Rhabdovirus olivaseus (HRV) 人工感染に及ぼす水温の影響

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Rhabdovirus olivaseus (HRV) 人工感染に及ぼす水温の影響
大迫, 典久; 吉水, 守; 木村, 喬久
魚病研究 = Fish pathology, 23(2): 125-132
1988-06
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http://hdl.handle.net/2115/38327
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yoshimizu-63.pdf
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Hokkaido University Collection of Scholarly and Academic Papers : HUSCAP
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，標本を仇 成した a 次ぎにこの伊みにメイ
湾別撤 1
細菌およびウイルス検査法
U
冬眠般を無 l
泊的に酬!脱した後腎臓鑑i
燃をー 内金 J
f
j
j
t
2J
'
oNaCl加 TSA(
t
ryp
l
;
c
a
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e拍 yagar
;Di
f
c
o
)階地に
〆リ
ュンワールドギムザ染色を纏した.
総
m
S0 C で 1週間 貸し細菌感条の有無を観策し
擁観し。 2
•
1
1し
， 1
0倍量の Ha
nks
'BSS
た.次いで腎 陵 肺 肢 を 嫡 1
累積鍵死寧
l
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Hanks
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)な加えストマ
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S nn の得水 I駄にきb巴ける u~nえ j(，の
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C
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)を)11してホモ γブ イ ズ L，
ミ Mボアフィルタ 一
鋭敏 I
I
I死事を Fig.lI
こ示した.なお 州 J
l
l
ll
i
l
織作成の為
HA(
0.
45pm)で櫨過し ， "イル λ
に取りよげた厳死魚も死亡厄数民含めた。 S
O
C1
え験併
RTG2細胞を用
式験鮮と比依し当初から動作が緩慢で。発組'
に
は，他のS
倹ヨ~ I式料 とした.ウイルス感染価は
いた常法の 96穴マイタロプ νート 4穴訟により 。測 定
よる遊泳動作の変化等の飯費憶が闘'重であった. 1
0 日日
¥.
H に対する家
した。分自量ウイルスの開花:は HRV制 O
ごろに発症が観察され 1
1 日"に"丞が死亡した.さら
兎抗血清に よる中 和唱え験によった。
に
病理組織標志の作成法
え 験 鮮 の 瀕 死 魚 縦 波 終了時の生残 1
(
¥の腎臓お よび
各R
1
3 日目巳 1尼が死亡 し.却も償 I
I
I死率は 4
0% に遣し
た。先般舶にも発症がみられ。鋭支持終了時の媒II!IIl死都
1
¥
は変わらなかったものの残り の個体全てにも筋肉 内 1
1し!前線 ιk迫 ら.1
9
8
8
)と向"の 1
J訟により
榔践を鏑 1
血~色 I.U 化生躯腺の発赤臨ホ貯欄などの著し、症
バラフ~ :/VJ片を作成し，へマトキシレ y ・ ~オ γγ 染
状が観照された o¥
Oo
CI
式験"では 4-'日自 に発包'が認
色を B
値した。
1
1
mのある倒t
宇治、観策
められ，1
'
/
側 I 腹側の体側筋中に 1
血中中和敏体価の測定法
F
i
g
.2
)。発症倒体は，体色合、川化し，動内秒、 1
1
1
された (
、
HRV 人工感染に及ぼす水漏の彬型車
1
2
7
J
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C，
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i
ono
fgona
d. (
b
a
r= 1
0m m
)
慢となり ，水底に静止したり水耐近くをフラフラ遊泳す
HRV 840 lH はいずれも rl:l ~向1 され ， 分離ウイルスが
ると いった典'
吊遊泳が観察された。6 日自 に ["
j
l
i，8 日
HRVであることが冊認された。
目に 3
f
t
!さらに 1
0日目に 2尾死亡 し巣 1
'
1
艶死率は 6
0%
に達 した。実験段終日に生残した 1庖にも発症がみられ
~
1
50
C試験併では 5日自に [J
吾さ らに [
3日目に 1尾
細菌検査
TSA培地を}lJc、た細菌検査の結果，対照群， 5，1
0，1
5
，
W C試験f，fいずれの時臓か らも細菌は分離されなか っ
った。
が死亡し鍛制瀕死率は 2
0% となったが，いずれの個
病理組織学的検討結果
体にも症状は認められなかった。 2
00C 試験計では，観
腎
京 mm~ を通じ ， いずれ の個体 にも変 化 はみられなヵ 、 つ
臓
5'
C 試験併の発症 j
uの腎臓の病理組織像を F
i
g.3に
示 した。 HRV感染症の特徴である池山組織各所での血
た
。
m
魚体内ウイルス量
管の充出血や細網細胞の核濃縮を伴う壊死が瀕死 し 生
供試，(
(
tの魚体内ウ イルス盆の測定結柴を Tabl
e[に示
残 ~(l全てに飢 Zをされ，静脈周囲の組織に著しい核濃紺の
¥ J した。5'
C 拭験群では死亡 1
A
t.瀕死 j
(
L 生残魚のいずれ
みられ る個体も存在 した。瀕死 f
j
tでは腎臓の造血組織全
7.
30，
においても 1
0
.
.
，
.
.1
0
8
.
8
0TCID ~o/g 以上 と極めて L1 い値
域にわたり明らかな核の膨化が引 き起こされていた。
0
1
0
C 群の瀕死 j
(tの腎臓の病理組織像を F
i
g.4に示し
を示 し た 。 このうち死 亡 ~(lt1.
1
07.8
0，
.
.
.
.t
0
・
制 TCID"
/
g，瀕
死j
uで 1
07.8
0
.
.
.
.
.1
08.80TC
ID
ωI
g以上，さらに生!'Iij
(
tで も
ゆ
8
0
8
8
1
0.
.
r.
.l
0. TCID
"/
g以上であり ，死亡1.f，l"瀕死 f
{
，
t
，生
た。 1
0'
C 拭験鮮の瀕死j(t
は.50
C 試験鮮に比べ峡死部
残 j("、ずれも魚体内ウイルス最に大廷はみとめられ
0
なかった。 1
50
C，20
C 試験群ではウイルスは分離さ
におよぶ披死は認められなか った。 ウイルスが分離され
0
が小規模であり ，血管の充血も比較的少なく ，組織全体
軽度の症状が腿められた倒体では組織内に若干の UI
J
f
l
lが
れなか った。 1
0C 1
試験 群 で は 瀕 死 j
(
{の場合 1
06.60
0TCID
1
ωI
TCID
"/
g，死亡 f
j
tでは 1
0
1
.0
&_1
07.8
g と向い値
残魚のうち発症が認められずウイルスも分離されなかっ
を示したが，生残魚では発症した個体で 1
0
'制TCID
ωI
g
た個体では，対照群 と比較 しても特典的な病変は観察さ
であったのに対L.無症状の個体か らは ウイルスは分離
きれなか った。5'
C試験群および l
OO
C 試験群の各 I尾
れなか った。
1
50
C，2
00
C 拭験群では，対照群と比較して変化は訟
の腎臓 より分離 したウイルスを対訟に.抗 HRV 家兎
0
められなか った。 なお . 20
C 試験群では全個体に 1
，
1
，
¥
色
血消に より 中和試験を行 ったが，供献した 2株 およ び
大食細胞の哨加が観察された (
F
i
g.5
)。
みられるも のり造血組織に変化は認められなか った。生
1
2
8
大iII典久吉水
守 ・木 村 錨 久
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・
C 獄験鮮には削1
1
.
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i
の
腎
随
同
様に黒色大食細胞の別加が観策された.
血中中和抗体価
"試験騨 の観察符了時に測定した抗 HRV 血中小~，抗
体価 (ND
叫 を T
a
b
l
e2
に示した。 5
・c3
え験郡の生残 魚
:
1
0-1
:
2
3，1
00
CI
式験群で 1J
佐
'を険 き 1:32-1:45，
で: 1
1
5
・CI
式験静では 1:
1
4-1:
4
5，200
C献験併では 1J
eを
徐き 1
:
3
2-1:
9
0であり全般的には さほど高い倒は得ら
れなかうたが水温のおい猷験鮮でより商い悩を示す傾向
が観旅された。
1妹根本@観寝
血球 1
血球槍抹標本の鋭貿信鮎来を F
i
g.9に示した o5
.OC 3
え
験併では発症した i
l
i残納を対lJi.としたが幼若諸 血ままが他
の野と比岐しヨ I" ~ に向い割合で出現した ( Fìg.9a)。この
.
c訴の標本を作成した全倒体に
幼若湯血尽の納加は ，
観嫁され小型のリンパ球様細胞の相対量も比徴的多か
った o I
OO
C 依験訴の碩死魚では小型のリン パlI<織銅脳.
好中島まが比般的多く (
F
ig
.9
b
)，発症魚では大型のリ
γバ
球樋創砲が多"幽裂していた。 1
5C :え験野でも 1
0
・
c
0
飢験鮮問慢に倒体盤はあるものの小型のリ:/，~隙繊細胞
と好中まま散が却脅し〈別加する傾向を庁、したが I 大型リ
γ
パ匁繊細胞は凡られなかった。 2
0C 以験 E
撃では全く発
0
症が総められなかったのに もかかわらず他の供政併に比
F
i
g.9
c
)の胤務な
しリンハ嫁犠細胞 (
m
f
t
が飽められ，
好中島まは金側体ともに若干の網量が観察された.
ヨ
惨
寮
5
・
C 隙験鮮のl!II'"魚の隣鳳の病理鋭機像を F
i
g.6に
HRV感幾多恵症に及ぼす水温の膨・を HRV人工感按
耳、した.f
I
'
院
に も著 し
、 出血像治、観賞され血海を堕して
ヒラメの探偵II!死事および発症魚の病患組織像 より観療
いた .1
1に榊儲嗣網餌胞では敏濃鮒，被ゆ'
1
1
貨を伴 う疲死
した o HRVを政隆内に接領 し ，
5
.1
0，1
5，2
00
C と拠な っ
巣が形成され，さらに出血部位 の 辺 録 制 で は 水 闘 繊錐
00CIt(験鮮で
た水量下で飼育したところ! まず 1
紫の玖;婚もlIl!められた。また爽動脈 '
<
'
1
時飢餓も題提死に陥
日目に発組がみられ 6 日目から死亡が始まり娘 f
l
l
l
i
l死硝
り 伎が消失し細胞膜か倣帰した変性細胞の小機カ騨鎚
0% に遣 した. しかし生存した個体には 1厄を除き
は 6
4
-'
魁織'
1
'に散在した。また腎臓の造血組織と阿健に協の膨
特典症状は見られず
(
，においても 問憾の所見
潤がilII分的に側要持された。 生残 j
も検出きれなか っ た 。 デC Iえ験~ではやや巡れ 1 0 日目
が凪 られたが脚幽組織中の
にな って症なが現れ 1
1 日自に 3賂 日 回 日 にさらに
部分に正常と考えられる総
aしている個体もみられた。
この無症状の個体か らはウイルス
織を
】陪死亡した.観療を 1
5 日で打ち切ったためにl
I
¥f
l
ll
I
!
1
00
C 依願鮮の瀕死魚の勝蔵では災動脈の血管銀の融
解，隣組組織の題提死か起こっている もの の デC 猷蹴野
みられ魚体内ウイルス量は死亡魚とほぼ阿憾の偵を示し
に比べさほど則箸ではなかった (
町g
.7
)0生存魚のうち
O
早晩死亡するものと考えられた。 ーブ
i
'I
5
.
C飢験"では
宛症 しなかった倒体では血管恨の融解がむ下見られたも
2尾の死亡が観費持されたが特典な症状は見られずワイル
のの脚雌組織には顕著な変性は惚められず.マクロフプ
スも分自聴きれなか 勺た.さらに 2
00CMl
f
I
郡ではすべて
iが観察 された (
F
i
g 旬。
ーシの設iIll
盤状も秘められずウイルスはもちろん分離されなか 勺
u・C，20・C !
式験群では
対照静 とJ
t被 して変化はみ
死離は 4
0% にとどまったが，生存し允企個体に宛催が
た。なお!分自障されたウイルスは HRV に対する家兎抗
1
3
0
大迫 典 久 ・吉 水
守 ・木 村 僑 久
r
.
i
.
τ
.
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‘
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L
~c.~ ~，，~，~ -
1
3
1
HRV 人J:f6換に及ぼすヌk
l
l
lの 修 .
は肺臓組織中比マタロファー νの浸潤像が見られ.20
た.
拭験!Iの腎厳および 1
5，2
0
>
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CS
式験鮮の騨腺記
え験鮮の死亡納および瀕
!(，体内のウイルス量は デ C!
ω什
死!(，の
・
1
0' TClDo
o/
g以 上 生 残 魚 の 織 作 も 1
0.
.
.
.
強抹暢本の観療でデc!式験鮮の側体に明らかな *
J
Jl
i
泊
三
血球の刷加泊、制慾されたのは。発鮒悩体が体の名所に !
t
は死亡!(，の場合でも 1
0
"
.
0 ¥0'
，
80TC
lDo
o
/i制 度を示す
じた山血宇治血組織の膿死により紙度の貧血に対応した
ιすぎなかった。 HRVの m 柑 "での歪適発"温度は
.
c
l
'
・
C-2
0
・
Cであるのに 反 し 魚 体 内での ， での高い
・
刷航および 1
0C でのl!!'増殖は，生体内での HRVの
m般を考える うえで
免1Ie系の関与等多〈の要闘を考慮
しなければならないことを示唆する館巣であ。た.
感9.!，生残個体を対象に血中中和抗体価の測定を鼠み
たが
がより
令制".下の血中中和抗体価は水温の'"ぃフ1
n~ 他宅(jj1、す傾向が鋭妻美され
飼育値段の刷速 による 免
m
n別 であると考えられた。 また小型のりン パ思繊細
・
中球教の符しく多い個体も認められた . このように病m
組織学的には. HRV 感集症はウイルスのm
厳による腎
補修
胞が水訟の向 L 併で断管で. l
'C 獣験併の似体には好
隊 .騨臓 などの組織の磁緩が主凄な病変であることが明
らかとな勺たが
この組織級担慢の程度はリンパ系の細胞
性免疫の働ぎによりある阻自主左おされているものと考え
られ白飼育水温が高 L 栂合。 血中中~，抗体 のit( 1t，マタ
使応符の盤が上述の魚体内でのウイルスのI!<l
長 般に関
ロフ
与している可能性が示唆された。
活性が高まり発症および死亡にまで宅らなレのではない
鍋理組級学的には対照若干には何 らの病変も観望持されな
5
・
C併では前報 {
大泊ら
γ
ーシによる食食さらに磁製された組織の初先符の
かと推黙された.
1
9
8
8
)同 銀
以上 HRV に感染したヒラメの発症におよほす水量
HRV 諸島保症の特徴である腎障の遊血組織4¥1
野での血管
の膨・を観望隠したが. ~，咽ヲプドウイルメ IH NV ~
の:/fl
l
¥
血
腎臓の仰脈問凶の組織に著し、依漫舗のみられる倒体も
VHSV の人工感接航験における水 1
1
1の膨.について
Ao
I
Ul
ND(
1肝'
0
)は (HN の場合 " および 1
6C で銅背し
C 以下では術
たヘユサケは向い舞死離を示したが， 問。
作。:した。 1
00Ct
t
え験院の瀕死1.{¥ではデC 献験鮮に比べ
状のJJl行が遮れ
か 。たカ
細捌細胞の敏濃舗を伴う厳死
および騨厳で
の特しも)¥1血や岐死が瀕死魚，生残納金てに観熊され
横死の.f!
i
¥
t.aは軽く
発症した生残;
.
(
{
lではその純度は瀕死
・
また 1
8，2
00 C と飼育水温が向〈なる
につれ舞死単は減少すると報告している。 "
)
iVHSに
00C 猷験榔の事)
.
発信
1
.
(
し
1
.
(
¥
よ
り
さ らに経度であった。 1
聞 しては 一 般 的 に 死 亡 を 引 き 飽 こ す 水 温 の 上 限 が
l
'
・
C 以験鮮 .2
0
・
C黙験務では腎臓および隣民組織に変
l
'
・
C 付近 とされ (
GI
IJ"I
TI
NO， 1
%5; C"
訂 R
IC andd
e
・
化は認められなかうた。 また 1
0C I
実験廊の生残倒体に
、
d
m嫡と考え られる 像がみ とめられた。さらκ血様
細胞の
TClDo
o
!g以上と"，.他を3
了
、したか .W Cll.t験鮮の場合
・
-
¥J
・
c
m色大食
血ii'iにより中和され接観ウイルスである ζ とが檎飽きれ
KI
NKU-I
N，1
9
制} また J
O
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IGE
悶 E
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1
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低いほど魚体内 のウイル λ 空
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誌が認め られた.
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5，2
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崎
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J(
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9
85
) ヒラメの納
る.前述の HRV感祭艇に及隠す水温の修・は VHSV
の発病パタ-/に J
I
I似している。今後ユ
γ
マメを含めた
サケ斜見知に対する HRVの納'原性につLても昨し〈 検
討す る必要があると考凡る。
費 約
HRV感染発症に及隠す水温の影・を HRV人工星島製
ヒラメの累積I
I死率および病理組織像より観織 し，以下
の如き結論を得た。
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，1
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。 2
0，0% を示し。発銀個体には 体色
m化
緩慢な動
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1
1血 お よ び 充 血 生 娘 腺 の 発 赤
雌A
<貯留が観察された .魚体内ウイ ルス 量は 5
・
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式験
次、で I
OO
C 獣験群の死亡1
隔で
訴で般も高い値を示し
あったa
病原級織学的には 5
"
C I式験鮮 の瀕死 ~(\ . ~tDJ(l，全て
に腎踏の造血組織の充 I
U胤キ>JI死が観察され . 1
00C J
弐
験酵の厳死魚の充 1
1
1
血""臨死の程度は 5
・
C'
下に比べ経
u下に烈色大食餌胞の榊加が観黙
度であった。 2
00C I
定
着
・
CI
式験群で脳血や膿死巣が祖E
された.一方腕隙では 5
Z
持されたが. l
OQC a
実験併での変化は程度であ。 た。マ
50C J
式験昨で.よ
.
¥¥色大食細胞
グロフヲー γ の浸潤像が 1
と考えられる細胞の刷加が
l
'・C，20C 献験即で観察さ
0
れた .
HRV に対する血中小柄l
抗体価は，ー般に低か ったも
のの飼育水温の高い方がより高レ値を示す餅向が鋭雲隠さ
t
t.5
.
・
CiI<験鮮の発症 l
'血中に幼若赤血球が非常に高い
欄合で 1
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1現 し 1
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，
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C黙験鮮では リソパ嫁峨細胞
。
・
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告に包凶すると考えられる鮪死 兵庫県水政研..，
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