GenomiPhi DNA Amplification Kit 簡易プロトコール

GenomiPhi DNA Amplification Kit
【 100 回反応用：コード番号 25-6600-01 】 【 500 回反応用：コード番号 25-6600-02 】
ゲノム DNA 増幅 簡易プロトコール
ゲノム DNA 1 ul （ 1 ng ）を Sample Buffer 9 ul に加えてサンプル溶液を調製する
ゲノム DNA
Sample Buffer
合計
1 ul （ 1 ng ）
9 ul
10 ul
サンプル溶液を 95℃で 3 分間インキュベートする
サンプル溶液を氷上におき、スピンダウンしてサンプルをチューブ底に集める
Reaction Buffer 9 ul と Enzyme Mix 1 ul
を混ぜた酵素反応溶液を調製する。#1
Reaction Buffer
Enzyme Mix
合計 9 ul
1 ul
10 ul
酵素反応溶液 10 ul とサンプル溶液 10 ul を混ぜる
サンプル溶液 10 ul
酵素反応溶液 10 ul
合計 20 ul
30℃で 18 時間 インキュベートする#2
65℃で 10 分間インキュベートし、酵素を失活させる#3
【 オプション 】 DNA 増幅の確認
アガロースゲル電気泳動
#4
#5
#6
PicoGreen （ Molecular Probes 社 ） 、分光光度計（ 要精製 ） を用いた定量
さまざまなアプリケーションに使用
#1 数本分まとめたマスターミックスとして調製することも可能です。用時調製してください。
#2 反応時間を 18 時間よりも短くすることはおすすめしません。
#3 Phi29 DNA Polymerase は Exonuclease 活性を有すため、反応後は速やかに 65℃10 分の失活処
理を行ってください。反応後の増幅 DNA は 4℃（ 長期保存は-20℃または-70℃ ）保存してくださ
い。
#4 1 ng 以下のゲノム DNA またはゲノム DNA を含まないサンプルから増幅反応を行った場合には、プ
ライマー由来の産物が非特異的に増幅されることがあります。
#5 GenomiPhi DNA Amplification Kit の英文マニュアルに記載の方法に従ってください。
#6 エタノール沈殿による精製をおすすめします。