比較して特有のアーチファクトがみられる。
１） 核の膨化、核の不明瞭化。テープ貼り付け時の
融解・再凍結に由来するアーチファクトか？
２） 切片に著しい亀裂が生ずる。特にリンパ節に
みられる。
３） 切片が厚めには薄切される傾向にある。
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従来法とクライオフイルム法 ： 肺腺癌症例
クライオフイルム
従来法とクライオフイルム法 ： 肺転移性腺癌症例（１）
クライオフイルム
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従来法とクライオフイルム法 ： 肺転移性腺癌症例（２）
クライオフイルム
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クライオフイルム法でみられる切片の亀裂
クライオフイルム法でみられる切片の亀裂（２）
アルコール中
キシレン中
クライオフイルムの使用経験から （１）
・ フイルムに貼り付けた切片を染色するため、染色
カゴを使用して複数枚の染色を行えないと現場での
活用は困難である。
・ フイルムに検体氏名や枝番号を記入するシールを
貼っておくと封入の際に間違いを防止できる。
・ フイルム幅が凍結ブロックの幅より広いと薄切時に
失敗しやすい。モルド３号を使用する場合、幅22mm
が適当である。
・ 脂肪だけでなく皮膚の表皮など、皺や折れ返りが生じ
やすい検体の薄切にも有効である。
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クライオフイルムの使用経験から （２）
・ クライオフイルム標本には従来法と異なるアーチファ
クトが経験された。
→ 厚めに薄切されるが、やや厚めに切った方が
良好な切片が得られる。
→ 核所見をはじめ全体的に鮮明さが低い標本と
なる。フイルム貼り付け時の融解が原因かも
しれない。
→ 特にリンパ節標本にひび割れが生じやすい。
キシレン透徹時にフイルムが収縮することに
起因する。しかし転移の検索に問題はない。
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まとめ
・ クライオフイルムは従来作製が困難であった脂肪を
含む組織の凍結切片作製を可能とした。
・ 乳腺センチネルリンパ節の検索において、微小転移
病変が診断されており、診断精度向上に有用である。
・ 薄切と染色に関し、さらなる技術検討が必要であり、
知見の集積が望まれる。
・ 今後、クライオフイルムによる切片作製は、乳癌検体
の迅速診断に必要な技術として普及してゆくことが
望まれる。
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