(TNB-0607-KIT) の染色プロトコール

Transcription Factor Staining Buffer Kit (TNB-0607-KIT) の染色プロトコール
Buffers and solution preparation
1. Transcription Factor Fixation/Permeabilization Concentrate (TNB-1020-L050) (1 part)
を Transcription Factor Fixation/Permeabilization Diluent (TNB-1022-L160) (3 parts)
で希釈することにより新鮮な Transcription Factor Fixation/Permeabilization working
solution を作製する。1 検体当たり 1mL の Transcription Factor Fixation/
Permeabilization working solution を使用する。
2. 使用前に 10 X concentrate ((TNB-1213-L150) を蒸留水で希釈することにより
Flow Cytometry Perm Buffer の 1 X working solution を作製する。1 検体当たり
3-5 mL の Flow Cytometry Perm Buffer の working solution を使用する。
3.
Flow Cytometry Staining Buffer（キットに含まれていません）：2%FBS, 0.09% アジ化
ナトリウムを含む PBS
Experimental Procedure
1. 細胞をチューブに分注する
2. 適切な濃度の蛍光標識抗体を用いて細胞表面抗原を染色する
3. 4℃または室温、遮光して 20-30 分インキュベートする
4. 1-2mL の Flow Cytometry Staining Buffer で洗浄する
5. サンプルを室温で 300-400xg で 5 分間遠心し、上清を捨てる
6. サンプルをボルテックスして細胞ペレットを完全に分散させる
7. 1mL の Transcription Factor Fixation/Permeabilization working solution を各チューブ
に加え pulse vortex する
8. 4℃または室温、暗所で 30-60 分インキュベートする
9. サンプルを室温、300-400xg で 5 分間遠心し、上清を捨てる
10. 1-2mL の Flow Cytometry Perm Buffer working solution で洗浄する
11. サンプルを室温、300-400xg で 5 分間遠心し、上清を捨てる
12. [ オプション ] 2% の正常マウス / ラット血清（キットに含まれていません）を 2uL 直接
細胞に加えることによりブロッキングを行う。室温で 15 分インキュベートする
13. 洗浄しないで推奨量の蛍光標識抗体を細胞に反応させ、室温、暗所で最低でも 30 分
インキュベートする
14. 1-2mL の Flow Cytometry Perm Buffer working solution で洗浄する
15. サンプルを室温、300-400xg で 5 分間遠心し、上清を捨てる
16. 1-2mL の Flow Cytometry Perm Buffer working solution で洗浄する
17. サンプルを室温、300-400xg で 5 分間遠心し、上清を捨てる
18. 染色した細胞を適当量の Flow Cytometry Staining Buffer に再懸濁させ、フローサイト
メーターで測定する