Comments
Description
Transcript
免疫原性およびワクチン組成物
JP 2011-503086 A 2011.1.27 (57)【要約】 免疫原性およびワクチン組成物、ならびにそれらを調製および使用する方法が提供され 、組成物は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ） 感染を防御し、その重症度を最小限に抑え、予防し、かつ／または改善するのに有効であ る。本明細書に開示されるアジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモ ニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）組成物の１回または２回投与による動物への投 与は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の病原 性株による感染に対して動物に免疫および防御を提供し、それによって１種または複数の マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の病原性株に 起因する疾患の重症度を軽減しかつ／または疾患を予防するのに有効である。さらに、た とえば１種または複数の生細菌、バクテリン、トキソイド、および／またはウイルス、お よび／またはウイルス抗原などの１種または複数の抗原をさらに含む組成物が提供される 。アジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅ ｕｍｏｎｉａｅ）を含む免疫原性組成物、およびアジュバント添加非病原性生マイコプラ ズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）とさらに組み合わせてブ タサーコウイルス１型−２型キメラ変性生ワクチン（ｃＰＣＶ１−２）を含む組成物が例 示される。 10 (2) JP 2011-503086 A 2011.1.27 【特許請求の範囲】 【請求項１】 動物において抗マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）免疫応答を誘発する組成物であって、免疫学的に有効量のマイコ プラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ） の非病原性生菌株および生物学的に許容できるアジュバントを含む組成物。 【請求項２】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の非病原性生菌株が、そのゲノムが参考Ｊ株の核酸配列に対して少なくとも約９ ０％の相同性を有する核酸配列を含む株である、請求項１に記載の組成物。 10 【請求項３】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の非病原性生菌株が、参考Ｊ株に対して少なくとも約７０％の多型同一性を有す る株である、請求項２に記載の組成物。 【請求項４】 参考Ｊ株が、ＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４または２７７１５を有する株であ る、請求項２または３のいずれかに記載の組成物。 【請求項５】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の非病原性生菌株が、ＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４または２７７１５ 20 と称されるＪ株である、請求項１から３のいずれかに記載の組成物。 【請求項６】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の非病原性生菌株が、ＡＴＣＣアクセッション番号２７７１５と称されるＪ株で ある、請求項５に記載の組成物。 【請求項７】 前記生物学的に許容できるアジュバントが、１種または複数のＳＬ−ＣＤ、Ｃａｒｂｏ ｐｏｌ、およびＳＰ−油からなる群から選択される、請求項１から６のいずれかに記載の 組成物。 【請求項８】 30 前記生物学的に許容できるアジュバントがＳＰ−油を含む、請求項７に記載の組成物。 【請求項９】 前記ＳＰ−油が、約１％から約２５％の濃度で存在する、請求項８に記載の組成物。 【請求項１０】 前記ＳＰ−油が、約１０％の濃度で存在する、請求項９に記載の組成物。 【請求項１１】 ヘモフィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｓｕｉｓ）、パスツレ ラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッカス ・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）、アクチノバチルス・プルロニュー モニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ボルデ 40 テラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サ ルモネラ・コレラスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、エリシ ペロスリクス・ルシオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉ ａｅ）、およびレプトスピラ（ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）細菌からなる群から選択される、 １種または複数の生細菌、バクテリン、および／または１種または複数の精製トキソイド をさらに含む、請求項１から１０のいずれかに記載の組成物。 【請求項１２】 ブタインフルエンザウイルス（ＳＩＶ）抗原、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス（ＰＲ ＲＳＶ）抗原、ＰＲＲＳ発現アライグマポックスウイルス抗原または他の抗原、ＰＲＲＳ 発現ＴＧＥＶ抗原または他の抗原、およびブタサーコウイルス（ＰＣＶ）抗原からなる群 50 (3) JP 2011-503086 A 2011.1.27 から選択される１種または複数のウイルス抗原をさらに含む、請求項１から１０のいずれ かに記載の組成物。 【請求項１３】 前記ブタサーコウイルス（ＰＣＶ）抗原が、ブタサーコウイルス１型−２型（ｃＰＣＶ １−２）キメラである、請求項１２に記載の組成物。 【請求項１４】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の非病原性生菌株によって誘発された免疫応答が、マイコプラズマ・ハイオニュ ーモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の病原性株による感染 に対して動物を防御するか、または感染に関連する少なくとも１つの症状の重症度を軽減 10 する、請求項１から１３のいずれかに記載の組成物。 【請求項１５】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の病原性株に関連する疾患に対して動物を防御するか、または疾患に関連する少 なくとも１つの症状を予防もしくは軽減する方法であって、請求項１から１４のいずれか 一項に記載の組成物を前記動物に投与するステップを含む方法。 【請求項１６】 投与ステップが、非経口投与によって達成される、請求項１５に記載の方法。 【請求項１７】 非経口投与ステップが、筋内注射によって達成される、請求項１６に記載の方法。 20 【請求項１８】 投与ステップが、経口投与によって達成される、請求項１５に記載の方法。 【請求項１９】 経口投与ステップが、手動送達または大量適用によって達成される、請求項１８に記載 の方法。 【請求項２０】 投与ステップが、経鼻投与によって達成される、請求項１５に記載の方法。 【請求項２１】 前記動物がブタである、請求項１５から２０のいずれか一項に記載の方法。 【請求項２２】 30 請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物を動物に投与するステップを含む、マ イコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｅ）の発生を予防または改善する方法。 【請求項２３】 免疫原性組成物である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。 【請求項２４】 前記生物学的に許容できるアジュバントが、１種または複数のＳＬ−ＣＤ、Ｃａｒｂｏ ｐｏｌ、およびＳＰ−油からなる群から選択される、請求項２３に記載の免疫原性組成物 。 【請求項２５】 40 前記生物学的に許容できるアジュバントがＳＰ−油を含む、請求項２４に記載の免疫原 性組成物。 【請求項２６】 前記ＳＰ−油が、約１％から約２５％の濃度で存在する、請求項２５に記載の免疫原性 組成物。 【請求項２７】 前記ＳＰ−油が、約１０％の濃度で存在する、請求項２６に記載の免疫原性組成物。 【請求項２８】 ヘモフィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｓｕｉｓ）、パスツレ ラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッカス 50 (4) JP 2011-503086 A 2011.1.27 ・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）、アクチノバチルス・プルロニュー モニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ボルデ テラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サ ルモネラ・コレラスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、エリシ ペロスリクス・ルシオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉ ａｅ）、およびレプトスピラ（ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）細菌からなる群から選択される、 １種または複数の生細菌、バクテリン、および／または１種または複数の精製トキソイド をさらに含む、請求項２３から２７のいずれかに記載の免疫原性組成物。 【請求項２９】 ブタインフルエンザウイルス（ＳＩＶ）抗原、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス（ＰＲ 10 ＲＳＶ）抗原、ＰＲＲＳ発現アライグマポックスウイルス抗原または他の抗原、ＰＲＲＳ 発現ＴＧＥＶ抗原または他の抗原、およびブタサーコウイルス（ＰＣＶ）抗原からなる群 から選択される１種または複数のウイルス抗原をさらに含む、請求項２３から２７のいず れかに記載の免疫原性組成物。 【請求項３０】 前記ブタサーコウイルス（ＰＣＶ）抗原が、ブタサーコウイルス１型−２型（ｃＰＣＶ １−２）キメラである、請求項２９に記載の免疫原性組成物。 【請求項３１】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）に対する免疫応答を増強する方法であって、単回または複数回投与の請求項２３ 20 から３０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を動物に投与するステップを含む方法。 【請求項３２】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の非病原性生菌株が、そのゲノムが参考Ｊ株の核酸配列に対して少なくとも約９ ０％の相同性を有する核酸配列を含む株である、請求項３１に記載の方法。 【請求項３３】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の非病原性生菌株が、参考Ｊ株に対して少なくとも約７０％の多型同一性を有す る株である、請求項３１に記載の方法。 【請求項３４】 30 参考Ｊ株が、ＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４または２７７１５を有する株であ る、請求項３２から３３のいずれかに記載の方法。 【請求項３５】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の非病原性生菌株が、ＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４または２７７１５ と称されるＪ株である、請求項３２から３３のいずれかに記載の方法。 【請求項３６】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の非病原性生菌株が、ＡＴＣＣアクセッション番号２７７１５と称されるＪ株で ある、請求項３５に記載の方法。 40 【請求項３７】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）に対する免疫応答を増強する方法であって、 ａ）１回目に、生物学的に許容できるアジュバント材料をアジュバント添加した免疫学的 に有効量の非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈ ｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を含む第１の免疫原性組成物を動物に投与するステップ、 ｂ）２回目に、生物学的に許容できるアジュバント材料をアジュバント添加した免疫学的 に有効量の非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈ ｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含む第２の免疫原性組成物を動物に投与するステップを含 む方法。 50 (5) JP 2011-503086 A 2011.1.27 【請求項３８】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の非病原性生菌株が、請求項２から１０のいずれか一項に定義された株である、 請求項３７に記載の方法。 【発明の詳細な説明】 【技術分野】 【０００１】 本開示は一般に、免疫学および獣医学の分野に関する。より具体的には、本開示は、マ イコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の１種または複 数の病原性株に起因する疾患の重症度の軽減および／または予防を助ける、免疫原性組成 10 物またはワクチン組成物を包含する、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のＪ株をベースとするアジュバント添加非病原性生マイコプラズ マ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）組成物を提供する。ブタサ ーコウイルス１型−２型キメラ変性生ワクチン（ｃＰＣＶ１−２）をさらに含む、免疫原 性組成物またはワクチン組成物を包含する、アジュバント添加非病原性生マイコプラズマ ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）組成物も提供される。本明細 書に開示されるアジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ． ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）組成物の動物への１回または２回投与は、マイコプラズマ ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の病原性株による感染に対す る細胞性免疫および／または液性免疫を包含する免疫の提供に有効である。 20 【背景技術】 【０００２】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）（Ｍ．ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）とも称される） は、豚マイコプラズマ肺炎の病原体である。この疾患は、慢性の咳、つやのない被毛、発 育遅滞、および数週間続く元気のない外観を引き起こす。感染動物では、特に腹部先端お よび心臓葉において、紫色から灰色の硬化領域の特徴的な病変が観察される。この疾患は ほとんど死亡の原因とはならないが、罹患したブタは多くの場合、死やストレスを招く日 和見病原体による二次感染を受けやすい（Ｒ．Ｆ．Ｒｏｓｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｌ ｄｉｓｅａｓｅｓ、ｐｐ．４３６∼４４４、Ａ．Ｄ．Ｌａｍａｎ等（編）、Ｄｉｓｅａｓ 30 ｅｓ ｏｆ Ｓｗｉｎｅ、Ｉｏｗａ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、 １９８６）。 【０００３】 この疾患は、ブタの疾患に関連する損失のもっとも重要な原因の１つであると考えられ ている（Ｗｈｉｔｔｌｅｓｔｏｎｅ、ｐｐ．１３３∼１７６、ＴｕｌｌｙおよびＷｈｉｔ ｃｏｍｂ（編）、Ｔｈｅ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ Ｖｏｌ２：Ｈｕｍａｎ ａｎｄ Ａｎ ｉｍａｌ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ （１９７９））。この疾患は一般に、非効率的体重増加個体、ならびに発育阻止および病 弱動物をもたらす。さらに、罹患したブタは多くの場合、日和見病原菌による二次感染を 受けやすい（Ｂｕｒｃｈ、Ｐｉｇ Ａｍｅｒｉｃａ、ｐｐ．２６∼２７、Ｄｅｃｅｍｂｅ 40 ｒ、１９８２）。この疾患の経済的影響は著しい。経済的損失だけでも年間２億から２億 ５千万ドルと推定されている。 【０００４】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）は、細胞壁を持たない、増殖の遅い選好性細菌である。この細菌は、同様に気道 に局在する一般的な第２の因子であるマイコプラズマ・ハイオリニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓ ｍａ ｈｙｏｒｈｉｎｉｓ）のために、気道からの単離が困難なことが多い。この疾患は 罹患ブタまたは回復期保菌ブタから、咳により生じる飛沫によって、および直接接触によ って蔓延する。感染動物と非感染動物が混在することによって、早期かつ頻繁な再感染が 引き起こされる。感染はしばしば、分娩時の保菌雌ブタによる子ブタへの感染から始まる 50 (6) JP 2011-503086 A 2011.1.27 。 【０００５】 群れによる管理技法により、感染は寿命の後年まで明らかとならない可能性がある。さ らなる感染は通常、離乳後、ブタが集められたときに観察される。顕性疾患は、通常は６ 週齢以上のブタで観察される。罹患した動物では、発育速度および飼料効率が著しく低下 する。抗生物質を用いる現在の治療は高価であり、長期の使用を必要とする。動物の再感 染は依然として問題である。 【０００６】 したがって、ワクチンは現在、感染およびその結果を回避するもっとも有効な方法であ る。マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏ 10 ｎｉａｅ）感染に対してブタを防御するワクチンを提供する数多くの試みがなされてきた 。数人の研究者が、組換えにより生成したマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃ ｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の表面抗原を含むワクチンを開示してい る。Ｓｃｈａｌｌｅｒ等、米国特許第４８９４３３２号、１９９０年１月１６日発行；欧 州特許公開第２８３８４０号、１９８８年９月２８日公開。ＰＣＴ公開第ＷＯ８６／００ ０１９号、１９８６年１月３日公開は、他の細胞成分を含まず、マイコプラズマ・ハイオ ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）原形質膜のみを含 むマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）ワクチンを開示している。Ｅｔｈｅｒｉｄｇｅ等、Ｒｅｓ．Ｖｅｔ．Ｓｃｉ．３ ３：１８８（１９８２）は、生ワクチンが静脈内、皮下、または腹腔内投与されたとき、 20 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉ ａｅ）による肺コロニー形成に対する不完全な防御を見出した。Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ等 、Ａｍ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｒｅｓ．４２：７８４（１９８１）は、加熱不活化マイコプラズマ ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を注射し た後、マイコプラズマ肺炎に対してブタが防御されないことを見出した。Ｒｏｓｓ等、Ａ ｍ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｒｅｓ．４５：１８９９（１９８４）は、ブタを免疫化するための、凍 結融解手順によって調製したマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ ａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抽出物の使用は不定の防御のみを提供し、一部の例で は、免疫ブタにおける病変発生の増強が認められることを見出した。これらの研究者はま た、ホルマリン不活化によって調製した全細胞ワクチンも研究した。ホルマリン不活化は 30 、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の防御免疫原性を著しく妨げ、このワクチンは有効でなかった。Ｙｏｓｈｉｏｋ ａ等、米国特許第３９１７８１９号（１９７５年１１月４日発行）は、マイコプラズマ・ ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の不活化ワ クチンを包含する、ホルマリンで不活化されたマイコプラズマを含むいくつかの死菌マイ コプラズマワクチンを開示している。Ｃｈｕｎｇ−Ｎａｎの欧州特許公開第５７１６４８ 号は、非常に増殖性であり抗原性のＰＲＩＴ−５株をベースとするマイコプラズマ・ハイ オニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンを開示した。 【０００７】 不活化病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐ 40 ｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株をベースとするワクチンは市販され入手可能である。Ｆｏｒｔ Ｄｏｄｇｅ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ（ＦＤＡＨ）は、マイコプラズマ・ハイオニュ ーモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に起因する臨床徴候に 対して健常なブタを防御するワクチンとして用いるため、Ｓｕｖａｘｙｎ（登録商標）お よびＲｅｓｐｉｆｅｎｄ（登録商標）マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐ ｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の名称で、マイコプラズマ・ハイオニューモ ニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）バクテリンを市販している 。このバクテリンワクチンは、第１回ワクチン接種の２週間から３週間後に第２回投与を 行う、少なくとも１週齢のブタ用の２回投与ワクチンとして推奨されている。 【０００８】 50 (7) JP 2011-503086 A 2011.1.27 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｊ株は、ブ タの線毛に付着し、それによって疾患を引き起こす能力が低減された非病原性株である。 Ｃａｓｔｒｏ等、Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ１１６：２５８∼２ ６９（２００６）およびＶａｓｃｏｎｃｅｌｏｓ等、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８７（ １６）：５５６８∼５５７７（２００５）（マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ． ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｊ株の全ゲノム配列を記載している（ＡＴＣＣ２５９３４ ））。病原性株と非病原性株（Ｊ株）とのゲノム比較は、マイコプラズマ・ハイオニュー モニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株間の相対病原特性の決定要因になると考え られている、線毛付着を包含する表面タンパク質の変化を明らかにした。Ｖａｓｃｏｎｃ ｅｌｏｓ等（２００６）およびＤｊｏｒｄｊｅｖｉｃ等、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ 10 Ｉｍｍｕｎｉｔｙ７２（５）：２７９１∼２８０２（２００４）。 【０００９】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、その細 胞表面、膜リポタンパク質、特に種特異的抗原決定基を有するＰ４６、Ｐ６５、およびＰ ９７タンパク質に発現する。最近、Ｂｏｕｈ等は、非病原性生マイコプラズマ・ハイオニ ューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）参考Ｊ株ＡＴＣＣ２５９３４のＰ４６お よびＰ６５に対するモノクローナル抗体を記載した。Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇ．Ｌａｂ．Ｉｍ ｍｕｎｏｌｏｇｙ１０（３）：４５９∼４６８（２００３）。ＢｌａｎｋおよびＳｔｅｍ ｋｅは、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｊ株 ゲノムの物理的地図および遺伝子地図を記載し、Ｃａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４６ 20 ：８３２∼８４０（２０００）、Ｗｉｌｔｏｎ等は、非病原性マイコプラズマ・ハイオニ ューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｊ株から生成された発現ライブラリのス クリーニング、およびマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）に対するブタ超免疫抗血清によるライブラリのスクリーニングを記載した。 【発明の概要】 【発明が解決しようとする課題】 【００１０】 その組成物がマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）の病原性株に対する有効性を提供する、アジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）から製造さ 30 れた、免疫原性組成物またはワクチン組成物を包含する組成物が求められている。 【課題を解決するための手段】 【００１１】 本開示は、免疫学的に有効量の非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙ ｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および生物学的に許容できるアジュバ ントを含む、免疫原性組成物またはワクチン組成物を包含する組成物を提供する。本明細 書に開示される組成物は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫応答を誘発し、それによってこの生物体に 起因する疾患を予防しおよび／またはその重症度を最小限に抑えるか、またはこの疾患に 関連する少なくとも１つの症状を改善する。 40 【００１２】 したがって、一態様において本発明は、動物において抗マイコプラズマ・ハイオニュー モニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）免疫応答を誘発する組成 物を提供し、前記組成物は、免疫学的に有効量のマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株および生物学的 に許容できるアジュバントを含む。 【００１３】 一実施形態において、組成物は、そのゲノムが参考Ｊ株の核酸配列に対して少なくとも 約９０％の相同性を有する核酸配列を含む、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙ ｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を含む。 50 (8) JP 2011-503086 A 2011.1.27 【００１４】 一実施形態において、組成物は、そのゲノムが参考Ｊ株の核酸配列に対して少なくとも 約９５％の相同性を有する核酸配列を含む、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙ ｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を含む。 【００１５】 一実施形態において、組成物は、そのゲノムが参考Ｊ株の核酸配列に対して少なくとも 約９９％の相同性を有する核酸配列を含む、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙ ｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を含む。 【００１６】 一実施形態において、組成物は、参考Ｊ株に対して少なくとも約７０％の多型同一性を 10 有する、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕ ｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を含む。 【００１７】 一実施形態において、組成物は、参考Ｊ株に対して少なくとも約８５％の多型同一性を 有する、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕ ｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を含む。 【００１８】 一実施形態において、組成物は、参考Ｊ株に対して少なくとも約９５％の多型同一性を 有する、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕ ｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を含む。 20 【００１９】 一実施形態において、本明細書に記載される組成物に用いられるマイコプラズマ・ハイ オニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌 株の相同性率は、ＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４（ＧｅｎＢａｎｋアクセッショ ン番号ＡＥ０１７２４３）または２７７１５を有する非病原性参考Ｊ株との比較によって 求められる。他のいくつかの実施形態において、参考株は、病原性株、たとえばＡＴＣＣ アクセッション番号２５６１７または２５０９５を有する株であることができる。 【００２０】 一実施形態において、本明細書に記載される組成物に用いられるマイコプラズマ・ハイ オニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌 30 株の多型同一性率は、ＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４または２７７１５を有する 非病原性参考Ｊ株との比較によって求められる。他のいくつかの実施形態において、参考 株は、病原性株、たとえばＡＴＣＣアクセッション番号２５６１７または２５０９５を有 する株であることができる。 【００２１】 一実施形態において、本明細書に記載される組成物に用いられるマイコプラズマ・ハイ オニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌 株は、ＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４または２７７１５と称されるＪ株である。 【００２２】 一実施形態において、本明細書に記載される組成物に用いられるマイコプラズマ・ハイ 40 オニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌 株は、ＡＴＣＣアクセッション番号２７７１５と称されるＪ株である。 【００２３】 一実施形態において、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株によって誘発された免疫応答は、マイコ プラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ） の病原性株による感染に対して動物を防御するか、または感染に関連する少なくとも１つ の症状の重症度を軽減する。 【００２４】 一実施形態において、本明細書に開示されるアジュバント添加非病原性生マイコプラズ 50 (9) JP 2011-503086 A 2011.1.27 マ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）組成物の動物への１回投与 は、マイコプラズマ感染からの免疫を動物に提供するのに有効である。 【００２５】 一実施形態において、本明細書に開示されるアジュバント添加非病原性生マイコプラズ マ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）組成物の動物への２回投与 は、マイコプラズマ感染からの免疫を動物に提供するのに有効である。 【００２６】 本明細書に開示されるアジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニ エ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン組成物は、マイコプ ラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に 10 起因する感染および疾患に対してブタに使用するために適切に用いることができ、ブタ集 団においてマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅ ｕｍｏｎｉａｅ）に起因する感染および疾患の蔓延の管理および／または予防に有用であ ろう。 【００２７】 したがって、本開示の免疫原性組成物およびワクチン組成物は、生物学的に許容できる アジュバントなどの１種または複数のアジュバントと組み合わせて１種または複数の非病 原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍ ｏｎｉａｅ）を用いる。生物学的に許容できるアジュバントは、場合により、ＳＰ−油、 ＳＬ−ＣＤ、アクリル酸ポリマー（Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）、Ｎｏｖｅｏｎ，Ｉｎ 20 ｃ．、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、ＯＨなど）、ならびに１種または複数の不飽和テルペン炭化 水素たとえばスクアレンまたはスクアランなどの代謝性油、およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（登 録商標）（ＢＡＳＦ、Ｆｌｏｒｈａｍ Ｐａｒｋ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）などのポリオ キシエチレン−ポリプロピレンブロックコポリマーの混合物からなる群から選択された１ 種または複数のアジュバントであることができる。 【００２８】 本明細書に記載の組成物に用いられるアジュバントの濃度は、アジュバントの性質によ って決まることになる。アジュバントは典型的に、最終濃度約１∼５０％（ｖ／ｖ）、よ り典型的には最終濃度約１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％（ｖ／ｖ）で本 明細書に記載の組成物に存在する。ＳＰ−油を含む組成物では、アジュバントは典型的に 30 、約１％から約２５％（ｖ／ｖ）、より典型的には約５％から約１５％（ｖ／ｖ）、たと えば約１０％（ｖ／ｖ）などで存在する。アクリル酸ポリマー、ならびに１種または複数 のテルペン炭化水素およびポリオキシエチレン−ポリプロピレンブロックコポリマーを含 む代謝性油の混合物を含む組成物では、アクリル酸ポリマーと代謝性油／ポリオキシエチ レン−ポリプロピレンブロックコポリマー混合物の比は典型的に、約１：２５から約１： ５０の比であり、典型的に最終濃度約１％から約２５％（ｖ／ｖ）である。 【００２９】 一実施形態において、生物学的に許容できるアジュバントは、ＳＰ−油を含む。一実施 形態において、ＳＰ−油は、約１％から約２５％ｖ／ｖの濃度で存在する。一実施形態に おいて、ＳＰ−油は、約５％から約１５％ｖ／ｖの濃度で存在する。一実施形態において 40 、ＳＰ−油は、約１０％ｖ／ｖの濃度で存在する。 【００３０】 いくつかの実施形態において、本明細書に開示の組成物は、１種または複数の他の生細 菌、バクテリン、トキソイド、および／またはウイルス抗原をさらに組み合わせて用いる ことができる。したがって、これらの実施形態のいくつかの態様において、アジュバント 添加非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）組成物は、たとえばヘモフィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｓ ｕｉｓ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、 ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）、アクチノバチ ルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏ 50 (10) JP 2011-503086 A 2011.1.27 ｎｉａｅ）、ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓ ｅｐｔｉｃａ）、サルモネラ・コレラスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅ ｓｕｉｓ）、エリシペロスリクス・ルシオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈ ｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、およびレプトスピラ（ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）細菌などの１ 種または複数の病原体由来の（ａ）１種または複数の生細菌、（ｂ）１種または複数のバ クテリン、（ｃ）１種または複数の精製トキソイド、および／または（ｄ）ウイルスがブ タインフルエンザウイルス（ＳＩＶ）、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ） 、ＰＲＲＳ発現アライグマポックスウイルスおよび／または他の抗原、ＰＲＲＳ発現ＴＧ ＥＶおよび／または他の抗原、ならびにブタサーコウイルス（ＰＣＶ）からなる群から選 択される１種または複数のウイルス抗原とさらに組み合わせて、免疫学的に有効量の非病 10 原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍ ｏｎｉａｅ）、および１種または複数の生物学的に許容できるアジュバントを含むことが できる。これらの実施形態のいくつかの態様において、ブタサーコウイルス１型−２型キ メラ変性生ワクチン（ｃＰＣＶ１−２）をさらに組み合わせて用いる、免疫原性組成物ま たはワクチン組成物を包含する組成物が本明細書において例示される。これらの実施形態 または別の実施形態において、免疫原性組成物またはワクチン組成物を包含する組成物は 、たとえばＳＧＧＫ、チメロソール、および／またはＥＤＴＡなどの保存剤ならびに安定 剤を追加的にまたは場合により包含することができる。 【００３１】 本明細書に記載の組成物に用いられるそのような他の生細菌、バクテリン、トキソイド 20 、および／またはウイルス抗原の濃度は、生細菌、バクテリン、トキソイド、および／ま たはウイルス抗原の性質によって決まることになり、典型的に本明細書に記載の組成物に 存在する。他の抗原が細菌性であるそのような組成物の場合、細菌は典型的に、ミリリッ トル当たり約０．５×１０５から０．５×１０１０の最終濃度で存在する。あるいは、細 菌は、ミリリットル当たり約０．５×１０６から０．５×１０９の最終濃度、またはミリ リットル当たり約０．５×１０７から０．５×１０８の最終濃度で存在する。 【００３２】 本発明の第２の態様は、本明細書に記載のアジュバント添加非病原性生マイコプラズマ ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）組成物を 投与することによって、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ 30 ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫応答を生じさせる、またはマイコプラズマ・ ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に起因する 疾患に対して動物を防御する、および／または動物集団の中でそのような疾患の発生を予 防もしくは改善する方法を提供する。関連する態様において、本開示はまた、マイコプラ ズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対 する免疫応答を増強する方法を提供する。そのような方法は、１回または２回投与で、１ 種または複数のアジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙ ｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を含む組成物をブタなどの動物に投 与するステップを含む。 【００３３】 40 一実施形態において、本発明の方法は、そのゲノムが参考Ｊ株の核酸配列に対して約９ ０％の相同性を有する核酸配列を含む、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏ ｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を用いる。 【００３４】 一実施形態において、本発明の方法は、そのゲノムが参考Ｊ株の核酸配列に対して約９ ５％の相同性を有する核酸配列を含む、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏ ｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を用いる。 【００３５】 一実施形態において、本発明の方法は、そのゲノムが参考Ｊ株の核酸配列に対して約９ ９％の相同性を有する核酸配列を含む、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏ 50 (11) JP 2011-503086 A 2011.1.27 ｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を用いる。 【００３６】 一実施形態において、本発明の方法は、参考Ｊ株に対して少なくとも約７０％の多型同 一性を有する、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐ ｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を用いる。 【００３７】 一実施形態において、本発明の方法は、参考Ｊ株に対して少なくとも約８５％の多型同 一性を有する、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐ ｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を用いる。 【００３８】 10 一実施形態において、本発明の方法は、参考Ｊ株に対して少なくとも約９５％の多型同 一性を有する、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐ ｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を用いる。 【００３９】 一実施形態において、本明細書に記載される、本発明の方法で用いられるマイコプラズ マ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病 原性生菌株は、ＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４または２７７１５と称されるＪ株 である。 【００４０】 一実施形態において、本明細書に記載される、本発明の方法で用いられるマイコプラズ 20 マ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病 原性生菌株は、ＡＴＣＣアクセッション番号２７７１５と称されるＪ株である。 【００４１】 一実施形態において、本発明は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌ ａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫応答を増強する方法を提供し、こ の方法は、 ａ）１回目に、生物学的に許容できるアジュバント材料をアジュバント添加した免疫学的 に有効量の非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈ ｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を含む第１の免疫原性組成物を動物に投与するステップ、 ｂ）２回目に、生物学的に許容できるアジュバント材料をアジュバント添加した免疫学的 30 に有効量の非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈ ｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含む第２の免疫原性組成物を動物に投与するステップを含 む。 【００４２】 いくつかの実施形態において、企図される正確な適用例に応じて、組成物は、筋内、皮 下、もしくは腹腔内注射などによって非経口で、またはクリームの局所適用によって投与 することができる。あるいは、組成物は、鼻腔内噴霧、または手動送達もしくは大量適用 による経口投与など、エアロゾル、鼻腔内、または経口経路によって投与することができ る。 【００４３】 40 本発明の第３の態様は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染を患っている、またはマイコプラズマ・ハイ オニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染に関 連する少なくとも１つの症状を患っている動物を治療する薬剤を調製するための、本明細 書に記載のマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅ ｕｍｏｎｉａｅ）株、およびこれらの株を含む組成物の使用を提供する。 【００４４】 本発明のこれらの実施形態および他の実施形態、特徴、ならびに利点は、本明細書にお いて以下に示す詳細な説明および添付の請求の範囲から明らかとなるであろう。本明細書 に言及するすべての特許、特許出願、および他の文献は、それらの全体を参照により本明 50 (12) JP 2011-503086 A 2011.1.27 細書の一部とする。矛盾する場合、本開示が優先される。 【発明を実施するための形態】 【００４５】 本発明の方法および治療法を記載する前に、そのような方法および条件は多様であって よいため、本発明は記載される特定の方法および実験条件に限定されないことが理解され る。さらに本明細書で用いられる用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであ り、限定を意図しない。 【００４６】 本明細書および添付の請求の範囲では、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は 、文脈が明らかに別段の指示をしていないかぎり、複数の参照物を包含する。したがって 10 、たとえば、「この方法」への言及は、１つまたは複数の方法、ならびに／または本明細 書に記載されており、および／もしくは本開示を読むことにより当業者に明らかとなる種 類のステップなどが包含される。 【００４７】 したがって、本出願において、当分野の技術の範囲内で通常の分子生物学、微生物学、 および組換えＤＮＡ技法を用いることができる。そのような技法は文献に十分に説明され ている。たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒｉｔｓｃｈ、およびＭａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏ ｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｓｅｃｏ ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒ ａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（ 20 本明細書では「Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、１９８９」）；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒ ａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｖｏｌｕｍｅｓ ＩおよびＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖ ｅｒ編、１９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ． Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編、（１９８５））；Ｔｒａｎｓｃｒｉ ｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＳ．Ｊ．Ｈｉ ｇｇｉｎｓ編、（１９８４））；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆ ｒｅｓｈｎｅｙ編、（１９８６））；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅ ｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、（１９８６））；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ、Ａ Ｐｒａｃ ｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ 30 ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ等（編）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅ ｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９ ４）を参照されたい。 【００４８】 本明細書に記載したものと類似または等価の任意の方法および材料を本発明の実施また は試験において用いることができるが、好ましい方法および材料をここに記載する。本明 細書に言及されるすべての刊行物は、それらの全体を参照により本明細書の一部とする。 【００４９】 （定義） 本明細書で用いられる用語は、当業者に認識され知られている意味を有するが、便宜上 40 および完全を期すため、特定の用語およびそれらの意味を以下に示す。 【００５０】 用語「約」または「およそ」は、統計的に意味のある値の範囲内を意味する。そのよう な範囲は桁の範囲内、典型的に所与の値または範囲の５０％以内、より典型的には２０％ 以内、より典型的には１０％以内、さらにより典型的には５％以内であることができる。 用語「約」または「およそ」によって包含される許容可能な変動は、研究される特定の系 によって決まり、当業者に容易に認識され得る。 【００５１】 「アジュバント」は、組成物、典型的にはワクチン組成物において非病原性生マイコプ ラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の 50 (13) JP 2011-503086 A 2011.1.27 抗原性を増強する１種または複数の物質からなる組成物を意味する。アジュバントは、抗 原を緩徐に放出する組織デポとして、さらに免疫応答を非特異的に増強するリンパ系活性 化因子としても機能を果たすことができる（Ｈｏｏｄ等、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｓｅｃ ｏｎｄ Ｅｄ．、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ：Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ、 １９８４、ｐ．３８４）。多くの場合、アジュバント不在下での抗原単独による初回ワク チン接種は、液性または細胞性免疫応答を誘発できない。アジュバントには、これに限定 されるものではないが、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、 無機質ゲル、たとえば水酸化アルミニウム、界面活性物質、たとえばリゾレシチン、プル ロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油または炭化水素 エマルション、スカシ貝（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ）ヘモシアニン、および潜在的 10 に有用なヒトアジュバント、たとえばＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イ ソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ− イソグルタミン、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−ア ラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリ ルオキシ）−エチルアミン、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌（ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌ ｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ））、およびコリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂ ａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）が包含される。好ましくは、アジュバントは生物学的 に許容できる。 【００５２】 本明細書に記載の組成物に用いられるアジュバントは、典型的に「生物学的に許容でき 20 るアジュバント」であり、したがって、結果として得られる組成物がｉｎ ｖｉｖｏで付 随する毒性なしに動物に投与できるように、非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモ ニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）と組み合わせて用いること ができる。ＳＰ−油、ＳＬ−ＣＤ、Ｃａｒｂｏｐｏｌ、ならびに１種または複数の不飽和 テルペン炭化水素、たとえばスクアレンまたはスクアランなどの代謝性油、およびＰｌｕ ｒｏｎｉｃ（登録商標）などのポリオキシエチレン−ポリプロピレンブロックコポリマー の混合物からなる群から選択された１種または複数の生物学的に許容できるアジュバント と組み合わせて、非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ ａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含む組成物が本明細書において例示される。 【００５３】 30 非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎ ｅｕｍｏｎｉａｅ）株またはそれに由来する分子は、免疫グロブリン（抗体）またはＴ細 胞抗原受容体などの免疫系の抗原認識分子と特異的に相互作用できるとき、「抗原性」で ある。典型的に抗原分子は、少なくとも約５個、典型的には少なくとも約１０個のアミノ 酸の「エピトープ」を含有するポリペプチド、またはその変異体である。本明細書では「 エピトープ」とも呼ばれるポリペプチドの抗原部分は、抗体もしくはＴ細胞受容体認識に 関して免疫優性である部分であることができ、または免疫化のために抗原部分を担体ポリ ペプチドにコンジュゲートすることによって分子に対する抗体を生成するために用いる部 分であることができる。抗原性である分子は、それ自体が免疫原性である必要はなく、す なわち担体なしに免疫応答を誘発できる必要はない。 40 【００５４】 用語「少なくとも」は以上を意味する。 【００５５】 本明細書では、「バクテリン」は、不活化されており、ある種のアジュバントと組み合 わせて動物に投与したとき、防御免疫を誘発して、疾患または感染に対して防御すること のできる細菌収穫物である。 【００５６】 アクリル酸ポリマーは、典型的にカルボマーである。カルボマーは「Ｃａｒｂｏｐｏｌ 」の商品名で市販され入手可能であり、たとえばそれぞれ参照により本明細書の一部とす る米国特許第２９０９４６２号および第３７９０６６５号に記載されている。 50 (14) JP 2011-503086 A 2011.1.27 【００５７】 用語「担体」は、化合物または組成物と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤 、安定剤、保存剤、および／またはビヒクルを指す。そのような担体は、落花生油、ダイ ズ油、鉱油、およびゴマ油などの石油、動物、植物、または合成起源のものを包含する、 水および油などの滅菌液体であることができる。水または水溶液食塩溶液、たとえばリン 酸緩衝溶液、リンガー溶液、ならびに水性デキストロースおよびグリセロール溶液はしば しば担体として、特に注射溶液用に用いられる。担体または希釈剤は非毒性でなければな らず、抗原／免疫原の生物活性に影響を及ぼしてはならない。湿潤剤または乳化剤、界面 活性剤、およびｐＨ緩衝物質などの他の追加補助物質も本発明の組成物に用いることがで きる。保存剤には、たとえばチメロソールおよび／またはＥＤＴＡを包含することができ 10 る。適切な医薬担体は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓ ｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ、第１８版に記載されている。多種多様な担体 が当分野でよく知られており、特定の担体の選択は十分に当業者の水準の範囲内である。 【００５８】 用語「コロニー形成単位」または「ＣＦＵ」は、所与のサンプル中の複製能力のある生 物体の数を示すために用いられる測定単位である。これはコロニーが細菌の対／クラスタ ーまたは単細胞の複製に由来するという理論に基づくものである。 【００５９】 「免疫学的に有効量」は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ ａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫応答を誘発する非病原性生マイコプラズ 20 マ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の量で ある。「免疫学的に有効量」は、レシピエント動物の種、品種、年齢、大きさ、健康状態 によって決まり、１種または複数の株がマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏ ｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の病原性株であるか、または非病原性株で あるかにかかわらず、その動物のマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａ ｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の１種または複数の株への曝露歴に影響されるこ とになる。本明細書では、非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐ ｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の「免疫学的に有効量」は、適切なアジュバ ントと組み合わせて用いられるとき、非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性を増強し、それによっ 30 て病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕ ｍｏｎｉａｅ）株によるチャレンジに対して防御免疫を提供するのに十分なマイコプラズ マ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の量で ある。一実施形態において、免疫学的有効量は、最少約１×１０３生物体である。一実施 形態において、免疫学的有効量は、約１×１０３コロニー形成単位／ｍｌ（ＣＦＵ／ＭＬ ）から約１×１０１１ＣＦＵ／ＭＬの範囲である。一実施形態において、免疫学的有効量 は、約５×１０７ＣＦＵ／ＭＬである。 【００６０】 本明細書では、用語「免疫原性」は、その非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモ ニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）が液性および／または細胞 40 性免疫応答を誘発できることを意味する。免疫原性株は抗原性でもある。免疫原性組成物 は、動物に投与したとき、液性および／または細胞性免疫応答を誘発する組成物である。 【００６１】 用語「免疫原性組成物」は、その組成物を哺乳動物において免疫応答を誘発するために 用いることのできる、抗原、たとえば微生物を含有する任意の医薬組成物に関する。免疫 応答には、Ｔ細胞応答、Ｂ細胞応答、またはＴ細胞応答およびＢ細胞応答の両方を包含で きる。この組成物は、細胞表面でＭＨＣ分子と結合して抗原を提示することにより哺乳動 物を感作する機能を果たすことができる。さらに、抗原特異的Ｔリンパ球または抗体は、 免疫化宿主の将来の防御を可能にするために生成され得る。「免疫原性組成物」は、細胞 媒介性（Ｔ細胞）免疫応答、もしくは抗体媒介性（Ｂ細胞）免疫応答、または両方を誘発 50 (15) JP 2011-503086 A 2011.1.27 し、微生物による感染に関連する１つまたは複数の症状から動物を防御する可能性がある か、または微生物の感染による死亡から動物を防御する可能性のある、全微生物またはそ れに由来する免疫原性部分を含む生、弱毒化、または死菌／不活化ワクチンを含有するこ とができる。 【００６２】 本明細書では、用語「単離された」は、言及される材料がその天然環境から取り出され ていることを意味する。したがって、単離された生物材料は、細胞成分、すなわちその天 然材料が天然に存在する細胞の成分（たとえば、細胞質または膜成分）の一部または全部 を含まない可能性がある。材料は、それが細胞抽出物または上清に存在する場合、単離さ れている。単離されたタンパク質は、細胞内で結合している他のタンパク質もしくは核酸 10 、または両方と結合していてもよく、または膜結合タンパク質である場合、細胞膜と結合 していてもよい。単離された小器官、細胞、または組織は、生物体が見出される解剖学的 部位から取り出されている。単離された材料は、その必要はないが、精製されていてもよ い。 【００６３】 本明細書では、用語「ＭＨＤＣＥ」は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃ ｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＤＮＡ細胞等価物を示し、所与のサンプ ルに存在するマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎ ｅｕｍｏｎｉａｅ）生物体の概数を求めるために用いられる測定単位として定義される。 【００６４】 20 本明細書では、用語「非経口投与」は、胃腸管を経る手段以外のいくつかの手段による 投与、具体的には静脈内、皮下、筋内、または髄内注射による生物体への物質の導入、な らびに腹腔内注射または局所適用などの他の非経口および非経鼻投与経路を意味する。 【００６５】 用語「参考Ｊ株に対する多型同一性」は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙ ｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の参考Ｊ株に対する非Ｊ株マイコプラ ズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のタ ンパク発現プロファイル間の類似性を指す。多型同一性は、これに限定されるものではな いが、たとえば研究中のマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）微生物の１種または複数のタンパク質の量もしくは大きさ 30 、１種または複数のタンパク質の沈降速度、または１種または複数のタンパク質の物理的 特徴もしくは生化学的特徴の変化を包含する、１種または複数のタンパク質の１つまたは 複数の特徴に基づくことができる。この用語はまた、マイコプラズマ・ハイオニューモニ エ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の１つの非Ｊ株とマイコプラ ズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の参 考Ｊ株の任意の１種または複数のタンパク質をコードするヌクレオチド配列間の類似性も 包含することができ、欠失または置換を包含するこれらの配列の任意の変異を包含する。 ヌクレオチドまたはアミノ酸配列の変化は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙ ｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）生物体の非病原性の保持を可能にする ものである。ヌクレオチドおよびアミノ酸配列の乱れ（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）を観 40 察する多種多様なアッセイが当分野でよく知られている。たとえば、核酸またはアミノ酸 配列の大きさおよび構造は、当業者に知られているノーザン、サザン、ウエスタン、ＳＤ Ｓ−ＰＡＧＥ ＥＬＩＳＡプロファイリング、ＰＣＲ、およびＤＮＡ配列決定プロトコル によって観察される（たとえば、Ｃａｌｕｓ，Ｄ．等、Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｉｃｒ ｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１２０、Ｉｓｓｕｅｓ ３∼４、Ｍａｒｃｈ １０、２００ ７、２８４∼２９１頁；Ｓｃａｒｍａｎ，ＡＬ等、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（１９９７ ）、Ｖｏｌ．１４３：６６３∼６７３参照）。さらに、１本鎖ＤＮＡ高次構造多型解析な どの、ヌクレオチドおよびアミノ酸配列の乱れを観察する他の方法も当分野でよく知られ ている（たとえば、１９９９年９月７日発行の米国特許第５３８２５１０号、および１９ ９５年１月１７日発行の米国特許第５９５２１７０号参照）。 50 (16) JP 2011-503086 A 2011.1.27 【００６６】 本明細書では、用語「精製された」は、非関連材料、すなわちその材料が得られる天然 材料を包含する混入物の存在を低減または除去する条件下で単離された材料を指す。たと えば、精製された細菌またはタンパク質は典型的に、組織培養または卵タンパク質、およ び非特異的病原体などを包含する宿主細胞または培養成分を実質的に含まない。本明細書 では、用語「実質的に含まない」は、材料の分析試験において操作上用いられる。典型的 に、混入物を実質的に含まない精製材料は、少なくとも純度５０％、より典型的には少な くとも純度９０％、さらに典型的には少なくとも純度９９％である。純度は、クロマトグ ラフィ、ゲル電気泳動、免疫学的アッセイ、組成分析、生物学的アッセイ、および当分野 で知られている他の方法によって評価できる。精製方法は、当分野でよく知られている。 10 用語「実質的に純粋」は、当分野で知られている通常の精製技法を用いて達成され得る最 高度の純度を示す。 【００６７】 「参考株」は、信頼できる供給元から得られ、他の未確立または未知培養物との比較を 行うことのできる対照株として用いることのできる微生物、たとえばマイコプラズマ・ハ イオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の株を指す。 本発明において、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の参考株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃ ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得られ、ＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４お よび２７７１５が付与されている非病原性Ｊ株であることができる。本発明において、Ａ 20 ＴＣＣアクセッション番号２５９３４および２７７１５を有する「参考株」は、本発明の 免疫原性組成物を調製するためにも用いられた。本発明の他のいくつかの実施形態におい て、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏ ｎｉａｅ）の参考株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ ｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得ることができ、ＡＴＣＣアクセッション番号２５６１７および ２５０９５が付与されている。 【００６８】 用語「ＳＬ−ＣＤ」は、米国特許第６６１０３１０号および第６１６５９９５号に記載 されているシクロデキストリンアジュバントのファミリーに属するスルホリポ−シクロデ キストリンを指す。典型的に、ＳＬ−ＣＤは、１種または複数の不飽和テルペン炭化水素 30 、たとえばスクアランなどの代謝性油、および好ましくはポリオキシエチレンソルビタン モノオレアートなどの非イオン性界面活性剤との混合物に配合される。 【００６９】 用語「ＳＰ−油」は、１％から３％（ｖ／ｖ）のポリオキシエチレン−ポリオキシプロ ピレンブロックコポリマー、２％から６％（ｖ／ｖ）のスクアラン、０．１％から０．５ ％（ｖ／ｖ）のポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート、および緩衝塩溶液を含む 油エマルションであるアジュバントを指す。 【００７０】 用語「ワクチン」または「ワクチン組成物」は、同じ意味で用いられ、動物において免 疫応答を誘発する少なくとも１種の免疫原性組成物を含む医薬組成物を指す。ワクチンま 40 たはワクチン組成物は、感染による疾患または起こり得る死から動物を防御することがで き、活性成分の免疫活性を増強する１種または複数の追加成分を包含してもしなくてもよ い。ワクチンまたはワクチン組成物は、医薬組成物に典型的なさらなる成分を追加的に含 むことができる。ワクチンまたはワクチン組成物は、ワクチンまたはワクチン組成物に典 型的なさらなる成分を追加的に含むことができ、たとえばアジュバントまたは免疫調整剤 が包含される。ワクチンの免疫原性活性成分は、それらの元の形態、もしくは変性生ワク チンの弱毒化生物体として完全な生きた生物体、または死菌もしくは不活化ワクチンの適 切な方法で不活化された生物体、またはウイルスの１つもしくは複数の免疫原性成分を含 むサブユニットワクチン、当業者に知られている方法で調製された遺伝子操作、変異、ま たはクローンワクチンを含むことができる。ワクチンまたはワクチン組成物は、上記成分 50 (17) JP 2011-503086 A 2011.1.27 の１つ、または２つ以上を同時に含むことができる。 【００７１】 本明細書では、「病原性」は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａ ｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に関連する疾患を引き起こすマイコプラズマ ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株の能力 を指す。病原性は、動物において疾患の進行を観察することによって評価できる。マイコ プラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ） の「病原性」株の一例は、本発明において記載および使用される、マイコプラズマ・ハイ オニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のチャレンジ株 によって例示されるものである。マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａ 10 ｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の他の病原性株は、Ｓｒａｉｎ Ｎｏ．２５６１ ７または２５０９５と称され、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌ ｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能である。用語「非病原性」は、病原性を欠いてい るマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）の株を指す。すなわち、非病原性株、分離株、または構築体は非病原性であり、 疾患を引き起こすことができない。本明細書では、用語「非病原性（ａｖｉｒｕｌｅｎｔ ）」は、用語「非病原性（ｎｏｎ−ｖｉｒｕｌｅｎｔ）」と同じ意味で用いられる。マイ コプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）非病原性生培養Ｊ 株（ＦＣＸ３−Ｌｉｎｅ１、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅ ｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）からＳｔｒａｉｎ Ｎｏ．２７７１５として入手可能である）を 20 用いる組成物が本明細書において例示される。同様にＡＴＣＣから入手可能である別の「 非病原性」株は、Ｓｔｒａｉｎ Ｎｏ．２５９３４と称される。ＡＴＣＣアクセッション 番号２７７１５と称されるＪ株は、ＡＴＣＣカタログに記載のとおり、ＡＴＣＣアクセッ ション番号２５９３４と称される親Ｊ株からクローン化された。 【００７２】 （一般的説明） 本開示は、１種または複数の非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃ ｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、たとえばＪ株（ＦＣＸ３−Ｌｉｎｅ１ 、ＡＴＣＣアクセッション番号２７７１５）など、および１種または複数のアジュバント 、典型的には生物学的に許容できるアジュバントを用いる、免疫原性組成物またはワクチ 30 ン組成物を包含するマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙ ｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）組成物の１回または２回投与レジメンが、病原性マイコプラズ マ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に 関連する疾患に対する防御および／または予防または改善に有効であるという発見に基づ くものである。 【００７３】 一実施形態において、これに限定されるものではないが、そのゲノムが参考Ｊ株の核酸 配列に対して少なくとも約９０％の相同性、または少なくとも約９５％の相同性、または 少なくとも約９９％の相同性を有する核酸配列を含むＪ株を包含する、他のマイコプラズ マ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病 40 原性生菌株の本発明の組成物および方法における使用が企図される。 【００７４】 一実施形態において、これに限定されるものではないが、参考Ｊ株に対して少なくとも 約７０％の多型同一性、または少なくとも約８５％の多型同一性、または少なくとも約９ ５％の多型同一性を有するＪ株を包含する、他のマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株の本発明の組成 物および方法における使用が企図される。 【００７５】 参考Ｊ株は、ＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４または２７７１５と称されるマイ コプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ 50 (18) JP 2011-503086 A 2011.1.27 ）株から選択することができる。 【００７６】 一実施形態において、本発明の組成物および方法に用いられる非病原性生Ｊ株は、ＡＴ ＣＣアクセッション番号２５９３４または２７７１５と称されるＪ株である。 【００７７】 一実施形態において、本発明の組成物および方法に用いられる非病原性生Ｊ株は、ＡＴ ＣＣアクセッション番号２７７１５と称されるＪ株である。 【００７８】 ブタサーコウイルス１型−２型キメラ変性生ワクチン（ｃＰＣＶ１−２）（米国特許出 願公開第２００３／０１７０２７０号および第２００４／０２５３２７０号参照）とさら 10 に組み合わせて、１種または複数の非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ ｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を用いる、ワクチン組成物を包含 する組成物も、病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈ ｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染および／または病原性ブタサーコウイルス感染に関連す る疾患に対する防御および／または予防または改善に有効であることも本明細書において 開示される。 【００７９】 いくつかの実施形態において、本発明の組成物はさらに、ヘモフィルス・パラスイス（ Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｓｕｉｓ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕ ｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏ 20 ｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉ ｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏ ｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サルモネラ・コレラスイス（Ｓａ ｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、エリシペロスリクス・ルシオパシエ（ Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、およびレプトスピラ（ ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）細菌からなる群から選択される、１種または複数の生細菌、バク テリン、および／または１種または複数の精製トキソイドを含む。 【００８０】 いくつかの実施形態において、本発明の組成物はさらに、ブタインフルエンザウイルス （ＳＩＶ）抗原、豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）抗原、ＰＲＲＳ発現ア 30 ライグマポックスウイルスまたは他の抗原、ＰＲＲＳ発現ＴＧＥＶまたは他の抗原、なら びにブタサーコウイルス（ＰＣＶ）抗原からなる群から選択された１種または複数のウイ ルス抗原を含む。 【００８１】 いくつかの実施形態において、本開示は、病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ （Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株１１を含有するＬＩ−３４と 称される肺ホモジネートによる感染に対する防御に関して以下に記載する（Ｊ．Ｃｌｉｎ ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９９ Ｍａｒ；３７（３）：６２０∼７参照）。しかしなが ら、本明細書に開示の組成物は、広範な病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ ｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に関連する疾患またはその疾患 40 に関連する少なくとも１つの症状に対する防御および／または予防または改善に有効であ ろうことが企図される。数多くの病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏ ｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）分離株が当分野で知られており、Ａｍｅｒ ｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、１２３０１ Ｐａｒｋｌ ａｗｎ Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍｄ．２０８５２を包含する様々な供給元か ら入手可能である。これらの病原性株の例には、これに限定されるものではないが、ＡＴ ＣＣアクセッション番号２５０９５、２７７１４、および２５６１７が包含される。 【００８２】 本開示の組成物、特に免疫原性組成物またはワクチン組成物は、当分野で容易に利用可 能である１つまたは複数の方法によって、非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニ 50 (19) JP 2011-503086 A 2011.1.27 エ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の凍結乾燥または新しく収穫 した培養物から調製することができる。ＡＴＣＣ番号２７７１５（ＡＴＣＣ番号２５９３ ４の濾過およびクローン化３回分離株）として入手可能である非病原性生マイコプラズマ ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｊ株（ＦＣＸ３−Ｌｉｎｅ１ ）を含む組成物が本明細書において例示される。 【００８３】 非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎ ｅｕｍｏｎｉａｅ）は、それぞれ全体を参照により本明細書の一部とする米国特許第５３ ３８５４３号および第５５６５２０５号に記載の方法で培養することができる。より詳細 には、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍ 10 ｏｎｉａｅ）は、ＰＰＬＯ（ウシ肺疫菌（Ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ）様生物体） 完全培地（Ｄｉｆｃｏ；Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、 Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）などの培地で増殖させることができる。生物 体の増殖を、色調変化単位（ＣＣＵ）を決定するなどの標準的な技法によってモニターし 、十分に高い力価が得られたときに収穫する。組成物製剤に混入する前に、このストック を通常の方法でさらに濃縮または凍結乾燥することができる。Ｔｈｏｍａｓ等、Ａｇｒｉ −Ｐｒａｃｔｉｃｅ７（５）：２６∼３０に記載の方法などの他の方法も用いることがで きる。 【００８４】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ 20 ｉａｅ）の分離株を増殖させる条件は、培地の正確な組成、および増殖させる特定の分離 株に応じて変化することができる。マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌ ａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）分離株は典型的に、インキュベーション時から 収穫時まで測定して、約４８時間から約１４４時間増殖させる。 【００８５】 製剤化される正確な組成に応じて、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐ ｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、たとえば超遠心分離または限外濾過によ って濃縮することができる。濃縮したマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐ ｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を当分野で知られている方法によって回収す ることができ、生理的に許容できる適切な担体、典型的に、たとえば食塩水、リン酸緩衝 30 溶液（ＰＢＳ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、またはＨＥＰＥＳ緩衝剤を含むＭＥＭなどの 水性培地と混合することができる。次いで、適切なアジュバントとさらに合わせて、体積 当たり体積（ｖ／ｖ）ベースで所望の濃度を提供することができる。組成物はさらに、典 型的には約０．０５％から約０．２０％（ｗ／ｖ）の濃度で、ＥＤＴＡなどの１種または 複数のキレート剤を含むことができる。あるいは、免疫原性組成物またはワクチン組成物 に用いられるマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎ ｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、上記のとおり濃縮し、または凍結乾燥し、体積当たり重量（ｗ ／ｖ）ベースで、所望の濃度で適切なアジュバントに再懸濁することができる。 【００８６】 上記のとおり、免疫原性組成物またはワクチン組成物を包含する、本開示の組成物は一 40 般に、１種または複数のアジュバント、典型的には生物学的に許容できるアジュバントと 組み合わせて、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐ ｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非病原性生菌株を含む。 【００８７】 １回投与の場合、組成物は、約１×１０８から約３×１０１１ＭＨＤＣＥ／ｍｌに相当 する量の非病原性生マイコプラズマ・ニューノモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕ ｎｏｍｏｎｉａｅ）を含有することができる。あるいは、組成物は、約１×１０９から約 ３×１０９ＭＨＤＣＥ／ｍｌに相当する量の非病原性生マイコプラズマ・ニューノモニエ （Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｎｏｍｏｎｉａｅ）を含有することができる。組成物 は、各投与用量が筋内、皮下、または腹腔内投与では動物当たり約１ｍｌから約５ｍｌ、 50 (20) JP 2011-503086 A 2011.1.27 または約２ｍｌとなり、経口または鼻腔内投与では約１から約１０ｍｌ、または約２から 約５ｍｌとなるように製剤化される。 【００８８】 ２回投与の場合、組成物は、典型的に約１×１０８から約３×１０１１ＭＨＤＣＥ／ｍ ｌ、より典型的には約１×１０９から約３×１０９ＭＨＤＣＥ／ｍｌの非病原性生マイコ プラズマ・ニューノモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｎｏｍｏｎｉａｅ）を含有 する。２回投与のいくつかの実施形態において、組成物は、約１０３ＣＦＵ／ＭＬから１ ０１１ＣＦＵ／ＭＬを含有する量の非病原性生マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏ ｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含有することができる。組成物は、各投与用量 が筋内、皮下、または腹腔内投与では動物当たり約１ｍｌから約５ｍｌ、好ましくは約２ 10 ｍｌとなり、経口または鼻腔内投与では約１から約１０ｍｌ、典型的には約２から約５ｍ ｌとなるように製剤化される。 【００８９】 本開示の免疫原性組成物およびワクチン組成物に用いるアジュバント混合物は、細胞媒 介性および／または局所（分泌型ＩｇＡ）免疫応答を刺激することによって免疫応答を増 強する。生物学的に許容できるアジュバントは、たとえば、ＳＰ−油、ＳＬ−ＣＤ、アク リル酸ポリマー（Ｃａｒｂｏｐｏｌなど）、ならびに１種または複数の不飽和テルペン炭 化水素、たとえばスクアレンまたはスクアランなどの代謝性油、およびＰｌｕｒｏｎｉｃ （登録商標）などのポリオキシエチレン−ポリプロピレンブロックコポリマーの混合物か らなる群から選択される１種または複数のアジュバントであることができる。アジュバン 20 トはさらに、ＩＬ−１２およびＩＬ−１８などのサイトカイン、水酸化アルミニウム、エ チレンマレイン酸コポリマー、ＤＥＡＥデキストラン、およびミコバクテリア細胞壁由来 アジュバントなどから選択することができる。 【００９０】 本明細書に記載の組成物に用いられるアジュバントの濃度は、アジュバントの性質によ って決まることになる。アジュバントは典型的に、最終濃度約１∼５０％、より典型的に は最終濃度約１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％で本明細書に記載の組成物 に存在する。アジュバントの抗原の濃度は、体積当たり重量ベース（ｗ／ｖ）、または体 積当たり体積ベース（ｖ／ｖ）で調製することができる。たとえば、本発明の組成物に送 達される抗原は、凍結乾燥形態で調製し、その後アジュバントで直接再構成して、体積当 30 たり重量ベースで指定の濃度を生じることができる。あるいは、抗原は最初に適切な希釈 剤（たとえば、緩衝剤）で再構成し、次いで、上記のとおり体積当たり体積ベースで抗原 およびアジュバント両方の最終所望濃度が生じるのに十分な量のアジュバントをそれに添 加する。 【００９１】 いくつかの実施形態において、アジュバントは、単一組成物として抗原／免疫原と共に 投与することができ、または抗原／免疫原の投与前、同時、もしくは投与後に投与できる 。 【００９２】 アジュバントの選択は、アジュバントを含有する抗原／免疫原の安定性、投与経路、投 40 与スケジュール、ワクチン接種される種に対するアジュバントの有効性によって決まり、 さらに関連する規制機関によって動物またはヒトでの使用が認可されたものでなければな らない。 【００９３】 ＳＰ−油を含む組成物では、アジュバントは典型的に、約１％から約２５％（ｖ／ｖ） 、より典型的には約５％から約１５％（ｖ／ｖ）、たとえば約１０％（ｖ／ｖ）などで存 在し、アクリル酸ポリマー、ならびに１種または複数のテルペン炭化水素およびポリオキ シエチレン−ポリプロピレンブロックコポリマーを含む代謝性油の混合物を含む組成物で は、アクリル酸ポリマーと代謝性油／ポリオキシエチレン−ポリプロピレンブロックコポ リマー混合物の比は典型的に、約１：２５から約１：５０の比である。代謝性油、ポリオ 50 (21) JP 2011-503086 A 2011.1.27 キシエチレン−ポリプロピレンブロックコポリマー、およびアクリル酸ポリマーは、水中 油型エマルションの形態で用いることができ、ここでアクリル酸ポリマーは典型的に約０ ．５ｇ／ｌから約１０ｇ／ｌの濃度で用いられ、代謝性油は典型的に約２ｍｌ／ｌから約 ６ｍｌ／ｌの濃度で用いられ、ポリオキシエチレン−プロピレンブロックコポリマーは典 型的に約１ｍｌ／ｌから約３ｍｌ／ｌの濃度で用いられる。 【００９４】 代表的な適切なアジュバント混合物には、これに限定されるものではないが、１種また は複数のアクリル酸ポリマーと、代謝性油、たとえば不飽和テルペン炭水化物、またはそ の水素添加生成物、好ましくはスクアラン（２，３，１０，１５，１９，２３−ヘキサメ チルテトラコサン）またはスクアレン、およびポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレ 10 ンブロックコポリマーの混合物との混合物が包含される。そのようなアクリル酸ポリマー は、ホモポリマーまたはコポリマーであることができる。 【００９５】 アクリル酸ポリマーは、典型的にカルボマーである。カルボマーはＣａｒｂｏｐｏｌの 商品名で市販され入手可能であり、たとえばそれぞれ参照により本明細書の一部とする米 国特許第２９０９４６２号および第３７９０６６５号に記載されている。 【００９６】 ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマーは、固体および液体成 分の懸濁を助ける界面活性剤、典型的には液体界面活性剤である。界面活性剤は、商品名 Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）でポリマーとして市販され入手可能である。界面活性剤ポ 20 ロキサマー４０１は、商品名Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｌ１２１で市販され入手可能 である。 【００９７】 アジュバント混合物は、水性媒質中のエマルションとして製剤化された代謝性油、アク リル酸ポリマー、およびポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー を含むことができる。いくつかの実施形態において、アジュバント混合物は、約５０ｍｌ ／ｌから約１００ｍｌ／ｌの量で存在することのできる、スクアランおよびＰｌｕｒｏｎ ｉｃ（登録商標）Ｌ１２１（ポロキサマー４０１）の混合物などの代謝性油およびポリオ キシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマーを包含することができ、カルボ キシメチレンポリマーはＣａｒｂｏｐｏｌ９３４Ｐ（Ｃａｒｂａｍｅｒ９３４Ｐ）である 30 ことができ、約２ｍｌ／ｌの量で存在できる。 【００９８】 好ましいアクリル酸ポリマーは、Ｂ．Ｆ ＧｏｏｄｒｉｃｈからＣａｒｂｏｐｏｌ９３ ４Ｐ ＮＦおよび９４１ ＮＦとして市販されているものであり、これはポリアリルスク ロースで架橋されたアクリル酸のポリマーであり、化学式（ＣＨ２ＣＨＯＯＯＨ）ｎを有 する。これらのポリマーは、水性担体と適切に製剤化される水性ゲルを形成する。ポリオ キシエチレン−ポリプロピレンブロックコポリマーは、ＢＡＳＦからＰｌｕｒｏｎｉｃ（ 登録商標）Ｌ１２１、Ｌ６１、Ｌ８１、またはＬ１０１として市販されている非イオン性 界面活性剤であることができる。 【００９９】 40 いくつかの実施形態において、本明細書に開示の組成物は、さらに組み合わせて、１種 または複数の他の生細菌、バクテリン、トキソイド、および／またはウイルス抗原を用い ることができる。したがって、これらの実施形態のいくつかの態様において、アジュバン ト添加非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｅ）組成物は、（ａ）１種または複数の生細菌、たとえばヘモフィルス・パラスイス（Ｈ ａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｓｕｉｓ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒ ｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ ｃｕｓ ｓｕｉｓ）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌ ｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒ ｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サルモネラ・コレラスイス（Ｓａｌ 50 (22) JP 2011-503086 A 2011.1.27 ｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、エリシペロスリクス・ルシオパシエ（Ｅ ｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、およびレプトスピラ（ｌ ｅｐｔｏｓｐｉｒａ）細菌など、（ｂ）１種または複数のバクテリン、（ｃ）たとえばヘ モフィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｓｕｉｓ）、パスツレラ・ ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッカス・ス イス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）、アクチノバチルス・プルロニューモニ エ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ボルデテラ ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サルモ ネラ・コレラスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、エリシペロ スリクス・ルシオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ 10 ）、およびレプトスピラ（ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）細菌などの１種または複数の病原体由 来の１種または複数の精製トキソイド、ならびに／または（ｄ）ウイルスがブタインフル エンザウイルス（ＳＩＶ；ＳＩＶ株Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、およびＨ３Ｎ２など）、豚繁殖 ・呼吸障害症候群ウイルス（ＰＲＲＳＶ）、ＰＲＲＳ発現アライグマポックスウイルスお よび／または他の抗原、ＰＲＲＳ発現ＴＧＥＶおよび／または他の抗原、およびブタサー コウイルス（ＰＣＶ）からなる群から選択される１種または複数のウイルス抗原とさらに 組み合わせて、免疫量の非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌ ａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、および１種または複数の生物学的に許容でき るアジュバントを含むことができる。ブタサーコウイルス１型−２型キメラ変性生ワクチ ン（ｃＰＣＶ１−２）とさらに組み合わせて１種または複数の非病原性生マイコプラズマ 20 ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を用い る、ワクチン組成物を包含する組成物が本明細書において例示される（米国特許出願公開 第２００３／０１７０２７０号および第２００４／０２５３２７０号参照）。 【０１００】 これらの実施形態または別の実施形態において、ワクチン組成物を包含する組成物は、 たとえばチメロソールおよび／またはＥＤＴＡなどの保存剤を追加的にまたは場合により 包含することができる。それぞれ全体を参照により本明細書の一部とする米国特許出願公 開第２００２／０１３１９８０号および第２００３／００１７１７１号も参照されたい。 【０１０１】 本明細書に記載の組成物に用いられるそのような他の生細菌、バクテリン、トキソイド 30 、および／またはウイルス抗原の濃度は、バクテリン、トキソイド、および／またはウイ ルス抗原の性質によって決まることになり、典型的にミリリットル当たり約０．５×１０ ５ から０．５×１０１０の最終濃度で本明細書に記載の組成物に存在する。あるいは、細 菌は、ミリリットル当たり約０．５×１０６から０．５×１０９、またはミリリットル当 たり約０．５×１０７から０．５×１０８の最終濃度で存在する。 【０１０２】 本開示の組成物は、本明細書に記載のアジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ハ イオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）組成物を投与 することによって、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙ ｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に起因する疾患に対して動物を防御する、および／または動物 40 集団の中でそのような疾患の発生を予防もしくは改善する方法において有用であろう。本 明細書に記載の組成物はまた、動物でマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐ ｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する細胞媒介性および／または液性免疫 応答などの免疫応答を増強する方法において有利に用いることができる。そのような方法 は、１回または２回投与で、１種または複数のアジュバント添加非病原性生マイコプラズ マ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を含 む組成物を動物、典型的にはブタに投与するステップを含む。企図される正確な適用例に 応じて、組成物は、筋内、皮下、経口、エアロゾルで、または鼻腔内に投与することがで きる。 【０１０３】 50 (23) JP 2011-503086 A 2011.1.27 本開示の方法によれば、望ましい投与レジメンは、１回または複数回の所望のワクチン 組成物をブタに投与することを含む。典型的には、２回投与で動物に投与する場合、それ らの投与は、約１週間隔から約４週間隔、より典型的には約２週間隔から約３週間隔で投 与される。 【実施例】 【０１０４】 本開示は、以下の非限定的な実施例を参照することにより、よりよく理解されるであろ う。 【０１０５】 （実施例１） 10 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）非病原性アジ ュバント添加生ワクチンの調製 この実施例は、本開示による代表的なアジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ハ イオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）組成物の調製を開示する。 【０１０６】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）は、多くの容易に利用可能な供給元から得ることができる。本明細書に記載の一 実施形態において、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉ ａｅ）非病原性生培養Ｊ株（ＦＣＸ３−Ｌｉｎｅ１）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）からＡＴ 20 ＣＣ Ｓｔｒａｉｎ Ｎｏ．２７７１５として得た。マイコプラズマ・ハイオニューモニ エ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の他の任意の非病原性株を、組成物の調製に用い ることができ、たとえばＡＴＣＣアクセッション番号２５９３４と称される親Ｊ株などで ある。他のいくつかの実施形態において、当業者に知られている手順を用いてｉｎ ｖｉ ｔｒｏ試験またはｉｎ ｖｉｖｏ試験によって求められるように、培養物が非病原性であ ると確立されるまで、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕ ｍｏｎｉａｅ）の任意の病原性生菌株を調節、弱毒化、または変異させてよいことが想定 される。ＡＴＣＣ２５９３４Ｊ株の全ゲノム配列はＶａｓｃｏｎｃｅｌｏｓ等（Ｊ．Ｂａ ｃｔｅｒｉｏｌ．（２００５）、１８７（１６）：５５６８∼５５７７）によって公表さ れており、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＥ０１７２４３が付与されている。ＡＴ 30 ＣＣ株２５９３４に関連するいくつかの配列はＰｕｂＭｅｄに見出すことができ、Ｇｅｎ Ｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ７３７０１２（１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子）、ＡＹ ５１２９０５（アドヘシン遺伝子、ＡＦ０１３７１４（プロリポタンパク質ｐ６５遺伝子 ）、Ｕ０２５３８（２３Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子）、およびＵ０２５３７（多剤耐性タンパク 質ホモログ遺伝子）を有する。 【０１０７】 殺菌アッセイのために、生理食塩水２０ｍｌで再水和したマイコプラズマ・ハイオニュ ーモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）培養物の１つの凍結乾燥バイアルから各ワ クチン組成物を調製した。ワクチン組成物は、再水和培養物５ｍｌ、および最終体積１０ ｍｌで指定のアジュバント濃度を得るのに十分なアジュバントの組合せを包含した。再水 和培養物５ｍｌと生理食塩水５ｍｌを合わせることによって、対照組成物も調製した。す べての組成物を、サンプル採取に先立って、５分間混合した。混合後５分（０時間）、３ 時間、および７時間の時点ですべての組成物からサンプルを採取した。各サンプル採取時 点でコロニー形成単位（ＣＦＵ）によって、各ワクチンの生存能力を求めた（表１参照） 。 【０１０８】 40 (24) JP 2011-503086 A 2011.1.27 【表１】 10 【０１０９】 ０時間のすべての対照生存能力を平均することによって、ストック培養物の平均生存能 力、平均９．０９×１０７ＣＦＵ／ｍｌを求めた。比較として、ストック培養物の最確数 20 ８ （ＭＰＮ）を求め、１．８５×１０ ＭＰＮ／ｍｌを得た。ワクチン混合とワクチン接種 には典型的に３時間未満かかる。したがって、アジュバントの殺菌効果を考察するとき、 ３時間の時点がもっとも重要である。対照と比較して、３時間サンプル採取時点での５％ および１０％のＳＰ−油の傾向は、それぞれ２倍差および４倍差である。 【０１１０】 最終濃度１０％（ｖ／ｖ）のＳＰ−油を含有する希釈剤で凍結乾燥培養物のバイアルを 再水和することによって、ワクチンＡを調製した。プラセボワクチンは滅菌生理食塩水で あった。 【０１１１】 （実施例２） 30 ブタにおけるアジュバント添加マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅ ｕｍｏｎｉａｅ）非病原性生ワクチンのｉｎ ｖｉｖｏ有効性 この実施例は、代表的なアジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモ ニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン組成物のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を実証 する。 【０１１２】 ４から６週齢の合計３０頭のブタをＣｈａｒｌｅｓ Ｃｉｔｙ、ＩｏｗａのＦｏｒｔ Ｄｏｄｇｅ Ａｎｉｍａｌ ＨｅａｌｔｈのＳＰＦの群れから得た。抗生物質および成長 促進剤を含まない飼料を用いて、水と食物を自由に摂取させ、ブタを維持した。ワクチン 組成物および対照組成物を投与する動物を別の部屋に収容し、ワクチン接種、モニター、 およびチャレンジ期間、すべてのブタを同様の条件下で維持した。 【０１１３】 ３０頭のブタを無作為に次の３群に割り当てた。１群はワクチン組成物を投与され、１ 群はプラセボを投与され、１群は環境対照とした。ブタは表２に示すとおりにグループ分 けした。 【０１１４】 40 (25) JP 2011-503086 A 2011.1.27 【表２】 10 【０１１５】 適切なワクチン２ｍｌ用量を用いて、筋内注射によって４から６週齢のブタをワクチン 接種した。第１群はワクチンＡを投与し、第２群はプラセボを投与した。第３群のブタは ワクチン接種およびチャレンジを行わず、環境対照とした。第１群のブタは、２週間の間 隔で２回ワクチン接種した。第２回ワクチン接種の２週間後、第１群および第２群のすべ てのブタを、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ） 株１１の病原性株を含有する肺ホモジネート（ＬＩ−３４）でチャレンジした（Ｊ．Ｃｌ ｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９９ Ｍａｒ；３７（３）：６２０∼７）。チャレンジ 20 の４週間後、第１∼３群のすべてのブタを剖検し、肺病変を評価した。 【０１１６】 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）チャレンジ株 の肺ホモジネート（ＬＩ−３４）の調製 交雑種ブタ７頭をＳｐｒｉｎｇ Ｐｒａｉｒｉｅ Ｃｏｌｏｎｙ Ｆａｒｍｓ（Ｇｅｎ ｅｔｉｐｏｒｋ）から入手し、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅ ｕｍｏｎｉａｅ）株１１の１０％粗肺ホモジネート（ＬＩ３１）の１：３０希釈１０ｍｌ を気管内接種した。ＬＩ３１粗肺ホモジネートは、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ （Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含有する肺ホモジネートを、特定病原体を持たな いブタに継代接種し、肺炎を生じた肺を疾患の早中期で収穫することによって生成した。 30 肺ホモジネートは必要になるまで−７０℃で保管した。 【０１１７】 到着時および剖検時にすべてのブタから血清を集め、ＴＧＥ（ＰＲＣＶ）、ＳＷ、およ びＰＲＶに対する抗体の証拠に関してＩＳＵ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｉａｇｎｏｓｔ ｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＩＳＵ−ＶＤＬ）で評価した。さらに、ＰＲＲＳＶおよび マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗体に関して ＥＬＩＳＡを行い、すべてのサンプルが上記のすべての呼吸器病原体に陰性であった。 【０１１８】 すべてのブタを剖検した。放血に先立って、ペントバルビタールを用いて、ブタの深麻 酔を誘導した。腹側胸壁を開き、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎ 40 ｅｕｍｏｎｉａｅ）に特有の肺炎病変領域を無菌的に摘出し、個別に滅菌容器に入れた。 【０１１９】 それぞれの肺の少量を摩砕し、血液寒天プレート、ビーフハートインフュージョン培地 、およびＦｒｉｉｓ培地で純度を確認した。Ｆｒｉｉｓ培地で管希釈を行い、マイコプラ ズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を失効（ｔｉｔｒａｔｅ ｏｕｔ）させた。細菌学検査およびマイコプラズマ単離の結果が分かるまで、残存する 肺切片を５０ｍｌ遠心分離管において−７０℃で凍結させた。ブタ７頭のうち３頭の肺葉 を用いて、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）肺 接種物を生成した。 【０１２０】 50 (26) JP 2011-503086 A 2011.1.27 肺葉塊をブタ番号３２９、３３１、および３３２から解凍し、抗生物質を含有しないＦ ｒｉｉｓ培地に摩砕した。肺接種物の純度を、ビーフハートインフュージョン、血液寒天 、およびＦｒｉｉｓ培地で培養することによって確認した。環境不純物と一致するミクロ コッカスのみが１つのプレートで見出された。肺接種物をマイコプラズマ・ハイオニュー モニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）レベルに関して力価測定し、およそ１０７Ｃ ＣＵ／ｍｌを含有することが見出された。ＳＮ、ＥＭＳ、エンテロウイルス、ＨＥＶ、Ｐ ＲＣＶ、ＰＲＲＳＶ、仮性狂犬病ウイルス（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ）、ＴＧＥ、パル ボウイルス、およびロタウイルスに関するウイルス単離アッセイのために、アリコートを ＩＳＵ−ＶＤＬに提出した。すべてのアッセイの結果は陰性であった。摩砕肺接種物（標 識ＬＩ３４）の最終体積は、肺組織１７８．１ｇから１７８０ｍｌであった。これを１０ 10 ０×５ｍｌおよび１１０×１０ｍｌ体積にアリコートした。 【０１２１】 試験の第２相では、最低８０％のブタで平均８％の肺炎の肺病変を誘発するのに必要と される肺接種物の濃度を求めるために、ブタ９頭を用いた。すべてのブタを、前述のとお り、ＬＩ３４マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ） 株１１で気管内にチャレンジした。チャレンジ希釈液は、１：３０、１：１００、および １：５００を包含した。 【０１２２】 ブタを剖検した。放血に先立って、ペントバルビタールを用いて、深麻酔を誘導した。 肺を摘出し、標準的な肺ダイヤフラムで肺病変をスケッチした。すべてのブタから血清を 20 集め、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対す る抗体に関してＥＬＩＳＡでアッセイした。すべてのブタはマイコプラズマ・ハイオニュ ーモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に関して低い陽性であるか、血清反応陰性 であり、到着前にマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｅ）に曝露されていないことを示唆した。すべてのブタから気管スワブを無菌的に集めた 。パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）およびヘモ フィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｓｕｉｓ）がそれぞれ４頭お よび３頭のブタから単離された。マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎ ｅｕｍｏｎｉａｅ）はチャレンジしたすべてのブタから単離された。肺のスケッチをＺｅ ｌｓｓ画像解析システムで評価して、肺炎肺病変率を求めた。 30 【０１２３】 （結論） ブタのチャレンジは好結果であり、１：１００希釈が用いるのに最適な希釈であろう。 誘発された肺炎の平均の率は１０．１７±６．６であり、これは通常より高いが、ブタに 存在するパスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）およ び／またはパラスイス（ｐａｒａｓｕｉｓ）に起因する可能性がある。さらに、チャレン ジ接種物を接種したブタの１００％が著しい肺病変を有した。全体として、これらの結果 は、他の病原体が存在する場合、肺炎が増加するという点において、本出願人等がマイコ プラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の試験で認める結果 にかなり特有である。これは病原体と免疫系の相互作用によるものである可能性がある。 40 本出願人等は、実験的チャレンジ実験に用いるためにマイコプラズマ・ハイオニューモニ エ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）肺接種物１６００ｍｌを生成した。この接種物は 、１：１００希釈で気管内に用いたとき、最低８０％の接種ブタで少なくとも８％または それ以上の肺炎肺病変を生じる。 【０１２４】 ワクチン接種日前にワクチンを力価測定し、殺菌アッセイを行って、用いるのに適切な アジュバント系を求めた（実施例１参照）。これらのデータから、さらなる試験用に１０ ％ＳＰ−油アジュバントを選択した。ストック培養物のバイアル当たり平均生存能力は３ ．６４×１０９ＣＦＵ／ボトルであった。 【０１２５】 50 (27) JP 2011-503086 A 2011.1.27 第１回投与当日、ワクチン組成物を次のとおり調製した。ワクチンＡ−３バイアルそれ ぞれの非病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）凍結乾燥培養物を１０％ＳＰ−油希釈液１０ｍｌで再水和した。それぞれの希釈の種類 に関して、３バイアルのワクチン組成物をプールし、撹拌棒を備えた撹拌プレートで２０ 分間混合した。プラセボは投与用滅菌ボトルにアリコートした生理食塩水であった。組成 物は２時間のワクチン接種過程中、氷上に保持した。 【０１２６】 第２回投与当日、ワクチン組成物を次のとおり調製した。ワクチンＡ−３バイアルそれ ぞれの非病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ）凍結乾燥培養物を１０％ＳＰ−油希釈液１０ｍｌで再水和した。それぞれの希釈の種類 10 に関して、３バイアルの再水和培養物をプールし、撹拌棒を備えた撹拌プレートで２０分 間混合した。プラセボは投与用滅菌ボトルにアリコートした生理食塩水であった。組成物 は２時間のワクチン接種過程中、氷上に保持した。 【０１２７】 各組成物中の生存マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉ ａｅ）の濃度を投与前および投与後に求めた。コロニー形成単位（ＣＦＵ／ｍｌ）を求め ることによって、生存能力を評価した。凍結乾燥ストック培養物のバイアルを生理食塩水 １０ｍｌで再水和し、２０分間混合し、生存能力アッセイの対照とした。第１の対照の生 存能力は、試験ワクチンの生存能力より低かったため、第２回投与時は、２つのバイアル を再水和し、プールして、対照とした（試験ワクチン生存能力および対照生存能力に関し 20 ては表３を参照のこと）。 【０１２８】 【表３】 30 【０１２９】 各投与の２日前から開始して、すべてのブタを体温および臨床症状に関して毎日観察し 、各投与後７日間継続した。ブタを、これに限定されるものではないが、咳、くしゃみ、 鼻汁、減退（ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）、食欲不振、および呼吸困難を包含する臨床症状に 関して観察した。 【０１３０】 40 第２回投与の１４日後、第１群のブタをマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈ ｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）病原性株で経気管チャレンジした。 【０１３１】 チャレンジ当日、病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍ ｏｎｉａｅ）チャレンジストックの凍結（−７０℃）肺ホモジネート（ＬＩ−３４）を温 水下で急速に解凍し、希釈した（１：１００希釈）。キシラジン（Ｘｙｌａｚｉｎｅ）５ ０ｍｇ／ｍｌ、ケタミン（Ｋｅｔａｍｉｎｅ）５０ｍｇ／ｍｌ、およびテラゾール（Ｔｅ ｌａｚｏｌ）１００ｍｇ／ｍｌからなるＸｙｌａｚｉｎｅ−Ｋｅｔａｍｉｎｅ−Ｔｅｌａ ｚｏｌ（商標）混合物で、ブタを鎮静させた。それぞれのブタにチャレンジ材料１０ｍｌ を経気管投与した。確実に針が配置されるように、チャレンジ材料の投与前に、空気を注 50 (28) JP 2011-503086 A 2011.1.27 射器に吸引した。チャレンジ後、臨床症状に関して、すべてのブタを毎日観察した。 【０１３２】 第０日、１４日、２８日、および５６日にブタを血清用に採血した。マイコプラズマ・ ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）チャレンジに対するブタの血清 学的応答をＥＬＩＳＡで求めた。チャレンジの４週間後、第１∼３群のすべてのブタを安 楽死させ、肺を摘出した。試験群は盲検化し、総肺病変のスコアを取った。異型マイコプ ラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）病変を、その後の組織 病理学的評価のためにホルマリン固定した。罹患肺のスワブサンプルを細菌単離用に集め た。 【０１３３】 10 第１群のブタの平均肺病変スコア（５．９％）は、プラセボ群（１４．８％）より約５ ０％低かった。統計的分析を同腹（ｌｉｔｔｅｒ）に関して調整したとき、１群の緩和率 （ｍｉｔｉｇａｔｅｄ ｆｒａｃｔｉｏｎ）は対照と比較したとき、肺病変の重症度が６ ９．２％低減した。これらのデータを表４に要約する。すべてのブタは第１回投与当日に 血清反応陰性であり、ブタはマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕ ｍｏｎｉａｅ）感染に感受性であることを示した。ＳＰ−油群のブタ１頭を除いて、ブタ は第１回ワクチン接種後にセロコンバージョンしなかった。ＳＰ−油アジュバント添加ワ クチン組成物を投与されたすべてのブタは、第２回注射後、抗体反応を生じた。血清学的 応答は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対 する免疫応答が誘発されたことを実証している（血清検査の結果に関しては表９を参照の 20 こと）。 【０１３４】 【表４】 30 【０１３５】 ワクチンがマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ） に有効とみなされるためには、データの統計的分析は肺病変の低減に関して緩和率（＜５ ０％信頼下限値＞３０％）の基準を満たさなければならない。全体として、これらのデー タは、アジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐ 40 ｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を、ｉｎ ｖｉｖｏで動物に投与したとき、防御免疫応答を誘発す るために有利に用いることができることを実証している。 【０１３６】 本発明を様々な実施形態においてそれぞれ述べたが、上記の説明に示し、以下の請求の 範囲でさらに具体化されるとおり、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、 当業者によってある種の修正が加えられ実行できることが予期される。本開示は本明細書 に記載した特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、上記の説明お よび添付の図面から、本明細書に記載したものに加えて、本発明の様々な変更が当業者に は明らかとなるであろう。そのような変更は添付の請求の範囲に含まれることが意図され る。すべての値は概数であり、説明のために提供されるものであることがさらに理解され 50 (29) JP 2011-503086 A 2011.1.27 る。本明細書に言及されるすべての特許および特許出願は、それらの全体を参照により本 明細書の一部とする。 【０１３７】 （実施例３） マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉ ａｅ）非病原性生菌株−ブタサーコウイルス１型−２型キメラ変性の生のマイコプラズマ ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）画分の予 備免疫原性試験 ３∼４週齢のブタにおける混合ワクチン この実施例は、３∼４週齢のブタに筋内（ＩＭ）または鼻腔内（ＩＮ）投与するときの 10 、アジュバント添加非病原性生マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓ ｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｊ（ＦＣＸ−Ｌｉｎｅ１）株およびブタサーコウイ ルス（ＰＣＶ）１型−２型キメラ生ワクチン（ｃＰＣＶ１−２、米国特許第７２７９１６ ６号および第７２７６３５３号参照）を含む混合ワクチンの有効性を開示する。この混合 ワクチン（ＰＣＶ／ＭＨ）は、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅ ｕｍｏｎｉａｅ）およびブタサーコウイルスに起因する疾患の予防および／または重症度 の軽減を助けるものとして、健常なブタのワクチン接種に用いるのに適している。 【０１３８】 標的とする試験ワクチンは、約４．０Ｌｏｇ１０ＦＡＩＤ５０／投与のｃＰＣＶ１−２ 変性生ウイルス、および４×１０８ＣＦＵ／投与のマイコプラズマ・ハイオニューモニエ 20 （Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｊ株を含有するべきである（ＦＡＩＤ法に関しては Ｋｉｎｇ等、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎ ｄ Ｖｅｔ．Ｓｃｉｅｎｃｅ、２９：８５∼８９（１９６５）および米国特許第４８２４ ７８５号を参照のこと）。ワクチンは、最終濃度１０％（ｖ／ｖ）のＳＰ−油を含有する ようにアジュバント添加した。プラセボワクチンは滅菌生理食塩水であった。 【０１３９】 この試験には合計６６頭の３∼４週齢のブタを用いた。１６頭のブタは、ＰＣＶ／ＭＨ 生ワクチン２ｍｌを１回筋内投与し、チャレンジした（第１群）。１５頭のブタは、ＰＣ Ｖ／ＭＨ生ワクチン２ｍｌを２回（２週間隔）筋内投与し、チャレンジした（第２群）。 １５頭のブタは、ＰＣＶ／ＭＨ生ワクチン２ｍｌ（１ｍｌ／鼻孔）を２回（２週間隔）鼻 30 腔内投与し、チャレンジした（第３群）。１５頭のブタは、ＰＣＶ／ＭＨ生ワクチンを投 与せず、チャレンジした（第４群）。さらに、５頭のブタは、環境対照とした（第５群） 。 【０１４０】 本明細書に開示の試験に用いたワクチンは、ＭＨ凍結乾燥生抗原（ロット番号１７４４ −５６）およびＰＣＶ（ロットＣ１０８−５６）生ワクチンを含有する希釈液の組合せで あった。ワクチン接種当日、凍結乾燥生ＭＨケークを、ＰＣＶ生ウイルスを含有する希釈 液（１０％ＳＰ油でアジュバント添加、４．０Ｌｏｇ１０ＦＡＩＤ５０／ｍｌ）で再水和 した。最終ワクチンにはロット番号２３１５−３０を付与した。ＭＨ画分の生存能力をワ クチン接種前および接種後に求め、それぞれ３．１８×１０８ＣＦＵ／ｍＬ（前）および 40 ８ １．６５×１０ ＣＦＵ／ｍＬ（後）であった。ワクチン接種前および接種後のワクチン のＰＣＶ力価は、それぞれ４．０９Ｌｏｇ１０ＦＡＩＤ５０および３．７Ｌｏｇ１０ＦＡ ＩＤ５０であった。第２回ワクチン接種用のワクチンを上記のとおり調製し、ロット番号 ２３１５−３２を付与した。ＭＨ画分の生存能力は、ワクチン接種前および接種後それぞ れ１．２４×１０８ＣＦＵ／ｍＬおよび１．５×１０８ＣＦＵ／ｍＬであった。ＰＣＶ画 分の生存能力は、それぞれ４．３６Ｌｏｇ１０ＦＡＩＤ５０および３．８３Ｌｏｇ１０Ｆ ＡＩＤ５０であった。 【０１４１】 ワクチンの有害反応に関して、ワクチン接種後７日間、ブタを観察した。ワクチン接種 後観察期間中、ＭＨまたはＰＣＶに関連しない原因のため３頭のブタが死亡した。ワクチ 50 (30) JP 2011-503086 A 2011.1.27 ン接種後期間の臨床的観察の概要を表５に示す。 【０１４２】 【表５】 10 20 30 40 【０１４３】 第１∼４群のすべてのブタを、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎ ｅｕｍｏｎｉａｅ）の病原性株（病原性ＭＨ（ＬＩ−３４）を含有するブタ肺ホモジネー ト）でチャレンジした。第１群のブタは、第１回ワクチン接種の４週間後にチャレンジし 50 (31) JP 2011-503086 A 2011.1.27 た。第２∼４群のブタは、第２回ワクチン接種の２週間後にチャレンジした。チャレンジ の４週間後、第１∼５群のすべてのブタを剖検し、肺病変を評価した。 【０１４４】 ワクチン接種日前にワクチンを力価測定した。ワクチン接種当日、非病原性マイコプラ ズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の凍結乾燥培養物を再水 和した。ワクチン中のマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎ ｉａｅ）生物体の濃度は、約２×１０８ＣＦＵ／ｍｌであった。ワクチンのサンプルを取 り置き、ワクチン接種前および接種後に生存能力アッセイを行って、実際のＣＦＵ／ｍｌ を確認した。ワクチン接種過程中、ワクチンは氷上に保持した。 【０１４５】 10 各ワクチン接種の２日前から開始し、各ワクチン接種後７日間継続して、すべてのブタ を体温および臨床徴候に関して毎日観察した。ブタを、これに限定されるものではないが 、咳、くしゃみ、鼻汁、減退、食欲不振、および呼吸困難を包含する臨床症状に関して観 察した。第２回ワクチン接種の１４日後、第１∼４群のブタをマイコプラズマ・ハイオニ ューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）病原性株で経気管チャレンジした。 【０１４６】 チャレンジ当日、病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍ ｏｎｉａｅ）チャレンジストックの凍結（−７０℃）肺ホモジネート（ＬＩ−３４）を温 水下で急速に解凍し、滅菌マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍ ｏｎｉａｅ）増殖培地を用いて希釈した（１：１００希釈）。キシラジン（Ｘｙｌａｚｉ 20 ｎｅ）５０ｍｇ／ｍｌ、ケタミン（Ｋｅｔａｍｉｎｅ）５０ｍｇ／ｍｌ、およびテラゾー ル（Ｔｅｌａｚｏｌ）１００ｍｇ／ｍｌを含むＸｙｌａｚｉｎｅ−Ｋｅｔａｍｉｎｅ−Ｔ ｅｌａｚｏｌ（商標）混合物で、ブタを鎮静させた。それぞれのブタにチャレンジ材料１ ０ｍｌを経気管投与した。確実に針が配置されるように、チャレンジ材料の投与前に、空 気を注射器に吸引した。 【０１４７】 チャレンジ後、臨床徴候に関して、すべてのブタを全般的に観察した。観察は、異常な 臨床徴候に関して毎日行った。試験の第０日、１４日、２８日、および５６日にブタを血 清用に採血した（全血１３ｍｌ以下）。血清を集めたが、評価はしなかった。その後の試 験期間中、集めた血清を用いて、ブタの血清学的応答を評価するためにＥＬＩＳＡを行う 30 ことができる。 【０１４８】 チャレンジの４週間後、第１∼５群のすべてのブタを安楽死させ、肺を摘出した。異型 マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）病変をホルマ リン固定し、サンプルを組織病理に関して検査した。罹患肺のスワブサンプルを細菌単離 用に集めた。チャレンジ後に死亡したブタを剖検し、上記のとおりサンプルを集めた。ワ クチン有効性はワクチン接種の合計平均肺病変スコアとして定義したが、これは対照の平 均肺病変スコアより５０％低かった。 【０１４９】 剖検当日、すべてのブタを安楽死させ、肺病変のスコアを取り、細菌単離用にスワブサ ンプルを採取した。スワブから単離された細菌は以下のスタフィロコッカス・ヘモリチカ ス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｅａｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ストレプトコッカス ・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｕｉｓ）（Ｐ３２２）、スタフィロコッカス ・エピデルミス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）、アクチノマイ セス・ピオゲネス（Ａ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、アエロコッカス種（ａｅｒｏｃｏｃｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）、ボルデテラ・ ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）（Ｐ３４４ ）、および巨大バクテリアからなった。肺病変スコアの統計的分析を表６に示す。 【０１５０】 40 (32) JP 2011-503086 A 2011.1.27 【表６】 10 20 【０１５１】 このデータの統計的分析は肺病変の低減に関して緩和率（＜５０％信頼下限値＞３０％ ）の基準を満たした。この実施例は、（ａ）３．１８×１０８ＣＦＵ／ｍｌで２回２ｍＬ ＩＭ投与したＭＨ画分のＭＨ／ＰＣＶワクチンの有効性、および（ｂ）ワクチン接種後Ｍ ＨまたはＰＣＶに関連する臨床徴候のないことからＭＨ／ＰＣＶワクチンの安全性を実証 している。 【０１５２】 （実施例４） マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉ 30 ａｅ）非病原性生菌株−ブタサーコウイルス１型−２型キメラ変性生混合ワクチンの３∼ ４週齢のブタにおけるマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈ ｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）画分免疫原性試験 この実施例は、実施例４に示した試験から得られた結果を支持し、筋内投与されたとき の、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏ ｎｉａｅ）非病原性生菌株−ブタサーコウイルス１型−２型（ｃＰＣＶ１−２）キメラ変 性生ワクチン混合ワクチン（ＭＨ／ＰＣＶ）のマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）画分の有効性を確認する免疫原性試験を開示する。本明 細書に開示するＭＨ／ＰＣＶワクチンは、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈ ｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびブタサーコウイルスに起因する疾患の予防および／ま 40 たは重症度の軽減を助けるものとして、健常なブタのワクチン接種に適切に用いることが できる。 【０１５３】 本試験に用いたブタは、ＥＬＩＳＡで判定されたとおり、マイコプラズマ・ハイオニュ ーモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対して血清反応陰性であった。 【０１５４】 合計７９頭の３から４週齢のブタを無作為に４群に分けた。２４頭のブタ（第１群）は 、混合ＰＣＶ／ＭＨ生ワクチンの単回投与でワクチン接種した。２４頭のブタ（第２群） は、２週間隔で、混合ワクチンで２回ワクチン接種した。２４頭のブタ（第３群）は、２ 週間隔で、生理食塩水で２回ワクチン接種し、チャレンジ対照とした。すべてのワクチン 50 (33) JP 2011-503086 A 2011.1.27 は筋内投与した。４頭のブタ（第４群）は、ワクチン接種もチャレンジもせず、環境対照 とした。 【０１５５】 本試験に用いたワクチンは、ＭＨ凍結乾燥生抗原（ロット１７４４−６６）およびＰＣ Ｖ（ｃＰＣＶ１−２ロットＣ１０８−５６）生ワクチンを含有する希釈液の組合せであっ た。ワクチン接種当日、凍結乾燥生ＭＨケークを、ＰＣＶ生ウイルスを含有する希釈液（ １０％ＳＰ油でアジュバント添加、３．５Ｌｏｇ１０ＦＡＩＤ５０／ｍｌ）で再水和した 。最終ワクチンにはロット番号２３１５−４０を付与した。ＭＨ画分の生存能力をワクチ ン接種前および接種後に求め、それぞれ２．０９×１０８ＣＦＵ／ｍＬおよび１．５６× １０８ＣＦＵ／ｍＬであった。プラセボワクチンは滅菌生理食塩水であった。 10 【０１５６】 第２回ワクチン接種用のワクチンを上記のとおり調製し、ロット番号２３１５−４２を 付与した。ＭＨ画分の生存能力は、ワクチン接種前および接種後それぞれ１．０５×１０ ８ ＣＦＵ／ｍＬおよび６．７２×１０７ＣＦＵ／ｍＬであった。ＰＣＶ画分希釈液の生存 能力は、３．４４Ｌｏｇ１０ＦＡＩＤ５０であった。 【０１５７】 ワクチン接種日前にワクチンを力価測定した。ワクチン接種当日、非病原性マイコプラ ズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の凍結乾燥培養物を再水 和した。ワクチンのサンプルを取り置き、ワクチン接種前および接種後に生存能力アッセ イを行って、ＣＦＵ／ｍｌを求めた。ワクチン接種過程中、ワクチンは氷上に保持した。 20 【０１５８】 各ワクチン接種の２日前から開始し、各ワクチン接種後７日間継続して、すべてのブタ を体温および臨床徴候に関して毎日観察した。ブタは、これに限定されるものではないが 、咳、くしゃみ、鼻汁、減退、食欲不振、および呼吸困難を包含する臨床症状に関して観 察した。 【０１５９】 ワクチンに対する有害反応に関して、ワクチン接種後７日間、ブタを観察した。ワクチ ン接種後観察期間中、ＭＨまたはＰＣＶに関連しない原因のため３頭のブタが死亡した。 ワクチン接種後期間の臨床的観察の概要を表７に示す。 【０１６０】 【表７】 30 40 【０１６１】 第１∼３群のすべてのブタを、およそ７週齢で、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ 50 (34) JP 2011-503086 A 2011.1.27 （Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の病原性株でチャレンジした。第１群のブタは、第 １回ワクチン接種の４週間後にチャレンジした。第２群および第３群のブタは、第２回ワ クチン接種の２週間後にチャレンジした。病原性マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（ Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）チャレンジストックの凍結（−７０℃）肺ホモジネー ト（ＬＩ−３４）を温水下で急速に解凍し、滅菌マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（ Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）増殖培地を用いて希釈した（１：１００希釈）。キシ ラジン（Ｘｙｌａｚｉｎｅ）５０ｍｇ／ｍｌ、ケタミン（Ｋｅｔａｍｉｎｅ）５０ｍｇ／ ｍｌ、およびテラゾール（Ｔｅｌａｚｏｌ）１００ｍｇ／ｍｌを含むＸｙｌａｚｉｎｅ− Ｋｅｔａｍｉｎｅ−Ｔｅｌａｚｏｌ（商標）混合物で、ブタを鎮静させた。それぞれのブ タにチャレンジ材料１０ｍｌを経気管投与した。 10 【０１６２】 試験の第０日、１４日、２８日、および５６日にブタを血清用に採血した。この試験で 集めた血清サンプルは、当分野でよく知られているＥＬＩＳＡ法を用いて、マイコプラズ マ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＣＶ２に対する動 物血清学的応答を評価するために試験することができる。市販され入手可能であるＥＬＩ ＳＡ試験キットを用いて、ワクチン接種後０日（０ＤＰＶ）およびチャレンジ後０日（０ ＤＰＣ）から集めた血清サンプルを、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ブタインフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）、および豚繁殖・呼吸障害症 候群（ＰＲＲＳ）に対する抗体に関して試験することができる。 【０１６３】 20 チャレンジ４週間後（２８ＤＰＣ）、第１∼４群のすべてのブタを安楽死させ、肺を摘 出した。肺病変スコアを記録し、典型的なマイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈ ｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）病変をホルマリン固定した。サンプルを組織病理に関して検 査した。マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に罹 患した１つの肺葉から、二次感染を検出する細菌単離用にスワブサンプルを集めた。さら に、気管支肺胞洗浄液も集めた。肺をリン酸緩衝溶液で洗浄し、得られた流体をＰＣＲ試 験用にアリコートした。 【０１６４】 肺病変の重症度の低減を評価するため、推定量（ｅｓｔｉｍａｔｏｒ）は緩和率（ＭＦ ）統計値とした。緩和率を以下のとおり算出した。 30 【０１６５】 【数１】 式中、 Ｗ１＝ウィルコクソン順位和統計値 40 ｎＣ＝対照群の対象数 ｎＶ＝ワクチン接種群の対象数 【０１６６】 緩和率の９５％信頼区間を算出した。 【０１６７】 肺病変の重症度の低減を主張する場合、以下のとおりである。 ＨＯ：ＭＶ＝ＭＣ ＨＡ：ＭＶ ＭＣ 式中、 ＭＶ＝ワクチン接種群の肺病変スコアの中央値 50 (35) JP 2011-503086 A 2011.1.27 ＭＣ＝対照群の肺病変スコアの中央値 【０１６８】 単一集団のサンプルのパラメトリックおよびノンパラメトリック解析を行うＰＲＯＣ ＵＮＩＶＡＲＩＡＴＥを用いて（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．、Ｃａｒｙ Ｎ Ｃ）、連続結果変数の頻度分布を評価した。抗体力価のｌｏｇ変換を用いて、パラメトリ ック検定に必要とされる正規性仮定を満たした。同腹および場所（ｒｏｏｍ）に関する各 群の比較性を評価するために、カイ二乗によってベースライン評価を行う。ウィルコクソ ン順位和検定によって（従属変数として肺病変スコアおよび独立変数として包含される処 置を用いるＰＲＯＣ ＮＰＡＲ１ＷＡＹ、肺病変の重症度を各ワクチン接種群および対照 群間で比較した。ＰＲＯＣ ＮＰＡＲ１ＷＡＹは、一元配置で位置および尺度の相違に関 10 してノンパラメトリック検定を行い、ＰＲＯＣ ＮＰＡＲ１ＷＡＹはさらに、経験分布関 数に基づく生データおよび統計値の分散標準分析も提供する（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ ｅ Ｉｎｃ．、Ｃａｒｙ ＮＣ）。 【０１６９】 すべての統計的分析はＳＡＳシステムを用いて行う。正規性に関してＷ検定で求めた変 換変数の残差の分布が変換によって改善されなかった場合、必要に応じてノンパラメトリ ック検定を用いた。有意水準はｐ＜０．０５に設定する。 【０１７０】 剖検当日、すべてのブタを安楽死させ、肺病変のスコアを取り、細菌単離用にスワブサ ンプルを採取した。気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）も集めた。スワブから単離された細菌は以 20 下のアクチノバチルス種（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ）、モラクセ ラ・オスロエンシス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｏｓｌｏｅｎｓｉｓ）、ストレプトコッカス ・サングイニス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｎｇｕｉｎｉｓ）、アクチノマイセ ス・ピオゲネス（Ａ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、およびボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏ ｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）からなった。ＢＡＬサンプルは、Ｐ ＣＲ法によってＭＨに関して試験し、そのサンプルは病変が記録された環境対照群の２種 のサンプル、ならびにワクチン接種群および対照群の病変スコアの低い２種のサンプルで あった。病変を有する環境対照群の両方のブタのＢＡＬサンプルは陰性であり、ワクチン 接種群の病変スコアの低い両方のブタは陽性であった。肺病変スコアの統計的分析を表８ に示す。 30 【０１７１】 【表８】 40 【０１７２】 このデータの統計的分析は肺病変の低減に関して緩和率（＜５０％信頼下限値＞３０％ ）の基準を満たした。このワクチンは、２．０９×１０８ＣＦＵ／ｍｌで、単回投与また 50 (36) JP 2011-503086 A 2011.1.27 は２回投与によって２ｍＬ用量をＩＭ投与したＭＨ画分に関して有効であるとみなされる 。さらにこのワクチンは、ワクチン接種後ＭＨまたはＰＣＶに関連する臨床徴候のないこ とから安全であるとみなされる。 【０１７３】 (37) JP 2011-503086 A 2011.1.27 【表９】 10 20 30 40 【受託番号】 50 (38) 【０１７４】 ＡＴＣＣ２５９３４ ＡＴＣＣ２５６１７ ＡＴＣＣ２５０９５ ＡＴＣＣ２７７１５ ＡＴＣＣ２７７１４ JP 2011-503086 A 2011.1.27 (39) JP 2011-503086 A 2011.1.27 【国際調査報告】 10 20 30 40 (40) JP 2011-503086 A 2011.1.27 10 20 30 40 (41) JP 2011-503086 A 2011.1.27 10 20 30 40 (42) JP 2011-503086 A 2011.1.27 10 20 30 40 (43) JP 2011-503086 A 2011.1.27 フロントページの続き (51)Int.Cl. ＦＩ テーマコード（参考） Ａ６１Ｋ 39/295 (2006.01) Ａ６１Ｋ 39/295 Ａ６１Ｐ 31/04 (2006.01) Ａ６１Ｐ 31/04 Ｃ１２Ｎ 1/00 (2006.01) Ｃ１２Ｎ 1/00 Ｌ Ｃ１２Ｎ 1/20 (2006.01) Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ Ｃ１２Ｎ 7/00 (2006.01) Ｃ１２Ｎ 7/00 (81)指定国 AP(BW,GH,GM,KE,LS,MW,MZ,NA,SD,SL,SZ,TZ,UG,ZM,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,MD,RU,TJ,TM), 10 EP(AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MT,NL,NO,PL,PT,RO,SE,SI,SK,T R),OA(BF,BJ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GQ,GW,ML,MR,NE,SN,TD,TG),AE,AG,AL,AM,AO,AT,AU,AZ,BA,BB,BG,BH,BR,BW,BY, BZ,CA,CH,CN,CO,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DO,DZ,EC,EE,EG,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,GT,HN,HR,HU,ID,IL,IN,IS,JP,KE,K G,KM,KN,KP,KR,KZ,LA,LC,LK,LR,LS,LT,LU,LY,MA,MD,ME,MG,MK,MN,MW,MX,MY,MZ,NA,NG,NI,NO,NZ,OM,PG,PH,PL,PT ,RO,RS,RU,SC,SD,SE,SG,SK,SL,SM,ST,SV,SY,TJ,TM,TN,TR,TT,TZ,UA,UG,US,UZ,VC,VN,ZA,ZM,ZW (72)発明者 シェン−ユエ チュ アメリカ合衆国 ６６０１２ カンザス州 ボナー・スプリングス市 セダー・レーン １５６７ １ (72)発明者 ズヒチャング スー 20 アメリカ合衆国 ５０５０１ アイオア州 フォート・ダッジ市 １８ティ・エイチ・アヴェニュ ー・ノース ２９２０ (72)発明者 ウミン リ アメリカ合衆国 ５０５０１ アイオア州 フォート・ダッジ市 ノルクレスト・ドライブ １５ １９ (72)発明者 ニコル レイ ギブソン アメリカ合衆国 ５０５４８ アイオア州 ハンボルト市 ２２０ティ・エイチ・ストリート １ ６４５ Ｆターム(参考) 4B065 AA99X BD50 CA45 4C085 AA03 AA04 AA38 BA07 BA48 BA51 BA55 DD86 EE03 EE06 FF17 FF21 GG03 GG08 GG10 30