データシート - Sigma

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aPhosphatase Inhibitor Cocktail 1
セリン/スレオニンプロテインホスファターゼおよび
アルカリホスファターゼの L-アイソザイム用
製品番号 P2850
保存温度 2～8 °C
製品概要
細胞粗抽出物は、プロテアーゼやホスファターゼなど、抽出
物に存在するタンパク質を修飾できる多数の内因性酵素を
含みます。完全なタンパク質の収率を向上させる最善の方
法は、もともとの物質への存在が既知である内因性酵素に
対する阻害剤を添加することです。このホスファターゼイン
ヒビターカクテルは、 アルカリホスファターゼの L-アイソザ
イムやプロテインホスファターゼ 1 および 2A などのセリン/
スレオニンプロテインホスファターゼに最適化され、検査を
受けています。
構成
この独自の構成の個々の成分は、特異的な阻害特性を有
します。各阻害剤の詳細を以下に示します。
Ｃａｎｔｈａｒｉｄｉｎ (製品番号 C7632) は、プロテインホスファタ
ーゼ 2A (PP-2A) を阻害します 1,2。
Bromotetramisole (製品番号 B8132) は、アルカリホスファ
ターゼを阻害します。
Microcystin LR (製品番号 M2912) は、プロテインホスファ
ターゼ 1 および 2A (PP-1 および PP-2A) を阻害します 3。
注意事項と免責事項
本製品は試験研究用のみを目的として販売されています。
医薬品、家庭用その他試験研究以外の用途には使用でき
ません。危険性や安全な取り扱いに関しては化学物質安全
データシート (MSDS) をご覧ください。
使用前の準備
このカクテルは、ジメチルスルホキシド (DMSO) の透明な
溶液です。本製品は、0.2 μm 膜でフィルターろ過滅菌され、
ボトルは無菌下で充填されています。
保存/安定性
このカクテルは保冷剤での輸送、2-8 °C での保存を推奨し
ます。提供された本製品は、製造日から 4 年間安定です。
手順
1 mL で、約 5 mg/mL のタンパク質濃度のヒト胎盤、ウシ肝
臓、ウサギ筋肉、A431 またはジャーカット細胞抽出物から
の 100,000 x g 上清のホスファターゼ活性を阻害します。
1 mL のカクテル溶液を、タンパク質最大 500 mg を含む上
清 100 mL の調製に使用します。すなわち、組織から得た
タンパク質 500 mg あたりに 1 mL のカクテル溶液を添加
するか、抽出バッファー100 mL あたりに 1 mL のカクテル
溶液を添加する必要があります。
本製品は様々な動物組織から得た細胞抽出物（ウシ肝臓
およびヒト胎盤のサイトゾルおよび Triton X-100 抽出物、
ウサギ筋肉のサイトゾル抽出物、A431 および Jurkat 細胞
の Triton X-100 抽出物）でテストされています。pH 10.4 の
p-リン酸ニトロフェニル (pNPP) で測定した場合、アルカリ
ホスファターゼの L-アイソザイムを阻害し、32P-Ser/Thr-ミ
エリン塩基性タンパク質または pH 7.6 の 32P-Ser ホスホリ
ラーゼの脱リン酸化によって測定した場合、セリン/スレオニ
ンプロテインホスファターゼ活性を阻害することが示されま
した。
参考文献
1. Jain, M.K. (1982) Handbook of Enzyme Inhibitors,
pp. 222. John Wiley and Sons, New York, NY.
2. Jain, M.K. (1982) Handbook of Enzyme Inhibitors,
pp. 334. John Wiley and Sons, New York, NY.
3. Nishiwaki, S. et al., FEBS, 279, No. 1 115-118,
Feb.,1992.
RBG/SAG/MAM 07/04
2
補足
Inhibition of activity on 32P-phosphorylase a by cocktail 1
100
90
80
% activity
70
0%
60
0.5%
50
1%
40
2%
30
20
10
0
P lac enta (C E )
Liver (CE )
M us c le (C E )
A 431
so u rce
Sigma
Sigma
ブランド製品は
ブランド製品はSigma-Aldrich,
Sigma-Aldrich,Inc.を通じて販売されています。
Inc.を通じて販売されています。
Sigma-Aldrich,
Sigma-Aldrich, Inc.は同社製品がこの文書およびその他の
Inc.は同社製品がこの文書およびその他のSigma-Aldrich
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