上＊澤江義郎

一 23 一一
間接蛍光抗体法による抗平滑筋抗体，
抗ミトコンドリア抗体の検索
山 田
上＊澤江義郎＊
Detection of Anti−Smooth Muscle Antibody and
Anti一一Mitochondrial Antibody by lndirect lmmuno−
fluorescence Method
Iwao Yamada and Yoshiro Sawae
まえがき
ついてはA型肝炎ウィルスに対する抗体検査を
近年，多くの疾患で自己抗体の存在が指摘さ
行い判定した。肝疾患以外のものは26例（26
れ，その臨床的意義づけもそれぞれの自己抗体
検体）で，全身性エリテマトーデス（SLE）6例
について次第に確立されてきている。
（6検体），慢性関節リウマチ3例（3検体），
肝疾患における自己抗体としては，抗平滑筋
呼吸器系疾患2例（2検体）であった。そのほ
抗体（ASMA）と抗ミトコンドリア抗体（AMA）
かに健常人コントロールとして，本学の学生よ
の存在が知られており，すでに鑑別診断や予後
り得た15例（15検体）の血清を用いた。
の判定などに利用されはじめている8＞！o）。
検出方法としては間接蛍光抗体法，補体結合
実験方法
反応，二重免疫拡散法などが知られているが，
ASMA， AMAの検査＝Bio Dx社のSMA
今回，著者らは間接蛍光抗体法を用いて，ASMA
テストとMAテスト試薬を用いた。すなわち，
とAMAの検出を試み，肝疾患における臨床的
基質としてSMAテストではラット胃組織切片
意義について検討したので報告する。
を，MAテストではラット腎組織切片を用いた
間接蛍光抗体法によりASMAおよびAMAを
実験対象
定量的に測定した。被検血清の10倍希釈液でス
実験に供した患者血清は52例の81検体であ
クリーニングを行ったのち，陽性を示したもの
った。乙れらの症例は治療継続中の肝疾患が26
については倍数希釈列をつくり抗体価を測定し
例（55検体）で，急性肝炎4例（9検体），慢
た。
性肝炎17例（36検体），肝硬変症5例（10検
抗核抗体（ANF）の検査：KW社のLE蛍光ス
体）であった。なお，肝炎の活動性，非活動性
ライドキットを用い，被検血清の10倍希釈液で
の判定は生検と肝機能検査成績の推移により行
スクリーニングを行い，陽性のものについては
ったが，一部の症例については肝機能検査成績
倍数希釈列をつくり抗体価を測定した。
のみにより行った。B型と非B型の判定はHB
血中免疫複合体（IC）の検査：Digeonら3）
抗原，抗体の血清学的検査により，急性肝炎に
の比色法に準じた。すなわち，被検血清に分子
量6， OOOのポリエチレングリコール溶液を加え，
＊九州大学医療技術短期大学部衛生技術学科
沈殿したタンパクを0，1NのNaOH 5 m1に溶解
一 24 一
間接蛍光抗体法による抗平滑筋抗体，抗ミトコンドリア抗体の検索
し，280nmの吸光度を測定した。なお，健康
2）疾患別ASMAとAMAの陽性率
人15例の平均値は0．02で，2標準編差値を加
表1に示したように，ASMAは急性肝炎の
えた0．03以下を正常値として評価した。
4例ではB型と非A非B型それぞれ1例ずつ陽
血清トランスアミナーゼ値の測定＝Reitman
性で，陽性率は50％であった。慢性肝炎では17
一・Frankel法1のに基づき，日本消化器病学会肝
例中11例（64．7丁目が陽性で，とくにB型と
機能研究斑が定めた標準操作法12）によるS．TA
非B型の活動性肝炎で100％の陽性率であった。
一 Test（和光純薬）試薬を用いて， GOT，GPT
また，非活動性肝炎ではB型66，7％，非B型50
の酵素活性を測定した。
％で，両者を合わせたものでは57．1％で，肝硬
成 績
変症ではB型50％，非B型33．3％で，両者の
平均では40％のものが陽性であった。
1）ASMA価とAMA価の分布
図1に示すように，ASMAが10倍希釈血清
で陽性のものは52例中15例（28．8％）で，す
表1 疾患別ASMAとAMAの陽性率
例数
疾 患
ASMA
べて肝疾患であり，肝疾患26例中の57．7％に
認められた。この15例中の8例（53．3％）で
B型急性肝炎 非A非B型
22
2618
160
e
80
e
100
50．0
U6．7
O00
P00
@ 活動性 非B型 非活動性
ASMA
抗体価
00
50．0
慢性肝炎 活動性 B型 非活動性
体価を示し，経過中に陰性化したものは認めら
れなかった。
AMA
T0．0
は40倍以上の抗体価を示した。また，同一症例
から得られた2ないし3検体ではほぼ同一の抗
陽 性 率 （％）
T0．0
AMA
B型肝硬変症 非B型
23
50．0
00
R3．3
40
糊
20
（＞ee
IO
eeee
〈10
e
疾
患
兜
11
0
0
健 康 人
15
0
0
一方，AMAは慢性肝炎17例中の1例（5．9
辮襯・繊3”麟繍・…騨
肝
その他の疾患群
他 健 肝 他 健
裟康 疾裟康
患 患 患
群 人 群 群 人
％）のみ検出された。この陽性例は慢性活動性
肝炎3例のうちのB型の1例であった。
3）肝疾患患者のASMA価， AMA価とAN
F価，IC値，血清トランスアミナーゼ値
個々の肝疾患患者19例のASMA価， AMA価
とANF価， I C値，血清トランスアミナー二値
蝦1
ASMA価とAMA価の分布
を表2に示した。
一方，AMAは52例中肝疾患の1例（1．9％）
ANFはASMA陽性の14例中4例（28．6％）
に検出され，しかも肝疾患26例の55検体中の
に認められ，それらは慢性活動性肝炎の3例す
1検体（L8％）にのみ認められた。
べてと，非活動性慢性肝炎の1例であった。し
肝疾患以外の11例および健康人の15例では，
かし，その抗体価は10倍ないし20倍と低値で
ASMA，AMAはいずれも陰性であった。
あった。一方，ASMA陰性の肝疾患の中には，
一 25 一
山田 巌・澤江義郎
表2 肝疾患患者のASMA価， AMA価とANF価， I C値，血清トランスアミナーゼ値
患
者
疾患名
ASMA価 AMA価
急性肝炎
慢性肝炎
40
20
10
e
慢性肝炎
慢性肝炎
慢性肝炎
f△
慢性肝炎
a△
b△
c△
d△
20
〈10
h△
慢性肝炎
慢性肝炎
i
慢性肝炎
40
80
40
20
慢性肝炎
10
慢性肝炎
慢性肝炎
慢性肝炎
＜10
＜10
n
慢性肝炎
0
慢性肝炎
慢性肝炎
＜10
＜10
⑧
」
k
1△
m
⑩△
＠△
r
慢性肝炎
肝硬変症
S
肝硬変症
10
40
160
40
40
ANF価
トランスアミナーゼ＊
I C
GOT
GPT
0．04
42
18
0．04
160
178
110
＜10
＜10
＜10
〈10
＜10
＜10
＜10
＜10
＜10
＜10
＜10
＜10
＜10
＜10
＜10
＜10
〈10
＜10
＜10
＜10
＜10
＜10
0．04
10
10
20
20
＜10
＜10
＜10
く10
0．04
250
0．06
32
24
26
38
20
＜10
0．03
21
10
10
0．05
＜10
＜10
＜10
＜10
く10
＜10
0．03
0．03
63
68
28
0．05
32
0．04
0．05
80
26
26
42
55
55
37
23
55
22
28
25
0．06
240
0．03
73
50
0．04
0．04
0．02
0．02
0．03
10
7
12
180
43
35
○印の症例は活動性肝炎 △印の症例はB型肝炎 ＊Kermen単位
AMA陽性の1例はANF陽性であった。
考 察
肝疾患の自己抗体としてはASMA，AMAの存
ICは測定値が0．02から0．06の間に分布し
在が知られているが，いずれも種属，臓器特異
ており，健常人測定値より求めた正常値のO．03
性のない自己抗体といわれている。
より高値であったものは，19例中12例（63．2
ASMAは1965年にJohnsonら5）によりは
％）と高率に認められた。とくにASMA，ANF
じめて報告された平滑筋に対する自己抗体であ
陽性の慢性活動性肝炎例では0．05以上の高値で
る。彼らによればルポイド肝炎で高率に出現し，
あった。一方，IC値が0．03以下のものは19
SLEでは陰性であるため，両者の鑑別診断に有
例中2例（10．5％）にすぎず，ASMA，AMA
効であるとしている。さらに最近では慢性活動
のいずれも陰性であった。
性肝炎，原発性胆汁性肝硬変症などでも検出さ
血清トランスアミナーゼ値については，ASMA
れることから，それらの診断にも利用されてい
陽性の14例中8例（57．1％）がGOT40単位，
る。
ANF陽性のものは認められなかった。また，
GPT 35単位以上の高値で，2例（14．3％）が
一方，AMAは1958年Mackey 7）がはじめて
GOTのみ高値となっていた。一方， ASMA陰
報告したミトコンドリアに対する自己抗体で，
性の5例では慢性肝炎の1例のGPTが正常値
1965年にWalkerら職1966年にDoniachら4）
よりもわずかに高い37単位であった。
により原発性胆汁性肝硬変症で高率に出現す
一 26 一
間接蛍光体法による抗平滑筋抗体，抗ミトコンドリア抗体の検索
ることが明らかにされ，比較的疾患特異性の高
肝炎の悪化といった慢性肝炎と同様の発症機序
い自己抗体と考えられた。しかし，その後慢性
の考えられるものがあるのかも知れない。しか
活動性肝炎をはじめ他の疾患でも認められるこ
し，このことはASMAが慢性肝炎の活動性を
とが報告され2）6），抗体の多様性が示唆されて
示唆するものではあるが，すべてがそうとはい
きた。
えないのかも知れない。それにはさらに数多く
今回，著者らはASMAとAMAの検出に間
の症例での精細な検討が必要であろう。中田ら11）
接蛍光抗体法を応用して検討したが，これまで
は急性肝炎で62，7％の陽性率であったと報告し
のANF検出の経験から技術的には比較的容易
ている。同時に慢性肝炎では28．6％，肝硬変症
であるといえた。それでも蛍光観察による判定
では37．5％であったと述べている。いずれにし
の際にANF検出の場合よりも，より一層観察
ても，ASMAは慢性活動性肝炎の血清学的診断
の熟達と慎重が要求された。すなわち，ASMA
の一つの情報を提供するものと考えられる。
の場合，基質に用いたラット胃粘膜において筋
一方，AMAは本来原発性胆汁性肝硬変症で
層以外のガストリック層や周囲の血管，毛細管，
特異的に認められる抗体とされており，著者ら
細胞の核，結合組織などにも非特異的な蛍光が
の成績では慢性活動性肝炎の3例中1例に認め
認められた。また，AMAの場合，ラット腎上
皮の近位尿細管，遠位尿細管の細胞質が穎粒
られたにすぎなかった。そこで，ASMAとは明
状に染色されるものが陽性であるが，核や平滑
る。Bergら2）は26％に，宮地ら9＞は12．5％に
筋あるいは近位尿細管の管腔などに蛍光が観察
慢性活動性肝炎でAMAが認められたと報告し
される乙とがあり，判定の際，これらの点に十
ているが，それほどの陽性率に認められておら
分な注意をはらう必要がある。
ず，原発性胆汁性肝硬変症の診断にのみ有用な
今回のわれわれの成績ではASMAは肝疾患
検査法であるかも知れない。それにしても陽性
の症例のみに陽性で，慢性肝炎の64．7％に検
の場合には活動性のものといえるだろう。
出され，とくに活動性のものには100％に認め
つぎに，ASMAおよびAMAの測定にANF
られた。ここでいう活動性か非活動性かという
の存在が影響するのかどうかをみるために，A
点については，活動性のものにASMAが100％
NF価320倍以上のSLE患者血清6例を用いて，
陽性であったことは非常に興味深い。同時に非
ASMAおよびAMAの測定を試みたが，いずれ
活動性と診断されていたものにも50％から66．7
も10倍以下であった。このことからANFの存
％に陽性であった乙とは，一部の症例で臨床的
在は同じ方法を用いての検査であるASMAおよ
経過により判定されたものであり，活動性であ
びAMA測定に何の影響も与えないものといえ
る可能性が多分にあると思われる。何故ならば，
る。肝疾患におけるANFの存在については，
ASMA陽性例では非活動性とみられながら，
その臨床的意義づけは渡辺ら’1 9）も述べているよ
GOT，GPTの高値のものが多くなっている。
うに明確でないが興味あるところで，われわれ
このことは肝硬変症についてもいえ，終未像
の例では明らかにIC値の高いものに認められ
になってもなお40％近いものには病像が活
ており，肝疾患の慢性化に何らかの働きをして
動性，進行性のものかも知れない。慢性活動性
いるのかも知れない。
肝炎についてDoniachら4）は58％，Andersen
ICはこれまでとくにSLEと関連づけて考え
らDは67％の陽性率であったと述べており，われ
られていたが，Shalmanら15）の報告以来， Ny−
われの肝疾患全体での陽性率とほぼ同率であり，
deggerら13）， T homasら1のにより肝疾患におけ
われわれの症例の活動性の判定が問題となるの
るICの存在が報告された。著者らの成績でも
かも知れない。また，急性肝炎でも半数のもの
肝疾患の63． 2 ％のものに異常値が認められてお
にASMAが認められており，急性期にも慢性
り，手嶋ら⑥はさらに高い87．5％であったと述
らかに抗体発生の機序が異なるものと考えられ
一 27 一
山 田 巌1・澤 江 義郎
べている。
cryptogenic cirrhosis and other liver
以上のことから，肝疾患の中に自己抗体とく
disease and their clinical implications．
にASMAが高頻度に存在することが示唆され，
Clin． Exp． lmmunol． 1：237’”一262，1966
慢性活動性肝炎でとくに著明であった。したが
5） Johnson， G．D．， Holborow，E．J．and Glynn，
って，肝疾患におけるASMA，AMA測定は，
L．E．： Antibody to smooth muscle in
肝疾患の活動性の判定に参考となると考えられ
patients with liver disease． Lancet II：
る。
878 Av 879， 1965
結
語
6） Klatsukin， G． and Kantor， F．： Mitochon−
drial・antibody in primary biliary cirrhosis
間接蛍光抗体法により，ASMAおよびAMA
and other liver disease． Ann．Intern．Med．
の検出を試み，つぎのような成績を得た。
77 ： 533 ’一w 541， 1972
1）ASMAは肝疾患の26例中15例（57．7％）
7） Mackey， 1． R．： Primary biliary cirrhosis
に認められ，とくに慢性活動性肝炎では100％
showing a highly titer of autoantibody，
の陽性率であった。肝疾患以外の26例ではいず
New Engl． J． Med． 258：185”一188，
れも陰性であった。
2）AMAは肝疾患および肝疾患以外の52
1958
8）前野芳正，鈴木悦子，宮地清光，鳥飼勝隆
例中1例（1．9％）にのみ検出され，それは慢
：抗ミトコンドリア抗体．Medical Techno−
性活動性肝炎3例のうちの1例であった。
logy 9：250”一252， 1981
3）ASMA陽性の肝疾患ではIC値，血清ト
9）宮地清光，鳥飼勝隆，梅田博道，鈴木悦子，
ランスアミナーゼ値に明らかな異常値を示すも
本間光夫：原発性胆汁性肝硬変症（PBC）に
のが多かった。
おけるミトコンドリア抗体の検討．臨床免
疫 i2：780∼790， 1980
文
献
10）長島秀夫，小出典男，小川晃：抗ミトコ
ンドリア抗体，抗平滑筋抗体．Medical
1） Andersen，P．：lncidence and titer of
Technology 13：1106’一1107， 1985
smooth muscle antibodies in human sera．
11）中田幸子，栗原とも子：MBL社の抗ミトコ
Acta Path．Microbiol． Scard． 87：11・’一16，
ンドリア抗体，抗平滑筋抗体検出用試薬
1979
（AID 一lTest）の使用経験と臨床的意義．
2） Berg， P．A．，Doniach， D．and Roitt，1．M．：
衛生検査：33：679∼683，1984
Immunologische Pha’nomene bei
12）日本消化器病学会肝機能斑：肝機能検査標
Leberkrankheiten， Die Bedeutung
準操作法．日消誌 61：621∼631，1964
Mitochondrialer Antik6rper． Klin． Whschr．
13） Nydegger， V．E．， Lambert， P．H．
47：1297nv 1307， 1969
（lerber， H．and Miesher， P．H．：Circulat−
3） Digeon， M． Laver， M．， Riza，J．and Bach，
ing immufie complexes in the serum in
J．F ．： Detection of circulating immune
systemic lupus erythematosus and in
complexes in human sera by simplified
carier of hepatitis B antigen， Quantita−
assay with polyethylene glycol． J．lmmunol．
tion by binding to radiolabelled Clq． J．
Method． 16：165’一一 183， 1977
Clin． lnvest． 54：297 ’h一 309， 1974
4） Doniach， O．， Roitt， 1．M．and Walker， J．G．
14） Reitman， S．and Frankel， S．： A colori−
：Tissue antibodies in primary biliary
metric method for the determination of
cirrhosis， active chronic（lupoid） hepatitis，
serum glut．amic oxaloacetic and glutamic
一 28 一
間接蛍光体法による抗平滑筋抗体，抗ミトコンドリア抗体の検索
17） Thomas， H．C． Devilliers， D． Potter，
pyruvic transaminase． Am． J． Clin．
B． Hodgson， H．and Jain， S．：Immune
Path． 28：56 n−63， 1957
complexes in acute and chronic liver
15） Shulman， N．R．and Barker， L．F．：
disease． Clin． Exp． lmrnunol． 31：150tx・
Virus−like antigen antibody and antigen−
157， 1978
antibody complexes in hepatitis
18） Walker， J．G． Doniach， O． and Roitt，1．
measured by complement fixation．
M．： Serological test in the diagnosis of
Science． 165：304 一一 306， 1969
primary biliary cirrhosis． Lancet 1：
16）手嶋秀毅，吾郷晋浩，友岡裕治，宮崎澄雄，
827一一・ 830， 1965
平良雅裕，重松信昭，鳥巣要道：ポリエチ
19）渡辺 進，森藤隆夫，武田尚寿，村井隆夫，
レングリコール沈殿物補体消費試験（PEG−
吉田 浩，粕川礼司二各種肝疾患患者血清
CC）によるCirculating Immnne Complex
中の自己抗体について，臨床免疫 10：
（CIC）の定量と臨床応用．アレルギー
30：59 一一 67， 1981
1054 一一 1058， 1978