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遺伝子検査キットカタログ
遺伝子検査キットカタログ PCR／リアルタイム PCR 関連製品 （2015 年 9月発行） タカラバイオの 検査システム 「試薬キット＋qPCR 装置」＝「検査システム」 ＋ ★ 試薬キット ★ ★ qPCR 装置 ★ ◆厚生労働省通知収載の「検査システム」 ・腸管出血性大腸菌 「腸管出血性大腸菌 O26、O103、O111、O121、O145 及び O157 の検査法について」 厚労省医薬食品局 食品安全部監視安全課長通知 食安監発 1120 第1号 ・腸管出血性大腸菌 ・ノロウイルス ・クリプトスポリジウム ・ジアルジア ・レジオネラ ・ノロウイルス ｢ノロウイルスの検出法について｣ 厚労省医薬食品局 食品安全部監視安全課長通知 食安監発第1105001号別添 最終改正：平成 25 年10月22日付食安監発 1022 第1号 ・レジオネラ 「第 3 版 レジオネラ症防止指針」 （平成 21年 3月、財団法人ビル管理教育センター発刊） 「循環式浴槽におけるレジオネラ症防止対策マニュアル」の改正について 厚労省健康局 生活衛生課長通知 健衛発 0331第 7号 ・クリプトスポリジウム、ジアルジア 「水道に関するクリプトスポリジウム等の検出のための検査方法の見直し等について」 厚労省健康局 水道課長通知 健水発 0302 第 2∼4 号 -1- 遺伝子検査キットカタログ ・トータルサポート 1.「システム」ならではの安心サポート！ 「試薬」と「装置」を提供するタカラバイオは、システムとしての性能を保証します。 システムなら、お問合せ窓口も一本で安心です。 2. 初心者でも楽々かんたん！ 簡単操作のプレミックス試薬、日本語表記のソフトウェアの組合せで、初心者の方 でもスムーズにご利用いただけます。 3. 装置一台で、様々な検査項目に対応！ 幅広い項目の検査に対応する試薬キットを準備しています。 カタログには無い項目は、カスタムで承ります。 ターゲット 製 品 名 掲載ページ 試薬と装置が通知法に収載されています。 Cycleave ®PCR O-157（VT gene）Screening Kit Ver.2.0 腸管出血性大腸菌 Cycleave PCR EHEC（O157/O26）Typing Kit 13 ® Cycleave ®PCR EHEC（O111/O121）Typing Kit 14 Cycleave ®PCR EHEC（O103/O145）Typing Kit クリプトスポリジウム Cycleave ® RT-PCR Cryptosporidium（18S rRNA）Detection Kit ジアルジア Cycleave ® RT-PCR Giardia（18S rRNA）Detection Kit 30 通知法に収載されたプライマー／プローブ配列を採用した試薬です。 ノロウイルス TaKaRa qPCR Norovirus（GI/GII）Typing Kit 10 第 3 版レジオネラ症防止指針に収載されています。 レジオネラ属菌 Cycleave ®PCR Legionella（16S rRNA）Detection Kit 29 遺伝子検査キットカタログ -2- タカラバイオ 遺伝子検査キットカタログ 【目次】 掲載ページ タカラバイオの検査システム・トータルサポート 検便検査 細胞検査 5 ・ノロウイルス 40 ・マイコプラズマ 7 ・腸管系病原細菌 41 ・HIV、HTLV、HCV、HBV、ParvoB19 食中毒検査 10 ・ノロウイルス 11 ・クドアセプテンプンクタータ 13 ・腸管出血性大腸菌（ベロ毒素（VT）遺伝子） 14 ・腸管出血性大腸菌（O 抗原型遺伝子） 15 ・サルモネラ、腸炎ビブリオ、セレウス菌、 ・カンピロバクター、リステリアモノサイトゲネス ・黄色ブドウ球菌 18 ・QuickPrimer（Real Time）シリーズ ・EBV、CMV、WNV 微生物推定解析 43 ・細菌、真菌 カスタム対応 46 ・リアルタイム PCR 検出系のカスタム設計 48 ・カスタム対応（酵素原料供給、製造） 核酸抽出 19 ・MORA シリーズ 50 ・DNA 簡易抽出 20 ・特殊細菌 Primer Set、Positive Control シリーズ 51 ・スピンカラム精製 衛生指標菌検査 装置 21 ・一般細菌 54 ・リアルタイム PCR 装置 22 ・腸内細菌科菌群 55 ・サーマルサイクラー 品種判別 技術紹介 23 ・コメ判別 56 ・PCR キャリーオーバー防止 25 ・肉種判別 57 ・EMA-PCR 法（グラム陽性菌、グラム陰性菌） 水質検査 遺伝子検出について 27 ・レジオネラ（生菌遺伝子検査） 59 ・食品・環境検査における各種検査法について 30 ・クリプトスポリジウム属、ジアルジア 60 ・遺伝子検出・遺伝子検査の用途 ヒト感染症検査 ・PCR、qPCR の原理 61 ・蛍光検出法 32 ・呼吸器感染症起因菌・起因ウイルス 33 ・B 群溶血性レンサ球菌（GBS） 62 遺伝子検査を始めるにあたって 34 ・サイトメガロウイルス、EB ウイルス 64 製品リスト 35 ・ヒトパピローマウイルス 動物感染症 37 ・ウシ白血病ウイルス 37 ・鳥インフルエンザウイルス 38 ・サルモネラ血清型 -3- 遺伝子検査キットカタログ 2015 年 9 月発行 検便検査 検出ターゲット ● ノロウイルス ● 腸管系病原細菌 （腸管出血性大腸菌、サルモネラ、赤痢菌） タカラバイオの検便検査システム 試薬キット ・ オールインワンキットで すぐに検査可能 ・ 内部コントロールにより 偽陰性をモニター ・ チューブの蓋の色分けで 取り違いを防止 判定ツール ・ 客観的な判定をサポート ・ 出力ファイルをそのまま 読み込み可能 ・ ひと目で判る判定結果 リアルタイムPCR 装置 ・ 日本語ソフトウェアの搭載 で楽々操作 ・ 検査用途に適した純正の チューブをご用意 システムならではの安心サポート！ 遺伝子検査キットカタログ -4- 検便検査 リアルタイム PCR 「リアルタイム PCR 法」によるノロウイルス検便検査用キット TaKaRa ノロウイルス GⅠ/GⅡ検出キット 「大量調理施設衛生管理マニュアル」に則った 「リアルタイム PCR 法」での検査が可能！ ターゲット遺伝子 リアルタイム PCR 装置の 蛍光検出フィルター GI 遺伝子 FAM GII 遺伝子 ROX インターナルコントロール Cy5 製品コード 容 量 価格（税別） RR255A 100回 ¥128,000 ＜キットの内容＞ 簡易抽出試薬 ● 1. Lysis Buffer（NV） リアルタイム PCR 試薬 ○ ● ● ● 2. 3. 4. 5. PCR Buffer（NV） Enzyme Mix（NV） NV Primer/Probe Mix NV Positive Control DNA 大量調理施設衛生管理マニュアル（※1）に記載された 「リアルタイム PCR 法」による検査を提供 可能！ ● ※1 「大量調理施設衛生管理マニュアル」 （平成 9 年 3 月 24 日衛食第 85 号別添 最終改正：平成 25 年10 月 22 日付け 食安発1022 第10 号） ● 厚生労働省通知法（※2）に収載されたプライマー・プローブ配列を採用した検査キット ※2 ｢ノロウイルスの検出法について｣ 厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課（平成15 年11月 5 日付け 食安監発第1105001号別添 最終改正：平成 25 年10 月 22 日付け食安監発1022 第1号） ● 1反応で GIとGIIをタイピング！ 融解曲線分析不要のかんたん判定 GI（FAM）、GII（ROX）、インターナルコントロール（Cy5）を1チューブで検出します。 プローブ検出のため、融解曲線分析は不要で、増幅曲線の立上り（Ct 値）のみのクリアな判定ができます。 判定イメージ IC（Cy5） GⅡ （ROX） GⅠ （FAM） 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 -5 80 25 蛍光強度（Primary Curve） 20 蛍光強度（Primary Curve） 蛍光強度（Primary Curve） 70 60 50 15 40 10 30 20 10 0 -10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 サイクル数 5 0 -5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 サイクル数 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 サイクル数 GI（FAM）、GII（ROX）の増幅曲線を確認します。 ともに増幅が無い場合は IC（Cy5）の増幅結果を確認し、偽陰性をモニターします。 融解曲線分析 Fluorescence（1st Derivative） 3500 1チューブで 3 つのターゲットを同時検出！ 3000 GⅠ （FAM） 2500 2000 1500 1000 GⅡ （ROX） 500 0 -500 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 Temperature 融解曲線分析による判定は不要 -5- 遺伝子検査キットカタログ IC（Cy5） 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L56 ● RNA 精製は不要。鋳型の調製は簡単な前処理だけで OK カラムによる 精製は不要 Lysis Buffer (NV) を加えて 90℃、5 分の熱処理を行うだけで、鋳型の簡易調製が 完了します。 1ステップリアルタイム RT-PCR の採用により2 時間以内に結果判定！ 即日報告の可能性が広がります。 ● 1ステップリアルタイム RT-PCR の採用により、反応時間が短縮されました。 検体添加後の反応時間は、約 90 分です。 サンプル＆反応液の調製＋反応時間＋判定を含めても最短で 2 時間以内の結果報告が可能となりました。 検体 簡易抽出 1ステップリアルタイム RT-PCR 解析 ■実験例 ： 陽性検便検体の段階希釈反応 GI 陽性検便検体と GII 陽性検便検体を混合し、1/10 の希釈率で 6 段階に希釈したサンプルを調製した。TaKaRa ノロウイルス GI/GII 検出キットを用いてリアルタイム PCR 検出を実施した結果、濃度依存的な検出を確認することができた。 GⅠ 55 （FAM） GⅡ （ROX） 55 50 50 60 1 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 10 -5 Fluorescence（Primary Curve） Fluorescence（Primary Curve） 60 45 45 40 40 35 35 30 30 25 25 20 20 15 15 10 10 5 5 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 Cycles Cycles （Thermal Cycler Dice Real Time System 使用） ●● 検査の流れ ●● 1. 検便懸濁液からの簡易抽出 2. 試薬調製・検出 3. 結果判定 90℃ 5 分 インキュベート 5 ∼ 10% 検便懸濁液 （遠心済） 検便懸濁液上清 5 µl ＋ Lysis Buffer（NV） 20 µl 約10 分∼ インキュベート後の溶液を PCR 反応液に添加 約 90 分∼ 【判定ツールについて】 本製品での取得データから、陽性または陰性を判定する解析ツールをご用意しています。 詳しくは、弊社までお問い合わせください。 遺伝子検査キットカタログ -6- 検便検査 PCR／融解曲線分析 検便プール検体からの迅速スクリーニング検査に TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット 腸管出血性大腸菌、サルモネラ、赤痢菌由来の 遺伝子スクリーニングを最短約 37 分で！ 製品コード 容 量 価格（税別） RR139A 200回 ¥150,000 ＜キットの内容＞ 検出対象菌種 ターゲット遺伝子 腸管出血性大腸菌 （EHEC） VT1/2 遺伝子 サルモネラ属菌 遺伝子 赤痢菌 遺伝子 PCR 試薬 ● 1. Reaction Mix Fast ● 2. 100× SYBR Green I（※1） ● 3. Primer Mix (VT/ipaH/invA) ○ 4. dH 2O Positive Control ● 1. VT Positive Control ● 2. ipaH Positive Control ● 3. invA Positive Control インターナル コントロール（IC） （PCR 阻害の有無の確認） ※1： 本製品は、ライフテクノロジーズから のライセンスの下に製造販売していま す。本製品は、ヒト由来検体（検便検 体）を利用した受託サービスに利用す ることができます。 ● 腸管出血性大腸菌、サルモネラ、赤痢菌の遺伝子を、1チューブでマルチプレックス PCR ● PCR 増幅産物を SYBR® Green I による融解曲線分析で検出 自社開発の高速 PCR 試薬を採用し、反応時間を最速 37 分まで短縮！ スクリーニング検査の迅速化を実現しました。 ● ● DNA 精製不要。鋳型の調製は、熱処理と遠心だけの簡易抽出で OK！ 検便懸濁液を、95℃ 5 分の熱処理後、8,000∼15,000 rpmで 5 分間遠心するだけで完了です。 ● 便利なオールインワンキット！ 検便懸濁液さえ準備すれば検査できます。 ■実験例 ： Thermal Cycler Dice® Real Time System による検出例 検出対象遺伝子は、VT 遺伝子（EHEC）、 遺伝子（サルモネラ）、 遺伝子（赤痢菌）の三種類。 PCR 阻害の有無を確認するためのインターナルコントロールも同時に検出します。 腸管出血性大腸菌 インターナルコントロール サルモネラ 赤痢菌 検出対象菌種 Tm 値（※2） EHEC 79.5∼81.5℃ サルモネラ属菌 82.8∼84.8℃ 赤痢菌 84.6∼86.6℃ インターナルコントロール 72.1∼74.1℃ ※2：Thermal Cycler Dice Real Time System で測定した場合の参考値 -7- 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L46、L65、L66 遺伝子検査のメリット ◆ その日のうちに陰性報告が可能 ◆ 培養検査における目視判定の手間を削減 ◆ 培地の廃棄コスト削減 ■ ■ 遺伝子検査によるスクリーニング ■ ■ ＜1日目＞ 50 検体プールの検便懸濁液 95℃ 5 分 約10 分 8,000∼15,000 rpm 5 分間遠心 約 37 分 マルチプレックス PCR＋融解曲線分析 陰性（プール検体） 「陰性」報告 陽性（プール検体） 分離培養 ＜2日目以降＞ 生化学的性状試験 ＋ 血清型試験 結果報告 検便検査の受託サービスにも 利用可能です！ Thermal Cycler Dice® Real Time System III なら、反応時間は約 37 分！ ● 基本表示もレポート出力も日本語の 「完全日本語サポート」 ● 検査現場での使いやすさを追求した 「食品環境検査用ソフトウェア」搭載 ● 出力ファイルは、 「専用解析ツール」でらくらく解析！ 装置の詳細は 54 ページをご覧ください。 遺伝子検査キットカタログ -8- 食品検査 検出ターゲット 食中毒 衛生指標菌 ● ノロウイルス ● 一般細菌 ● 腸管出血性大腸菌 ● 腸内細菌科菌群 ● カンピロバクター 品種判別 ● サルモネラ ● 腸炎ビブリオ ● コメ品種 ● セレウス菌 ● 肉種 ● 黄色ブドウ球菌 ● リステリアモノサイトゲネス ● クドアセプテンプンクタータ ● その他 検査フローのイメージ リアルタイム PCR 解析 ・食品 ・前培養液 ・コロニー など -9- 遺伝子検査キットカタログ DNA 調製 エンドポイント PCR 解析 食中毒検査 リアルタイム PCR 通知法収載のプライマー・プローブ配列によるノロウイルス検出キット TaKaRa qPCR Norovirus（GⅠ/GⅡ）Typing Kit 通知法に収載された プライマー・プローブ配列で定量解析！ ● 製品コード 容 量 価格（税別） RR250A 50回 ¥90,000 RR250B 250回 ¥360,000 厚生労働省からの通知法（※）と相関性の高い定量解析が可能 公定法で用いられるコントロールプラスミド DNA と同等の定量結果が得られることを確認しています。 ● コンポーネントは使いやすいプレミックス 面倒な試薬調製は一切不要、初心者でも簡単に使用できます。 ● 逆転写反応はわずか15 分で完了！ 独自開発の逆転写酵素の採用により、反応時間の短縮が実現しました。 本製品は、群馬県衛生環境研究所との共同研究の成果に基づき製品化しました。 ※厚生労働省 医薬食品局 食品安全部 監視安全課より通知された「ノロウイルスの検出法について」 （食安監発第1105001号） （最終改正：平成 25 年10 月 22 日食安監発1022 第1号） 検体 RNA 調製 逆転写反応 （約15 分） リアルタイム PCR 解析 逆転写∼qPCR に要する時間は約100 分！ ■実験例 ： Positive Control DNAを用いた検量線の作成 【方法】 本キットに含まれる GI / GII Positive Control DNA からそれぞれ調製した 段階希釈液を用いて検量線を作成した。 GI 検出系 GII 検出系 増幅曲線 増幅曲線 検量線 検量線 R2：0.998 Eff = 110.5％ 逆転写試薬 1. 5×PrimeScript Buffer（NV） 2. PrimeScript RT Enzyme Mix（NV） 3. Random 6 mers リアルタイム PCR 試薬 4. （NV） （2×） 5. GI Primer Mix 6. GII Primer Mix 7. GI Probe Mix 8. GII Probe Mix 9. ROX Reference Dye（50×） 10. ROX Reference Dye II（50×） 11. RNase Free dH 2O 定量用 Positive Control DNA 12. GI Positive Control DNA （4×10 6 copies/µl） 13. GII Positive Control DNA （4×10 6 copies/µl） 14. EASY Dilution（for Real Time PCR） R2：0.999 Eff = 105.1％ （Thermal Cycler Dice Real Time System 使用） 【結果】 GI / GII 遺伝子とも、10 copies ∼1×10 7 copies の範囲で、精度よく検量 線が作成できることを確認しています（25 µl 反応系、n=3）。 通知法で求められる定量試験と同等の精度での解析にご利用いただけます。 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：A6、L56 ＜キットの内容＞ 【注】検便サンプルからの検出には、5∼6 ページ 掲載の TaKaRa ノロウイルス（GI/GII）検出 キット（製品コード RR255A）をご利用くだ さい。 遺伝子検査キットカタログ -10- 食中毒検査 リアルタイム PCR 通知法収載の配列によるクドアセプテンプンクタータ検出キット Kudoa septempunctata（18S rRNA）qPCR Detection Kit 通知法に収載された プライマー・プローブ配列で定量解析！ ● 厚生労働省からの通知法（※）と相関性の高い定量解析が可能 ● コンポーネントは使いやすいプレミックス 製品コード 容 量 価格（税別） RR260A 50回 ¥66,000 面倒な試薬調製は一切不要、初心者でも簡単に使用できます。 ● キット添付の Positive Control DNAで定量可能 ※厚生労働省 医薬食品局 食品安全部 監視安全課長通知（平成 23 年 7 月11日 ) 「 の検査法について（暫定版）」 （食安監発 0711第1号） 検体 DNA 調製 リアルタイム PCR 解析 ■実験例：Positive Control DNAを用いた検量線作成例 ＜キットの内容＞ キット添付の Kudoa Positive Control を EASY Dilution (for Real Time PCR) で 段階希釈し、2.5×10 7、2.5×10 5、2.5×10 3、2.5×101 copies/µl の溶液を用いて 検 量 線を 作成しました。各反 応 系で の 最 終コピー 数はぞ れぞ れ1×10 8 、1×10 6 、 1×10 4、1×10 2 です。 増幅曲線 検量線 （Thermal Cycler Dice Real Time System 使用） リアルタイム PCR 試薬 1. （Tli RNaseH Plus） 2. Kudoa Primer/Prove Mix 3. dH 2O 4. ROX Reference Dye 5. ROX Reference Dye II 定量用 Positive Control DNA 6. Kudoa Positive Control （2.5×10 7 copies/µl） 7. EASY Dilution （for Real Time PCR） 検査法フローチャート（通知法より引用） A. スクリーニング法として、リアルタイム PCR を行う場合 （注） 遺伝子検査法 顕微鏡検査 総合判定 陽性 陽性 陽性 ヒラメ検体 （kudoa rDNA コピー数10 7 以上を スクリーニング陽性とする） 陰性 陰性 国立衛生研に送付 陰性 【注】試験法については、 「A. リアルタイム PCR を用いた遺伝子検査法をスクリーニングに使用する方法」および「B. 顕微鏡検査を行 い遺伝子検査法を実施する方法」が併記されています。 -11- 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：A6 食中毒検査 リアルタイム PCR 便利なオールインワン検査キットシリーズ Cycleave®PCR Kit シリーズ リアルタイム PCR 検査に必要なコンポーネントがすべて含まれたオールインワンキットです。通知法収載の腸管出血性大腸菌シリーズ をはじめ、多数のラインナップを取り えています。 ● プレミックス試薬なので面倒な試薬調製は一切不要。初心者でも簡単に使用できます！ ● 品質保証されたキットなので、すぐに検査ができます。 キットとして性能保証されており、試薬管理の手間が省けます。 ● インターナルコントロールで自動的に偽陰性をチェック！ ターゲット遺伝子とは無関係な配列を有する DNA を同時に増幅し、PCR 阻害の有無をチェックできます。 FAM ROX ターゲット ● インターナルコントロール FAMとROXを検出できる幅広い装置で使用可能 Thermal Cycler Dice ® Real Time System シリーズ（タカラバイオ）、Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Life Technologies）などの幅広いリアルタイム PCR 装置で使用できます。 ● 反応時間はわずか 90 分！ 食中毒菌シリーズはすべて同じ反応条件なので、複数のキットで一度に検査することができます。 検体 DNA 調製 検 出 対 象 ベロ毒素 遺伝子 腸管出血性 大腸菌 （EHEC） リアルタイム PCR 解析 製 品 名 Cycleave ®PCR O-157（VT gene）Screening Kit Ver.2.0 ★ 価 格 製品コード 容 量 CY217A 50回 ¥52,000 CY217B 100回 ¥96,000 （税別） Cycleave ®PCR O-157（VT1/VT2）Typing Kit CY222 50回＊1 ¥69,000 Cycleave PCR EHEC（O157/O26）Typing Kit ★ CY237 20回 ¥28,000 Cycleave ®PCR EHEC（O111/O121）Typing Kit ★ CY238 20回 ¥28,000 Cycleave PCR EHEC（O103/O145）Typing Kit ★ CY239 20回 ¥28,000 Cycleave ®PCR EHEC（O165）Typing Kit CY241 50回 ¥69,000 サルモネラ Cycleave PCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0 CY205 50回 ¥69,000 腸炎ビブリオ Cycleave ®PCR Vibrio（tdh gene）Detection Kit CY220 50回 ¥69,000 セレウス Cycleave PCR Bacillus cereus（CRS gene）Detection Kit CY221 50回 ¥69,000 リステリアモノサイトゲネス Cycleave PCR Listeria monocytogenes（inlA gene） Detection Kit CY223 50回 ¥69,000 カンピロバクター Cycleave ®PCR Campylobacter（jejuni／coli）Typing Kit CY225 50回＊2 ¥69,000 黄色ブドウ球菌 Cycleave PCR Staphylococcus aureus（DnaJ gene） Detection Kit CY228 50回 ¥69,000 ® O 抗原型 遺伝子 ® ® ® ® ® ★：通知法収載 ＊1 VT1、VT2 各 25 回 ＊2 、 掲載 ページ 13 14 14 15 各 25 回 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください： L4、L34（CY221のみ）、L42（CY225 のみ） 遺伝子検査キットカタログ -12- 食中毒検査 リアルタイム PCR 腸管出血性大腸菌（EHEC）ベロ毒素（VT）遺伝子検出キット Cycleave®PCR O-157（VT gene）Screening Kit Ver.2.0 ● 厚生労働省より通知の方法に収載 本製品は、厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知（平成 26 年 11 月 20 日） 「 腸管出血性大腸菌 O26 、O103 、O111 、O121 、O145 及び O157 の検査法について」 （食安監発 1120 第 1 号）に収載されました。 ● 1チューブでインターナルコントロールによる偽陰性チェック が可能 反応測定イメージ ● IC （ROX） VT 遺伝子 （FAM） 抽出試薬も含んだオールインワンキット！ アルカリ熱抽出試薬も添付。検体さえ準備すれば検査ができます。 ● FAMとROXを検出できる幅広い装置で使用可能 通知法収載 製品コード 容 量 価格（税別） CY217A 50回 ¥52,000 CY217B 100回 ¥96,000 ＜キットの内容＞ リアルタイム PCR 試薬 ● 1. 2×Cycleave Reaction Mixture ● 2. VT Primer/Probe Mix（FAM, ROX） ● 3. dH 2O アルカリ熱抽出試薬 ● 4. NaOH Solution（50 mM） ○ 5. Tris-HCl Buffer pH7.0（1 M） ● 6. dH 2O（for Dilution） Positive Control DNA ● 7. VT1 Positive Control ● 8. VT2 Positive Control ＜インターナルコントロール（IC）による偽陰性チェック＞ IC （ROX） VT 遺伝子 （FAM） 培養液 反応阻害なし DNA 抽出 VT 陰性 VT 遺伝子検査 IC （ROX） VT 遺伝子 （FAM） 陰性 終了 陰性 終了 陽性 反応阻害あり Ｏ抗原遺伝子検査 判定不能 陽性 ◆VT 遺伝子検査の DNA 抽出には・・・ ・アルカリ熱抽出法 ・カラム精製法 通知法収載 分離培養法 通知法収載 結果判定 食品の増菌培養液からの精製に！ − NucleoSpin® Tissue（製品コード 740952.10/.50/.250） 通知法収載 食品衛生検査指針 収載 ＊ 食品衛生検査指針 微生物編 2015（2015 年 3 月末発刊） ＊ ★専用プロトコールをご用意しています。 「腸管出血性大腸菌 O26、O103、O111、O121、O145 及び O157 の検査法について」 厚生労働省医薬食品局 食品安全部監視安全課長通知（食安監発 1120 第 1 号）よ り引用 チョコレートなど、抽出が困難な食品からの精製に！ − NucleoSpin® Food（製品コード 740945.10/.50/.250） NucleoSpin 各種はマッハライ・ナーゲル社の製品です。 -13- 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4 食中毒検査 リアルタイム PCR 腸管出血性大腸菌（EHEC）O 抗原型遺伝子タイピングキット Cycleave®PCR EHEC（O157/O26）Typing Kit Cycleave®PCR EHEC（O111/O121）Typing Kit Cycleave®PCR EHEC（O103/O145）Typing Kit ● 厚生労働省より通知の方法に収載 主要な 6 種をタイピングできる試薬キットをラインナップ 1 チューブで 2 種の O 抗原型遺伝子を判定できます。組み合わせてお使いいただ くことで主要な O 抗原型遺伝子のタイピングが可能です。 ● 通知法収載 通知法収載 製品コード 容 量 本製品は、厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知（平成 26 年 11月 20 日） 「腸管出血性大腸菌 O26、O103、O111、O121、O145 及び O157 の検査 法について」 （食安監発 1120 第 1 号）に収載されました 。 ● 通知法収載 価格（税別） CY237 20回 ¥28,000 CY238 20回 ¥28,000 CY239 20回 ¥28,000 ※ O16 5 を検 出する C yc l e ave ® P C R EHEC（O165）Typing Kit（製品コー ド CY241：50 回 ￥69,000）もご用意し ています。 FAMとROXを検出できる幅広い qPCR 装置で使用可能 ＜キットの内容： 製品コード CY237＞ 例）Cycleave PCR EHEC（O157/O26）Typing Kit ® リアルタイム PCR 試薬 ● 1. 2×Cycleave Reaction Mixture ● 2. O157/O26 Primer/Probe Mix ○ 3. dH 2O Positive Control DNA O26 O157 （ROX） （FAM） ● 4. O157 Positive Control ● 5. O26 Positive Control ○ 6. EASY Dilution （for Real Time PCR） O26 O157 （ROX） （FAM） 陽性 陰性 ◆O 抗原型遺伝子検査の DNA 抽出には・・・ ・アルカリ熱抽出法 ・カラム精製法 食品の増菌培養液からの精製に！ − NucleoSpin® Tissue（製品コード 740952.10/.50/.250） ★専用プロトコールをご用意しています。 チョコレートなど、抽出が困難な食品からの精製に！ − NucleoSpin® Food（製品コード 740945.10/.50/.250） NucleoSpin 各種はマッハライ・ナーゲル社の製品です。 製 品 名 製品 コード ターゲット 蛍光検出 遺伝子 波長 Cycleave ®PCR EHEC（O157/O26） Typing Kit CY237 O157 FAM O26 ROX Cycleave ®PCR EHEC（O111/O121） CY238 Typing Kit O111 FAM O121 ROX Cycleave ®PCR EHEC（O103/O145） CY239 Typing Kit O103 FAM O145 ROX O165 FAM Cycleave ®PCR EHEC（O165） Typing Kit CY241 ベロ毒素遺伝子（VT1/VT2 遺伝子）のタイピングには・・ Cycleave®PCR O-157（VT1/VT2）Typing Kit インターナルコントロールによる偽陰性をモニターしながら、VT1/VT2 遺伝子の タイピングが可能です。 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4 製品コード 容 量 CY222 各25回 価格（税別） ¥69,000 遺伝子検査キットカタログ -14- 食中毒検査 リアルタイム PCR サルモネラを検出 Cycleave®PCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0 ほとんどすべてのサルモネラ菌が保有している侵入性因子関連遺伝子 として、リアルタイム PCR で検出します。 をターゲット 製品コード CY205 容 量 50回 価格（税別） ¥69,000 腸炎ビブリオを検出 Cycleave®PCR Vibrio（tdh gene）Detection Kit 腸炎ビブリオの耐熱性溶血毒遺伝子（ で検出します。 遺伝子）をターゲットとして、リアルタイム PCR 製品コード CY220 容 量 50回 価格（税別） ¥69,000 セレウリド産生性セレウス菌を検出 Cycleave®PCR Bacillus cereus（CRS gene）Detection Kit 分離培養培地から得られたセレウリド合成酵素（CRS）遺伝子をターゲットとして、リアル タイム PCR で迅速かつ確実に検出します。 製品コード CY221 容 量 50回 価格（税別） ¥69,000 カンピロバクター ジェジュニ／コリをタイピング Cycleave®PCR Campylobacter（jejuni/coli）Typing Kit カンピロバクター属菌の Cytolethal distending toxin 遺伝子（ ニット遺伝子（ gene）をターゲットとして、 、 び同定を行います。 genes）の C サブユ の 2 菌種の検出およ 製品コード 容 量 CY225 各25回 価格（税別） ¥69,000 リステリアモノサイトゲネスを検出 Cycleave®PCR Listeria monocytogenes（inlA gene） Detection Kit が細胞内に侵入する際に関与する分子 Internalin A（ ） をコードする遺伝子配列領域をターゲットとして 、リアルタイム PCR で検出を行います。 製品コード CY223 容 量 50回 価格（税別） ¥69,000 黄色ブドウ球菌を検出 Cycleave®PCR Staphylococcus aureus（DnaJ gene） Detection Kit ハウスキーピング遺伝子の1つであり、菌種間でも多様性を持つ DnaJ 遺伝子をターゲッ トとして、黄色ブドウ球菌をリアルタイム PCR で検出します。 CY228 容 量 50回 価格（税別） ¥69,000 ● 食中毒検査用 Cycleave®PCR シリーズはすべて同じ反応条件なので、複数の項目を一度に検査可能！ ● インターナルコントロールで自動的に偽陰性をチェック！ FAM ターゲット ● -15- 製品コード ROX インターナルコントロール プレミックス試薬なので、初心者でもかんたん！ 遺伝子検査キットカタログ ・2×CycleavePCR Reaction Mix ・dH2O ・各 Primer/Probe Mix（5×） ・Positive Control DNA 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4、L34（CY221のみ）、L42（CY225 のみ） 食中毒検査 PCR 腸管出血性大腸菌（EHEC）ベロ毒素（VT）遺伝子検出キット ※各製品の価格、容量については 67ページ（裏表紙）の製品一覧をご確認ください。 One Shot PCR Kit シリーズ 腸管出血性大腸菌（EHEC）ベロ毒素遺伝子の検出とタイピングを簡便かつ迅速に行うための One Shot PCR キットです。 PCR に必要な試薬全てが 0.2 ml PCR tube に分注されており、サンプル DNA を加えるだけで PCR を行うことができます。 製 品 名 製品に 含まれる プライマー 特 長 （別売り製品 コード） O-157（ベロ毒素遺伝子） One Shot PCR Screening Kit Ver.2 サンプルを加えるだけの Ready-to-Useタイプ 検出できる遺伝子 ベロ毒素 ベロ毒素 1型 2型 遺伝子 遺伝子 EVC-1/2 （S008） VT1 VT2 ターゲット DNA 増幅 サイズ ベロ毒素 2 型の変異型遺伝子 VT2vha VT2vhb VT2vp1 171 bp （製品コード RR102A） O-157（ベロ毒素 1型、 2 型遺伝子）One Shot PCR Typing Kit Ver.2 （製品コード RR106A） 1型 2 型の判別が可能な VT1/VT2 用 Ready-to-Useタイプ プライマー VT1 349 bp VT2 VT2vha VT2vhb VT2vp1 VT2vp2 112 bp PCR Kit シリーズ One Shot PCR Kit 以外にも PCR 法を用いた迅速なベロ毒素遺伝子検出キットを用意しています。 特 長 通知法収載 製 品 名 EHEC（VT gene）PCR Screening Set インターナルコ ントロールを ★ 含んだキット O-157（ベロ毒素 1 型、2 型 遺伝子）PCR Typing Set 毒素の1型、 2 型の判別を 安価に （製品コード RR120A） （製品コード RR105A） ★ O-157（ベロ毒素 1 型、2 型 検出できる 変異型遺伝子が 遺伝子）PCR Typing Set Plus 増えてさらに （製品コード RR122A） O-157& ベロ毒素遺伝子 同時検出キット （製品コード RR107A） 便利 O-157および 毒素の 1型、 2 型を同時に 検出 製品に 含まれる プライマー ベロ毒素 ベロ毒素 1型 2型 （別売り製品 遺伝子 遺伝子 コード） EVC-1/2 （S008） VT1 EVT-1/2 （S006） VT1 EVS-1/2 （S007） EVT-1/2 （S006） VT2 検出できる遺伝子 O-157 由来 遺伝子 ベロ毒素 2 型の変異型遺伝子 VT2vha VT2vhb VT2vp1 171 bp 349 bp VT2 VT2vha VT2vhb VT2vp1 404 bp VT1 EVS-1/ EVC-2 349 bp VT2 VT2vha VT2vhb VT2vp1 VT2vp2 O-157 由来 遺伝子用 プライマー VT1/VT2 用 プライマー ターゲット DNA 増幅 サイズ 112 bp ○ VT1 457 bp 349 bp VT2 VT2vha VT2vhb VT2vp1 VT2vp2 112 bp ★：厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課長通知 （平成 26 年 11 月 20 日） 「腸管出血性大腸菌 O26、O103、O111、O121、O145 及び O157 の検査法について」 （食安監発 1120 第 1 号） 腸管出血性大腸菌（EHEC）O 抗原型遺伝子検出キット EHEC（O antigens）PCR Typing Kit ● 製品コード RR133A 主要な 7 種の O 抗原型遺伝子をマルチプレックス PCR でタイピング 1チューブで O157、O26、O111、O121、O103、O145、O165 をタイピング ● ベロ毒素1型、ベロ毒素 2 型、 遺伝子も同時に検出 ※ 本キットの開発には、宮崎大学農学部畜産草地科学科衛生微生物学分野 井口純先生にご協力いた だききました。 容 量 50回 価格（税別） ¥77,000 O165 O103 O111 O157 O26 O121 O145 遺伝子検査キットカタログ -16- 食中毒検査 PCR セレウリド産生性セレウス菌の検出キット Bacillus cereus（CRS gene）PCR Detection Kit 分離培養培地から得られたセレウス菌およびその類似菌（例： 、 など）とセレウリド産生性セレウス菌を迅速かつ確実に検出するための PCR キットです。 ● ● 製品コード RR132A 容 量 50回 ターゲット遺伝子 価格（税別） ¥88,000 増幅サイズ 偽陰性チェックが可能 セレウリド合成酵素遺伝子（CRS） 426 bp インターナルコントロールを含んだマルチプレックス検出系 レシチナーゼ遺伝子（LE） 227 bp インターナルコントロール遺伝子（IC） 134 bp コンポーネントはプレミックス PCR が初めてでもスムーズに使用できます。 ＜キットの内容＞ ■検出例 M 1 2 3 4 1: 2: 3 : 嘔吐毒素（セレウリド）非産生性 4 : 嘔吐毒素（セレウリド）産生性 M : 100 bp Ladder Marker ←426 bp ←227 bp ←106 bp 低分子分析用アガロースを使用 1. 5×PCR Premix 2. CRS Primer Mixture （セレウリド合成酵素遺伝子検出用） 3. LE Primer Mixture （レシチナーゼ遺伝子検出用） 4. I.C. Primer Mixture （インターナルコントコール検出用） 5. CRS Positive Control Template 6. LE Positive Control Template ※本キットの製品化には、名古屋市衛生研究所 安形則雄先生に ご協力いただきました。 カンピロバクターの迅速な検出・同定キット Campylobacter（cdt gene）PCR Detection and Typing Kit カンピロバクター属菌が保有する Cytolethal distending toxin 遺伝子（ genes）の B サブユニット遺伝子（ gene）または C サブユニット遺伝子（ gene）をターゲット として、PCR により 、 、 のタイピングを行うためのキットです。 ● 世界初、 をタイピング！ ● コンポーネントはプレミックス PCR が初めてでもスムーズに使用できます。 ■検出例 製品コード 容 量 価格（税別） RR134A 50検体 ¥88,000 ＜キットの内容＞ 1. HS（2×conc.） 2. Primer Mix 3. Primer Mix 4. dH 2O 5. Positive Control 6. Positive Control 7. Positive Control ※本キットの製品化には、大阪府立大学生命環境科学研究科 獣 医国際防疫学研究室 山崎伸二先生および扶桑薬品工業株式会 M -17- 1 2 3 M 1 2 3 遺伝子検査キットカタログ M 鋳型：ゲノム DNA（5 pg） 1: 2: 3: M : 100 bp ラダー 社のご協力をいただきました。 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L34（RR132A）、L42（RR134A） 食中毒検査 リアルタイム PCR Tm 解析による食中毒菌関連遺伝子のスクリーニング用プライマー QuickPrimer（Real Time）シリーズ 主な食中毒病原菌および下痢性病原菌を、SYBR ® Green I を用いたインターカレーター法によるリアルタイム PCR で検出するためのプ ライマーシリーズです。各プライマーは、特定の菌または病原因子の遺伝子の極めて特異的な配列部分に相補するよう設計されています。 ● Ct 値と Tm 値に基づいて結果を判定 検体 サンプルの増幅曲線より得られた Ct 値、ならびに融解曲線のパターンおよび Tm 値が、 判定基準に一致するかどうかで目的遺伝子検出の判定を行います。 ● SYBR® ™（Tli RNaseH Plus） （製品コード RR420A）と組み合せて使用 専用試薬との組み合わせで至適化されています。 ● DNA 抽出 豊富なラインナップから自由に組み合せて使用可能 反応条件は全て同一なので、自由な組み合わせで使用できます。 ● 反応時間はわずか約 90 分 ● 1 反応あたり約 240 円なので、安価なスクリーニング検出に好適 リアルタイム PCR （融解曲線分析） サンプルの増幅曲線より得られた Ct 値、融解曲 線のパターンおよび Tm 値が、判定基準に一致す るかどうかで目的遺伝子検出の判定を行う。 Thermal Cycler Dice ® Real Time Systemでの 解析例 A： 陽性コントロール DNA B： 陰性コントロール（滅菌蒸留水） ■病原因子遺伝子検出用 製 品 名 製品コード QuickPrimer InvE 遺伝子 QuickPrimer IpaB 遺伝子 QuickPrimer IpaH 遺伝子 QuickPrimer Shiga I 遺伝子 QuickPrimer Shiga II 遺伝子 QuickPrimer LT 遺伝子 QuickPrimer STI 遺伝子 QuickPrimer Tdh 遺伝子 QuickPrimer CdtA 遺伝子 QuickPrimer InvA 遺伝子 QuickPrimer Enterotoxin （Clostridium perfringens）遺伝子 QuickPrimer Nhe 遺伝子 MR101 細胞侵入性因子 InvE 遺伝子 検出対象遺伝子 MR401 MR102 細胞侵入性因子 IpaB 遺伝子 MR402 MR103 細胞侵入性因子 IpaH 遺伝子 MR401 MR104 志賀毒素（ベロ毒素）I 型 Shiga I 遺伝子 MR403 コントロール DNA MR105 志賀毒素（ベロ毒素）II 型 Shiga II 遺伝子 MR404 MR106 易熱性毒素 LT 遺伝子 MR405 製品コード MR401∼MR415 各 30 回 各 ¥11,000 MR107 MR109 ヒト耐熱性毒素 STI 遺伝子（STh 遺伝子） MR406 MR407 耐熱性溶血毒 Tdh 遺伝子 MR110 細胞膨張化致死毒素 CdtA 遺伝子 MR408 MR111 細胞侵入性因子 InvA 遺伝子 MR409 MR112 腸管毒 Enterotoxin 遺伝子 MR410 MR113 非溶血性腸管毒 Nhe 遺伝子 MR415 陽性コントロール ■病原菌遺伝子検出用 製 品 名 QuickPrimer Escherichia／Shigella group（16S rDNA） QuickPrimer Staphylococcus spp.（16S rDNA） QuickPrimer Clostridium perfringens（16S rDNA） QuickPrimer Yersinia spp.（16S rDNA） QuickPrimer Campylobacter spp.（16S rDNA） QuickPrimer Listeria spp.（16S rDNA） QuickPrimer Bacillus cereus group（16S rDNA） 製品コード 検出対象遺伝子 陽性コントロール MR201 16S rDNA 遺伝子 MR405 MR202 16S rDNA 遺伝子 MR411 MR203 16S rDNA 遺伝子 MR410 MR204 16S rDNA 遺伝子 MR412 MR205 16S rDNA 遺伝子 MR408 MR207 16S rDNA 遺伝子 MR414 MR208 16S rDNA 遺伝子 MR415 プライマーシリーズ 製品コード MR101∼MR208 各100 回 各 ¥13,000 ★専用解析ツール 便利な Tm 値自動判定ツール 「QuickPrimer 結果判定用エク セルシート」をウェブカタログ の製品ページでダウンロード できます。 ★Tm 値判定用ポジティブ コントロール DNA 各 QuickPrimer にそれぞれ専 用のポジティブコントロール DNA（製品コード MR401∼ MR415） を用意しています。 ※本製品は、岐阜大学大学院医学系研究科病原体制御学分野 教授 江崎孝行先生のご協力のもとに開発いたしました。 遺伝子検査キットカタログ -18- 食中毒検査 PCR 下痢性病原菌遺伝子スクリーニング用プライマーセット MORA-Primer Diarrheal Pathogens 8 連チューブの各ウェル（1∼8）に充填されたプライマーセットで PCR を行い、主要な病原菌を網羅的に検出します。 ウェル 1 2 3 4 5 6 7 8 病 原 菌 名 和 名 検 出 対 象 InvE（ 増幅サイズ 127 bp ） Enteroinvasive E. coli/Shigella 腸管侵入性大腸菌 / 赤痢菌 Enterotoxigenic E. coli 腸管毒素原性大腸菌（ETEC） Enterohemorrhagic E. coli／Shigella 腸管出血性大腸菌（EHEC） Enteroinvasive E. coli／Shigella 腸管侵入性大腸菌 / 赤痢菌 Enterohemorrhagic E. coli 腸管出血性大腸菌（EHEC） Vibrio parahaemolyticus 腸炎ビブリオ菌 Escherichia coli 腸管毒素原性大腸菌（ETEC） Vibrio cholerae コレラ菌 CT（ Yersinia group エルシニア属菌群 16S rDNA Campylobacter jejuni キャンピロバクター・ジェジュニ 107 bp Enteroinvasive E. coli／Shigella 腸管侵入性大腸菌 / 赤痢菌 117bp Salmonella spp. サルモネラ属菌 Enteroaggregative E. coli 腸管凝集性大腸菌 297 bp LT Shiga 1（ ） Shiga 2（ ） 376 bp 137 bp 272 bp 368 bp 171 bp ST1 494 bp ） 316 bp 422 bp 173 bp EAST1 製 品 名 製品コード 容 量 76311 各192 pmol（24 回分） ¥37,500 76312 各768 pmol（96 回分） ¥115,200 76511 10 回分 ¥26,000 MORA-Primer Diarrheal Pathogens MORA-DNA Diarrheal Pathogens 価格（税別） 食品病原菌遺伝子スクリーニング用プライマーセット MORA-Primer Food Pathogenes 8 連チューブの各ウェル（1∼8）に充填されたプライマーセットで PCR を行い、主要な病原菌を網羅的に検出します。 ウェル 1 2 3 4 5 6 7 8 病 原 菌 名 和 名 増幅サイズ Staphylococcus spp. ブドウ球菌群 16S rDNA 414 bp Clostridium perfringens ウェルシュ菌 16S rDNA 257 bp Vibrio parahaemolyticus 腸炎ビブリオ菌（溶血毒） Clostridium perfringens ウェルシュ菌 ( 腸管毒 ) Enterotoxin 230 bp Campylobactor jejuni キャンピロバクター 16S rDNA 107 bp Vibrio cholerae コレラ菌（下痢毒素） CT ( ) 494 bp Clostridium botulinum AB（F）group ボツリヌス菌群 AB(F) 型 16S rRNA 390 bp Listeria monocytogenes リステリア菌 16S rRNA 411 bp Bacillus cereus セレウス菌（非溶血性腸管毒） NHENT 152 bp Salmonella spp. サルモネラ菌（侵入因子） Bacillus cereus group セレウス菌群 16S rDNA 143 bp Escherichia／Shigella group 大腸菌／赤痢菌群 16S rDNA 413 bp Bacterial universal 細菌一般 16S rDNA 510 bp Fungal universal カビ一般 18S rDNA 380 bp 製 品 名 MORA-Primer Food Pathogens MORA-DNA Food Pathogens -19- 検 出 対 象 遺伝子検査キットカタログ Hemolysin ( ) 368 bp 422 bp 製品コード 容 量 76313 各192 pmol（24 回分） ¥37,500 76314 各768 pmol（96 回分） ¥115,200 76512 10 回分 ¥26,000 価格（税別） 食中毒検査 PCR ラインナップ豊富なプライマーシリーズ 特殊細菌検出用 Primer Set ™（製品コード R001A）、 ™ Hot Start Version（製品コード R007A）と組合わせて使用いただけます。 製 品 名 腸炎ビブリオ 毒素原生大腸菌 腸管出血性大腸菌 （EHEC） 黄色ブドウ球菌 コレラ 赤痢菌および腸管侵入性 大腸菌（EIEC） サルモネラ菌 ウェルシュ菌 ボツリヌス 製品コード 耐熱性溶血毒遺伝子検出用 Primer Set VPD-1&2 S001 耐熱性溶血毒類似毒素遺伝子（ 1）検出用 Primer Set VPS-1&2 S002 耐熱性溶血毒類似毒素遺伝子（ 1&2）検出用 Primer Set VPR-1&2 S028 LT 遺伝子検出用 Primer Set ELT-1&2 S003 STh 遺伝子検出用 Primer Set ESH-1&2 S004 STp 遺伝子検出用 Primer Set ESP-1&2 S005 VT1遺伝子検出用 Primer Set EVT-1&2 S006 VT2 遺伝子検出用 Primer Set EVS-1&2 S007 VT 遺伝子検出用 Primer Set EVC-1&2 S008 エンテロトキシンA 遺伝子検出用 Primer Set SEA-1&2 S009 エンテロトキシン B 遺伝子検出用 Primer Set SEB-1&2 S010 エンテロトキシン C 遺伝子検出用 Primer Set SEZ-1&2 S011 エンテロトキシン D 遺伝子検出用 Primer Set SED-1&2 S012 エンテロトキシン E 遺伝子検出用 Primer Set SEE-1&2 S013 毒素性ショック症候群毒素遺伝子検出用 Primer Set TST-1&2 S015 コレラ毒素遺伝子検出用 Primer Set VCT-1&2 容 量 価格（税別） 各 1,000 pmol 各 ￥33,000 各 1,000 pmol 各 ￥33,000 各 1,000 pmol 各 ￥33,000 各 1,000 pmol 各 ￥33,000 S014 1,000 pmol ￥33,000 遺伝子検出用 Primer Set INV-1&2 S016 遺伝子検出用 Primer Set IPA-1&2 S017 各 1,000 pmol 各 ￥33,000 遺伝子検出用 Primer Set SIN-1&2 S018 エンテロトキシン遺伝子検出用 Primer Set STN-1&2 S019 各 1,000 pmol 各 ￥33,000 ウェルシュ菌毒素遺伝子検出用 Primer Set CPE-1&2 S020 1,000 pmol ￥33,000 A 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BAS-1&2 S021 B 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BBS-1&2 S022 C 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BCS-1&2 S023 D 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BDS-1&2 S024 各 ￥34,000 E 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BES-1&2 S025 各 1,000 pmol F 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BFS-1&2 S026 G 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BGS-1&2 S027 ※S001∼S020, S028 は（株）島津製作所で製造されたものです。 製品内容： ・10×PCR Buffer 600 µl ・Primer F/R（19 pmol/µl） 各1,000 pmol ウェブカタログに下記の参考データ集を掲載しています。ご参照ください。 ★ SYBR ® Green I 検出によるリアルタイム PCR への応用 ★ UNG 処理によるキャリーオーバーコンタミネーションの防止 専用ポジティブコントロール 特殊細菌検出用 Positive Control Template 対応する 増幅 DNA 製品 Primer Set 製品名 (bp) コード （製品コード） 688 VPD（S001） S031 VP1 688 VPS（S002） S046 VP2 666 VPR（S028） 690 ELT（S003） S032 EC1 691 ESH（S004） 689 ESP（S005） S033 EC2 686 EVT（S006） 686 EVS（S007） S034 EC3 685 EVC（S008） 対応する 増幅 DNA 製品 Primer Set 製品名 (bp) コード （製品コード） 695 SEA（S009） S035 SE1 694 SEB（S010） 697 SEZ（S011） S036 SE2 695 SED（S012） 695 SEE（S013） S037 ST 694 TST（S015） 691 INV（S016） S038 SS 689 IPA（S017） S039 VC 670 VCT（S014） 689 SIN（S018） S040 SN 690 STN（S019） 対応する 増幅 DNA 製品 Primer Set 製品名 （bp） コード （製品コード） S041 CP 667 CPE（S020） 691 BAS（S021） S042 BS1 691 BBS（S022） 690 BCS（S023） S043 BS2 690 BDS（S024） 691 BES（S025） S044 BS3 691 BFS（S026） S045 BS4 668 BGS（S027） 容量： 各 50 µl（100 pg/µl） 価格： 各￥12,000（税別） 遺伝子検査キットカタログ -20- 衛生指標菌検査 リアルタイム PCR 「一般細菌数」の定量をその日のうちに Bacteria（tuf gene）Quantitative PCR Kit 細菌を対象とした PCR 検出系では16S rRNA 遺伝子を利用したものが知られ ていますが、菌種間でコピー数が異なるため、細菌数の正確な定量には適してい ません。 本キットでは、菌 種間での 保 存 性が 高く、染 色体上に低コピー（1または 2 コ ピー）で存在しているタンパク質伸長因子 Tu（ ）遺伝子を検出対象としている ため、広範囲な菌種を偏りなく測定することができます。 容 量 価格（税別） RR240A 100回 ¥65,000 ＜キットの内容＞ リアルタイム PCR 試薬 1. SYBR GC 2. TUF Primer Mix 3. dH 2O 4. ROX Reference Dye 5. ROX Reference Dye II Positive Control DNA 本キットの開発には、東京海洋大学 木村凡先生、高橋肇先生、ならびに東洋水産株式 会社 田中悠一郎氏にご協力いただきました。 ● 製品コード 6. TUF Positive Control 7. EASY Dilution（for Real Time PCR） その日のうちに結果判定 培養法では判定に 2∼4 日を要しますが、遺伝子検査はその日のうちに判定できます。 DNA 抽出 （約 30 分） キット添付の ポジコンによる定量 リアルタイム PCR 解析 （約 90 分） NucleoSpin Tissue （51ページ） 食材懸濁液 ● 試料液の調製 その日のうちに結果判定！ 標準寒天培地にて培養 （48 時間∼） コロニーの計数 3 日目 広範囲に検出できる遺伝子検査で自主検査の効率アップ 検体によって含まれる菌種は異なり、従来法では培地組成や培養温度を工夫する必要がありますが、菌種間での保存性が高 い「タンパク質伸長因子 Tu（ ）遺伝子＊」を対象とした遺伝子検査なら、一度に広範囲な細菌種を検出することができます。 ＊参考文献 Design of a new universal real-time PCR system targeting the tuf gene for the enumeration of bacterial counts in food. 2010 Apr;73（4）: 670-679. ● 遺伝子検査なら、食材の細菌汚染履歴も調査できます 例えば、加熱食品を対象とした細菌汚染履歴の調査にも活用できます。培養検査では不検出となる検体についても、過去 に細菌汚染があった場合には、遺伝子検査で検出することが可能です。 ■実験例：コピー数と菌数の相関について 【結果】 TSA 塗沫培養の結果（菌数； CFU/g）を横軸に、リアルタイム PCR の結果（コピー数； copies/g）を縦軸にプロットしたところ、TSA 塗沫培養とリアルタイム PCR の結果はよく相関していました。 なお、リアルタイム PCR では検体に含まれる死菌や培養で増殖しに くい菌種も検出している可能性があるため、リアルタイム PCR によ るコピー数の方が、TSA 塗沫培養による菌数よりも1∼2 オーダー 高めに算出される傾向にあったと考えられます。 10 Real Time PCR (log copies/g) 【方法】 野菜類 9 種、サラダ類（カット野菜含む）6 種、肉類 8 種について 10% 懸濁液を調製し、TSA 塗沫培養（30℃、48 時間）による菌数 測定と本製品によるリアルタイム PCR 解析を実施した。 8 6 野菜 4 サラダ類 肉類 2 0 標準線 0 2 4 6 8 10 TSA (log cfu/g) -21- 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L11、L46 衛生指標菌検査 リアルタイム PCR 「腸内細菌科菌群」の検出・定量をその日のうちに Enterobacteriaceae（rplP gene）Quantitative PCR Kit 本キットでは、リアルタイム PCR により、 （50S ribosomal protein L16） 遺伝子を検出対象として、腸内細菌科菌群を検出および定量します。従来法では 判定に 6 日間ほどを要しますが、リアルタイム PCR ならその日のうちに結果判 定が可能なため、自主検査の効率アップに有効です。 製品コード 容 量 価格（税別） RR241A 100回 ¥65,000 ＜キットの内容＞ 腸内細菌科菌群は、サルモネラ、赤痢菌、エルシニアのような腸管系食中毒菌も 含み、大腸菌群よりも広い腸管系食中毒菌をカバーしています。従来、食品衛生 における衛生指標菌としては、大腸菌群や糞便大腸菌群が対象とされてきました が、欧州連合（EU）の食品微生物基準では、大腸菌群に代わる衛生指標菌として 腸内細菌科菌群が汎用されています。 リアルタイム PCR 試薬 1. SYBR GC 2. rplP Primer Mix 3. dH 2O 4. ROX Reference Dye 5. ROX Reference Dye II Positive Control DNA 本キットの開発には、東京海洋大学 木村凡先生、高橋肇先生にご協力いただきました。 6. rplP Positive Control 7. EASY Dilution（for Real Time PCR） ● その日のうちに結果判定 培養法では判定に 6 日ほどを要しますが、遺伝子検査はその日のうちに判定できます。 DNA 抽出 （約 30 分） キット添付の ポジコンによる定量 リアルタイム PCR 解析 （約 90 分） NucleoSpin Tissue （51ページ） 食材懸濁液 試料液の調製 その日のうちに結果判定！ 標準寒天培地にて培養 （48 時間∼） コロニーの計数 6 日目 ■実験例：コピー数と菌数の相関について 【結果】 VRBG 混 釈培 養 の 結果（菌数； CFU/g）を横軸に、リアルタイム PCR の結果（コピー数； copies/g）を縦軸にプロットしたところ、 VRBG 混釈培養とリアルタイム PCR の結果はよく相関していまし た。VRBG は胆汁末などの選択剤を含む培地であるため、殺菌工程 などで損傷を受けた細菌がうまく培養されない可能性があり、その 結果、リアルタイム PCR によるコピー数の方が、VRBG 混釈培養に よる菌数よりも1∼2 オーダー高めに算出される傾向にあったと考え られます。 そこで、10% 懸濁液調製の際に、生理食塩水の代わりに BPW を用 い ることに より損 傷 回 復 を 試 みたところ（ 図 中 で は→で 示す ）、 VRBG 混釈培養とリアルタイム PCR の結果がほぼ一致しました。 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L11、L46、L60 10 Real Time PCR（log copies/g） 【方法】 肉類 6 種、野菜類 5 種、サラダ類 5 種について、生理食塩水または BPW を用いて10% 懸濁液を調製し、VRBG 混釈培養（37℃、48 ∼96 時間）による菌数測定と本製品によるリアルタイム PCR 解析 を実施した。 8 ← ← 6 → 4 ← 標準線 ← 精肉 野菜 2 サラダ 0 0 2 4 6 8 10 VRBG（log CFU/g） 遺伝子検査キットカタログ -22- 品種判別 PCR 特徴的なバンドパターンやバンドが検出されないことでコシヒカリ* を判別 コメ判別用 PCR Kit I ／コメ判別用 PCR Kit II 4 種類のプライマー対を用いるマルチプレックス PCR を行い、コシヒカリを判別します。 コメ判別用 PCR Kit （製品コード I RR211A）ではコシヒカリと他の 60 品種について、 Kit II（製品コード RR213A）ではコシヒカリと他の 48 種について確認済みです。本キッ トにより、遺伝子レベルでの種 の管理や精米・米飯の品質管理が可能となります。 ● 製品コード 容 量 価格（税別） RR211A 100回 ¥57,000 RR213A 100回 ¥57,000 マルチプレックス PCR のバンドパターンでコシヒカリ＊を判別 Kit I： 他の品種とは異なる特徴的なバンド出現パターンで判別 Kit II： 識別バンドが検出されないことで判別 ● コシヒカリ＊と他の 60 品種（Ｉ）、48 品種（Ｉ Ｉ）について確認済 Kit I ではコシヒカリ以外の 60 品種（下表）について、コシヒカリとは異なるパターンになることを確認しています。 Kit II の確認済みの 48 品種についてはウェブカタログをご覧ください。 ＊コシヒカリBL を除く コメ判別用 PCR Kit Iで確認済みのコシヒカリ以外の 60 品種 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 ひとめぼれ ヒノヒカリ あきたこまち きらら３９７ キヌヒカリ ほしのゆめ はえぬき むつほまれ 日本晴 ササニシキ つがるロマン ハナエチゼン 夢つくし ハツシモ 朝の光 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 月の光 あいちのかおり 祭り晴 あきほ ゆきまる むつかおり まなむすめ かけはし キヨニシキ どまんなか 越路早生 ゆきの精 ほほほの穂 ゆめあかり 能登ひかり 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 アキツホ アケボノ 朝日 ヤマホウシ ヤマヒカリ 黄金錦 コガネマサリ レイホウ ミネアサヒ ふさおとめ かりの舞 どんとこい アキニシキ ながのほまれ フクヒカリ コメ検体 ■実験例：アガロース電気泳動例 2 3 4 5 遺伝子検査キットカタログ 【注】 全国 33 都道府県のコシヒカリ原種について、 同一パターンであることを確認していますが、 遺伝的変異のために異なる結果が出る可能性 があります。 また、コシヒカリ以 外 の 6 0 品 種（左 表）につ き、コシヒカリとは異なるパターンになること を確認していますが、これらの品種においても 遺伝的変異により、コシヒカリと同じパターン を示す可能性があります。 （ 左表に記載のない 品種については、確認しておりません。） なお、コシヒカリBL については前記コシヒカリ と異なる結果を示す場合があります。 PCR＋電気泳動 （2% Agarose , 1×TAE Buffer） 6 コメ判別用 PCR Kit II 7 1. Maker DNA Solution 2. コシヒカリ 3. コシヒカリ以外の品種Ａ 4. コシヒカリ以外の品種Ｂ 5. コシヒカリ以外の品種Ｃ 6. キット添付 Control DNA 7. φX174III digest 8. Negative Control -23- ゴロピカリ 初星 中生新千本 森のくまさん ゆめさんさ 加賀ひかり きらり宮崎 ゆめみのり たかねみのり あさひの夢 ニシホマレ チヨニシキ ヒヨクモチ ヒメノモチ はくちょうもち DNA 抽出 コメ判別用 PCR Kit I １ 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 8 M1M2 1 2 3 4 5 6 M2 M3 M1. φX174III digest（100 ng / lane） M2. キット添付の Marker DNA Solution（10 µl / lane） M3. pHY Marker（100 ng / lane） 1. No Template Control（1/10 TE） 2.コシヒカリ 3.コシヒカリ以外の品種 A 4.コシヒカリ以外の品種 B 5.コシヒカリ以外の品種 C 6.コシヒカリ以外の品種 D 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L26（RR211A）、L27（RR213A） 品種判別 PCR 新潟県監修 新潟コシヒカリBL の判定基準書に基づいた検査キット 平成 26∼27 年産新潟県コシヒカリ BL 判別用 PCR キット 「新潟県監修 新潟コシヒカリ BL の判定基準書」 に基づいて判定 新潟コシヒカリ BL は、BL1号・BL2 号・BL3 号・BL11号が混在する多系品種です。本 キットでは米1粒から調製した DNA を鋳型として、Primer Mixture 1、Primer Mixture 2 による PCR 反応をそれぞれ行い、その増幅バンド出現パターンにより新潟コシヒカリ BL の判別を行います。 製品コード 容 量 RR217A 100判別用 DNA 抽出 （コメ DNA 抽出キット） ¥69,000 ＜キットの内容＞ 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 本キットは、新潟県と独立行政法人食品総合研究所のライセンスを受けて、タカラバイオ（株）が 製造販売しています。 コメ1粒 価格（税別） PCR＋電気泳動 HS 10×PCR Buffer（Mg 2＋ free） MgCl（25 mM） 2 dNTP Mixture（各 2.5 mM） Primer Mixture 1 Primer Mixture 2 Loading Buffer Positive Control DNA コメ DNA 抽出キット（精米・玄米1粒スケール） ● 未加熱の精米または玄米1粒からDNAサンプルを調製 ● 磁性粒子にDNAを吸着させて精製 製品コード 容 量 9197 96×3回分 価格（税別） ¥57,200 コメ DNA 抽出キット（精米 20 粒スケール） ● 未加熱の精米 20 粒からDNAサンプルを調製 ● スピンカラムによる遠心分離操作で精製 ■製品コード 9197 を使用した場合の操作方法 米1粒 製品コード 容 量 9103 50回 価格（税別） ¥26,400 ■製品コード 9103 を使用した場合の操作方法 米 20 粒 滅菌 MiliQ 水添加、一晩放置 Lysis Bufferを加えて米粒を粉砕 滅菌 MiliQ 水添加、一晩放置 Lysis Bufferを加えて米粒を粉砕 Proteinase K 処理 Proteinase K 処理 上清とPrecipitation Buffer の混和 上清とDNA Binding Buffer の混和 RNase A 処理 上清とMagnetic Particles Dilution の混和 Magnetic Particles の洗浄 DNA 溶出 米 DNA 溶液 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L25（RR217A） DNA Binding Buffer 添加 Miniprep Spinカラムへの添加 洗浄 DNA 溶出 米 DNA 溶液 遺伝子検査キットカタログ -24- 品種判別 リアルタイム PCR ウシ、ブタ、ニワトリなどの 6 肉種を判別 Cycleave PCR 肉種判別キット（6 種） ® 製品コード 容 量 CY218 20サンプル分 価格（税別） ¥79,000 リアルタイム PCR により、原料肉のウシ、ブタ、ニワトリ、ウマ、ヒツジ、ウサギの 6 種の種判別を行うためのキットです。 ミトコンドリア DNA 上にある cytochrome c oxidase subunit I (cox I) 遺伝子領域の動物種間の多型をもとに、cox I 領域におい てそれぞれの動物種を特異的に増幅するようにプライマーを設計し、さらにそれぞれの動物種の増幅産物に特異的にハイブリダイズす るプローブを用いて検出を行います。 ＜キットの内容＞ ● ● 6 種の肉種判定が可能 Tube FAM ROX Tube 1 ウシ インターナルコントロール Tube 2 ブタ インターナルコントロール Tube 3 ニワトリ インターナルコントロール Tube 4 ウサギ インターナルコントロール Tube 5 ウマ インターナルコントロール Tube 6 ヒツジ インターナルコントロール インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 リアルタイム PCR 試薬 1. 2×CycleavePCR Reaction Mix 2. Primer・Probe Mix-1 (for beef) 3. Primer・Probe Mix-2 (for pork) 4. Primer・Probe Mix-3 (for chicken) 5. Primer・Probe Mix-4 (for rabbit) 6. Primer・Probe Mix-5 (for horse meat) 7. Primer・Probe Mix-6 (for mutton) 8. dH 2O（滅菌蒸留水） Positive Contorol DNA 9. 10. 11. 12. 13. 14. Control Control Control Control Control Control DNA DNA DNA DNA DNA DNA for for for for for for beef pork chicken rabbit horse meat mutton ■実験例： ドライソーセージサンプルの肉種判別 【方法】 パッケージの表示に「畜肉（豚肉、マトン、牛肉）、鶏肉」と記載されているドライソーセージ 10 mg から DNA 調製を行い、24.4 ng/ µl の濃度で DNA サンプルを得た。これを 2 ng/µl 濃度に調整し、CycleavePCR 肉種判別キット（6 種）の反応に 5 µl を使用し （10 ng/ 反応）、肉種判別を行った。 FAM （ターゲット） pork ROX （IC 遺伝子） mutton beef chicken horse meat rabbit 左図：増幅曲線（FAM） ： 4 種類の肉種について検出された。 右図：増幅曲線（ROX） ： インターナルコントロール遺伝子は すべて検出された。 （PCR 反応阻害は無し） 【結果】 今回の実験では 4 種類の肉種のシグナルが確認されました。これらはドライソーセージ製品に食肉原材料として記載があった豚肉、マ トン、牛肉、鶏肉と一致していました。 -25- 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4 水質検査 検出ターゲット LC EMA-qPCR 法（生菌遺伝子検査） ● レジオネラ リアルタイム PCR 検査 ● クリプトスポリジウム、ジアルジア ● レジオネラ 検査フローのイメージ レジオネラ生菌遺伝子検査 検水 濃縮 LC EMA-qPCR 法 液体培養 酸処理 （Liquid Culture） （18 時間） 液体培養（LC）による 生菌の選択的増殖 EMA 処理による 死菌由来の PCR 増幅抑制 EMA 処理 （30 分） DNA 抽出 リアルタイム PCR （30 分） （90 分） クリプトスポリジウム・ジアルジア検査 環境水 10 L 10 ml に 濃縮 オーシスト、 シスト 核酸抽出 リアルタイム RT-PCR 解析 遺伝子検査キットカタログ -26- 水質検査 LC EMA-qPCR 18時間 濃縮 液体培養 酸処理 （Liquid Culture） 2日間で結果判定できるレジオネラ生菌遺伝子検査 LC EMA-qPCR 法は、 「迅速性」に加えて「生菌選択性」を併せ持つ、新しい遺伝子検査法です。 生菌由来の遺伝子のみを検出する方法（生菌検出法）は、厚生労働省健康局生活衛生課長通知（平成 27 年 3 月 31日） 「循環式 浴槽におけるレジオネラ症防止対策マニュアル」の改正について（健衛発 0331第 7 号）に収載されています。 「 液 体 培 養 による生 菌 の 選 択 的 増 殖 」と「 E M A 処 理による死 菌 由 来 D N A からの P C R 増 幅 の 抑 制 」を 組 み 合 せ た L C EMA-qPCR 法は、遺伝子検査の最大の特長である迅速性に加えて生菌選択性を併せもつ「生菌検出法」です。従来の遺伝子 検査法の課題であった死菌由来 DNA の検出を抑制し、平板培養法での結果を迅速に予想することができます。 液体培養 液体培養に使用する培地のベース Legionella LC Medium Base ● 製品コード 容 量 9016 90 ml 価格（税別） ¥16,500 より確実な生菌の選択的検出に MWY 液体培地で 36℃18 時間培養することで生菌のみが増殖し、相対的に生菌の選択性が向上します。 ★定量性を保った状態で増菌させ、定量的な解析を行うために、一定時間（18 時間）の培養を行います。 注： LC Medium Base を使用する際には下記のサプリメントが必要です。 ・レジオネラ BCYE 発育サプリメント（関東化学（Oxoid） ；Code SR0110） ・レジオネラ MWY 選択サプリメント（関東化学（Oxoid） ；Code SR0118） EMA処理 EMA 試薬キット Viable Legionella Selection Kit for LC EMA-qPCR LC EMA-qPCR 法に至適化された専用の EMA 試薬です。 光照射装置 LED Crosslinker 12 EMA 処理検体（1.5 ml チューブ）12 本を一度に光照射できます。 ● 死菌由来の PCR 増幅を抑制し、生菌由来 DNA を選択的に検出 製品コード 容 量 7730S 25回 価格（税別） ¥18,000 7730 50回 ¥33,000 製品コード 容 量 価格（税別） EM200 一式 ¥107,800 EMA で修飾された死菌 DNA が PCR 増幅できない状態となることを利用して、生菌 DNA を選択的に検出します。 （EMA 処理の詳細は p57∼58 を参照） DNA抽出 レジオネラ菌専用の DNA 抽出試薬 製品コード 容 量 Lysis Buffer for Legionella 9181 50回 価格（税別） ¥11,000 試薬を加えて 95℃10 分間加熱後、4℃で遠心分離し、さらに 5 分間氷冷するだけです。 ● 簡便な操作で DNA 抽出 界面活性剤と PCR 阻害物質吸着樹脂からなり、遠心後は吸着樹脂の上にゲル層が 形成される仕組みで、初心者でも簡便に DNA 溶液の回収が可能です。 -27- 遺伝子検査キットカタログ 30分 EMA 処理 30分 90分 DNA 抽出 リアルタイム PCR リアルタイム PCR レジオネラ属菌検出キット Cycleave®PCR Legionella（16S rRNA）Detection Kit ● 広範囲なレジオネラ属菌を検出可能 製品コード 容 量 CY240S 25回 ¥31,000 CY240 50回 ¥57,000 を含む 74 種で増幅を確認しています。 ● インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 レジオネラ16S rRNA 遺伝子 FAM 価格（税別） インターナルコント ロール（IC）遺伝子 ROX 検出結果の判断基準について 「厚生労働科学研究費補助金（健康安全・危機管理対策総合研究事業） 公衆浴場等におけるレジオネラ属菌 対策を含めた総合的衛生管理手法に関する研究 平成 24 年度分担研究報告書」より引用 ■ LC EMA-qPCR 法におけるレジオネラ1 CFU あたりの 16S Positive Control コピー数の決定 35 Ct 値 アメーバ培養レジオネラ菌の10 倍希釈系列を用い、それぞれ 2 連 で LC EMA-qPCR を行い、検量線を作成した。この回帰式の切片 と、16S Positive Control の回帰式の切片の差から、レジオネラ 1 CFU 当りの16S Positive Control コピー数が以下の通り算出 された。 40 0h （EMA-） y = -3.274 x + 36.431 R² = 0.999 18h （EMA-）y = -3.391 x + 31.929 R² = 0.992 18h （EMA+）y = -3.379 x + 33.276 R² = 0.993 y = -3.174 x + 44.248 死菌 （EMA+） R² = 0.990 プラスミド y = -3.036 x + 39.984 30 25 20 18 時間培養 EMA 処理後のコピー数（レジオネラ1 CFU 当り） 2（39.984−33.276） = 104.5 ≒ 100 コピー 15 -1 0 1 2 3 4 5 log CFU/5 µl （log copies/5 µl） 6 アメーバ培養レジオネラを用いた LC EMA-qPCR の検量線 「厚生労働科学研究費補助金（健康安全・危機管理対策総合研究事業） レジオネラ検査の標準化及び消毒等 に係る公衆浴場等における衛生管理手法に関する研究 平成 26 年度分担研究報告書」より引用 ■ LC EMA-qPCR による循環式浴槽水等における検査結果 平成 26 年度に浴用施 設から採 取された176 検体の試料につい て、平板培養法と LC EMA-qPCR 法の比較を行った。平板培養法 では 57/176 検体（32.4％）から10 CFU/100 ml 以上のレジオ ネラ属菌が検出された。一方、LC EMA-qPCR 法では、カットオフ 値を1 CFU/100 ml 相当とした場合、82/176 検体（46.6％）の 検体からレジオネラ属菌の遺伝子が検出された。LC EMA-qPCR 法の平板培養法に対する感度は 89.5％（51/57 検体）、特異性は 73.9％（88/119 検体）であり、高い相関を示した。 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4（CY240S、CY240） 平板培養法と LC EMA-qPCR 法との比較（n=176） LC EMA-qPCR 法のカットオフ値 1 CFU/100 ml 相当 平板培養法 LC EMA-qPCR 法 計 ≧1 ＜1 ≧10 ＜10 51 31 計 82 6 88 94 57 119 176 感度 89.5% 特異性 73.9％ 遺伝子検査キットカタログ -28- 水質検査 リアルタイム PCR レジオネラの遺伝子検査（生菌＋死菌） Cycleave®PCR Legionella（16S rRNA）Detection Kit レジオネラ属菌の16S rRNA 遺伝子をターゲットとして、レジオネラ属の広範な菌種を リアルタイム PCR で検出するためのキットです。菌の生死に関わらず遺伝子を検出する方 法（生菌死菌検出法）は、厚生労働省健康局生活衛生課長通知（平成 27 年 3 月 31日） 「循 環式浴槽におけるレジオネラ症防止対策マニュアル」の改正について（健衛発 0331第 7 号）に収載されています。 ● 製品コード 容 量 CY240S 25回 価格（税別） ¥31,000 CY240 50回 ¥57,000 ＜キットの内容＞ 広範囲なレジオネラ属菌の検出をカバー を含む 74 種でターゲット遺伝子の増幅を確認しています。 検出可能な菌種リストは、説明書を参照してください。 ● 前処理は Lysis Buffer for による簡易抽出 ● 定性検査、定量検査どちらにも使用可能 ● インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 ● 1. 2×Cycleave Reaction Mixture ● 2. 16S Primer/Probe Mix ● 3. Solution E ● 4. 16S Positive Control ● 5. EASY Dilution （for Real Time PCR） ■ レジオネラの遺伝子検査法について ■ 厚生労働省健康局生活衛生課長通知（平成 27 年 3月31日） 「循環式浴槽におけるレジオネラ症防止対策マニュアル」の改正について（健衛発 0331第 7 号） P29（6）レジオネラ迅速検査法（遺伝子検査法）の活用について より引用 培養検査法は結果が得られるまでに 7 日∼10 日を要しますが、迅速検査法（遺伝子検査法）は採水当日あるいは翌日に判定が 可能であり、現在いくつかの市販検査キットが利用可能です。迅速検査法は死菌の DNA を検出する可能性があることなどの 理由から、最終的にレジオネラ属菌の有無は培養検査法で判定する必要がありますが、迅速検査法では結果が迅速に得られる ため、現在は主に次の目的で使用されています。 ・患者発生時の感染源調査（原因究明） ・改善措置後の陰性確認検査（営業再開の目安） ・洗浄効果の判定（陰性証明）等 迅速検査法には、菌の生死に関わらず遺伝子を検出する方法（生菌死菌検出法）と、生菌由来の遺伝子のみを検出する方法（生 菌検出法）の 2 種類があり、それぞれ結果の解釈には注意が必要です。 前者（生菌死菌検出法）は、死菌由来の遺伝子も増幅対象とするため、遺伝子検査法が陽性でも培養検査法が陰性になる場合 がありますが、採水当日に結果が判明し、死菌の存在を潜在的なリスクとして評価することが可能です。後者（生菌検出法）は、 液体培養による生菌の選択的増殖と、化学修飾による死菌由来 DNA の増幅抑制を組み合わせたもので、採水翌日に培養検査 結果の予測が可能ですが、菌数が少ない場合には培養検査の結果と食い違う場合があることがわかっています。 いずれにしても、これらの特徴を理解したうえで、培養検査法と組み合わせて使用するのが良いでしょう。 ◆生菌死菌検出法：リアルタイム PCR 法 概 要 製 品 名 DNA 抽出 Lysis Buffer for Legionella リアルタイム PCR Cycleave PCR Legionella（16S rRNA）Detection Kit 製品コード 9181 ® CY240/CY240S ◆生菌検出法：LC EMA-qPCR 法 概 要 液体培養（LC） EMA 処理 -29- 製 品 名 Viable Legionella Selection Kit for LC EMA-qPCR Lysis Buffer for Legionella リアルタイム PCR Cycleave PCR Legionella（16S rRNA）Detection Kit 遺伝子検査キットカタログ 7730/7730S EM200 LED Crosslinker 12 DNA 抽出 ® 製品コード 9016 Legionella LC Medium Base 9181 CY240/CY240S 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4 水質検査 リアルタイム PCR クリプトスポリジウム属、ジアルジアの遺伝子検査 Cycleave® RT-PCR Cryptosporidium （18S rRNA）Detection Kit Cycleave® RT-PCR Giardia （18S rRNA）Detection Kit ● 製品コード 容 量 CY230 50回 製品コード 容 量 CY231 50回 価格（税別） ¥69,000 価格（税別） ¥69,000 厚生労働省からの通知法に収載 厚生労働省健康局水道課長通知「水道に関するクリプトスポリジウム等の検出のための検査方法の見直し等について」 （ 健水発 0302 第 2∼4 号） （平成 24 年 3 月 2 日発付）において、 「遺伝子検出法」のひとつとして「リアルタイム PCR 法」が収載されました。 試料水中の1個のオーシスト等を検出する感度が求められることから、基本的に逆転写 PCR（RT-PCR）法が推奨されています。 ● オールインワンキット 磁気ビーズ法で精製したオーシスト／シストがあれば、すぐに検査ができます。リアルタイム PCR 試薬に加え、核酸抽出試 薬、逆転写試薬も含まれています。 ● インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 一本のチューブでインターナルコントロールを同時検出するので、常に偽陰性のモニターが可能です。 ● 定性検査、定量検査どちらにも使用可能 キット添付のポジティブコントロール DNA を段階希釈して検量線を作成することにより、定量解析が可能です。 厚生労働省からの通知法の付録には、 「遺伝子検査法におけるオーシスト等の定量」が収載されています。 ● 遺伝子型の解析も可能 反応後のチューブをそのままお送りいただくだけで、増幅産物の塩基配列解析が可能です（受託サービス）。 サ ー ビ ス 項 目 参 考 価 格 クリプトスポリジウム属・ジアルジア検出キット専用 塩基配列解析（PCR 産物の精製も含む） ＜キットの内容（製品コード CY230 の場合）＞ ￥11,000 1解析あたり 参 考 納 期 約 2 週間 ■実験例： ポジティブコントロール DNAを用いた検量線の例 逆転写試薬 ● 1. 5×PrimeScript RT Master Mix リアルタイム PCR 試薬 R2＝0.998 Eff＝103.6％ ● 2. 2×Cycleave Reaction Mixture ● 3. . Primer/Probe Mix（FAM、ROX） ○ 4. RNase Free dH 2O 核酸抽出試薬 ● 5. Lysis Buffer ○ 6. Proteinase K ○ 7. dH 2O（for Dilution） 定量用 Positive Control ● 8. . Positive Control（1×10 5 copies/µl） ● 9. EASY Dilution（for Real Time PCR） キット（CY230）に含まれる . Positive Control （1×10 5 copies/µl) の10 倍希釈系列を用いて検量線を作成した。 蛍光抗体染色 フィルター吸引濾過法など 環境水 10 L 10 ml に 濃縮 顕微鏡観察 オーシスト、 シスト 分離・精製 （免疫磁気ビーズ法 等） 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4 核酸抽出 リアルタイム RT-PCR 解析 遺伝子検査キットカタログ -30- ヒト・動物感染症検査 検出ターゲット ヒト感染症 ヒトゲノムタイピング ● 呼吸器系感染症起因菌 ● ALDH2 ● 呼吸器系感染症起因ウイルス ● FLT3／ITD ● B 群溶血性連鎖球菌 （GBS） ● サイトメガロウイルス （CMV） 動植物感染症 ● EB ウイルス （EBV） ● ウシ白血病ウイルス ● Human ● 鳥インフルエンザウイルス Papillomavirus（HPV） ● サルモネラ血清型 検査フローのイメージ 検体 -31- コロニー or 前培養液 遺伝子検査キットカタログ アルカリ熱抽出 or RNA／DNA 精製 リアルタイム PCR 解析 PCR＋電気泳動 ヒト感 染 症 検 査 リアルタイム PCR 呼吸器系感染症起因菌・起因ウイルスの迅速検出に Cycleave®PCR 呼吸器系感染症 起因菌検出キット Ver.2 Cycleave®PCR 呼吸器系感染症 起因ウイルス検出キット Ver.2 製品コード 容 量 価格（税別） CY214 60反応 ¥96,000 製品コード 容 量 価格（税別） CY216 60反応 ¥108,000 呼吸器系感染症は、様々な病原菌やウイルスによって引き起こされます。呼吸器系感染症に対して適切な治療を行うためには、原因と なる病原菌、ウイルスを特定する必要がありますが、ウイルスに関しては臨床症状だけで同定することは困難です。また、同定のための ウイルス分離や血清学的検査は時間がかかるため、早急な対応には対処できません。 本キットは、慶応義塾大学医学部感染症学教室 生方公子先生監修の元、リアルタイム PCR 装置を用いて迅速に呼吸器感染症の起因 菌、起因ウイルスを検出するためのキットとして開発されました。 ● 呼吸器系感染症の起因菌 6 種／起因ウイルス11種を検出 呼吸器系感染症の原因となる細菌あるいはウイルスを網羅的に検出します。 ● 感度・特異性に優れたサイクリングプローブ法を採用 ■検出対象微生物（製品コード CY214） ターゲット起因菌 1 2 3 4 5 6 肺炎球菌： インフルエンザ菌： マイコプラズマ： クラミジア： ＜キットの内容（製品コード CY214）＞ ターゲット遺伝子 プローブ蛍光色素 遺伝子 FAM 16S rRNA 遺伝子 FAM 16S rRNA 遺伝子 FAM 16S rRNA 遺伝子 FAM レジオネラ菌： および16S rRNA 遺伝子 FAM および ROX A 群溶血性レンサ球菌： 16S rRNA および 遺伝子 FAM および ROX ■検出対象ウイルス（製品コード CY216） 1 2 3 4 5 6 起因ウイルス ウイルスの 種類 プローブ 蛍光色素 RSウイルス A 型： Human respiratory syncytial virus subtype A RNAウイルス FAM RSウイルス B 型： Human respiratory syncytial virus subtype B RNAウイルス ROX パラインフルエンザウイルス 1 Human parainfluenza virus 1 RNAウイルス FAM パラインフルエンザウイルス 2 Human parainfluenza virus 2 RNAウイルス ROX メタニューモウイルス Human metapneumovirus RNAウイルス FAM パラインフルエンザウイルス 3 Human parainfluenza virus 3 RNAウイルス ROX インフルエンザウイルス A Influenza A virus RNAウイルス FAM インフルエンザウイルス B Influenza B virus RNAウイルス ROX アデノウイルス Human adenovirus DNAウイルス FAM ボカウイルス Human bocavirus DNAウイルス ROX ライノウイルス Human rhinovirus RNAウイルス FAM 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4 リアルタイム PCR 試薬 1．2×CycleavePCR Reaction Mixture （60 反応分） 2．Probe/Primer Mix-1（10 反応分） 3．Probe/Primer Mix-2（10 反応分） 4．Probe/Primer Mix-3（10 反応分） 5．Probe/Primer Mix-4（10 反応分） 6．Probe/Primer Mix-5（10 反応分） 7．Probe/Primer Mix-6（10 反応分） 8．dH 2O Positive Control DNA 9．Positive Control 1-FAM 10．Positive Control 2-FAM 11．Positive Control 3-FAM 12．Positive Control 4-FAM 13．Positive Control 5-FAM 14．Positive Control 5-ROX 15．Positive Control 6-FAM 16．Positive Control 6-ROX ＜キットの内容（製品コード CY216）＞ リアルタイム PCR 試薬 1．2×RT Buffer Mix（10 反応分） 2．PrimeScript RT Enzyme Mix I（10 反応分） 3．2×CycleavePCR Reaction Mix（60 反応分） 4．Probe/Primer Mix-1（10 反応分） 5．Probe/Primer Mix-2（10 反応分） 6．Probe/Primer Mix-3（10 反応分） 7．Probe/Primer Mix-4（10 反応分） 8．Probe/Primer Mix-5（10 反応分） 9．Probe/Primer Mix-6（10 反応分） 10．RNase-free dH 2O Positive Control DNA 11．Positive Control 1-FAM 12．Positive Control 1-ROX 13．Positive Control 2-FAM 14．Positive Control 2-ROX 15．Positive Control 3-FAM 16．Positive Control 3-ROX 17．Positive Control 4-FAM 18．Positive Control 4-ROX 19．Positive Control 5-FAM 20．Positive Control 5-ROX 21．Positive Control 6-FAM 遺伝子検査キットカタログ -32- ヒト感 染 症 検 査 リアルタイム PCR B 群溶血性レンサ球菌（GBS）を特異的に検出 Cycleave®PCR Streptococcus agalactiae（GBS）Detection Kit B 群溶血性レンサ球菌（ ；GBS）は出生直後の新生児の敗 血症や生後 3 か月までに見られる髄膜炎、高齢者の侵襲性感染症等の主な原因菌です。 本製品は GBS を網羅的、特異的かつ迅速にリアルタイム PCR で検出します。 ● CY233 50回 価格（税別） ¥69,000 リアルタイム PCR 試薬 1. 2×CycleavePCR Reaction Mixture 2. dltS Primer/Probe Mix （FAM、ROX） 3. dH 2O Positive Control DNA 遺伝子をターゲットとし インターナルコントロールによる偽陰性チェックが可能 ROX FAM 容 量 ＜キットの内容＞ GBS を網羅的かつ特異的に検出 GBS 由来のヒスチジンキナーゼをコードする て、GBS を遺伝子レベルで迅速に検出します。 ● 製品コード 4. dltS Positive Control 遺伝子 サンプル調製 （スワブ・混釈） インターナルコントロール DNA 抽出 （Mutanolysin、EXTRAGEN II） リアルタイム PCR 解析 莢膜型 Ia 型、Ib 型、III 型をタイピング Cycleave®PCR GBS Capsular Typing Kit Cycleave ® PCR (GBS) Detection Kit（ 製品コード CY233）を用いた検出で GBS が陽性であったサンプルについて、莢膜型をコードする （Ia）、 （Ib)、 （III）遺伝子を検出します。莢膜型 Ia 型、Ib 型、III 型は、新生児の 重篤な髄膜炎や敗血症に関与することが報告されています。 GBS 検出 陽性なら 製品コード 容 量 CY234 50回 価格（税別） ¥69,000 莢膜型 Ia 型、Ib 型、III 型タイピング ＜キットの内容＞ 2 反応で莢膜型 Ia 型、Ib 型、III 型をタイピング FAM FAM (Ia) 遺伝子 ROX (III) 遺伝子 リアルタイム PCR 試薬 1. 2×CycleavePCR Reaction Mixture 2. （Ia）＆ （Ib）Primer/ Probe Mix （FAM、ROX） 3. （III）Primer/Probe Mix （FAM） 4. dH 2O Positive Control DNA 5. 6. 7. （Ia）Positive Control （Ib）Positive Control （III）Positive Control (Ib) 遺伝子 本シリーズは、慶應義塾大学医学部感染症学教室 生方公子先生監修の元、リアルタイム PCR キットとして開発されました。 -33- 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4 ヒト感 染 症 検 査 リアルタイム PCR サイトメガロウイルスの検出・定量に Cycleave®PCR Cytomegalovirus（CMV）Detection Kit 本製品は、免疫不全・免疫抑制状態で発生する日和見感染の原因としてよく知られているサイトメガロウイ ルス（CMV）の DNA を、前初期（IE）遺伝子を標的としたリアルタイム PCR 法で迅速に検出するキットです。 本キットは、名古屋大学大学院医学系研究科ウイルス学 木村宏先生のご協力の元、検証いただきました。 カスタム製造品です。 詳しくは弊社へ お問合せください。 ＜キットの内容＞ ● 国際標準物質を用いた試薬によるキャリブレーション済 CMV の国際標準物質によるキャリブレーションの結果、試薬の測定値を 4.0 倍することで、国際単位（IU）に換算されることが確認されました。 ● インターナルコントロールで偽陰性をモニター可能 ● FAMとROXを検出できる幅広い装置で使用可能 リアルタイム PCR 試薬 1. 2×Cycleave Reaction Mixture 2. CMV Primer/Probe Mix（FAM、ROX） 3. dH 2O Positive Control DNA 4. CMV Positive Control 5. EASY Dilution（for Real Time PCR） ■反応例：CMV 検出 ROX FAM CMV 遺伝子 インターナルコントロール 検量線 EBウイルスの検出・定量に Cycleave®PCR Epstein-Barr virus（EBV）Detection Kit 本製品は、免疫不全・免疫抑制状態で発生する日和見感染の原因としてよく知られている EB ウイルス （EBV）の DNA を、ウイルス DNA ポリメラーゼをコードする BALF5 遺伝子を標的としたリアルタイム PCR 法により迅速に検出するキットです。 本キットは、名古屋大学大学院医学系研究科ウイルス学 木村宏先生のご協力の元、検証いただきました。 カスタム製造品です。 詳しくは弊社へ お問合せください。 ＜キットの内容＞ ● 国際標準物質を用いた試薬によりキャリブレーション済 EBV の国際標準物質によるキャリブレーションの結果、試薬の測定値を 2.8 倍することで、国際単位（IU）に換算されることが確認されました。 ● インターナルコントロールで偽陰性をモニター可能 ● FAMとROXを検出できる幅広い装置で使用可能 リアルタイム PCR 試薬 1. 2×Cycleave Reaction Mixture 2. EBV Primer/Probe Mix（FAM、ROX） 3. dH 2O Positive Control DNA 4. EBV Positive Control 5. EASY Dilution（for Real Time PCR） ■反応例：EBV 検出 ROX FAM EBV 遺伝子 インターナルコントロール 検量線 ■検査フロー サンプル調製 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4 DNA 抽出 リアルタイム PCR 解析 遺伝子検査キットカタログ -34- ヒト感 染 症 検 査 PCR ヒトパピローマウイルスの悪性型（16, 18, 33 型）の検出に TaKaRa PCR Human Papillomavirus Detection Set ● 製品コード 容 量 6602 50回 価格（税別） ¥57,000 Human Papillomavirus（HPV）16 型、18 型、33 型を特異的に検出 子宮頸癌において最も高頻度に検出される型を検出します。 ● PCRとドットハイブリダイゼーションによる検出 HPV16、18 および 33 型の E6 を含む領域を増幅するためのプライマーと、増幅後ハイブリダイゼーションを行うための 特異的プローブが含まれています。 検体 ゲノム DNA 調製 PCR ドットハイブリダイゼーション ＜セットの内容＞ 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. HPVpF（共通 forward primer） HPVp16R（HPV16 reverse primer） HPVp18R（HPV18 reverse Primer） HPVp33R（HPV33 reverse primer） HPVb16（HPV16 probe） HPVb18（HPV18 probe） HPVb33（HPV33 probe） Control Template HPVT16（HPV16） Control Template HPVT18（HPV18） Control Template HPVT33（HPV33） ※100 µl 反応 50 回分。50 µl 反応の場合は 100 回分 →HPVpF（forward Primer） ←HPVp16Ｒ, HPVp18R, HPVp33R（reverse Primer） −HPVb16, HPVb18, HPVb33 ヒトパピローマウイルスの悪性型 7 種、良性型 2 種の判別に TaKaRa PCR Human Papillomavirus Typing Set 製品コード 容 量 6603 100回 価格（税別） ¥57,000 ● 悪性型 HPV16、18、31、33、35、52b、58 型と良性型 HPV6、11型の E6・E7 領域を増幅 ● 増幅産物の制限酵素切断パターンにより判別 良性型と悪性型をそれぞれ PCR 増幅し、増幅産物の制限酵素処理と電気泳動により判別します。 検体 ゲノム DNA 調製 ＜セットの内容＞ 1. 2. 3. 4. 5. -35- HPVpU-1M（悪性型 forward primer） HPVpU-31B（良性型 forward primer） HPVpU-2R（共通 reverse primer） Control Template HPV-TM（悪性型） Control Template HPV-TB（良性型） 遺伝子検査キットカタログ PCR 制限酵素消化 電気泳動 ★HPVタイピングに、HPVタイピング用制限酵素セットを ご用意しています。 Enzyme Set A 製品コード 容 量 6604 50回 価格（税別） ¥52,000 セットの内容： I I T110 I（ K11B I（ II I） II） ヒトゲノムタイピング リアルタイム PCR PCR ALDH2 遺伝子の一塩基多型の検出に Cycleave® Human ALDH2 Typing Probe/Primer Set Ver.2 ● Aldehyde dehydrogenase-2 （ALDH2） 遺伝子の 一塩基多型を識別 ★ ALDH2 type 1（wild type）、ALDH2 type 2（mutant type）を マルチプレックス検出します。 （FAM / ROX） ● 製品コード 容 量 CY403 50回 価格（税別） ¥57,000 ＜セットの内容＞ 1. 2. 3. 4. サイクリングプローブ法による特異性の高い検出 2× 完全プレミックスタイプの試薬 Cycleave ® PCR Reaction Mix （製品コード CY505A）と組み合わせて使用します。 Cycleave ALDH2 PCR Primer Mix Cycleave ALDH2 PCR Probe Mix（25×） ALDH2 Positive Control（allele 1） ALDH2 Positive Control（allele 2） ★ALDH2 はアルコールの中間代謝物質であるアセトアルデヒドを分解する酵素であり、その exon12 には、487Glu（GAA）→Lys（AAA） の一塩基多型［ALDH2 type 1 (wild type)、ALDH2 type 2 (mutant type)］が存在することが知られています。 ■Mutant Type の解析例 Thermal Cycler Dice ® Real Time System 食品環境検査用ソフトウェアの解析画面 Allele 1 (wild type) アレル1 ： Positive Control のアレル1 の塩基 アレル 2 ： Positive Control のアレル 2 の塩基 ヘテロ ： アレル1 およびアレル 2 の両方を持つ ヘテロタイプ OK ： コントロール反応が正常（反応系が正し く進んでいる） Allele 2 (mutant type) FLT3 遺伝子の ITD 変異解析に TaKaRa PCR FLT3/ITD Mutation Detection Set ● FLT3 遺伝子の ITD 変異を検出 FLT3（FMS-like tyrosine kinase 3）遺伝子の JM（Juxtamembrane）領域 周辺に起こる Internal Tandem Duplication（ITD）変異の有無を検出します。 ● 分子標的薬の研究開発に有用 急性骨髄性白血病（AML）において、この変異を有する症例は予後不良である ことが報告され、FLT3 のキナーゼ活性を特異的に阻害する分子標的薬の開発 が進められています。 ● 製品コード 容 量 6632 50回 価格（税別） ¥41,000 ＜セットの内容＞ 1. 2. 3. 4. FLT3/ITD-1 Primer FLT3/ITD-2 Primer Control Template（Mutant） Control Template（Normal） ゲノム DNA 中の 5∼10% の ITD 変異を検出可能 骨髄液 血液 DNA 調製 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4（CY403） PCR アガロースゲル 電気泳動 Agilent2100 バイオアナライザ 遺伝子検査キットカタログ -36- 動物感染症検査 リアルタイム PCR リアルタイム PCR によるウシ白血病ウイルスの定量に ウシ白血病ウイルス検出用 Probe/Primer/Positive control ウシ白血病ウイルスの 遺伝子をターゲットとして、プロウイルスとして組み込まれたウ シ白 血 病 ウイルス（B LV）をリアル タイム P C R 装 置を 用 いて 検 出するために 必 要 な Probe、Primer、Positive Control です。 特異性の高い検出が可能 定量が可能 50回 ¥31,000 ★リアルタイム PCR を行うためには、反応 に必要な酵素と最適化されたバッファー が 含 ま れ たプ レミックスタイプの 試 薬 （Cycleave ®PCR Reaction Mix SP： 製品コード CY510）が使用できます。 製品添付の Positive Control を用いて検量線を作成することができます。 ● CY415 価格（税別） 1. Probe/Primer Mix for BLV（5×） 2. Positive Control （2×10 5 copies/µl） 3. EASY Dilution （for Real Time PCR） サイクリングプローブを採用しています。 ● 容 量 ＜キットの内容＞ 本製品は独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構動物衛生研究所との共同研究及び、 国立大学法人岩手大学 村上賢二教授のご協力のもとにタカラバイオが製品化しました。 ● 製品コード プレミックス試薬なので操作が簡便 初心者でも安心してご利用いただけます。 ■実験例： 製品添付の Positive Control DNA による検出 増幅曲線 検量線 キットに含まれる Positive Control の段 階希釈液を用いて検量線を作成し、検体 サンプル中の 遺伝子コピー数を算出 することができます。 リアルタイム RT-PCR による鳥インフルエンザウイルスの検出に qPCR Subtyping Primer Set for HA of Avian Influenza qPCR Subtyping Primer Set for NA of Avian Influenza 鳥インフルエンザウイルスの HA（Hemagglutinin）、または NA（Neuraminidase）遺伝 子の塩基配列から設計されたプライマーのセットです。 鳥インフルエンザウイルスの HA 遺伝子または NA 遺伝子の亜型判定が可能です。 製品コード 容 量 6640 1 Set ¥52,000 6641 1 Set ¥27,000 本製品は独立行政法人 農業・食品産業技術総合研究機構が出願した特許を利用し、タカラバイオ が製品化しました。 価格（税別） 注： プライマー配列は HA 遺伝子（製品コード 6640）、または NA 遺伝子（製品コード 6641）の亜型を判定できるように最適化されています が、遺伝子によっては判定が困難な可能性があります。 ■実験例： 陽性サンプルの反応例 リアルタイム RT-PCR の逆転写反応には PrimeScriptTM RT reagent Kit （Perfect Real Time） （製品コード RR037A/B）、qPCR TM には SYBR ® (Tli RNaseH Plus)（製品コード RR420A/B）が使用できます。 40 35 30 25 20 15 10 5 0 -5 融解曲線分析 Fluorescence（1st Derivative） 増幅曲線 Fluorescence（Primary Curve） N1 Subtype Eu/Am Lineage Primer 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Cycles 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 -200 ※ 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80 82 84 86 88 90 92 94 96 Temperature ※亜型ならびに NP gene 特異的に得られた融解曲線のピークです。 -37- 遺伝子検査キットカタログ 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4（CY415）、L59（6641） 動物感染症検査 PCR 7 種類のサルモネラ血清型を迅速にタイピング サルモネラ血清型 PCR 同定キットシリーズ サルモネラの血清型をスクリーニングするための PCR キットです。 製品化には、独立行政法人 農業・食品産業技術総合研究機構 動物衛生研究所のご協力をいただ きました。 ● 価格（税別） R230A∼ R236A 各50回 各 ¥52,000 1. 2. 3. 4. マルチプレックス PCR で特異性の高い検出 4 つの遺伝子（サルモネラの侵入性因子関連遺伝子 、各血清型が特異的に 保有する 3 遺伝子）をターゲットとした検出を行います。 ● 容 量 ＜キットの内容＞ 全7 種類のキット、組み合わせは自由自在 全キットとも反応条件は同一です。 ● 製品コード 2×PCR Mix（Red） Primer Mix dH 2O Positive Control DNA 操作は極めて簡単、反応終了後はそのまま電気泳動へ 2×PCR Mix は、電気泳動マーカーも含むプレミックス試薬です。 ■サルモネラ血清型 PCR 同定キットシリーズ 製品コード サルモネラ属 遺伝子判定サイズ Salmonella serovar Typhimurium Identification Kit R230A 605 bp 94 bp、196 bp、303 bp Salmonella serovar Choleraesuis Identification Kit R231A 605 bp 100 bp、198 bp、305 bp Salmonella serovar Enteritidis Identification Kit R232A 605 bp 101 bp、203 bp、299 bp Salmonella serovar Dublin Identification Kit R233A 605 bp 105 bp、203 bp、296 bp Salmonella serovar Gallinarum Identification Kit R234A 605 bp 97 bp、206 bp、301 bp Salmonella serovar Infantis Identification Kit R235A 605 bp 95 bp、198 bp、304 bp Salmonella serovar Hadar Identification Kit R236A 605 bp 105 bp、199 bp、303 bp 製 品 名 ■実験例： M 1 サルモネラ血清型判定サイズ serovar Typhimurium Identification Kit による検出 2 3 4 5 6 7 8 侵入性因子関連遺伝子 （ N M 遺伝子） と M：100 bp DNA Ladder 1： Typhimurium 由来サンプル 2： Choleraesuis 由来サンプル 3： Dublin 由来サンプル 4： Enteritidis 由来サンプル 5： Gallinarum 由来サンプル 6： Hadar 由来サンプル 7： Infantis 由来サンプル 8： Positive control（ST Positive Control DNA） N： Negative control（H 2O） 3% Agarose Typhimurium 特異的な 3 遺伝子を検出 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L55a 遺伝子検査キットカタログ -38- 細胞検査 検出ターゲット 再生医療・細胞医療製品／培地のウイルス試験 ● マイコプラズマ ● HIV, ● EBV, HTLV, HCV, HBV, ParvoB19 CMV, WNV 検査フローのイメージ 細胞培養上清 または 細胞懸濁液 細胞懸濁液、 培養上清 など -39- 遺伝子検査キットカタログ 90 分で結果判定！ 一部を採取 DNA／RNA 精製 リアルタイム PCR 解析 細胞検査 リアルタイム PCR PCR リアルタイム PCR で網羅的・特異的にマイコプラズマ汚染を検出 Cycleave®PCR Mycoplasma Detection Kit ● リアルタイム PCR で簡便・迅速に汚染の有無をチェック ● 最適化した特異的なプライマー・プローブを採用 常在菌の誤検出を抑制しながら、 属125 種のうち113 種 ★ を 特異的に検出できるよう、プライマーおよびプローブを設計しています。 容 量 CY232 50回 価格（税別） ¥57,000 ＜キットの内容＞ リアルタイム PCR 試薬 1. 2×CycleavePCR Reaction Mix 2. Myco. Primer/Probe Mix（5×conc.） 3. RNase Free dH 2O Positive Control ★培養細胞によく見られる以下の種の汚染を高感度に検出できることを確認して います。 属の10 種（ ） および 属中の1 種（ ） ● 製品コード 4. Myco. Positive Control （1×10 6 copies/µl） 5. Proteinase K 高感度検出 1 fg までの検出が可能 マイコプラズマ の ゲノム DNA を用いて希 釈 系 列を作 製し、1 ng∼1 fg を反 応液に添加して検出 （Thermal Cycler Dice Real Time System 使用） サンプル調製 培養細胞上清、細胞懸濁液 リアルタイム PCR 解析 （約 90 分） Proteinase K 処理 エンドポイント PCR によるマイコプラズマ汚染チェック TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set ● マイコプラズマを高感度に検出 16S-23S リボソーム遺伝子 間のスペーサー領域にプライ マーが設計されており、2 段 PCR 法（Nested PCR 法）に より検出します。 F1 製品コード 容 量 6601 100回 価格（税別） ¥57,000 F2 5 16S 23S spacer region 5 R2 R1 first PCR second PCR TM ★ 本 セット は、別 売 の （製 品コード R 0 01A / B /C）または ® （製品コード RR001A/B/C）との使用により最高の効率が得 られるように設計されています。 ＜キットの内容＞ 1. 2. 3. 4. 5. MCGp F1 Primer（20 pmol/µl） MCGp R1 Primer（20 pmol/µl） MCGp F2 Primer（20 pmol/µl） MCGp R2 Primer（20 pmol/µl） Control Template（1 ng/µl） 【マイコプラズマ汚染の確認の重要性について】 マイコプラズマは培養細胞や培地などの汚染菌としてよく知られ、汚染率は15% 以上であることを示す報告もあります。マイコプラズ マの感染は実験結果に多大な影響を及ぼすため、実験を行う前にその感染の有無を知ることは非常に重要です。最小の原核生物であ るマイコプラズマは、通常のフィルターを通り抜け、またほとんどの抗生物質に抵抗性があるため、除去することが困難です。そのた め、細胞の継代ごとにマイコプラズマの検査を行い、早急な処置を行うことをお勧めします。 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4（CY232） 遺伝子検査キットカタログ -40- 微生物推定解析 検出ターゲット 遺伝子解析による微生物推定 ● 細菌 （16S rDNA） ● 真菌 （ITS1、D1/D2） 検査フローのイメージ ゲノム DNA 抽出 PCR 反応 ∼精製 シーケンス解析 相同性解析 GGGC T CCGA T G T A T A A T A A T T 遺伝子検査キットカタログ -42- 微 生物 推 定 解 析 PCR 遺伝子解析による微生物推定解析 『遺伝子解析による微生物推定解析』は、第十六改正日本薬局方に「遺伝子解析による微生物の迅速同定法」として収載され、製造現場 での出荷判定や工程管理などに幅広く利用されています。DNA 抽出から PCR 増幅、シーケンス解析、相同性解析まで各種ツールを えています。 コロニー DNA 抽出 PCR 反応 シーケンス解析 （＋増幅産物の精製） アセンブル 相同性検索 DNA 調製 ■コロニーから簡易抽出 ■難抽出には DNA 精製キット ＜細菌・真菌＞ ＜細菌＞ MightyPrep reagent for DNA（製品コード 9182） ＜真菌＞ SimplePrepTM reagent for DNA（製品コード 9180） NucleoSpin ® Tissue（製品コード 740952.10/.50/.250） NucleoSpin ® Plant II（製品コード 740770.10/.50/.250） PCR Bacterial 16S rDNA PCR Kit Fast（800） Fungal rDNA（ITS1）PCR Kit Fast Fungal rDNA（D1/D2）PCR Kit Fast ● 第十六改正日本薬局方収載のプライマー配列を採用 PCR 反応時間はわずか 40∼50 分！ 品質保証されたオールインワンキット PCR に必要なコンポーネントと、シーケンス用プライマーを含み、 品質を保証していますので、すぐに検査にご利用いただけます。 ターゲット 細菌 真菌 解 析 領 域 50回 価格（税別） ¥42,000 RR183A 50回 ¥42,000 RR184A 50回 ¥42,000 PCR 試薬 1. HS Fast Detect Premix 2. 16S rDNA Primer Mix（800） 3. dH 2O 4. Positive Control（ DNA） シーケンス用プライマー 高速タイプの PCR 酵素を採用し、大幅に反応時間を短縮しました。 ● 容 量 RR182A ＜キットの内容（製品コード RR182A）＞ 細菌 16S rDNA 用、真 菌 ITS 用のプライマーは、局法収載配列を 用い、それぞれプレミックス化しています。 ● 製品コード 5. Sequencing Primer 10F 6. Sequencing Primer 800R 製 品 名 局法収載プライマー 16S rDNA 領域の約 0.8 kb Bacterial 16S rDNA PCR Kit Fast（800） rDNA 領域内の ITS1領域（150∼500 bp） Fungal rDNA（ITS1）PCR Kit Fast rDNA 領域内の D1/D2 領域（約 0.6 kb） Fungal rDNA（D1/D2）PCR Kit Fast 10F / 800R ITS1F / ITS1R − 細菌16S rDNA 全長塩基配列解析には・・・ Bacterial 16S rDNA PCR Kit 製品コード 容 量 RR180A 50回 価格（税別） ¥42,000 ※本キットには16S rDNA の全長領域（約1.5 kb）を増幅するため の PCR コンポーネントに加え、PCR 産物のシーケンス用プライ マーも添付されています。 PCR 産物の精製に NucleoSpin® Gel and PCR Clean-up PCR 反応液にバッファーを加え、精製カラムにアプライして洗浄す るだけの簡 単操 作 で、P CR 反 応 液 から酵 素・ヌクレオチド・塩 類・その他の不純物を迅速、簡単に除去できます。 Sequencing Primer F1 Sequencing Primer F2 約400 bp 増幅産物 約500 bp 約550 bp Sequencing Primer R2 Sequencing Primer R1 増幅産物：約1.5 kb 製品コード 容 量 価格（税別） 740609.10 10回 ¥5,300 740609.50 50回 ¥12,500 250回 ¥45,000 740609.250 ※NucleoSpin はマッハライ・ナーゲル社の製品です。 -43- 遺伝子検査キットカタログ シーケンス 参考納期 ￥8,000／8 連チューブあたり 2 営業日 （弊社午前サンプル着から起算） プレミックスシーケンス解析 （96ウェルプレート） ￥38,400／96ウェルプレートあたり 3 営業日 （弊社午前サンプル着から起算） 解析 参考価格 プレミックスシーケンス解析 （8 連チューブ） 会員登録 サービス項目 W E B データのダウンロード 受入れサンプル（※）でそのまま塩基配列解析を行います。解析データはウェブサイトからダウン ロードでき、迅速・簡単に解析結果をご確認いただけます。 サンプルと依頼書を送付 「プレミックスシーケンス解析」受託サービス 受入サンプル：鋳型 DNAとシーケンスプライマーを混合し、8 連チューブまたは 96ウェルプレートへ分注したもの アセンブル SEQUENCHERTM for Macintosh V5.3 スタンドアローン版 SEQUENCHERTM for Windows V5.3 スタンドアローン版 製品コード 価格（税別） 9260 ¥680,000 9261 ¥880,000 DNA シーケンス編集、アセンブルソフトウェアです。操作が簡単なインターフェイスに加えて、 数百∼数千のフラグメントのアセンブル処理時間が大幅に短縮できます。 ※本製品は米国 Gene Codes 社が開発したソフトウェアです。 総輸入販売元：株式会社日立製作所 相同性検索 テクノスルガ・ラボ微生物同定システム 解析ソフトウェア アドバンスト 解析ソフトウェア i アドバンスト 製品コード 価格（税別） 14107142 ¥500,000 14107143 ¥550,000 テクノスルガ・ラボ微生物同定システムは、DNA を用いる微生物同定において、解析結果の精度を高く保ちつつ、解析作業を大 幅に効率化するためのツールです。微生物の同定専用に構築した塩基配列データベースと、微生物同定専用に設計されたソフト ウェアからなります。 ● 同定に必要な塩基配列のみをデータベース化 細菌については16S rDNA のほぼ全長領域、菌類（カビ・酵母）につい ては18S rDNA、ITS 領域（ITS1-5.8S rDNA-ITS2 を含む 領域）、 28S（26S）rDNA-D1/D2 領域の塩基配列情報を収録しています。 細菌・酵母では基準株由来の塩基配列データを、カビでは分類学的な 比較に有効なタイプ標本由来株などの塩基配列を採用しています。公 共データベースに適切な配列が存在しない微生物については、テクノス ルガ・ラボが独自にデータを追加しています。 ● データベースは随時更新 新種の追加や学名の変更に対応するため、データベースは随時更新します。 2015 年 9 月現在収録数： 細菌 16S rDNA： 2,287 属 11,347 種 357 亜種 菌類 28S（26S）-D1/D2： 1,193 属 4,550 種 ITS 領域： 741属 4,027 種 18S rDNA： 472 属 1,322 種 ● STEP 1 塩基配列を入力 テキストや FASTA 形式のシーケンスデータ をドラッグアンドドロップで読み込めます。 エレクトロフェログラムは読み込めません。 STEP 2 ボタンをクリック 相同 性 検 索や系 統樹作成ボタンを押 せば、読み込んだ配列をリスト順に自 動解析します。 判りやすい相同性検索結果 学名、株名、公共データベースのアクセッション番号、相同率、バイオセー フティレベルが表示されます。 ● 近縁種の推定が容易 系統樹を描くことで、相同率の比較だけでは理解しにくい近縁種との 系統関係を明確にします。 分かり易い相同性検索結果 検 索 結果を PDF や HTML 形式 で保存可能です。 ※本製品は （株） テクノスルガ・ラボの製品です。 ※本システムの使用は、研究および品質管理目的となります。受託解析での使用はできません。 系 統 樹を使えば 近 縁 種の推 定が容易 出力結果を PDF や jpeg 形式で 保存可能です。 遺伝子検査キットカタログ -44- カス タ ム 対 応 サービス内容 リアルタイム PCR 検出系のカスタム設計 ● SYBR® ● Dual Green I Labeled Probe ● サイクリングプローブ カスタム対応（酵素原料供給、製造） -45- 遺伝子検査キットカタログ 受 託 サービス カスタム設計 リアルタイム PCR 検出系のカスタム設計 お客様のご要望に応じたリアルタイム PCR 検出系の設計を幅広くサポートいたします。 スクリーニングには SYBR ® Green I 検出、相同性の高い配列同士を区別する場合や SNPs タイピングには蛍光標識プローブ検出、 などお客様のご要望に応じて最適な検出系をご提案いたします。 SYBR® Green I 検出系：プライマーの設計・合成 インターカレーター法（SYBR ® Green I 検出）によるリアルタイム PCR に最適なプライマーセットを設計いたします。 リアルタイム RT-PCR 用プライマーセット（カスタム設計） ・プライマー 2 本（Forward、Reverse） 脱塩精製 2 OD 保証 濃度調整済み TE 溶液品（50 pmol / µl） ● ■価格・納期 ￥25,000（税別）∼ 参考納期： 約 2 週間 カスタムプライマー設計 1. ご指定の Accession ID に基づいて公共データベースから設計対象配列情報を取得します。 （※ゲノム DNAでの設計 追加料金：￥10,000） 2. 弊社独自のアルゴリズムにより、リアルタイム PCR 反応条件に適合したプライマー配列を選択します。 3. 設計したプライマーに対し、特異性の確認を行います。 （詳細はウェブカタログをご覧ください。） ● オプションサービス ・特異性確認 基本サービス以外の生物種について、ご指定生物の RefSeq データベースを調査し、特異性確認用 DB を作成した上で 特異性確認を行います。 （※追加料金： ￥10,000／1生物種） ・遺伝子間の共通領域に設計 複数遺伝子の共通領域にプライマーを設計します。 （※追加料金： ￥10,000／1領域） Dual Labeled Probe 検出系：プライマー・プローブの設計・合成 プライマー・プローブのカスタム設計を承ります。設計後、プライマー・プローブの配列 情報を確認した上で注文いただけます。 F Q ※本 製 品はシグ マアルドリッチ社で 設 計・合成 されています。シグ マアルドリッチ社では、 TaqMan ® プローブの開発元である米国 Applied Biosystems 社よりライセンスを受けて製 造販売しています （購入者ご自身の研究用途に限る） 。 ￥33,000（税別）∼ 参考納期： 約 2 週間 カートリッジ精製、4.0 OD 保証、凍結乾燥品 ★上記 3 本の配列デザイン込み （参考）修飾組合せ例 2. Dual Labeled Probe 単品 ・Dual Labeled Probe 1本 HPLC 精製、1.5 OD 保証、凍結乾燥品 設計内容を 確認して発注 ・プライマー 2 本（Forward、Reverse） ■価格・納期 Q 設計 HPLC 精製、1.5 OD 保証、凍結乾燥品 設計に必要な 情報︵ ︶ を連絡 ※ ・Dual Labeled Probe 1本 ＷＥＢ会員登録 1. デザインセット F ■価格・納期 ￥27,000（税別）∼ 参考納期： 2 週間以内 http://www.takara-bio.co.jp/TKRProbe ※遺伝子の Accession No.や配列情報、遺伝子名、生物種、プローブ、標識の情報があれば 発注可能です。 注） 本システムのご利用にはタカラバイオ WEB 会員への登録が必要です（無料）。 5′ 3′ FAM TAMRA TET TAMRA HEX TAMRA FAM BHQ-1 TET BHQ-1 HEX BHQ-1 TAMRA BHQ-2 Cy5 BHQ-3 TAMRAをクエンチャーに用いる「Dual Labeled Probe」は、「TaKaRa qPCR Probe」へ移行しました。 遺伝子検査キットカタログ -46- 受 託 サービス カスタム設計 サイクリングプローブ検出系：プライマー・プローブの設計・合成 技術原理 サイクリングプローブ （A 検出用） RNA RNase H SNP point 鋳型 DNA 完全マッチ 増幅産物 A PCR 反応 ミスマッチ 増幅産物 B クエンチャーに より制御されて いた蛍光強度 が増大 完全マッチなら RNasa H による 切断が起こる ミスマッチとなり 切断されない 蛍光は検出 されない タカラバイオ独自のリアルタイム PCR 手法である「CycleavePCR 法」は、 「サイクリングプローブ」を用いて PCR 産物中の1塩 基の違いを認識し、検出することができる画期的な技術です。 Cycleave®PCR Assay Designer（SNPs） Cycleave ®PCR Assay Designer（SNPs）は、CycleavePCR 法に適した SNP（1塩基置換）検出用プライマー・プローブを 設計・オンライン注文するためのシステムです。 1. プライマー・サイクリングプローブ（1プローブ） ・プライマー 2 本（Forward、Reverse） HQ-SEQ グレード（HPLC 精製）、1 OD 保証、濃度調整済み TE 溶液品（50 µM） ・サイクリングプローブ 1本 ■価格・納期 ￥30,000（税別） 参考納期： 約 3 週間 HPLC 精製、1 OD 保証、濃度調整済み TE 溶液品（50 µM； 遮光チューブ） ※クエンチャーは Eclipse、レポーターは FAM、HEX、ROX から選択 2. プライマー・サイクリングプローブ（2 プローブ） ・プライマー 2 本（Forward、Reverse） HQ-SEQ グレード（HPLC 精製）、1 OD 保証、濃度調整済み TE 溶液品（50 µM） ・サイクリングプローブ 2 本 ■価格・納期 ￥50,000（税別） 参考納期： 約 3 週間 HPLC 精製、1 OD 保証、濃度調整済み TE 溶液品（50 µM； 遮光チューブ） ※クエンチャーは Eclipse、レポーターは FAM、HEX、ROX から選択 http://www.takara-bio.co.jp/realtime_snps/ ※目的遺伝子の塩基配列、検出対象塩基を指定すれば、設計候補を最大 3 種類設計し、配列・Tm 値・増幅サイズ等の情報を開示します。 注） 本システムのご利用にはタカラバイオ WEB 会員への登録が必要です（無料）。 ■実験例 ： CYP2C9 (rs1057910)の検出 NC Hetero Wild 検出由来シグナル （SNP site A） Mutant 検出由来シグナル （SNP site C） Wild homo -47- 遺伝子検査キットカタログ Mutant homo カスタム 対応（酵素原料供給、製造） ∼酵素の原料供給、各種対応を承ります∼ 各種試薬製造で培ったノウハウが凝縮されたタカラバイオの酵素や試薬を素材として提供します。 ご利用目的や用途に合わせてご提案いたします。 ≪例≫ 各種 PCR 酵素（マルチプレックス対応、高速対応、高効率化） UNG 等温増幅用酵素 逆転写酵素、RNase Inhibitor 酵素の特別分注（分注量の変更）やバッファーの最適化、酵素の凍結乾燥などのご要望にもお応えいた します。 ≪例≫ ○診断薬製造メーカーのお客様 原料酵素の供給、凍結乾燥品の対応 など ○検査会社のお客様 カタログパッケージとは別規格の大容量品や小容量品 など ◆GMP 製造品も承ります。 ∼カスタムキット製造も承ります∼ 品質管理された試薬キットは、ルーチン検査などに大変便利です。 すでに検出系をお持ちのお客様はもちろん、これから新しく開発をお考えのお客様にも、ご要望にあっ た検出系をご提案の上で、設計から構築までを完全サポートしたします。 検出系構築でお困りの方、検討時間を節約したい方にも最適です。 ご要望のスペックをお伺いしたうえで、製品仕様をご相談いたします。 ≪例≫ ○臨床検査会社のお客様 ルーチン検査用キットの構築、新規検査系の構築、キットの安定供給 ○食品会社品質管理部門のお客様 工程管理用の検査キット開発、コンポーネントのプレミックス化（使い勝手向上） ○製薬企業のお客様 コンパニオン検査薬の開発 カスタムキット 仕様決定 試作キットで 性能検証 保存テスト 実施 カスタムキット 供給 遺伝子検査キットカタログ -48- 核酸抽出 核酸抽出フローのイメージ 簡易抽出 【操作フロー】 ・組織など生体試料 ・コロニー 試薬を添加して ボルテックス 95℃10 分 加熱 2 分間 遠心 上清（DNA 抽出液）を そのまま PCR／リアルタイム PCR へ カラム精製 【操作フロー】 サンプルの溶解 [ ] 動物組織、 培養細胞、 細菌など DNAの結合 -49- 遺伝子検査キットカタログ 洗浄、乾燥 溶出 核 酸 抽出試 薬 DNA 簡易抽出 PCR 用鋳型 DNAの調製に MightyPrep reagent for DNA 菌体、血液、加工食品、土壌、組織等から、簡便に PCR の鋳型 DNA を 調製できます。 添加する試薬は1種類のみで簡便 ● わずか15 分で調製完了 ● 約￥73／回のお手頃価格（標準プロトコール） 容 量 9182 20 ml 原 理 検体に本試薬を添加し、95℃10 分の加熱だけで DNAを簡易抽出 ● ● 製品コード ・血液 2∼20 µl ・マウス尾 1∼2 mm （本試薬 2 100 µlあたり） ・植物 1∼10 mm ・土壌 ∼0.5 mg など サンプル量 グラム陰性菌 ・ Enteritidis ・ 【操作フロー】 2分 遠心 var グラム陽性菌 ・ ・ ・ 試薬を添加して ポルテックス 95℃10 分 加熱 ¥14,500 熱抽出 適用可能な 細菌、酵母 ・組織など生体試料 ・コロニー 価格（税別） 酵母 ・ ・ ・ など 上清（DNA 抽出液）を そのまま PCR／ リアルタイム PCR へ 作業時間 ∼15分 ■実験例 A．各種微生物からの DNA 抽出 【方法】プレート培養した各種微生物（細菌 5 種、真菌 3 種）のコロニーから、本製品（MightyPrep reagent for DNA）を用いて DNA 抽出液 （製品コード RR182A）、または Fungal rDNA（ITS1）PCR を調製し、微生物推定解析用の Bacterial 16S rDNA PCR Kit Fast（800） Kit Fast（製品コード RR183A）を用いて PCR 増幅を行った。 【結果】試験に供したすべての微生物で良好に増幅産物が得られました。 M1 1 2 3 4 5 M2 6 7 8 M1 1 2 3 4 5 M2 6 7 8 : 250 bp DNA Ladder : var. Enteritidis : : : : : 100 bp DNA Ladder : : : B．牛乳中のサルモネラ菌 DNA の抽出 【方法】 var. Enteritidis の菌体懸濁液を牛乳で希釈した試料より、本製品および A 社試薬を用いて DNA 抽出液を調 を用いてサルモネラ菌を検出した。 製し、Cycleave ®PCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0（製品コード CY205） 【結果】MightyPrep reagent for DNA を使用した場合、A 社試薬を用いた場合より Ct 値が低くなり良好な検出ができました。 MightyPrep reagent for DNA A 社試薬 Ct 値 DNA 抽出試薬 19.5 19.65 22.7 25.1 26.08 1/1000 希釈液 28.11 28.85 1/10000 希釈液 30.99 31.52 1/10 希釈液 1/100 希釈液 （弊社比較データ） A 社試薬 21.85 原液 希釈率 MightyPrep reagent for DNA 遺伝子検査キットカタログ -50- 核 酸 抽出試 薬 ゲノム DNA 精製 製品コード ゲノム DNA 精製に NucleoSpin® Tissue さまざまなサンプルに対応した16 種類以上のプロトコール を用意 【サンプル例】 ・マウス尾など動物組織 ・培養細胞、バクテリア、酵母 ・糞便、尿、生検サンプルなど臨床検体 ・血液痕、毛髪、口腔粘膜、タバコの吸い殻など法医学サンプル ・FFPE 組織切片、NucleoCard ® など濾紙血 通知法収載 価格（税別） 740952.10 10回 ¥6,900 740952.50 50回 ¥23,000 250回 ¥103,000 740952.250 ● 容 量 原 理 シリカメンブレン法 形 状 ミニスピンカラム サンプル量 1∼25 mg 組織 10 2∼10 7 個 培養細胞 精製サイズ 200 bp∼約 50 kb 回 収 量 15∼35 µg 溶出液量 60∼100 µl 精製時間 ∼20分 （溶解後） 食品衛生検査指針微生物編 2015 収載 NucleoSpin ® Tissue は、平成 27 年 3 月 24 日発出の厚生労働省医薬食品局食品安全部監視安全課の事務連絡により、通知法に収 載されました。また、食品衛生検査指針にも収載されています。 食品における腸管出血性大腸菌（EHEC）遺伝子検査において、増菌培養液からの DNA 抽出には本製品をお勧めいたします。 ①サンプルを準備 増菌培養液 100 µl ④エタノールを添加 上清にエタノールを 添加し混合 10,000× 、10 分 上清を除去 ⑥メンブレンを洗浄 Buffer BW で洗浄 11,000× 、1分 Buffer B5 で洗浄 11,000× 、1分 ②Proteinase K 処理 56℃ 1 h（∼O/N） ⑤カラムへ吸着 NucleoSpin Tissue ColumnをCollection Tube にセットし、④を 添加 ③サンプルを溶解 Buffer B3を加えて 攪拌し、70℃10 分 インキュベート 11,000× 、1分 ⑦メンブレンを乾燥 11,000× 、1分 ⑧DNA を溶出 70℃に温めた Buffer BEを添加し、室温1分 インキュベート 溶出 11,000× 、1分 11,000× 、5 分 ゲノム DNA 精製 製品コード 740901.10 少量サンプルからの精製に NucleoSpin Tissue XS ® 740901.50 740901.250 ● 生検試料や FACSソート細胞など微量サンプルから高効率な精製が可能 ● わずか 5 µl で溶出できるため、高濃縮 DNA の調製が可能 少量の液で溶出できます！ ファンネル型のリングを採用することで径の小さい シリカメンブレンを保持。効果的に少量 DNA を結合 させ、さらに 5∼30 µl という非常に少量の液で溶出 できます。そのため、得られた DNA 溶液は高濃度と なります。 -51- 遺伝子検査キットカタログ 容 量 10回 価格（税別） ¥7,900 50回 ¥30,000 250回 ¥135,000 核 酸 抽出試 薬 ゲノム DNA 精製 製品コード 加工食品、飼料などからの精製に NucleoSpin® Food 加工食品、大豆（豆乳、大豆粉）、チョコレート、穀類、肉類、 飼料などからゲノム DNAを迅速、簡便に精製 ● ● PCR 阻害物質を完全に除去した高品質 DNA 調製 ● 少量 DNA、部分分解 DNAも精製可能 ゲノム DNA 精製 NucleoSpin Soil ® ● 4 パターンの抽出システム 2 種類の Lysis Bufferと Enhancer SX を組み合せて使用 ● 微生物を効果的に破砕 セラミックビーズを含む NucleoSpin ® Bead Tube を添付 ● フミン酸などの PCR 阻害物質を効果的に除去 NucleoSpin ® Inhibitor Removal Column を添付 ● 価格（税別） 740945.10 10回 ¥7,400 740945.50 50回 ¥30,500 250回 ¥140,000 740945.250 原 理 シリカメンブレン法 形 状 ミニスピンカラム サンプル量 5∼200 mg 精製サイズ 300 bp∼約 50 kb 回 収 量 0.1∼10 µg 溶出液量 100 µl 精製時間 30 分 製品コード 土壌からの精製に 容 量 740780.10 740780.50 740780.250 容 量 価格（税別） 10回 ¥10,000 50回 ¥43,000 250回 ¥178,500 原 理 シリカメンブレン法 形 状 ミニスピンカラム サンプル量 ＜500 mg 土壌、汚泥、 堆積物 回 収 量 2∼10 µg 溶出液量 30∼100 µl 精製時間 90 分 さまざまな土壌サンプルに対応 ・土壌、汚泥、堆積物中の微生物（グラム陽性菌、古細菌、酵母、カビ類、 藻類）DNA ・土壌中の遊離 DNA ・環境サンプル中の微生物 DNA ゲノム DNA 精製 植物、真菌からの精製に NucleoSpin® Plant II ● 植物組織、植物細胞、糸状菌からのゲノム DNA 精製 さまざまな植物サンプルに対応可能な 2 種類の Lysis Buffer を添付（PL1：CTAB 法用、PL2：SDS 法用） 製品コード サンプルライセートのクリーンアップに有用な NucleoSpin® Filter を含む DNA 結合用に最適化したシリカメンブレンと改良バッファー 系により、高純度、高収量を実現 ● ● RNase Aも添付 価格（税別） 740770.10 10回 ¥7,400 740770.50 50回 ¥24,300 250回 ¥110,000 740770.250 原 理 シリカメンブレン法 形 状 ミニスピンカラム サンプル量 ＜100 mg 植物組織 （湿重量） ＜20 mg 植物組織 （乾燥重量） プレフィルター NucleoSpin ® Filter 精製サイズ 50 bp∼約 50 kb 回 収 量 1∼30 µg 溶出液量 100 µl 精製時間 30 分 ● ● 容 量 遺伝子検査キットカタログ -52- 核 酸 抽出試 薬 ゲノム DNA 精製 製品コード 全血からの迅速精製に NucleoSpin® Blood QuickPure ● 操作は 20∼25 分（実操作：10 分）で極めて迅速 ● 洗浄と乾燥工程が1ステップで完了 特殊な処理を行ったシリカメンブレンを採用 ● 200 µlまでの血液サンプルに対応 ・ヒト、動物血液（新鮮血、凍結保存血） ・クエン酸血、EDTA 血、へパリン血、CPDA 血 ・バフィーコート、血小板、体液、血清、血漿 ウイルス核酸精製 740569.10 10回 ¥6,000 50回 ¥20,000 250回 ¥95,000 740569.250 原 理 シリカメンブレン法 形 状 ミニスピンカラム サンプル量 5∼200 µl 全血、体液 ＜5×10 6 個 培養細胞（リンパ球） 精製サイズ 200 bp∼約 50 kb 回 収 量 4∼6 µg 回収濃度 80∼120 ng/µl 溶出液量 30∼50 µl 精製時間 ∼25 分（実操作：∼10 分） 製品コード 容 量 NucleoSpin Virus 740983.250 血清、血漿など無細胞生体液（最大 400 µl）からウイルス RNA／DNAを精製 ● ● 添付 Proteinase K によりDNAウイルスからも効率良く精製 ● 50 分以内に完了する迅速で簡便なプロトコール ヒト、動物の血漿、血清などの無細胞体液よりウイルス核酸 を効率よく抽出 ● 価格（税別） 10回 740983.50 ® 価格（税別） 740569.50 740983.10 ウイルス RNA/DNAの精製に 【操作フロー】 容 量 ¥11,000 50回 ¥31,000 250回 ¥140,000 原 理 シリカメンブレン法 形 状 ミニスピンカラム サンプル量 ＜200 µl 血清、血漿、生体液 ※2 回ロードにより、400 µl まで可能 精製サイズ 100 bp∼約 50 kb 溶出液量 30 µl 精製時間 50 分 血清、血漿 +Proteinase K +Carrier RNA +Lysis Buffer VL +ethanol ウイルス RNA/ DNA の結合 クリーンアップ 洗浄 製品コード PCR 産物の精製に NucleoSpin Gel and PCR Clean-up ® 1種類のバッファーで PCR 産物の精製にもアガロースゲル からの抽出にも対応 ● ● 操作時間はわずか10 分、最小溶出液量は15 µl ● 50 bp 以上の DNA 断片を回収、プライマーを効率よく除去 ● 全てのゲル用バッファー（TAE、TBE など）に対応 ● Binding Buffer にpH indicator を含む 740609.10 740609.50 740609.250 溶出 容 量 10回 価格（税別） ¥5,300 50回 ¥12,500 250回 ¥45,000 pH indicator の色で至適 pH をチェック できます。 Yellow, pH＜6 サンプルの pH が至適 Green, pH＜6∼7 Blue, pH＞7 サンプルの pH が少し高い サンプルの pH が高い pH 調整が必要 -53- 遺伝子検査キットカタログ リアルタイム PCR 装置 タカラバイオが送り出す究極の実用機 製品コード 多波長(Multi) 96ウェルモデル Thermal Cycler Dice® Real Time System III TP970（with PC） ¥3,500,000 TP950（本体のみ） ¥3,300,000 TP990（PC＋Cy5） ¥3,700,000 ● 基本表示もレポート出力も日本語の「完全日本語サポート」 ● 検査現場での使いやすさを追求した総合システム（食品環境検査用ソフトウェア搭載） サンプルをセット 食品環境検査用ソフトウェア 価格（税別） 検査結果をレポート作成 タカラバイオの「検査キット」と組合わせて、3 ステップでかんたん解析！ レポート出力も楽々！ 反応条件設定 サンプル設定 結果／解析 レポート出力 Word、PowerPoint、EXCEL など様々な形式に対応 反応 設定 決まった 反応条件 サンプル 設定 簡単設定 結果 解析 ワンタッチ 解析 レポート 出力 右クリックで データ出力 ▼専用パソコンからの操作 ・パソコン付タイプ（with PC： TP970）をご購入いただけば、パソコンで ソフトウェアを操作し、反応から解析までを行うことができます。 ▼スタンドアローン操作 ・本体タッチパネルから項目を選択するだけで反応を開始。 データは本体に保存されます。 ・USB メモリからのデータ読み込み機能付 ▼フィルター2 種搭載タイプ、3 種搭載タイプを用意 ・TP970 は FAM / SYBR ® Green I および ROX / Texas Red フィルターを標準装備。 TP990 ではさらに Cy5 フィルターも標準装備しています。 検査のためのトータルサポートシステム 「試薬」と「装置」を提供するタカラバイオはシステムとしての性能を保証します。 1.「システム」ならではの安心サポート ・・ 2. 装置一台で様々な検査項目に対応 ・・食品検査や水質検査など、複数の検査にご使用いただけます。 3. リアルタイム PCR サポートライン ・・専用窓口では、リアルタイム PCR の専門スタッフがご質問に丁寧にお答えします。 通知法に収載された装置 多波長（Multi）、96ウェルモデル 製品コード 価格（税別） TP900（本体＋PC） ¥4,125,000 製品コード 価格（税別） TP700（本体＋PC） ¥2,530,000 Thermal Cycler Dice Real Time System II ® 使い勝手のよいコンパクトモデル 多波長（Multi） 48ウェルモデル ® Thermal Cycler Dice Real Time System Lite 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください： L47 遺伝子検査キットカタログ -54- エンドポイント PCR 用サーマルサイクラー A4サイズに収まるコンパクトな 96ウェルサーマルサイクラー TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice® Touch 製品コード 価格（税別） TP350 ¥580,000 新しいソフトウェアで、より直感的な操作が可能！ ● 大きくて入力しやすい7インチカラータッチパネルを採用 ● 最大 24℃の温度勾配が設定可能なグラジエント機能を搭載 ● 横幅 18 cm×奥行 28.5 cm 、重量 5.0 kg の超コンパクト設計 プログラムファイルの作成がより簡単に！ プログラム内容の確認が簡単！ 信頼と実績の「96ウェルスタンダード」サーマルサイクラー TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice® Gradient ● 4 段階可動式操作パネルの採用により使いやすい角度に設定 ● 最大 20℃の温度勾配が設定可能なグラジエント機能を搭載 製品コード 価格（税別） TP600 ¥550,000 ■消耗品（TP350、TP600 用） 容 量 製品コード 価格（税別） 0.2 ml Hi-Tube Dome Cap 1,000本 NJ200 ¥9,350 0.2 ml Hi-Tube Dome Cap Recovery 1,000本 NJ201 ¥11,550 0.2 ml Hi-Tube Flat Cap Recovery 1,000本 NJ203 ¥11,550 0.2 ml Hi-8-Tube（8 連） 125 strips NJ300 ¥16,500 0.2 ml Hi-8-Dome Cap（8 連） 125 strips NJ301 ¥4,400 製 品 名 0.2 ml Hi-8-Flat Cap（8 連） 125 strips NJ302 ¥4,400 TaKaRa 96 well PCR Hi-Plate 50枚（8連×12/枚） NJ111 ¥40,700 TaKaRa PCR Hi-Caps（8 連） 120本 NJ811 ¥6,050 Dice Touch （TP350） Dice Gradient （TP600） 製品コード 5 µl 10 µl 50 µl 5 µl 10 µl 50 µl 0.2 ml Hi-Tube Dome Cap NJ200 ○ − ◎ △ ◎ ◎ 0.2 ml Hi-Tube Dome Cap Recovery NJ201 ○ − ◎ △ ◎ ◎ 0.2 ml Hi-Tube Flat Cap Recovery NJ203 △ − ◎ △ ◎ ◎ 0.2 ml Hi-8 -Tube NJ300 0.2 ml Hi-8 -Dome Cap NJ301 △ − ◎ × ◎ ◎ 0.2 ml Hi-8 -Tube NJ300 0.2 ml Hi-8 -Flat Cap NJ302 △ − ◎ △ ◎ ◎ 製 品 名 0.2 ml シングル チューブ 0.2 ml 8 連チューブ & キャップ -55- 遺伝子検査キットカタログ 技術紹介：PCR キャリーオーバー防止 キャリーオーバーコンタミネーション防止！ PCR は非常に高感度な検出方法であるため、以前に行った PCR 増幅産物のキャリーオーバーによる偽陽性が生じる場合があります が、UNG 処理を追加することで偽陽性を簡単に防止できます。 ■UNG を利用してキャリーオーバーの影響を防止する原理 1回目の PCR A T 検体由来 DNA A U PCR 増幅産物 T A U A C G C G A T G C A U G C dTTP の代わりに dUTP を含む dU plus dNTP Mixture を用い て PCR 増幅し、ウラシル塩基を取り込ませる。 T A TM ※ 注意： UNG を利用する場合は、 などの Pol I 型 PCR 酵素を使用してください。 校正活性を持つα型 PCR 酵素はウラシルを含む鋳型の 増幅には適さないため、α型 PCR 酵素やα型酵素を含む ブレンド酵素の使用は推奨しません。 U A 2 回目の PCR キャリーオーバーコンタミネーション A U 検体由来 DNA U C A G U A G U C A A T 影響なし UNG 処理（25℃、10 分） A C A A G G C A ← デオキシリボースとウラシル塩基の 間の N- グリコシド結合が加水分解を 受け、脱塩基部位が生じる A T C A A G G C A × T C A G T A G T C A 影響なし 熱処理（95℃、2 分） A T C A G T A G T C A ← 脱塩基部位でリン酸バックボーンの 加水分解が起こる A T T C A G T A G T C A dU plus dNTP Mixture を用いて PCR 増幅 PCR 増幅産物 PCR の鋳型にならない A U C A G U U A G U C A 2 回目以降もクリアに結果判定が可能 プライマーがあればすぐ利用できるUNG 酵素セット 製品コード TaKaRa Taq HS PCR Kit, UNG plus TM ＜キットの内容＞ 価格（税別） 50回 ¥20,000 R013A 200回 ¥63,800 製品コード 容 量 価格（税別） 6088 200回 ¥46,000 ・ HS（5 U/µl） ・10×PCR Buffer for UNG plus ・dU plus dNTP Mixture（12.5×）※1 ・UNG（2 U/µl）※2 TM お手持ちの検出系にUNG 処理を追加 TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit ＜キットの内容＞ 容 量 R013S ・UNG（2 U/µl）※2 ・dU plus dNTP Mixture（12.5×）※1 ・MgCl（25 mM） 2 ※1： dUTP を含む基質溶液 別途単品販売も行っています（製品コード 4035）。 ※2： 熱感受性の UNG 別途単品販売も行っています（製品コード 2820）。 遺伝子検査キットカタログ -56- 技術紹介：EMA-PCR EMA-PCR 法とは・・・ EMA（ethidium monoazide）は可視光に暴露すると核酸に共有結合する選択的膜透過性色素です。 生菌を含む検体に EMA を含む試薬を添加して光を照射しても、生菌では薬剤が内部に浸透せず DNA の化学修飾は起こりませんが、 死菌中の DNAや溶液中に遊離している DNA は EMA と光照射により化学修飾を受けます。 EMA により修飾された DNA は PCR 反応の鋳型とならないため、EMA 処理後は生菌由来 DNA のみが PCR の鋳型となり、検出され ます。 EMA-PCR 法とは、EMA が死菌由来 DNA を修飾し、修飾を受けた DNA が PCR 増幅できない状態となることを利用して、 生菌由来 DNA を選択的に検出する方法です。 さらに タカラバイオ独自の技術によりリアルタイム PCR でも生菌由来 DNAの 選択的検出が可能になりました！ タカラバイオの Viable Bacteria Selection システムはこの EMA-PCR 法を応用しており、さらに独自の技術で死菌由来 DNA の EMA 修飾効果を向上させた（特許出願中）ことで、増幅サイズが短いリアルタイム PCR でも効果的な生菌由来 DNA の選択的検出が可 能です。 ＜エンドポイント PCR＞ ＜リアルタイム PCR＞ そこで、短鎖 PCR 増幅にも 効果的な EMA 処理法を開発 しました！ “Viable Bacteria Series” 増幅サイズが大きい EMA 修飾が多い＝PCR 抑制が容易 増幅サイズが小さい（100 bp 前後） EMA 修飾が少ない＝PCR 抑制が難しい 原 理 生菌では EMA が浸透しない 死菌では EMA が浸透する EMA によるDNA 修飾（不活化） 【参考文献】 Biotechniques. 2003 Apr; 34(4):804-8, 810, 812-3. Ethidium monoazide for DNA-based differentiation of viable and dead bacteria by 5 -nuclease PCR. Nogva HK, Dromtorp SM, Nissen H, Rudi K. 操作フロー 5∼15分 15分 ∼40分 ∼90分 EMA 試薬添加 ※1 光照射 ※1 DNA 抽出 qPCR/PCR 検出 ※2 EMA 処理試薬 Solution A Solution B 検体 LED Crosslinker 12 NucleoSpin Tissue XS ※1 EMA 処理条件は、検出目的の菌種や検体の種類にあわせて最適化します。 ※2 qPCR／PCR 試薬は別途ご用意ください。 -57- 遺伝子検査キットカタログ お手持ちの qPCR／PCR 検出系との組合せ 技術紹介：EMA-PCR ■ ビフィズス菌での検証 検証1：生菌への影響 検証 2：死菌抑制効果 培養したビフィズス菌（ ）を生理食塩水 に懸濁し生菌サンプルとして使用。5×10 7∼5×10 3 個の生菌から、 プロトコールに従って EMA 処理なし、EMA 処理ありサンプルをそ れぞれ調製し、SYBR Green I 検出リアルタイム PCR で検出を行っ た。その結果、EMA 処理あり／EMA なしでほぼ同等の結果が得ら れ、本キットを用いた EMA 処理によって検出感度には影響がないこ とが分かった。 EMA 処理前 ビフィズス菌（ ）の生菌を 95℃で 5 分間 熱処理し死菌サンプルとして使用。5×10 7∼5×10 3 個の死菌から、 プロトコールに従って EMA 処理なし、EMA 処理ありサンプルをそ れぞれ調製し、SYBR Green I 検出リアルタイム PCR で検出を行っ た 。そ の 結 果 、本 キット を 用 い た E M A 処 理 に より 、少なくとも 5×10 6 個までの死菌を完全に抑制可能であることが分かった。 EMA 処理後 EMA 処理前 EMA 処理後 EMA 処理キット（グラム陰性菌／グラム陽性菌用） グラム陰性菌専用の EMA 試薬 Viable Bacteria Selection Kit for PCR（Gram Negative） グラム陽性菌専用の EMA 試薬 Viable Bacteria Selection Kit for PCR（Gram Positive） 製品コード 容 量 7700 100回 価格（税別） ¥55,000 7705 100回 ¥55,000 EMA 処理条件を最適化し、目的細菌の生菌由来 DNA を選択的に検出する系を構築することができます。 製品コード キットの内容 7700 ・Solution A-gn ・Solution B-gn 7705 ・Solution A-gp ・Solution B-gp ・Dilution Buffer 光照射装置 ルーチン利用をより便利に！ LED Crosslinker 12 製品コード 価格（税別） EM200 ¥107,800 ● 高輝度 LED ランプを搭載した専用装置で、精度の高い安定したデータ取得に有効です。 ● 1.5ml チューブ12 本を同時に処理することが可能です。 EMA 処理成否の確認用キット 実検体におけるEMA 処理の成否をチェック可能 Control Test Kit（Viable Bacteria Selection） EMA 処理が正常に行われたかどうかを確認するための工夫が施されており、様々な夾雑物 による影響が懸念される実検体における検証に便利です。コンポーネントに反応確認用の プラスミド DNA が予め添加されており、検体に対して EMA 処理が正しく行われるとこのプ ラスミド DNA も同時に修飾を受け、PCR 増幅できなくなります。プラスミド DNA 上の領 域をターゲットとして PCR 増幅を行うことで、事前に EMA 処理の成否を確認できます。 検体の前処理操作が うまくいくと 前処理反応中に プラスミド DNA が共存 EMA プラスミド DNAも 修飾を受ける プラスミド DNA 上の ターゲットは、リアル タイム PCR やエンド ポイント PCR で増幅 されない。 製品コード 容 量 CY290 50回 EMA 処理 OK！ 価格（税別） ¥28,000 EMA（−） EMA（＋） EMA 処理 OUT！ EMA（−） EMA（＋） ★特定細菌に至適化した専用キットもラインナップ Viable Bacteria Selection システムでは、レジオネラ属菌、サルモネラ菌、腸管出血性大腸菌、カンピロバクターなど各標的細菌用に 至適化した試薬キットも用意しています。至適化済みの条件で EMA 処理を行い、Cycleave ®PCR キット（サイクリングプローブ法を利 用したリアルタイム PCR キット）と組み合わせて検出を行います。 EMA PCR 検索 詳しくはウェブカタログをご覧ください。 本ページ掲載製品のライセンス確認事項は 66 ページをご覧ください：L4（CY290） 遺伝子検査キットカタログ -58- 遺伝子検出について ● 食品・環境検査における各種検査法について ■培養 微生物を人工的な環境下で育てる方法です。細菌を培養するには、液体培地を用いる方法とこれを寒天で固めた固形培地（寒天培地） を用いる方法があります。細菌を寒天培地に播いて適当な温度で培養すると、やがてコロニーと呼ばれる菌の固まりを作り、目視で確 認できるようになります。1個のコロニーは、1個の細菌が増えてできた全て同じ遺伝子を持つ集団、すなわちクローンです。少なくと も一晩以上培養に時間がかかり、培養が困難な菌種もあります。 ■PCR（エンドポイント PCR） PCR（Polymerase Chain Reaction）法とは、DNA 鎖の熱変性、プライマーのアニーリング、ポリメラーゼによる相補鎖の合成を繰 り返し行うことにより DNA を増幅する方法です。1サイクルごとに DNA が 2 倍、4 倍、8 倍・・・と指数関数的に増幅し、やがてプラ トー（一時的に停滞する状態）に達します。この方法を用いると、数時間で少なくとも10 5 倍に DNA を増幅できます。反応終了後はア ガロースゲル電気泳動に供し、増幅産物のバンドの有無を目視で判定します。 エンドポイント PCR の実験フロー 核酸抽出 試薬の調製 約 30 分∼ 約10 分∼ PCR 反応 電気泳動 約 2 時間∼ 約 30 分∼ ■qPCR（リアルタイム PCR） リアルタイム PCR（qPCR）法は、反応液の中にあらかじめ蛍光プローブあるいは蛍光色素を添加し、目的遺伝子が1サイクルごとに指 数関数的に増幅する様子をリアルタイムでモニタリングし、解析する方法です。PCR 法で必須であった電気泳動が不要となり、よりス ピーディーでコンタミネーションによるリスクの低い遺伝子検出を実施できます。 リアルタイム PCR の実験フロー 核酸抽出 試薬の調製 リアルタイム PCR 反応と解析 OK 約 30 分∼ 約10 分∼ Posi. Nega. 約1時間半∼ ■ELISA ELISA（Enzyme-linked Immunosorbent Assay）法は、酵素で標識された抗体あるいは抗原を用いて、試料溶液中の抗原あるいは 抗体量を定量する方法です。以下のような様々な方法があります。 ● 直接法 ： 抗原あるいは抗体を固相化し、酵素標識した抗体あるいは抗原で検出する方法 ● 間接法 ： 抗原を固相化し、抗原に対する一次抗体、および一次抗体に対する酵素標識ニ次抗体で検出する方法 ● サンドイッチ法 ： 抗原に対する抗体を固相化し、抗原を含む試料溶液を加え、抗原に対する抗体（固相化したものとは別の 抗体； 一次抗体）および一次抗体に対する酵素標識二次抗体で検出する方法 次項では、この中から特に「PCR」、 「リアルタイム PCR」をクローズアップします。 -59- 遺伝子検査キットカタログ 遺伝子検出について ● 遺伝子検出・遺伝子検査の用途 PCR 法、リアルタイム PCR 法は、分子生物学のみならず医学を始め生物学全体に広く浸透し、加えて法医学、食品・環境衛生検査、動 植物検査等の分野でも簡便迅速な手法として汎用されています。 例えば、リアルタイム PCR 法は遺伝子組換え食品の検査、ウイルスや病原菌の検出、検体中のウイルス量の解析などさまざまな用途に 応用されています。反応後に電気泳動で増幅産物の確認を行う必要がないので簡便・迅速に結果が得られ、コンタミネーションリスク も低いといった長所があるためです。近年では、従来の PCR 法で行われていた遺伝子検査がリアルタイム PCR へ移行する例も多数見 られます。 【定性解析におけるリアルタイム PCR の利点】 【定量解析におけるリアルタイム PCR の利点】 ● 操作が簡便で迅速に結果が得られる。 ● 操作が簡便で迅速に結果が得られる。 ● 電気泳動が不要で、コンタミネーションのリスクが低い。 ● 電気泳動が不要で、コンタミネーションのリスクが低い。 ● 広いダイナミックレンジで正確な定量ができる。 ● PCR、qPCR の原理 PCR の原理 ■PCR（エンドポイント PCR） PCR（Polymerase Chain Reaction）法とは、以下の 3 ステップを繰り返 し行うことにより で DNA を増幅する方法です（右図参照）。 ・DNA 鎖の熱変性（denaturation step） ・プライマーのアニーリング（annealing step） ・ポリメラーゼによる相補鎖の合成（extension step） この方法を用いるとことで、数時間以内に DNA の目的 領域を少なくとも 10 5 倍に増幅できます。 初発の DNA 量が多いほど、増幅産物量は早く検出可能な量に達するため、増幅曲線 が早いサイクルで立ち上がります。したがって、段階希釈したスタンダードサンプル を用いてリアルタイム PCR を行うと、初発 DNA 量が多い順番に等間隔で並んだ増 幅曲線が得られます。増幅曲線上に適当な閾値（Threshold）を設定し、閾値と増幅 曲線が交わる点を Ct 値（Threshold Cycle）として算出します。リアルタイム PCR 用キットでは、この Ct 値を利用し、結果判定を行っています。 また、Ct 値と初期鋳型量の間には直線関係があり、右図のような検量線を作成する こともできます。未知サンプルについてもスタンダードサンプルと同様に Ct 値を算 出し、この検量線に当てはめれば、初期鋳型量を求めることが可能です。 ← 初発DNA量が未知のサンプル 104 103 102 101 100 コピー数 閾値 サイクル数 初発DNA量 （Log値） PCR では、1サイクルごとに DNA が 2 倍、4 倍、8 倍、 ・・・・と指数関数的に増幅し、 やがてプラトーに達します。リアルタイム PCR では、この増幅の様子を、増幅曲線 （得られた蛍光強度の増加量を単位時間ごとにプロットした曲線）として画面上でモ ニタリングします。PCR 増幅産物をリアルタイムでモニタリングするため、指数関数 的増幅域での正確な検出を行うことができ、これはエンドポイントで解析する従来の PCR 法と大きく異なる点です。 PCR 産物量 ■qPCR（リアルタイム PCR） 4 3 検量線 2 1 0 Ct 値 タカラバイオの各種遺伝子検出キットでは、主に＋/−判定による 定性解析法で結果を求めています。ある一定のサイクル数の間に 目的の遺伝子が増幅して Ct 値が算出できたものをプラス（Posi）、 目的遺伝子が増幅せず Ct 値が算出できなかったものをマイナス （Nega）と判定し、装置画面には右図のように表示されます。 遺伝子検査キットカタログ -60- 遺伝子検出について ● 蛍光検出法 リアルタイム PCR では PCR 増幅産物を蛍光により検出します。蛍光検出法には、インターカレーターを用いる方法と蛍光標識プロー ブを用いる方法の 2 種類があります。反応後の解析はソフトウェア上で完結し、迅速でコンタミネーションリスクの低い遺伝子検出を 実現できます。 ■インターカレーター法（SYBR® Green I） インターカレーター法には一般的に SYBR ® Green I を使用します。インターカレーターは、PCR によって増幅した二本鎖 DNA に結 合し、励起光の照射により蛍光を発します。この蛍光強度を測定することにより、増幅産物の生成量をモニターできます。さらに融解 曲線分析を行うことで適切な増幅産物が得られたかどうかを確認できます。 【融解曲線分析】 PCR 後に PCR 反応液の温度を徐々に上げてインターカレーターの蛍光シグナルをモニタリングすると、最初は PCR 増幅産物の二本鎖 DNA に結合して蛍光シグナルを発しているが、ある一定の温度に達すると DNA が一本鎖に解離し、蛍光シグナルの急激な低下が確認される。この 変化をプロットしたものが融解曲線であり、一本鎖に解離する温度は融解温度（Tm 値）と呼ばれ、増幅産物の配列に固有の値を示す。融解曲 線を1st Derivativeで表示すると蛍光強度の変化量を確認でき、そのピークが Tm 値である。 融解曲線分析 1st Derivative Raw Tm 値 ■蛍光標識プローブ 蛍光標識プローブには多くの種類がありますが、ここでは 2 種類のプローブ検出法を紹介します。 Dual Labeled Probe サイクリングプローブ Dual Labeled Probe は、5 末端を蛍光物質で、3 末端をク エンチャー物質で修飾したオリゴヌクレオチドである。Dual Labeled Probe はアニーリングステップで鋳型 DNA に特異 的にハイブリダイズするが、プローブにクエンチャーが存在す るため、励起光を照射しても蛍光の発生は抑制されている。そ の後の伸長 反 応ステップ で、 DNA ポリメラーゼのもつ 5 →3 エキソヌクレアーゼ活性により、鋳型にハイブリダイズ した Dual Labeled Probe が分解されると、蛍光色素がプ ローブから遊離し、クエンチャーによる抑制が解除されて蛍光 を発するようになる。 サイクリングプローブは、RNA と DNA からなるキメラオリゴ ヌクレオチドで、片方の末端が蛍光物質で、もう一方の末端が クエンチャー物質で修飾されている。インタクトな状態では蛍 光を発しないが、PCR 増幅産物とハイブリッドを形成すると RNase H によりRNA 部分が切断されて蛍光を発する。サイク リン グ プ ロ ーブ の R N A 付 近 に ミ スマッ チ が 存 在 す る と RNase H による切断は起こらないので、非常に配列特異性の 高い検出が可能であり、SNPs タイピングなどに最適である。 1）熱変性 1）熱変性 2）プライマーのアニーリング／プローブのハイブリダイゼーション 2）プライマーのアニーリング／プローブのハイブリダイゼーション 3）RNase H によるプローブの切断 4）切断されたプローブの遊離 3）伸長反応 5）伸長反応 -61- 遺伝子検査キットカタログ 付録：遺伝子検査を始めるにあたって ■リアルタイム PCR に必要な実験器具・装置 リアルタイム PCR は従来の PCR をベースにした技術であり、専用のリアルタイム PCR 装置のほかは、実験器具なども基本的には同じ ものが使用できます。装置および主な器具類を紹介します。 品 名 数 量 リアルタイム PCR 装置・チューブ 1 Thermal Cycler Dice ® Real Time System シリーズ 1 2 1 ● 0.1 ml 8-strip tube, individual Flat Caps など 鋳型調製用 1 微量高速冷却遠心機 1 2 ボルテックスミキサー 1 3 ヒートブロック 1 4 チューブラック 1 5 卓上微量遠心機 1 6 マイクロピペット（各種 ) 1 ● ● PCR 試薬調製用 1 マイクロピペット（各種 ) 適当量 2 フィルター付きチップ 適当量 3 1.5 ml マイクロチューブ 適当量 4 手袋（パウダーフリー） 適当量 5 チューブラック 2 6 冷却用アルミ製ラック（1.5 ml 用） 1 7 冷却用アルミ製ラック（0.2 ml 用） 1 8 卓上クリーンベンチ（UV ランプ付） 1 9 ボルテックスミキサー 1 10 卓上微量遠心機 11 クラッシュアイス または 保冷剤／アイスボックス（6,7の代わりに） ● 1 適当量 鋳型添加用 1 マイクロピペット（10 µl 用 ) 1 2 卓上クリーンベンチ（UV ランプ付） 1 ◆ リアルタイム PCR 装置 リアルタイム PCR 実験を行うには、専用装置が必要です。リアルタイム PCR 装置はターゲット配列を増幅 する PCR 装置と、リアルタイムにその増幅を蛍光物質でモニタリングする検出器で構成されています。 ◆ 反応チューブ、反応プレート Thermal Cycler Dice Real Time System および には、純正品の 8 連チューブ、96（または 48）ウェルプレートをご利用ください。 純正品以外のチューブやプレートを使用すると正常な PCR 反応が行われなかったり、装置の故障原因となりますのでご注意ください。 検査用途には、独立型フラットキャップ付き 8 連チューブ （0.2 ml 8-strip tube, individual Flat Caps ：製品コード NJ600） をお勧めします。 本製品はフラットキャップが独立しており、1チューブごとに蓋を開閉できるため、コンタミネーション防止に役立ちます。また、切り離せば シングルチューブとしても利用でき、大変便利です。 ・0.1 ml 8-strip tube, individual Flat Caps（製品コード NJ902） ・0.2 ml 8-strip tube, individual Flat Caps（製品コード NJ600） Thermal Cycler Dice Real Time System シリーズ専用の独立型フラットキャップ付きチューブが 8 連結したタイプ ◆ マイクロピペット 「検体調製用」 「PCR 試薬調製用」 「鋳型添加用」など、用途別に えておくことをお勧めします。 ◆ マイクロピペット用チップ エアロゾルによるコンタミネーションを防止するため、疎水性フィルター付きのチップを使用してください。リアルタイム PCR はシングルコピー オーダーの鋳型の検出も可能なため、反応液調製時に鋳型となりうる核酸等が混入しないよう細心の注意が必要です。疎水性フィルター付き のチップは、各メーカーのマイクロピペットに対応した滅菌済のものが販売されています。 ◆ 反応チューブ・反応プレート用遠心機 通常の PCR 実験で使用する卓上型の1.5 ml チューブ用小型遠心機のほか、8 連反応チューブ用の遠心機や反応プレート用の遠心機があると 便利です。反応液を反応チューブやプレートに分注後、チューブ壁などに飛散した反応液をスピンダウンするときに使用します。 遺伝子検査キットカタログ -62- 付録：遺伝子検査を始めるにあたって ■実験環境について 菌体の取り扱いには十分に注意し、必要に応じて安全キャビネットあるいはクリーンベンチ内で操作してください。 また、PCR による検出は非常に高感度です。コンタミネーションを防止するために、サンプルの調製から PCR 検出まで下記の 3 つの エリア（エリア1、2、3）を設定し、物理的に隔離することを推奨します。 正しい結果を得るために、以下の注意点をご確認ください。 ● バイオセーフティ規定を順守する。 病原微生物感染が疑われる検体を取り扱う際の検査担当者の安全を目的とします。施設内の該当規則を遵守すると共に、 適切なバイオセーフティレベルの実験施設で取り扱ってください。バイオセーフティに関する規定については「国立感染症研 究所病原体等安全管理規定」で確認できます。 ● 核酸分解酵素（ヌクレアーゼ）のコンタミネーションを防止する。 DNase、RNase の混入による核酸の分解防止を目的とします。万一、サンプルやプローブ、プライマーなどの核酸がヌクレ アーゼの混入により分解されると正確な検出ができません。実験者の汗や唾液からもヌクレアーゼが混入する可能性があり ますので、作業過程ごとにディスポーザブル手袋の交換およびマスク着用など、操作には細心の注意を払ってください。 ● 遺伝子のコンタミネーションを防止する。 器具間の核酸クロスコンタミネーションや、増幅産物の混入による誤判定防止を目的とします。PCR による検出は非常に 高感度なため、ごく微量な混入でも増幅の原因となります。作業エリアを物理的に隔離し、実験器具や着衣の取り扱いにも 注意してください。 エリア１ 専用白衣 試薬調製用 （クリーンベンチ） エリア 3 鋳型添加用 （クリーンベンチ） 専用白衣 エリア 4 電気泳動室 通常の実験エリア エリア 2 安全キャビネット コンタミネーション防止のポイント ●エリア 1：反応試薬のみを扱うエリア リアルタイム PCR 反応液の調製、分注を行う。 （鋳型となる DNA は一切持ち込まない） ●エリア 2：検体を扱うエリア 検体の取扱いや DNA 調製を行う。 検体のバイオハザードレベルが高い場合、安全 キャビネットの設置が理想 ●エリア 3：調製済の高濃度 DNA を扱うエリア 分注済みの反応液への鋳型 DNA の添加を行う。 標準サンプルの希釈もここで行う。 ●エリア４：PCR 産物を取り扱うエリア PCR 後の増幅産物を電気泳動する場合はエリア 1、2、3 とは異なる別室で行う。 ・ 操作ごとにエリアを分ける。 ・ エリアごとにマイクロピペット・チップ・白衣などを分ける。 ・ 疎水性フィルター付きチップを用いる。 ・ プライマー用液、反応試薬などを小分けしておく。 ・ DNA-OFF（製品コード 9036）で、実験台や器具をふき取る。 ・ 陰性（ネガコン）反応による確認を行う。 ・ リアルタイム PCR（電気泳動不要）の使用を推奨 左図の写真のように、クリー ンベンチ内にピペットや チップを常設し、使用しない 時は UV 照射しておくのが 便利です。 コンタミネーションが発生すると実験結果に影響を及ぼすので、事前に可能な範囲で実験環境の整備をしておくことをお勧めします。 万一コンタミネーションが発生した場合は、考えられる原因に一つ一つ対処してください。試薬へのコンタミネーションが疑われるとき は、新しいものに取り替える必要があります。実験台や器具類は洗浄を徹底してください。 -63- 遺伝子検査キットカタログ ≪製品一覧 -2≫ 製品のタイプ； ●リアルタイム PCR キット ●エンドポイント PCR キット ●プライマー 製 品 タイプ 製 品 名 サルモネラ ● ● ● ● ● 容 量 ● ● ● ● ● ● Cycleave ®PCR Salmonella Detection Kit Ver.2.0 サルモネラ菌（invA gene）One Shot PCR Kit QuickPrimer InvA 遺伝子 サルモネラ菌 invA 遺伝子検出用 Primer Set SIN-1&2 サルモネラ菌エンテロトキシン遺伝子検出用 Primer Set STN-1&2 Cycleave ®PCR Vibrio（tdh gene）Detection Kit 腸炎ビブリオ（tdh gene）One Shot PCR Kit 腸炎ビブリオ（trh gene）One Shot PCR Kit 腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒遺伝子検出用 Primer Set VPD-1 & 2 腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒類似毒素遺伝子（trh1）検出用 Primer Set VPS-1&2 腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒類似毒素遺伝子（trh1&2）検出用 Primer Set VPR-1&2 QuickPrimer Tdh 遺伝子 セレウス菌 ● ● Cycleave ®PCR Bacillus cereus（CRS gene）Detection Kit Bacillus cereus（CRS gene）PCR Detection Kit QuickPrimer Nhe 遺伝子 QuickPrimer Bacillus cereus group（16S rDNA） ● Cycleave ®PCR Campylobacter（jejuni／coli）Typing Kit ● Campylobacter（cdt gene）PCR Detection and Typing Kit QuickPrimer CdtA 遺伝子 QuickPrimer Campylobacter spp.（16S rDNA） ● ● カンピロバクター ● ● リステリアモノサイトゲネス ● ● Cycleave ®PCR Listeria monocytogenes（inlA gene）Detection Kit QuickPrimer Listeria spp.（16S rDNA） 黄色ブドウ球菌 ● ● Cycleave ®PCR Staphylococcus aureus（DnaJ gene）Detection Kit QuickPrimer Staphylococcus spp.（16S rDNA） 黄色ブドウ球菌エンテロトキシン A 遺伝子検出用 Primer Set SEA-1&2 黄色ブドウ球菌エンテロトキシン B 遺伝子検出用 Primer Set SEB-1&2 黄色ブドウ球菌エンテロトキシン C 遺伝子検出用 Primer Set SEZ-1&2 黄色ブドウ球菌エンテロトキシン D 遺伝子検出用 Primer Set SED-1&2 黄色ブドウ球菌エンテロトキシン E 遺伝子検出用 Primer Set SEE-1&2 黄色ブドウ球菌毒素性ショック症候群毒素遺伝子検出用 Primer Set TST-1&2 ● 毒素原性大腸菌（STh gene）One Shot PCR Kit ● ● ● ● ● ● 毒素原性大腸菌 ● ● ● 毒素原性大腸菌（STp gene）One Shot PCR Kit 毒素原性大腸菌（LT gene）One Shot PCR Kit ● QuickPrimer LT 遺伝子 QuickPrimer STI 遺伝子 毒素原性大腸菌 LT 遺伝子検出用 Primer Set ELT-1&2 毒素原性大腸菌 STh 遺伝子検出用 Primer Set ESH-1&2 毒素原性大腸菌 STp 遺伝子検出用 Primer Set ESP-1&2 ● 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌（EIEC） （invE gene）One Shot PCR Kit ● ● ● 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌（EIEC） ● ● ● ● ● QuickPrimer InvE 遺伝子 QuickPrimer IpaB 遺伝子 QuickPrimer IpaH 遺伝子 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌（EIEC）invE 遺伝子検出用 Primer Set INV-1&2 ● ● ● ● ● ● 掲 載 ページ 50回 CY205 ¥69,000 15 48回 RR115A ¥62,000 web 18 100回 MR111 ¥13,000 各1,000 pmol S018 ¥33,000 各1,000 pmol S019 ¥33,000 CY220 ¥69,000 48回 RR116A ¥62,000 48回 RR118A ¥62,000 各1,000 pmol S001 ¥33,000 各1,000 pmol S002 ¥33,000 各1,000 pmol S028 ¥33,000 100回 MR109 ¥13,000 18 CY221 ¥69,000 15 ¥88,000 17 100回 MR113 ¥13,000 100回 MR208 ¥13,000 CY225 ¥69,000 15 100回 （50検体） RR134A ¥88,000 17 100回 MR110 ¥13,000 100回 MR205 ¥13,000 50回 CY223 ¥69,000 15 100回 MR207 ¥13,000 18 50回 （ 各25 回） CY228 ¥69,000 15 MR202 ¥13,000 18 各1,000 pmol S009 ¥33,000 各1,000 pmol S010 ¥33,000 各1,000 pmol S011 ¥33,000 各1,000 pmol S012 ¥33,000 各1,000 pmol S013 ¥33,000 各1,000 pmol S015 ¥33,000 48回 RR104A ¥63,000 48回 RR108A ¥62,000 48回 RR109A ¥62,000 100回 MR106 ¥13,000 100回 MR107 ¥13,000 各1,000 pmol S003 ¥33,000 各1,000 pmol S004 ¥33,000 各1,000 pmol S005 ¥33,000 48回 RR117A ¥62,000 100回 MR101 ¥13,000 100回 MR102 ¥13,000 100回 MR103 ¥13,000 ¥33,000 ボツリヌス A 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BAS-1&2 各1,000 pmol S021 ¥34,000 各1,000 pmol S022 ¥34,000 各1,000 pmol S023 ¥34,000 各1,000 pmol S024 ¥34,000 各1,000 pmol S025 ¥34,000 各1,000 pmol S026 ¥34,000 各1,000 pmol S027 ¥34,000 ボツリヌス G 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BGS-1&2 18 50回 ¥33,000 ボツリヌス F 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BFS-1&2 18 100回 S017 ボツリヌス E 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BES-1&2 20 RR132A S016 ボツリヌス D 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BDS-1&2 web 50回 各1,000 pmol ボツリヌス C 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BCS-1&2 15 50回 各1,000 pmol ボツリヌス B 型毒素遺伝子検出用 Primer Set BBS-1&2 20 50回 赤痢菌および腸管侵入性大腸菌（EIEC）ipaH 遺伝子検出用 Primer Set IPA-1&2 ボツリヌス菌 ● 価 格 （税別） 食 中 毒 検 査（3） 腸炎ビブリオ ● 製品コード 遺伝子検査キットカタログ 20 web 18 20 web 18 20 20 -64- ≪製品一覧 -3≫ 製品のタイプ； ●リアルタイム PCR キット ●エンドポイント PCR キット ●プライマー・プローブ ●プライマー ●コントロール DNA 製 品 タイプ 製 品 名 容 量 製品コード 価 格 （税別） 掲 載 ページ 食 中 毒 検 査（4） ウェルシュ菌 ● ウェルシュ菌毒素遺伝子検出用 Primer Set CPE-1&2 各1,000 pmol S020 ¥33,000 20 ● コレラ毒素遺伝子検出用 Primer Set VCT-1&2 各1,000 pmol S014 ¥33,000 20 ● 100回 MR201 ¥13,000 100回 MR112 ¥13,000 ● QuickPrimer Escherichia／Shigella group（16S rDNA） QuickPrimer Enterotoxin（Clostridium perfringens）遺伝子 QuickPrimer Clostridium perfringens（16S rDNA） QuickPrimer Yersinia spp.（16S rDNA） 100回 MR203 ¥13,000 100回 MR204 ¥13,000 ● Kudoa septempunctata（18S rRNA）qPCR Detection Kit 50回 RR260A ¥66.000 11 ● Cycleave ®PCR Bacteria Screening Kit 50回 （ENT、BS各25回） CY208 ¥91,000 web ● 100回 RR240A ¥65,000 21 ● Bacteria（tuf gene）Quantitative PCR Kit Enterobacteriaceae（rplP gene）Quantitative PCR Kit Bacteria Screening PCR Kit 100回 RR241A ¥65,000 22 50検体分 RR114A ¥73,000 web ● MORA-Primer Diarrheal Pathogens ● MORA-DNA Diarrheal Pathogens ● MORA-Primer Food Pathogenes ● MORA-DNA Food Pathogens ● TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit コレラ（コレラ毒素） その他細菌 ● ● クドアセプテンプンクタータ 衛生指標菌 ● 下痢性病原菌遺伝子 食品病原菌遺伝子 キャリーオーバー防止試 ● 品種判別 肉種判別 Cycleave ®PCR 肉種判別キット（6 種） ● コメ判別用 PCR Kit I コメ判別 ● ● コメ判別用 PCR Kit II 平成 26∼27 年産新潟県コシヒカリ BL 判別用 PCR キット サルモネラ血清型 ● 76311 ¥37,500 76312 ¥115,200 10回分 76511 ¥26,000 各192 pmol 76313 ¥37,500 各768 pmol 76314 ¥115,200 10回分 76512 ¥26,000 6088 ¥46,000 200回 TaKaRa TaqTM HS PCR Kit, UNG plus ● 各192 pmol 各768 pmol 動物感染症検査 50回 R013S ¥20,000 200回 R013A ¥63,800 20サンプル分 CY218 ¥79,000 100回 RR211A ¥57,000 100回 RR213A ¥57,000 100判別用 RR217A ¥69,000 50回 R230A ¥52,000 50回 R231A ¥52,000 50回 R232A ¥52,000 50回 R233A ¥52,000 50回 R234A ¥52,000 50回 R235A ¥52,000 50回 R236A ¥52,000 ● Salmonella serovar Typhimurium Identification Kit Salmonella serovar Choleraesuis Identification Kit Salmonella serovar Enteritidis Identification Kit Salmonella serovar Dublin Identification Kit Salmonella serovar Gallinarum Identification Kit Salmonella serovar Infantis Identification Kit Salmonella serovar Hadar Identification Kit ● ウシ白血病ウイルス検出用 Probe/Primer/Positive control 50回 CY415 ¥31,000 ● qPCR Subtyping Primer Set for HA of Avian Influenza qPCR Subtyping Primer Set for NA of Avian Influenza 1 Set 6640 ¥52,000 1 Set 6641 ¥27,000 50回 CY230 ¥69,000 50回 CY231 ¥69,000 ● ● ● ● ● ウシ白血病ウイルス 鳥インフルエンザウイルス ● クリプトスポリジウム属・ジアルジア ● ● Cycleave ® RT-PCR Cryptosporidium（18S rRNA）Detection Kit Cycleave ® RT-PCR Giardia（18S rRNA）Detection Kit 呼吸器系感染症起因菌・ウイルス ● ● 水 質 検 査（2） ヒ ト 感 染 症 検 査（1） Cycleave ®PCR 呼吸器系感染症起因菌検出キット Ver.2 Cycleave ®PCR 呼吸器系感染症起因ウイルス検出キット Ver.2 サイトメガロウイルス、EB ウイルス ● ● -65- Cycleave ®PCR Cytomegalovirus（CMV）Detection Kit Cycleave ®PCR Epstein-Barr virus（EBV）Detection Kit 遺伝子検査キットカタログ 60反応 CY214 ¥96,000 60反応 CY216 ¥108,000 お問い合わせください 18 19 19 56 25 23 24 38 37 37 30 32 34 ≪製品一覧 -4≫ 製品のタイプ； ●リアルタイム PCR キット ●エンドポイント PCR キット ●プライマー 製 品 タイプ 製 品 名 ● Cycleave ®PCR Streptococcus agalactiae（GBS）Detection Kit Cycleave ®PCR GBS Capsular Typing Kit ヒトパピローマウイルス ● ● ● ● TaKaRa PCR Human Papillomavirus Detection Set TaKaRa PCR Human Papillomavirus Typing Set ヒトゲノムタイピング Cycleave ® Human ALDH2 Typing Probe/Primer Set Ver.2 TaKaRa PCR FLT3/ITD Mutation Detection Set EMA 試薬 − − − − − − 製品コード 価 格 （税別） 50回 CY233 ¥69,000 50回 CY234 ¥69,000 50回 6602 ¥57,000 100回 6603 ¥57,000 50回 CY403 ¥57,000 50回 6632 ¥41,000 100回 7700 ¥55,000 100回 7705 ¥55,000 50回 7711 ¥55,000 50回 7712 ¥55,000 50回 7713 ¥55,000 50回 7714 ¥55,000 50回 CY290 ¥28,000 掲 載 ページ ヒ ト 感 染 症 検 査（2） B 群溶血性レンサ球菌（GBS） ● 容 量 生菌由来遺伝子の検出 Viable Bacteria Selection Kit for PCR（Gram Negative） Viable Bacteria Selection Kit for PCR（Gram Positive） Viable Salmonella Selection Kit for PCR Viable enterohemorrhagic E. coli Selection Kit for PCR Viable Campylobacter Selection Kit for PCR Viable Legionella Selection Kit for PCR Ver.2.0 EMA 反応チェック用試薬 Control Test Kit（Viable Bacteria Selection） 33 35 36 58 web 58 【ライセンスについて】 製品紹介ページでは、各製品に該当する License Notice の記号を付記しています。 なお、License Notice の内容が変更になる場合もありますので、最新のライセンスに関しては弊社ウェブカタログでご確認ください。 [A6] PCR Notice：Purchase of this product includes an immunity from suit under patents specified in the product insert to use only the amount purchased solely in Environmental Testing, Food Testing, Industrial Microbiology and also for the purchaser's own internal research. No other patent rights are conveyed expressly, by implication, or by estoppel. Further information on purchasing licenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA. [L4] Quencher： This product is for measurement of amplification detection for research use only in life sciences research, industrial and environmental testing (including food industry, but excluding bio-terrorism and bio-warfare), non-human animal diagnostic testing, forensic testing and providing services to third parties who do not use the services for the purpose of (a) providing patient management or care, and in which the results of such services are not included in patient records and (b) providing bio-terrorism or bio-warfare testing; and specifically excluding, without limitation: (I) any human clinical, therapeutic or diagnostic uses and animal clinical and therapeutic uses (including any use of the results of any testing performed with any product for patient management or care, or the use of the results of the services for patient management or care) and (II) any research or services where the results of any test or assay are used for patient management, care or otherwise in making therapeutic or treatment decisions for a patient.A portion of this product is subject to proprietary rights of Epoch Biosciences, Inc. and are made and sold under license from Epoch Biosciences, Inc. under the patents and patent applications (US20020155484, WO0142505, WO02099141, US10/113,445, US09/876,830 and corresponding patents issued in other countries).There is no implied license for commercial use with respect to this product. A license must be obtained directly from Epoch Biosciences, Inc. with respect to any proposed commercial use of this product, and“commercial use”includes but is not limited to (A) the sale, lease, license or other transfer of this product or any material derived or produced from it, (B) the sale, lease, license or other grant of rights to use this product or any material derived or produced from it, and (C) the sale, lease, license or other transfer of kits which include this product. [L11] SYBR ® Green I : This product is provided under an intellectual property license from Life Technologies Corporation. The transfer of this product is contingent on the buyer using the purchased product and components of the product solely in research conducted by the buyer (whether the buyer is an academic or for-profit entity). The sale of this product is expressly conditioned on the buyer not using the product or its components for any Commercial Purposes. Commercial Purposes means any activity by a party to generate revenue, which may include, but is not limited to use of the product or its components: (i) in manufacturing; (ii) to provide a service, information, or data in return for payment; (iii) for therapeutic, diagnostic or prophylactic purposes; or (iv) for resale, regardless of whether they are resold for use in research. For information on purchasing a license to this product for purposes other than research, contact Life Technologies Corporation, 5791 Van Allen Way, Carlsbad, CA 92008 USA or [email protected]. [L25] Rice Identiify A : This product is covered by the claims of JP Patent No. 4072610. 本キットの電気泳動結果から判別を行う場合には、新潟県農林水産部監修の「新潟県 産コシヒカリ BL 判定基準書」を参照下さい。 本キットは、独立行政法人食品総合研究所のライセンス（特許出願番号 特願 2005-252949）お よび、新潟県と独立行政法人食品総合研究所のライセンス（特許出願番号 特願 2002-310616） を受けて、タカラバイオ（株）が製造販売しています。 [L26] Rice Identify B： 本キットは、独立行政法人食品総合研究所のライセンスを受けて ( 特 許出願番号 特願平 12−226854)、タカラバイオ ( 株 ) が製造販売しています。 [L27] Rice Identify C： 本キットは、独立行政法人食品総合研究所のライセンスを受けて ( 特 許出願番号 特願 2002-240084)、タカラバイオ ( 株 ) が製造販売しています。 [L33] Bacteria Screening： This product is covered by the claims of U.S. Patent No. 7,326,779 and its foreign counterpart patent claims. [L34] ： This product is covered by the claims of U.S. Patent No. 7,264,959 and its foreign counterpart patent claims. [L42] PCR Detection： This product is sold by Takara Bio Inc. under license from Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. and Osaka Prefecture University. This product is covered by the claims of U.S. Patent No. 7,563,594 and its foreign counterparts [L46] SYBR/Melting Curve Analysis:The purchase of this product includes a limited, non-transferable license for all fields other than human or veterinary in vitro diagnostics under specific claims of U.S. Patent Nos. 6,174,670, 6,569,627 and 5,871,908, owned by the University of Utah Research Foundation or Evotec Biosystems GmbH and licensed to Idaho Technology, Inc. and Roche Diagnostics GmbH, to use only the enclosed amount of product according to the specified protocols. No right is conveyed, expressly, by implication, or by estoppel, to use any instrument or system under any claim of U.S. Patent Nos. 6,174,670, 6,569,627 and 5,871,908, other than for the amount of product contained herein. [L47] Real-Time PCR Quantification Method ： The purchase of this product includes a limited, non-transferable license for all fields other than human or veterinary in vitro diagnostics under specific claims of U.S. Patent Nos. 6,174,670, 6,569,627, 6,303,305, and 6,503,720, owned by the University of Utah Research Foundation and licensed to Idaho Technology, Inc. and Roche Diagnostics GmbH. [L53a] Rox Reference Dye (Application Field) ： Use of this product is covered by one or more of the following US patents and corresponding patent claims outside the US: 5,928,907. The purchase of this product includes a limited, non-transferable immunity from suit under the foregoing patent claims for using only this amount of product solely in Environmental Testing, Industrial Microbiology, including reporting results of purchaser’s activities for a fee or other commercial consideration, and also for the purchaser's own internal research. No right under any other patent claim is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. Further information on purchasing licenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA. [L55a] PCR Detection： This product is the subject of the pending JP patent applications. [L56] Detction： 本製品は、 （株）ビー・エム・エルより特許第 4437525 号およ び第 4414648 号のライセンスを受け、タカラバイオ （株） が製造、販売しています。 [L59] Avian Influenza PCR Detection ： This product is the subject of the pending JP patent applications. [L60] Intestinal bacteria PCR Detection :Licensed under the pending JP patent application No.2012-35637 [L65] Intestinal bactria PCR DetectionThis product is covered by the claims of JP patent No. 5267293, owned by Shimane Prefecture. [L66] Intestinal bactria PCR Detection This product is provided under an intellectual property license from Life Technologies Corporation that authorizes the use of such intellectual property in connection with the purchased product solely for the purpose of providing human medical or diagnostic testing, analysis or screening services, including use for the purpose of guiding therapeutic strategy or determining outcome or providing clinical information or clinical analysis in return for compensation on a per-test basis, within the parameters set forth in the accompanying product literature. The transfer of this product is conditioned on the buyer not using this product for therapeutic or prophylactic purposes, for manufacture of another product, or any other purpose not expressly authorized. For information on purchasing a license to this product for purposes other than as described above, contact Life Technologies Corporation, 5791 Van Allen Way, Carlsbad, CA 92008 USA or [email protected]. 遺伝子検査キットカタログ -66- ≪製品一覧 -1≫ 製品のタイプ； ●リアルタイム PCR キット ●エンドポイント PCR キット ●プライマー 製 品 タイプ 製 品 名 ● TaKaRa ノロウイルス GI/GII 検出キット ● TaKaRa 腸管系病原細菌遺伝子検出キット ● Cycleave ®PCR O-157（VT gene）Screening Kit Ver.2.0 ● ● Cycleave ®PCR O-157（VT1/VT2）Typing Kit Cycleave ®PCR EHEC（O157/O26）Typing Kit Cycleave ®PCR EHEC（O111/O121）Typing Kit Cycleave ®PCR EHEC（O103/O145）Typing Kit Cycleave ®PCR EHEC（O165）Typing Kit O-157（ベロ毒素遺伝子）One Shot PCR Screening Kit Ver.2 O-157（ベロ毒素 1 型、2 型遺伝子）One Shot PCR Typing Kit Ver.2 EHEC（VT gene）PCR Screening Set O-157（ベロ毒素 1 型、2 型遺伝子）PCR Typing Set O-157（ベロ毒素 1 型、2 型遺伝子）PCR Typing Set Plus O-157 & ベロ毒素遺伝子同時検出キット EHEC（O antigens）PCR Typing Kit QuickPrimer Shiga I 遺伝子 QuickPrimer Shiga II 遺伝子 腸管出血性大腸菌 VT1 遺伝子検出用 Primer Set EVT-1&2 腸管出血性大腸菌 VT2 遺伝子検出用 Primer Set EVS-1&2 腸管出血性大腸菌 VT 遺伝子検出用 Primer Set EVC-1&2 ● TaKaRa qPCR Norovirus（GI/GII）Typing Kit − Legionella LC Medium Base 腸管三菌種 ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● 食 中 毒 検 査（1） 腸 管 出 血 性 大 腸 菌 食 中 毒 検 査（2） ノ ロ ウ イ ル ス Viable Legionella Selection Kit for LC EMA-qPCR − LED Crosslinker 12 Lysis Buffer for Legionella ● Cycleave ®PCR Legionella（16S rRNA）Detection Kit ● Bacterial 16S rDNA PCR Kit Bacterial 16S rDNA PCR Kit Fast（800） Fungal rDNA（ITS1）PCR Kit Fast Fungal rDNA（D1/D2）PCR Kit Fast ● ● ● ● ● ● ● 価 格 （税別） 掲 載 ページ 100回 RR255A ¥128,000 5 200回 RR139A ¥150,000 7 微生物推定解析 Cycleave ®PCR Mycoplasma Detection Kit TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set Virus Test Kit（HIV, HTLV, HCV, HBV, ParvoB19） Virus Test Kit（EBV, CMV, WNV） 細胞検査 50回 CY217A ¥52,000 100回 CY217B ¥96,000 50回 CY222 ¥69,000 20回 CY237 ¥28,000 20回 CY238 ¥28,000 20回 CY239 ¥28,000 50回 CY241 ¥69,000 48回 RR102A ¥63,000 48回 RR106A ¥77,000 200回 RR120A ¥69,000 100回 RR105A ¥69,000 100回 RR122A ¥69,000 50回 RR107A ¥77,000 50回 RR133A ¥77,000 100回 MR104 ¥13,000 100回 MR105 ¥13,000 各1,000 pmol S006 ¥33,000 各1,000 pmol S007 ¥33,000 各1,000 pmol S008 ¥33,000 水 質 検 査（1） レ ジ オ ネ ラ 生 菌 遺 伝 子 検 査 − − 製品コード 検便検査 ノロウイルス ● 容 量 50回 RR250A ¥90,000 250回 RR250B ¥360,000 90 ml 9016 ¥16,500 25回 7730S ¥18,000 50回 7730 一式 EM200 ¥33,000 14 14 16 18 20 10 27 ¥107,800 50回 9181 ¥11,000 25回 CY240S ¥31,000 50回 CY240 ¥57,000 50回 RR180A ¥42,000 50回 RR182A ¥42,000 50回 RR183A ¥42,000 50回 RR184A ¥42,000 50回 CY232 ¥57,000 6601 ¥57,000 100回 13 1 R5$ ¥120,000 55A ¥70,000 28 43 40 4 64∼66 ページにも製品一覧 -2、-3、-4 を掲載していますのでご確認ください。 各製品の紹介ページに該当するライセンス情報の記号を付記しています。対応するライセンスの詳細は 66 ページをご覧ください。 ・本カタログで紹介した製品は、研究用あるいは食品・環境分析用、または検便検査用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。 また、食品、化粧品、家庭用品等として使用しないでください。 ・タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。 ・本カタログに記載された社名および製品名は、特に記載がなくても各社の商標または登録商標です。 ・本カタログ記載の価格は 2015 年 9 月 24 日現在の希望小売価格です。価格に消費税は含まれておりません。 東京支店 関西支店 TEL 03-3271-8553 TEL 077-565-6969 FAX 03-3271-7282 FAX 077-565-6995 TaKaRa テクニカルサポートライン 製品の技術的なご質問に専門の係がお応えします。 TEL 077-565-6999 Website FAX 077-565-6995 http://www.takara-bio.co.jp 2015 年 9 月作成 20K