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SUMO タグ発現システム ワクチンアジュバント DNA ワクチンアジュバント
ver. 2.2 SUMO タグ発現システム ワクチンアジュバント DNA ワクチンアジュバント DNA ワクチンプラスミド ポリ - リシンデンドリグラフト ワクチン研究関連 ELISA キット OVA 抗原 LifeSensors 社 SUMO タグ発現システム ワクチンとなる抗原を発現精製したときに、余計なアミノ酸が抗原に残っていると抗体作成における抗原として適切 ではありません。本システムでは、ユビキチン様タンパク質 SUMO をタグとして使用し、SUMO プロテアーゼで タグを切断します。同プロテアーゼは SUMO の立体構造を認識するためリンカーを必要としません。 * ご注意：目的タンパク質の N 末端側にプロリンを持つタンパク質の場合、SUMO プロテアーゼを使用することができません。 ● ネイティブなタンパク質（タグ無し）が得られる ● SUMO プロテアーゼは立体構造を認識するので、正確かつ迅速 ● 可溶化を促進 ■ 抗原作製例 rPA の発現・精製 1. マーカー 2. IMAC（一回目）溶出 3. HIC 添加サンプル（2 と同じ） 4. HIC 溶出 5. SUMO プロテアーゼ処理 6. IMAC（二回目） 添加サンプル 7. IMAC（二回目）フロースルー 8. IMAC（二回目）溶出 9. Blank 10. IMAC（二回目）フロースルー× 2 タグの無い抗原 rPA が得られた （レーン 7、10） ■ SUMO タグの性能 タグ切断プロテアーゼの切断が正確 SUMO タグ融合タンパク質のタグを切断するプロテアーゼ（SUMO プロテアーゼ）は、SUMO の立体構造を認識し切断します。従って、 N 末端側に不要なアミノ酸が残らずネイティブなタンパク質の作製が可能です。また目的タンパク質の内部配列が切断される心配は ありません。一般的に使用されるプロテアーゼが非特異的消化をするのに対し、SUMO プロテアーゼは正確であることが報告されています （下記文献参照）。 Lee, C.D. . An improved SUMO fusion protein system for effective production of native proteins. 17(7), 1241-8 (2008). ■ SUMO プロテアーゼの特長 * ベクター番号 7（次ページ参照）は、His タグの上流側に DYKDDDDK タグがあります。 ■ 性能比較例 SUMO タグを用いた可溶性タンパク質の発現 SUMO はフォールディングしやすい性質を持ち、SUMO の性質により目的タンパク質もともに正確な立体構造を形成することで、 可溶性タンパク質の発現を促進すると考えられています。 ■ 各種タグ融合タンパク質との可溶性発現の比較 LB 培地で大腸菌を培養後、ペレットを回収し緩衝液を添加しソニケーション処理を行ったサンプル （UN：IPTG 非誘導および IN：IPTG 誘導）、ソニケーション後に遠心した上清（S：可溶性画分）とペレット （IB：不溶性画分）を電気泳動し CBB 染色を行った。結果として、 他のタグ融合タンパク質と比較し、SUMO タグタンパク質が、可溶性画分に高効率で発現していることが示されています。 使用したタグ：His6, Ub(ubiquitin), SUMO, MBP(maltose binding protein), GST(glutathione S-transferase), TRX(Thioredoxin), NUSA 2 ワクチン研究 http://www.nacalai.co.jp ■ 製品ラインアップ 1. 発現系 本発現システムでは、以下の発現系に適合する発現ベクターおよびキットを販売しています。また、SUMO タグの種類は、3 種類用意 （使い分けは、2.SUMO タグの種類をご参照ください） されており、それぞれのタグに応じた適切なプロテアーゼが用意されています。 発現の宿主 選択マーカー プロモーター 大腸菌 宿主 Amp Kan 酵母（ ） 酵母（ Amp T7 大腸菌 ） 昆虫細胞 哺乳類細胞 Kan AOX1 SUMO タグの 種類 *2 SUMO Protease 1 hSUMO3 SUMO Protease 2 価格表 対応番号 *1 1 2 3 4 Amp 5 Kan 6 CUP1 + Trp - Amp CMV SUMO プロテアーゼの 種類 *3 SUMO Zeocin™ Polh 分泌 シグナル SUMOstar + 7 SUMOstar Protease 1 8 9 10 Neomycin + 11 12 *1：価格表に対応するようにベクターを番号付けしています。ベクターの詳細は、下記の " 発現ベクターマップ " をご参照ください。 *2：SUMO タグの種類の詳細は、下記の "2. SUMO タグの種類 " をご参照ください。 *3：SUMO プロテアーゼの種類については、下記の "3. SUMO プロテアーゼの種類 " をご参照ください。 2. SUMO タグの種類 SUMO タグは以下の 3 種類用意されており、発現系や目的タンパク質の性質により、使い分けしてください。本タンパク質の N 末端には His タグが付加されており、切断後の SUMO タグの除去が簡単に行えます。 SUMO タグの種類 由来 使い分け SUMO 酵母 ・大腸菌発現システムのみ適応 hSUMO3 ヒト ・目的タンパク質の N 末端に疎水性アミノ酸を多く含む場合に推奨 SUMOstar 遺伝子改変 SUMO ・内在性（真核生物）のプロテアーゼによる切断を回避 3. SUMO プロテアーゼの種類 LifeSensors 社では、切断する SUMO タグに応じて、3 種類の SUMO プロテアーゼを用意しています。各プロテアーゼは、非常に高効率で SUMO タグ融合タンパク質から SUMO タグを正確に切断します。また、N 末端側には His タグが付加されており、切断に使用した プロテアーゼの除去が簡単に行えます。 プロテアーゼ 切断する SUMO タグ SUMO Protease 1 SUMO SUMO Protease 2 hSUMO3 SUMOstar Protease 1 SUMOstar 活性の定義 至適 pH/ 至適温度 各 製 品 は、 基 質 と な る 各 SUMO タ グ-GFP タンパク質を 37℃、1 時間の条件下、1unit で 90μg 以上切断します。 至適 pH：5.5-9.5 至適温度：30℃ * 純度：95% 以上 / 形態：溶液 / 比活性：1×105U/mg 以上 * 本酵素は上記至適条件以外に様々な pH、塩濃度、低温条件 （4℃） 下でも切断可能です。詳細は以下の文献をご参照ください。 5, 75-86 (2004). ■ ベクターマップ 例）大腸菌発現ベクター ベクターは、特定の制限酵素により処理する必要があります。 大腸菌発現ベクターの場合、 Ⅰによる処理が必要です。 本制限酵素処理により、ACCT の粘着末端と Ⅰで消化した 場合に形成される粘着末端と同じ CTAG の粘着末端が形成 されます。この Ⅰによる処理後に、必要に応じて Ⅰ、 Ⅰ、 dⅢなどの制限酵素サイトを利用することも可能です。 その他の発現ベクターのマップ等の詳細な情報はメーカー Web site（http://www.lifesensors.com/product-expressionsystems.php）でご確認ください。 http://www.nacalai.co.jp ワクチン研究 3 使用方法 リンカー配列は不要で、目的の 配列を付属のベクターにクロー ニング後、ターゲットタンパク 質を発現。 高発現するターゲットタン パク質をNi-カラムにて精製。 カラムから溶出させたター ゲットタンパク質をSUMO プロテアーゼで切断。 切断後のサンプルを再 度、Ni-カ ラ ム に 添 加。 プロテアーゼと SUMO タグは、His タグにより 吸着、ターゲットタン パク質のみ溶出。 ■ 実施例 ① 昆虫細胞発現系での可溶化タンパク質の高発現 分泌タンパク質における SUMOstar の効果を試験するために、分泌シグナル gp67 を持つ tryptase と SUMOstartryptase 発現用バキュロウイルスを Sf9 昆虫細胞に感染させた。培地を回収し SDS-PAGE を行った後、CBB 染色に より検出した。これらのデータから、SUMOstar タグは分泌型の tryptase の発現を促進することが示されました。 ■ 実施例 ② 哺乳類細胞発現系での使用例 図左）分泌型の哺乳類細胞発現系により、GzmB （Granzyme B）を発現させた後、培地を回収し、電気泳動後、GzmB に対する抗体を 用いて検出しました。その結果、SUMO タグを付加した場合、6xHis タグのみの場合と比較し、GzmB の発現が促進されていることが 示されています。 サンプル：各サンプルを 2 レーンずつ泳動 図右）分泌型の哺乳類細胞発現系により、マウス由来の PLA2 を発現させた後、培地を回収し、電気泳動後、His タグ抗体を用いて検出 しました。その結果、SUMOstar タグを付加した場合、6xHis タグのみの場合と比較し、発現が促進されていることが示されています。 ■ キット内容 LifeSensors 社では、発現ベクター、SUMO プロテアーゼ、SUMO タグ抗体などを一纏めにしたキットを販売しています。 ・発現ベクター ・SUMO プロテアーゼ ・SUMO タグ抗体 ・コントロールタンパク質（SUMO-GFP） 4 ワクチン研究 http://www.nacalai.co.jp 発現系 製品名 ベクター対応番号 *1 メーカー製品番号 1 1000A 1 kit 122,600 122,600 容量 価格 キット SUMOpro Protein and Peptide Expression Kit (Amp) 大腸菌 酵母 昆虫細胞 哺乳類細胞 SUMOpro Protein and Peptide Expression Kit (Kan) 2 1000K 1 kit SUMOpro-3 Protein and Peptide Expression Kit (Amp) 3 1010A 1 kit 141,000 SUMOpro-3 Protein and Peptide Expression Kit (Kan) 4 1010K 1 kit 141,000 SUMOstar Protein and Peptide Expression Kit (Amp) 5 1100A 1 kit 141,000 SUMOstar Protein and Peptide Expression Kit (Kan) 6 1100K 1 kit 141,000 Pichia Secretory SUMOstar Expression Kit 7 2160 1 kit 146,300 Saccharomyces Intracellular SUMOstar Expression Kit 8 2100 1 kit 141,000 Insect Secretory SUMOstar Expression Kit 9 3105 1 kit 141,000 Insect Intracellular SUMOstar Expression Kit 10 3100 1 kit 141,000 Mammalian Secretory SUMOstar Expression Kit 11 7120 1 kit 141,000 Mammalian Intracellular SUMOstar Expression Kit 12 7110 1 kit 141,000 pE-SUMOpro Vector ( ) Amp 1 1001A 20 μg 45,500 pE-SUMOpro Vector ( ) Kan 2 1001K 20 μg 45,500 3 1016 20 μg 52,300 4 1011 20 μg 52,300 5 1106 20 μg 52,300 ベクター単品 大腸菌 酵母 昆虫細胞 哺乳類細胞 pE-SUMOpro-3 Vector ( pE-SUMOpro-3 Vector ( ) Amp ) Kan pE-SUMOstar Vector ( ) Amp pE-SUMOstar Vector ( ) Kan pY-secSUMOstar Vector ( pY-SUMOstar Vector ( ) ) 6 1101 20 μg 52,300 7 2161 20 μg 54,300 8 2101 20 μg 52,300 pI-secSUMOstar Vector (Insect-Secretory) 9 3106 20 μg 52,300 pI-SUMOstar Vector (Insect-Intracellular) 10 3101 20 μg 52,300 pM-secSUMOstar (Mammalian-Secretory) 11 7121 20 μg 52,300 pM-SUMOstar (Mammalian-Intracellular) 12 7111 20 μg 52,300 製品名 切断タグ メーカー製品番号 容量 価格 250 units 28,000 SUMO プロテアーゼ単品 SUMO Protease 1 SUMO SUMO Protease 2 hSUMO3 SUMOstar Protease 1 SUMOstar 製品名 4010 4020 4110 メーカー製品番号 500 units 55,200 1000 units 101,600 5000 units ご照会 250 units 32,200 500 units 63,500 1000 units 116,800 5000 units ご照会 250 units 32,200 500 units 63,500 1000 units 116,800 5000 units ご照会 容量 価格 SUMO プロテアーゼ用ポジティブコントロール単品 SUMO Protease 2 control protein 5004 100 μg 30,000 SUMO Protease 1 control protein 5000 100 μg 30,000 SUMOstar Protease control protein 5010 100 μg 30,000 Anti-hSUMO3 antibody AB7030 50 μg 40,000 Anti-SUMO/SUMOstar antibody AB7002 50 μg 40,000 SUMO 抗体単品 * 価格表に掲載のベクターの詳細は、3 ページに掲載の製品ラインアップ 1. 発現系をご参照ください。 < 商標について > SUMOpro®、SUMOpro-3® は、LifeSensors の登録商標です。SUMOstar™ は、LifeSensors の商標です。 http://www.nacalai.co.jp ワクチン研究 5 InvivoGen 社 ワクチンアジュバント InvivoGen 社では、徹底した無菌条件下で製造し、エンドトキシン試験済みの VacciGrade™ アジュバントを販売 しています。本グレードの製品ではヒトワクチンで利用されている Alum や、アジュバントとして期待されている （後述の各リガンドの文献を参照ください）自然免疫受容体リガンドなどをラインアップしています。 ● 徹底した無菌条件下で製造 ● エンドトキシン試験済み ■ Alum およびエマルジョンアジュバント 製品名 概要 使用比率または 作用濃度 エンドトキシン レベル メーカー 製品番号 容量 価格 Th2 1：1 （AddaVax™：抗原） <5EU/ml vac-adx-10 10 ml 29,000 Th2 1：9-1：1 （Alhydrogel：抗原） - vac-alu-250 250 ml 48,000 Th1 1：1 （CFA：抗原） <1EU/ml vac-cfa-10 10 ml 16,000 vac-cfa-60 6×10 ml 31,000 Th2 1：1 （IFA：抗原） vac-ifa-10 10 ml 13,000 vac-ifa-60 6×10 ml 25,000 スクアラン 水中油型 AddaVax™ Alhydrogel 2% Th 応答 水酸化アルミニウムゲル （Alum） CFA 完全フロイントアジュバント 油中水型 IFA 不完全フロイントアジュバント 油中水型 <1EU/ml ■ 自然免疫受容体リガンド 製品名 文献 概要 Th 応答 作用量 エンドトキシン レベル メーカー 製品番号 容量 価格 c-di-AMP VacciGrade™ 1, 2, 3 細胞質内 DNA センサーアゴニスト Th1/Th2 5-50μg/mouse <0.005EU/μg vac-cda 1 mg 83,000 c-di-GMP VacciGrade™ 1, 2, 3, 4 細胞質内 DNA センサーアゴニスト Th1/Th2 5-50μg/mouse <0.005EU/μg vac-cdg 1 mg 83,000 Flagellin VacciGrade™ 5, 6 TLR5 アゴニスト 由来のリコンビナント Th1/Th2 フラジェリン 1-10μg/mouse <0.005EU/μg vac-fla 50 μg 507,000 Gardiquimod VacciGrade™ 7 TLR7 アゴニスト イミダゾキノリン化合物 Th1 10-100μg/mouse <0.005EU/μg vac-gdq 5 mg 135,000 Imiquimod VacciGrade™ 8 TLR7 アゴニスト イミダゾキノリン化合物 Th1 10-100μg/mouse <0.005EU/μg vac-imq 5 mg 85,000 MPLA-SM VacciGrade™ 9, 10, 11 Th1 2-20μg/mouse - vac-mpla 1 mg 89,000 MPLA Synthetic VacciGrade™ 9, 10, 11 TLR4 アゴニスト 合成モノホスホリルリピド A Th1 2-20μg/mouse - vac-mpls 1 mg 102,000 N-Glycolyl-MDP VacciGrade™ 12 NOD2 アゴニスト N- グリコリル化ムラミルジペプチド Th1 5-30μg/mouse <0.001EU/μg vac-gmdp 5 mg 85,000 Th1 20-50μg/mouse <0.001EU/μg vac-1585-1 1 mg 286,000 Th1 20-50μg/mouse <0.001EU/μg vac-1826-1 1 mg 312,000 Th1 20-50μg/mouse <0.002EU/μg vac-2006-1 1 mg 312,000 Th1 20-50μg/mouse <0.001EU/μg vac-2395-1 1 mg 248,000 TLR4 アゴニスト TLR9 アゴニスト ODN 1585 VacciGrade™ 13, 14, 15 CpG オリゴデオキシヌクレオチド ODN 1826 VacciGrade™ 16, 17, 18 CpG オリゴデオキシヌクレオチド ODN 2006 VacciGrade™ 16, 17, 19 CpG オリゴデオキシヌクレオチド ODN 2395 VacciGrade™ 6 mutant R595 由来モノ ホスホリルリピド A A型 （マウス） TLR9 アゴニスト B型 （マウス） TLR9 アゴニスト B型 （マウス） 20, 21 ワクチン研究 TLR9 アゴニスト CpG オリゴデオキシヌクレオチド C型 （ヒト / マウス） http://www.nacalai.co.jp 文献 概要 Th 応答 作用量 エンドトキシン レベル メーカー 製品番号 容量 価格 Pam3CSK4 VacciGrade™ 22, 23 TLR1/2 アゴニスト 合成トリアシル化リポタンパク質 Th1 2-20μg/mouse <0.001EU/μg vac-pms 1 mg 78,000 Poly(I:C)(HMW) VacciGrade™ 17, 18 TLR3 アゴニスト ポリイノシンポリシチジン酸 Th1 10-100μg/mouse <0.001EU/μg vac-pic 10 mg 78,000 TLR7/8 アゴニスト イミダゾキノリン化合物 Th1 10-100μg/mouse <0.001EU/μg vac-r848 5 mg 227,000 Mincle アゴニスト コード因子の合成アナログ Th1 1-100μg/mouse <5EU/ml vac-tdb 2 mg 98,000 Th1 1-100μg/mouse <5EU/ml vac-stdb 2 mg 101,000 製品名 R848 VacciGrade™ 24 TDB VacciGrade™ 25, 26, 27 TDB-HS15 VacciGrade™ 25, 26, 27 HS15 配合のコード因子のアナログ 1. Ebensen T. . Bis-(3',5')-cyclic dimeric adenosine monophosphate: strong Th1/Th2/Th17 promoting mucosal adjuvant. 29(32), 5210-20 (2011). 2. Burdette DL. . STING is a direct innate immune sensor of cyclic di-GMP. 478 (7370), 515-8 (2010). 3. Karaolis DK. . Bacterial c-di-GMP is an immunostimulatory molecule. . 1786, 2171-81 (2007). 4. Madhun AS. . Intranasal c-di-GMP-adjuvanted plant-derived H5 influenza vaccine induces multifunctional Th1 CD4+ cells and strong mucosal and systemic antibody responses in mice. 29(31), 4973-82 (2011). 5. Mbow ML. . New adjuvants for human vaccines. 22(3), 411-6 (2010). 6. Skountzou I. . Salmonella flagellins are potent adjuvants for intranasally administered whole inactivated influenza vaccine. 28(4), 4103-12 (2010). 7. Ma F. . The TLR7 agonists imiquimod and gardiquimod improve DC-based immunotherapy for melanoma in mice. 7, 381-388 (2010). 8. Triozzi PL. . Regulation of the activity of an adeno-associated virus vector cancer vaccine administered with synthetic Toll-like receptor agonists. 28(50), 7837-43 (2010). . TLR4 Ligands Augment Antigen-Specific CD8+ T Lymphocyte Responses Elicited by a Viral Vaccine Vector. 84, 104139. Rhee eG. 10419 (2010). 10. Didierlaurent A. . AS04, an aluminum salt- and TLR4 agonist-based adjuvant system, induces a transient localized innate immune response leading to enhanced adaptive immunity. 183(10), 6186-97 (2009). 11. Casella CR. . Putting endotoxin to work for us: monophosphoryl lipid A as a safe and effective vaccine adjuvant. 65(20), 3231-40 (2008). 12. Coulombe F. . Increased NOD2-mediated recognition of N-glycolyl muramyl dipeptide. 206(8), 1709-16 (2009). 13. Marshall JD. . Superior activity of the type C class of ISS and across multiple species. . 24(2), 63-72 (2005). 14. Bauer, S. . Human TLR9 confers responsiveness to bacterial DNA via species-specific CpG motif recognition. . 98(16), 9237-42 (2001). 15. Ballas ZK. . Divergent therapeutic and immunologic effects of oligodeoxynucleotides with distinct CpG motifs. . 167(9), 487886 (2001). 16. Steinhagen F. . TLR-based immune adjuvants. 29(17), 3341-55 (2011). 17. Coffman RL. . Vaccine adjuvants: Putting innate immunity to work. 33(4), 492-503 (2010). 18. Longhi MP. . Dendritic cells require a systemic type I interferon response to mature and induce CD4+Th1 immunity with poly IC as adjuvant. . 206, 1589-602 (2009). 19. conforti VA. . The effectiveness of a CpG motif-based adjuvant (CpG ODN 2006) for LHRH immunization. 25, 6537-43 (2007). 20. Fransen F. . Agonists of Toll-like receptors 3, 4, 7, and 9 are candidates for use as adjuvants in an outer membrane vaccine against Neisseria meningitidis serogroup . 75(12), 5939-46 (2007). . Characterization of three CpG oligodeoxynucleotide classes with distinct immunostimulatory activities. 34(1), 21. Vollmer J. 251-62 (2004). 22. Caproni E. . MF59 and Pam3CSK4 Boost Adaptive Responses to Influenza Subunit Vaccine through an IFN Type I-Independent Mechanism of Action. . (2012). [Epub ahead of print] 23. Jayakumar A. . TLR1/2 activation during heterologous prime-boost vaccination (DNA-MVA) enhances CD8+ T Cell responses providing protection against Leishmania (Viannia). 5(6), e1204 (2011). 24. Baldwin sL. . Intradermal immunization improves protective efficacy of a novel TB vaccine candidate. 27, 3063-3071 (2009). 25. Christensen D. . Cationic liposomes as vaccine adjuvants. . 10(4), 513-21 (2011). 26. Schoenen H, . Cutting edge: Mincle is essential for recognition and adjuvanticity of the mycobacterial cord factor and its synthetic analog trehalose-dibehenate. 184(6), 2756-60 (2010). 27. Agger EM. . Cationic liposomes formulated with synthetic mycobacterial cordfactor (CAF01): a versatile adjuvant for vaccines with different immunological requirements. . 3(9), e3116 (2008). http://www.nacalai.co.jp ワクチン研究 7 InvivoGen 社 DNA ワクチンアジュバント ■ pBOOST DNA ワクチンアジュバントの輸送方法は、Th1 応答または Th2 応答にバイアスをかけることが知られています。 このバイアスは、インターフェロン制御因子（IRF） や TANK-binding kinase 1 （TBK1）を同時に輸送することによって 更に増強されます。本製品はこれら遺伝子をコードしており、これによってワクチン効率を高めることが可能と なります。 ■ プラスミドマップ ■ 製品説明 pBOOST2 ● 野生型 IRF-1 IRF-1 は主に Th2 抗体産生応答を増強します *1。筋肉注射または遺伝子銃による DNA ワクチンの接種の後、IRF-1 は抗体価を最大で 10 倍増強します。 ● 変異型 IRF-3 IRF-3 は主に Th1 T 細胞応答を増強します。Ser396 を Asp に置換するポイントミューテーションを導入することで常時活性型である IRF-3 を作製しました。この超活性型 IRF-3 は野生型よりも 10 倍以上、IFN-αおよび IFN-βプロモーターを活性化します *2。 ● キメラ IRF7/3 IRF-3 および IRF-7 は異なる標的プロモーターを活性化することで Th1 および Th2 応答の双方を増強します *1。 双方の IRF の生物学的 特長を利用するために、IRF-7 の DNA への結合特異性と超活性型 IRF-3 の強力な転写活性化能を合わせた IRF-7/3 キメラは超活性型 IRF-3 のみの場合と比較し、10 倍以上強力に IFN-αをよび IFN-βプロモーターを活性化します *3。 *1 Sasaki S. . Regulation of DNA-raised immune responses by cotransfected interferon regulatory factors. *2 Servant MJ. . Identification of the minimal phosphoacceptor site required for in response to virus and double-stranded RNA. 278(11), 9441-7 (2003). *3 Bramson JL. 76(13), 6652-9 (2002). activation of interferon regulatory factor 3 . Super-activated interferon-regulatory factors can enhance plasmid immunization. 21(13-14), 1363-70 (2003). ■ 製品説明 pBOOST3 pBOOST3-mTBK1 プラスミドはマウス TBK1 遺伝子を発現します。非古典的な IκB キナーゼである TANK-binding kinase 1 （TBK1）が、 DNA ワクチンのアジュバント効果に関与していることが分かりました *4。DNA ワクチンが投与されると、CpG 非依存的で TBK-1 依存的に I 型インターフェロンや炎症性サイトカインが誘導されます。このことから、TBK-1 を発現するプラスミドと共に投与することで、 DNA ワクチンにより誘導される免疫原性を増強することが期待されます。 *4 Ishii KJ. . TANK-binding kinase-1 delineates innate and adaptive immune responses to DNA vaccines. 製品名 8 コード遺伝子 メーカー製品番号 451, 725-729 (2008). 容量 価格 pBOOST2-wtmIRF1 野生型 マウス IRF1 pbst2-wtmirf1 20 μg 98,000 pBOOST2-wthIRF1 野生型 ヒト IRF1 pbst2-wthirf1 20 μg 98,000 pBOOST2-samIRF3 変異型 マウス IRF3 pbst2-samirf3 20 μg 103,000 pBOOST2-sahIRF3 変異型 ヒト IRF3 pbst2-sahirf3 20 μg 103,000 pBOOST2-samIRF7/3 キメラ マウス IRF7/3 pbst2-samirf73 20 μg 108,000 pBOOST2-sahIRF7/3 キメラ ヒト IRF7/3 pbst2-sahirf73 20 μg 108,000 pBOOST3-mTBK1 マウス TBK1 pbst3-mtbk1 20 μg 98,000 pBOOST2-mcs マルチクローニングサイト（コントロール） pbst2-mcs 20 μg 66,000 pBOOST2-LacZ LacZ pbst2-lacz 20 μg 98,000 pBOOST3-mcs マルチクローニングサイト（コントロール） pbst3-mcs 20 μg 66,000 ワクチン研究 http://www.nacalai.co.jp InvivoGen 社 DNA ワクチンプラスミド ■ pVAC 目的抗原に対する中和抗体の誘導に pVAC は筋肉注射により液性免疫を刺激するために設計された DNA ワクチンプラスミドです。目的抗原タンパク質は、 pVAC にコードされている膜貫通アンカードメイン（ヒト胎盤アルカリホスファターゼ由来）の上流へクローニング することで細胞表面に固定されます。筋肉細胞表面上に産生された抗原ペプチドは抗原提示細胞 （APC）によって 取り込まれ、主要組織適合複合体（MHC）クラスⅡ経路を介して処理されると考えられています。 ■ プラスミドマップ ■ 製品説明 ● 高レベルの抗原遺伝子発現 pVAC プラスミドは骨格筋細胞および抗原提示細胞において高レベルで発現させるためにアカゲザル EF1α 遺伝子の プロモーター部位を用いています。発現レベルは SV40 エンハンサーを付加することでさらに増強されています。SV40 エンハンサーの付加は、特に分裂しない細胞においてプラスミドの核内移行を促進します。 ● 抗原遺伝子の持続的な発現 pVAC を大腸菌内で複製およびセレクションするために必要とされる細菌由来の遺伝子領域は、最小化した複製起点 （Ori）を使用し、CpG-free Zeocin™ 耐性遺伝子 （ Δ ） を用いることで免疫原性の CpG モチーフを減少させています。 ● 抗原遺伝子の簡便なクローニング pVAC には複数の汎用的な制限酵素サイトを持つマルチクローニングサイト （MCS）が存在します。 1. Corr M. . In vivo priming by DNA injection occurs predominantly by antigen transfer. 163(9), 4721-7 (1999). 2. Forns X. . DNA immunization of mice and macaques with plasmids encoding hepatitis C virus envelope E2 protein expressed intracellularly and on the cell surface. 17, 1992-2002 (1999). 3. McCluskie MJ . Route and method of delivery of DNA vaccine influence immune responses in mice and non-human primates. 5, 287-300 (1999). 分泌シグナル（IL2） メーカー製品番号 容量 価格 pVAC1-mcs 製品名 有り pvac1 20 μg 95,000 pVAC2-mcs 無し pvac2 20 μg 95,000 http://www.nacalai.co.jp ワクチン研究 9 COLCOM 社 ポリ - リシンデンドリグラフト ■ ポリ -リシンデンドリグラフト 抗体作製にも利用可能 本製品は COLCOM 社 （フランス）の製品であり、様々な用途にご利用いただけます。 ● 生体成分（リシン）100% なのでバイオコンパチブル ● 水に易溶で熱に安定 ● 表面に多数の NH2 基があり表面修飾が容易 ■ 製品仕様 製品ラインアップとして世代２ （G1） ∼世代 5 （G5）のデンドリグラフトと世代 1 （G1） の PLL をご用意しています。 世代 G1 G2 G3 G4 G5 172,300 分子量 1,450 8,600 22,000 65,300 直径 -pH7（nm） 2 4.5 7 11 16 リシン数 8 48 123 365 963 ■ 実施例 抗体作製 デンドリグラフトにハプテンを連結し、ウサギで免疫を実施。デンドリグラフト自体は 低免疫原性であることを確認 （→ワクチンとしても効果的） Romestand, B production. 製品名 . Dendrigraft poly-L-lysine: a non-immunogenic synthetic carrier for antibody 11(5), 1169-73 (2010). メーカー製品番号 製品番号 容量 価格 Dendri-Grafted Poly- -Lysine G2 Amino Surface DGL-G2-AS Dendri-Grafted Poly- -Lysine G3 Amino Surface DGL-G3-AS 53159-94 100 mg 50,000 53160-54 100 mg Dendri-Grafted Poly- -Lysine G4 Amino Surface 59,000 DGL-G4-AS 53161-44 100 mg 68,000 Dendri-Grafted Poly- -Lysine G5 Amino Surface DGL-G5-AS 53162-34 100 mg 78,000 Poly- -Lysines, NH2 G1 PLL-NH2-G1 53158-04 100 mg 40,000 ■ ポリ -リシン ポリ -リシンデンドリグラフトを販売している Colcom 社では、リシン鎖長ごとに精製する技術の開発により、 高品質なポリ -リシンの製造が可能となりました。DDS の開発や、中間体等としてご利用ください。 製品名 10 メーカー製品番号 容量 価格 Poly- -Lysines, K6 （Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys） PLL-K6 10 mg 48,000 Poly- -Lysines, K7 （Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys） PLL-K7 10 mg 54,000 Poly- -Lysines, K8 （Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys） PLL-K8 10 mg 61,000 Poly- -Lysines, K9 （Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys） PLL-K9 10 mg 69,000 ワクチン研究 http://www.nacalai.co.jp Alpha Diagnostic International 社 ワクチン研究関連 ELISA キット Alpha Diagnostic International 社では、ワクチン研究関連の ELISA キットを豊富に取り扱っています。ワクチン モデル抗原、KLH ワクチン、ODN ワクチンアジュバント関連の ELISA キットの中から一部の製品を紹介します。 ■ 実施例 Mouse Anti-Ovalbumin IgM ELISA kit（#600-170-OGM）を用いた力価測定 Titer Values mc154=1.72kU mc155=5.70kU mc157=1.85kU mc158=7.90kU 測定対象 動物種 測定対象の抗体のクラス メーカー製品番号 容量 価格 IgG, IgA, IgM 600-100-OGG 1 kit 164,000 IgG1 600-110-OG1 1 kit 164,000 ワクチンモデル抗原（Ovalbumin、DNP）関連 ELISA キット IgG2a 600-120-O2A 1 kit 164,000 IgG2b 600-130-O2B 1 kit 164,000 IgG3 600-140-OG3 1 kit 164,000 IgM 600-170-OGM 1 kit 164,000 IgE 600-165-OGE 1 kit 164,000 IgG, IgA, IgM 610-100-OGG 1 kit 149,000 IgM 610-120-OGM 1 kit 143,000 IgE 610-110-OGE 1 kit 143,000 IgG, IgA, IgM 640-210-DGG 1 kit 149,000 IgM 640-220-DGM 1 kit 149,000 IgE 640-200-DGE 1 kit 149,000 IgG 650-110-DGG 1 kit 149,000 IgM 650-120-DGM 1 kit 179,000 IgE 650-100-DGE 1 kit 179,000 マウス 700-130-KLM 1 kit 327,000 ウサギ 700-110-KLR 1 kit 327,000 700-100-KLG 1 kit 327,000 700-120-KLC 1 kit 327,000 IgG 5120 1 kit 149,000 IgM 5130 1 kit 149,000 149,000 マウス Anti-Ovalbumin ラット マウス Anti-Dinitrophenol（DNP） ラット Keyhole Limpet Hemocyanin（KLH） ワクチン関連 ELISA キット Anti-KLH ヤギ IgG ニワトリ ODN ワクチンアジュバント関連 ELISA キット マウス Anti-dsDNA IgG, IgA, IgM ラット ヒト Anti-ssDNA マウス ラット IgG 5110 1 kit 650-130-DDN 1 kit 357,000 3100 1 kit 128,000 IgG 5320 1 kit 149,000 IgG, IgA, IgM 5310 1 kit 149,000 IgG 650-330-DSN 1 kit 357,000 他にも様々なワクチン研究関連の ELISA キットや関連製品を販売しています。 詳細は Alpha Diagnostic International 社 Web site（http://www.4adi.com/） をご参照ください。 http://www.nacalai.co.jp ワクチン研究 11 InvivoGen 社 OVA 抗原 オボアルブミン（OVA） は、免疫の際に基準となるタンパク質です。市販されているオボアルブミンは、 での 結果の信憑性に影響を与えるエンドトキシンがしばしば混入しています。本製品は低エンドトキシンレベルを保証 しており、抗原スタンダードとして最適です。 製品名 EndoFit™ Ovalbumin 詳細 メーカー製品番号 容量 価格 エンドトキシンレベル <1EU/mg タンパク質 98% 以上 vac-efova 10 mg 36,000 ■ 関連製品 製品名 詳細 メーカー製品番号 容量 価格 Ovalbumin 検出用（ウェスタンブロッティング、ELISA） タンパク質 98% 以上 vac-ova 1g 14,000 OVA 257-264 クラスⅠエピトープ、検出用 （ELISPOT） 配列：SIINFEKL（分子量：963.2） vac-sin 1 mg 19,000 OVA 323-339 クラスⅡエピトープ、検出用 （ELISPOT） 配列：ISQAVHAAHAEINEAGR（分子量：1773.9） vac-isq 1 mg 26,000 ※記載の内容は、'14 年 1 月現在の情報に基づいております。 ※価格に消費税は含まれておりません。 1401T