犬の糞便血

ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
TABLE OF CONTENTS
LIST OF TABLES ......................................................................................................................................... 3
LIST OF FIGURES ....................................................................................................................................... 3
略語・用語の定義一覧................................................................................................................................ 4
2.6.4.1. まとめ.............................................................................................................................................. 5
2.6.4.1.1. 吸収 ........................................................................................................................................ 5
2.6.4.1.2. 分布 ........................................................................................................................................ 6
2.6.4.1.2.1. 組織分布.................................................................................................................... 6
2.6.4.1.2.2. 蛋白結合および赤血球移行 .................................................................................... 6
2.6.4.1.2.3. 胎盤通過.................................................................................................................... 6
2.6.4.1.3. 代謝 ........................................................................................................................................ 6
2.6.4.1.3.1. in vivo .......................................................................................................................... 6
2.6.4.1.3.2. in vitro ......................................................................................................................... 7
2.6.4.1.4. 排泄 ........................................................................................................................................ 8
2.6.4.1.4.1. 尿中および糞中排泄................................................................................................ 8
2.6.4.1.4.2. 乳汁中排泄................................................................................................................ 8
2.6.4.1.5. 薬物動態学的薬物相互作用................................................................................................. 8
2.6.4.2. 分析法.............................................................................................................................................. 9
2.6.4.3. 吸収................................................................................................................................................ 10
2.6.4.3.1. 膜透過性およびトランスポーター................................................................................... 10
2.6.4.3.1.1. 膜透過性および排出トランスポーターの寄与 .................................................. 10
2.6.4.3.1.2. 取り込みトランスポーターの寄与 ...................................................................... 11
2.6.4.3.2. 単回投与時の血漿中濃度................................................................................................... 11
2.6.4.3.2.1. マウス...................................................................................................................... 11
2.6.4.3.2.2. ラット...................................................................................................................... 13
2.6.4.3.2.3. イヌ.......................................................................................................................... 15
2.6.4.3.2.4. ラット：代謝物 M2 ............................................................................................... 16
2.6.4.3.3. 反復投与時の血漿中濃度................................................................................................... 18
2.6.4.3.3.1. ラット...................................................................................................................... 18
2.6.4.3.3.2. ウサギ...................................................................................................................... 20
2.6.4.3.3.3. イヌ.......................................................................................................................... 21
2.6.4.4. 分布................................................................................................................................................ 22
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2.6.4 薬物動態試験の概要文
2.6.4.4.1. ラットにおける組織分布................................................................................................... 22
2.6.4.4.2. in vitro 蛋白結合................................................................................................................... 23
2.6.4.4.2.1. ボスチニブ.............................................................................................................. 23
2.6.4.4.2.2. 代謝物 M2 および M5............................................................................................ 24
2.6.4.4.2.3. 赤血球移行.............................................................................................................. 24
2.6.4.4.2.3.1. in vitro ....................................................................................................... 24
2.6.4.4.2.3.2. in vivo ........................................................................................................ 24
2.6.4.4.3. 胎盤通過（ラット） .......................................................................................................... 24
2.6.4.5. 代謝................................................................................................................................................ 25
2.6.4.5.1. in vivo..................................................................................................................................... 25
2.6.4.5.1.1. マウス...................................................................................................................... 25
2.6.4.5.1.2. ラット...................................................................................................................... 26
2.6.4.5.1.3. イヌ.......................................................................................................................... 26
2.6.4.5.1.4. ヒト.......................................................................................................................... 27
2.6.4.5.1.5. 代謝物曝露量.......................................................................................................... 30
2.6.4.5.2. in vitro.................................................................................................................................... 32
2.6.4.5.2.1. 肝ミクロソームおよび肝細胞を用いた in vitro 代謝......................................... 32
2.6.4.5.2.2. ボスチニブの代謝に関与するチトクローム P450 分子種の同定 .................... 33
2.6.4.5.2.3. ボスチニブの代謝における FMO 分子種の関与 ............................................... 34
2.6.4.5.2.4. ボスチニブの代謝における UGT 分子種の関与................................................ 34
2.6.4.6. 排泄................................................................................................................................................ 35
2.6.4.6.1. 尿中および糞中排泄 .......................................................................................................... 35
2.6.4.6.1.1. ラット...................................................................................................................... 35
2.6.4.6.1.2. イヌ.......................................................................................................................... 35
2.6.4.6.2. 乳汁中排泄（ラット） ...................................................................................................... 35
2.6.4.7. 薬物動態学的薬物相互作用........................................................................................................ 36
2.6.4.7.1. チトクローム P450 阻害 .................................................................................................... 36
2.6.4.7.2. チトクローム P450 誘導 .................................................................................................... 36
2.6.4.7.3. P-糖蛋白質阻害.................................................................................................................... 37
2.6.4.8. その他の薬物動態試験................................................................................................................ 37
2.6.4.9. 考察および結論............................................................................................................................ 37
2.6.4.10. 図表.............................................................................................................................................. 39
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2.6.4.11. 参考文献...................................................................................................................................... 39
LIST OF TABLES
Table 1.
マウス，ラットおよびイヌにボスチニブを静脈内投与したときの薬物動態パラ
メータ...........................................................................................................................................17
Table 2.
マウス，ラットおよびイヌにボスチニブを経口投与したときの薬物動態パラ
メータ...........................................................................................................................................18
Table 3.
ラットにボスチニブを反復経口投与したときのトキシコキネティクス ...........................20
Table 4.
ウサギにボスチニブを反復経口投与したときのトキシコキネティクス ...........................21
Table 5.
イヌにボスチニブを反復経口投与したときのトキシコキネティクス ...............................22
Table 6.
ラット，イヌおよびヒトにおける M2 および M5 の曝露量比較 ........................................32
LIST OF FIGURES
Figure 1.
放射標識ボスチニブの構造式...................................................................................................10
Figure 2.
ボスチニブ（SKI-606）を雌ヌードマウスに単回静脈内（5 mg/kg）または経口
（50 mg/kg）投与したときの血漿中濃度推移........................................................................12
Figure 3.
ボスチニブを雌ヌードマウスに絶食下または摂食下，50 mg/kg で単回経口投与
したときの血漿中濃度推移.......................................................................................................13
Figure 4.
雌雄ラットにボスチニブ（SKI-606）を単回静脈内（5 mg/kg）または経口
（50 mg/kg）投与したときの血漿中濃度推移（平均  標準偏差）....................................14
Figure 5.
ボスチニブ（WAY-173606）を雄ラットに 20 および 60 mg/kg で単回静脈内投
与したときの血漿中濃度推移（平均  標準偏差）...............................................................15
Figure 6.
ボスチニブ（SKI-606）を雌イヌに単回静脈内（2 mg/kg，摂食下）または経口
（5 mg/kg，摂食下または絶食下）投与したときの血漿中濃度推移（平均  標
準偏差）.......................................................................................................................................16
Figure 7.
ボスチニブの代謝物 M2（WAY-198760）を雌雄ラットに 50 mg/kg で単回経口
投与したときの血漿中濃度推移（平均  標準偏差）.........................................................17
Figure 8.
マウス，ラット，イヌおよびヒト血漿中に存在すると推定される代謝物 .......................29
Figure 9.
マウス，ラット，イヌおよびヒト排泄物中に存在すると推定される代謝物 ...................30
Figure 10.
in vitro における推定代謝経路 ..................................................................................................33
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略語・用語の定義一覧
略語・用語
AAG
AUC
BCRP
CL
Cmax
CML
CYP
EDTA
fu
FMO
GLP
HEPES
HPLC
HSA
IC50
LC-MS
LC-MS/MS
LE
LSC
MED
MRP
NZW
OATP
Papp
P-gp
SD
t½
Tmax
UGT
Vdss
省略していない表現または用語の定義
1-acid glycoprotein，1-酸性糖蛋白質
Area under the plasma concentration-time curve，血漿中濃度－時間曲線下面積
Breast cancer resistance protein，乳癌耐性蛋白質
Systemic clearance，全身クリアランス
Maximum plasma concentration，最高血漿中濃度
Chronic myelogenous leukemia，慢性骨髄性白血病
Cytochrome P450，チトクローム P450
Ethylenediaminetetraacetic acid，エチレンジアミン四酢酸
Unbound fraction，非結合型分率
Flavin-containing monooxygenase，フラビン含有モノオキシゲナーゼ
Good Laboratory Practice，医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施の基準
N-(2-hydroxyethyl) piperazine-N'-(2-ethanesulfonic acid，N-（2-ヒドロキシエチル）ピ
ペラジン-N’-2-エタンスルホン酸
High performance liquid chromatography，高速液体クロマトグラフィ
Human serum albumin，ヒト血清アルブミン
50% inhibitory concentration，50%阻害濃度
Liquid chromatography and mass spectrometry，高速液体クロマトグラフィ／質量分析
Liquid chromatography and tandem mass spectrometry，高速液体クロマトグラフィ／
タンデム質量分析
Long-Evans
Liquid scintillation counting，液体シンチレーション計測
Minimal effective dose，最小有効量
Multidrug resistance protein，多剤耐性蛋白質
New Zealand white，ニュージーランドホワイト
Organic anion-transporting polypeptide，有機アニオン輸送ポリペプチド
Apparent permeability coefficient，見かけの透過係数
P-glycoprotein，P-糖蛋白質
Sprague-Dawley
Apparent elimination half life，見かけの終末相消失半減期
Time to reach Cmax，最高血漿中濃度到達時間
Uridine diphosphate glucuronyl transferase，ウリジン二リン酸グルクロニルトランス
フェラーゼ
Volume of distribution at steady state，定常状態における分布容積
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2.6.4 薬物動態試験の概要文
2.6.4.1. まとめ
ボスチニブ（SKI-606；WAY-173606；PF-05208763）の吸収，分布，代謝および排泄について，薬理
試験および毒性試験で使用した動物種であるマウス，ラット，ウサギおよびイヌを用いた in vivo 試
験で評価するとともに，分布および代謝の検討には目的に応じた in vitro 試験系（Caco-2 細胞，肝ミ
クロソームなど）を用いた評価を実施した。
2.6.4.1.1. 吸収
Caco-2 細胞単層膜におけるボスチニブの透過性は中等度であった。ボスチニブは P-糖蛋白質（P-gp，
ABCB1），乳癌耐性蛋白質（BCRP，ABCG2）および多剤耐性蛋白質（MRP）の基質であった。し
かし，マウス，ラットおよびイヌに経口投与したときのバイオアベイラビリティが中等度であったこ
とから，吸収におけるこれらの排出トランスポーターの寄与は小さいと考えられた。ボスチニブのヒ
ト肝細胞への取り込みは受動拡散を介していた。
ボスチニブを静脈内投与したときの全身クリアランス（CL）はマウスおよびイヌでは肝血流量の半
分程度であり（それぞれ 2.25 および 0.914 L/h/kg），ラットでは肝血流量と同程度の値（雄および雌
でそれぞれ 7.68 および 4.22 L/h/kg）を示した。定常状態における分布容積（Vdss）は，検討したすべ
ての動物で体内総水分量を超える高い値（11.5～19.4 L/kg）を示し，ボスチニブが組織に広く分布す
ることが示唆された。単回経口および静脈内投与したときの見かけの消失半減期（t½）は，マウスお
よびラットで中等度（2.5～5.4 時間）であり，イヌでは長かった（13.5～17.7 時間）。ボスチニブを
経口投与したときのバイオアベイラビリティは中等度であり，雌ヌードマウスで 52.6%，雄および雌
ラットでそれぞれ 23.0%および 59.5%，イヌで摂食時 64.0%および絶食時 49.6%であった。すべての
動物種において，吸収は中等度または速やかであり，Tmax は 1.3～5.5 時間であった。
毒性試験の一部として実施したトキシコキネティクス試験のデータを用いてボスチニブ反復投与時
の血漿中濃度を評価した。ラットの 1 ヵ月間および 6 ヵ月間反復投与毒性試験，ならびに 2 年間がん
原性試験（投与 6 ヵ月のデータ）でのボスチニブの曝露量は，おおむね用量増加にしたがって増加し
た。すべての用量において，投与 28 日，180 日または 182 日の曝露量（AUC/投与量）は，雄に比べ
て雌の方が約 3～5 倍高かった。雌雄いずれにおいても，蓄積はほとんど認められなかった。同様に，
心血管系安全性薬理試験において雄ラットにボスチニブを 50 mg/kg/日の用量で 56 日間反復経口投与
したときにも，未変化体および主要代謝物である M5（N-脱メチル体；WAY-173607；PF-05312061）
の血漿中での蓄積はわずかであった。2 年間がん原性試験において，投与 182 日での代謝物 M2（酸
化的脱塩素体；WAY-198760；PF-05898965）の曝露量（AUC）は雄では未変化体の 3%，雌では定量
限界未満で，M5 の曝露量は雄および雌で未変化体のそれぞれ 30%および 2%であった。
イヌを用いた用量設定試験における 37.5 mg/kg 投与時の曝露量（AUC(0-24)）は，絶食時に比べて摂食
時の方が約 2 倍高く，摂食時投与により高い曝露量を達成できることが示唆された。イヌに摂食時投
与したときの投与 28 日または 273 日における曝露量は，用量に比例して増加した。すべての用量に
おいて，曝露量に性差は認められず，血漿中での蓄積はわずかであった。
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2.6.4.1.2. 分布
2.6.4.1.2.1. 組織分布
Sprague-Dawley（SD）（アルビノ）ラットに[14C]ボスチニブを経口投与したとき，放射能は大部分の
組織および器官に広く分布し，分布容積は大きかった。脳内に放射能は検出されず，[14C]ボスチニブ
および代謝物がラットの血液－脳関門をほとんど通過しないことが示された。ほとんどの組織におい
て，組織中放射能濃度は投与後 168 時間以内に最高血漿中濃度（Cmax）の 10%未満にまで低下した。
アルビノラットにおいて高い放射能濃度が認められた組織は，ハーダー腺，小腸，大腸，肝臓および
副腎であった。Long-Evans（LE）（有色）ラットでは，メラニン含有組織に対して高い親和性で放
射能の結合が認められ，放射能の取り込みおよび滞留はブドウ膜で特に顕著であった。しかし，有色
ラットを用いた光安全性試験において光毒性は認められず，ビーグル犬を用いた反復投与毒性試験に
おいても眼および皮膚に毒性所見は認められていない。
2.6.4.1.2.2. 蛋白結合および赤血球移行
マウス，ラット，ウサギ，イヌおよびヒト血漿中での[14C]ボスチニブの in vitro 蛋白結合率は高く，
非結合型分率（fu 値）はそれぞれ 0.059，0.061，0.028，0.041 および 0.063 であった。検討したいず
れの動物種においても，約 100～10000 ng/mL の血漿中濃度範囲で[14C]ボスチニブの結合率に著しい
変化は認められなかった。ヒト血漿中での in vitro 成績と同様，ボスチニブ 200 mg を投与した慢性肝
機能障害患者および健康被験者から採取した血漿中での ex vivo 蛋白結合率も高かった（fu = 0.034～
0.058）。また，生理学的濃度のヒト血清アルブミン（HSA）に対するボスチニブの結合率は高く
（fu = 0.046），1-酸性糖蛋白質（AAG）に対する結合率は中等度（fu = 0.286）であった。
ヒト血中での主代謝物である M5 の in vitro 血漿蛋白結合率は高く，マウス，ラット，ウサギ，イヌ
およびヒトにおける fu 値はそれぞれ 0.049，0.062，0.023，0.021 および 0.055 であった。これらの動
物種における蛋白結合率は，約 50～500 ng/mL の範囲で濃度に依存しなかった。
in vitro（ラット，イヌおよびヒト）ならびに in vivo（マウス，ラットおよびイヌ）評価において，検
討したすべての動物種を通して，ボスチニブまたは[14C]ボスチニブ由来放射能の血液/血漿中濃度比
は約 1 であり，ボスチニブおよびボスチニブ由来放射能は血球および血漿にほぼ均等に分布すること
が示唆された。
2.6.4.1.2.3. 胎盤通過
妊娠ラットに[14C]ボスチニブを経口投与したときの血漿と比較した胎盤，胎児および羊水中放射能濃
度の AUC(0-72)比はそれぞれ 21，2.9 および 2.2 であり，[14C]ボスチニブ由来放射能が胎盤を通過し，
胎児がその曝露を受けることが示された。なお，ラットおよびウサギにおいては生殖発生毒性（胚・
胎児死亡および胎児奇形の増加）が認められている。
2.6.4.1.3. 代謝
2.6.4.1.3.1. in vivo
マウス，ラットおよびイヌに[14C]ボスチニブを経口投与したときの血漿中の主要放射能成分は未変化
体であった。雄マウスの主要血中代謝物は M5 および M6（N-オキシド体）で，血漿中放射能に占め
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2.6.4 薬物動態試験の概要文
る割合はそれぞれ最大 11%および 6%であった。
雌雄ラットの血中代謝物として M4（O-脱メチル体）
，
M5，M6，M9（未同定）および M10（未同定）が検出されたが，血漿中放射能の 10%以上を占める
ものは雄ラットにおける M9 のみであった［17%（投与後 4 時間）～40%（投与後 24 時間）］。雄イ
ヌの主要血中代謝物は M5 および M6 で，投与後 2～24 時間の血漿中放射能に占める割合はそれぞれ
2.8%～20.3%および 7.8%～10.2%であった。ラットおよびイヌにおいて in vivo で検出された代謝物は
in vitro と同様であった。
ヒトにボスチニブを単回または反復経口投与したときの血漿中の主要成分は未変化体であった。血中
の主代謝物は M2 および M5 であった。健康被験者にボスチニブ 500 mg を単回経口投与したときの
M2 および M5 の全身曝露量（AUC）は，それぞれ未変化体の 18%および 24%であった。M6 は未変
化体の 10%未満であり，微量代謝物と考えられた。Src 形質転換線維芽細胞を用いた足場非依存的増
殖能アッセイにおけるこれら 3 種類の代謝物の活性は，未変化体の 2%～6%であった（2.6.2.2.2 項）。
ボスチニブの主排泄経路は糞中排泄であり，主に未変化体および M5 として排泄された。
ラットおよびイヌにボスチニブを経口投与したときの血漿中に有意な濃度の M2 が認められなかっ
たことから，代謝物 M2 の安全性について，別途 in vitro 遺伝毒性試験およびラット 2 週間毒性試験
を実施して評価した。このラット 2 週間毒性試験における M2 の全身曝露量は，ヒトにボスチニブ
500 mg を単回経口投与したときに認められる曝露量の約 2～3 倍であった。M5 については，雄ラッ
トにボスチニブを 50 mg/kg/日の用量で 56 日間反復投与したときの血漿 AUC は未変化体の 29%～
38%であった。この未変化体に対する M5 の AUC 比および 6 ヵ月間毒性試験における無毒性量
（30 mg/kg/日）での未変化体の AUC から，雄ラットにおける M5 の全身曝露量は，ヒトにボスチニ
ブ 500 mg を単回経口投与したときの曝露量の約 2 倍と推定された。以上の結果から，これらの毒性
試験より得られたラットにおける M2 の全身曝露量ならびにラットおよびイヌにおける M5 の推定曝
露量は，おおむねヒトにおける曝露量と同程度以上と考えられた。
2.6.4.1.3.2. in vitro
マウス，ラット，イヌおよびヒト肝ミクロソームを用いた in vitro 試験で得られたボスチニブの固有
クリアランスは，雄イヌおよびヒトで高く，雄ラットで中等度であり，雄マウスおよび雌ラットで低
かった。ラットおよびヒトの肝ミクロソームおよび肝細胞における主代謝経路は，酸化的脱塩素化，
N-脱メチル化および N-オキシド化であった。マウス肝ミクロソームにおける主代謝経路は N-脱メチ
ル化および N-オキシド化であり，イヌ肝ミクロソームおよび肝細胞における主代謝経路は N-オキシ
ド化であった。ヒト肝ミクロソームおよび肝細胞で認められた主代謝経路と同様の経路は，主要な毒
性試験で使用した動物種であるラットまたはイヌの肝ミクロソームおよび肝細胞でも認められた。
ヒト肝ミクロソームおよび cDNA 発現ヒトチトクローム P450（CYP）分子種を用いた in vitro 試験に
おいて，ボスチニブの主代謝酵素は CYP3A4 であることが示された。この結果と一致して，ヒトに
おいてボスチニブをケトコナゾール（CYP3A および P-gp 阻害剤）と併用したときにはボスチニブの
血漿 AUC が約 8 倍増加したのに対して，リファンピシン（CYP3A および P-gp 誘導剤）と併用した
ときにはボスチニブの血漿 AUC が約 94%減少した。
遺伝子組換えヒトフラビン含有モノオキシゲナーゼ（FMO）を用いた試験において，ボスチニブは
N-オキシド体（M6）に代謝された。ヒト肝ミクロソームでの M6 生成に関与する主要酵素は CYP3A
であるのに対して，ヒト腎ミクロソームでの M6 生成に関与する主要酵素は FMO であった。
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2.6.4 薬物動態試験の概要文
ヒト血中代謝物である M2 のグルクロン酸抱合体（M13）の生成におけるウリジン二リン酸グルクロ
ニルトランスフェラーゼ（UGT）の寄与を検討するための in vitro 試験を実施した結果，M13 生成に
関与している UGT 分子種は UGT1A1，UGT1A3，UGT1A4，UGT1A6，UGT1A7，UGT1A8，UGT1A9，
UGT1A10，UGT2B4，UGT2B7，UGT2B15，UGT2B17 など多岐にわたることが示された。このこと
から，
M2 のグルクロン酸抱合体は小腸および肝臓両方の UGT によって生成することが示唆された。
2.6.4.1.4. 排泄
2.6.4.1.4.1. 尿中および糞中排泄
ラットおよびイヌに[14C]ボスチニブを経口投与したときの放射能の主排泄経路は糞中であった。
2.6.4.1.4.2. 乳汁中排泄
授乳中のラットに[14C]ボスチニブを 10 mg/kg の用量で単回経口投与したとき，投与後 0.5 時間の早い
時点で放射能が乳汁中に分泌され，出生児血漿中にも，特に母動物への投与後 24 および 48 時間に放
射能が検出された。
2.6.4.1.5. 薬物動態学的薬物相互作用
ヒトにボスチニブ 500 mg［慢性骨髄性白血病（CML）患者における推奨臨床用量］を 1 日 1 回反復
経口投与したときの定常状態における Cmax 平均値（0.43 mol/L または 226 ng/mL）と CYP1A2，
CYP2A6，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP3A4/5 阻害に関するボスチニブの Ki 値の比
（Cmax/Ki）は 0.1 未満であり，検討したこれらの CYP 分子種の基質である薬物を臨床で併用投与し
ても，ボスチニブがその代謝を阻害することに起因する薬物相互作用が生じる可能性は低いと考えら
れた。また，ヒト肝細胞において，ボスチニブは CYP1A2，CYP2B6，CYP2C9，CYP2C19 および CYP3A
を誘導しなかった。したがって，これらの CYP 分子種の基質である薬物を臨床で併用投与しても，
ボスチニブがその代謝を誘導することによる薬物相互作用が生じる可能性も低いと考えられた。
Caco-2 細胞単層膜において，ボスチニブは P-gp を介するジゴキシンの排出を濃度依存的に阻害し，
IC50 は 2 μmol/L（約 1.06 g/mL）であった。したがって，ボスチニブはジゴキシンのような P-gp 基
質の薬物動態に影響を及ぼす可能性があると考えられた。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
2.6.4.2. 分析法
4.2.2.1.1 RPT-52825，4.2.2.1.2 RPT-51973，4.2.2.1.3 RPT-52824，4.2.2.1.4 RPT-61666，4.2.2.1.5 RPT-51974，
4.2.2.1.6 RPT-52823，4.2.2.1.7 RPT-64071，4.2.2.1.8 RPT-56239，4.2.2.1.9 RPT-64162，4.2.2.1.10
RPT-73572，4.2.2.1.11 RPT-75544，4.2.2.1.12 RPT-79906（参考）
分析法のバリデーションおよび安定性試験，ならびに非臨床薬物動態およびトキシコキネティクス試
験で使用したボスチニブ，代謝物 M2 および M5 定量法の一覧表を薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.2
および 2.6.5.1.3 に示す。
マウス，
ラット，ウサギおよびイヌ血漿中のボスチニブ濃度を測定するため，
LC-MS/MS 法を開発し，
バリデーションを行った（RPT-52825，RPT-51973，RPT-52824，RPT-61666，RPT-51974，RPT-52823，
RPT-64071）。血漿試料 0.2 mL を使用したとき，マウスおよびウサギの定量法では 10～500 ng/mL，
ラットおよびイヌの定量法では 5～500 ng/mL の範囲で検量線は良好な直線性を示した。ボスチニブ
添加血漿試料を-70°C で保存したとき，マウス，ラット，ウサギおよびイヌ血漿中でそれぞれ少なく
とも 112，239，189 および 272 日間安定であった（RPT-56239，RPT-64162）。また，代謝物 M2（酸
化的脱塩素体）のラット 2 週間毒性試験における血漿中濃度測定のため，LC-MS/MS による M2 濃度
定量法のバリデーションを行った（RPT-73572）。血漿試料 0.1 mL を使用したとき，この方法は 5～
250 ng/mL の範囲で検量線は良好な直線性を示した。M2 添加血漿試料を-70°C で保存したとき，ラッ
ト血漿中で少なくとも 106 日間安定であった（RPT-75544）。さらに，ラット 2 年間がん原性試験に
おける血漿中濃度測定のため，LC-MS/MS によるボスチニブ，M2 および M5（N-脱メチル体）濃度
定量法のバリデーションを行った（RPT-79906）。血漿試料 0.1 mL を使用したとき，ラット血漿中の
ボスチニブ，M2 および M5 濃度定量法は，5～500 ng/mL の範囲で検量線は良好な直線性を示した。
ボスチニブ，M2 および M5 は，EDTA 添加ラット血漿試料中において，約-70°C で 52 日間安定であっ
た。
ラット組織分布試験，マウス，ラット，イヌおよびヒト代謝試験，ならびにラットおよびイヌ排泄試
験は[14C]ボスチニブ（Figure 1）を用いて実施した。[14C]ボスチニブの標識位置は化学的にも代謝的
にも安定と考えられ，比放射能は 68.6～97.3 Ci/mg，放射化学純度は 98%以上であった。ラットに
おける組織分布試験では，定量的全身オートラジオグラフィ法および組織摘出法を用いて評価した。
定量的全身オートラジオグラフィ法における定量下限は 0.162 g•eq/g であった。血漿，尿，糞，全
血，ホモジネート組織，胎盤，羊水，乳汁および胎児中の放射能濃度は液体シンチレーション計測
（LSC）法により測定した。全血，ホモジネート組織および糞試料中の放射能濃度は試料を燃焼させ
た後に LSC 法により測定した。定量下限はバックグラウンド値の 2 倍とした。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Figure 1.
放射標識ボスチニブの構造式
*放射性標識体の標識部位。
2.6.4.3. 吸収
2.6.4.3.1. 膜透過性およびトランスポーター
2.6.4.3.1.1. 膜透過性および排出トランスポーターの寄与
4.2.2.2.1 RPT-71680，4.2.2.2.2 RPT-80268（参考）
Caco-2 細胞単層膜を用いてボスチニブの膜透過性および P-gp 基質としての可能性を評価した
（RPT-71680；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.4）。ボスチニブ濃度 1，10 および 100 μmol/L におけ
る頂端膜側から基底膜側（A→B）および基底膜側から頂端膜側（B→A）への見かけの透過係数（Papp）
を測定した。また，P-gp 阻害剤であるベラパミル（100 μmol/L）存在下でのインキュベーションも行
い，排出機構における P-gp の関与について検討した。ボスチニブは 1～100 μmol/L の濃度範囲で中
等度の透過性を示した。ボスチニブの排出は濃度依存的であり，100 μmol/L では飽和に達すると考え
られた。ベラパミル存在下ではボスチニブ（10 μmol/L）の排出比が 4.8 から 1.8 に低下したことから，
Caco-2 細胞単層膜を通したボスチニブの輸送に P-gp が関与していることが示された。
また，Caco-2 細胞単層膜におけるボスチニブの透過性に他の薬物排出トランスポーターが関与して
いる可能性を検討した（RPT-80268；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.5）。ボスチニブ濃度 1 μmol/L
における A→B および B→A 両方向の Papp を測定するとともに，P-gp および CYP3A の双方を阻害す
ることが知られているケトコナゾール（1，10 および 100 μmol/L），P-gp 阻害剤であるベラパミル
（100 μmol/L）
，
BCRP 阻害剤である KO-143（5 μmol/L）
または MRP 阻害剤である MK-571（100 μmol/L）
存在下でインキュベーションを行った。その結果，上述の結果同様，ボスチニブは中等度～高度の透
過性を示した。ケトコナゾールは濃度依存的にボスチニブの A→B 方向の輸送を増加させるとともに
B→A 方向の輸送を減少させ，ケトコナゾール 100 μmol/L 存在下での排出比は非存在下での 16.4 か
ら 1.0 に低下した。また，ベラパミル，KO-143 および MK-571 はボスチニブの排出比に対してそれ
ぞれ 93%，66%および 74%の阻害作用を示した。これらの結果から，ボスチニブの排出には，P-gp
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
に加えて BCRP や MRP など他の排出トランスポーターも関与している可能性が示唆された。
しかし，
上述のとおりボスチニブの膜透過性が中等度であったことに加え，マウス，ラットおよびイヌにおけ
るバイオアベイラビリティが中等度であったことから，in vivo でのボスチニブの吸収におけるこれら
のトランスポーターによる排出の寄与は小さいと考えられた。
2.6.4.3.1.2. 取り込みトランスポーターの寄与
4.2.2.2.3 WAY-173606_
_195303（参考）
ヒト肝細胞を用いて，リファマイシン SV［肝取り込みトランスポーターである有機アニオン輸送ポ
リペプチド（OATP）1B1 および 1B3 の阻害剤］存在下および非存在下でボスチニブの肝取り込みを
評価した（WAY-173606_
_195303；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.6）。能動的取り込みを確
認するための陽性対照として，OATP1B1 および OATP1B3 の基質であるロスバスタチン（1 μmol/L）
を用いた。
ボスチニブ 1 μmol/L における肝取り込み速度は，リファマイシン SV によってわずかに（15%）阻害
されたが，25 μmol/L では阻害されなかった。一方，ロスバスタチンの肝取り込み速度はリファマイ
シン SV によってほぼ完全に（92%）阻害された。これらの結果から，in vitro においてボスチニブは
受動拡散によってヒト肝細胞内に取り込まれ，肝細胞へのボスチニブの取り込みに対する OATP1B1
および OATP1B3 の寄与は小さいと考えられた。
2.6.4.3.2. 単回投与時の血漿中濃度
マウス，ラットおよびイヌにボスチニブを単回静脈内または経口投与したときの血漿中濃度の推移を
評価した。結果の一覧を Table 1 および Table 2 に示す。
2.6.4.3.2.1. マウス
4.2.2.2.4 RPT-51795，4.2.2.2.5 RPT-53291
雌ヌードマウス（1 時点あたり 3 匹）にボスチニブを 5 mg/kg で単回静脈内投与および 50 mg/kg で単
回強制経口投与したときの薬物動態およびバイオアベイラビリティを評価した（RPT-51795）。経口
投与液の溶媒は 2%ポリソルベート 80，0.5%メチルセルロースおよび 0.06%酢酸であった。5 mg/kg
静脈内投与時の CL は 2.25 L/h/kg であり，肝血流量（約 5.4 L/h/kga）の約半分であった。Vdss（11.5 L/kg）
は体内総水分量（0.6～0.7 L/kg）に比べて高値を示し，ボスチニブが組織に広く分布することが示唆
された。50 mg/kg 単回経口投与時のバイオアベイラビリティは 52.6%であった。静脈内および経口投
与における t½はそれぞれ 4.8 および 4.2 時間であった（Figure 2）。
a
Davies B, Morris T. Physiological parameters in laboratory animals and humans. Pharm Res 1993;10(7):1093-5.
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Figure 2.
ボスチニブ（SKI-606）を雌ヌードマウスに単回静脈内（5 mg/kg）または経口（50 mg/kg）
投与したときの血漿中濃度推移
ヌードマウスを用いた薬理試験におけるボスチニブの全身曝露量を推定するため，雌ヌードマウスに
絶食および摂食下でボスチニブを単回経口投与したときの薬物動態を評価した。経口投与液の溶媒は
薬効薬理試験で使用した溶媒と同様，2%ポリソルベート 80 および 0.5%メチルセルロース（酢酸は
含まない）とした（RPT-53291）。本試験でボスチニブ 50 mg/kg を単回経口投与したときの全身曝露
量（AUC(0-)）は，絶食および摂食下投与でそれぞれ 7986 および 5710 ng•h/mL であり，絶食時と摂
食時を平均した AUC(0-)は 6848 ng•h/mL であった（Figure 3）。この結果から，曝露量が用量に比例
すると仮定した場合，CML 移植ヌードマウスモデルを用いた薬効薬理試験における最小有効量
（MED；15 mg/kg）における曝露量は 2054 ng•h/mL と推定された（2.6.2.2.3 項）。
これらの試験で得られた薬物動態パラメータを薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.7 に示す。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Figure 3.
ボスチニブを雌ヌードマウスに絶食下または摂食下，50 mg/kg で単回経口投与したとき
の血漿中濃度推移
FED
FASTED
2.6.4.3.2.2. ラット
4.2.2.2.6 RPT-51749，4.2.2.2.7 RPT-51150
雌雄 SD ラット（1 時点あたり雌雄各 4 匹）にボスチニブ 5 mg/kg を単回静脈内投与（急速静注）お
よび 50 mg/kg を単回経口投与したときの薬物動態およびバイオアベイラビリティを評価した
（RPT-51749）
。雄および雌ラットに 5 mg/kg を単回静脈内投与したときの CL
（7.68 および 4.22 L/h/kg）
a
b
は肝血流量（約 3.3 L/h/kg ）に比べて同程度 であり，Vdss は大きく（15.2 および 17.1 L/kg），t½は
中等度（2.5 および 4.3 時間）であった。雌ラットに比べて，雄ラットの方が CL は高く，t½は短かっ
た。Vdss は雌雄で同程度であり，体内総水分量（約 0.7 L/kga）を大きく上回っていたことから，ボス
チニブがラットの組織に広く分布することが示唆された。このことは組織分布試験で得られた結果と
も一致する（2.6.4.4.1 項）。Cmax は雄および雌でそれぞれ 224 および 834 ng/mL であり，AUC(0-)は
a
Davies B, Morris T. Physiological parameters in laboratory animals and humans. Pharm Res 1993;10(7):1093-5.
b
血漿クリアランスから推定される血液クリアランスと肝血流量を比較した。In vitro の血液/血漿中濃度比
（2.6.4.4.2.3.1 項）から，ラットおよびイヌの血液クリアランスは血漿クリアランスのそれぞれ 0.63 倍および 1.1 倍と
推定される。なお，マウスでは in vitro 血液/血漿中濃度比を測定しておらず，in vivo での血液/血漿中濃度比が 0.95～
1.26 であったこと（2.6.4.4.2.3.2 項）から，血液クリアランスと血漿クリアランスはほぼ等しいと推定された。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
それぞれ 1507 および 7099 ng•h/mL であった。ボスチニブのバイオアベイラビリティは雄で 23.0%，
雌で 59.5%であった（Figure 4）。
Figure 4.
雌雄ラットにボスチニブ（SKI-606）を単回静脈内（5 mg/kg）または経口（50 mg/kg）
投与したときの血漿中濃度推移（平均  標準偏差）
雄
雌
雄 SD ラットにボスチニブを 20 mg/kg（3 匹）または 60 mg/kg（4 匹）の用量で単回静脈内投与（5
分間の低速静注）する薬物動態試験を別途実施した（RPT-51150）。上述の試験と同様，CL は肝血
流量に比べて高く（20 および 60 mg/kg でそれぞれ 6.53 および 6.31 L/h/kg，以下同じ），Vdss は大き
く（12.3 および 19.4 L/kg），t½は中等度（2.6 および 3.8 時間）であった。この試験における 20 およ
び 60 mg/kg 投与時の CL は上述の試験における 5 mg/kg 投与時とも同程度であったことから，検討し
た用量範囲内で雄ラットにおける薬物動態は線形であることが示唆された（Figure 5）。
これらの試験で得られた薬物動態パラメータを薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.8 に示す。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Figure 5.
ボスチニブ（WAY-173606）を雄ラットに 20 および 60 mg/kg で単回静脈内投与したと
きの血漿中濃度推移（平均  標準偏差）
2.6.4.3.2.3. イヌ
4.2.2.2.8 RPT-51748
雌イヌ 4 匹にボスチニブ 2 mg/kg を単回静脈内投与（急速静注）および 5 mg/kg を摂食または絶食下
単回経口投与したときの薬物動態およびバイオアベイラビリティを評価した（RPT-51748；薬物動態
試験の概要表，2.6.5.1.9）。各動物に対して，投与の間に 1 週間の休薬期間を設けて 3 種類の投与
（2 mg/kg 静脈内，5 mg/kg 摂食下経口および 5 mg/kg 絶食下経口）を行った。静脈内投与後の CL
（0.914 L/h/kg）は肝血流量（約 1.9 L/h/kga）の半分程度でありb，Vdss が体内総水分量（約 0.6 L/kga）
を超える高い値（13.5 L/kg）を示したことから組織に広く分布することが示唆され，t½は長かった
（13.5 時間）。イヌに経口投与したときの絶対的バイオアベイラビリティは摂食時で 64.0%，絶食時
で 49.6%であり，吸収は比較的速やかであった（Tmax は摂食時で 1～4 時間，絶食時で 1～2 時間）。
また，ボスチニブの曝露量（AUC(0-)）は絶食下投与（3091 ng•h/mL）に比べて，摂食下投与
（3835 ng•h/mL）の方が高かった。さらに，10 日間用量設定試験において，ボスチニブを 37.5 mg/kg
の用量で投与したとき，摂食下投与により AUC が 2 倍増加した（2.6.4.3.3.3 項）。これらの結果か
ら，イヌにボスチニブを経口投与した場合，絶食下投与に比べて摂食下投与で曝露量が増加すること
が示唆された（Figure 6）。
a
Davies B, Morris T. Physiological parameters in laboratory animals and humans. Pharm Res 1993;10(7):1093-5.
b
2.6.4.3.2.2 項 脚注 b 参照。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Figure 6.
ボスチニブ（SKI-606）を雌イヌに単回静脈内（2 mg/kg，摂食下）または経口（5 mg/kg，
摂食下または絶食下）投与したときの血漿中濃度推移（平均  標準偏差）
2.6.4.3.2.4. ラット：代謝物 M2
4.2.2.2.9 RPT-73187
代謝物 M2（酸化的脱塩素体）はヒト血漿中には認められるものの，ラットおよびイヌにボスチニブ
を経口投与したときの血漿中には認められず，ヒト特異的な代謝物と考えられたことから，M2 の毒
性試験を別途実施することとした。ラットを用いた M2 の 2 週間毒性試験における用量設定のため，
雌雄の SD ラットに M2 を 50 mg/kg の用量で単回経口投与したときの薬物動態を評価した
（RPT-73187；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.10）。M2 を経口投与したときの Tmax は約 2 時間，t½
は 5.4～9.0 時間の範囲であり，AUC は雄（295 ng•h/mL）と雌（230 ng•h/mL）で同程度であった。こ
れらの値はヒトにボスチニブ 500 mg を単回経口投与したときの値（440 ng•h/mL；B1871023，試験
3160A4-1106-US）に比べて低かったことから，M2 のラット 2 週間毒性試験ではこれより高い用量
（70 および 210 mg/kg）を選択した。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Figure 7.
Table 1.
ボスチニブの代謝物 M2（WAY-198760）を雌雄ラットに 50 mg/kg で単回経口投与した
ときの血漿中濃度推移（平均  標準偏差）
マウス，ラットおよびイヌにボスチニブを静脈内投与したときの薬物動態パラ
メータ
投与量
t½
AUC(0-)
C5min
CL
Vdss
動物種／性別
(mg/kg)
(ng/mL)
(h)
(ng•h/mL)
(L/h/kg)
(L/kg)
ヌードマウス／雌
5a
1049
4.8
2220
2.25
11.5
ラット／雄
5a
646
2.5
655
7.68
15.2
ラット／雌
5a
723
4.3
1194
4.22
17.1
ラット／雄
20b
4058
2.6
3067
6.53
12.3
ラット／雄
60b
14,911
3.8
10291
6.31
19.4
イヌ／雌
2a
605
13.5
2449
0.91
13.5
C5min = 投与後 5 分における濃度，t½ = 見かけの終末相消失半減期，AUC(0-) = 投与後 0 時間から無限大時間
まで外挿した血漿中濃度－時間曲線下面積，CL = 全身クリアランス，Vdss = 定常状態における分布容積。
a
溶媒：クエン酸緩衝液（pH 3.0～3.5）。
b
溶媒：5%ブドウ糖注射液（pH 2.9～3.1 に調整）。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Table 2.
マウス，ラットおよびイヌにボスチニブを経口投与したときの薬物動態パラメータ
動物種／性別
ヌードマウス／雌
ヌードマウス／雌
ヌードマウス／雌
（絶食）
ラット／雄
ラット／雌
投与量
(mg/kg)
50a
50b
Cmax
(ng/mL)
1509
1132
Tmax
(h)
4.0
2
50b
50a
50a
1177
224
834
2～4
3.0
5.5
t½
AUC(0-24)
(ng•h/mL)
NC
5649
AUC(0-)
(ng•h/mL)
11677
5710
Fc
(%)
52.6
NA
2.9
3.7
5.4
17.7
7947
NC
NC
7986
1507
7099
NA
23.0
59.5
(h)
4.2
3.5
イヌ／雌
5a
230
2.3
NC
3835
64.0
イヌ／雌
13.5
（絶食）
5a
206
1.3
NC
3091
49.6
Cmax = 最高血漿中濃度，Tmax = 最高血漿中濃度到達時間，t½ = 見かけの終末相消失半減期，AUC(0-24) = 投与
後 0～24 時間の血漿中濃度－時間曲線下面積，NC = 計算せず，AUC(0-) = 投与後 0 時間から無限大時間まで
外挿した血漿中濃度－時間曲線下面積，F = 全身バイオアベイラビリティ，NA = 該当なし。
a
溶媒：2%ポリソルベート 80，0.5%メチルセルロースおよび 0.06%酢酸。
b
溶媒：2%ポリソルベート 80 および 0.5%メチルセルロース。
c
ボスチニブを経口および静脈内投与したときの投与量で補正した AUC(0-)を比較することにより算出した
値。
2.6.4.3.3. 反復投与時の血漿中濃度
ボスチニブまたは代謝物 M2 を反復経口投与時の血漿中濃度は，トキシコキネティクスデータを用い
て評価した。
2.6.4.3.3.1. ラット
4.2.3.2.4 RPT-52934，4.2.3.2.7 RPT-64288，4.2.3.4.1.1
RPT-64286，4.2.3.7.5.1 RPT-74244
-2185，4.2.1.3.9 SP3810（参考），4.2.3.5.2.2
1 ヵ月間毒性試験において，SD ラット（1 群雌雄各 9 匹）にボスチニブを 10，30 または 70 mg/kg/
日の用量で 1 日 1 回反復経口投与したときのトキシコキネティクスを評価した（RPT-52934；毒性試
験の概要表，2.6.7.11；Table 3）。ボスチニブの曝露量（Cmax および AUC）は用量増加に伴っておお
むね用量比を上回る増加を示した。投与 28 日の投与量で補正した曝露量（AUC／投与量）は，雄（10，
30 および 70 mg/kg/日群でそれぞれ 32，56 および 59）に比べて雌（それぞれ 147，146 および 201）
の方が高かった。また，30 mg/kg/日の用量で投与 1 日の曝露量を測定してボスチニブの蓄積を評価
したところ，累積係数は雄および雌でそれぞれ 1.3 および 1.0 であり，蓄積はほとんど認められなかっ
た。
6 ヵ月間毒性試験において，SD ラット（1 群雌雄各 9 匹）にボスチニブを 10，30 または 100/70 mg/kg/
日aの用量で 1 日 1 回反復経口投与したときのトキシコキネティクスを評価した（RPT-64288；毒性試
験の概要表，2.6.7.14；Table 3）。投与 180 日のボスチニブの曝露量（Cmax および AUC）は 10 mg/kg/
日から 30 mg/kg/日では用量比を上回る増加を示したが，30 mg/kg/日から 100/70 mg/kg/日では用量比
の増加を下回った。1 ヵ月間試験と同様，雌の曝露量は雄に比べて約 3～5 倍高かった。
a
高用量群では投与 7 週（43 日）以降，用量を 100 mg/kg/日から 70 mg/kg/日に減量した。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
2 年間がん原性試験において，SD ラット（1 群雌雄各 9 匹）にボスチニブを雄 2.5，7.5 または 25 mg/kg/
日，雌 1.5，5 または 15 mg/kg/日の用量で 1 日 1 回反復経口投与したときのボスチニブならびに代謝
物 M2 および M5 のトキシコキネティクスを評価した（ -2185；毒性試験の概要表，2.6.7.26；Table 3）。
投与 182 日のボスチニブの曝露量（Cmax および AUC）は用量比を上回る増加を示した。1 ヵ月間お
よび 6 ヵ月間試験と同様，雌の曝露量は雄に比べて約 2～3 倍高かった。投与 182 日の時点で代謝物
M2 の曝露量は雄では微量（未変化体の 3.4%未満）および雌では定量限界未満であり，M5 は雄およ
び雌でそれぞれ未変化体の 30%および 2%であった。
これらの反復投与毒性試験およびがん原性試験でみられた曝露量の性差は単回投与薬物動態試験で
認められた結果と同様であり（2.6.4.3.2.2 項），ボスチニブの代謝が雄ラットでより速やかであるこ
とに起因している可能性が考えられた（2.6.4.5.1.2 項）。
雄ラットを用いた安全性薬理試験（SP3810；毒性試験の概要表，2.6.7.8）において，ボスチニブを
50 mg/kg/日の用量で 56 日間反復投与したときの未変化体および M5 の血漿中での蓄積はわずかで
あった。投与 1，28 および 56 日における M5 の AUC はそれぞれ 1270，1250 および 2020 ng•h/mL で
あり，それぞれ未変化体（3530，4350 および 5370 ng•h/mL）の 36%，29%および 38%に相当した。
発生毒性試験において，交配させた雌 SD ラット（各群 9 匹）に妊娠 6 日から 15 日までの 10 日間，
ボスチニブを 1，3 または 10 mg/kg/日の用量で反復経口投与したときのトキシコキネティクスを評価
した（RPT-64286，毒性試験の概要表，2.6.7.32；Table 3）。妊娠ラットにおけるボスチニブの曝露量
（Cmax および AUC）は，1～3 mg/kg/日の用量範囲で用量にほぼ比例して増加し，10 mg/kg/日では 1
および 3 mg/kg/日に比べて用量比を上回る増加を示した。
雌雄の SD ラットを用いた M2 に関する 2 週間毒性試験の投与 8 日に M2 のトキシコキネティクスを
評価した（RPT-74244；毒性試験の概要表，2.6.7.35）。ラットに M2 を 70 mg/kg/日または 210 mg/kg/
日の用量で 1 日 1 回経口投与したときの M2 の全身曝露量は雌雄で同程度であった。AUC は用量に
ほぼ比例して増加した。210 mg/kg/日での曝露量（雄および雌でそれぞれ 929 および 1488 ng•h/mL）
は，ヒトにボスチニブ 500 mg を単回経口投与したときの M2 の血漿 AUC(0-)平均値（502 ng•h/mL；
B1871023，試験 3160A4-1106-US）よりも高値であった。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Table 3.
ラットにボスチニブを反復経口投与したときのトキシコキネティクス
試験
評価日
投与量
(mg/kg/日)
1 ヵ月間毒性試験
（RPT-52934）
28
10
30
70
6 ヵ月間毒性試験
（RPT-64288）
180
10
30
100/70b
2 年間がん原性試験
（ -2185）
182
2.5
1.5
7.5
5
25
15
性別
雄
雌
雄
雌
雄
雌
Cmax (ng/mL)
非結合型
総濃度
濃度 a
31
1.9
126
7.7
156
9.5
539
33
314
19
1500
92
AUC(0-24) (ng•h/mL)
非結合型
総濃度
濃度 a
318
19
1467
89
1686
103
5017
306
4092
250
14090
859
雄
雌
雄
雌
雄
雌
85
394
346
1222
503
1474
5.2
24
21
75
31
90
807
4387
3810
15405
7630
22692
49
268
232
940
465
1384
雄
雌
雄
雌
雄
雌
18.8
25.4
87.6
162
349
724
1.15
1.55
5.34
9.88
21.3
44.2
244
298
840
1902
5127
10570
14.9
18.2
51.2
116
313
645
17.3
1.1
204
12
雌
1
70.4
4.3
857
52
雌
3
377
23
4463
272
雌
10
AUC(0-24) = 投与後 0～24 時間の血漿中濃度－時間曲線下面積，Cmax = 最高血漿中濃度。
a
非結合型 Cmax または AUC = 総 Cmax または AUC×0.061（ラットにおける非結合型分率平均値；RPT-54418）。
b
投与 7 週（43 日）以降，高用量群の用量を 100 mg/kg/日から 70 mg/kg/日に減量した。
c
妊娠ラットに妊娠 6 日から 15 日まで反復経口投与した。妊娠 15 日の結果を示す。
発生毒性試験
（RPT-64286）
10c
2.6.4.3.3.2. ウサギ
4.2.3.5.2.7 RPT-66820
発生毒性試験において，交配させた雌ニュージーランドホワイト（NZW）ウサギ（各群8匹）に妊娠
6日から15日まで，ボスチニブを3，10または30 mg/kg/日の用量で1日1回反復経口投与したときのト
キシコキネティクスを評価した（RPT-66820；毒性試験の概要表，2.6.7.33；Table 4）。ボスチニブの
曝露量（AUC）は，3～30 mg/kg/日の用量範囲で用量にほぼ比例して増加した。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Table 4.
ウサギにボスチニブを反復経口投与したときのトキシコキネティクス
Cmax (ng/mL)
AUC(0-24) (ng•h/mL)
非結合型
非結合型
総濃度
総濃度
濃度 a
濃度 a
b
129
3.6
1308
37
発生毒性試験
雌
10
3
505
14
5451
153
（RPT-66820）
雌
10
1857
52
14002
392
雌
30
AUC(0-24) = 投与後 0～24 時間の血漿中濃度－時間曲線下面積，Cmax = 最高血漿中濃度。
a
非結合型 Cmax または AUC = 総 Cmax または AUC×0.028（ウサギにおける非結合型分率平均値；
RPT-54418）。
b
妊娠ウサギに妊娠 6 日から 15 日まで反復経口投与した。妊娠 15 日の結果を示す。
試験
評価日
投与量
(mg/kg/日)
性別
2.6.4.3.3.3. イヌ
4.2.3.2.9 RPT-53053，4.2.3.2.11 RPT-53029，4.2.3.2.14 RPT-66535
10 日間用量設定試験において，雌ビーグル犬（各群 2 または 3 匹）にボスチニブを 5，37.5，75 また
は 150 mg/kg/日の用量で 1 日 1 回経口投与したときのトキシコキネティクスを評価した（RPT-53053；
毒性試験の概要表，2.6.7.9）。11 匹の動物を 4 群に分け，第 1 群（3 匹）を溶媒対照群とし，第 2 群
（3 匹）には絶食下で 150 mg/kg/日を 3 日間投与した。第 3 群（3 匹）には，5～9 日間の休薬期間を
設けて，75 mg/kg を単回（絶食下），37.5 mg/kg/日を 2 日間（絶食下），37.5 mg/kg を単回（摂食下）
投与した。第 4 群（2 匹）には 5 mg/kg/日を 10 日間（摂食下）投与した。ボスチニブの曝露量（Cmax
および AUC）は，摂食下投与では 5～37.5 mg/kg/日の用量範囲で用量に比例して増加し，絶食下投与
では 37.5～150 mg/kg/日の用量範囲で用量比を下回る増加を示した。37.5 mg/kg/日投与時の曝露量は，
絶食下投与（AUC(0-24) = 6349 ng•h/mL）に比べて摂食下投与（AUC(0-24) = 13330 ng•h/mL）の方が約 2
倍高かった。本試験では第 2 群および第 3 群では毒性発現により投与を途中で中止したため，投与
10 日に得られた薬物動態パラメータは第 4 群（5 mg/kg/日）の少数（2 匹）の動物で得られたデータ
に限られてはいるが，この結果から投与 1 日と比較した投与 10 日の平均累積係数は 1.4 であり，イ
ヌにボスチニブを反復投与したときの血漿中での蓄積はわずかであることが示唆された。
にボスチニブを 0.5，
1.5 または 5 mg/kg/
1 ヵ月間毒性試験において，
雌雄のビーグル犬（1 群雌雄各 3 匹）
日の用量で 1 日 1 回摂食下経口投与したときのトキシコキネティクスを評価した（RPT-53029；毒性
試験の概要表，2.6.7.16；Table 5）。投与 28 日における曝露量（Cmax および AUC）は，用量にほぼ
比例して増加した。曝露量に性差は認められなかった。すべての用量において，28 日間反復投与し
たときのボスチニブの蓄積は軽度～中等度であり（累積係数 1.29～1.54），10 日間用量設定試験と同
様の結果であった。
9 ヵ月間毒性試験において，雌雄のビーグル犬にボスチニブを 1，3 または 10 mg/kg/日の用量で 1 日
1 回摂食下経口投与したときのトキシコキネティクスを評価した（RPT-66535；毒性試験の概要表，
2.6.7.18；Table 5）。投与 39 週におけるボスチニブの曝露量は，1～10 mg/kg/日の用量範囲で用量に
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
ほぼ比例して増加した。曝露量に性差はなく，1 ヵ月間試験同様，血漿中でのボスチニブの蓄積はわ
ずかであった（蓄積係数 1.23～1.61）。
Table 5.
イヌにボスチニブを反復経口投与したときのトキシコキネティクス
試験
評価日
投与量
(mg/kg/日)
1 ヵ月間毒性試験
（RPT-53029）
1
0.5
1.5
5
28
0.5
1.5
5
9 ヵ月間毒性試験
（RPT-66535）
1
性別
雄
雌
雄
雌
雄
雌
雄
雌
雄
雌
雄
雌
Cmax (ng/mL)
非結合型
総濃度
濃度 a
13
0.5
16
0.7
56
2.3
52
2.1
257
11
177
7.3
17
0.7
21
0.9
78
3.2
69
2.8
364
15
291
12
AUC(0-24) (ng•h/mL)
非結合型
総濃度
濃度 a
149
6.1
154
6.3
758
31
599
25
2954
121
2405
99
229
9.4
232
9.5
985
40
824
34
3888
159
3450
141
1
雄
34
1.4
396
16
雌
39
1.6
506
21
雄
3
142
5.8
1670
68
雌
154
6.3
1686
69
雄
10
652
27
6805
279
雌
419
17
4891
201
雄
273
1
35
1.4
575
24
雌
66
2.7
823
34
雄
3
133
5.5
2008
82
雌
160
6.6
2372
97
雄
10
583
24
8265
339
雌
513
21
6657
273
AUC(0-24) = 投与後 0～24 時間の血漿中濃度－時間曲線下面積，Cmax = 最高血漿中濃度。
a
非結合型 Cmax または AUC = 総 Cmax または AUC×0.041（イヌにおける非結合型分率平均値；RPT-54418）。
2.6.4.4. 分布
2.6.4.4.1. ラットにおける組織分布
4.2.2.3.1 RPT-54959
SD（アルビノ）ラット（1 時点あたり雄 2 匹）および LE（有色）ラット（1 時点あたり雄 1 匹）に [14C]
ボスチニブ 50 mg/kg を単回経口投与したときの組織分布を評価した（RPT-54959；薬物動態試験の概
要表，2.6.5.1.12）。SD ラットにおける組織分布を定量的全身オートラジオグラフィ法または組織摘
出法（各 1 匹）を用いて測定し，また LE ラットにおける皮膚およびブドウ膜への分布を定量的全身
オートラジオグラフィ法により測定した。
血漿および血液中総放射能濃度の薬物動態パラメータは SD ラットと LE ラットで類似しており，い
ずれの濃度も投与後 4 時間に最高値に達した。SD ラットにおいて，放射能は速やかに広範囲の組織
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
に分布し，組織中濃度は大部分の組織で投与後 8 時間までに最高値に達した。組織／血漿中放射能濃
度比は大部分の組織で 10 を超えていた。この広範囲の組織分布は，ラットにおいてボスチニブの分
布容積が大きかったこととも一致する結果であった（2.6.4.3.2.2 項）。最も高い放射能濃度が認めら
れた組織は，ヒトでは痕跡器官であるハーダー腺であった。この他に高い曝露（AUC(0-672) >
1000 μg•eq•h/g）が認められた組織は，小腸，大腸，肝臓および副腎であった。検討したすべての時
点において，脳中濃度は定量限界未満であり，[14C]ボスチニブおよび代謝物がラットの血液－脳関門
をほとんど通過しないことが示された。ほとんどの組織において，組織中放射能濃度は投与後 168
時間以内にそれぞれの Cmax の 10%未満にまで低下した。
LE ラットにおいてはメラニン含有組織である皮膚およびブドウ膜に対して高い親和性で放射能の結
合が認められた。ブドウ膜における放射能の取り込みおよび滞留は特に顕著であり，投与後 24～672
時間にわたって組織中濃度はほとんど変化せず，
組織／血漿 AUC(0-672)比は，
SD ラットおよび LE ラッ
トの他の器官に比べても顕著に高かった。なお，LE ラットを用いた光安全性試験においてボスチニ
ブは 10 および 100 mg/kg の用量で光毒性を示さず（2.6.6.7.2 項），ビーグル犬を用いた最長 9 ヵ月間
までの毒性試験においても，眼および皮膚に毒性所見は認められていない（2.6.6.3.5～2.6.6.3.8 項）。
2.6.4.4.2. in vitro 蛋白結合
2.6.4.4.2.1. ボスチニブ
4.2.2.3.2 RPT-54418，4.2.2.3.3 PF-05208763_
_144818（参考），4.2.2.3.4 RPT-79220（参考）
CD-1 マウス，SD ラット，NZW ウサギ，ビーグル犬およびヒト（いずれも雄または男性）血漿中で
の [14C]ボスチニブの in vitro 蛋白結合率を，濃度 100，1000 または 10000 ng/mL，約 37C で超遠心
法により測定した（RPT-54418；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.13）。検討した濃度範囲におけるマ
ウス，ラット，ウサギ，イヌおよびヒト血漿中での [14C]ボスチニブの in vitro 蛋白結合率は高く（fu
値はそれぞれ 0.059，0.061，0.028，0.041 および 0.063）この濃度範囲において[14C]ボスチニブの結合
率に著しい変化は認められなかった。
生理学的濃度の HSA（590 mol/L）および AAG（20 mol/L）に対するボスチニブ（1 mol/L，530 ng/mL）
の結合率を検討した結果，HSA に対するボスチニブの結合率は高く（fu = 0.046），AAG に対する結
合率は中等度（fu = 0.286）であった（PF-05208763_
_144818；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.14）。
これらの結果から，ヒト血漿中におけるボスチニブの主要結合蛋白質は HSA である可能性が高いと
考えられた。
肝機能障害患者を対象とした試験において，ボスチニブの ex vivo 血漿蛋白結合率を超遠心法により
測定した。ボスチニブ 200 mg を投与した慢性肝機能障害患者および健康被験者から採取した血漿中
での蛋白結合率は高く（RPT-79220；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.15），ボスチニブ濃度 9.64～
50.5 ng/mL の範囲で fu 値は 0.034～0.058 であった。各群内でボスチニブの血漿蛋白結合率に濃度依
存性および時間依存性は認められなかった。これらの結果は，[14C]ボスチニブを用いた上述の in vitro
試験で濃度に依存せず，高い血漿蛋白結合率が認められたことと一致した。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
2.6.4.4.2.2. 代謝物 M2 および M5
4.2.2.3.5 PF-05312061/
/122621（参考）
予備的な安定性評価から，平衡透析法のインキュベーション条件下（37C，6 時間）において，M2
（酸化的脱塩素体）は緩衝液または血漿中で不安定であることが示唆された。したがって，M2 の血
漿蛋白結合試験は実施しなかった。
CD-1 マウス，SD ラット，NZW ウサギ，ビーグル犬およびヒト血漿中での M5（N-脱メチル体）の
in vitro 蛋白結合率を，濃度 50 または 500 ng/mL，約 37C で平衡透析法により測定した
（PF-05312061/
/122621；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.16）。検討した動物種における M5
の血漿蛋白結合率は高く，マウス，ラット，ウサギ，イヌおよびヒトにおける fu 値はそれぞれ 0.049，
0.062，0.023，0.021 および 0.055 であった。いずれの動物種においても，血漿中濃度 50 ng/mL と
500 ng/mL の間で M5 の fu 値に著しい変化は認められなかった。
2.6.4.4.2.3. 赤血球移行
2.6.4.4.2.3.1. in vitro
4.2.2.3.6 WAY-173606_
_113243（参考）
ラット，イヌおよびヒト全血を用いてボスチニブ（1 mol/L，530 ng/mL）の赤血球移行を評価した
（WAY-173606_
_113243；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.17）。ラット，イヌおよびヒトに
おける血液／血漿中濃度比はそれぞれ 1.6，0.9 および 1.2 であり，ボスチニブの赤血球への移行性は
高くないことが示された。
2.6.4.4.2.3.2. in vivo
4.2.2.4.1 RPT-77073，4.2.2.4.2 RPT-53088，4.2.2.4.4 RPT-53089
マウス，ラットおよびイヌに[14C]ボスチニブ（マウスおよびラットは 50 mg/kg，イヌは 5 mg/kg）を
単回経口投与したときの放射能の血液／血漿中濃度比は，マウスで 0.95～1.26（RPT-77073；薬物動
態試験の概要表，2.6.5.1.19），ラットで 0.97～1.31（RPT-53088；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.20），
およびイヌで 0.82～0.97（RPT-53089；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.21）であった。これらの in vivo
試験結果は上述の in vitro 試験結果と同様であり，両試験結果より，マウス，ラット，イヌおよびヒ
トにおいて，ボスチニブは血球および血漿にほぼ均等に分布することが示唆された。
2.6.4.4.3. 胎盤通過（ラット）
4.2.2.3.7 RPT-77097
妊娠 SD ラット（各時点 1 匹）に [14C]ボスチニブを 10 mg/kg の用量で妊娠 19 日に単回経口投与し
たときのボスチニブの胎盤通過性を評価した（RPT-77097；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.18）。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
母体血漿中の放射能濃度は投与後 4 時間に最高値（398 ng•eq/mL）に達した後，投与後 72 時間には
13 ng•eq/mL まで低下した。
胎盤および胎児中の放射能濃度は投与後 8 時間に最高値（それぞれ 4855 および 515 ng•eq/g）に達し
た。胎盤中濃度（全時点）ならびに胎児中濃度（投与後 8 および 24 時間）は，母体血漿中で認めら
れた最高濃度（398 ng•eq/mL）を上回っていた。羊水中濃度は投与後 24 時間に最高値（355 ng•eq/mL）
に達した。血漿と比較した胎盤，胎児および羊水中放射能濃度の AUC(0-72)比は，それぞれ 21，2.9 お
よび 2.2 であった。
以上のように，妊娠 SD ラットに [14C]ボスチニブを 10 mg/kg の用量で単回経口投与したとき，胎盤
中に放射能が認められ，それより低濃度ながら羊水および胎児でも検出された。このことから，[14C]
ボスチニブまたはその代謝物が胎盤を通過し，胎児が曝露を受けることが示された。なお，ラットに
おいてボスチニブ投与による生殖発生毒性が認められている（2.6.6.6 項）ことから，添付文書（案）
において，「妊婦又は妊娠している可能性のある婦人には投与しないこと。また妊娠可能な婦人に対
しては適切な避妊を行うよう指導すること」と注意喚起する。
2.6.4.5. 代謝
2.6.4.5.1. in vivo
マウス，ラット，イヌおよびヒトにおけるボスチニブの in vivo 代謝を評価した。ボスチニブの in vivo
推定代謝経路を Figure 8 および Figure 9，ならびに薬物動態試験の概要表，2.6.5.2.1 および 2.6.5.2.2
に示す。
2.6.4.5.1.1. マウス
4.2.2.4.1 RPT-77073
雄 CD-1 マウス（各時点 4～5 匹）に [14C]ボスチニブを 50 mg/kg の用量で単回経口投与したときの血
漿，尿および糞中代謝物を評価した（RPT-77073；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.19）。
検討したすべての時点において，血漿中の主要放射能成分は未変化体であり，投与後 0.25，1，3，6
および 24 時間における血漿中放射能のそれぞれ 70%，89%，85%，85%および 87%を占めていた。
また，M5（N-脱メチル体）および M6（N-オキシド体，WAY-266857）の 2 種類の代謝物が検出され，
血中放射能に占める割合はそれぞれ最大 11%および 6%であった。
投与後 24 時間までの尿中放射能回収率は 1.1%であった。尿中の主要放射能成分は未変化体，M5 お
よび M6 であったが，M2（酸化的脱塩素体），M4（O-脱メチル体）および M14（キノリン環の O脱メチル体）も検出された。
投与後 24 時間までの糞中放射能回収率は 47.5%であった。未変化体が糞中放射能に占める割合は 66%
であり，投与量の 32%に相当した。M5 が糞中放射能に占める割合は 14%であり，M4 および M14 そ
れぞれが糞中放射能に占める割合は 10%未満であった。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
2.6.4.5.1.2. ラット
4.2.2.4.2 RPT-53088，4.2.2.4.3 PF-05208763_
_183648（参考）
雌雄の SD ラット（各時点 3 匹）に [14C]ボスチニブを 50 mg/kg の用量で単回経口投与したときの血
漿，尿および糞中代謝物を評価した（RPT-53088；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.20）。
血漿試料における主要放射能成分は未変化体であった。雄では，血漿中放射能に占める未変化体の割
合は投与後 4 および 8 時間で 57%，投与後 24 時間で 36%であった。雌では，すべての時点において
未変化体が血漿中放射能の約 80%を占めていた。代謝物プロファイルに質的な性差は認められず，
主な代謝経路は O-脱メチル化，N-脱メチル化および N-オキシド化であった。血漿中に認められた代
謝物は M4，M5，M6，M9（未同定）および M10（未同定）であった。雄ラットで血漿中放射能の
10%を超える代謝物は M9 のみであり，その割合は 17%（投与後 4 時間）～40%（投与後 24 時間）
であった。M5 および M6 はそれぞれ未変化体の 1%～9%および 4%～8%に相当した。また，ラット
の安全性薬理試験（SP3810）から得た検体を追加分析した結果，反復投与後の雄ラットの血漿中に
_183648）。
M3（M2 の酸素付加体）も存在することが確認された（PF-05208763_
尿中排泄は少なく，雌雄いずれにおいても，投与後 24 時間以内の排泄率は投与量の 2%未満であっ
た。雄および雌ラットの尿中放射能に占める未変化体の割合はそれぞれ 7%～8%および 15～19%で
あった。尿中の主代謝物は M6 であり，雄および雌でそれぞれ尿中放射能の 24%～32%および 61%～
66%を占めていた。この他の尿中代謝物として，M2，M4，M5 および M8（O-脱アルキル化体）が認
められた。
ラットにおける主要排泄経路は糞中であり，雄および雌でそれぞれ投与量の 61.5%および 36.5%が投
与後 24 時間以内に排泄された。ラジオクロマトグラフィで検出された主な放射能ピークは未変化体
であり，雌雄の糞抽出物中放射能の約 83%を占めていた。これは雄で投与量の約 50%，雌で投与量
の 30%に相当する。この他に雌雄両方のラットで検出された微量代謝物は，M2，M4 および M5 であっ
た。in vivo で認められた代謝物は，概してラット肝ミクロソームおよび肝細胞を用いた in vitro 試験
でも検出された（2.6.4.5.2.1 項）。
2.6.4.5.1.3. イヌ
4.2.2.4.4 RPT-53089
雄ビーグル犬 4 匹に [14C]ボスチニブを 5 mg/kg の用量で単回経口投与したときの血漿，尿および糞
中代謝物を評価した（RPT-53089；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.21）。
血漿中の主要放射能成分は未変化体であり，投与後 2，4，8 および 24 時間の血漿中放射能に占める
割合は 66%～87%であった。イヌにおける主代謝経路は N-脱メチル化および N-オキシド化であり，
血漿中の主代謝物は M5 および M6 であった。M5 は投与後 4 時間に最高値（血漿中放射能の 20%）
に達した後，投与後 24 時間には 3%まで低下し，AUC0-24 平均値は未変化体の 13.7%であった。M6
が血漿中放射能に占める割合は検討したすべての血漿試料で 8%～10%であり，投与後 24 時間まで，
明らかな経時的変化は認められなかった。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
尿中排泄は少なく，投与後 168 時間以内の排泄率は投与量の 1.3%であった。尿中放射能に占める未
変化体の割合は，0～8 時間で 19%，8～24 および 24～48 時間で 52%であった。尿中の主代謝物は
M6 であり，尿中放射能の 20%～35%を占めていた。この他，M5（各検体中の尿中放射能の 9%～18%）
および M2（0～8 時間試料中，尿中放射能の 3.3%）が検出された。
イヌにおける主要排泄経路は糞中であり，投与後 168 時間以内に投与量の 93%が排泄された。ラジ
オクロマトグラフィで検出された主な放射能ピークは未変化体であり，糞抽出物中放射能の 62%，
投与量の約 58%を占めていた。糞中で検出された主代謝物は M5 であり，糞中放射能の約 30%を占め
ていた。in vivo で認められた代謝物は，イヌ肝ミクロソームおよび肝細胞を用いた in vitro 試験でも
検出された（2.6.4.5.2.1 項）。
2.6.4.5.1.4. ヒト
4.2.2.4.5 RPT-79197，4.2.2.4.6 RPT-70327，5.3.3.4.2 B1871023
健康男性被験者 6 例に [14C]ボスチニブ 500 mg を単回経口投与したときの排泄速度および経路，マス
バランス，ならびに代謝動態を評価した（RPT-79197；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.23）。ラット
の有色組織に放射能が長時間貯留したことを考慮して（2.6.4.4.1 項），本試験で投与する目標放射能
量を 100 nCi に設定したが，投与液の調製段階での希釈過誤により，実際に投与された放射能量は
10 nCi であった。投与前および投与後 216 時間までの指定された時点で全血，血漿，尿および糞試料
を採取し，HPLC により分取精製した後，加速器質量分析（AMS）により分析した。
投与した放射能量が目標量より少なく，放射能濃度が定量限界未満となったため，血漿中の代謝物プ
ロファイルは評価できなかった。しかし，Cmax 近くの時間に採取した大量の血漿試料を抽出した結果，
質量分析により未変化体，M2，M5 および M11（M2 の硫酸抱合体）が検出された。
糞抽出物中の主要放射能成分は未変化体および M5 であり，投与後 0～24 および 24～144 時間試料の
抽出物中総放射能に占める割合は，
未変化体でそれぞれ 40%および 30%，M5 で 22%および 19%であっ
た。また，M2 もそれぞれ 1.6%および 7.3%の割合で検出された。尿中排泄は少なく，未変化体およ
び M2 が 0～24 時間尿試料中の総放射能のそれぞれ 72%および 7.5%を占めていた。これらの結果か
ら，ヒト肝ミクロソームによる in vitro 代謝（2.6.4.5.2.1 項）同様，ヒトにおけるボスチニブの代謝経
路として，N-脱メチル化および酸化的脱塩素化が存在すると考えられた。
ヒトにおける代謝物プロファイルを更に検討するため，ボスチニブ 400 mg または 500 mg を単回，あ
るいは投与 1 および 3～15 日に反復経口投与した進行性悪性固形癌患者から採取した血漿および尿試
料，ならびにボスチニブ 400 mg を単回経口投与した健康被験者の血漿および尿試料を用いて LC/MS
による評価を行った（RPT-70327；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.22）。また，投与後 2，4，8 およ
び 24 時間に採取した血漿試料（試験 3160A1-100-US の投与 1 および 15 日，試験 3160A1-103-EU の
投与 1 日）ならびに 0～48 時間に採取した尿試料について，合成標品を用いたバリデートされていな
い LC/MS 法により，M2，M5 および M6 に関する半定量的分析を行った。
単回投与後のヒト血漿中に認められた主要薬物由来成分は未変化体であった。これに加えて，M2，
M4，M5，M6 および M13（M2 のグルクロン酸抱合体）の 5 種類の代謝物が検出されたが，M4 およ
び M13 は測定した一部の試料のみに認められた。反復投与後には，これに加えて一部の試料中に 4
種類の微量代謝物として M1（M2 の N-脱メチル体），M3，M12（M3 の位置異性体）ならびに M11
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
（M2 の硫酸抱合体）が検出された。これらの結果から，ボスチニブをヒトに経口投与したときの血
中の主代謝物は M2 および M5 であると考えられた。なお，投与 15 日の試料において，ボスチニブ
の代謝に顕著な質的個人差は認められなかった。
M2，M5 および M6 に関する血漿試料の半定量的分析から，血中の主代謝物は M5 であることが示さ
れた。血漿中での未変化体に対する M5 の割合は患者で 14%～32%，健康被験者で 22%～74%，M2
の割合は患者で 7%～11%，健康被験者で 5%～17%であった。また，患者および健康被験者において
M6 の存在量は未変化体の 10%未満であり，
微量代謝物であると考えられた。
他の酸化的代謝物
（M1，
M3，M4 および M12）の存在量も未変化体，M2，M5 および M6 に比べて少なく，やはり微量代謝
物であると考えられた。
尿中に未変化体，M2，M5，M6 および M13 が認められた。M2，M5 および M6 に関する尿試料の半
定量的分析から，これらの代謝物の排泄量はいずれも投与量の 1%未満であった。
以上の健康被験者および癌患者の代謝物プロファイルから，ボスチニブをヒトに経口投与した場合，
主に N-脱メチル化および酸化的脱塩素化によって代謝され，M2 および M5 が血中の主代謝物である
ことが示された。バリデートされた生物分析法を用いたその後の試験において，健康被験者にボスチ
ニブ 500 mg を単回経口投与したときの M2 および M5 の血漿 AUC は，未変化体の AUC の 18%およ
び 24%に相当すると算出され，これらがヒト血中の主代謝物であることが確認された（試験
3160A4-1106-US；B1871023）。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Figure 8.
マウス，ラット，イヌおよびヒト血漿中に存在すると推定される代謝物
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Figure 9.
マウス，ラット，イヌおよびヒト排泄物中に存在すると推定される代謝物
2.6.4.5.1.5. 代謝物曝露量
上述のとおり，ヒトにおけるボスチニブの主代謝物は M2 および M5 で，健康被験者にボスチニブ
500 mg を単回経口投与したときの M2 および M5 の全身曝露量は，それぞれ未変化体の 18%および
24%であった。ラット，イヌおよびヒトにおける M2 および M5 の曝露量を比較して Table 6 に示す。
ラットおよびイヌにボスチニブを経口投与したときの血漿中に有意な濃度の M2 が認められなかっ
たため，代謝物 M2 に関する非臨床評価として，ラット薬物動態試験（2.6.4.3.2.4 項），ラット 2 週
間毒性試験（2.6.6.7.1.1 項）および in vitro 遺伝毒性試験（2.6.6.7.1.2 項および 2.6.6.7.1.3 項）を別途
実施した。その結果，M2 に遺伝毒性はなく，2 週間毒性試験で 70 および 210 mg/kg を投与しても
M2 に関連する影響は認められなかった。210 mg/kg 投与時の M2 の全身曝露量は雄および雌ラット
でそれぞれ 929 および 1488 ng•h/mL であり，ヒトにボスチニブ 500 mg を単回経口投与したときの曝
露量（AUC(0-) = 502 ng•h/mL；試験 3160A4-1106-US；B1871023）の 2～3 倍であった。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
健康被験者を対象とした臨床試験 3160A4-1106-US で得られたデータより，ボスチニブ 500 mg を単
回経口投与したときの M5 の総曝露量（AUC(0-)）は 654 ng•h/mL，非結合型の AUC［総 AUC×0.055
（ヒトにおける fu 平均値）より算出；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.16］は 36 ng•h/mL であった。
ラットを用いた8週間安全性薬理試験（SP3810）において，雄ラットにボスチニブを50 mg/kg/日の用
量で56日間投与したときのM5の全身曝露量（血漿AUC）は，未変化体の29%～38%（平均値34%）で
あった（2.6.4.3.3.1項）。M5曝露量の未変化体に対する割合は，6ヵ月間安全性薬理試験（SP6211）
において雄ラットにボスチニブを50 mg/kg/日の用量で178日間投与したときは37%，がん原性試験
（ -2185）において雄ラットにボスチニブを7.5および25 mg/kg/日の用量で182日間投与したときは
いずれの用量でも30%であり，いずれの反復投与試験でも同程度の値を示した。また，6ヵ月間毒性
試験における無毒性量（30 mg/kg/日）での雄ラットの未変化体の血漿AUCは3810 ng•h/mLであり
（Table 3），未変化体のAUCに対するM5の割合が34%（上述3試験の平均値）であると仮定すると，
M5の血漿AUCは1295 ng•h/mL，非結合型M5のAUCは80 ng•h/mLと推定された（ラットのfu値0.062よ
り；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.16）。したがって，6ヵ月間毒性試験における無毒性量での雄ラッ
トの非結合型M5のAUCは，ヒトにおける非結合型M5のAUCに比べて約2倍高いと推定された。
雄イヌを用いた単回投与試験（RPT-53089）において，[14C]ボスチニブを 5 mg/kg の用量で単回投与
したときの M5 全身曝露量（血漿 AUC）は，未変化体の 13.7%であった（2.6.4.5.1.3 項）。このこと
から，9 ヵ月間毒性試験（RPT-66535，毒性試験の概要表，2.6.7.18）の無毒性量（10 mg/kg/日）にお
ける投与 1 および 273 日の M5 の AUC 平均値はそれぞれ総濃度で 932 および 1132 ng•h/mL，非結合
型として 20 および 24 ng•h/mL と算出された（イヌの fu 値 0.021 より；薬物動態試験の概要表，
2.6.5.1.16）。これらのイヌにおける曝露量は，ヒトに臨床用量である 500 mg を投与したときの非結
合型 M5 の曝露量（36 ng•h/mL）のそれぞれ 0.56 および 0.67 倍に相当した。
以上のように，これらの毒性試験より得られたラットにおける M2 の全身曝露量ならびにラットおよ
びイヌにおける M5 の推定曝露量は，おおむねヒトにおける曝露量と同程度以上と考えられた。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
Table 6.
ラット，イヌおよびヒトにおける M2 および M5 の曝露量比較
----M2----
動物種
総 AUC 実測値
(ng•h/mL)
ラット
雄
雌
イヌ（雄）
投与 1 日
投与 273 日
929a
1488a
NA
NA
---------------------------------M5--------------------------------無毒性量における
総／非結合型 AUC
M5／未変化体
総 e／非結合型 f AUC
実測値
AUC 比
(ng•h/mL)
推定値 (ng•h/mL)
NA
NA
0.34c
NA
1295/80
NA
NA
NA
0.137d
NA
NA
932/20
1132/24
502b
654b/36
NA
NA
ヒト
NA = 該当なし。
a
RPT-74244
b
AUC(0-)，試験 3160A4-1106-US；B1871023。
c
投与 1，28 および 56 日の比（M5 の AUC／未変化体の AUC）の平均値（SP3810）。
d
放射性標識体を用いた試験で得られた雄イヌの値（RPT-53089）。
e
無毒性量における未変化体の総 AUC［ラット 6 ヵ月間試験の雄で 3810 ng•h/mL (RPT-64288)，イヌ 9 ヵ月間
に各動物種の M5／未変化体 AUC 比
（ラッ
試験の雄で投与 1 日 6805 ng•h/mL，273 日 8265 ng•h/mL (RPT-66535)］
ト 0.34，イヌ 0.137）を乗じることにより算出した値。
f
M5 の総 AUC 推定値に各動物種における M5 の血漿中非結合型分率（ラット，イヌおよびヒトでそれぞれ
0.062，0.021 および 0.055）を乗じることにより算出した値。
2.6.4.5.2. in vitro
ボスチニブの in vitro 推定代謝経路を Figure 10 および薬物動態試験の概要表，2.6.5.2.3 に示す。
2.6.4.5.2.1. 肝ミクロソームおよび肝細胞を用いた in vitro 代謝
4.2.2.4.7 RPT-53085
CD-1 マウス（雄），SD ラット（雄および雌），ビーグル犬（雄）およびヒト（男性および女性）由
来の肝ミクソローム，ならびに雄ラットおよびイヌの初代培養肝細胞およびヒト（男性および女性）
由来の凍結肝細胞を[14C]ボスチニブとインキュベーションし，in vitro における代謝速度の算出およ
び代謝物の検討を実施した（RPT-53085；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.24）。
ヒト肝ミクロソームおよび肝細胞中での [14C]ボスチニブの主代謝経路は，N-脱メチル化，酸化的脱
塩素化および N-オキシド化であった。ヒト肝ミクロソームとともにインキュベーションしたときに
認められた主代謝物は M2 および M5 であり，微量代謝物として，M1（M2 の N-脱メチル体）， M4，
M6 および M7（M4 のグルクロン酸抱合体）も検出された。ヒト肝細胞とともにインキュベーション
したときに認められた主代謝物は M5 および M6 であり，微量代謝物として M2 および M7 が検出さ
れた。雄ラット肝ミクロソームとともにインキュベーションしたときにも同様の代謝経路および代謝
物が認められ，主代謝物として M2，M5，M6，微量代謝物として M1，M3，M4，M7 が検出された。
雄ラットの肝細胞における主代謝物は M6 であったが，雌ラットの肝ミクロソームを用いたときの代
謝はわずかであった。イヌ肝ミクロソームおよび肝細胞では，主代謝物として M6，微量代謝物とし
て M5 および M7 が検出された。マウス肝ミクロソームでは，主代謝物として M5 および M6，微量
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
代謝物として M2 および M7 が認められた。各動物種の肝ミクロソームを用いたときの M2（雄ラッ
トおよびヒト），M5（全動物種）ならびに M6（雄マウス，雌雄ラットおよび雄イヌ）の生成速度か
ら算出したボスチニブの in vitro 固有クリアランスは，雄マウスおよび雌ラットで低く，雄ラットで
中等度，イヌおよびヒトで高かった。これらの結果から，ヒト肝ミクロソームおよび肝細胞における
主代謝経路および代謝物は，毒性試験で使用した動物種であるラットまたはイヌでも認められること
が示された。
Figure 10.
in vitro における推定代謝経路
2.6.4.5.2.2. ボスチニブの代謝に関与するチトクローム P450 分子種の同定
4.2.2.4.8 RPT-53086，5.3.3.4.1 B1871022，5.3.3.4.2 B1871023
ヒト肝ミクロソームを用いた CYP 分子種特異的阻害剤の存在下および非存在下でのインキュベー
ション，ならびに組換えヒト CYP 発現酵素（rCYP）を用いたインキュベーションの 2 種類の方法に
より，[14C]ボスチニブの代謝に関与する CYP 分子種を検討した（RPT-53086；薬物動態試験の概要
表，2.6.5.1.25）。阻害剤を用いた検討では，フラフィリン（CYP1A2），クマリン（CYP2A6），オ
ルフェナドリン（CYP2B6），ケルセチン（CYP2C8），スルファフェナゾール（CYP2C9），トラニ
ルシプロミン（CYP2C19），キニジン（CYP2D6），ジエチルジチオカルバミド酸（CYP2E1），ケ
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
トコナゾール（CYP3A4/5）およびベンジルイミダゾール（全 CYP）の各 CYP 阻害剤を用いた。こ
れらの阻害剤のうち，ヒト肝ミクロソームにおいてボスチニブの代謝を完全に阻害したのは，全 CYP
を阻害するベンジルイミダゾールと CYP3A4/5 の特異的阻害剤であるケトコナゾールのみで，他の
CYP 阻害剤はボスチニブの代謝を阻害しなかった。阻害剤を用いた検討と同様に，rCYP 分子種
（CYP1A2，CYP2A6，CYP2B6，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1，CYP3A4 およ
び CYP3A5）とともに [14C]ボスチニブをインキュベーションしたときにも，rCYP3A4 のみでボスチ
ニブの代謝が認められ，他の CYP 分子種ではボスチニブに対する活性は認められなかった。
ボスチニブの代謝における CYP3A4 の寄与は，臨床での薬物相互作用試験においても確認されてい
る。強力な CYP3A 阻害剤であるケトコナゾール（400 mg 1 日 1 回 5 日間）と併用してボスチニブ
（100 mg）を投与したとき，ボスチニブの Cmax および AUC はそれぞれ 5 および 8 倍増加した（試験
3160A4-104-US；B1871022）。一方，強力な CYP3A 誘導剤であるリファンピシン（600 mg 1 日 1 回
10 日間）と併用してボスチニブ（500 mg）を投与したときには，ボスチニブの Cmax および AUC は
それぞれ 86%および 92%減少した（試験 3160A4-1106-US；B1871023）。
2.6.4.5.2.3. ボスチニブの代謝における FMO 分子種の関与
4.2.2.4.9 RPT-63186
ボスチニブの代謝に FMO が寄与している可能性について，cDNA 発現ヒト FMO 分子種ならびにヒ
ト肝および腎ミクロソームを用いて検討した（RPT-63186；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.26）。[14C]
ボスチニブを cDNA 発現 FMO 分子種 FMO1，FMO3 および FMO5 とともにインキュベーションした
ところ，いずれの FMO 分子種でもボスチニブ代謝活性が認められたが，生成した代謝物は M6 のみ
であり，活性は FMO5 に比べて FMO1 および FMO3 で高かった。
ヒト肝ミクロソームにおける M6 の生成はケトコナゾール（1 μmol/L）を添加することでほぼ完全に
（95%以上）消失したが，ミクロソームを 50oC で加熱不活性化しても影響はみられなかった。この
ことから，ヒト肝ミクロソーム中での M6 生成における FMO の関与はわずかであり，CYP3A4 によ
る寄与が高いことが示唆された。一方，ヒト腎ミクロソーム中での M6 の生成に対するケトコナゾー
ル添加の影響はわずかであり（20%未満），ミクロソームの加熱不活性化により顕著（85%以上）に
阻害されたことから，ヒト腎ミクロソーム中での M6 生成は主として FMO によることが示唆された。
2.6.4.5.2.4. ボスチニブの代謝における UGT 分子種の関与
4.2.2.4.10 PF-05898965_
_201157（参考）
ヒト血中の代謝物として M2 のグルクロン酸抱合体（M13）が認められたことから，このグルクロン
酸抱合体生成に関与する UGT 分子種を同定するための試験を実施した
（PF-05898965_
_201157；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.27）。M2（0.5 および 5 mol/L）を
遺伝子組換えヒト UGT 酵素とともにインキュベーションしたところ，UGT1A1，UGT1A3，UGT1A4，
UGT1A6，UGT1A7，UGT1A8，UGT1A9，UGT1A10，UGT2B4，UGT2B7，UGT2B15 および UGT2B17
等の複数の UGT 分子種が M13 の生成を触媒した。このことから，小腸および肝臓のいずれにおいて
も M2 のグルクロン酸抱合体が生成する可能性が示唆された。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
2.6.4.6. 排泄
2.6.4.6.1. 尿中および糞中排泄
2.6.4.6.1.1. ラット
4.2.2.5.1 RPT-53087
雄 SD ラット 4 匹に [14C]ボスチニブを 50 mg/kg の用量で単回経口投与したときの放射能の排泄を検
討した（RPT-53087；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.28）。投与した放射能は排泄物中にほぼ完全に
回収され，回収率は 99%であった。主排泄経路は糞中排泄であり，投与量の 98%が糞中に，1.3%が
尿中に回収された。放射能の排泄は速やかであり，24 時間以内に投与量の 82%が回収された。
2.6.4.6.1.2. イヌ
4.2.2.4.4 RPT-53089
雄ビーグル犬 4 匹に [14C]ボスチニブを 5 mg/kg の用量で単回経口投与したときの放射能の排泄を検
討した（RPT-53089；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.29）。主排泄経路は糞中排泄であり，投与量の
93%が糞中に，1.3%が尿中に回収された。放射能は投与後 72 時間までに 89%が，168 時間までに 94%
が回収された。
2.6.4.6.2. 乳汁中排泄（ラット）
4.2.2.5.2 RPT-77578
授乳中の SD ラット（各時点 3～4 匹）に [14C]ボスチニブを 10 mg/kg の用量で単回経口投与したと
きに乳汁を介して出生児にボスチニブが移行する可能性を評価した（RPT-77578；薬物動態試験の概
要表，2.6.5.1.30）。投与後 2，6 および 24 時間における乳汁中放射能濃度は血漿中濃度に比べて高く，
乳汁／血漿中放射能の AUC(0-24)比は 7.8 であり，[14C]ボスチニブまたはその代謝物がラットの乳汁中
に排泄されることが示された。
出生児血漿中の放射能濃度は 0.3（投与後 0.5 時間）～205 ng•eq/mL（投与後 24 時間）の範囲であっ
た。投与後 0.5～8 時間における出生児血漿中放射能濃度は母体血漿中濃度に比べて低かったが，投
与後 24 および 48 時間における出生児血漿中放射能濃度は母体血漿中濃度に比べて少なくとも 8 倍高
い値を示した。出生児／母体血漿中放射能の AUC(0-48)比は 2.6 であり，出生児が乳汁を介して全身曝
露を受けることが示された。
これらのことから，添付文書（案）において，「授乳中の婦人には，授乳を中止させること」と注意
喚起する。
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
2.6.4.7. 薬物動態学的薬物相互作用
2.6.4.7.1. チトクローム P450 阻害
4.2.2.6.1 RPT-53488，4.2.2.6.2 RPT-79459
ヒト肝ミクロソームを用いて，CYP1A2，CYP2A6，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6 および
CYP3A4/5 活性に対するボスチニブの阻害能を評価した（RPT-53488；薬物動態試験の概要表，
2.6.5.1.31）。
ボスチニブは 100 μmol/L（約 53 g/mL）までの濃度において，CYP1A2，CYP2A6 および CYP2C9 活
性を阻害せず，CYP2C8 活性に対する阻害もわずかで，外挿により算出した IC50 値は 200 μmol/L
（106 g/mL）であった。したがって，これらの CYP 分子種によって代謝される併用薬とボスチニブ
の間に薬物相互作用が生じる可能性は低いと考えられる。
ボスチニブは CYP2C19 および CYP2D6 活性を阻害し，阻害定数（Ki）はそれぞれ 27 および 10 μmol/L
（14.3 および 5.3 g/mL）であった。また，CYP3A4/5 によるミダゾラム-1’-水酸化およびテストステ
ロン-6β-水酸化活性も阻害し，Ki 値はそれぞれ 132 および 27 μmol/L（70 および 14.3 g/mL）であっ
た。さらに，ボスチニブの CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6 および CYP3A に対する阻害作用が時間依
存的であるか否かを評価するため，ヒト肝ミクロソームにボスチニブ（1，10，100 µmol/L）を添加
して NADPH 生成系存在下または非存在下でプレインキュベーションを行った後の酵素阻害の程度
を比較した（RPT-79459；薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.31）ところ，いずれの CYP 分子種におい
ても NADPH 存在下と非存在下で阻害の程度は同様であったことから，ボスチニブのこれらの CYP
分子種に対する阻害作用は時間依存的ではないことが示唆された。
推奨臨床用量（500 mg 1 日 1 回）での定常状態における Cmax とそれぞれの CYP 分子種の阻害作用に
関する Ki 値を比較することにより，薬物相互作用の可能性を評価した。競合的阻害においては，
Cmax/Ki 比が 0.1 未満では相互作用が生じる可能性は非常に低く，0.1～1 では相互作用が生じる可能性
があり，1 を超える場合には相互作用が生じる可能性が高いと考えられている（Bjornsson et al., 2003）。
CML 患者にボスチニブ 500 mg を 1 日 1 回反復経口投与したときの定常状態における Cmax は
226 ng/mL（0.43 μmol/L）で（試験 3160A3-2203-JA；B1871007），これと上述の Ki 値の比較より，
CYP2C19，CYP2D6 ならびに CYP3A4/5（ミダゾラム-1’-水酸化およびテストステロン-6β-水酸化）に
おける Cmax/Ki 比はいずれも 0.1 未満であることから，CYP2D6，CYP2C19 または CYP3A4/5 の基質
となる併用薬の代謝クリアランスをボスチニブが阻害することにより薬物相互作用が生じる可能性
は低いと考えられた。
2.6.4.7.2. チトクローム P450 誘導
4.2.2.6.3 RPT-69677（参考）
ヒト肝細胞を用いてボスチニブの CYP 誘導能を評価した（RPT-69677；薬物動態試験の概要表，
2.6.5.1.32）。肝細胞に 0.48，0.95 および 9.5 μmol/L（約 0.25，0.5 および 5 g/mL）のボスチニブを添
加して，CYP1A2，CYP2B6，CYP2C9，CYP2C19 および CYP3A4 の誘導作用を mRNA 発現量により
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
評価した。CYP3A4 誘導については酵素活性による評価も行った。陽性対照としてリファンピシン
（10 μmol/L）を使用した。
検討したいずれの CYP 分子種についても，ボスチニブは mRNA 発現または酵素活性の誘導を示さな
かった。なお，CYP3A の酵素活性は最高濃度（9.5 μmol/L）のボスチニブ添加により低下したが，こ
れはボスチニブの CYP3A 阻害作用によるものと考えられた（2.6.4.7.1 項）。CML 患者にボスチニブ
500 mg を 1 日 1 回反復投与したときの定常状態における Cmax（226 ng/mL，0.43 μmol/L）の約 22 倍
の 9.5 μmol/L までの濃度で CYP1A2，CYP2B6，CYP2C9，CYP2C19 および CYP3A を誘導しなかっ
たことから，ボスチニブがこれらの CYP 分子種の誘導を介する薬物相互作用を惹起する可能性は低
いと考えられる。
2.6.4.7.3. P-糖蛋白質阻害
4.2.2.2.1 RPT-71680
Caco-2 単層細胞膜を用いて，ボスチニブ（0.5～50 mol/L）の P-gp 阻害能を評価した（RPT-71680；
薬物動態試験の概要表，2.6.5.1.33）。ジゴキシン（5 μmol/L）をプローブ基質として使用した。
ボスチニブは濃度依存的に P-gp を介したジゴキシンの排出を阻害した。
50 mol/L で P-gp 活性を 95%
阻害し，IC50 値は 2 μmol/L（1.06 g/mL）であった。推奨臨床用量（500 mg）のボスチニブを 1 日 1
回反復経口投与したときの定常状態における非結合型 Cmax は 14.2 ng/mL（0.027 μmol/L）であり，IC50
値の比は 0.1 未満であったことから，ボスチニブとジゴキシンの間に薬物相互作用が生じるリスクは
低いことが示唆された（Giacomini et al. 2010）。しかし，上述の推奨臨床用量における消化管内濃度
推定値（投与量を 250 mL で除した値）と IC50 値の比は 10 を超えることから，ジゴキシンなど P-gp
の基質となる薬物の吸収または血漿中濃度にボスチニブが影響を及ぼす可能性が考えられた。
2.6.4.8. その他の薬物動態試験
該当なし。
2.6.4.9. 考察および結論
ボスチニブのヌードマウス，ラットおよびイヌにおける経口投与時のバイオアベイラビリティは中等
度で，吸収は中等度または速やかであった。静脈内投与時の CL はマウスおよびイヌで肝血流量の半
分程度であり，ラットで肝血流量と同程度で，Vdss は検討したすべての動物種で高い値を示した。単
回経口および静脈内投与したときの t½はマウスおよびラットで中等度であり，イヌでは長かった。
ラットにおいて，CL および全身曝露量に性差が認められ，同じ用量を投与したときの雌ラットの血
漿 AUC は雄の約 3～5 倍であったが，イヌではこのような性差は認められなかった。ラットおよび
イヌに反復投与したとき，ボスチニブの蓄積はほとんど認められなかった。以上の薬物動態試験およ
びトキシコキネティクス試験の結果から，安全性薬理試験および毒性試験で経口投与したときにヒト
と同程度以上の曝露量が得られたことが確認された。
Caco-2 細胞単層膜におけるボスチニブの透過性は中等度で，排出トランスポーターである P-gp，
BCRP および MRP の基質であることが明らかになった。しかし，マウス，ラットおよびイヌに経口
投与したときのバイオアベイラビリティが中等度であったことから，吸収におけるこれらの排出ト
ランスポーターの寄与は小さいと考えられた。ボスチニブは in vitro において受動拡散によりヒト肝
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
細胞内に取り込まれ，肝臓に存在する取り込みトランスポーターのボスチニブの肝臓内への取り込み
に対する寄与は小さいことが示唆された。
ラットに [14C]ボスチニブを投与したとき，放射能は脳を除く大部分の組織および器官に広く分布し，
分布容積が大きいことと一致した。放射能の取り込みおよび滞留はメラニン含有組織であるブドウ膜
で特に顕著であった。しかし，有色ラットを用いた光安全性試験において，ボスチニブに光毒性は認
められず，イヌを用いた反復投与毒性試験においても眼および皮膚に毒性所見は認められていない。
マウス，ラット，ウサギ，イヌおよびヒト血漿中でのボスチニブおよび N-脱メチル体の蛋白結合率
は高く，濃度依存性は認められなかった。ヒト血漿中でのボスチニブの主な結合蛋白質は HSA であ
ると考えられた。ラット，イヌおよびヒトにおけるボスチニブ（in vitro）およびボスチニブ由来放射
能（in vivo）の血液/血漿中濃度比から，血球および血漿にほぼ均等に分布することが示唆された。こ
れらのデータから，薬物動態およびトキシコキネティクスの評価に血漿中濃度を用いることが適切で
あることが示された。
妊娠 SD ラットに [14C]ボスチニブを 10 mg/kg の用量で単回経口投与したとき，胎盤中に放射能が認
められ，これより低濃度ながら羊水および胎児でも検出された。
マウス，ラット，イヌおよびヒトにおける in vivo 代謝試験から，血漿中の主な放射能成分は未変化
体であることが明らかになった。マウスおよびイヌにおける主要代謝経路は，N-脱メチル化および
N-オキシド化であり，ラットにおける主要代謝経路は O-脱メチル化，N-脱メチル化および N-オキシ
ド化であった。ヒトにボスチニブを単回または反復経口投与したときの循環血中の主代謝物は酸化的
脱塩素体（M2）および N-脱メチル体（M5）で，ボスチニブ 500 mg を単回経口投与したときの M2
および M5 の血漿 AUC は，未変化体のそれぞれ 18%および 24%であった。なお，これらの代謝物の
Src 形質転換線維芽細胞の足場非依存性増殖に対する阻害活性は，未変化体の 2%～6%以下であった
（2.6.2.2.2 項）。ヒト糞中の主な薬物由来成分は未変化体および M5 であった。
ヒト主要代謝物の一つである M2 が毒性試験で用いた動物種で認められなかったことから，in vitro
遺伝毒性試験および in vivo ラット 2 週間毒性試験を実施して M2 の安全性を評価した。ラットにお
ける M2 の全身曝露量は，ヒトにボスチニブ 500 mg を単回経口投与したときに認められる曝露量の
2～3 倍であった。M5 については，6 ヵ月間毒性試験における無毒性量での雄ラットの M5 曝露量は，
ヒトにボスチニブ 500 mg を単回経口投与したときの曝露量に比べて約 2 倍高いと推定された。以上
のラットにおける M2 の全身曝露量，ならびにラットおよびイヌにおける M5 の推定曝露量は，おお
むねヒトにおける曝露量と同程度以上と考えられた。
In vitro 試験において，ボスチニブは主に CYP3A4 によって M2，M5 および M6 に代謝されることが
明らかになった。M2 はさらに複数の UGT によってグルクロン酸抱合体へと代謝された。CYP1A2，
CYP2A6，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP3A4/5 の基質（阻害）または CYP1A2，CYP2B6，
CYP2C9，CYP2C19，CYP3A の基質（誘導）を併用したときに，これらの併用薬の代謝がボスチニ
ブによって阻害または誘導されることによって薬物相互作用が生じる可能性は低いと考えられた。In
vitro において，ボスチニブは P-gp を介するジゴキシンの排出を濃度依存的に阻害し，ジゴキシンの
ような P-gp 基質である薬物の吸収にボスチニブが影響を及ぼす可能性がある。なお，ヒトにおける
ボスチニブの尿中排泄はわずかであり，腎臓の排出トランスポーター［有機アニオントランスポー
ター（OAT）1 および 3，有機カチオントランスポーター（OCT）2］のボスチニブの全身クリアラン
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ボスチニブ水和物
2.6.4 薬物動態試験の概要文
スに対する寄与は小さいと予測されたことから，これらの腎臓の排出トランスポーターに関する評価
は行っていない。
ラット，イヌおよびヒトに [14C]ボスチニブを経口投与したときの放射能の主排泄経路は糞中排泄で
あった。授乳中の SD ラットに [14C]ボスチニブを 10 mg/kg の用量で単回経口投与したとき，乳汁中
に放射能が分泌され，出生児血漿中に放射能が検出された。なお，ラットおよびウサギにおいてボス
チニブ投与による生殖発生毒性（胚・胎児死亡および胎児奇形の増加）が認められている。
2.6.4.10. 図表
薬物動態試験で得られた結果を示す補足表および図は，本文中および 2.6.5 薬物動態試験の概要表に
示した。
2.6.4.11. 参考文献
1.
Bjornsson TD, Callaghan JT, Einolf HJ, et al. The conduct of in vitro and in vivo drug-drug interaction
studies: a Pharmaceutical Research and Manufacturers of America (PhRMA) perspective. Drug Metab
Dispos 2003;31(7):815-32.
2.
Giacomini, KM, Huang SM, Tweedie DJ et al. Membrane transporters in drug development. Nat Rev
Drug Discov. 2010;9(3):215-36.
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Page 39
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetic Tabulated Summary
TABLE OF CONTENTS
2.6.5.1. Supportive Tables ............................................................................................................................. 3
2.6.5.1.1. Pharmacokinetics: Overview ................................................................................................... 4
2.6.5.1.2. Analytical Method Validation and Stability Reports, Nonclinical (Chronological by
Report Issue Date).......................................................................................................................... 9
2.6.5.1.3. Analytical Methods Used in Nonclinical Pharmacokinetic and Toxicokinetic Studies......... 11
2.6.5.1.4. Pharmacokinetics: Absorption – In Vitro, Substrate for P-Glycoprotein .............................. 15
2.6.5.1.5. Pharmacokinetics: Absorption – In Vitro, In the Presence of Efflux Transporter
Inhibitors ...................................................................................................................................... 16
2.6.5.1.6. Pharmacokinetics: In Vitro Assessment of Hepatic Uptake .................................................. 18
2.6.5.1.7. Pharmacokinetics: Absorption after a Single Dose of Bosutinib in Nude Mice .................... 19
2.6.5.1.8. Pharmacokinetics: Absorption after a Single Dose of Bosutinib in Rats............................... 20
2.6.5.1.9. Pharmacokinetics: Absorption after a Single Dose of Bosutinib in Dogs ............................. 21
2.6.5.1.10. Pharmacokinetics: Absorption after a Single Dose of Oxydechlorinated Bosutinib
(M2) in Rats ................................................................................................................................. 22
2.6.5.1.11. Pharmacokinetics: Absorption after Repeated Doses .......................................................... 23
2.6.5.1.12. Pharmacokinetics: Organ Distribution, Oral Single Dose ................................................... 24
2.6.5.1.13. Pharmacokinetics: Plasma Protein Binding of Bosutinib, Ultracentrifugation.................... 28
2.6.5.1.14. Pharmacokinetics: Binding of Bosutinib to Human Plasma Proteins.................................. 29
2.6.5.1.15. Pharmacokinetics: Ex Vivo Plasma Protein Binding of Bosutinib,
Ultracentrifugation ....................................................................................................................... 30
2.6.5.1.16. Pharmacokinetics: Plasma Protein Binding of N-Desmethyl Bosutinib (M5),
Equilibrium Dialysis .................................................................................................................... 31
2.6.5.1.17. Pharmacokinetics: In Vitro Red Blood Partitioning ............................................................ 32
2.6.5.1.18. Pharmacokinetics: Study in Pregnant Animals.................................................................... 33
2.6.5.1.19. Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Mice .................................................................... 34
2.6.5.1.20. Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Rats...................................................................... 36
2.6.5.1.21. Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Dogs .................................................................... 38
2.6.5.1.22. Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Humans ............................................................... 39
2.6.5.1.23. Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Healthy Male Human Subjects............................ 41
2.6.5.1.24. Pharmacokinetics: Metabolism In Vitro .............................................................................. 42
2.6.5.1.25. Pharmacokinetics: Identification of Drug-Metabolizing Enzymes, CYP ............................ 43
2.6.5.1.26. Pharmacokinetics: Identification of Drug-Metabolizing Enzymes, FMO ........................... 45
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Page 1
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetic Tabulated Summary
2.6.5.1.27. Pharmacokinetics: Identification of Drug-Metabolizing Enzymes, UGT............................ 47
2.6.5.1.28. Pharmacokinetics: Excretion in Rats ................................................................................... 48
2.6.5.1.29. Pharmacokinetics: Excretion in Dogs.................................................................................. 49
2.6.5.1.30. Pharmacokinetics: Study in Nursing Animals ..................................................................... 50
2.6.5.1.31. Pharmacokinetics: In Vitro CYP450 Inhibition in Human Liver Microsomes.................... 52
2.6.5.1.32. Pharmacokinetics: In Vitro Induction of Cytochrome P450 Genes by Bosutinib in
Human Primary Hepatocytes ....................................................................................................... 54
2.6.5.1.33. Pharmacokinetics: In Vitro Inhibition of P-Glycoprotein Activity...................................... 55
2.6.5.2. Supportive Figures .......................................................................................................................... 56
2.6.5.2.1. Proposed Bosutinib Metabolites Present in Mouse, Rat, Dog, and Human Plasma .............. 57
2.6.5.2.2. Proposed Bosutinib Metabolites Present in Mouse, Rat, Dog, and Human Excreta.............. 58
2.6.5.2.3. Proposed Metabolic Pathways for Bosutinib In Vitro ........................................................... 59
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Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1. Supportive Tables
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Page 3
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.1. Pharmacokinetics: Overview
Route
Dosage
(mg/kg)
Testing
Facility
[14C]Bosutinib
In vitro
NA
Wyeth
Research
RPT-71680
Caco-2 Cell Monolayers
[14C]Bosutinib
In vitro
NA
Wyeth
Research
RPT-80268
Cryopreserved Human Hepatocytes
Bosutinib
In vitro
NA
Pfizer, Inc.
WAY-173606_
_195303
Single-Dose
PK/Bioavailability
Female Nude Mice
Bosutiniba
IV
Oral (gavage)
5
50
Wyeth
Research
RPT-51795
Single-Dose PK
Female Nude Mice
Bosutinibb
Oral (gavage)
50
Wyeth
Research
RPT-53291
Rats
Bosutiniba
IV
Oral (gavage)
5
50
Wyeth
Research
RPT-51749
Male Rats
Bosutinibc
IV
20
60
Wyeth
Research
RPT-51150
Female Dogs
Bosutiniba
IV
Oral (gavage)
2
5
Wyeth
Research
RPT-51748
Rats
Oxydechlorinated
Bosutinib (M2)d
Oral (gavage)
M2
50 mg/kg
Wyeth
Research
RPT-73187
Type of Study
Test System
Absorption and Pharmacokinetics
Caco-2 Cell Monolayers
P-Glycoprotein Efflux
and Bosutinib
Permeability
Efflux Transporters
and Bosutinib
Permeability
Hepatic Uptake
Single-Dose
PK/Bioavailability
Single-Dose PK
Single-Dose
PK/Bioavailability
Single-Dose PK
Test Article
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 4
Report No.
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.1
Pharmacokinetics: Overview (Cont’d)
Test System
Test Article
Route
Dosage
(mg/kg)
Male Long-Evans and S-D Rats
[14C]Bosutinib
Oral (gavage)
50
Protein Binding
Plasma of Mice, Rats, Rabbits, Dogs,
and Humans
[14C]Bosutinib
In vitro
NA
Wyeth
Research
RPT-54418
Protein Binding
Purified protein coated beads
(HSA and AAG)
Bosutinib
In vitro
NA
Pfizer, Inc.
PF-05208763_
_1448
18
Protein Binding
Plasma of Humans
Bosutinib
Ex vivo
200 mg
Wyeth
Research
RPT-79220
Protein Binding
Plasma of Mice, Rats, Rabbits, Dogs,
and Humans
N-Desmethyl
Bosutinib (M5)e
In vitro
NA
Pfizer, Inc.
PF-05312061
/
/
122621
Red Blood Cell
Partitioning
Whole Blood of Rats, Dogs, and
Humans
Bosutinib
In vitro
NA
Pfizer, Inc.
WAY-173606
_
_113
243
Gravid Rats
[14C]Bosutinib
Oral
10
Wyeth
Research
RPT-77097
Type of Study
Distribution
Tissue Distribution
Placental Transfer
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Page 5
Testing
Facility
Report No.
RPT-54959
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.1
Pharmacokinetics: Overview (Cont’d)
Type of Study
Metabolism
In Vivo Metabolism
Test System
Test Article
Route
Dosage
(mg/kg)
Testing
Facility
Male Mice
[14C]Bosutinib
Oral (gavage)
50
Wyeth
Research
RPT-77073
In Vivo Metabolism
Rats
[14C]Bosutinib
Oral (gavage)
50
Wyeth
Research
RPT-53088
Rat Plasma/
Rat and Human Liver Microsomes
Bosutinib
Oral
(gavage)/
In vitro
50/
NA
Pfizer, Inc.
PF-05208763_
_1836
48
In Vivo Metabolism
Male Dogs
[14C]Bosutinib
Oral (gavage)
5
Wyeth
Research
RPT-53089
In Vivo Metabolism
Humans
Bosutinib
Oral
400 or
500 mg
Wyeth
Research
RPT-70327
In Vivo Metabolism
Humans, Healthy Male Subjects
[14C]Bosutinib
Oral
500 mg
(10 nCi)
Wyeth
Research
RPT-79197
In Vitro Metabolism
Mouse, Rat, Dog, and Human Liver
Microsomes; Rat, Dog, and Human
Hepatocytes
[14C]Bosutinib
In vitro
NA
Wyeth
Research
RPT-53085
CYP Enzyme
Identification
Human Liver Microsomes
[14C]Bosutinib
In vitro
NA
Wyeth
Research
RPT-53086
FMO Enzyme
Identification
Human Liver and Kidney Microsomes
[14C]Bosutinib
In vitro
NA
Wyeth
Research
RPT-63186
In Vivo/In Vitro
Metabolism
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 6
Report No.
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.1
Pharmacokinetics: Overview (Cont’d)
Test System
Recombinant UGT Enzymes
Test Article
Oxydechlorinated
Bosutinib (M2)d
Route
In vitro
Dosage
(mg/kg)
NA
Testing
Facility
Pfizer, Inc.
Excretion
Mass Balance
Male Rats
[14C]Bosutinib
Oral (gavage)
50
Wyeth
Research
RPT-53087
Mass Balance
Male Dogs
[14C]Bosutinib
Oral (gavage)
5
Wyeth
Research
RPT-53089
Milk Transfer
Lactating Rats
[14C]Bosutinib
Oral
10
Wyeth
Research
RPT-77578
Bosutinib
In vitro
NA
Wyeth
Research
RPT-53488
Human Liver Microsomes
Bosutinib
In vitro
NA
Wyeth
Research
RPT-79459
CYP Induction
Human Hepatocytes
Bosutinib
In vitro
NA
Wyeth
Research
RPT-69677
P-Glycoprotein
Inhibition
Caco-2 Cell Monolayers
Bosutinib
In vitro
NA
Wyeth
Research
RPT-71680
Type of Study
UGT Enzyme
Identification
Pharmacokinetic Drug Interactions
CYP Inhibition
Human Liver Microsomes
CYP
Mechanism-Based
Inhibition
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 7
Report No.
PF-05898965_
_2011
57
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.1
Pharmacokinetics: Overview (Cont’d)
Type of Study
Note:
Test System
Test Article
Route
Dosage
(mg/kg)
Testing
Facility
Report No.
Bosutinib = SKI-606, WAY-173606, and PF-05208763.
AAG = 1-acid glycoprotein; CYP = Cytochrome P450; FMO = Flavin-containing monooxygenase; HSA = Human serum albumin; IV = Intravenous;
NA = Not applicable; PK = Pharmacokinetics; RPT = Report; UGT = Uridine diphosphate glucuronosyltransferase; S-D = Sprague-Dawley.
a.
b.
c.
d.
e.
The vehicle for the oral formulation contained 2% polysorbate, 0.5% methylcellulose, and 0.06% acetic acid.
The vehicle contained 2% polysorbate and 0.5% methylcellulose, without acetic acid.
The vehicle contained 5% dextrose, pH adjusted to a range of 2.9 to 3.1.
Oxydechlorinated bosutinib [M2] = WAY-198760 and PF-05898965.
N-Desmethyl bosutinib [M5] = WAY-173607 and PF-05312061.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 8
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.2. Analytical Method Validation and Stability Reports, Nonclinical (Chronological by Report Issue Date)
Type of
Analytical Methods
Matrix
Range
(ng/mL)a
Quantification of
bosutinib
LC/MS/MS
Rat Plasma
5 to 500
Report Issue Date
Report No.
Purpose
Validation Reports
- -20
RPT-51973
-
-20
RPT-51974
Quantification of
bosutinib
LC/MS/MS
Dog Plasma
5 to 500
-
-20
RPT-52825
Quantification of
bosutinib
LC/MS/MS
Mouse Plasma
10 to 500
-
-20
RPT-52823
Quantification of
bosutinib
LC/MS/MS
Dog Plasma
5 to 500
-
-20
RPT-52824
Quantification of
bosutinib
LC/MS/MS
Rat Plasma
5 to 500
-
-20
RPT-61666
Quantification of
bosutinib
LC/MS/MS
Rabbit Plasma
10 to 500
-20
RPT-73572
Quantification of
oxydechlorinated
bosutinib (M2)b
LC/MS/MS
Rat Plasma
5 to 250
-20
RPT-79906
Quantification of
bosutinib,
oxydechlorinated
bosutinib (M2),b and
N-desmethyl
bosutinib (M5)c
LC/MS/MS
Rat Plasma
5 to 500
-
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 9
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.2 Analytical Method Validation and Stability Reports, Nonclinical (Chronological by Report Issue Date) (Cont’d)
Report Issue Date
Type of
Analytical Methods
Matrix
Range
(ng/mL)a
Long-term stability
evaluation of bosutinib
LC/MS/MS
Rabbit Plasma
NA
RPT-64071
Bench-top stability
evaluation of bosutinib
LC/MS/MS
Rat Plasma
NA
RPT-56239
Long-term stability
evaluation of bosutinib
LC/MS/MS
Mouse, Rat, and Dog
Plasma
NA
Report No.
Purpose
RPT-64162
-20
-20
Stability Reports
-20
Solution
Stability evaluation of
bosutinib-d8 internal
standard
-
-20
RPT-75544
Long-term stability
evaluation of
oxydechlorinated
bosutinib (M2)b
LC/MS/MS
Rat Plasma and Stock
Solution
NA
HB-PS = N-(2-hydroxyethyl)-piperazine-N’-(2-ethanesulfonic acid) (HEPES)-buffered physiologic saline; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem
mass spectrometry; NA = Not applicable; RPT = Report.
a.
b.
c.
Range in units of ng/mL, unless otherwise indicated.
Oxydechlorinated bosutinib [M2] = WAY-198760 and PF-05898965.
N-Desmethyl bosutinib [M5] = WAY-173607 and PF-05312061.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 10
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.3. Analytical Methods Used in Nonclinical Pharmacokinetic and Toxicokinetic Studies
Study Description
Report No.
Nude Mice
Single-Dose Oral/IV
Pharmacokinetics in Females,
RPT-51795
Single-Dose Oral
Pharmacokinetics in Females,
RPT-53291
Mice
Single-Dose Oral (Micronucleus Support Study)
Toxicokinetics in Males
RPT-52338
Rats
Single-Dose Oral/IV
Pharmacokinetics,
RPT-51749
Single-Dose IV
Pharmacokinetics in Males,
RPT-51150
Single-Dose Oral
Pharmacokinetics,
RPT-73187
Report No. for
Validation
Method Used in
Study
Test Article
Analyte
Type of
Analytical
Method
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
Characterized,
Non-validated
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
Characterized,
Non-validated
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
RPT-52825
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
RPT-51973
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
Characterized,
Non-validated
Oxydechlorinated
Bosutinib (M2)a
Oxydechlorinated
Bosutinib (M2)a
LC/MS/MS
Plasma
Characterized,
Non-validated
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 11
Matrix
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.3 Analytical Methods Used in Nonclinical Pharmacokinetic and Toxicokinetic Studies (Cont’d)
Study Description
Report No.
7-Day Oral Dose-Ranging
Toxicokinetics,
RPT-50258
Type of
Analytical
Method
LC/MS/MS
Matrix
Plasma
Report No. for
Validation
Method Used in
Study
Characterized,
Non-validated
Test Article
Bosutinib
Analyte
Bosutinib
2-Week Oral Toxicity
Toxicokinetics,
RPT-74244
Oxydechlorinated
Bosutinib (M2)a
Oxydechlorinated
Bosutinib (M2)a
LC/MS/MS
Plasma
RPT-73572
1-Month Oral Toxicity
Toxicokinetics,
RPT-52934
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
RPT-51973,
RPT-52824
Bosutinib and
PF-01677920b
LC/MS/MS
Plasma
Characterized,
Non-validated
LC/MS/MS
Plasma
RPT-52824
LC/MS/MS
Plasma
RPT-52824
56-Day Investigative Toxicity
Toxicokinetics,
SP3810
6-Month Oral Toxicity
Toxicokinetics,
RPT-64288
Bosutinib
Bosutinib,
N-Desmethyl
Bosutinib (M5),c
and
PF-01677920b
Bosutinib
Developmental Toxicity
Toxicokinetics in Gravid Females,
RPT-64286
Bosutinib
Bosutinib
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 12
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.3 Analytical Methods Used in Nonclinical Pharmacokinetic and Toxicokinetic Studies (Cont’d)
Matrix
Report No. for
Validation
Method Used in
Study
Test Article
Analyte
Type of
Analytical
Method
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
RPT-61666
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
RPT-61666
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
RPT-51974
5-Day IV Dose-Ranging
Toxicokinetics,
RPT-50667
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
Characterized,
Non-validated
10-Day Oral Dose-Ranging
Toxicokinetics in Females,
RPT-53053
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
Characterized,
Non-validated
1-Month Oral Toxicity
Toxicokinetics,
RPT-53029
9-Month Oral Toxicity
Toxicokinetics,
RPT-66535
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
RPT-51974,
RPT-52823
Bosutinib
Bosutinib
LC/MS/MS
Plasma
RPT-51974,
RPT-52823
Study Description
Report No.
Rabbits
Developmental Toxicity Dose-Ranging
Toxicokinetics in Gravid Females,
RPT-64285
Developmental Toxicity
Toxicokinetics in Gravid Females,
RPT-66820
Dogs
Single-Dose Oral/IV
Pharmacokinetics in Females,
RPT-51748
IV = Intravenous; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry; RPT = Report.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 13
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.3 Analytical Methods Used in Nonclinical Pharmacokinetic and Toxicokinetic Studies (Cont’d)
Study Description
Report No.
a.
b.
c.
Test Article
Analyte
Oxydechlorinated bosutinib [M2] = WAY-198760 and PF-05898965.
PF-01677920 = Imatinib.
N-Desmethyl bosutinib [M5] = WAY-173607 and PF-05312061.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 14
Type of
Analytical
Method
Matrix
Report No. for
Validation
Method Used in
Study
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.4. Pharmacokinetics: Absorption – In Vitro, Substrate for P-Glycoprotein
Study System: Caco-2 monolayers
Concentration (µM): 1, 10, or 100 µM [14C]bosutinib; 100 µM verapamil (P-gp
inhibitor)
Method of Analysis: LSC
Sampling Time: 2 hours
Concentration
(μM)
1
10
100
Treatment
No Inhibitor
Report No.:
RPT-71680
---Apparent [14C]Bosutinib Permeability Coefficient (Papp x 10-6 cm/sec)--(Mean ± SD)
AB
BA
2.08 ± 0.24
14.0 ± 1.40
2.96 ± 0.25
14.3 ± 1.59
5.93 ± 0.18
6.87 ± 0.36
Ratio
BA/AB
6.7
4.8
1.2
10
+ Verapamil
4.51 ± 0.43
7.94 ± 0.38
1.8
100
7.43 ± 0.93
6.23 ± 0.97
0.8
AB = Apical to basolateral direction; BA = Basolateral to apical direction; LSC = Liquid scintillation counting; Papp = Apparent permeability coefficient;
P-gp = P-glycoprotein; RPT = Report; SD = Standard deviation.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 15
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.5. Pharmacokinetics: Absorption – In Vitro, In the Presence of Efflux Transporter Inhibitors
Study System: Caco-2 monolayers
Concentration (µM): 1 µM [14C]bosutinib; 1, 10, 100 µM ketoconazole (P-gp and
CYP3A inhibitor); 100 µM verapamil (P-gp inhibitor); 5 µM KO-143 (BCRP inhibitor);
100 µM MK-571 (MRP inhibitor)
Method of Analysis: LSC
Sampling Time: 2 hours
Report No.:
RPT-80268
Apparent [14C]bosutinib Permeability Coefficient (Papp x 10-6 cm/sec)
(Mean ± SD)
AB
BA
1.31 ± 0.05
21.5 ± 1.81
Ratio
BA/AB
16.4
Inhibitiona
(%)
NA
13.9 ± 0.99
6.46 ± 0.06
4.04 ± 0.34
6.0
1.5
1.0
63
91
94
6.18 ± 0.59
6.92 ± 0.46
1.1
93
2.35 ± 0.18
13.1 ± 2.35
5.6
66
Bosutinib
(μM)
1
Treatment
(μM)
Control
1
1
1
Ketoconazole
1
10
100
2.34 ± 0.26
4.20 ± 0.19
3.91 ± 0.48
1
Verapamil
100
1
KO-143
5
MK-571
1
100
2.48 ± 0.04
10.7 ± 0.60
4.3
74
Note: Under the same conditions, the prototype P-gp substrate digoxin showed an efflux ratio of 22.1 at a drug concentration of 5 µM, and the efflux
ratio was reduced to 1.0 in the presence of verapamil (100 µM), inhibiting P-gp activity by 99%.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 16
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.5.
Pharmacokinetics: Absorption – In Vitro, In the Presence of Efflux Transporter Inhibitors (Cont’ d)
AB = Apical to basolateral direction; BA = Basolateral to apical direction; BCRP = Breast cancer resistance protein; CYP = Cytochrome P450;
LSC = Liquid scintillation counting; MRP = Multi-drug resistance protein; NA = Not applicable; Papp = Apparent permeability coefficient;
P-gp = P-glycoprotein; RPT = Report; SD = Standard deviation.
a.
% Inhibition = [1-(Efflux ratioinhibition/Efflux ratio)] x 100.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 17
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.6. Pharmacokinetics: In Vitro Assessment of Hepatic Uptake
Study System: Cryopreserved human hepatocyte suspensionsa
Concentration (µM): 1 or 25 µM bosutinib; 1 µM rosuvastatin (positive control);
rifamycin SV (an inhibitor of OATP-mediated transport)
Method of Analysis: LC/MS/MS
Sampling Time: 0.5 to 1.5 minutes
Test Article
Bosutinib
Concentration
(μM)
1
25
Report No.:
WAY-173606_
----------Uptake (pmol/min/1 x 106 cells)----------Rifamycin SV
+Rifamycin SV
272
231
3195
4995
Rosuvastatin
1
11.9
0.95
LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry; OATP = Organic anion transporting polypeptides.
_195303
% Inhibition of Uptake Rateb
15.2%
No Inhibition
92.0%
a. Assays were conducted twice on separate days, and incubations for each time point were performed in duplicate within an assay.
b. Percent inhibition of uptake rate was calculated using the following equation: [1-(slope of uptake plus inhibitor/slope of uptake minus inhibitor)] ×
100.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 18
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.7. Pharmacokinetics: Absorption after a Single Dose of Bosutinib in Nude Mice
Report No.:
Species:
No. and Gender (M/F) of
Animals:
Feeding Condition:
Vehicle/Formulation:
Matrix:
Analyte:
Assay:
Route:
Dosage (mg/kg):
----------------RPT-51795-------------Nude Mice
3 F/time point/dosage
---------------RPT-53291-------------Nude Mice
3 F/time point/dosage
Fed
Oral: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and
0.06% acetic acid
IV: citric buffer (pH 3.0)
Plasma
Bosutinib
LC/MS/MS
---------IV---------------Oral--------
Fasted/Fed
Oral: 2% polysorbate 80 and 0.5% methylcellulose
Plasma
Bosutinib
LC/MS/MS
---------------Oral--------------Fasted
Fed
50
50
5
50
PK Parameters (Mean):
C5min or Cmaxa (ng/mL)
1049
1509
1177
1132
Tmax (h)
NA
4.0
2 to 4
2
t1/2 (h)
4.8
4.2
2.9
3.5
AUC(0-24) (ng•h/mL)
NC
NC
7947
5649
AUC(0-) (ng•h/mL)
2220
11,677
7986
5710
CL (L/h/kg)
2.25
NA
NA
NA
11.5
NA
NA
NA
Vdss (L/kg)
Fb (%)
NA
52.6
NA
NA
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; C5min = Concentration at 5 minutes; CL = Total plasma clearance; Cmax = Peak concentration;
F = Systemic bioavailability; IV = Intravenous; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry; NA = Not applicable; NC = Not
calculated; PK = Pharmacokinetics; RPT = Report; t1/2 = Apparent elimination half-life; Tmax = Time to peak concentration; Vdss = Steady-state volume
of distribution.
a.
b.
C5min for IV route, Cmax for oral route.
Obtained from the ratio of dose-normalized AUC(0-) after oral and IV administration of bosutinib.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 19
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.8. Pharmacokinetics: Absorption after a Single Dose of Bosutinib in Rats
Report No.:
Species:
No. and Gender (M/F) of
Animals:
Feeding Condition:
Vehicle/Formulation:
-------------------------RPT-51749------------------------Rats
4 M and 4 F/route of administration
------------RPT-51150----------Rats
4 M/dosage
Fed
Oral: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% acetic acid
IV: citrate buffer (pH 3.5)
Plasma
Bosutinib
LC/MS/MS
--------------------IV-------------------------------------Oral----------------Males
Females
Males
Females
5
5
50
50
Fed
IV: 5% dextrose injection, pH
adjusted to a range of 2.9 to 3.1
Plasma
Bosutinib
LC/MS/MS
--------------------IV-------------------Males
Males
20c
60
Matrix:
Analyte:
Assay:
Route:
Gender:
Dosage (mg/kg):
PK Parameters (Mean ± SD):
C5min or Cmaxa (ng/mL)
646 ± 86
723 ± 53
Tmax (h)
NA
NA
t1/2 (h)
2.5 ± 0.3
4.3 ± 0.3*
AUC(0-) (ng•h/mL)
655 ± 64
1194 ± 126
CL (L/h/kg)
7.68 ± 0.72
4.22 ± 0.45*
Vdss (L/kg)
15.2 ± 2.2
17.1 ± 1.0
Fb (%)
NA
NA
* Significantly different (p < 0.05) from corresponding value in males.
224 ± 62
3.0 ± 1.2
3.7 ± 1.0
1507 ± 409
NA
NA
23.0
834 ± 337*
5.5 ± 1.9
5.4 ± 1.0
7099 ± 2731*
NA
NA
59.5
4058 ± 1083
NA
2.6 (N=2)
3067 (N=2)
6.53 (N=2)
12.3 (N=2)
NA
14911 ± 10453
NA
3.8 ± 0.7
10291 ±3313
6.31 ± 1.98
19.4 ± 11.3
NA
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; C5min = Concentration at 5 minutes; CL = Total plasma clearance; Cmax = Peak concentration;
F = Systemic bioavailability; IV = Intravenous; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry; NA = Not applicable;
PK = Pharmacokinetics; RPT = Report; SD = Standard deviation; t1/2 = Apparent elimination half-life; Tmax = Time to peak concentration; Vdss =
Steady-state volume of distribution.
a.
b.
c.
C5min for IV route, Cmax for oral route.
Obtained from the ratio of dose-normalized AUC(0-) after oral and IV administration of bosutinib.
N = 3. The cannula in 1 animal was not flowing; therefore, this animal was not used in the study.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 20
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.9. Pharmacokinetics: Absorption after a Single Dose of Bosutinib in Dogs
Report No.:
Species:
No. and Gender (M/F) of Animals:
Feeding Condition:
Vehicle/Formulation:
Matrix:
Analyte:
Assay:
Route:
Dosage (mg/kg):
PK Parameters (Mean ± SD):
C5min or Cmaxa (ng/mL)
Tmax (h)
t1/2 (h)
AUC(0-) (ng•h/mL)
CL (L/h/kg)
Vdss (L/kg)
Fb (%)
-------------------------RPT-51748------------------------Dogs
4 F/(cross-over)
Fasted/Fed
Oral: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% acetic acid.
IV: citrate buffer, pH 3.5
Plasma
Bosutinib
LC/MS/MS
Fed
Fasted
Fed
--------IV-------------Oral-----------Oral-----2
5
5
605 ± 247
NA
13.5 ± 0.7
2449 ± 1104
0.91 ± 0.29
13.5 ± 4.1
NA
206 ± 99
1.3 ± 0.5
13.5 ± 3.5
3091 ± 1773
NA
NA
49.6 ± 14.8
230 ± 87
2.3 ± 1.3
17.7 ± 3.8
3835 ± 1525*
NA
NA
64.0 ± 12.3
* Significantly different (p < 0.05) from corresponding value in fasted condition.
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; C5min = Concentration at 5 minutes; CL = Total plasma clearance; Cmax = Peak concentration;
F = Systemic bioavailability; IV = Intravenous; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry; NA = Not applicable; PK =
Pharmacokinetics; RPT = Report; SD = Standard deviation; t1/2 = Apparent elimination half-life; Tmax = Time to peak concentration; Vdss =
Steady-state volume of distribution.
a.
b.
C5min for IV route, Cmax for oral route.
Obtained from the ratio of dose-normalized AUC(0-) after oral and IV administration of bosutinib.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 21
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.10. Pharmacokinetics: Absorption after a Single Dose of Oxydechlorinated Bosutinib (M2) in Rats
-------------------------RPT-73187------------------------Report No.:
Rats
Species:
4 M/F
No. and Gender (M/F) of
Animals:
Fed
Feeding Condition:
Oral: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose
Vehicle/Formulation:
Plasma
Matrix:
Oxydechlorinated bosutinib (M2)
Analyte:
LC/MS/MS
Assay:
Route:
--------------------Oral-------------------Males
Females
Gender:
50
50
Dosage (mg/kg):
PK Parameters (Mean ± SD):
Cmax (ng/mL)
54.1 ± 47.0
34.7 ± 12.4
Tmax (h)
2.0 ± 0.0
2.3 ± 2.6
t1/2 (h)
7.0 ± 1.5
6.6 ± 1.1
AUC(0-24) (ng•h/mL)
295 ± 172
230 ± 54
AUC(0-) (ng•h/mL)
317 ± 185
257 ± 64
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Peak concentration; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry;
PK = Pharmacokinetics; RPT = Report; SD = Standard deviation; t1/2 = Apparent elimination half-life; Tmax = Time to peak concentration.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 22
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.11. Pharmacokinetics: Absorption after Repeated Doses
Toxicokinetic results are presented in 2.6.7 Toxicology Tabulated Summary.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 23
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.12. Pharmacokinetics: Organ Distribution, Oral Single Dose
Species/Strain: Rats (S-D and Long-Evans)
No. and Gender (M/F) of Animals: 16 S-D M (1/time point/assay); 8 Long-Evans M
(1/time point/assay)
Feeding condition: Fasted
Vehicle/Formulation: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and water
Method of Administration: Oral (gavage), single dose of [14C]bosutinib
Method of Analysis: QWBA (S-D and Long-Evans); QTD (S-D); LSCa (S-D and Long-Evans)
Tmax
(h)
Tissue
Adrenal gland
Cmax
(g eq/g)
AUC(0-672)
(g eq•h/g)
AUC(0-)
(g eq•h/g)
Report No.: RPT-54959
Dosage (mg/kg): 50
Radionuclide: 14C
Specific Activity: 97.3 µCi/mg
Analyte/Assay (unit): Radioactivity; μg eq/g
Sampling Times: 1, 4, 8, 24, 48, 96, 168, and
672 hours after dosing
t1/2
(h)
AUC(tissue)/
AUC(plasma)b
Sprague-Dawley Rats; Pharmacokinetics for Radioactivity Determined by QWBA (Group 1)
4
30.8
1510
1840
333
195
C168
(g eq/g)
C168/
Cmax
1.68
0.0545
Adrenal gland (cortex)
8
29.0
876
1040
73.7
111
1.54
0.0531
Adrenal gland (medulla)
8
31.9
917
1260
121
134
1.99
0.0624
4
0.613
25.7
32.5
362
3.46
0.033
0.0538
Blood
c
Bone marrow
4
13.6
440
NC
NC
48.7
0.430
0.0316
NA
NA
NA
NC
NC
NA
NA
NA
8
0.800
16.6
NC
NC
1.84
0.00
0.0000
Harderian gland
24
11.6
2350
NC
NC
260
4.78
0.412
e
Kidney
4
28.1
726
794
52.6
84.5
0.900
0.0320
Liver
4
47.6
1580
NC
NC
175
2.10
0.0441
Lung
4
16.2
250
NC
NC
27.7
0.00
0.0000
Braind
Eye
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 24
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.12
Pharmacokinetics: Organ Distribution, Oral Single Dose (Cont’d)
Tmax
(h)
Tissue
Cmax
(g eq/g)
AUC(0-672)
(g eq•h/g)
AUC(0-)
(g eq•h/g)
t1/2
(h)
AUC(tissue)/
AUC(plasma)b
Report No.:
RPT-54959
C168
(g eq/g)
C168/
Cmax
Sprague-Dawley Rats; Pharmacokinetics for Radioactivity Determined by QWBA (Group 1) (Cont’d)
Lymph nodes (cervical)
8
10.4
463
NC
NC
51.2
0.746
0.0717
Muscle
4
3.05
37.8
40.7
11.3
4.33
0.00
0.0000
Myocardium
4
6.28
231
NC
NC
25.6
0.252
0.0401
Pancreas
4
16.0
355
420
72.9
44.7
0.622
0.0389
Pituitary
124
1.82
0.0839
8
21.7
974
1160
72.0
c
4
0.588
9.04
9.40
17.8
1.00
0.00
0.0000
Prostate
8
7.38
217
NC
NC
24.0
0.00
0.0000
Renal cortex
4
27.6
648
721
58.4
76.7
0.870
0.0315
Renal medulla
4
29.2
840
901
46.2
95.9
0.926
0.0317
Salivary gland
4
15.6
316
334
44.9
35.5
0.272
0.0174
Skin
8
2.93
156
NC
NC
17.3
0.278
0.0949
Spleen
4
26.3
873
956
269
102
0.792
0.0301
Spleen (red pulp)
4
29.8
522
NC
NC
57.7
0.00
0.0000
Spleen (white pulp)
4
18.7
335
NC
NC
37.1
0.00
0.0000
Testis
24
0.375
135
NC
NC
14.9
0.366
0.976
Thymus
8
7.24
227
288
101
30.6
0.417
0.0576
Plasma
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 25
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.12
Pharmacokinetics: Organ Distribution, Oral Single Dose (Cont’d)
Tmax
(h)
Tissue
Thyroid
Uveal tract
Blood
AUC(0-672)
(g eq•h/g)
AUC(0-)
(g eq•h/g)
t1/2
(h)
AUC(tissue)/
AUC(plasma)b
c
RPT-54959
C168
(g eq/g)
C168/
Cmax
Sprague-Dawley Rats; Pharmacokinetics for Radioactivity Determined by QWBA (Group 1) (Cont’d)
4
29.3
949
NC
NC
105
1.26
4
5.86
226
236
35.9
25.1
Long-Evans Rats; Pharmacokinetics for Radioactivity Determined by QWBA (Group 2)
4
0.528
20.2
27.6
429
3.30
c
Plasma
Cmax
(g eq/g)
Report No.:
0.0430
0.198
0.0338
0.024
0.0455
4
0.533
7.84
8.36
59.9
1.00
0.006
0.0113
Skin
4
2.85
191
NC
NC
24.4
0.326
0.114
Uveal tract
24
64.4
38,000
NC
NC
4840
60.4
0.938
0.129
0.0245
Bladder (urinary)
Sprague-Dawley Rats; Pharmacokinetics for Radioactivity Determined by QTD (Group 3)
4
5.26
154
159
176
14.7
Blood
4
0.780
24.6
28.2
276
2.61
0.031
0.0397
Bone (femur)
4
6.46
202
215
214
19.9
0.187
0.0289
Fat (perirenal)
4
1.99
113
116
152
10.7
0.132
0.0663
Large intestine
4
192
1890
1890
167
175
0.199
0.00104
Liver
4
62.5
1530
1540
110
143
1.19
0.0190
Plasma
4
0.780
10.4
10.8
52.4
1.00
0.005
0.00641
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 26
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.12
Pharmacokinetics: Organ Distribution, Oral Single Dose (Cont’d)
Tissue
Small intestine
Stomach
Tmax
(h)
Cmax
(g eq/g)
AUC(0-672)
(g eq•h/g)
AUC(0-)
(g eq•h/g)
t1/2
(h)
AUC(tissue)/
AUC(plasma)b
Report No.:
RPT-54959
C168
(g eq/g)
C168/
Cmax
Sprague-Dawley Rats; Pharmacokinetics for Radioactivity Determined by QTD (Group 3) (Cont’d)
1
528
2020
2030
255
188
0.152
1
50.7
518
535
200
49.5
0.277
0.000288
0.00546
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; C168 = Concentration at 168 h; Cmax = Peak concentration; LSC = Liquid scintillation counting;
NA = Not applicable; NC = Not calculated due to insufficient tissue concentrations to estimate the elimination phase; QTD = Quantitative tissue
dissection; QWBA = Quantitative whole body autoradiography; RPT = Report; S-D = Sprague Dawley; t1/2 = Apparent terminal half-life; Tmax = Time
to peak concentration.
a.
b.
c.
d.
e.
Plasma radioactivity concentrations were determined by LSC. Selected tissues were evaluated by QTD using LSC of solubilized or combusted
whole tissues and tissue homogenates.
The AUC(0-) value was used for both the tissue and plasma when the tissue AUC(0-) was calculated. AUC(0-672) was used for both the tissue and
plasma when AUC(0-) was not calculated for the tissue.
Concentration of radioactivity determined by radioanalysis.
The components of the brain (cerebrum, cerebellum, medulla, and olfactory lobe) were below the limit of quantitation at all time points.
The components of the kidney (renal cortex and renal medulla) are included in kidney.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 27
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.13. Pharmacokinetics: Plasma Protein Binding of Bosutinib, Ultracentrifugation
Study System: In vitro
Matrix and Method: Plasma, ultracentrifugation
Radionuclide: 14C
Temperature: 37C
Nominal Plasma [14C]Bosutinib
Concentration
Species
(ng/mL)
Mice
100
1000
10,000
Average:
Rats
100
1000
10,000
Average:
Rabbits
100
1000
10,000
Average:
Dogs
100
1000
10,000
Average:
Humans
100
1000
10,000
Average:
RPT = Report; SD = Standard deviation.
Report No.:
RPT-54418
% Bound to Plasma Proteins
(Mean ± SD)
92.6 ± 0.1
94.7 ± 0.1
95.0 ± 0.1
94.1
93.0 ± 0.4
94.4 ± 0.6
94.3 ± 0.1
93.9
97.6 ± 0.1
97.4 ± 0.0
96.7 ± 0.1
97.2
96.1 ± 0.1
96.1 ± 0.1
95.4 ± 0.0
95.9
93.8 ± 0.1
93.9 ± 0.4
93.3 ± 0.3
93.7
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 28
% Unbound to Plasma Proteins
(Mean ± SD)
7.4 ± 0.1
5.3 ± 0.1
5.0 ± 0.1
5.9
7.0 ± 0.4
5.6 ± 0.6
5.7 ± 0.1
6.1
2.4 ± 0.1
2.6 ± 0.0
3.3 ± 0.1
2.8
3.9 ± 0.1
3.9 ± 0.1
4.6 ± 0.0
4.1
6.2 ± 0.1
6.1 ± 0.4
6.7 ± 0.3
6.3
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.14. Pharmacokinetics: Binding of Bosutinib to Human Plasma Proteins
Study System: In vitro, purified protein coated beads (HSA and AAG)
Method: Transil assay binding kits (Sovicell); LC/MS/MS
Concentration: 1 µM bosutinib
Report No.:
PF-05208763_
Human Plasma Protein
Concentration
(mg/mL)a
% Fraction Bound
(Meanb ± SD)
% Unbound
Fraction
HSA
AAG
40
0.8
95.4 ± 0.2
71.4 ± 0.1
4.6
28.6
_144818
fu (%)c
3.95
AAG = 1-acid glycoprotein; HSA = Human serum albumin; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry; SD = Standard deviation.
a.
b.
c.
HSA and AAG concentrations of 5.88 x 10-4 and 2.00 x 10-5 M, respectively.
Values represent the mean of 6 replicate samples per concentration tested for each human plasma protein.
Unbound fraction in human plasma estimated based on HSA and AAG binding.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 29
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.15. Pharmacokinetics: Ex Vivo Plasma Protein Binding of Bosutinib, Ultracentrifugation
Study System: Ex vivo
Matrix and Method: Plasma, ultracentrifugation
Temperature: 37C
Report No.:
RPT-79220 (Study 3160A4-1111-EU)
Bosutinib Concentration
(ng/mL)
Time
(h)
% Bound to Plasma
Proteins
(Mean ± SD)
% Unbound to Plasma
Proteins
(Mean ± SD)
50.5 ± 20.5
33.3 ± 14.3
13.2 ± 5.11
3
6
24
94.5 ± 1.8
94.2 ± 1.7
94.8 ± 1.6
5.5 ± 1.8
5.8 ± 1.7
5.2 ± 1.6
26.6 ± 8.90b
24.4 ± 7.63b
9.64 ± 4.04c
RPT = Report; SD = Standard deviation.
3
6
24
96.2 ± 0.4
96.3 ± 0.4
96.6 ± 0.8
3.8 ± 0.4
3.7 ± 0.4
3.4 ± 0.8
Subjects
Chronic Hepatic
Impairmenta
Healthy
a.
b.
c.
Number of subjects with chronic hepatic impairment = 18.
Number of healthy subjects = 9.
Number of healthy subjects = 6.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 30
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.16. Pharmacokinetics: Plasma Protein Binding of N-Desmethyl Bosutinib (M5), Equilibrium Dialysis
Study System: In vitro
Matrix and Method: Plasma, equilibrium dialysis
Temperature: 37C
Species
Mice
Rats
Rabbits
Dogs
Humans
SD = Standard deviation.
a.
Report No.:
Nominal Plasma M5a
Concentration
(ng/mL)
50
500
Average:
50
500
Average:
50
500
Average:
50
500
Average:
50
500
Average:
PF-05312061/
% Bound to Plasma Proteins
(Mean)
94.9
95.3
95.1
93.5
94.1
93.8
97.6
97.9
97.7
98.0
97.9
97.9
94.8
94.2
94.5
N-Desmethyl bosutinib [M5] is also referred to as WAY-173607 and PF-05312061.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 31
/122621
% Unbound to Plasma Proteins
(Mean ± SD)
5.1 ± 0.3
4.7 ± 0.8
4.9
6.5 ± 0.1
5.9 ± 0.2
6.2
2.4 ± 0.4
2.1 ± 0.1
2.3
2.0 ± 0.2
2.1 ± 0.1
2.1
5.2 ± 0.0
5.8 ± 0.3
5.5
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.17. Pharmacokinetics: In Vitro Red Blood Partitioning
Study System: In vitro
Method and Matrix: LC/MS/MS; Whole Blood
Concentration: 1 µM bosutinib
Temperature: 37℃
Report No.:
WAY-173606_
_113243
Species
Mean Whole Blood/Plasma Concentration Ratio
(Cb/Cp)
n
Rats
Dogs
Humans
1.6
0.9
1.2
2
2
3
Cb = Concentration in whole blood; Cp = Concentration in plasma; LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry; n = Number of
separate determinations on different days.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 32
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.18. Pharmacokinetics: Study in Pregnant Animals
Species/Strain: Gravid Rats/S-D
Report No.: RPT-77097
Gestation Day/No. of Animals: GD 19; 6 gravid rats (1/time point)
Vehicle/Formulation: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% glacial acetic acid
Method of Administration: Oral gavage, single dose of [14C]bosutinib
Dosage (mg/kg): 10
Analyte: Radioactivity, [14C]
Assay: LSC
Concentration
-----------------------------------------------------------------Time (h)-------------------------------------------------------------------(ng eq/mL or ng eq/g)
2
4
8
24
48
72
Plasma
270
398
263
79.5
50.5
13.3
Blood
256
382
293
91.2
50.1
17.5
Placentaa
1774
4390
4855
2812
1121
587
Amniotic Fluida
7.97
54.8
156
355
223
154
Fetusesa
55.5
294
515
427
196
128
Tissue-to-Plasma Ratio
Blood
1.0
1.0
1.1
1.2
1.0
1.3
Placentaa
6.6
11.0
18.5
35.4
22.2
44.0
Amniotic Fluida
< 0.1
0.1
0.6
4.5
4.4
11.6
0.2
0.7
2.0
5.4
3.9
9.6
Fetusesa
--------------------------PK Parameters of [14C]Bosutinib-------------------------Cmax
Tmax
AUC(0-72)
(ng eq/mL or ng eq/g)
(h)
(ng eqh/mL or ng eqh/g)
AUC Ratiob
Plasma
398
4
7326
1
Placenta
4855
8
155456
21
355
24
16040
2.2
Amniotic Fluida
Fetusesa
515
8
20923
2.9
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Peak concentration; GD = Gestation day; LSC = Liquid scintillation counting;
RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley; Tmax = Time to peak concentration.
a.
b.
Placenta, amniotic fluid, and fetuses were pooled by time point for analysis.
AUC(tissue)/AUC(plasma).
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 33
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.19. Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Mice
Species/Strain: Mice/CD-1 (whole blood, plasma, urine, feces)
No. and Gender (M/F) of Animals: 5 M/time pointa
Feeding Condition: Fed
Vehicle/Formulation: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% glacial acetic acid
Method of Administration: Single dose of [14C]bosutinib, oral (gavage)
Dosage (mg/kg): 50
Radionuclide: 14C
Target Specific Activity: 12 μCi/mg
Methods of Analysis: HPLC with radioactivity flow detection; LC/MS
Report No.:
RPT-77073
Sampling Time
or Period (h)
0.25
1
3
6
24
% of Dosage
in Sample
NA
NA
NA
NA
NA
Urine
0 - 24
1.1
45.8
1.9
22.0
21.1
NA
8.8c
Feces
0 - 24
47.5
66.4
8.1
14.3
ND
1.6
9.5d
Sample
Plasma
0.25
1
3
6
24
-------------------------------------------% of Radioactivity in Sample------------------------------------------Otherb
Bosutinib
M4
M5
M6
M14
69.7
NA
2.5
2.2
NA
25.6
89.4
NA
10.6
ND
NA
ND
85.2
NA
9.0
5.8
NA
ND
84.7
NA
9.6
5.6
NA
ND
87.1
NA
7.9
5.1
NA
ND
--------------------------------------Blood:Plasma Radioactivity Ratios (Mean ± SD)-------------------------------------1.19 ± 0.26
0.95 ± 0.11
1.01 ± 0.03
1.09 ± 0.12
1.26 ± 0.31
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 34
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.19
Note:
Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Mice (Cont’ d)
ND indicates metabolite peak was not detected.
CD-1 = Cesarean-derived; HPLC = High-performance liquid chromatography; LC/MS = Liquid chromatography/mass spectrometry; M2 =
Oxydechlorinated bosutinib; M4 = O-Desmethyl bosutinib; M5 = N-Desmethyl bosutinib; M6 = Bosutinib N-oxide; M14 = Quinoline ring O-desmethyl
bosutinib; NA = Not applicable; RPT= Report; SD = Standard deviation.
a.
b.
c.
d.
Four (4) males at the 24 hour time point.
A single uncharacterized radioactive peak.
Includes M2 and 6 uncharacterized radioactive peaks, each representing < 2.5% of the radioactivity in the sample.
Includes 2 uncharacterized radioactive peaks.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 35
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.20. Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Rats
Species/Strain: Rats/S-D (whole blood, plasma, urine, feces)
No. and Gender (M/F) of Animals: 3 M and 3 F/time point
Feeding Condition: Fed
Vehicle/Formulation: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% acetic acid in water
Method of Administration: Single dose of [14C]bosutinib, oral (gavage)
Dosage (mg/kg): 50
Radionuclide: 14C
Target Specific Activity: 6 μCi/mg
Methods of Analysis: LSC; LC/MS
Sample
Plasma
Urineb
Gender and
Sampling
Time
or Period (h)
Male 4h
Female 4h
Male 8h
Female 8h
Male 24h
Female 24h
Male 0 – 8h
Female 0 – 8h
Male 8 – 24h
Fecesc
Female 8 –
24h
Male 8 – 24h
Female 8 –
24h
% of
Dosage
in Sample
NA
NA
NA
NA
NA
NA
0.18 ±
0.16
0.70 ±
0.08
0.52 ±
0.22
1.00 ±
0.11
61.5 ±
21.6
36.5 ±
25.6
Report No.:
RPT-53088
--------------------------------------% of Radioactivity in Sample (Mean ± SD)a--------------------------------------Bosutinib
M2
M4
M5
M6
M8
M9
M10
55.9 ± 8.4
NA
2.1 ± 0.4
8.8 ± 1.5
6.7 ± 1.1
NA
17.4 ± 4.7
ND
79.6 ± 7.0
NA
1.3 ± 1.2
1.1 ± 0.9
7.6 ± 0.5
NA
7.9 ± 4.6
ND
57.8 ± 8.9
NA
0.6 ± 1.1
6.3 ± 2.4
4.8 ± 1.3
NA
27.5 ± 13.0
ND
83.1 ± 5.2
NA
1.8 ± 0.2
1.8 ± 0.3
4.4 ± 1.9
NA
6.5 ± 3.5
ND
35.6
NA
ND
13.0
2.7
NA
39.7
8.9
77.8 ± 21.8
NA
ND
3.8 ± 2.1
7.5 ± 1.4
NA
6.0 ± 3.5
9.0 ± 2.6
7.2 ± 5.8
5.3 ± 4.9
5.0 ± 2.6
10.7 ± 5.5
24.2 ± 7.0
19.2 ± 18.0
NA
NA
18.8 ± 8.8
1.0 ± 1.1
2.3 ± 0.8
4.6 ± 0.7
61.0 ± 9.5
4.4 ± 1.3
NA
NA
8.0 ± 3.4
11.2 ± 2.0
9.5 ± 0.3
16.0 ± 3.0
32.2 ± 3.9
8.4 ± 3.1
NA
NA
14.6 ± 7.3
0.8 ± 0.8
3.1 ± 1.8
4.8 ± 0.6
66.1 ± 8.0
4.6 ± 2.4
NA
NA
84.2 ± 7.2
2.3 ± 2.8
4.1 ± 0.1
7.1 ± 2.4
NA
NA
NA
NA
82.0 ± 10.8
0.9 ± 1.5
8.6 ± 3.7
8.0 ± 4.9
NA
NA
NA
NA
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 36
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.20
Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Rats (Cont’ d)
Report No.: RPT-53088
Gender and
Sampling Time
or Period (h)
--------------------------------------Blood:Plasma Radioactivity Ratios (Mean ± SD)-------------------------------------Male 2h
0.97 ± 0.08
Female 2h
0.89 ± 0.05
Male 4h
1.00 ± 0.06
Female 4h
1.00 ± 0.06
Male 8h
1.09 ± 0.07
Female 8h
1.10 ± 0.06
Male 24h
1.31 ± 0.25
Female 24h
1.22 ± 0.11
Note: ND indicates metabolite peak was not detected; M9 and M10 are uncharacterized metabolites. Dioxydechlorinated bosutinib (M3) was identified
in rat plasma in an additional study (PF-05208763_
_183648).
LC/MS = Liquid chromatography/mass spectrometry; LSC = Liquid scintillation counting; M2 = Oxydechlorinated bosutinib; M4 = O-Desmethyl
bosutinib;
M5 = N-Desmethyl bosutinib; M6 = Bosutinib N-oxide; M8 = O-Dealkyl bosutinib; NA = Not applicable; RPT= Report; SD = Standard deviation; S-D =
Sprague-Dawley.
a.
b.
c.
For plasma metabolite identification, 3 animals for 4, 8, and 24 (females only) hour sampling times and 3 duplicate runs for pooled plasma for the
24-hour samples from males.
Additional radiochromatographic peaks were observed in the urine samples, but were not integrated, as they accounted for less than 0.1% of the
administered dose.
Samples collected 0 – 8 hours after dosing contained less than 0.1% of the dose and were not analyzed.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 37
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.21. Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Dogs
Species/Strain: Dogs/beagle (whole blood, plasma, urine, feces)
No. and Gender (M/F) of Animals: 4 M
Feeding Condition: Fed
Vehicle/Formulation: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% acetic acid in water
Method of Administration: Single dose of [14C]bosutinib, oral (gavage)
Dosage (mg/kg): 5
Radionuclide: 14C
Target Specific Activity: 7 μCi/mg
Methods of Analysis: HPLC; LSC; LC/MS
Report No.:
RPT-53089
Sampling Time
or Period (h)
2
4
8
24
% Recovery of
Total Radioactivity
NA
NA
NA
NA
Urine
0-8
8 - 24
24 - 48
0.18 ± 0.14
0.33 ± 0.08
0.67 ± 0.68
19.0 ± 8.9
50.3 ± 10.4
54.5 ± 4.3
3.3 ± 1.1
NA
NA
8.9 ± 2.1
17.9 ± 2.6
16.7 ± 4.7
34.8 ± 3.8
25.6 ± 6.9
20.1 ± 6.5
Feces
0 - 24
24 - 48
43.6 ± 30.9
20.0 ± 4.52
62.6 ± 9.7
61.6 ± 7.8
NA
NA
28.5 ± 7.2
32.1 ± 7.3
NA
NA
Sample
Plasma
-----------------------------% of Radioactivity in Sample (Mean ± SD)-----------------------------Bosutinib
M2
M5
M6
76.8 ± 4.9
NA
6.9 ± 0.5
10.2 ± 2.6
66.3 ± 2.1
NA
20.3 ± 1.5
9.0 ± 1.4
78.7 ± 11.5
NA
9.5 ± 11.0
7.8 ± 0.7
86.7 ± 3.9
NA
2.8 ± 3.6
9.2 ± 2.3
----------------------------Blood:Plasma Radioactivity Ratios (Mean ± SD)-------------------------2
0.82 ± 0.03
4
0.85 ± 0.01
8
0.90 ± 0.01
24
0.94 ± 0.09
48
0.97 ± 0.06
HPLC = High performance liquid chromatography; LC/MS = Liquid chromatography/mass spectrometry; LSC = Liquid scintillation counting; M2 =
Oxydechlorinated bosutinib; M5 = N-Desmethyl bosutinib; M6 = Bosutinib N-oxide; NA = Not applicable; RPT= Report; SD = Standard deviation.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 38
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.22. Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Humans
Species: Humansa,b (plasma and urine)
No. and Gender (M/F): Gender not specified. Study 100-US:a 6 subjects for day 1 data; 4 subjects for day
15 data. Study 103-EU:b 6 subjects.
Method of Administration: Single or multiple dose of bosutinib, oral
Dosage (mg): 400 mg single dose or 500 mg multiple dose in study 100-US. a 400 mg single dose in study
103-EU.b
Method of Analysis: LC/MS (Semi-quantitative, non-validated)
Study
100-USa
103-EUb
Sample
Plasmac
Plasmad
Study Day
1
Sampling Time or
Period (h)
2
4
8
24
Report No.:
RPT-70327
-----------------Metabolite Concentrations as % Relative to Bosutinib-----------------M2
M5
M6
8.2 ± 1.9
28.0 ± 4.1
5.1 ± 3.0
10.5 ± 3.7
32.1 ± 10.8
5.8 ± 4.0
10.3 ± 3.2
26.1 ± 7.1
6.1 ± 4.3
7.6 ± 1.3
13.8 ± 1.5
4.6 ± 2.1
15
2
4
8
24
7.7 ± 3.8
6.5 ± 2.3
9.4 ± 5.2
9.6 ± 10.8
19.0 ± 5.4
25.7 ± 7.1
20.0 ± 9.7
17.3 ± 10.8
4.1 ± 2.4
4.8 ± 2.8
4.7 ± 3.5
4.0 ± 3.1
1
2
4
8
24
16.5
5.1
12.2
8.2
74.2
38.7
27.6
21.8
9.4
5.5
4.3
NCe
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 39
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.22
Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Humans (Cont’ d)
Sampling Time or
-------------Metabolite Amount as % of Administered Bosutinib Dose-------------Period (h)
M2
M5
M6
0–8
0.20
0.07
0.09
8 – 24
0.32
0.08
0.08
24 – 48
0.14
0.04
0.05
0 – 48 (Total)
0.66
0.19
0.22
Note: Other metabolites of bosutinib observed by LC/MS in human plasma and/or urine include the following: M1, M3, M4, M11, and M12 in plasma,
and M13 in plasma and urine.
Study
103-EUb
Sample
Urine
Study Day
1
BQL = Below quantitation limit; LC/MS = Liquid chromatography/mass spectrometry; M1 - N-Desmethyl, oxydechlorinated bosutinib;
M2 = Oxydechlorinated bosutinib; M3 = Dioxydechlorinated bosutinib; M12 = Regioisomer of M3; M4 = O-Desmethyl bosutinib; M5 = N-Desmethyl
bosutinib; M6 = Bosutinib N-oxide; M11 = Oxydechlorinated bosutinib sulfate; M13 = oxydechlorinated bosutinib glucuronide; NC = Not calculated;
RPT = Report; SD = Standard deviation.
a.
Study 3160A1-100-US was conducted in subjects with advanced malignant solid tumors after single or multiple oral doses of 400 or 500 mg of
bosutinib administered on day 1 and days 3 to 15.
b. Study 3160A1-103-EU was conducted in healthy subjects after a single oral dose of 400 mg of bosutinib.
c. Mean ± SD.
d. Pooled plasma samples
e. Metabolite concentration was BQL.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 40
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.23. Pharmacokinetics: Metabolism In Vivo, Healthy Male Human Subjects
Species: Humans/healthy subjectsa (plasma, urine, and feces)
No. and Gender (M/F): 6 M
Feeding Condition: Fed
Method of Administration: Single dose of [14C]bosutinib, oral
Dosage (mg): 500
Radionuclide: 14C
Target Specific Activity: 0.1 μCi in 500 mg doseb
Methods of Analysis: AMS, LC/MS
Sample
Urine
Sampling Period (h)
0 - 24
Report No.:
RPT-79197
-------------------% of Radioactivity in Sample-------------------Bosutinibc
M2c
M5c
72
7.5
ND
Feces
0 - 24
40
1.6
22
24 - 144
30
7.3
19
AMS = Accelerator mass spectrometry; LC/MS = Liquid chromatography/mass spectrometry; LLOQ = Lower limit of quantitation;
M2 = Oxydechlorinated bosutinib; M5 = N-Desmethyl bosutinib; M11 = Oxydechlorinated bosutinib sulfate; ND = Not determined; RPT = Report.
a. Study 3160A4-1112-US.
b. Actual radioactive dose administered was 10 nCi.
c. Bosutinib, M2, M5, and M11 were also observed by LC/MS in plasma.
metabolite profiles could not be obtained.
However, radioactivity concentrations were below the LLOQ, and
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 41
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.24. Pharmacokinetics: Metabolism In Vitro
Report No.:
[14C]Bosutinib
Metabolite
Bosutinib (parent)
Enzyme System:
Concentration (μM):
_183648
-----------------------Liver Microsomes------------------------------------Hepatocytes-------------Mouse
M Rat
F Rat
Dog
Human
Rat
Dog
Human
100
100
100
50
50
5 or 50
5 or 50
5 or 50
X
N-Desmethyl, oxydechlorinated bosutinib (M1)
Oxydechlorinated bosutinib (M2)
RPT-53085; PF-05208763_
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Dioxydechlorinated bosutinib (M3)
X
O-Desmethyl bosutinib (M4)
X
X
X
X
X
X
N-Desmethyl bosutinib (M5)
X
X
X
X
X
X
X
X
Bosutinib N-oxide (M6)
X
X
X
X
X
X
X
X
O-Dealkyl bosutinib O-glucuronide (M7)
X
X
X
X
X
X
X
X
RPT = Report; X = Present.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 42
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.25. Pharmacokinetics: Identification of Drug-Metabolizing Enzymes, CYP
Type of Study: Identification of human CYP enzymes involved in the metabolism of bosutinib
Method: In vitro incubation with cDNA-expressed human CYP enzymes. In vitro incubation with human
liver microsomes and CYP enzyme-specific chemical inhibitors.
Analytical Method: HPLC with radioflow detection
Test Article: [14C]Bosutinib
Concentrations Evaluated (μM): 5 or 50 (cDNA study); 50 (chemical inhibition study)
Radionuclide: 14C
Target Specific Activity: 50.9 μCi/mg
Report No.:
RPT-53086
---------------------------------------------------------------------------------cDNA Study-------------------------------------------------------------------------------------------Rates of NADPH-Dependent Formation of Major Bosutinib Metabolites-------------(nmoles/nmole of P450/min)a
b
CYP Enzyme
M2 Formation
M5 Formation
M6 Formation
CYP1A2
–
–
–
CYP2A6
–
–
–
CYP2B6
–
–
–
CYP2C8
–
–
–
CYP2C9
–
–
–
CYP2C19
–
–
–
CYP2D6
–
–
–
CYP2E1
–
–
–
CYP3A4c
5.5
7.5
1.8
CYP3A5
–
–
–
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 43
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.25
Pharmacokinetics: Identification of Drug-Metabolizing Enzymes, CYP (Cont’ d)
Report No.: RPT-53086
------------------------------------------------------------------------Chemical Inhibition Study----------------------------------------------------------------------% Inhibition of Bosutinib Metabolite
CYP Enzyme
Enzyme Inhibitor
Concentrations (μM)
(M2, M5, and M6) Formation
CYP1A2
Furafylline
1 and 10
< 15
CYP2A6
Coumarin
10 and 100
< 15
CYP2B6
Orphenadrine
20 and 200
< 15
CYP2C8
Quercetin
1 and 10
< 15
CYP2C9
Sulfaphenazole
1 and 10
< 15
CYP2C19
Tranylcypromine
5 and 50
< 15
CYP2D6
Quinidine
1 and 10
< 15
CYP2E1
Diethyldithiocarbamate
10 and 100
< 15
CYP3A4/5
Ketoconazole
1 and 10
> 90
All CYPs
Benzylimidazole
1000
> 90
CYP = Cytochrome P450; HPLC = High-performance liquid chromatography; M1 = N-Desmethyl, oxydechlorinated bosutinib; M2 = Oxydechlorinated
bosutinib; M4 = O-Desmethyl bosutinib; M5 = N-Desmethyl bosutinib; M6 = Bosutinib N-oxide; NADPH = Reduced form of nicotinamide-adenine
dinucleotide phosphate; RPT = Report.
a. The limit of detection was 0.1 nmoles/nmole of P450/min.
b. The only cDNA-expressed CYP enzyme that metabolized bosutinib was CYP3A4.
c. M1 and M4 were also detected in radiochromatograms of samples of [14C]bosutinib incubated with cDNA-expressed CYP3A4 in the presence of
NADPH.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 44
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.26. Pharmacokinetics: Identification of Drug-Metabolizing Enzymes, FMO
Type of Study: Identification of FMO enzymes involved in the metabolism of bosutinib
Method: In vitro incubation with cDNA-expressed FMO enzymes FMO1, FMO3, and FMO5. In vitro
incubation using human liver and kidney microsomes with NADPH, without NADPH, with the CYP3A-specific
inhibitor ketoconazole, and after heat inactivation.
Analytical Method: HPLC with radioflow detection
Test Article: [14C]Bosutinib
Concentrations Evaluated (μM): 20
Radionuclide: 14C
Target Specific Activity: 68.6 μCi/mg
Matrix and Incubation Conditions
cDNA-expressed FMOs
FMO1
FMO3
FMO5
Report No.:
RPT-63186
-------------------Activity (pmol/min/mg)-------------------M6 Formation
MPT Sulfoxide Formationa
367
216
8.8
16,500
19,100
1300
Human Liver Microsomes
+ NADPH
- NADPH
+ Ketoconazoleb
+ Heat Inactivationc
63.8
8.0
2.9
66.7
5390
170
NDd
150
Kidney Liver Microsomes
+ NADPH
- NADPH
+ Ketoconazoleb
+ Heat Inactivationc
74.3
5.3
62.5
8.2
740
100
650
210
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 45
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.26
Pharmacokinetics: Identification of Drug-Metabolizing Enzymes, FMO (Cont’ d)
CYP = Cytochrome P450; FMO = Flavin-containing monooxygenase enzymes; HPLC = High-performance liquid chromatography; M6 = Bosutinib
N-oxide; MPT = Methyl p-tolyl sulfide; NADPH = Reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate; ND = Not determined;
RPT = Report.
a.
b.
c.
d.
MPT is a positive control for FMO enzymatic activity.
1 μM.
Before the incubations, microsomes were heated to 50C to inactivate the FMO enzymes.
Incubations were not performed and the values were not determined.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 46
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.27. Pharmacokinetics: Identification of Drug-Metabolizing Enzymes, UGT
Type of Study:
Identification of UGT enzymes involved in the metabolism of M2.
Report No.:
PF-05898965_
_201157
Method: In vitro incubation with recombinant UGT enzymes.
Analytical Method: LC/MS/MS
Test Article: M2 (PF-05898965)
Concentrations Evaluated (μM): 0.5 or 5
-----------------------------------M2 Glucuronide Formation----------------------------------UGT Enzyme
0.5 M M2
5 M M2
UGT1A1
+
+
UGT1A3
+
+
UGT1A4
–
+
UGT1A6
–
+
UGT1A7
+
+
UGT1A8
+
+
UGT1A9
+
+
UGT1A10
+
+
UGT2B4
–
+
UGT2B7
+
+
UGT2B15
+
+
UGT2B17
+
+
+ denotes M2 glucuronide was observed.
– denotes M2 glucuronide was not observed.
LC/MS/MS = Liquid chromatography/tandem mass spectrometry; M2 = Oxydechlorinated bosutinib (WAY-198760 and PF-05898965); UGT = Uridine
diphosphate glucuronosyltransferase.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 47
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.28. Pharmacokinetics: Excretion in Rats
Species/Strain: Rats/S-D
No. and Gender (M/F) of Animals: 4 M
Feeding Condition: Fed
Vehicle/Formulation: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% acetic acid in
water
Method of Administration: Single dose, oral (gavage)
Target Specific Activity: 1 Ci/mg
Excretion Route:
Time (h)
0–8
0 – 24
0 – 48
0 – 72
0 – 96
0 – 120
Report No.: RPT-53087
Dosage (mg/kg): 50
Analyte: [14C]Bosutinib
Assay: LSC
------------------------------------------------% of Dosage (Mean ± SD)----------------------------------------------Urine
Feces
Cage Rinse
0.03 ± 0.24
1.13 ± 0.38
1.22 ± 0.42
1.26 ± 0.43
1.28 ± 0.44
1.29 ± 0.44
0.00 ± 0.00
81.56 ± 14.89
96.02 ± 2.08
97.19 ± 1.62
97.47 ± 1.57
97.60 ± 1.55
Total Recovery (Urine+Feces+Cage 99.08 ± 1.45
Rinse, % of Dosage)a
LSC = Liquid scintillation counting; ND = Not determined; RPT = Report; SD = Standard deviation; S-D = Sprague-Dawley.
a.
Determined 120 hours after dosing.
PFIZER CONFIDENTIAL
Page 48
ND
0.13 ± 0.06
0.16 ± 0.07
0.18 ± 0.07
0.18 ± 0.07
0.19 ± 0.07
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.29. Pharmacokinetics: Excretion in Dogs
Species/Strain: Dogs/beagle
No. and Gender (M/F) of Animals: 4 M
Feeding Condition: Fed
Vehicle/Formulation: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% acetic acid in
water
Method of Administration: Single dose, oral (gavage)
Target Specific Activity: 7 Ci/mg
Time (h)
0–8
0 – 24
0 – 48
0 – 72
0 – 96
0 – 120
0 – 144
0 – 168
Excretion Route:
Report No.: RPT-53089
Dosage (mg/kg): 5
Analyte: [14C]Bosutinib
Assay: LSC
----------------------------------------------% of Dosage (Mean ± SD)---------------------------------------------Urine
Feces
Cage Rinse
0.18 ± 0.14
0.43 ± 0.29
1.10 ± 0.42
1.22 ± 0.48
1.27 ± 0.50
1.28 ± 0.51
1.30 ± 0.51
1.31 ± 0.51
ND
43.56 ± 30.92
63.56 ± 29.54
86.45 ± 4.87
89.52 ± 5.28
90.29 ± 5.45
90.82 ± 5.44
91.06 ± 5.44
Total Recovery (Urine+Feces+Cage Rinse, 93.97 ± 2.98
% of Dosage)a
LSC = Liquid scintillation counting; ND = Not determined; RPT = Report; SD = Standard deviation.
a.
Determined 168 hours after dosing.
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Page 49
ND
1.32 ± 2.36
1.46 ± 2.55
1.52 ± 2.57
1.56 ± 2.62
1.58 ± 2.62
1.59 ± 2.63
1.60 ± 2.64
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.30. Pharmacokinetics: Study in Nursing Animals
Species/Strain: Rats/S-D
Report No.: RPT-77578
No. of Animals: 16 lactating rats for milk concentration segment (4/time point) and 9 lactating
Analyte: Radioactivity, [14C]
rats and litters for plasma concentration segment (3/time point)
Vehicle/Formulation: 2% polysorbate 80, 0.5% methylcellulose, and 0.06% glacial acetic acid
Assay: LSC
Method of Administration: Oral gavage, single dose of [14C]bosutinib
Dosage (mg/kg): 10
------------------------------------------------------------------------------------Time (h)-----------------------------------------------------------------------------------0.5
1
2
3
4
6
8
24
48
-------------------------------------------------------------------Milk Concentration Study Segment------------------------------------------------------------------Maternal Plasmaa (ng eq/mL)
66.7 ± 25.4
NA
89.1 ± 23.4
NA
NA
131.4 ± 28.7
NA
16.0 ± 4.5
NA
NA
240.3 ± 108.6
NA
NA
1181.2 ± 314.7d
NA
125.1 ± 49.8
NA
a
Milk (ng eq/mL)
30.7b
Milk to Plasma Ratio
a
0.5b
NA
3.0 ± 2.1
NA
NA
8.1 ± 1.4d
NA
7.6 ± 1.5
NA
PK Parameters of
Cmax
Tmax
AUC(0-24)
[14C]Bosutinib
(ng eq/mL)
(h)
(ng eqh/mL)
AUC Ratioc
Plasma
131.4
6
1901
1
Milk
1181.2
6
14810
7.8
------------------------------------------------------------------Plasma Concentration Study Segment------------------------------------------------------------------Maternal Plasmad (ng eq/mL)
69.7 ± 29.4
81.0 ± 21.9
90.3 ± 10.7
151.1 ± 40.6
0.7 ± 0.7
Tmax
(h)
3
24
1.6 ± 1.1
132.0 ± 30.9
91.3 ± 21.7
126.7 ± 53.4
23.6 ± 6.8
8.6 ± 0.5
7.1 ± 6.3
AUC(0-48)
(ng eqh/mL)
2433
6343
19.3 ± 8.3
33.4 ± 20.6
205.3 ± 7.9
157.1 ± 30.3
d
Pup Plasma (ng eq/mL)
0.3 ± 0.5
PK Parameters of
[14C]Bosutinib
Dam Plasma
Pup Plasma
0.3 ± 0.2
Cmax
(ng eq/mL)
151.1
205.3
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Page 50
AUC Ratioe
1
2.6
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.30
Pharmacokinetics: Study in Nursing Animals (Cont’ d)
AUC = Area under the concentration-versus-time curve; Cmax = Peak concentration; LSC = Liquid scintillation counting; N = Number; NA = Not
applicable; RPT = Report; S-D = Sprague-Dawley; Tmax = Time to peak concentration.
a.
b.
c.
d.
e.
N = 4.
N = 2.
AUC(milk)/AUC(plasma).
N = 3.
AUC(pup plasma)/AUC(dam plasma).
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Page 51
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.31. Pharmacokinetics: In Vitro CYP450 Inhibition in Human Liver Microsomes
Report No.:
Test System:
Bosutinib Concentrations:
Enzyme
CYP1A2
--------------------------------------------------------------RPT-53488-------------------------------------------------------------Human Liver Microsomes
0, 0.1, 0.25, 1.0, 2.5, 10, 25, 100 μM
Probe Substrate
----------IC50------------Estimated Ki---(Concentration M)
(μM)
(μM)
Ethoxyresorufin (1)
NCa
NC
CYP2A6
Coumarin (2.5)
NCa
NC
CYP2C8
Paclitaxel (10)
200
NC
a
CYP2C9
Diclofenac (10)
NC
NC
CYP2C19
S-mephenytoin (40)
37
27
CYP2D6
Bufuralol (5)
55
CYP3A4/5
CYP3A4/5
Report No.:
Test System:
Bosutinib Concentration:
(μM)
Enzyme
CYP2C9
10
a
Midazolam (2.5)
NC
132
Testosterone (50)
21
27
--------------------------------------------------------------RPT-79459-------------------------------------------------------------Human Liver Microsomes
----------------------------------------------% Control Activity (Mean ± SD)b----------------------------------------------------------0---------- NADPH
+ NADPH
100 ± 1
100 ± 1
----------1---------- NADPH
+ NADPH
100 ± 1
100 ± 1
----------10---------- NADPH
+ NADPH
97 ± 0.1
104 ± 3
----------100---------- NADPH
+ NADPH
82 ± 4
86 ± 3
CYP2C19
100 ± 3
100 ± 2
95 ± 4
102 ± 3
98 ± 4
94 ± 2
76 ± 2
75 ± 3
CYP2D6
100 ± 2
100 ± 1
99 ± 2
102 ± 3
94 ± 2
99 ± 6
57 ± 1
64 ± 5
CYP3A
100 ± 1
100 ± 3
103 ± 1
101 ± 1
106 ± 1
100 ± 1
104 ± 2
86 ± 2
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Page 52
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.31 Pharmacokinetics: In Vitro CYP450 Inhibition in Human Liver Microsomes (Cont’ d)
CYP = Cytochrome P450; IC50 = Concentration resulting in 50% inhibition; Ki = Inhibition constant; NADPH = Reduced form of
nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate; NC = Not calculated; RPT = Report; SD = Standard deviation.
a.
b.
Not calculated due to lack of inhibition at 100 μM.
N = 3.
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Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.32. Pharmacokinetics: In Vitro Induction of Cytochrome P450 Genes by Bosutinib in Human Primary Hepatocytes
Report No.: RPT-69677
--------------------------------------Fold Change of Treated Over Vehicle Controls (Mean ± SD) --------------------------------------------------------------------------------------mRNA Levels------------------------------------------------Enzyme Activity
CYP3A4
CYP3Ab
CYP1A2
CYP2B6
CYP2C9
CYP2C19
0.53 ± 0.01
0.79 ± 0.08
0.86 ± 0.09
0.92 ± 0.18
0.77 ± 0.16
0.89 ± 0.20
0.50 ± 0.02
0.86 ± 0.09
0.87 ± 0.18
0.97 ± 0.19
0.75 ± 0.30
0.84 ± 0.35
0.29 ± 0.19
0.99 ± 0.21
0.84 ± 0.41
0.88 ± 0.46
0.88 ± 0.71
0.31 ± 0.15
a
Bosutinib (μM)
0.48
0.95
9.5
Vehicle Control
1.00 ± 0.00
1.00 ± 0.00
Rifampicin (10 µM)
0.64 ± 0.19
7.02 ± 2.06
CYP = Cytochrome P450; RPT = Report; SD = Standard deviation.
a.
b.
1.00 ± 0.00
1.00 ± 0.00
1.00 ± 0.00
1.00 ± 0.00
2.32 ± 0.25
1.05 ± 0.08
12.94 ± 5.31
4.51 ± 4.05
Average of data from 3 subjects, unless otherwise indicated.
CYP3A enzymatic activity as measured by testosterone 6-hydroxylase activity.
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Page 54
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.1.33. Pharmacokinetics: In Vitro Inhibition of P-Glycoprotein Activity
Study System: Caco-2 monolayers
Concentration (µM): 0.5, 1, 3, 10, 25, or 50 µM [14C]bosutinib; 5 µM [3H]digoxin (P-gp substrate);
100 µM verapamil (P-gp inhibitor)
Method of Analysis: LSC
Sampling Time: 2 hours
3
[ H]Digoxin
(μM)
5
Treatment
(μM)
Control
5
5
5
5
5
5
Bosutinib
0.5
1
3
10
25
50
Report No.:
-----Apparent Permeability Coefficient (Papp x 10-6 cm/sec)---(Mean ± SD)
AB
BA
0.60 ± 0.03
15.2 ± 1.08
0.74 ± 0.11
1.18 ± 0.39
1.02 ± 0.14
3.02 ± 0.26
4.61 ± 0.24
9.55 ± 1.66
14.9 ± 2.14
15.6 ± 0.93
14.9 ± 0.77
14.2 ± 0.98
12.6 ± 1.45
12.4 ± 3.77
RPT-71680
Ratio
BA/AB
25.3
Inhibitiona
(%)
20.2
13.2
14.6
4.7
2.7
1.3
20
48
42
81
89
95
Verapamil
5
100
11.3 ± 0.54
14.5 ± 1.01
1.3
95
AB = Apical to basolateral direction; BA = Basolateral to apical direction; LSC = Liquid scintillation counting; Papp = Apparent permeability coefficient;
P-gp = P-glycoprotein; RPT = Report; SD = Standard deviation.
a. % Inhibition = [1-(REi/REa)]x100, where REa and REi represent the efflux ratio of digoxin in the absence and presence of the putative inhibitor,
respectively.
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Page 55
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.2. Supportive Figures
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Page 56
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.2.1. Proposed Bosutinib Metabolites Present in Mouse, Rat, Dog, and Human Plasma
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Page 57
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.2.2. Proposed Bosutinib Metabolites Present in Mouse, Rat, Dog, and Human Excreta
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Page 58
Bosutinib
Module 2.6.5 Pharmacokinetics Tabulated Summary
2.6.5.2.3. Proposed Metabolic Pathways for Bosutinib In Vitro
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Page 59