猫・犬寄生ノミの Bartonella henselae 感染

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第 74 回日本感染症学会総会学術講演会座長推薦論文
猫・犬寄生ノミの Bartonella henselae 感染
1）
山口大学医学部保健学科，2）山口県厚生連長門総合病院研究検査科，3）山口大学農学部家畜内科学教室
石田 千鶴1）
常岡 英弘2）
飯野 英親1）
壽3）
大西 堂文3）
塚原 正人1）
猪熊
村上 京子1）
（平成 12 年 10 月 10 日受付）
（平成 12 年 11 月 6 日受理）
Key words：
Bartonella henselae, flea, Ctenocephalidis felis, Ctenocephalidis canis, PCR
要
旨
猫・犬に寄生する 2 種類のノミ（Ctenocephalidis felis，Ctenocephalidis canis）の Bartonella henselae 感染
の有無を検討した．飼い猫・犬から採取したノミ 62 匹について，PCR 法による B. henselae 特異 DNA
の検出を試みたところ，猫から採取したノミの 33.3％（12 36），犬から採取したノミの 26.9％（7 26）か
ら B. henselae 特異 DNA が検出された．以上の事実から，猫ノミ，犬ノミ共に B. henselae に感染しており，
寄生ノミが犬・猫への感染媒体であること，および人への直接感染源となり得ることが示唆された．
〔感染症誌
序
文
Bartonella henselae 感染症は，主に猫や犬などの
ペットを介して感染する人畜共通感染症で，代表
75：133∼136，2001〕
対象と方法
1．対象
平成 6 年 7 月から平成 11 年 9 月まで，山口県お
疾 患 は 猫 ひ っ か き 病（cat scratch disease：CS-
よび大阪府の飼い猫・犬から採取したノミ 62 匹
D）
である． その臨床型は局所リンパ節腫大から，
（猫から採取した C. felis 36 匹，犬から採取した C.
不明熱，肝・脾肉芽腫などの全身性感染をひきお
felis24 匹， C. canis2 匹）を対象とした．ノミは，
こすものまで多彩である
1）
2）
3）
．その感染経路につ
いては不明な点が多いが，寄生ノミが猫への感染
採取後 70％ エタノール溶液中に保存してあった
ものを用いた．
を媒介しているのではないかと考えられている．
2．方法
わ が 国 の 猫 や 犬 に 見 ら れ る ノ ミ は，主 に
1）ノミの DNA 抽出
Ctenocephalidis felis と Ctenocephalidis canis の 2 種
エタノール溶液中に保存したノミを 1 匹ずつ
類で，猫に寄生するノミの 96.7％，犬に寄生するノ
1.5ml エッペンドルフチューブに入れて乾燥後，
ミの 75.9％ が C. felis であるという報告がある4）．
次亜塩素酸処理したハサミで細切した．500µl の
しかし，ノミの B. henselae 感染の実態は明らかに
digestion buffer（10mM EDTA，10mM Tris-HCl
されていない．そこで我々は，我が国の飼い猫・
pH 8.0，100mM NaCl，0.6％SDS）と proteinase
犬から採取したノミについて，B. henselae 特異
K（最終濃度 800µg ml）を加えて，56℃ で 3 日∼
DNA の保有状況を検討したので報告する．
別刷請求先：（〒755―8554）
山口県宇部市南小串1―1―1
山口大学医学部保健学科
塚原 正人
平成13年 2 月20日
5 日インキュベートした．その後，フェノール・ク
ロロホルム法で DNA 抽出を行い，TE（10mM
Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0）で DNA 濃度を
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石田
千鶴 他
Table 1 Primers used in PCR analyses
Nucleotide sequence
（5’to 3’）
Primers
Cat 1 & 2a)
b)
Cat 1’
& 2’
Cat 1
Cat 2
Cat 1’
Cat 2’
a）Anderson B et al.
PCR product
size
（bp）
GATTCAATTGGTTTGAAGGAGGCT TCACATCACCAGGACGTATTC
AATGATGTCCGTGATCTAGC
CATCAGAAGGAGCAACAATC
418
220
5）
b）Tsukahara M et al.
6）
0.1µg µl に調整した．
2）プライマー
B. henselae htrA gene を 増 幅 す る Cat 1 & 2 と，
さらにその内側を増幅する Cat 1’
＆ 2’
の 2 組の
プライマーペアを使用した（Table 1）
．Cat 1 & 2
で first PCR をした後に，その 1µl をテンプレート
Table 2 Detection of B. henselase DNA in fleas from
domestic cats and dogs
Host
Cat
Dog
Dog
Species of fleas No. of tested fleas
C. felis
C. felis
C. canis
No.（%）of PCR
positive fleas
36
24
2
12
（33.3）
（
5 20.8）
（
2 100）
として，Cat 1’
＆ 2’
を用いて nested PCR を行っ
た．
3）PCR 反応
滅菌精製水 5µl に 10×Buffer（20mM MgCl2，
500 mM Tris pH 8.3 ，2.5 mg ml BSA，20％ Sucrose，1mM Cresol Red）
，2mM dNTP，5µM プラ
Fig. 1 Agarose gel electrophoresis of PCR products.
Lane 1, molecular size marker；lane 2, positive control（Cat 1 & 2）；lane 3, C. felis（Cat 1 & 2）；lane 4,
positive control（Cat 1’＆ 2’
）
；lane 5, C. felis（nested
PCR）；lane 6, negative control.
1
イマーペア，ノミ DNA（0.1µg µl）
，0.4U Taq ポ
2
3
4
5
6
リメラーゼを各 1µl ずつ順次加え，全量を 10µl
にしたものを PCR 反応液とした．反応条件は，
first PCR，nested PCR 共に同じで，DNA 変性 98
℃，10 秒，アニーリング 50℃，10 秒，伸長反応
72℃，35 秒を 1 サイクルとして，30 サイクル行っ
た．増幅反応には，Rapidcycler（Idaho Technology）を使用した．陽性コントロールとして B.
418bp
henselae ATCC 49882 菌株より抽出した DNA（0.1
220bp
µg µl）を 1µl 用いた．
4）PCR 産物の検出とシークエンス
PCR 産物は，エチジウムブロミド（終濃度 0.5
µg ml）加 1.5％ アガロースゲルを用いて電気泳動
し，紫外線照射下で目的バンドの検出を行った．
さらに， PCR 産物の塩基配列を確認する目的で，
クエンスを行った．
成
績
B. henselae 特異 DNA 陽性のノミ 2 匹について，
ノミ 62 匹中，猫から採取した C. felis 33.3％（12
PCR 産物を QIA quick PCR purification kit（QIA-
36）
，犬から採取した C. felis 20.8％（5 24）
，C.
GEN）で精製し，PRISM Ready Reaction Termi-
canis 100％（2 2），計 30.6％（19 62）より B. hense-
nator Cycle Sequencing kit を 用 い て 373A―18 D-
lae 特異 DNA が検出された（Table 2）．PCR 陽性
NA Sequencer（共に Applied Biosystems）でシー
ノミ 19 匹のうち，1 匹（猫から採取した C. felis）
は
感染症学雑誌
第75巻
第2号
猫・犬寄生ノミの Bartonella henselae 感染
first PCR で陽性だったが，他の 18 匹は，first PCR
135
実施することが重要と思われる．
は陰性で nested PCR のみが陽性だった．Fig. 1
昨 今 の ペ ッ ト ブ ー ム に よ り，わ が 国 で も B.
に陽性コントロールと，nested PCR 陽性ノミのア
henselae 感染症（CSD）の報告例が増えつつある．
ガロースゲル電気泳動像を示した．
その早期診断，早期治療，さらに予防的見地から
PCR 陽性ノミのうち，猫から採取した C. felis1
匹と犬から採取した C. canis1 匹，計 2 匹の PCR
産物をダイレクトシークエンスした結果，両者と
も， B. henselae htrA gene の塩基配列と 99％ が一
致していた．
考
察
今回の結果から，わが国の飼い猫寄生ノミの約
33％，飼い犬寄生ノミの約 27％ が B. henselae に感
染していることが明らかとなった．これは猫ノミ
の 26∼34％ か ら B. henselae 特 異 DNA が 検 出 さ
れ た と す る 欧 米 の 報 告7）∼9）と 同 様 で あ っ た．
Chomel ら7）は 飼 い 猫 の 39.5％ が B. henselae に よ
る菌血症を示しており，菌血症の猫の方が菌血症
のない猫より，寄生ノミが多かったと報告してい
る．また，ノミが，B. henselae を含む血液を摂取す
ることにより，B. henselae に感染すること10）や，菌
血症の猫から採取したノミを用いた，猫への B.
henselae 感染が実験的に確認されている8）11）．これ
らの報告と今回の結果，さらに猫―猫間でのノミ
の移動があること12）から，ノミが猫―猫間で B.
henselae を媒介している可能性は十分にあると考
えられる．今回は犬ノミからも B. henselae 特異
DNA を検出しているので，犬―犬間，さらに猫ま
たは犬から人への B. henselae 感染においても，ノ
ミが重要な感染媒体になり得ることが示唆され
る．
B. henselae 感染症においては，猫などのペット
による受傷歴の有無は，診断の大きな手がかりと
なるが，ペットとの接触歴はあるものの，受傷歴
がない例もみられる．猫や犬の口腔内や目ヤニに
も菌が存在することは分かっている13）ので，受傷
歴がなくても接触歴があれば B. henselae 感染は起
こりうると考えられる．さらに今後は，ペットと
の接触に限らず，ペットに寄生するノミによる人
への直接感染も考慮する必要があると考えられ
る．B. henselae 感染予防のためには，ペットの除菌
と共に，ペットに寄生するノミの駆除もあわせて
平成13年 2 月20日
も猫，犬，寄生ノミ等の感染媒体及び感染経路に
関する疫学的な解明が今後の課題と思われる．
文
献
1） Tsukahara M , Tsuneoka H , Iino H , Murano I ,
Takahashi H, Uchida M：Bartonella henselae infection as a cause of fever of unknown origin. J Clin
Microbiol 2000；1990―1991.
2）Anderson BE, Neuman MA：Bartonella spp. as
emerging human pathogens. Clin Microbiol Rev
1997；Apr：203―219.
3）村野一郎，吉井英樹，蔵重秀樹，他：全身性猫ひっ
か き 病 の 3 例．感 染 症 学 雑 誌 1999；73：248―
252.
4）今井壮一，武田雅人，内野富弥，中野正和，小竹
康人：我が国における犬および猫寄生ノミの種
別分布．日獣会誌 1995；48：775―778.
5）Anderson B, Sims K, Regnery R et al .：Detection
of Rochalimaea henselae DNA in specimens from
cat scratch disease patients by PCR. J Clin Microbiol 1994；32：942―948.
6）Tsukahara M, Tsuneoka H, Iino H, Ohno K, Murano I：Bartonella henselae infection from a dog.
Lancet 1998；352：1682.
7）Chomel BB, Abbott RC, Kasten RW et al .：Bartonella henselae prevalence in domestic cats in
California：risk factors and association between
bacteremia and antibody titers. J Clin Microbiol
1995；33：2445―2450.
8）Chomel BB, Kasten RW, Floyd-Hawkins K et al .：
Experimental transmission of Bartonella henselae
by the cat flea. J Clin Microbiol 1996；34：1952―
1956.
9）Bergmans AM, de Jong CM, van Amerongen G,
Schot CS, Schouls LM：Prevalence of Bartonella
species in domestic cats in the Netherlands. J Clin
Microbiol 1997；35：2256―2261.
10） Higgins JA , Radulovic S , Jaworski DC , Azad
AF：Acquisition of the cat scratch disease agent
Bartonella henselae by cat fleas（ Siphonaptera ：
Pulicidae）
. J Med Entomol 1996；33：490―495.
11）Foil L, Andress E, Freeland RL et al .：Experimental infection of domestic cats with Bartonella
henselae by inoculation of Ctenocephalidis felis （Siphonaptere ： Pulicidae ） feces . J Med Entomol
1998；35：625―628.
12）Rust MK：Interhost movement of adult cat fleas
136
石田
（ Siphonaptera ： Pulicidae ）. J Med Entomol
1994；31：486―489.
13）塚原正人，山本きよみ，常岡英弘，他：Bartonella
千鶴 他
henselae 感染症．化学療法の領域
93.
1999；15：87―
Bartonella henselae Infection in Domestic Cat and Dog Fleas
Chizuru ISHIDA1）, Hidehiro TSUNEOKA2）, Hidechika IINO1）, Kyoko MURAKAMI1）,
Hisashi INOKUMA3）, Takafumi OHNISHI3）& Masato TSUKAHARA1）
1）
Faculty of Health Sciences, Yamaguchi University School of Medicine
Department of Clinical Laboratory, Yamaguchi-Ken Kouseiren Nagato General Hospital
3）
Laboratory of Veterinary Internal Medicine, Faculty of Agriculture, Yamaguchi University
2）
We studied on the infection of domestic cat and dog fleas with Bartonella henselae by polymerase
chain reaction（PCR）
. A total of 62 fleas（36 Ctenocephalidis felis from cats, 24 C. felis from dogs and 2
Ctenocephalidis canis from dogs）
, stored in 70％ ethanol, were analyzed by PCR for B. henselae specific
DNA. Of the 62 fleas, C. felis from cats and dogs were positive for B. henselae specific DNA in 12 of the
36（33.3％）and in 5 of the 24（20.8％）
, respectively, and C. canis from dogs was positive in 2 of the 2
（100％）
. Our results demonstrated that pet fleas were infected with B. henselae, and suggest that flea
transmission of B. henselae between cats or dogs may occur, and direct transmission of B. henselae
from pet fleas to human may cause cat scratch disease.
感染症学雑誌
第75巻
第2号