ACQUITY UPLC H-Class の

ACQUITY UPLC H-Class の
Auto・Blend テクノロジーを用いた
トコフェロールの順相分析
目的
ビタミン E サプリメントに含まれているトコフェ
ロール4 種を順相UPLC®によって分析しました。
ビタミンEサプリメント中のトコフェロール
順相UPLC分析はわずか1分未満で良好な再現性が得ら
れます。
なり、メチル化度が高いほど、ビタミン活性も高
0.60
値を示します。天然のビタミンEから作られたサプ
れるのに対して、合成サプリメントには一般にα
トコフェロール（最も活性の高い型）のみが含ま
AU
リメントにはこのトコフェロール4 種の分布がみら
δトコフェロール
り、それぞれクロマノール環でのメチル化度が異
γトコフェロール
αトコフェロール
ビタミン E 活性を示すトコフェロールには 4 種あ
βトコフェロール
背景
0.30
れています。一般にビタミン Eサプリメントの分析
は、逆相または順相クロマトグラフィーによって
行なわれていますが、ビタミン Eは脂溶性ビタミン
であるため、抽出は非極性溶媒を用いて行わな
ければなりません。このため、逆相クロマトグラ
フィーで分析するには、試料調製時に抽出溶媒を
移動相に用いる溶媒と親和性のあるものに置換
する必要がある求められる場合があります。この
点、順相クロマトグラフィーであれば、この抽出溶
媒の置換操作を省くことができます。通常、トコ
フェロールの分析に要する時間は、ベースライン
での成分4 種すべてを分離するためには、10 ∼30
分が必要とされます。天然ビタミン Eサプリメント
や原料の多数のロットを検査している QC 試験室
では、このような長い分析時間が行程の障害とな
る可能性があります。今回ご紹介する、順相クロ
マトグラフィーアプリケーションでは、分析時間
の短縮によりQC にかかわる時間が大幅に短縮で
き、最終的には製造スケジュール自体の時間短縮
につながります。
0.00
0.00
0.20
0.40
分
0.60
0.80
図 1. ACQUITY UPLC BEH HILIC カラムおよび ACQUITY UPLC H-Class システムを使用した、順相
UPLC によるトコフェロール標準試料 4 種の分析例
1.00
結果
トコフェロール
保持時間
相対標準偏差（%）
図1に示すように、ACQUITY UPLC®H-Classシステムでは、
ピーク面積
相対標準偏差（%）
α
0.14
0.19
ビタミンE 活性トコフェロール 4 種の順相クロマトグラ
β
0.13
0.19
フィー分析を1分未満で達成しました。このアプリケー
γ
0.13
0.17
ションのために、オプションの T HF/ ヘキサンキット
（P/N
δ
0.09
0.23
205000661）をH-Class本体に取り付けました。ACQUITY
表 1. トコフェロール標準試料 4 種の 6 回繰り返し注入における、保持時間およびピーク面積
UPLCクォータナリソルベントマネージャ
（ QSM）のAuto・
の再現性
Blend™機能を使用することで、アイソクラティック移動
1.00
AU
ける二次的な表面相互作用を減少させるために添加）
を添加したエチルアセテートを用いました。分離は、
0.50
ACQUITY UPLC BEH HILICカラムを使用しました。一般に、
シリカをベースとした順相カラムでは、表面汚染およ
δトコフェロール
た。溶媒 Aはn- ヘキサン、溶媒 Bは1% 酢酸（カラムにお
γトコフェロール
1.50
βトコフェロール
に毎回移動相を手動で調製する必要がなくなりまし
αトコフェロール
相をオンラインで混合することが可能になり、分析前
0.00
1.00
AU
保持時間およびピーク面積について表1に示すように
再現性の高い結果が得られました。また、天然、および
0.50
天然/合成配合のビタミンEサプリメント2種の分析結果
を図2に示します。サプリメントは100%ヘキサンで溶解
δトコフェロール
てん剤にBEHを用いたこの順相UPLC分析の結果から、
γトコフェロール
1.50
βトコフェロール
能力の再現性確保は困難とされています。しかし、充
αトコフェロール
び二次的な相互作用のため、逆相カラムのような保持
0.00
し、ACQUITY UPLC H-Classシステムに直接注入を行ない
0.00
ました。
トコフェロール4種は1分以内に分析が終了し、
0.20
0.40
分
0.60
0.80
1.00
図 2. ビタミン E サプリメント 2 種の分析
各成分の定量値からビタミンE 総量を求めることがで
きます。
まとめ
目的のアプリケーションに最適なクロマトグラフィー分離モードを選択すること
で、最短の分析時間で最良結果が得られます。順相クロマトグラフィーによるビタ
ミン E 活性トコフェロールの分析は、迅速で再現性のある方法です。特に試料調製
時間を計算に入れた場合、分析時間が逆相クロマトグラフィーよりも大幅に短縮さ
れます。ACQUITY UPLC H-Classシステムは、この順相アプリケーションに非常に適し
ており、Auto・Blendテクノロジーによって、移動相調製時間が短縮し、良好な再現
性が得られます。
©2012 Waters Corporation. Produced in Japan. 2012 年 4 月 720003690 JA PDF