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パブラール製剤に含まれる白金 バラジウムコロイ 空
薬理 と臨床 第 19巻 第 6号 2009年 H月 7 (397) パ プ ラール 製剤 に含まれる白金および パ ラジウム コロイ ドと溶存酸素 および ヒ ドロキ シル ラジカルの反 応 京都工芸繊維大学大学院 生体分子 工学部門 田嶋 邦彦 櫻井 康 博 大石 俊恵 金折 賢二 安田女子大学 薬学部 森本 千恵 安 田女子大学 家政学部 坂本 俊治 キ ー ワ ー ド :パ プ ラール製剤 ,白 金 ,パ ラジ ウム,コ ロイ ド,水 素 ,溶 存酸素濃度 ヒ ドロキシルラジカル消去活 性,ESR,ス ピン トラッピング 緒 , 水素 の血 中投与 ある いは 吸 引な どによる供給 が検 討 され て いるD。 水素原 子 は溶存水素 に比 べ て ヒ rEI ヒ ドロキ シル ラジカル消去活 性を維持 ある いは ドロキ シル ラジカル との反応が 速 い に ∼ 7× 109 M判 Sl)の ことが知 られて い る。水溶液 中で溶存 改善す るため に,抗 酸化活性 を備 えた医 薬品ある 水素 を水素原子 に変換す る機構 として ,白 金 ある いは食品な どが注 目され ,そ れ らの抗 酸化活性 に いはパ ラジウムな どの金 属 団体 表面 にお ける水素 つ いて 物理 化学 的な研 究 が 継 続 されて いる 1∼ 3)。 溶存水素 による ヒ ドロキ シル ラジカル の消去反応 が注 目 を集 めて いる 4)。 溶存水 素 とヒ ドロキ シル ラジカル の反応速度定数は 6× 107M● 分子 の吸着 と水素原子 へ の活 陛化が ある 。 白金お よびパ ラジウムの金属 コロイ ド溶液で あるパ プラ ール 製斉Jは 原液 (3.OmL)中 にコ ロイ ド状 の 白金 s■ 程度 で 0.6mgと パ ラジウム0.9mgを 含 み ,コ ロイ ド表面 あ り,そ の反応速度 は比較 的遅 いが ,無 毒な溶存 に吸着 した水素 によって ヒ ドロキ シリ レラジカル を Chernical・ Reactivity of Pd‐ ,and Pt― coHoid lnvolved in Papuraru to Solvated Oxygen and Hydroxyl Radical Kunihiko TAJIMA(Department of Biomolecular Engineering,Kyoto lnstitute of Technology,Kyoto, Japan)et al. 薬理と臨床 19(6):397∼ 404,2009 薬理 と臨床 第 19巻第 6号 (398) 8 消去す る機能 を有 して いるD。 パ プ ラ ー ル製斉」 の Ptコ ロイ ドの粒径 はお お よそ 50A,Pdコ ロィ ド の粒径 はおお よそ 100Aで あ り,そ の主 な効能 は 急性 胃炎お よび 胃粘膜 損傷 に対す る効果 である 2009年 11月 み合わ せて して 使用 した 。FI‐ ESR測 定 システム は 高速液体 ク ロマ トグラフ分析 用 送液ポ ンプ, (TOSOH)の 6方 切 り替えバル ブ,イ ンジェクシ パ プ ラー ル製斉」 は, ヒ ドロキ シリ レラジカル に対 し ョ ンバ ル ブ お よび扁 平型 石 英 ESRフ コー セ ル (Wilmad)で 構成 され,こ れ らを通 常 のHPLC用 て優れた消 去活性 を有 し,そ の重 量 あた りの消去 のPEEKチ ュ ーブ (外 径 1.58mm,内 径 0 8)。 9。 活性 は ビタ ミンCに 匹敵す る 本研究 では,パ プラール 製斉Jと ヒ ドロキ シル ラ ジカルお よび 溶存酸素 との反応 を研 究 し,そ れ ら の反 応 にお け るPtお よ び Pdコ ロ イ ドの作 用機序 を検 討 した。前者 の ヒ ドロキ シル ラジカルの消去 活 性 は フ ロー イ ン ジェ ク シ ョ ンESR装 置 (FI¨ ESR)3)を 使 用 して 検 討 した 。 さ らに,後 者 の溶 存酸素 との反応 は,電 気化 学 検出法 による溶存酸 素濃度 の時 間変化を計測 した。 本論文では,Ptコ ロイ ドが ドロキ シル ラジカル消去活 性 について 中 心的 な役割 を果 た し,Pdコ ロ イ ドはPtコ ロ イ ド の溶存酸素 による酸化 的な失活 を抑 制す る作用 を 有す ることを報告す る。 13mm) で接続 した。光照射 には,石 英ガ ラス とテ フロン ス ペ ー サ ー で構 成 され る フ ロー 型 の 照 射 セ ル GEOL)を 使用 し,紫 外線照射 には光 フ ァイバ ー 式照射装置 (三 永電機 ,UV-203S,150W)使 用 したの。DMPO/OHラ ジカル の濃 度 は,安 定 ラジ カルで あるTEMPOL(和 光純 薬 )の ESR信 号強 度 と濃度 の検量線か ら評 価 した 。 また,磁 場掃 引 形式で観測す るESR信 号 の強度補正 には外 部標準 試料 として 酸化 マ グネ シウム に希釈 したMn(II)イ オ ンを使用 し,磁 場強度 の補 正 にはMn(II)イ オ ン 由来 のESR信 号 の低磁 場か ら3本 目 と4本 目 の分 (8.69 mT)を 基準 とした。なお,FI‐ ESR 法 にお ける信号 強度 の実 験誤差 は ±5%以 内で あ 裂幅 る。溶存酸素濃度 の測定 にはTD‐ 51型 微量溶存酸 実 1.試 験 薬 パ プラーリ の原液 (1.OmL中 にPdコ ロイ ド レ製斉」 0.3mg,Ptコ ロィ ドの白金0.2mg)を 開封直後 に測 素計 (東 興化学研 究所 )を 使用 した。溶存酸素濃 度 のゼ ロ点補 正 には亜 硫酸水素 ナ トリウム の飽和 溶液 を使用 した。 また,大 気 を連続的に通 気 した 超純水 の溶存酸素濃 度 (8.H して測定値 を校正 した。 mg/mL)を 基準 と 定 に使用 した。 さ らに,パ プ ラー ル製 剤 の原料で ある,単 独 のPdコ ロイ ド溶液 (0.6mg/mL)お ょび Ptコ ロイ ド溶液 (0.4mg/111L)を 測定 に使用 した。 結 果 と 考 察 パ プ ラール 製剤お よび 両 コ ロイ ド溶液 は東洋厚生 1.Ptお よびPdコ ロイ ド溶液および パ プラール 製薬所 か ら提 供 され た。 5,5_dimethyl-1‐ pyrrO_ 製剤の酸素吸収挙動 パ プ ラー ル製 剤 の主成 分である Ptお よ 費 dコ ロイ ドと溶 存 酸 素 の 反 応 を電 極 法 で 観 測 した line_1_Oxide lDMPO)は 市販 の試薬 (Labotech) を精 製 せ ず にそ の まま測定 に 使用 した。 DMPO および過酸化水素 の水溶液 は ,超 純水 を使 用 して 大 気 中で 調 製 した 。 ESR信 号 の 強 度 補 正 に は TEMPOL (2,2,6,6_tetramethyl‐ 4_hydroxyp― iperidine― N― oxyl,和 光純薬 )を そ の まま使 用 し た。 いずれ の試薬及び測定溶液 も測定 の直前 に所 定 の濃度 に調製 した。 2.FI― ESR損 1定 および溶 存酸素濃度の測定 ESR測 定 )こ はTE‐ 100 型電子 ス ピン共 鳴装 (日 本電子 )に 改良型IPRITソ フ トウエ ア と組 FI― 置 CJブ /2た αJ P/1θ ″ ″ 2α ε O′ 0,α れ ′τた ι ′ ￠ ′y (Fig.1-1)。 あ らか じめ空 気 を通気 した蒸 留水 (1.2 mL)の 溶存酸素量 ヤ ま約 8.lmg/mLで あるが 水素ガ スで 置換 した0.4mLの Ptコ ロイ ド溶液 を加 えた混 合溶液 (Pt,0.10mg/mL)の 溶存 酸素濃 度 は 1分 以 内で ほぼゼ ロに 達 した。 この とき ,Pt コロイ ドが 吸収 した溶存酸素量 は 9.96mgで ある。 次 に ,同 様 に して 0.4mLの Pdコ ロイ ド溶 液 を 1.2mLの 空 気飽和 した超純水 に混合す る と ed, 0.15 mg/mL),溶 存酸素濃度 は1分 以 内 に3.6mg/ mLの 一定値 に達 し,こ のPdコ ロイ ド溶液が吸収 薬理 と臨床 第 19巻 第 9 (399) △ ０ロ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ・ ９ ８ ７ ６ ５ ４ ３ ２ １ ︵日■ ヽ 日 ︶〓ｏ∞ヽＸＯ嘔Ｏ 目２ 焉お壺８ ｃｏ０ △ 口● △ △ △ △ △ △ △ △ △ △ △ △ ロ 0 ロ 0 0.00 0 ロ ● 思 20 80 40 time(s) 100 ０ ０ ７ ７ ０ ０ ９ ８ ７ ０ ７ ７ ０ ６ ７ ０ ５ Δ Δ △ △ △ △ ▲ △ △ △ △ △ △ ０ ０ ４ ３ ７ ７ ７ ０ ２ ７ ７ ０ ０ １ ０ ６ ０ ９ ︵口 日 ヽ 日 ︶ 目 ｏ“ 、ｘ ｏ ﹂Ｏ Ｌ 戴 撼 ﹄ョ ｏｏｃ ｏ ｏ ８ 1-2 Xx × 10 Figure l 6号 2009年 H月 60tillnc(sf0 100 X 120 140 Time dependence of solvated oxygen concentration(mg/mL)of colloidal sOlutions observed before aeration(1-1)Pd colloid(A:Pd,0.15 mg/mL),Pt colloid(□ :Pt, 0.10 mg/mL),and papuraru(GD:Pt,0.10 mg/mL and Pd,0.15 mg/mL),and after aeration(1… 2)× ,sunl of the oxygen consumption by Pd and Pt colloids. The concentration of Pd and Pt c0110ids was equalto that of papuraru. した 溶存 酸素量 は4.20mgで あ る。 この 結果 は , パ プ ラール 製 剤 に含 まれ るPtコ ロ イ ドは Pdコ ロ イ ドに比 べ て溶存酸素 を効果的 に吸収す る ことを 示唆 して いる。 ここで比 較 のため に,パ プラール 粒子 の性質はそ の粒子径 ,表 面状態お よび 溶存水 素濃 度等 の影 響 を受 け るため ,Ptお よ dPdコ ロ イ ドの酸素親和性 を定量的 に議論す る ことは 困難 の原 液 0.8mlを 空気飽 和 した超純水 0.8mLに 製斉」 で ある。 ここで ,パ プラー ル製 剤 の主成分である Ptお よ費 dコ ロ イ ドの酸 素親和性 を比較す る限 混合す る と (Pdコ ロイ ド0.15mg/mL,Ptコ ロィ ド01l mg/mL),混 合か ら約 1分 以内 に溶存酸素濃 り,酸 素吸収量 のほ とん どはPtコ ロィ ドに依存 し て いる ことが結論でき る。 度 はほぼ 0に 達 し,そ の時間変化 は先 に述 べ たPt 次 に,こ れ ら単独 のPdお よ びRの コ ロイ ド溶 コロイ ドと類似 して いた 。一 般 に,金 属 コロイ ド 液 の溶存酸素濃度が 8.Omg/mLに 達す るまで空 気 crJれ Jε αJ Pttα ttα ε ο′ οgy αれどrLι z″ ′y 薬理 と臨床 第 19巻第 (400) 10 6号 2009年 H月 Figure 2 ESR spectrum observed for DIIPO/OH radical. The downward arrow indicates the static field for FI― ESR measurements. を充分 に通気 し,そ の後 の酸素濃度 の 時間変化 を 記録 した (Figure l-2)。 単独 のPtコ ロイ ド溶 液 減少速 度 はPdが 最 も遅 く (約 0.lmg/mL・ min), Ptと パ プ ラー ル 製 剤 が ほぼ 等 しく約 0.5mg/mL・ (0.lmg/mL)の 場 合 ,酸 素 ガス通気 を停 止 した 後 に。 溶存酸 素濃度 は徐 々 に低下 し,約 120秒 後 に酸 素濃 度 は 約 7.22mg/mLに 減 少 した。 他方 単独 のPdコ ロイ ド溶液 (0.15mg/mL)の 溶存酸 minで あった。試み として ,単 独 のPtお よび Pdコ , 素吸収はPtに 比べ て 遅 く,約 120秒 後 に溶 存酸素 ロイ ドの酸素消費量 を加算 して ,パ プ ラー ル製剤 と組 成比 が等 しい仮 想的な溶液 の溶存酸素濃度 の 時間変 化 をプ ロ ッ トす る と (Figure l-2),そ の 酸素濃度 は組成が 同 じパ プ ラール 製剤 の観測結果 濃度 は約 7 70mg/mLま で減 少 した。 これ らの酸 素飽和状態 にお ける酸素吸収 は ,前 述 の水素ガ ス を有意 に下回る傾 向 が 認め られた。 これは ,パ プ ラー ル製剤 に含 まれるPdと Ptコ ロイ ドは溶液 中 置換 したコ ロイ ド溶 液 の酸素吸収 に比 べ て特徴 的 で相互 作用 し,結 果 的 に溶存酸素 の 吸収 を抑 制 し に遅 い。興 味深 い ことに ,こ の遅 い酸素吸収 の 挙 動 は水素 置換 したPdコ ロイ ド溶液およびパ プ ラー た可能性 を示唆 して いる。酸素吸収 をコ ロイ ド金 属 の酸化失活 と考 え る と,こ の観測結果 はパ プ ラ ル製 剤 につ いて観測 さ れた ,1分 以 降 の遅 い 酸素 吸収 の挙動 とほぼ一 致 している。 これは ,こ の遅 ール 製剤 で 共存す るPdコ ロ イ ドは ,Ptコ ロ イ ド の酸化失活 を抑制す る効果 を有す る ことを意 味 し い溶 存酸素 の消費 過程 は ,Ptお よ び Pdコ ロ ィ ド に比べ て十 分な溶存 酸素 が存在す る場合 に観測 さ て いる。 れる現象 である可能 性 を支持 して いる。 また ,こ の遅 い過程 の酸素吸 収量 は コ ロイ ド濃度 に依存す 2.Ptお よびPdコ ロイ ド混合比率 の ヒ ドロキ シ る ことか ら (data not shown),金 属 コ ロイ ドが 流通型電子 ス ピン共 鳴法 ル ラ ジカル消書 舌性 (FI‐ ESR)に よって , 溶存酸素 を消費す る 可能性 を示唆 している。 した が って ,こ の遅 い溶存 酸素 の 消費 は金 属 コロイ ド 混合 組成 の 異なる Ptお よびPdコ ロ ィ ド混 合溶液 の ヒ ドロ キ シル ラジカ ル 消 去活 性 を検 討 した 。 の酸化 的な失活過程 に関連 した反応 として考 える DMPOを ス ピ ン トラッ ピング試薬 と して使用 し DMPOの ヒ ドロキ シル ラジカル アダク ト① MPO/ OH)の ESR信 号 を測定対象 とした。過酸化 水素 ことが できる。 次 に,パ プラール 製剤 の2倍 希釈溶液 (Pdコ ロ ィ ド0.15111g/mL,Ptコ ロィ ド0.lmg/mL)に つ いて も充分 に空 気 を通気 後 の溶存酸素濃度 の時間 変化 を記 録 した (Figure l-2)。 測定 開始か ら溶 存酸素 濃度 は単 調 に 減少 し,約 120秒 後 にお ける , の紫外線照射で生成 す るヒ ドロキ シル ラジカル を DMPO/OHラ ジカリ レとして検出 した 。FiguFe 2に 示 したESRス ペ ク トル は,HPLCポ ンプか ら連続 的 に送液す る超 純水 (1.OmL/min)に イ ンジェク シ ョンバ ル ブか らDMPO(100μ M)と 過酸化 水 溶存 酸素濃度 は約 7.15mg/mLで あ った。溶存 酸 素濃度 の時間変化 は単 独 のPtコ ロイ ド溶液 の観測 素 結果 に類似 して いる 。 また ,見 か けの酸素濃度 の 液 とす る)を 注入 (0.2mL)し ,反 応溶液がESRセ C′ ,4ゴ ι α′Pた α″ αεO′ Ogy αれどZた 9′ッ `″ “ (500mM)の 混合溶液 (以 下 ,コ ン トロー ル 溶 第 19巻 第 薬理 と臨床 6号 2009年 H月 11 (401) 3-1 3.0 ５ ０ ５ ０ ・ ・ ・ ・ ２ ２ １ １ 芝ュ＼［ 〓〇＼ＯＬΣ●］ ９ １ ・ Ｂ ︲ ・ 0.0 10 15 20 25 30 time(min) 3-2 〓 ュ ＼ ［工 Ｏ ＼ Ｏ Ｌ 〓 ０ ］ ５ ０ ５ ０ ５ ２ ２ １ １ ０ A1 9_l c-2 C-3 C-4 C-5 C-6 C-7 C-8 PTPc_10 10 15 time(min) Figure 3 FI― ESR signals of DⅣIPO/OH radical observed for each iniectiOn Of reaction mixture containing DMPO(100 μM),H202(500 μM)and diluted(0.05%to l.0%)colloidal solutions.(3-1)FI¨ ESR signal observed for control solution(A),and diluted colloidal solution of(Pt O.04 mg/mL,Pd O.3 mg/mL),B-1,0.03%;B… 2,0.05%;B-3,0.08%;B-4,0.10%;B-5,0.12%;B-6,0.15%;B-7,0.20 %;B… 8,0.30%;B-9,0.50%.(3-2)FI― ESR signal observed for control solution(A),and diluted c01loidal solution of(Pt O.2 mg/mL,Pd o.06 mg/mL),C-1,0.005%;C-2,0.01%;C-3,0.03%,C¨ 4, 0.05%;C-5,0.10%,C-6,0.15%;C-7,0.20%;C-8,0.309`;C-9,0.50%. FI― ESR measurements were conducted by following condition;microwave power lo mW,modulation width O.16 1nT, amplitude 1000,time constants l.O ms,sampling interval l.O ms,and number of accumulation 1000. ル に到達 した時点で 送液 を停 止 して外 部磁場 を掃 ク頂点 に磁 場 を固定 し,HPLCポ ンプか ら超純水 引 して 記録 した 。ESR信 号 は強 度比1:2:2:1の を毎分 1.OmLで 連続的 に送液 しなが ら,イ ンジェ クシ ョンバル ブか ら コ ン トロー ル溶液 を注入す る (aH=aN=1.50mT)を 示 し,そ の信号 の線形 と微細 結合定数か ら,本 ラジカル を 4本 線 の微細分裂 DMPO/OHラ ジカル と帰属 した。次 に ,DMPO/ OHラ ジカル のESR信 号 の低磁場か ら2本 目の ピー と,DMPO/OHラ ジカリ レの信号強度 の時間変化 曲 線 が観測 された (Figure 3-1)。 TEMPOLラ ジカ ル のESR信 号強度 を基準 として ,コ ン トロー ル溶 CJげ れ′ εα′Pttα ttπ αcο ′ οgッ クれグ r72ι ″ ￠′ッ 薬理 と臨床 (402) 12 第 19巻第 6号 2009年 H月 ■ 口 ◆ ■◆ ▲ ● ▲ ｏ︻工〇ヽ〇﹂Σ∩］ヽ∽［工〇ヽ〇﹂Σ∩］ １ ０ 4-1 ◆ ■ ▲ ◆ ■ ▲ ◆ ■ ▲ 。 0.0 001 01 各 コ ロ イ ド溶 液 の希 釈 率 (%) ◇墜 ０四 △ ０□ １ ０ △含 △ ９ △ 。［工〇ヽＯαΣ∩］ヽり［工〇ヽＯαΣの］ 4-2 霊 0 0.01 0.001 o.1 各 コロイ ド溶液 の希釈率 (%) Figure 4 1nhibitory curves of mixed solutions of Pd and Pt colloid.(4-1)圏 mixed solution composed of Pd (0.3 mg/mL)and Pt colloid(0.o4mg/mL),◆ Pd(o.3 mg/mL)and Pt colloid(0.04mg/mL),and▲ Pd colloid(0.3 mg/mL)and Pt colloid(o.lmg/mL);(4-2)□ mixed solution composed of Pd(o.15 mg/mL)and Pt colloid(0.2 mg/mL),◇ Pd c0110id(o.15 mg/mL)and Pt colloid(o.2 mg/mL),and ∠ゝPd c0110id(0,3 mg/1nL)and Pt colloid(o.2mg/mL).The bottom horizontal axis cOrresponds to the dilution(%)of these inixed colloidal s01utiOns. 液 のDMPO/OHラ ジカル の濃度 ([DMPO/OH]c) Mと 解析 した。 あ らか じめ水素ガス を通 気 したPdコ ロイ ド(o.3 mg/mL)と Ptコ ロイ ド (0.04mg/mL)の 混合溶 は2.6μ 液 を測 定試料 とし,空 気 で飽 和 した超純水で 0.4% か ら0.02%に 希釈 した測定溶液 につ いてFI― ESR測 CJJκ Jε α ′P″ αp72α ε Oあgy α燿グτみ ι ″ 9′ ッ 定 を行 つた (Figure 3-2)。 純水 で 0.05%に 希釈 した コ ロイ ド溶液 を含 む コ ン トロー ル溶液 をFI― ESRシ ステム に注入す る と,DMPO/OHラ ジカリレ の信 号強度 は コ ン トロー ルの 約 90%に 減 少 した。 希釈率 の低下 につれて ,DMPO/OHラ ジカル の強 度 は段階的 に減少 し,最 終的 に希釈率力Ю.5%の 溶 薬理と臨床 第19巻第 6 号 2009年 H月 13 (403) レ 液で はDMPO/OHラ ジカル の強度 は コ ン トロー リ 溶液 の約 25%に 減少 した。 コ ロイ ド溶液 を加 えた が増加 して も見か け の抗酸化活性 は ,ほ とん ど変 化 しない ことを意 味 して いる。 また,抗 酸化 曲線 溶液 のDMPO/OHラ ジカル濃度 のシグモイ ド曲線 の線形 もPd濃 度 と無 関係 に一 致 釈 率 を横軸 に とって 抗 酸化 曲線 をプ ロ ッ トした し,そ の線形か ら反応 次数 pは ほぼ 1と 解析 された。 Ptお よJPdコ ロイ ド溶液 の混合溶液 の ヒ ドロキ シル ラジカル に対す る抗酸化反応 では ,Ptコ ロイ ([DMPO/OH]s) とコ ン トロール 溶液 のDMPO/OH濃 度 ([DMPO/ OH]c)と の比率(%)を 縦軸 に,コ ロイ ド溶液 の希 (Figure 4-1,轟 :Pd O.3mg/mL,Pt O.04mg/mL, ◆ :Pd O.3mg/mL, Pt O.l mg/mL, ▲ :Pd O.3 mg/mL,Pt O.2mg/mL)。 ドが 中心的な役割 を果 た して いる ことが 明 らか に された。 いず れ もコロイ ド溶液 もシグモイ ド型 の線形 を示 し,見 か け のID50値 は それぞ れ約 0.14,0.2お ょび 0.25%で あ り,Ptコ ロイ ドの濃度増加 につ れてID50値 が減少す る傾 向 払 結 F田 が 顕著 である ,こ れ は,ヒ ドロキ シル ラジカ ル の あ らか じめ 水素置 換 したPd,Ptコ ロ イ ド溶 液 お よび パ プ ラール製 剤 は ,急 速な溶存酸 素 を吸 収 消 去活 性 が Ptの 添加 によ って 向上 した結果 で あ る。 さ らに,抗 酸化 曲線 の線形 を比較す る と ,Pt し,Ptコ ロイ ドの溶存酸素吸収 量 はパ プ ラール製 剤 にほぼ等 しく,Pdコ ロイ ドを有意 に上回る 6さ 濃度 の低下 につれて シグモイ ド曲線がなだ らか に なる傾 向 が ある。 シグモイ ド曲線 の線 形は競争反 らに ,3種 類 のコ ロイ ド溶液 の 水素 を空 気 で置換 す る と,金 属 コロイ ドの酸化 的な失活 に伴 う遅 い 応 の反応次数 Φ)に 依存 して変化する。 溶 存酸 素濃 度 の 低下 が認 め られ ,Ptコ ロイ ドは リや Pdコ ロイ ドに比べて溶存酸素 による酸化 を受 セ す い。 また ,パ プラー ル製斉Jの 溶 存酸素 吸収量 と p・ OH+Aox=H20+P'Oduct (1カ た とえば,上 式 の反応で はp=2の シグモイ ド曲線 の線形 は,p=1に 比べ てなだ らかにな ることがシ 単独 のPtお よ び Pdコ ロイ ド溶 液 の酸 素吸収 量 の 比較か ら,パ プ ラー ル製剤 に含 まれ るPdコ ロイ ド はPtコ ロイ ドの酸化 的 な失活 を抑制す る効果 を有 す る 可能性 が示唆 された 。FI‐ ESR法 で評 価 した ミュレーション計算 によって明 らかである。Pdお よびPtコ ロイ ド混合 溶液 の抗 酸化曲線 の線形は Ptの 存在比率が低下するにつれて ,見 かけの反応 Pdお よ びPtコ ロ イ ドの ヒ ドロキ シル ラジ カル消 去活 性 の比 較か ら,Ptコ ロ イ ドの 消去活 性 がPd 次数 pが 1を 上 回る ことを示 唆 して いる 。 実 際 に Pdコ ロ イ ド (0.3mg/mL)お よび Ptコ ロ イ ド コ ロイ ドの活性を上回る ことが判 明 した。さ らに パ プラール 製剤 のヒ ドロキ シル ラジカル消去活性 , (0.04mg/mL)混 合溶液 の反応次数pは 約2と 解析 され た。 この結果 は,Pdお よ びPtコ ロ イ ドの抗 酸 化活 性機 構 を考え る うえ で興 味深 い 知見 で あ り,今 後 の詳細な解析が期待 され る。 次 に,同 様 の測定手順で Ptコ ロイ ド溶液 とPdコ ロイ ド溶液 の混合溶 液 (Pt,0.2mg/mL,Pd,0.06 か ら0.3mg/mL)に ついてFI‐ ESR測 定 を行 い ,そ れぞれ の抗酸化曲線 をプ ロ ッ トした (Figure 4-2, O.06mg/mL,Pt O.2mg/mL,◇ :Pd O.15 mg/mL,Pt O.2mg/mL, △ :Pd 03mg/mL, Pt , は単独 のPtコ ロイ ドとほぼ等 しい ことか ら,パ プ レラジカル活性 は 主 にPt レ製剤 のヒ ドロキ シリ ラーフ コ ロイ ドに起 因す る ことが結 論 された。以上 の結 果か ら,パ プ ラール製剤 の安 定性 と優 れた抗酸化 活性 は ,共 存 す るPtコ ロ イ ドとPdコ ロ イ ドに起 因す る ことが半J明 した 。 謝 辞 □ :Pd O.2mg/mL)。 組成 の異な る コロイ ド溶液 の抗酸 化 曲線 はほぼ重な り,ID50値 は 0.1%か ら0.12%の 範 囲で一 致 した。 この結果は Pdコ ロイ ドの濃度 パプラール製剤,Ptコ ロイ ド溶液 およ♂ dコ ロイ ド溶液 を ご提供頂 いた株 式会社東洋厚 生製 薬所の築 地栄一 社長 に深謝 します。 O′ Ogy C′ jれ ,ε αJ P/7α rrlα θ αれどτみθ′ クρッ