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公開特許公報 特開2015
〔実 62 頁〕 公開特許公報（Ａ） (19)日本国特許庁（ＪＰ） (12) (11)特許出願公開番号 特開2015-172048 （Ｐ２０１５−１７２０４８Ａ） (43)公開日 平成27年10月1日(2015.10.1) (51)Int.Cl. ＦＩ テーマコード(参考) Ｃ０７Ｋ 16/24 (2006.01) Ｃ０７Ｋ 16/24 ＺＮＡ ２Ｂ０３０ Ａ０１Ｈ (2006.01) Ａ０１Ｈ 5/00 Ａ ４Ｂ０２４ Ａ０１Ｋ 67/027 (2006.01) Ａ０１Ｋ 67/027 ４Ｂ０６４ Ｃ１２Ｐ 21/08 (2006.01) Ｃ１２Ｐ 21/08 ４Ｃ０７６ Ａ６１Ｋ 39/395 (2006.01) Ａ６１Ｋ 39/395 5/00 審査請求 Ｄ ４Ｃ０８４ 有 請求項の数1 ＯＬ （全80頁） 最終頁に続く (21)出願番号 特願2015-79320(P2015-79320) (22)出願日 平成27年4月8日(2015.4.8) フェムタ (62)分割の表示 特願2011-536496(P2011-536496) ンコーポレイテッド の分割 ＦＥＭＴＡ 平成21年11月13日(2009.11.13) ＬＳ，ＩＮＣ． (31)優先権主張番号 61/114,295 アメリカ合衆国 (32)優先日 平成20年11月13日(2008.11.13) ニア州 サン ディエゴ (33)優先権主張国 米国(US) ロード １１０１１ 原出願日 (71)出願人 511116247 ファーマシューティカルズ イ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡ ９２１２１ カリフォル トーレヤーナ (74)代理人 100105957 弁理士 恩田 誠 (74)代理人 100068755 弁理士 恩田 博宣 (74)代理人 100142907 弁理士 本田 淳 最終頁に続く (54)【発明の名称】ヒト化抗ＩＬ−６抗体 (57)【 要 約 】 （修正有） 【課題】ＩＬ−６に関連する疾患を予防、治療、改善又は診断する為に使用する、ヒトＩ Ｌ−６又はそのフラグメントに対する高親和性の中和キメラ又はヒト抗体の提供。 【解決手段】複数の特定のアミノ酸配列のいずれかを有する重鎖可変領域、複数の特定の アミノ酸配列のいずれかを有する軽鎖可変領域、及び、１又はそれ以上のヒト抗体に由来 する定常領域と、を有するヒトＩＬ−６に結合する単離抗体又は抗体フラグメント。 【選択図】なし ( 2 ) JP 1 2015-172048 A 2015.10.1 2 【特許請求の範囲】 くは変異体と、担体または希釈剤とを含有する医薬組成 【請求項１】 物。 配列番号３、７、１１、１５、１９、２３、２７、３１ 【請求項１０】 、１３４、１４０、１４１、１４４、１４７、１４９、 ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻酔 １５２、１５３または１５６のアミノ酸配列を有する重 薬（ｎａｒｃｏｔｉｃ）、非ステロイド系抗炎症薬（Ｓ 鎖可変領域； ＮＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬（ａｎｅｓｔｈｅｔｉｃ） 配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、 、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、抗乾癬 ６８、７１、７２、７５、７６、８０または８８のアミ 薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、 ノ酸配列を有する軽鎖可変領域；および １またはそれ以上のヒト抗体に由来する定常領域； 糖尿病関連薬、無機物、栄養素、甲状腺薬、ビタミン、 10 カルシウム関連ホルモン、下痢止め薬、鎮咳薬、鎮吐薬 を有するヒトＩＬ−６に結合する単離抗体または抗体フ 、抗潰瘍薬、緩下薬、抗凝固薬、エリスロポエチン、フ ラグメント。 ィルグラスチム、サルグラモスチム、免疫、免疫グロブ 【請求項２】 リン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エ ＢＡ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、Ｂ ストロゲン受容体調節剤、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、ア Ａ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ８９０およびＢＡ９３９の ルキル化剤、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害剤、放射性医薬 １またはそれ以上の可変領域に由来する重鎖および軽鎖 品、抗うつ薬、抗躁病薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠 の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、 薬、交感神経様作用薬、興奮薬、ドネペジル、タクリン １またはそれ以上のヒト抗体に由来する定常領域と 、喘息治療薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコ を有するヒトＩＬ−６に結合する単離抗体または抗体フ トリエン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピ ラグメント。 20 ネフリンまたは類似体、ドルナーゼα、サイトカイン、 【請求項３】 サイトカインアンタゴニスト、 前記抗体またはフラグメントが、インビボでの抗ＩＬ− および抗ＴＮＦαまたはＩＬ−１２／ＩＬ−２３モノク ６マウス抗体のヒトＩＬ−６への結合を競合的に阻害す ローナル抗体の少なくとも１つから選択される少なくと る、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。 も１つの化合物またはタンパク質をさらに含有する、請 【請求項４】 求項９に記載の組成物。 少なくとも１０ - 9 Ｍの親和性（Ｋｄ ）でＩＬ−６に結合 【請求項１１】 する、請求項１に記載の抗ＩＬ−６抗体または特定部分 細胞、組織、器官または動物において免疫障害または疾 もしくは変異体。 患を治療するための方法であって、選択免疫調節に有効 【請求項５】 量の請求項１に記載の少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体 少なくとも１０ - 1 1 Ｍの親和性（Ｋｄ ）でＩＬ−６に結 30 または特定部分もしくは変異体の少なくとも１つを前記 合する、請求項１に記載のＩＬ 細胞、組織、器官または動物に接触させるまたは投与す −６抗体または特定部分もしくは変異体。 ることを含む方法。 【請求項６】 【請求項１２】 少なくとも１０ - 1 2 Ｍの親和性（Ｋｄ ）でＩＬ−６に結 前記免疫疾患が、関節リウマチ／血清反応陰性関節症、 合する、請求項１に記載のＩＬ 変形性関節症、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス −６抗体または特定部分もしくは変異体。 、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、特発性肺線維 【請求項７】 症、全身性脈管炎／ヴェーゲナー肉芽腫症、サルコイド 少なくとも１つのＩＬ−６の少なくとも１つの活性を実 ーシス、精巣炎／精管復元術、アレルギー性／アトピー 質的に中和する、請求項１に記載のＩＬ−６抗体または 特定部分もしくは変異体。 性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、湿疹、アレルギー性 40 接触皮膚炎、アレルギー性結膜炎、過敏性肺炎、移植、 【請求項８】 臓器移植拒絶反応、移植片対宿主病、全身性炎症反応症 前記活性が、ＩＬ−６媒介性ＭＣＰ−１産生の阻害、Ｔ 候群、敗血症症候群、グラム陽性菌敗血症、グラム陰性 ＨＰ−１ヒト単球性白血病細胞におけるＩＬ−６シグナ 菌敗血症、培養陰性敗血症、真菌敗血症、好中球減少性 ル伝達の阻害、ＨｅｐＧ２細胞からのＩＬ−６誘導性血 発熱、尿路性敗血症、髄膜炎菌血症、外傷／出血、熱傷 清アミロイドＡ産生の阻害、およびｒｈＩＬ−６誘導性 、電離放射線への暴露、急性膵炎、成人呼吸窮迫症候群 細胞増殖の阻害から成る群より選択される少なくとも１ 、全身性エリテマトーデスおよび関節リウマチ、アルコ つである、請求項７に記載のＩＬ−６抗体または特定部 ール性肝炎、慢性炎症性病変、サルコイドーシス、クロ 分もしくは変異体。 ーン病、鎌状赤血球貧血、糖尿病、ネフローゼ、アトピ 【請求項９】 ー性疾患、過敏症反応、アレルギー性鼻炎、枯草熱（花 請求項１に記載の単離ＩＬ−６抗体または特定部分もし 50 粉症）、通年性鼻炎、結膜炎、喘息、蕁麻疹、全身性ア ( 3 ) JP 2015-172048 A 2015.10.1 3 4 ナフィラキシー、皮膚炎、悪性貧血、溶血性疾患、血小 前立腺細胞癌、鼻咽頭癌、悪性組織球増殖症、腫瘍随伴 板減少症、何らかの器官または組織の移植片拒絶反応、 症候群／悪性高カルシウム血症、固形腫瘍、腺癌、肉腫 腎移植拒絶反応、心移植拒絶反応、肝移植拒絶反応、膵 、および悪性黒色腫から選択される少なくとも１つであ 移植拒絶反応、肺移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒 る、請求項１５に記載の方法。 絶反応、皮膚同種移植片拒絶反応、軟骨移植拒絶反応、 【請求項１７】 骨移植拒絶反応、小腸移植拒絶反応、胎児胸腺移植片拒 前記有効量が、前記細胞、組織、器官または動物の１キ 絶反応、副甲状腺移植拒絶反応、何らかの器官または組 ログラム当たり０．０１∼１００ｍｇである、請求項１ 織の異種移植拒絶反応、同種移植拒絶反応、抗受容体過 ５に記載の方法。 敏症反応、グレーブス病、レイノー病、Ｂ型インスリン 【請求項１８】 抵抗性糖尿病、喘息、重症筋無力症、抗体媒介性細胞傷 10 前記接触または前記投与が、静脈内、筋肉内、ボーラス 害、ＩＩＩ型過敏症反応、全身性エリテマトーデス、天 、皮下、呼吸器、吸入、経膣、経直腸、口腔内、舌下、 疱瘡、強皮症、混合性結合組織病、特発性アジソン病、 鼻腔内、または経皮から選択される少なくとも１つの様 真性糖尿病、慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、白 式による、請求項１１に記載の方法。 斑、脈管炎、心筋梗塞（ＭＩ）後心臓切開術症候群、Ｉ 【請求項１９】 Ｖ型過敏症、接触皮膚炎、過敏性肺炎、同種移植拒絶反 前記（１）接触もしくは投与の前に、接触もしくは投与 応、細胞内生物体に起因する肉芽腫、薬物感受性、代謝 と同時に、または接触もしくは投与の後に、ＴＮＦアン 性／特発性ウィルソン病、ヘモクロマトーシス、α１− タゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、麻酔薬、非ステ アンチトリプシン欠損症、糖尿病、橋本甲状腺炎、骨粗 ロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬、鎮 しょう症、視床下部−下垂体−副腎軸評価、原発性胆汁 静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬、乾癬治療薬 性肝硬変、甲状腺炎、脳脊髄炎、悪液質、嚢胞性線維症 20 、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、糖 、家族性血球貪食性リンパ組織球症、皮膚疾患、乾癬、 尿病関連薬、無機物、栄養素、甲状腺薬、ビタミン、カ 脱毛、ネフローゼ症候群、腎炎、血液透析、尿毒症、毒 ルシウム関連ホルモン、下痢止め薬、鎮咳薬、鎮吐薬、 性、ｏｋｔ３療法、抗ｃｄ３療法、サイトカイン療法、 抗潰瘍薬、緩下薬、抗凝固薬、エリスロポエチン、フィ 化学療法、放射線療法（たとえば無力症、貧血、悪液質 ルグラスチム、サルグラモスチム、免疫、免疫グロブリ 等を含むが、これらに限定されない）、慢性サリチル酸 ン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エス 中毒から選択される少なくとも１つである、請求項１１ トロゲン受容体調節剤、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アル に記載の方法。 キル化剤、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害剤、放射性医薬品 【請求項１３】 、抗うつ薬、抗躁病薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬 前記有効量が、前記細胞、組織、器官または動物の１キ 、交感神経様作用薬、興奮薬、ドネペジル、タクリン、 ログラム当たり０．０００１∼５０ｍｇである、請求項 30 喘息治療薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコト １２に記載の方法。 リエン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピネ 【請求項１４】 フリンまたは類似体、ドルナーゼα、サイトカイン、サ 前記有効量が、前記細胞、組織、器官または動物の１キ イトカインアンタゴニスト、および抗ＴＮＦαまたはＩ ログラム当たり０．００１∼５０ｍｇである、請求項１ Ｌ−１２／ＩＬ−２３モノクローナル抗体の少なくとも ３に記載の方法。 １つから選択される治療に有効な量の少なくとも１つの 【請求項１５】 化合物またはタンパク質を含有する少なくとも１つの組 細胞、組織、器官または動物において癌障害または疾患 成物を投与することをさらに含む、請求項１１に記載の を調節するための方法であって、医薬として有効量の請 方法。 求項１に記載の少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体または 【請求項２０】 特定部分もしくは変異体を前記細胞、組織、臓器もしく 40 請求項１に記載の少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体また は動物に接触させるまたは投与することを含む方法。 は特定部分もしくは変異体を含む医療装置であって、前 【請求項１６】 記の少なくとも１つのＩＬ−６抗体または特定部分もし 前記癌障害または疾患が、白血病、急性白血病、急性リ くは変異体を、静脈内、筋肉内、ボーラス、皮下、呼吸 ンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、 器、吸入、経膣、経直腸、口腔内、舌下、鼻腔内、また Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＦＡＢ ＡＬＬ、急性骨髄性白血 は経皮から選択される少なくとも１つの様式によって接 病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リン 触させるまたは投与するのに適する医療装置。 パ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病、骨髄異形 【請求項２１】 成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リン 請求項１に記載の抗ＩＬ−６抗体またはフラグメントと パ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発 同じエピトープまたは抗原領域に結合する、単離完全ヒ 性骨髄腫、カポジ肉腫、結腸直腸癌、膵癌、腎細胞癌、 50 ト抗体またはその特定部分もしくは変異体。 ( 4 ) JP 5 2015-172048 A 2015.10.1 6 【請求項２２】 することとを含む、少なくとも１つの抗ＩＬ−６媒介性 請求項１に記載の少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体また 疾患を治療する方法。 はフラグメントと、 【請求項３１】 滅菌水、滅菌緩衝水から選択される少なくとも１つの担 包装材料と、請求項１に記載の少なくとも１つの抗ＩＬ 体、または −６抗体または特定部分もしくは変異体の溶液または凍 フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−ク 結乾燥形態を含有する容器とを含む、ヒト医薬用途のた レゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜 めの製品。 硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアル 【請求項３２】 デヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム、アルキ 前記容器が、複数回使用での投与のための栓を有するガ ルパラベン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウ 10 ラスまたはプラスチック容器である、請求項３１に記載 ム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、もし の製品 くはそれらの混合物から成る群より選択される少なくと 【請求項３３】 も１つの防腐剤 請求項１に記載の抗ＩＬ−６抗体またはフラグメントを を溶解させた水性希釈剤と、 作製するための方法であって、 を含有する医薬組成物。 宿主細胞またはトランスジェニック動物またはトランス 【請求項２３】 ジェニック植物または前記抗体もしくはフラグメントを 抗ＩＬ−６抗体または特定部分もしくは変異体の濃度が コードするヌクレオチド配列で形質転換した植物細胞か 約０．１ｍｇ／ｍｌ∼約１００ ら、前記抗体またはフラグメントを発現させること、お ｍｇ／ｍｌである、請求項２２に記載の組成物。 よび 【請求項２４】 20 前記宿主細胞またはトランスジェニック動物またはトラ 等張剤をさらに含有する、請求項２２に記載の組成物。 ンスジェニック植物または前記抗体もしくはフラグメン 【請求項２５】 トをコードするヌクレオチド配列で形質転換した植物細 生理的に許容される緩衝液をさらに含有する、請求項２ 胞から、前記抗体またはフラグメントを回収すること ２に記載の組成物。 からなる方法。 【請求項２６】 【請求項３４】 凍結乾燥形態の請求項１に記載の少なくとも１つの抗Ｉ 前記宿主細胞が哺乳動物細胞、植物細胞または酵母細胞 Ｌ−６抗体またはフラグメントを入れた第１容器と、 である、請求項３３に記載の方法。 滅菌水、滅菌緩衝水、または、フェノール、ｍ−クレゾ 【請求項３５】 ール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾ 前記トランスジェニック動物が哺乳動物である、請求項 ール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェ 30 ３３に記載の方法。 ノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノー 【請求項３６】 ル、塩化マグネシウム、アルキルパラベン、塩化ベンザ 前記トランスジェニック哺乳動物が、ヤギ、ウシ、ヒツ ルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリ ジ、ウマ、および非ヒト霊長動物から選択される、請求 ウムおよびチメロサール、もしくはそれらの混合物から 項３３に記載の方法。 成る群より選択される少なくとも１つの防腐剤を溶解さ 【請求項３７】 せた水性希釈剤を含有する任意の第２容器を含むキット 請求項１に記載の少なくとも１つの抗体を発現すること 。 ができるトランスジェニック動物または植物。 【請求項２７】 【請求項３８】 抗ＩＬ−６抗体または特定部分もしくは変異体の濃度が 請求項３３に記載の方法によって作製される少なくとも 、約０．１ｍｇ／ｍｌ∼約５００ｍｇ／ｍｌの濃度に再 40 １つの抗ＩＬ−６抗体または特定部分もしくは変異体。 構成される、請求項２６に記載のキット。 【発明の詳細な説明】 【請求項２８】 【技術分野】 等張剤をさらに含む、請求項２６に記載のキット。 【０００１】 【請求項２９】 関連出願情報 生理的に許容される緩衝液をさらに含む、請求項２６に 本出願は、米国以外のすべての国を指定国とする場合の 記載のキット。 出願人を米国企業Ｆｅｍｔａ 【請求項３０】 ｃａｌｓ，Ｉｎｃ．とし、米国のみを指定国とする場合 請求項２６に記載の第１容器の内容物を請求項２６に記 の出願人をドイツ国国民フライ、ゲルハルト（Ｇｅｒｈ 載の第２容器の内容物で再構成することと、および第１ ａｒｄ 容器の再構成された内容物をその必要のある患者に投与 50 イ ウェン（Ｈｗａｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉ Ｆｒｅｙ）、アメリカ合衆国国民チャン、ホワ Ｗｅｎ Ｃｈａｎｇ）、および ( 5 ) JP 7 アメリカ合衆国ショート、ジェイ（Ｊａｙ 2015-172048 A 2015.10.1 8 Ｓｈｏｒｔ 要な身体機能およびプロセスに深く関与する。結果とし ）としたＰＣＴ国際特許出願として２００９年１１月１ て、骨代謝、腫瘍性形質転換ならびに免疫および炎症応 ３日に出願されたものであり、２００８年１１月１３日 答を含む生理的プロセスは、抗体を用いたインビボでの に出願された米国特許仮出願第６１／１１４，２９５号 ＩＬ−６の生物活性の操作によって増強、抑制または防 の優先権を主張する。 止され得る。 【０００２】 【発明の概要】 本発明は、少なくとも１つのインターロイキン６（イン 【発明が解決しようとする課題】 ターフェロンβ２としても知られるＩＬ−６）タンパク 【０００６】 質またはそのフラグメントに特異的な抗体（特定部分ま ＩＬ−６に関連する疾患を予防する、治療する、改善す たは変異体を包含する）、ならびにそのような抗ＩＬ− 10 るまたは診断するために使用される、ＩＬ−６またはそ ６抗体をコードする核酸、相補的核酸、ベクター、宿主 のフラグメントに対する高親和性の中和キメラまたはヒ 細胞、ならびに治療用製剤、投与および装置を包含する ト抗体を提供することが求められている。 その製造および使用の方法に関する。 【課題を解決するための手段】 【背景技術】 【０００７】 【０００３】 本発明は、当技術分野で公知のものと組み合わせて、本 インターロイキン６（ＩＬ−６）は多くの異なる細胞型 明細書で説明し、本明細書で可能にする、高親和性のＢ によって産生されるプロ炎症性サイトカインである。イ Ａ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ ンビボでは、刺激された単球、線維芽細胞および内皮細 ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ８９０またはＢＡ９３９抗Ｉ 胞がＩＬ−６の主要な供給源である。マクロファージ、 Ｌ−６抗体に由来する少なくとも１つの抗原結合領域を ＴおよびＢリンパ球、顆粒球、ケラチノサイト、マスト 20 有する単離されたヒト化抗ＩＬ−６抗体、ならびに抗Ｉ 細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、グリア細胞ならびに平滑筋 Ｌ−６抗体組成物、それに関連するコード核酸または相 細胞のような他の細胞もまた、刺激後にＩＬ−６を産生 補的核酸、ベクター、宿主細胞、組成物、製剤、装置、 する。いくつかの腫瘍細胞もＩＬ−６を生産し、ＩＬ− トランスジェニック動物、トランスジェニック植物、な ６は前立腺癌進行についての予後因子として関係づけら らびにその作製および使用の方法を提供する。本発明の れてきた。ＩＬ−６産生はＩＬ−６自体によって調節さ 抗体は、ヒトＩＬ−６を高い親和性で特異的に中和する れ、また細胞型に依存して、ＩＬ−６はそれ自体の合成 。 を刺激するまたは阻害することができる。 【０００８】 【０００４】 本発明は、本明細書で述べる少なくとも１つの単離され ＩＬ−６は、マイトジェン活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞、末梢 たヒト化抗ＩＬ−６抗体を提供する。本発明による抗体 血単球および特定の腫瘍上で発現されるＩＬ−６受容体 30 は、ＢＡ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８ に結合することができる。ＩＬ−６受容体は少なくとも 、ＢＡ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ８９０またはＢＡ９３ ２つの異なる成分を有し、ＩＬ−６結合に関与するｇｐ ９の任意の１つ、または本発明の抗体に組み込むことが ８０と呼ばれるα鎖、およびシグナル伝達のために必要 できる、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク領域 なｇｐ１３０と称されるβ鎖から成る。ＩＬ−６、ＬＩ またはその任意の部分と組み合わせた、ＢＡ３９９、Ｂ Ｆ、オンコスタチンＭ、ＩＬ−１１、ＣＮＴＦおよびＣ Ａ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ Ｔ−１を含むサイトカインファミリーはすべて、それら ８４８、ＢＡ８９０もしくはＢＡ９３９抗体の１つに由 のコグネイト受容体への結合後にｇｐ１３０を介してシ 来する、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決 グナル伝達する。加えて、ＩＬ−６サイトカインファミ 定領域（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分を含む任 リーのすべての成員は、急性期タンパク質の肝臓発現を 誘導することができる。 意のタンパク質またはペプチド分子を包含する。１つの 40 実施形態では、本発明は、各々の鎖がヒト定常領域の少 【０００５】 なくとも一部、およびその各々がヒトＩＬ−６に特異性 ＩＬ−６の少なくとも２つの主要な生物学的機能がある を有するＢＡ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８ ：急性期タンパク質の媒介ならびに分化および活性化因 ０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ８９０またはＢＡ 子として作用すること。急性期タンパク質は、免疫応答 ９３９の１またはそれ以上に由来する可変領域（ｖ）の を調節し、炎症を媒介し、そして組織リモデリングにお 少なくとも一部を含有する、軽鎖および重鎖を含む抗Ｉ いて役割を果たすことが知られている。分化および活性 Ｌ−６抗体であって、ヒトＩＬ−６の阻害および／また 化因子として、ＩＬ−６は、Ｂ細胞を分化して抗体を分 は中和エピトープに高い親和性で結合する抗体を対象と 泌するように誘導し、Ｔ細胞を細胞傷害性Ｔ細胞に分化 する。本発明はまた、そのような抗体のフラグメントま するように誘導し、細胞シグナル伝達因子を活性化し、 たは誘導体、たとえば、重鎖定常領域、連結領域、多様 そして造血を促進する。ＩＬ−６は、多くの決定的に重 50 性領域もしくは可変領域、または軽鎖定常領域、連結領 ( 6 ) JP 9 2015-172048 A 2015.10.1 10 域もしくは可変領域などの、抗体鎖の１またはそれ以上 ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ の部分を包含する。 ｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ 【０００９】 ． Ｙ．， 抗体は、抗ＩＬ−６抗体に由来する少なくとも１つの相 の少なくとも１つの抗体は、たとえばＢｒａｃｋｅｎｈ 補性決定領域（ＣＤＲ）（たとえば重鎖または軽鎖可変 ｏｆｆ 領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）（これらの ように、ヒトＩＬ−６タンパク質、サブユニット、フラ 用語は本明細書で定義される）の少なくとも１つの特定 グメント、それらの部分または任意の組合せに特異的な 部分、および／または少なくとも１つの定常もしくは可 少なくとも１つの特定エピトープに結合する。エピトー 変フレームワーク領域またはその任意の部分を含み得る プは、少なくとも１つの抗体結合領域を含むことができ 。抗体アミノ酸配列は、場合により、本明細書で述べる 10 、前記エピトープは、好ましくは、ヒトＩＬ−６タンパ または当技術分野で公知の少なくとも１つの特定の置換 ク質の少なくとも１つの機能性、細胞外、可溶性、親水 、挿入または欠失をさらに含み得る。 性、外部もしくは細胞質ドメイン、またはその任意の部 【００１０】 分などの、しかしこれらに限定されない、その少なくと 本発明の好ましい抗体は、ＢＡ３９９、ＢＡ４３６、Ｂ も１つの部分の少なくとも１∼５アミノ酸から成る。 Ａ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ 【００１３】 ８９０、ＢＡ９３９、ＢＡ３９９−０１、ＢＡ３９９− １つの態様では、本発明は、ＢＡ３９９、ＢＡ４３６、 ０２、ＢＡ３９９−０３、ＢＡ３９９−０４、ＢＡ３９ ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８４８、Ｂ ９−０５、ＢＡ３９９−０６、ＢＡ３９９−０７、ＢＡ Ａ８９０、ＢＡ９３９、ＢＡ３９９−０１、ＢＡ３９９ ３９９−０８、ＢＡ３９９−０９およびＢＡ３９９−１ −０２、ＢＡ３９９−０３、ＢＡ３９９−０４、ＢＡ３ ０、ならびにそのフラグメントおよび領域を包含する。 20 ９９−０５、ＢＡ３９９−０６、ＢＡ３９９−０７、Ｂ 【００１１】 Ａ３９９−０８、ＢＡ３９９−０９およびＢＡ３９９− １つの実施形態では、本開示は、配列番号３、７、１１ １０の１つからの少なくとも１つの可変領域、ならびに 、１５、１９、２３、２７、３１、１３４、１４０、１ それらをコードする核酸配列を含む、少なくとも１つの ４１、１４４、１４７、１４９、１５２、１５３または 単離された哺乳動物抗ＩＬ−６抗体を提供する。 １５６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；配列番号 【００１４】 １、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、６８、７ もう１つの態様では、本発明は、（ｉ）ＢＡ３９９、Ｂ １、７２、７５、７６、８０または８８のアミノ酸配列 Ａ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ を有する軽鎖可変領域；および１またはそれ以上のヒト ８４８、ＢＡ８９０、ＢＡ９３９、ＢＡ３９９−０１、 抗体に由来する定常領域を含む、ヒトＩＬ−６に結合す ＢＡ３９９−０２、ＢＡ３９９−０３、ＢＡ３９９−０ る単離抗体または抗体フラグメントを提供する。１つの 30 ４、ＢＡ３９９−０５、ＢＡ３９９−０６、ＢＡ３９９ 態様では、本開示は、ＢＡ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８ −０７、ＢＡ３９９−０８、ＢＡ３９９−０９およびＢ ０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ８９ Ａ３９９−１０に由来する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ ０および ）アミノ酸配列、ならびにそれらをコードする核酸配列 ＢＡ９３９の１またはそれ以上の可変領域に由来する重 の全部；または（ｉｉ）ＢＡ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ 鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、１またはそ ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ８ れ以上のヒト抗体に由来する定常領域とを有する、ヒト ９０、ＢＡ９３９、ＢＡ３９９−０１、ＢＡ３９９−０ ＩＬ−６に結合する単離抗体または抗体フラグメントを ２、ＢＡ３９９−０３、ＢＡ３９９−０４、ＢＡ３９９ 提供する。もう１つの態様では、本開示は、前記抗体ま −０５、ＢＡ３９９−０６、ＢＡ３９９−０７、ＢＡ３ たはフラグメントが、インビボで抗ＩＬ−６マウス抗体 ９９−０８、ＢＡ３９９−０９およびＢＡ３９９−１０ のヒトＩＬ−６への結合を競合的に阻害する、請求項１ 40 の１つからの軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列、ならびにそれら に記載の抗体またはフラグメントを提供する。 をコードする核酸配列の全部のいずれかを含む、少なく 【００１２】 Ｐｒｅ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ １９８８）に見出すことができる。本発明 ｅｔ ａｌ．（前出）によって記述されている とも１つの単離された哺乳動物抗ＩＬ−６抗体を提供す 本発明の好ましい抗体は、Ｂｒａｃｋｅｎｈｏｆｆ ｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｅ ａｌ．（前出）によって記述されたエピトープを包 る。 【００１５】 含する、ヒトＩＬ−６に結合して、受容体結合をブロッ もう１つの態様では、本発明は、ＢＡ３９９、ＢＡ４３ クするものである。競合的阻害によってモノクローナル ６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８４８ 抗体の特異性および親和性を決定するための好ましい方 、ＢＡ８９０、ＢＡ９３９、ＢＡ３９９−０１、ＢＡ３ 法は、参照により本出願に組み込まれる、Ｈａｒｌｏｗ ９９−０２、ＢＡ３９９−０３、ＢＡ３９９−０４、Ｂ ， Ａ３９９−０５、ＢＡ３９９−０６、ＢＡ３９９−０７ ｅｔ ａｌ， ｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ａ Ｌａ Ｓｐｒ 50 、ＢＡ３９９−０８、ＢＡ３９９−０９およびＢＡ３９ ( 7 ) JP 11 2015-172048 A 2015.10.1 12 ９−１０に由来するアミノ酸配列を有する少なくとも１ 宿主細胞において少なくとも１つの前記抗ＩＬ−６抗体 つの重鎖または軽鎖ＣＤＲ、ならびにそれらをコードす を発現するための少なくとも１つの方法を提供する。 る核酸配列を含む、少なくとも１つの単離された哺乳動 【００２０】 物抗ＩＬ−６抗体を提供する。 本発明はまた、（ａ）単離抗ＩＬ−６抗体をコードする 【００１６】 核酸および／または本明細書で述べる抗体と、（ｂ）適 本発明の他の態様では、少なくとも１つのヒトＣＤＲを 切な担体または希釈剤とを含有する少なくとも１つの組 含む、少なくとも１つの単離された哺乳動物キメラ、ヒ 成物を提供する。前記担体または希釈剤は、場合により ト化またはＣＤＲ移植抗ＩＬ−６抗体を提供し、前記抗 、公知の担体または希釈剤に従って、医薬的に許容され 体は、ヒトＩＬ−６のエピトープの少なくとも１∼３ア ミノ酸を含む少なくとも１つのエピトープ 得る。組成物は、場合により、少なくとも１つのさらな 10 る化合物、タンパク質または組成物をさらに含有し得る に特異的に結合する。 。 【００１７】 【００２１】 少なくとも１つの抗体はさらに、場合により、少なくと も１０ - 9 Ｍ、好ましくは少なくとも１０ - 1 0 Ｍの親和性 本発明はさらに、当技術分野で公知のようにおよび／ま たは本明細書で述べるように、関連する疾患の前に、後 （Ｋｄ）でＩＬ−６に結合し、および／または少なくと にまたはその間に、細胞、組織、器官、動物または患者 も１つの において少なくとも１つのＩＬ−６関連疾患を調節する ＩＬ−６タンパク質の少なくとも１つの活性を実質的に または治療するために治療有効量を投与するための、少 中和する。好ましい実施形態では、抗体は、少なくとも なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体法または組成物を提供す ５×１０ - 1 0 Ｍ、好ましくは５×１０ くは５×１０ - 1 2 - 1 1 Ｍ、より好まし Ｍの親和性（Ｋd ）Ｌ−６に結合し、ヒ 20 る。従って、本発明は、本発明の少なくとも１つの単離 抗ＩＬ−６抗体の有効量を含有する組成物を、細胞、組 トＩＬ−６を中和する。 織、器官または動物に接触させるまたは投与することを 【００１８】 含む、細胞、組織、器官または動物においてＩＬ−６関 本発明は、１つの態様では、その少なくとも１つの特定 連疾患を診断するまたは治療するための方法を提供する 配列、ドメイン、部分または変異体を包含する、前記特 。その方法は、場合により、細胞、組織、器官または動 異的抗ＩＬ−６抗体をコードするポリヌクレオチドを含 物に対して本発明の抗ＩＬ−６抗体の０．００１∼５０ む、前記ポリヌクレオチドに相補的な、または前記ポリ ｍｇ／ｋｇの有効量を使用することをさらに含み得る。 ヌクレオチドにハイブリダイズする単離核酸分子を提供 前記方法は、場合により、非経口、皮下、筋肉内、静脈 する。本発明はさらに、前記抗ＩＬ−６抗体核酸分子を 内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔 含む組換えベクター、そのような核酸および／または組 内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心 換えベクターを含む宿主細胞、ならびにそのような抗体 30 筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺 核酸、ベクターおよび／または宿主細胞を作製するおよ 内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液包内、 び／または使用する方法を提供する。従って、本発明は 胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口腔、 、少なくとも１つの単離哺乳動物抗ＩＬ−６抗体をコー 舌下、鼻腔内または経皮経路から選択される少なくとも ドする単離核酸、前記単離核酸を含む単離核酸ベクター １つの方法によって接触させるまたは投与することをさ 、および／または前記単離核酸を含む原核生物または真 らに含み得る。前記方法は、場合により、抗体の接触も 核生物宿主細胞を包含する。宿主細胞は、場合により、 しくは投与の前に、接触もしくは投与と同時に、また ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１、 は接触もしくは投与の後に、検出可能な標識またはレポ ＣＨＯ、ＢＳＣ−１、Ｈｅｐ Ｇ２、６５３、ＳＰ２／ ーター、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩 ０、２９３、ＨｅＬａ、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）、骨 薬、麻酔薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、 髄腫もしくはリンパ腫細胞、またはその任意の誘導体、 40 鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、 固定化もしくは形質転換細胞から選択される少なくとも 抗菌薬、乾癬治療薬、コルチコステロイド、タンパク質 １つであり得る。また、ＩＬ−６抗体が検出可能なまた 同化ステロイド、エリスロポエチン、免疫、免疫グロブ は回収可能な量で発現される、インビトロ、インビボま リン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放 たはインサイチュー条件下で核酸をコードする核酸を翻 射性医薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、興奮薬、喘息治療 訳することを含む、少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体を 薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンまた 作製する方法も提供される。 はその類似体、細胞傷害性または他の抗癌薬、メトトレ 【００１９】 キサートなどの代謝拮抗薬、抗増殖薬、サイトカイン、 本発明はまた、本明細書で述べる宿主細胞を、少なくと サイトカインアンタゴニスト、および抗ＴＮＦαまたは も１つの抗ＩＬ−６抗体が検出可能なおよび／または回 ＩＬ−１２／ＩＬ−２３モノクローナル抗体の少なくと 収可能な量で発現される条件下で培養することを含む、 50 も１つから選択される少なくとも１つの化合物またはタ ( 8 ) JP 13 2015-172048 A 2015.10.1 14 ンパク質の有効量を含有する少なくとも１つの組成物を つの防腐剤を溶解させた水性希釈剤とを含有する任意の 投与することをさらに含み得る。 第２容器を含むキットを提供する。１つの態様では、キ 【００２２】 ットにおいて、第１容器中の抗ＩＬ−６抗体または特定 本発明はさらに、当技術分野で公知のようにおよび／ま 部分もしくは変異体の濃度は、第２容器の内容物で約０ たは本明細書で述べるように、関連する疾患の前に、後 ．１ｍｇ／ｍｌ∼約５００ｍｇ／ｍｌの濃度に再構成さ にまたはその間に、細胞、組織、器官、動物または患者 れる。もう１つの態様では、第２容器は等張剤をさらに において少なくとも１つのＩＬ−６関連疾患を診断する 含む。もう１つの態様では、第２容器は、生理的に許容 ための少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体法を提供する。 される緩衝液をさらに含む。１つの態様では、本開示は 【００２３】 、キット中で提供され、投与の前に再構成される製剤を 本発明はまた、本発明に従って、少なくとも１つの抗Ｉ 10 その必要のある患者に投与することを含む、少なくとも Ｌ−６抗体を診断するための少なくとも１つの組成物、 １つの抗ＩＬ−６媒介性疾患を治療する方 装置および／または送達方法を提供する。 法を提供する。 また、少なくとも１つの単離ヒト化抗ＩＬ−６抗体およ 【００２６】 び少なくとも１つの医薬的に許容される担体または希釈 また、包装材料よ、本発明の少なくとも１つの単離哺乳 剤を含有する組成物も提供される。組成物は、場合によ 動物抗ＩＬ−６抗体の溶液または凍結乾燥形態を含有す り、検出可能な標識またはレポーター、細胞傷害性また る容器とを含む、ヒト医薬または診断用途のための製品 は他の抗癌薬、メトトレキサートなどの代謝拮抗薬、抗 が提供される。製品は、場合により、非経口、皮下、筋 増殖薬、サイトカインまたはサイトカインアンタゴニス 肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内 ト、ＴＮＦアンタゴニスト、抗リウマチ薬、筋弛緩薬、 、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内 麻酔薬、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＴＨＥ）、鎮痛薬 20 、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜 、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬 内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、 、乾癬治療薬、コルチコステロイド、タンパク質同化ス 滑液包内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直 テロイド、エリスロポエチン、免疫、免疫グロブリン、 腸、口腔、舌下、鼻腔内または経皮送達装置またはシス 免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医 テムの成分として容器を有することを含み得る。 薬品、抗うつ薬、抗精神病薬、興奮薬、喘息治療薬、β 【００２７】 アゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリンまたは類似 本発明はさらに、本明細書で述べる任意の発明を提供す 体の少なくとも１つから選択される少なくとも１つの化 る。 合物またはタンパク質の有効量をさらに含有し得る。 【図面の簡単な説明】 【００２４】 【００２８】 また、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支 30 【図１】抗ＩＬ−６ 内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内 号１、２）および重鎖（配列番号３、４）可変領域につ 、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内 いて、それぞれアミノ酸配列および核酸配列を示す。 、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、 【図２】抗ＩＬ−６ 腎内、網膜内、髄腔内、滑液包内、胸腔内、子宮内、膀 号５、６）および重鎖（配列番号７、８）可変領域につ 胱内、ボーラス、膣、直腸、口腔、舌下、鼻腔内または いて、それぞれアミノ酸配列および核酸配列を示す。 経皮経路から選択される少なくとも１つの方法によって 【図３】抗ＩＬ−６ 少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体を接触させるまたは投 号９、１０）および重鎖（配列番号１１、１２）可変領 与するのに適する、本発明の少なくとも１つの単離哺乳 域について、それぞれアミノ酸配列および核酸配列を示 動物抗ＩＬ−６抗体を含む医療装置が提供される。 【００２５】 Ａｂ ＢＡ３９９の軽鎖（配列番 Ａｂ ＢＡ４３６の軽鎖（配列番 Ａｂ ＢＡ８０２の軽鎖（配列番 す。 40 【図４】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ８０８の軽鎖（配列番 さらなる態様では、本開示は、凍結乾燥形態の本開示の 号１３、１４）および重鎖（配列番号１５、１６）可変 少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体またはフラグメントを 領域について、それぞれアミノ酸配列および核酸配列を 入れた第１容器と、滅菌水、滅菌緩衝水、または、フェ 示す。 ノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾ 【図５】抗ＩＬ−６ ール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸 号１７、１８）および重鎖（配列番号１９、２０）可変 フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒ 領域について、それぞれアミノ酸配列および核酸配列を ド、クロロブタノール、塩化マグネシウム、アルキルパ 示す。 ラベン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、 【図６】抗ＩＬ−６ デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、もしくは 号２１、２２）および重鎖（配列番号２３、２４）可変 それらの混合物から成る群より選択される少なくとも１ 50 領域について、それぞれアミノ酸配列および核酸配列を Ａｂ ＢＡ８４０の軽鎖（配列番 Ａｂ ＢＡ８４８の軽鎖（配列番 ( 9 ) JP 15 ＰＲＯ∼ＬＣ３２ Ａｂ A 2015.10.1 16 示す。 【図７】抗ＩＬ−６ 2015-172048 ＰＲＯのＢＡ３９９ ＣＰＳ軽鎖可 ＢＡ８９０の軽鎖（配列番 変領域についてのアミノ酸配列（それぞれ配列番号８７ 号２５、２６）および重鎖（配列番号２７、２８）可変 、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、 領域について、それぞれアミノ酸配列および核酸配列を ９６、９７および９８）を示す。 示す。 【図２０】抗ＩＬ−６ 【図８】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ９３９の軽鎖（配列番 ＤＮＡ∼ＨＣ０６ Ａｂ ＢＡ３９９ ＨＣ０１ ＤＮＡのＢＡＢＡ３９９ ＣＰＳ重 号２９、３０）および重鎖（配列番号３１、３２）可変 鎖可変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号４、 領域について、それぞれアミノ酸配列および核酸配列を ９９、１００、１０１、１０２および１０３）を示す。 示す。 【図２１】抗ＩＬ−６ 【図９】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ００１の軽鎖（配列番 10 ＤＮＡ∼ＨＣ１２ Ａｂ ＢＡ３９９ ＤＮＡのＢＡ３９９ ＨＣ０７ ＣＰＳ重鎖可 号３３、３４）および重鎖（配列番号３５、３６）可変 変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号１０４、 領域について、それぞれアミノ酸配列および核酸配列を １０５、１０６、１０７、１０８および１０９）を示す 示す。 。 【図１０】ＢＡ００１と本発明の抗ＩＬ−６抗体の競合 【図２２】抗ＩＬ−６ ＥＬＩＳＡ分析を示す。 ＤＮＡ∼ＨＣ１８ 【図１１】ＢＡ００１と本発明の抗ＩＬ−６抗体のＢｉ 変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号１１０、 ａＣｏｒｅおよびＥＬＩＳＡ分析を示す。 １１１、１１２、１１３、１１４および１１５）を示す 【図１２】抗ＩＬ−６ ＤＮＡ∼ＬＣ０６ Ａｂ ＢＡ３９９ ＤＮＡのＢＡ３９９ ＬＣ０１ Ａｂ ＢＡ３９９ ＤＮＡのＢＡ３９９ ＨＣ１３ ＣＰＳ重鎖可 。 ＣＰＳ軽鎖可 【図２３】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ３９９ 変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号２、３７ 20 ＤＮＡ∼ＨＣ２４ 、３８、３９、４０および４１）を示す。 変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号１１６、 【図１３】抗ＩＬ−６ ＤＮＡ∼ＬＣ１２ Ａｂ ＢＡ３９９ ＤＮＡのＢＡ３９９ ＬＣ０７ ＤＮＡのＢＡ３９９ ＨＣ１９ １１７、１１８、１１９、１２０および１２１）を示す ＣＰＳ軽鎖可 。 変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号４２、４ 【図２４】抗ＩＬ−６ ３、４４、４５、４６および４７）を示す。 ＤＮＡ∼ＨＣ３０ 【図１４】抗ＩＬ−６ ＤＮＡ∼ＬＣ１８ Ａｂ ＢＡ３９９ ＤＮＡのＢＡ３９９ ＣＰＳ重鎖可 Ａｂ ＢＡ３９９ ＤＮＡのＢＡ３９９ ＨＣ２５ ＣＰＳ重鎖可 ＬＣ１３ 変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号１２２、 ＣＰＳ軽鎖可 １２３、１２４、１２５、１２６および１２７）を示す 変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号４８、４ 。 ９、５０、５１、５２および５３）を示す。 【図２５】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ３９９ ＤＮＡおよびＨＣ３２ ＤＮＡのＢＡ３９９ 【図１５】抗ＩＬ−６ ＤＮＡ∼ＬＣ２４ Ａｂ ＢＡ３９９ ＤＮＡのＢＡ３９９ ＬＣ１９ 30 ＣＰＳ軽鎖可 ２８および１２９）；ならびに抗ＩＬ−６ ５、５６、５７、５８および５９）を示す。 ３９９ ＤＮＡ∼ＬＣ３０ Ａｂ ＢＡ３９９ ＤＮＡのＢＡ３９９ ＣＰＳ重 鎖可変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号１２ 変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号５４、５ 【図１６】抗ＩＬ−６ ＨＣ３１ ＨＣ０１ ＰＲＯ∼ＨＣ０６ Ａｂ ＢＡ ＰＲＯの重鎖可 ＬＣ２５ 変領域についてのアミノ酸配列（それぞれ配列番号３、 ＣＰＳ軽鎖可 １３０、１３１、１３２、１３３および１３４）を示す 変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号６０、６ 。 １、６２、６３、６４および６５）を示す。 【図２６】抗ＩＬ−６ 【図１７】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ３９９ ＬＣ３１ ＤＮＡおよびＬＣ３２ ＤＮＡのＢＡ３９９ ＰＲＯ∼ＨＣ１５ ＣＰＳ軽 Ａｂ ＢＡ３９９ ＰＲＯのＢＡ３９９ ＨＣ０７ ＣＰＳ重鎖可 変領域についてのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１３ 鎖可変領域についての核酸配列（それぞれ配列番号６６ 40 ５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１ および６７）；ならびに抗ＩＬ−６ 、１４２および１４３）を示す。 ＬＣ０１ ＰＲＯ∼ＬＣ０８ Ａｂ ＢＡ３９９ ＰＲＯの軽鎖可変領域 【図２７】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ３９９ ＰＲＯ∼ＨＣ２５ ６９、７０、７１、７２、７３および７４）を示す。 変領域についてのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１４ 【図１８】抗ＩＬ−６ ４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０ ＰＲＯ∼ＬＣ２０ Ａｂ ＢＡ３９９ ＰＲＯのＢＡ３９９ ＬＣ０９ ＣＰＳ軽鎖可 ＰＲＯのＢＡ３９９ ＨＣ１６ についてのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１、６８、 ＣＰＳ重鎖可 、１５１、１５２および１５３）を示す。 変領域についてのアミノ酸配列（それぞれ配列番号７５ 【図２８】抗ＩＬ−６ 、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、 ＰＲＯ∼ＨＣ３２ ８４、８５および８６）を示す。 変領域についてのアミノ酸配列（それぞれ配列番号１５ 【図１９】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ３９９ ＬＣ２１ 50 Ａｂ ＢＡ３９９ ＰＲＯのＢＡ３９９ ＨＣ２６ ＣＰＳ重鎖可 ４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９および１ ( 10 ) JP 17 2015-172048 A 2015.10.1 18 ６０）を示す。 を含む様々な抗ＩＬ−６ Ｍａｂによる、ＩＬ−６／ｓ 【図２９】包括的ポジショナルエボルーション（ｃｏｍ ＩＬ−６Ｒで刺激したＴＨＰ−１細胞におけるＳｔａｔ ｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ３リン酸化の阻害を示す（Ａ）。各々の状態についての ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｅｖｏ ｌｕｔｉｏｎ（ＣＰＥ））によるＢＡ３９９親和性成熟 総Ｓｔａｔ３のウエスタンブロットを（Ｂ）に示す。 からの上位１０のヒットの相対比活性を示す。各々のク 【図３８】１０ｎｇ／ｍＬ ローンについての相対比活性を、黒い水平な線で示す、 ００３、ＢＡ３９９、ＢＡ３９９−２およびＢＡ３９９ 抗ＩＬ−６ −９を含む様々な抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ３９９の比活性に基準化してい る。 ＩＬ−６を使用して、ＢＡ Ｍａｂによる、ＩＬ−６ ／ｓＩＬ−６Ｒで刺激したＴＨＰ−１細胞におけるＳｔ 【図３０】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ３９９の軽鎖可変領 ａｔ３リン酸化の阻害を示す（Ａ）。各々の状態につい 域のコンビナトリアルタンパク質合成（ＣＰＳ）による 10 ての総Ｓｔａｔ３のウエスタンブロットを（Ｂ）に示す 親和性成熟からの３９９ＣＰＳ 。 Ｓ ＬＣ０１∼３９９ＣＰ ＬＣ３２（それぞれ配列番号１、６８、６９、７０ 【図３９】２４時間目の、抗ＩＬ−６ Ｍａｂ ＣＮＴ 、・・・９８）のアミノ酸配列の比較を示す。完全長配 Ｏ１３６、ＢＡ３９９、ＢＡ３９９−２、ＢＡ３９９− 列および対応する配列番号を図１７∼１９に示す。 ９の連続希釈による、ヒトＩＬ−６、ｓＩＬ−６Ｒおよ 【図３１】抗ＩＬ−６ びＩＬ−１ｂで刺激したＨｅｐＧ２細胞による血清アミ Ａｂ ＢＡ３９９の重鎖可変領 域のコンビナトリアルタンパク質合成（ＣＰＳ）による ロイドＡタンパク質産生の阻害を示す。 親和性成熟からの３９９ＣＰＳ 【図４０】４８時間目の、抗ＩＬ−６ Ｓ ＨＣ０１∼３９９ＣＰ Ｍａｂ ＣＮＴ ＨＣ３２（それぞれ配列番号３、１３０、１３１、 Ｏ１３６、ＢＡ３９９、ＢＡ３９９−２、ＢＡ３９９− １３２、・・・１６０）のアミノ酸配列の比較を示す。 ９の連続希釈による、ヒトＩＬ−６、ｓＩＬ−６Ｒおよ 完全長配列および対応する配列番号を図２５∼２８に示 20 びＩＬ−１ｂで刺激したＨｅｐＧ２細胞による血清アミ す。 ロイドＡタンパク質産生の阻害を示す。 【図３２】コンビナトリアルタンパク質合成（ＣＰＳ） 【図４１】ビオチニル化抗ＩＬ−６ によるＢＡ３９９親和性成熟からの上位１０のヒットの サルＩＬ−６に対する交差反応性、およびビオチニル化 基準化した比活性を示す。各々のクローンについての相 していないヒト化抗ＩＬ−６ 対比活性を、水平な黒い線で示すように、抗ＩＬ−６ Ａ００３、ＢＡ３９９、ＢＡ３９９−２およびＢＡ３９ Ａｂ ９−９の、ビオチニル化ＢＡ００１のサルＩＬ−６への ＢＡ３９９の比活性に基準化している。 【図３３】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ３９９の親和性成熟 によって生成された抗ＩＬ−６ Ｍａｂ ＢＡ００１、Ｂ 結合をブロックする能力を示す。ヒトＩｇＧを非特異的 Ｍａｂクローン、ＢＡ 抗体として使用する。 ００３（ＣＮＴＯ１３６）、およびＢＡＰ００１クロー 【図４２】抗ＩＬ−６ ン１∼ＢＡＰ００１クローン１０のＳａｐｉｄｙｎｅ Ｍａｂ ００１の 30 Ｍａｂ ＢＡ００１、ＢＡ３９ ９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０ ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）反応速度排除分析からの解離 、ＢＡ８４８およびＢＡ８９０による４８時間目のＩＬ 定数（Ｋｄ）を含む表を示す。 −６誘導性ＤＳ−１細胞増殖の阻害を示す。 【図３４】抗ＩＬ−６ Ａｂ ＢＡ３９９の親和性成熟 によって生成された抗ＩＬ−６ 【図４３】抗ＩＬ−６ Ｍａｂ ＢＡ００１、ＢＡ３９ ａｂクローン、ＢＡ３ ９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０ ９９−２、ＢＡ３９９−５、ＢＡ３９９−９およびＢＡ 、ＢＡ８４８およびＢＡ８９０による９６時間目のＩＬ ３９９−１０のＢｉａＣｏｒｅ分析からの結合データを −６誘導性ＤＳ−１細胞増殖の阻害を示す。 含む表を示す。 【図４４】ＢＡ３９９抗ＩＬ−６ 【図３５】抗ＩＬ−６ ＭａｂのＣＰＳ親和 Ｍａｂ濃度を上昇させることに 性成熟からの上位１０クローンにおいて使用した軽鎖と よるＴＨＰ−１細胞でのＩＬ−６／ｓＩＬ６Ｒ誘導性Ｓ 重鎖の組合せを示す。軽鎖と重鎖についての対応するア ｔａｔ３リン酸化の阻害を示す。データは、総Ｓｔａｔ 40 ミノ酸配列および配列番号はそれぞれ図１７∼１９およ ３についてのウエスタンブロットに基づいて基準化して び図２５∼２８に示されている。 いる。 【発明を実施するための形態】 【図３６】１００ｎｇ／ｍＬ ＩＬ−６を使用して、０ 【００２９】 ０３、ＢＡ３９９、ＢＡ３９９−２およびＢＡ３９９− 引用 ９を含む様々な抗ＩＬ−６ Ｍａｂによる、ＩＬ−６／ 本明細書中で引用するすべての公表文献または特許は、 ｓＩＬ−６Ｒで刺激したＴＨＰ−１細胞におけるＳｔａ それらが本発明の時点での技術水準を示すので、および ｔ３リン酸化の阻害を示す（Ａ）。各々の状態について ／または本発明の記載および実施可能性を提供するため の総Ｓｔａｔ３のウエスタンブロットを（Ｂ）に示す。 に、全体が参照により本明細書に組み込まれる。公表文 【図３７】１０ｎｇ／ｍＬ 献は、任意の学術公表文献もしくは特許公開公報、また ＩＬ−６を使用して、００ ３、ＢＡ３９９、ＢＡ３９９−２およびＢＡ３９９−５ 50 はすべての記録、電子または印刷形式を含む、任意のメ ( 11 ) JP 19 2015-172048 A 2015.10.1 20 ディア形式で利用可能な任意の他の情報を指す。以下の ペプチド含有分子を包含する。あるいは、「抗ＩＬ−６ 参考文献は、全体が参照により本明細書に組み込まれる 抗体」という用語は、ヒト化モノクローナル抗体ＢＡ３ ：Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｃｕ ９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４ Ｍｏｌｅｃｕ ０、ＢＡ８４８、ＢＡ８９０およびＢＡ９３９を集合的 ｒｒｅｎｔ ｌａｒ ｅｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｓｏｎｓ， ｅｔ ａｌ．， Ａ ｉｎ ＮＹ， Ｗｉｌｅｙ Ｎ．Ｙ． ＆ にまたは個別に指す。そのような抗体は、インビトロ、 （１９ インサイチューおよび／またはインビボで、少なくとも Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ １つのＩＬ−６活性もしくは結合、またはＩＬ−６受容 Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｎ．Ｙ． ｅｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ， 10 Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ． として、本発明の適切な抗ＩＬ−６抗体、特定部分また は変異体は、ＢＡ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、Ｂ ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ８９０または ａｎｄ Ｓｐｒｉｎｇ （１９８９）； Ｈａｒｂ ＢＡ９３９モノクローナル抗体の少なくとも１つによっ Ｃｏｌｌｉｇａｎ て認識されるヒトＩＬ−６の阻害および／または中和エ ａｌ．， ｅｄｓ．， ピトープに高い親和性で結合することができる。適切な Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ ＆ Ｓｏｎｓ， ＮＹ Ｉｎｃ．， ｉ 抗ＩＬ−６抗体、特定部分または変異体はまた、場合に Ｗｉｌｅｙ より、ＲＮＡ、ＤＮＡまたはタンパク質合成、ＩＬ−６ （１９９４−２０ ０１）； 放出、ＩＬ−６受容体シグナル伝達、膜ＩＬ−６切断、 20 Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｎｃｅ， Ｗｉｌｅｙ Ｊｏｈｎ Ｎ． するおよび／または妨げることができる。非限定的な例 Ｌａｎｅ， Ｈａｒｌｏｗ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ｏｒ， 、軽減する、緩和する、ブロックする、阻害する、排除 ２．ｓｕｐ．ｎｄ （１９８９）； Ｙ， 体活性もしくは結合を調節する、低下させる、拮抗する Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ， ｅｄ．， Ｊｏｈｎ Ｉｎｃ．， ８７−２００１）； ： ａｌ．， Ｙ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＆ 、しかしこれらに限定されない Ｓｃｉｅ Ｓｏｎｓ， ＩＬ−６活性、ＩＬ−６産生および／または合成などの Ｎ （１９９７−２００１）。 ＩＬ−６の活性または機能の少なくとも１つに影響を及 ぼし得る。 【００３２】 【００３０】 「抗体」という用語はさらに、抗体ミメティックを包含 アミノ酸コード する、または、各々が抗ＩＬ−６に由来する少なくとも 本発明の抗ＩＬ−６抗体を構成するアミノ酸はしばしば １つのＣＤＲを含有する、一本鎖抗体およびそのフラグ 略記される。アミノ酸の特定は、当技術分野で広く理解 メントを包含する、抗体またはその特定フラグメントも されているように、その１文字コード、３文字コード、 しくは部分の構造および／または機能を模倣する抗体の 名称または３つのヌクレオチドコドンによってアミノ酸 30 部分を含有する、抗体、その消化フラグメント、特定部 を特定することにより指示され得る（Ａｌｂｅｒｔｓ， 分および変異体を包含することが意図されている。機能 Ｂ．， ｅｔ ａｌ．， ｏｌｏｇｙ Ｅｄ．， ｏｆ Ｔｈｅ Ｇａｒｌａｎｄ Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ， Ｂｉ 的フラグメントは、哺乳動物ＩＬ−６に結合する抗原結 Ｔｈｉｒｄ 合フラグメントを含む。たとえば、Ｆａｂ（たとえばパ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ， パイン消化による）、Ｆａｂ’（たとえばペプシン消化 Ｙｏｒｋ， １９９４参照）。 と部分的還元による）およびＦ（ａｂ’）２（たとえば 【００３１】 ペプシン消化による）、ｆａｃｂ（たとえばプラスミン 定義 消化による）、ｐＦｃ’（たとえばペプシンまたはプラ 本明細書で使用される、「抗インターロイキン６抗体」 スミン消化による）、Ｆｄ（たとえばペプシン消化、部 、「抗ＩＬ−６抗体」、「抗ＩＬ−６抗体部分」、また 分的還元および再集合による）、ＦｖまたはｓｃＦｖ（ は「抗ＩＬ−６抗体フラグメント」および／または「抗 40 たとえば分子生物学技術による）フラグメントを含むが ＩＬ−６抗体変異体」等は、本発明の抗体に組み込むこ これらに限定されない、ＩＬ−６またはその部分に結合 とができる、非マウス起源、好ましくはヒト起源の重鎖 することができる抗体フラグメントは、本発明に包含さ または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレー れる（たとえばＣｏｌｌｉｇａｎ， ムワーク領域またはその任意の部分と組み合わせた、Ｂ ｇｙ、前出参照）。 Ａ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ 【００３３】 ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ８９０またはＢＡ９３９ヒト 抗体フラグメントは、当技術分野で公知のようにおよび 化モノクローナル抗体の少なくとも１つに由来する重鎖 ／または本明細書で述べるように、酵素切断、合成また もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤ は組換え技術によって作製できる。抗体はまた、１また Ｒ）またはそのリガンド結合部分を含む、免疫グロブリ はそれ以上の終止コドンが天然の終止位置の上流に導入 ン分子の少なくとも一部を含む任意のタンパク質または 50 された抗体遺伝子を使用して様々なトランケート形態で Ｉｍｍｕｎｏｌｏ ( 12 ) JP 21 2015-172048 A 2015.10.1 22 作製することもできる。たとえば、重鎖のＣＨ１ドメイ トリアルライブラリーを、次に、対象とする抗原への結 ンおよび／またはヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を 合に関してスクリーニングすることができる。このアプ 含むように、Ｆ（ａｂ’）２重鎖部分をコードする組合 ローチは、親抗体への結合活性を維持するという観点か せ遺伝子を設計することができる。抗体の様々な部分を ら完全なヒトフレームワークの最も好ましい組合せの選 、従来の技術によって化学的に共に連結するか、または 択を可能にし得る。その後、ヒト化抗体を様々な技術に 遺伝子操作技術を用いて隣接タンパク質として調製する よってさらに最適化することができる。 ことができる。 【００３６】 【００３４】 抗体のヒト化は、マウスまたは他の非ヒト抗体を「完全 本明細書で使用される「キメラ」抗体または「ヒト化」 ヒト」抗体へと進化させるために使用できる。生じる抗 抗体または「ＣＤＲ移植」は、非マウス、好ましくはヒ 10 体は、出発抗体と類似の結合親和性および特異性を維持 ト抗体に由来する１またはそれ以上のタンパク質または しつつ、ヒト配列だけを含み、マウスまたは非ヒト抗体 ペプチドと組み合わせた本明細書で述べる抗ＩＬ−６ 配列を含まない。 ＡＢまたはそれに由来する任意のＣＤＲの任意の組合せ 【００３７】 を包含する。本発明に従って、キメラまたはヒト化抗体 「包括的ポジショナルエボルーション」（ＣＰＥ（商標 は、ＣＤＲが本明細書で述べる抗ＩＬ−６ Ａｂの１も ））という用語は、単一または複数の抗体特性と結合特 しくはそれ以上および少なくともその一部に由来するか 性を増強するように包括的な突然変異誘発、シャフリン 、または抗体の残りの部分が１もしくはそれ以上のヒト グおよび合成技術を組み合わせるために使用できる抗体 抗体に由来するものを包含する。従って、抗体のヒト部 進化技術プラットフォームを表すのに使用される。ＣＰ 分は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である、フレー Ｅプラットフォームは、タンパク質内の各々の位置にお ムワーク、ＣＬ、ＣＨドメイン（たとえばＣＨ１、ＣＨ 20 ける６３の潜在的コドン変化すべてについてタンパク質 、ＣＨ3 ）、ヒンジ、（ＶＬ、ＶＨ）領域を含み得る。 内のあらゆる個別コドン変化のインビボ作用を包括的に ヒト抗体に由来する抗体の領域は、ヒト抗体と１００％ マッピングすることを可能にする。この包括的突然変異 の同一性を有する必要はない。好ましい実施形態では、 誘発技術は、抗体可変ドメインの配列に沿ってあらゆる 免疫原性が無視し得る程度であるためにできるだけ多く 位置でアミノ酸変化を試験することにより、抗体変異体 のヒトアミノ酸残基が保持されるが、ヒト残基は、同時 を迅速に作製する。 に抗体のヒト化を最大化しつつ、ＣＤＲによって形成さ 【００３８】 れる抗原結合部位を支持するために必要に応じて修飾さ 「コンビナトリアルタンパク質合成」（ＣＰＳ（商標） れ得る。 ）という用語は、抗体の最良特性を新たな高性能抗体へ そのような変化または変異は、場合によりおよび好まし と組み合わせることによって抗体の所望特性を最適化す くは、非修飾抗体と比較してヒトまたは他の種における 30 るために使用できるコンビナトリアルタンパク質合成技 免疫原性を保持するまたは低減する。ヒト化抗体は、機 術を表すのに使用される。ＣＰＳ（商標）はＣＰＥ（商 能的に再配列されたヒト免疫グロブリン（たとえば重鎖 標）後に使用でき、タンパク質または抗体内のコドン変 および／または軽鎖）遺伝子を発現することができる非 化の最適の組合せまたはセットの同定のために、改善さ ヒト動物または原核もしくは真核細胞によって産生され れた個別コドンのすべての置換のその後の作製とインビ 得ることが注目される。さらに、抗体が一本鎖抗体であ ボ選択を可能にし得る。これらの技術の組合せは、スク る場合、それは、天然ヒト抗体では認められないリンカ リーニングするのに利用できる抗体変異体のプールを大 ーペプチドを含み得る。たとえば、Ｆｖは、重鎖の可変 きく拡大することができ、それは、結合親和性、特異性 領域と軽鎖の可変領域を連結する、２∼約８個のグリシ 、熱安定性、発現レベル、エフェクター機能、グリコシ 2 ンまたは他のアミノ酸残基のようなリンカーペプチドを 含み得る。 ル化および溶解度などの単一または複数の増強された特 40 性を有する抗体を発見する確率を有意に上昇させる。 そのようなリンカーペプチドはヒト起源であるとみなさ 【００３９】 れる。 完全長抗体分子のために、ハイブリドーマ細胞株のゲノ 【００３５】 ムＤＮＡまたはｍＲＮＡから免疫グロブリン遺伝子を得 抗体のヒト化は、たとえば、個々のヒトフレームワーク ることができる。抗体重鎖および軽鎖を哺乳動物ベクタ のプールにフレーム内で融合された非ヒト標的モノクロ ー系でクローニングする。二本鎖配列分析で構築を実証 ーナル抗体の６つのＣＤＲを含むコンビナトリアルライ する。抗体構築物を他のヒトまたは哺乳動物宿主細胞株 ブラリーを合成することによって実施できる。すべての において発現させることができる。構築物を、次に、対 公知の重鎖および軽鎖ヒト生殖細胞遺伝子を代表する遺 象とする発現された抗体の一過性トランスフェクション 伝子を含むヒトフレームワークライブラリーが利用でき アッセイおよびウエスタンブロット分析によって確認で る。生じたコンビナ 50 きる。最も高い生産性を有する安定な細胞株を単離し、 ( 13 ) JP 23 2015-172048 A 2015.10.1 24 迅速検定法を用いてスクリーニングすることができる。 【００４４】 【００４０】 本発明の抗体 「親和性成熟」という用語は、抗原に対する免疫応答の 本発明に従って、抗ＩＬ−６抗体は、ＢＡ３９９、ＢＡ 平均的な親和性の上昇を指す。 ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８ 本来は、抗原への反復暴露後に起こり得る。特に好まし ４８、ＢＡ８９０もしくはＢＡ９３９抗体の任意の１つ いタイプの置換変異体は、親抗体（たとえばヒト抗体） 、または可変領域もしくはＣＤＲがＢＡ３９９、ＢＡ４ の１またはそれ以上の超可変領域残基を置換することを ３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８４ 含む。一般に、さらなる開発のために選択される、生じ ８、ＢＡ８９０もしくはＢＡ９３９抗体の任意の１つに た変異体は、それらが生成された親抗体に比べて改善さ 由来し、且つ抗体のフレームワークおよび定常領域が１ れた生物学的特性を有する。そのような置換変異体を生 10 もしくはそれ以上のヒト抗体に由来する抗体を含む。 成するための好都合な方法は、本明細書で述べる技術ま 抗体に由来する可変領域またはＣＤＲは、好ましくはＢ たは当業者に公知の他の技術、たとえばファージディス Ａ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ プレイ（Ｓｃｈｉｅｒ Ｂｉ ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ８９０またはＢＡ９３９抗体 １９９６）を用い の任意の１つの可変領域またはＣＤＲと約９０％∼約１ た親和性成熟を含む。変異体を、次に、本明細書で述べ ００％の同一性を有するが、キメラ抗体が、ＩＬ−６に るように、たとえばＢｉａｃｏｒｅアッセイによって、 結合してＩＬ−６を阻害する能力を維持する限り、置換 それらの生物活性（たとえば結合親和性）に関してスク 、挿入および欠失を含むありとあらゆる修飾が企図され リーニングする。修飾のための良好な候補である超可変 る。ヒト抗体に由来するキメラ、ヒト化またはＣＤＲ移 領域残基を同定するために、アラニン置換突然変異誘発 植抗体の領域は、ヒト抗体と１００％の同一性を有する を実施して、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基 20 必要はない。好ましい実施形態では、免疫原性が無視し を同定することができる。１またはそれ以上の適切なア 得る程度であるためにできるだけ多くのヒトアミノ酸残 ッセイにおいて卓越した特性を有する抗体をさらなる開 基が保持されるが、ヒト残基、特にフレームワーク領域 発に供することができる。 の残基は、必要に応じておよび本発明に従って本明細書 【００４１】 中以下で教示するように置換される。本明細書で開示す 「有効量」は、ある程度の期間にわたってそれを投与さ るそのような修飾は、同時に抗体のヒト化を最大化しつ れる生物において疾患を治療するまたは予防するのに有 つ、ＣＤＲによって形成される抗原結合部位を支持する 効である、たとえば所望投与間隔の間治療効果を提供す ために必要である。 る、抗ＩＬ−６抗体またはフラグメントの量である。 【００４５】 【００４２】 本発明に従って、抗ＩＬ−６ 「治療する」という用語は、（１）状態、障害または疾 30 よび重鎖）の核酸配列および推定アミノ酸配列を図１∼ 患に罹患する可能性があるかまたは素因があるが、まだ ８に示す。ＢＡ００１軽鎖および重鎖可変領域の配列を その状態、障害または疾患の臨床もしくは準臨床症状を 図９に示す。ＢＡ３９９の親和性成熟からの軽鎖および 経験していないまたは示していない動物において発現す 重鎖可変領域の核酸およびアミノ酸配列を図１２∼２８ る状態、障害または疾患の臨床症状の出現を防止または に示す。軽鎖および重鎖可変領域の配列をそれぞれ図３ 遅延させること；（２）状態、障害または疾患を抑制す ０および３１で比較する。重鎖および軽鎖可変領域の各 ること（すなわち疾患、その少なくとも１つの臨床もし 々は、集合して抗原結合部位を形成する３つのＣＤＲを くは準臨床症状の発現、または維持治療の場合はその再 含む。３つのＣＤＲは、主としてＣＤＲを支持するよう 発を停止、低減または遅延させること；および／または に機能する４つのＦＲ領域によって取り囲まれている。 （３）疾患を緩和すること（すなわち状態、障害または 重鎖および軽鎖の可変領域の配列内のＣＤＲの配列は、 疾患またはその臨床もしくは準臨床症状の少なくとも１ 40 Ｋａｂａｔ つの後退を生じさせること）を包含する。治療される患 ｑｕｅｎｃｅｓ 者にとっての利益は、統計的に有意であるか、または少 ｏｆ なくとも患者もしくは医師に認知できる。 ， ４ｔｈ 【００４３】 Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ 測定量に関して本明細書で使用される場合、「約」とい Ｈｕｍａｎ う用語は、測定の目的および使用される測定装置の精度 ｒｎｍｅｎｔ に応じた、一定の注意を払って測定を実施する当業者に ａｓｈｉｎｇｔｏｎ， よって予想される測定量の通常の変動を指す。特に指示 用アラインメントによって、または可変領域の分子モデ されない限り、「約」は、与えられる数値の±１０％の リングによって、たとえばＬｅｖｉｔｔ ｏｌ．， Ｒ．， Ｊ． ２６３：５５１−６７， 変動を指す。 Ｍｏｌ． 50 ｅｔ ａｌ． ｏｆ Ａｂの可変領域（軽鎖お （１９８７） ） Ｊ． Ｉｎｔｅｒｅｓｔ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｍｏｌ． Ｓｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｄ．， ｉｎ Ｕ．Ｓ． ａｎｄ Ｇｏｖｅ Ｏｆｆｉｃｅ， Ｗ Ｄ．Ｃ．によるコンピュータ援 （１９８３ Ｂｉｏｌ． １６８：５９５によ ( 14 ) JP 25 2015-172048 A 2015.10.1 26 って述べられたようなＥＮＣＡＤプログラムを利用して 重鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＨＣ２８（配列番号１５６）を 同定できる。 含む。 【００４６】 【００４９】 好ましい実施形態では、ＣＤＲはＢＡ３９９、ＢＡ４３ 本発明のヒト化抗体、フラグメントおよび領域の定常（ ６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８４８ Ｃ）領域をコードするヒト遺伝子は、公知の方法によっ 、ＢＡ８９０またはＢＡ９３９の任意の１つに由来する て、ヒト胎児肝ライブラリーから誘導できる。ヒトＣ領 。重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲの決定は、十分に当業者 域遺伝子は、ヒト免疫グロブリンを発現し、産生するも の技術範囲内である。たとえばｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ． のを含む、任意のヒト細胞に由来し得る。 ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／参照。 ヒトＣＨ領域は、γ、μ、α、δ、εを含むヒトＨ鎖の 【００４７】 10 公知のクラスまたはアイソタイプ、およびＧ１、Ｇ２、 抗ＩＬ−６抗体のＣＤＲの配列は、ＣＤＲ移植抗体がヒ Ｇ３およびＧ４などのそれらのサブタイプのいずれかに トＩＬ−６に結合して、ヒトＩＬ−６を阻害する能力を 由来し得る。Ｈ鎖アイソタイプは抗体の様々なエフェク 維持する範囲で挿入、置換および欠失によって修飾され ター機能に関与するので、ＣＨ領域の選択は、補体固定 得る。当業者は、本明細書中以下で述べる機能的アッセ 、または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における活性 イを実施することによってこの活性の維持を確認するこ などの、所望エフェクター機能によって導かれる。好ま とができる。 しくは、ＣＨ領域はγ１（ＩｇＧ１）に由来する。 【００４８】 【００５０】 あるいは、ＢＡ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ ヒトＣＬ領域は、ヒトＬ鎖アイソタイプκまたはλのい ８０８、ＢＡ８４０、ＢＡ８４８、ＢＡ８９０またはＢ ずれか、好ましくはκに由来し得る。 Ａ９３９の任意の１つの重鎖可変領域および軽鎖可変領 20 ヒト免疫グロブリンＣ領域をコードする遺伝子は、標準 域全体をヒト定常領域およびフレームワーク領域と組み 的なクローニング技術（Ｓａｍｂｒｏｏｋ， 合わせて、本発明のキメラ抗体を形成し得る。１つの態 ｌ． 様では、親和性成熟からの抗ＩＬ−６ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｂ ＢＡ３ （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ び重鎖アミノ酸配列を図４４に開示する。クローンＢＡ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， ３９９−０１は、軽鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＬＣ０６（配 Ｈａｒｂｏｒ， Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ｍａｎｕａｌ， ９９の上位１０クローンのために利用した可変軽鎖およ ａ Ａ ２ｎｄ Ｅｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｃｏｌｄ Ｎ．Ｙ． ｅｔ ｅｔ Ｓｐｒｉｎｇ （１９８９） ａｌ．， ｅｄｓ． ａｎｄ 列番号７２）と重鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＨＣ−０６（配 Ａｕｓｕｂｅｌ 列番号１３４）を含む。クローンＢＡ３９９−０２は、 ｅｎｔ 軽鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＬＣ０２（配列番号６８）と重 ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ 鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−２５（配列番号１５３）を含む。 30 てヒト細胞から得られる。ヒトＣ領域遺伝子は、Ｌ鎖の クローンＢＡ３９９−０３は、軽鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ− ２つのクラス、Ｈ鎖の５つのクラスおよびそれらのサブ ＬＣ０５（配列番号７１）と重鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−Ｈ クラスを代表する遺伝子を含む公知のクローンから容易 Ｃ２１（配列番号１４９）を含む。クローンＢＡ３９９ に入手可能である。Ｆ（ａｂ −０４は、軽鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＬＣ０６（配列番号 キメラ抗体フラグメントは、適切にトランケートされた ７２）と重鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＨＣ１３（配列番号１ キメラＨ鎖遺伝子を設計することによって調製できる。 ４１）を含む。クローンＢＡ３９９−０５は、軽鎖ＢＡ たとえば、Ｆ（ａｂ ３９９ＣＰＳ−ＬＣ１０（配列番号７６）と重鎖ＢＡ３ ードするキメラ遺伝子は、Ｈ鎖のＣＨ１ドメインおよび ９９ＣＰＳ−ＨＣ１６（配列番号１４４）を含む。クロ ヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列、続いてトランケー ーンＢＡ３９９−０６は、軽鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＬＣ ト分子を生成するための翻訳終止コドンを含む。 ２２（配列番号８８）と重鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＨＣ２ 40 【００５１】 ４（配列番号１５２）を含む。クローンＢＡ３９９−０ 一般に、一例では、本発明のヒト化抗体、フラグメント ７は、軽鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＬＣ１４（配列番号８０ および領域は、抗ＩＬ−６特異的抗体のＨ鎖およびＬ鎖 ）と重鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＨＣ１９（配列番号１４７ 抗原結合領域をコードするＤＮＡセグメントをクローニ ）を含む。クローンＢＡ３９９−０８は、軽鎖ＢＡ３９ ングし、これらのＤＮＡセグメントを、それぞれＣＨお ９ＣＰＳ−ＬＣ１０（配列番号７６）と重鎖ＢＡ３９９ よびＣＬ領域を含むＤＮＡセグメントに連結して、完全 ＣＰＳ−ＨＣ１２（配列番号１４０）を含む。クローン 長キメラ免疫グロブリンコード遺伝子を生成することに ＢＡ３９９−０９は、軽鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＬＣ０９ よって作製される。 （配列番号７５）と重鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＨＣ２４（ 【００５２】 配列番号１５２）を含む。クローンＢＡ３９９−１０は 抗体の可変領域の配列は、キメラ抗体が、ヒトＩＬ−６ 、軽鎖ＢＡ３９９ＣＰＳ−ＬＣ０９（配列番号７５）と 50 に結合して、ヒトＩＬ−６を阻害する能力を維持する範 Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｃｕｒｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａ （１９８７−１９９３））によっ １ １ ）２およびＦａｂなどの ）２フラグメントのＨ鎖部分をコ ( 15 ) JP 27 2015-172048 A 2015.10.1 28 囲で挿入、置換および欠失によって修飾され得る。当業 ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ 者は、本明細書中以下で述べる機能的アッセイを実施す ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ； ることによってこの活性の維持を確認することができる ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａ 。可変領域は、たとえば、配列番号１∼３２の可変領域 ｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ に約５０％∼約１００％の相同性を有し得る。好ましい ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉ−ｈｅｉｄｅｌ 実施形態では、抗体の可変領域は、配列番号１∼３２お ｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ； よび３７∼１６０の可変領域に約８０％∼約１００％の ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌ 相同性を有する。より好ましい実施形態では、可変領域 ｏｇｙ／ＣＨ０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ； は、配列番号１∼３２および３７∼１６０の可変領域に 約９０％∼約１００％の相同性を有する。 ｔｏｏｌｓ ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒ 10 【００５３】 ｇ／１２４２９／ｈｎｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈ ｔｍｌ； １つの特定態様では、本開示の好ましい抗ＩＬ−６ Ｍ ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕ ａｂは、配列番号１に９５％、９６％、９７％、９８％ ｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃ または９９％のアミノ酸配列相同性を有する可変軽鎖領 ａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｍｉｋｅ 域を含み、配列番号３に９５％、９６％、９７％、９８ ｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒ ％または９９％のアミノ酸配列相同性を有する可変重鎖 ｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／； 領域をさらに含む。 ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／ 【００５４】 Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ． １つの特定態様では、本開示の好ましい抗ＩＬ−６ Ｍ ｗｗｗ．ｉｍｍｕ ｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／； ａｂは、配列番号６８∼９８の１つから選択される可変 20 ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ． 軽鎖領域を含む。さらなる特定態様では、本開示の好ま ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉ しい抗ＩＬ−６ ｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／ Ｍａｂは、配列番号６８、７１、７２ 、７５、７６、８０および８８の１つから選択される可 ； 変軽鎖領域を含む。 ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３／３ 【００５５】 ４０９１３．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇ もう１つの特定態様では、本開示の好ましい抗ＩＬ−６ ｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／； Ｍａｂは、配列番号１３０∼１６０の１つから選択さ ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／．ａｂｏｕ れる可変重鎖領域を含む。さらなる特定態様では、本開 ｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ 示の好ましい抗ＩＬ−６ ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ； Ｍａｂは、配列番号１３４、 １４０、１４１、１４４、１４７、１４９、１５２、１ 30 ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖ ５３および１５６の１つから選択される可変重鎖領域を ｉｅｓ／ｌｉｎｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃ 含む。 ｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏ 【００５６】 ｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏ 非ヒトまたはヒト抗体を遺伝子操作するまたはヒト化す ｒｇ／ｓｉｔｅｓ＿ｇｅｏ．ｈｔｍｌ； るための方法も使用でき、当技術分野において周知であ ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉ−ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ る。一般に、ヒト化または遺伝子操作された抗体は、非 ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰＳｔａｒｔ．ｈｔｍｌ ヒト、たとえば、限定されることなく、マウス、ラット ； 、ウサギ、非ヒト霊長動物または他の哺乳動物であるソ ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ． ースからの１またはそれ以上のアミノ酸残基を有する。 ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓ１．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅ これらのヒトアミノ酸残基は、しばしば「インポート」 40 ｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ． 残基と称され、「インポート」残基は、典型的には公知 ｎｗｖｕ．ｅｄｕ／；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ のヒト配列の「インポート」可変、定常または他のドメ ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕｂｌｉｃ／ＩＮＴ インから取られる。公知のヒトＩｇ配列は、たとえば、 ＲＯ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖ 各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、： ｉｒ／Ｖ＿ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒ ．ｆｒ：８１０４／； ｅｚ／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ； ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂ ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔ ｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ ｍｌ； ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／； ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃ ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗ ａｍ．ｃｏｍ／； 50 ｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ； ( 16 ) JP 29 2015-172048 A 2015.10.1 30 ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．ａｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇ る。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を及ぼすこ ｇｅｒ／ＡＨＯｓｅｍｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔ とに直接且つ最も実質的に関与する。本発明の抗体のヒ ｍｌ； ト化または遺伝子操作は、各々全体が、その中で引用さ ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．Ｕｋ／．ａｂｏｕ れる参考文献を含めて、参照により本明細書に組み込ま ｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／； れる、Ｗｉｎｔｅｒ ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａ Ｎａｔｕｒｅ ｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃ ｅｃｈｍａｎｎ ａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｈｕｍａ ２：３２３ ｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ； ｔ ａｌ．， ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃ 10 １９８８））， Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．， ｔｕｒｅ／ｓｔａｔ＿ａｉｍ．ｈｔｍｌ； ｍｍｕｎｏｌ． １５１： ２２９６ ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓ ３２１：５２２ ｅｔ ． Ｂｉｏｌ． ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ ａｒｔｅｒ Ａｃａｄ． Ｒｉ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３３ Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅ ２３９：１５３４ （ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ； ａｎｄ １９６：９０１ Ｊ． Ｊ． ＭｏＩ （１９８７）， Ｐｒｏｃ． Ｕ．Ｓ．Ａ． Ｃ Ｎａｔｌ． ８９：４２８ Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ； ５ （１９９２）； ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒ＿ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｊ． ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｎ／ ９３）、米国特許第５，７２３，３２３号、同第５，９ ｉｂｍ．ｈｔｍｌ． ７６，８６２号、同第５，８２４，５１４号、同第５， Ｋａｂａｔ ｅｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｏｆ 20 Ｐｒｅｓｔａ Ｉ （１９９３）； Ｌｅｓｋ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ． ｅｔ ａｌ．， （１９８６）； （１９８８）； Ｃｈｏｔｈｉａ ．ａｂｏｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂ−ｐａｇｅｓ／ （Ｊｏｎｅｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ｅｔ ａｌ．， １５１ ：２６２３ （１９ ８１７，４８３号、同第５，８１４，４７６号、同第５ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ，７６３，１９２号、同第５，７２３，３２３号、同第 Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ５，７６６，８８６号、同第５，７１４，３５２号、同 （１９８３） 第６，２０４，０２３号、同第６，１８０，３７０号、 に開示されている。 同第５，６９３，７６２号、同第５，５３０，１０１号 【００５７】 、同第５，５８５，０８９号、同第５，２２５，５３９ そのようなインポート配列は、当技術分野で公知のよう 号、同第４，８１６，５６７号、ＰＣＴ／：第ＵＳ９８ に、免疫原性を低減する、または結合、親和性、オンレ ／１６２８０号、同第ＵＳ９６／１８９７８号、同第Ｕ ート（ｏｎ−ｒａｔｅ）、オフレート（ｏｆｆ−ｒａｔ Ｓ９１／０９６３０号、同第ＵＳ９１／０５９３９号、 ｅ）、アビディティー、特異性、半減期もしくは任意の 同第ＵＳ９４／０１２３４号、英国特許第ＧＢ８９／０ 他の適切な特性を低減する、増強するもしくは修飾する 30 １３３４号、同第ＧＢ９１／０１１３４号、同第ＧＢ９ ために使用できる。一般に、可変領域と定常領域の非ヒ ２／０１７５５号；国際公開公報第ＷＯ９０／１４４４ ト配列をヒトまたは他のアミノ酸で置き換える一方で、 ３号、同第ＷＯ９０／１４４２４号、同第ＷＯ９０／１ 非ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の一部または全部が維持さ ４４３０号、欧州特許第ＥＰ れる。抗体はまた、場合により、抗原に対する高い親和 れているものなどの、しかしこれらに限定されない、任 性および他の有益な生物学的特性を保持しつつヒト化す 意の公知の方法を用いて実施できる。 ることができる。この目標を達成するために、ヒト化抗 【００５８】 体を、場合により、親配列およびヒト化配列の三次元モ 本発明のヒト化抗体のヒト定常領域は、任意のクラス（ デルを使用して親配列および様々な概念上のヒト化産物 ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ等）またはア の分析工程によって作製することができる。三次元免疫 イソタイプであり得、κまたはλ軽鎖を含み得る。１つ グロブリンモデルが一般に使用可能であり、当業者によ 40 の実施形態では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ重鎖または規 く知られている。選択した候補免疫グロブリン配列の推 定フラグメント、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ 定三次元立体配座構造を例示し、表示するコンピュータ ３またはＩｇＧ４アイソタイプの少なくとも１つを含む プログラムが利用可能である。 。もう１つの実施形態では、抗ヒトＩＬ−６ヒト抗体は これらの表示の検査により、その残基が候補免疫グロブ 、ＩｇＧ１重鎖およびＩｇＧ１Ｋ軽鎖を含む。本発明の リン配列の機能において果たす可能性のある役割の分析 単離抗ＩＬ−６抗体は、任意の適切なポリヌクレオチド 、すなわち候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能 によってコードされる、本明細書で開示する抗体アミノ 力に影響を及ぼす残基の分析が可能となる。このように 酸配列を含む。好ましくは、抗体または抗原結合フラグ して、標的抗原に対する親和性上昇などの所望抗体特性 メントはヒトＩＬ−６に結合し、それによってタンパク が達成されるように、ＦＲ残基を選択し、コンセンサス 質の少なくとも１つの生物活性を部分的にまたは実質的 配列およびインポート配列から組み合わせることができ 50 に中和する。抗体またはその特定部分もしくは変異体は ２２９２４６号に述べら ( 17 ) JP 31 2015-172048 A 2015.10.1 32 、少なくとも１つの を用いて抗体をコードする（１またはそれ以上の）核酸 ＩＬ−６タンパク質またはフラグメントの少なくとも１ 分子を調製し、発現することによって、または任意の他 つの生物活性を部分的にまたは好ましくは実質的に中和 の適切な方法を用いて、本発明のポリペプチドの発現を し、それによりＩＬ−６のＩＬ−６受容体への結合を介 生じさせる可能な縮重コドンのいずれかを使用すること してまたは他のＩＬ−６依存性または媒介性機構を介し によって作製できる。 て媒介される活性を阻害する。本明細書で使用される、 【００６０】 「中和抗体」という用語は、ＩＬ−６依存性活性を、ア 軽鎖および重鎖についてのコンビナトリアル可変ドメイ ッセイに依存して約２０∼１２０％、好ましくは少なく ンヒト化ライブラリーの液相合成が使用できる。ヒト化 とも約１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６ 軽鎖（ＬＣ）可変ドメインライブラリーの構築は、たと ５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３ 10 えば、ヒト軽鎖フレームワーク（ＦＷ）および非ヒト相 、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％また 補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ライブラリーは、たと はそれ以上阻害することができる抗体を指す。ＩＬ−６ えば、ＦＷとＣＤＲ 依存性活性を阻害する抗ＩＬ−６抗体の能力は、本明細 連結を使用することによって構築される。ライブラリー 書で述べるようにおよび／または当技術分野で公知のよ は、当業者に公知の技術によってＦＷ１−ＣＤＲ１−Ｆ うに、好ましくは少なくとも１つの適切なＩＬ−６タン Ｗ２−ＣＤＲ２−ＦＷ３−ＣＤＲ３の順でＦＷとＣＤＲ パク質または受容体アッセイによって評価される。 ＤＮＡフラグメントの段階的液相 ＤＮＡフラグメントの段階的液相連結を使用すること 【００５９】 によって構築される。たとえば、各々が参照により本明 本発明の少なくとも１つの抗体は、少なくとも１つのＩ 細書に組み込まれる、以下の参考文献の１またはそれ以 Ｌ−６タンパク質、サブユニット、フラグメント、部分 上の技術による。Ｌｏ， またはそれらの任意の組合せに特異的な少なくとも１つ 20 Ａｎｔｉｂｏｄｙ の特定エピトープに結合する。少なくとも１つのエピト ＣＤＲ ープは、タンパク質の少なくとも１つの部分を含む少な ｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， くとも１つの抗体結合領域を含むことができ、前記エピ ｏｔｏｃｏｌｓ． Ｂ． Ｋ．， ２００３， ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ ｇｒａｆｔｉｎｇ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｄｉｔ ｂｙ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｂｙ ａｎｄ ｐｒ Ｂｅｎｎｙ Ｋ． トープは、好ましくはタンパク質の少なくとも１つの細 Ｃ． 胞外、可溶性、親水性、外部または細胞質部分から成る ｌａｒ 。一般に、本発明のヒト抗体または抗原結合フラグメン ； Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．， トは、本明細書で述べる抗ＩＬ−６ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ａ ｍｉｎｉｍａｌｌｙ Ａｂに由来する、 Ｌｏ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ， 少なくとも１つの重鎖可変領域の少なくとも１つのヒト ｍｕｎｏｇｅｎｉｃ 相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３） ｏｄｙ または変異体ならびに少なくとも１つの軽鎖可変領域の 30 Ｒ ｇｒａｆｔｉｎｇ． 少なくとも１つのヒト相補性決定領域（ＣＤＲ４、ＣＤ ｎｅｅｒｉｎｇ， Ｒ５およびＣＤＲ６）または変異体を含む抗原結合領域 ｏｃｏｌｓ． を含有する。特定実施形態では、抗体または抗原結合フ ． Ｌｏ， ラグメントは、対応するＣＤＲ１、２および／または３ Ｍｅｔｈｏｄｓ のアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖ＣＤＲ（ ｏｇｙ， すなわちＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３） ｔｅ， の少なくとも一部を含む抗原結合領域を有し得る。もう Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ １つの特定実施形態では、抗体または抗原結合部分もし Ｐｒｏｔｅｉｎ くは変異体は、対応するＣＤＲ４、５および／または６ ｅｎｅ のアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ（ 40 Ｅｎ ｉｎ ２４８， Ｍｏｌｅｃｕ １３５−１５９ ２００３， ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｉｍ ａｎｔｉｂ ｂｙ ＳＤ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｄｉｔ ｉｎ ２４８， ａｎｄ ｐｒｏｔ ｂｙ Ｂｅｎｎｙ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ３６１−３７６； Ｐ． Ｈ．， Ｋ． Ｃ Ｂｉｏｌ Ｂａｓｓｅｔ ｅｔ ａｌ．， ２００３， ｏｆ Ｄｅｓｉｇｎｅｄ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｅｎｇｉ Ｕｓｉｎｇ Ｇ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ． Ｄｉｒｅｃｔｅｄ すなわちＣＤＲ４、ＣＤＲ５および／またはＣＤＲ６） Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ Ｌｉｂｒａｒｙ の少なくとも一部を含む抗原結合領域を有し得る。好ま ｎ， しい実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントの ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ． ３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲは、ＢＡ３９ ｎｄ ９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８、ＢＡ８４０ ｏｌｅｃｕｌａｒ 、ＢＡ８４８、ＢＡ８９０またはＢＡ９３９の少なくと −３７； も１つの対応するＣＤＲのアミノ酸配列を有する。その Ｃｈａｍｅｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｒｅａｔｉｏ ａｎｄ Ｅｄｉｔ． Ｇｅｏｒｇｉｏｕ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｐ．， ような抗体は、従来技術を用いて抗体の様々な部分（た Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｓ とえばＣＤＲ、フレームワーク）を化学的に共に連結す Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ることによって、組換えＤＮＡテクノロジーの従来技術 50 ｔｉｂｏｄｙ Ａｒｎｏｌｄ ｉｎ ａ Ｍ ２３１， ２９ ｅｔ ａｌ．， ２００１， ｏｎ ａｎｔｉｇｅｎｓ． Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ａｎ Ｅｄｉｔ ( 18 ) JP 33 ｂｙ Ｒ． １４９−１６６； ｄ Ｊｏｎｅｓ， ｓｉｎｇ ｉｎｇ， ｎ Ｌａｂ Ｍａｎｕａｌ ば、任意の所与の抗ＩＬ−６抗体、フラグメントまたは Ｏ’Ｂｒｉｅｎ Ｓ．， ａｎ 変異体についてのアミノ酸置換、挿入または欠失の数は Ｈｕｍａｎｉ 、本明細書で特定するように、４０、３０、２０、１９ ＣＤＲ ｇｒ 、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、 Ｅｎｇｉｎｅｅｒ １０、９、８、７、６、５、４、３、２、１以下、たと Ｋｏｎｔｅｒｍａｎ えば１∼３０またはその中の任意の範囲または値である Ｓｐｒｉｎｇｅｒ 。 Ｔ．， ａｎｄ ２００１， ｂｙ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｄｉｔ ａｎｄ Ｌａｂ 述したものを含む多くの因子に依存する。一般的に言え ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｆｔｉｎｇ． Ｓ． ｂｙ Ｒ． Ｄｕｂｅｌ， Ｍａｎｕａｌ， 2015.10.1 Ｄ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ， A 34 Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ｕｂｅｌ， 2015-172048 Ｓ． ５６７−５９０。 【００６４】 【００６１】 10 機能に必須である本発明の抗ＩＬ−６抗体中のアミノ酸 上記に定義された重鎖または軽鎖可変領域またはＣＤＲ は、部位指定突然変異誘発またはアラニン置換突然変異 領域を含むヒトＩＬ−６に結合する抗体は、当技術分野 誘発などの、当技術分野で公知の方法によって同定でき で公知のようにおよび／または本明細書で述べるように る（たとえば、Ａｕｓｕｂｅｌ， 、ファージディスプレイ（Ｋａｔｓｕｂｅ， ａｐｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｄ， Ｉｎｔ Ｙ．， Ｊ． ＭｏＩ． ｌ（５）：８６３−８６８ ａｎｄ （１９９８）） ８， Ｗｅｌｌｓ， ８１−１０８５ ｓｕｐｒａ， Ｃｈ １５； Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０ （１９８９））。後者の手順は、分子 またはトランスジェニック動物を用いる方法などの、適 内のあらゆる残基で１個のアラニン突然変異を導入する 切な方法を用いて作製できる。たとえば、抗体、特定部 。次に、生じた突然変異体分子を、少なくとも１つのＩ 分または変異体は、コード核酸またはその部分を使用し Ｌ−６中和活性などの、しかしこれに限定されない生物 て適切な宿主細胞において発現させることができる。 20 活性に関して試験する。抗体結合のために重要な部位も 【００６２】 、結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識などの構造解 前述したように、本発明はまた、配列が本明細書で述べ 析によって同定できる（Ｓｍｉｔｈ， るアミノ酸配列と実質的に同じである配列のアミノ酸を Ｊ． ＭｏＩ． Ｂｉｏｌ． ｅｔ ａｌ．， ２２４：８９９− ９ 含む抗体、抗原結合フラグメント、免疫グロブリン鎖お ０４ よびＣＤＲに関する。そのような抗ＩＬ−６抗体は、本 ａｎｄ （１９９２） 明細書で特定するように、自然の突然変異またはヒト操 ｃｅ 作のいずれかからの、１またはそれ以上のアミノ酸置換 （１９９２））。 、欠失または付加を含み得る。好ましくは、そのような 【００６５】 抗体または抗原結合フラグメントおよびそのような鎖ま 本発明の抗ＩＬ−６抗体は、配列番号１、３、５、７、 たはＣＤＲを含む抗体は、高い親和性（たとえば約１０ 30 ９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５ - 9 ｄｅ Ｖｏｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎ ２５５：３０６−３１２ Ｍまたはそれ以下のＫＤ）でヒトＩＬ−６に結合する 、２７、２９、３１、６８、６９、７０、７１、７２、 ことができる。本明細書で述べる配列と実質的に同じで ７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８ あるアミノ酸配列は、保存的アミノ酸置換、ならびにア １、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９ ミノ酸欠失および／または挿入を含有する配列を包含す 、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、 る。保存的アミノ酸置換は、第一アミノ酸のものに類似 ９８、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３ する化学的および／または物理的特性（たとえば電荷、 ５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１ 構造、極性、疎水性／親水性）を有する第二アミノ酸に 、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、 よる第一アミノ酸の置換を指す。保存的置換は、以下の １４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１ 群内の１つのアミノ酸の別のアミノ酸による置換を含む ５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９または ：リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）およびヒスチジン（ 40 １６０に由来するＣＤＲの少なくとも１つの連続するア Ｈ）；アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ） ミノ酸の５から全部より選択される少なくとも一部、一 ；アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ 連、または組合せを含み得るが、これらに限定されない ）、トレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、Ｋ、Ｒ、Ｈ、 。 ＤおよびＥ；アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン 【００６６】 （Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニ 抗ＩＬ−６抗体は、場合により、配列番号１、３、５、 ルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、メチオニン ・・・３１の少なくとも１つに由来するＣＤＲの連続す （Ｍ）、システイン（Ｃ）およびグリシン（Ｇ）；Ｆ、 るアミノ酸の７０∼１００％の少なくとも１つのポリペ ＷおよびＹ； プチドをさらに含み得る。１つの特定態様では、抗ＩＬ Ｃ、ＳおよびＴ。 【００６３】 −６抗体は、配列番号１に９５∼９９％の配列相同性を 言うまでもなく、当業者が行うアミノ酸置換の数は、上 50 有するポリペプチド、好ましくは配列番号６８∼９８の ( 19 ) JP 35 2015-172048 A 2015.10.1 36 １つを含むＣＤＲを含有する。もう１つの特定態様では ０％、最も好ましくは少なくとも８０％、９０％または 、抗ＩＬ−６抗体は、配列番号３に９５∼９９％の配列 ９５％∼１００％の比活性を有する。酵素活性および基 相同性を有するポリペプチド、好ましくは配列番号１３ 質特異性の程度を検定し、数量化する方法は当業者に周 ０∼１６０の１つを含むＣＤＲを含有する。 知である。 【００６７】 【００７０】 １つの実施形態では、免疫グロブリン鎖またはその部分 もう１つの態様では、本発明は、有機部分の共有結合に （たとえば可変領域、ＣＤＲ）のアミノ酸配列は、配列 よって修飾された、本明細書で述べるようなヒト抗体お 番号１、３、５、・・・３１の少なくとも１つのアミノ よび抗原結合フラグメントに関する。そのような修飾は 酸配列に約７０∼１００％の同一性（たとえば７０、７ 、改善された薬物動態特性（たとえば高いインビボ血清 １、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９ 10 半減期）を有する抗体または抗原結合フラグメントを生 、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、 成し得る。有機部分は、直鎖状または分枝鎖親水性ポリ ８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９ マー基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であり得る。 ６、９７、９８、９９、１００またはその中の任意の範 特定実施形態では、親水性ポリマー基は約８００∼約１ 囲もしくは値）を有する。たとえば、軽鎖可変領域のア ２０，０００ダルトンの分子量を有することができ、ポ ミノ酸配列は、配列番号１、５、９、１３、１７、２１ リアルカングリコール（たとえばポリエチレングリコー 、２５、２９の配列と比較できる。好ましくは、７０∼ ル（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）） １００％のアミノ酸同一性（すなわち９０、９１、９２ 、炭水化物ポリマー、アミノ酸ポリマーまたはポリビニ 、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００ ルピロリドンであり得、脂肪酸基または脂肪酸エステル またはその中の任意の範囲もしくは値）は、当技術分野 基は約８∼約４０個の炭素原子を含み得る。 で公知のように、適切なコンピュータアルゴリズムを用 20 【００７１】 いて決定される。１つの特定態様では、抗ＩＬ−６抗体 本発明の修飾抗体および抗原結合フラグメントは、直接 は、配列番号１に９５∼９９％の配列相同性を有するポ または間接的に抗体に共有結合された１またはそれ以上 リペプチド、好ましくは配列番号６８∼９８の１つを含 の有機部分を含み得る。本発明の抗体または抗原結合フ む可変領域を含有する。もう１つの特定態様では、抗Ｉ ラグメントに結合される各々の有機部分は、独立して親 Ｌ−６抗体は、配列番号３に９５∼９９％の配列相同性 水性ポリマー基、脂肪酸基または脂肪酸エステル基であ を有するポリペプチド、好ましくは配列番号１３０∼１ り得る。本明細書で使用される、「脂肪酸」という用語 ６０の１つを含む可変領域を含有する。 は、モノカルボン酸およびジカルボン酸を包含する。「 【００６８】 親水性ポリマー基」は、この用語が本明細書で使用され 例示的な重鎖および軽鎖可変領域配列は、配列番号１、 る場合、オクタンよりも水により可溶性である有機ポリ ３、５、・・・３１、６８∼９８または１３０∼１６０ 30 マーを指す。たとえば、ポリリシンはオクタンよりも水 において提供される。本発明の抗体またはその特定変異 により可溶性である。従って、ポリリシンの共有結合に 体は、本発明の抗体からの任意の数の連続するアミノ酸 よって修飾された抗体は本発明に包含される。本発明の 残基を含むことができ、その数は、抗ＩＬ−６抗体中の 抗体を修飾するのに適する親水性ポリマーは、直鎖状ま 連続残基数の１０∼１００％から成る整数の群より選択 たは分枝鎖であり得、たとえばポリアルカングリコール される。場合により （たとえば、ＰＥＧ、モノメトキシ−ポリエチレングリ 、この連続するアミノ酸のサブ配列は、少なくとも約１ コール（ｍＰＥＧ）、ＰＰＧ等）、炭水化物（たとえば ０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０ デキストラン、セルロース、オリゴ糖、多糖類等）、親 、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、 水性アミノ酸のポリマー類（たとえばポリリシン、ポリ １６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２ アルギニン、ポリアスパラギン酸等）、ポリアルカンオ ２０、２３０、２４０、２５０もしくはそれ以上のアミ 40 キシド類（たとえばポリエチレンオキシド、ポリプロピ ノ酸長、またはその中の任意の範囲もしくは値である。 レンオキシド等）およびポリビニルピロリドンを含む。 さらに、そのようなサブ配列の数は、１∼２０から成る 好ましくは、本発明の抗体を修飾する親水性ポリマーは 群から選択される任意の整数、たとえば少なくとも２、 、個別の分子的実体として約８００∼約１５０，０００ ３、４または５であり得る。 ダルトンの分子量を有する。たとえばＰＥＧ５０００お 【００６９】 よびＰＥＧ２０，０００が使用でき、前記下付き文字は 当業者が認識するように、本発明は、本発明の少なくと ダルトンで表したポリマーの平均分子量である。親水性 も１つの生物学的に活性な抗体を包含する。生物学的に ポリマー基は、１∼約６個のアルキル基、脂肪酸基また 活性な抗体は、天然（非合成）、内因性または関連およ は脂肪酸エステル基で置換することができる。脂肪酸ま び公知抗体の比活性の少なくとも２０％、３０％または たは脂肪酸エステル基で置換された親水性ポリマーは、 ４０％、好ましくは少なくとも５０％、６０％または７ 50 適切な方法を使用することによって調製できる。たとえ ( 20 ) JP 37 2015-172048 A 2015.10.1 38 ば、アミン基を含むポリマーは、脂肪酸または脂肪酸エ 基（たとえば親水性ポリマー、脂肪酸または脂肪酸エス ステルのカルボキシレートとカップリングさせることが テル）に直接、またはリンカー部分、たとえば１もしく でき、脂肪酸または脂肪酸エステル上の活性化カルボキ はそれ以上の炭素原子が酸素、窒素または硫黄などのヘ シレート（たとえばＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾール テロ原子によって置換されていてもよい二価Ｃ1 −Ｃ1 2 で活性化された）は、ポリマー上のヒドロキシル基とカ 基を介して結合され得る。適切なリンカー ップリングさせることができる。 部分は、たとえばテトラエチレングリコール、−（ＣＨ 【００７２】 2 本発明の抗体を修飾するのに適した脂肪酸および脂肪酸 ＮＨ−および−ＣＨ2 −Ｏ−ＣＨ2 −ＣＨ2 −Ｏ−ＣＨ2 − エステルは、飽和であり得るかまたは１もしくは以上の ＣＨ2 −Ｏ 不飽和単位を含有し得る。本発明の抗体を修飾するのに 10 −ＣＨ−ＮＨ−を含む。リンカー部分を含む変性剤は、 適した脂 たとえばモノ−Ｂｏｃ−アルキルジアミン（たとえばモ 肪酸は、たとえばｎ−ドデカノエート（Ｃ1 2 、ラウレー ノ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン、モノ−Ｂｏｃ−ジアミ ト）、ｎ−テトラデノエート（Ｃ1 4 、ミリステート）、 ノヘキサン）を１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ ｎ−オクタデカノエート（Ｃ1 8 、ステアレート）、ｎ− プロピルカルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で脂肪酸と エイコサノエート（Ｃ2 0 、アラキデート）、ｎ−ドコサ 反応させて遊離アミンと脂肪酸カルボキシレートとの間 ノエート（Ｃ2 2 、ベヘネート）、ｎ−トリアコンタノエ でアミド結合を形成することによって生成できる。Ｂｏ ート（Ｃ3 0 ）、ｎ−テトラコンタノエート（Ｃ4 0 ）、シ ｃ保護基は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で処理して、 ス−δ９−オクタデカノエート（Ｃ1 8 、オレエート）、 前述したように別のカルボキシレートにカップリングさ すべてのシス−δ５，８，１１，１４−エイコサテトラ せ得る第一級アミンを露出させることによって生成物か エノエート（Ｃ2 0 、アラキドネート）、オクタン二酸、 20 ら除去できるか、またはマレイン酸無水物と反応させ、 テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸等 生じた生成物を環化して脂肪酸の活性化マレイミド誘導 を含む。適切な脂肪酸エステルは、直鎖または分枝鎖低 体を生成することができる。（たとえば、その教示全体 級アルキル基を含むジカルボン酸のモノエステルを包含 が参照により本明細書に組み込まれる、Ｔｈｏｍｐｓｏ する。低級アルキル基は、１∼約１２個、好ましくは１ ｎ， ∼約６個の炭素原子を含み得る。 国際公開公報第ＷＯ９２／１６２２１号参照）。 【００７３】 【００７４】 修飾ヒト抗体および抗原結合フラグメントは、１または 本発明の修飾抗体は、ヒト抗体または抗原結合フラグメ それ以上の変性剤との反応などの、適切な方法を用いて ントを変性剤と反応させることによって生成できる。た 調製できる。「変性剤」は、この用語が本明細書で使用 とえば、アミン反応性変性剤、たとえばＰＥＧのＮＨＳ される場合、活性化基を含有する適切な有機基（たとえ 30 エステルを使用することにより、有機部分を非部位特異 ば親水性ポリマー、脂肪酸、脂肪酸エステル）を指す。 的に抗体に結合することができる。修飾ヒト抗体または 「活性化基」は、適切な条件下で、２番目の化学基と反 抗原結合フラグメントはまた、抗体または抗原結合フラ 応し、それによって変性剤と２番目の化学基の間で共有 グメントのジスルフィド結合（たとえば鎖内ジスルフィ 結合を形成することができる化学的部分または官能基で ド結合）を還元することによっても調製できる。還元さ ある。たとえば、アミン反応性活性化基は、トシレート れた抗体または抗原結合フラグメントを、次に、チオー 、メシレート、ハロ（クロロ、ブロモ、フルオロ、ヨー ル反応性変性剤と反応させて本発明の修飾抗体を生成す ド）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＭＨ ることができる。本発明の抗体の特定部位に結合された Ｓ）等のような求電子基を含む。チオール類と反応する 有機部分を含む修飾ヒト抗体および抗原結合フラグメン ことができる活性化基は、たとえばマレイミド、ヨード トは、逆タンパク質分解（Ｆｉｓｃｈ アセチル、アクリロリル、ピリジルジスルフィド、５− 40 ）3 −、−ＮＨ−（ＣＨ2 ）6 −ＮＨ−、−（ＣＨ2 ）2 − ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ チオール−２−ニトロ安息香酸チオール（ＴＮＢ−チオ ７−１５３ ール）等を含む。アルデヒド官能基は、アミンまたはヒ ９２）； ドラジド含有分子に結合することができ、アジド基は三 ｎｊｕｇａｔｅ 価リン基と反応してホスホルアミデートまたはホスホル （１９９４）； イミド結合を形成することができる。分子中に活性化基 ｒｏｔｅｉｎ を導入する適切な方法は当技術分野において公知である ２４１ （たとえばＨｅｒｎａｎｓｏｎ， Ｂｉｏｏｒｇ． ｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｇ． Ｔ．， Ｂｉ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｓａｎ Ａｃ ａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ： Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ． （１９９６）参照）。活性化基は、有機 50 ６８ ３：１４ （１９ Ｗｅｒｌｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ．， Ｋｕｍａｒａｎ Ｓｃｉ． （１９９７）； Ｂｉｏｃｏ ５：４１１−４１７ ａｌ．， Ｐ ６（１０）：２２３３− ｅｔ ２ Ｉｔｏｈ Ｃｈｅｍ．， ｅｔ ａｌ．， ２４（１）： ５９− （１９９６）； Ｃａｐｅｌｌａｓ ｏｌ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ．， ｅｔ Ｂｉｏｅｎｇ．， ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎ ５６（４）：４５６−４６ ( 21 ) JP 39 （１９９７））、およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ， ． Ｔ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ． A 2015.10.1 40 ３ ｑｕｅｓ， 2015-172048 Ｇ の約７５％未満、または好ましくは約５０％未満におい Ｔｅｃｈｎｉ て有意のＨＡＨＡ、ＨＡＣＡまたはＨＡＭＡ応答を生じ Ｐｒｅｓｓ： Ｓａｎ させること、および／または治療される患者において低 （１９９６）に記載さ い力価をもたらすこと（二重抗原酵素免疫検定法で測定 れている方法などの、適切な方法を用いて調製できる。 される約３００未満、好ましくは約１００未満）（全体 【００７５】 が参照により本明細書に組み込まれる、Ｅｌｌｉｏｔｔ 本発明の抗体は、広い範囲の親和性（ＫD ）でヒトＩＬ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３４４：１１２５−１ −６に結合することができる。 １２７（１９９４））と定義される。 好ましい実施形態では、本発明の少なくとも１つのヒト 【００７８】 ｍＡｂは、場合により、高い親和性でヒトＩＬ−６に結 10 少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有す 合し得る。たとえば、ｍＡｂは、０．１∼９．９（また るモノクローナル、ヒト化抗体である二重特異性、ヘテ はその中の任意の範囲もしくは値）×１０ - 7 - 8 、 ロ特異性、ヘテロコンジュゲートまたは同様の抗体もま またはそ た使用できる。本発明の場合、結合特異性の一方は少な の中の任意の範囲もしくは値のような、しかしこれらに くとも１つのＩＬ−６タンパク質に対してであり、他方 １０ - 9 、１０ - 1 0 、１０ - 1 1 限定されない、約１０ - 7 - 1 2 、１０ 、１０ 、１０ - 1 3 Ｍまたはそれ以下のＫＤでヒト は任意の他の抗原に対してである。二重特異性抗体を作 ＩＬ−６に結合することができる。 製する方法は当技術分野において公知である。伝統的に 【００７６】 、二重特異性抗体の組換え生産は、２本の重鎖が異なる 抗原に対する抗体の親和性またはアビディティーは、任 特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の 意の適切な方法を用いて実験的に決定することができる 共発現に基づく（Ｍｉｌｓｔｅ 。（たとえば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ， ｉｎ ｅｔ “Ａｎｔｉｂｏｄｙ− Ａｎｔｉｇｅｎ ａｃｔｉｏｎｓ，煤@Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍ ｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ． Ｅｄ．， Ｅ．， ｅｗ ｂｙ， Ｙｏｒｋ， Ｒａｖｅｎ Ｎ． Ｊａｎｉｓ ａｌ．， 20 Ｉｎｔｅｒ Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ． Ｗ アドローマ）は１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物 Ｎ を産生し、そのうちの１つだけが正しい二重特異性構造 Ｋｕ を有する。通常はアフィニティークロマトグラフィー工 Ｐｒｅｓｓ： Ｙ． （１９８４）； ａｎｄ ３０５： ンダムな組合せのゆえに、これらのハイブリドーマ（ク Ｐａｕｌ， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｈ． ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ５３７（１９８３））。免疫グロブリン重鎖と軽鎖のラ Ｗ． Ｃｏｍｐａｎｙ： 程によって行われる、正しい分子の精製はかなり面倒で Ｎ あり、生成物の収率は低い。同様の手順は、たとえば、 （１９９２）；および本 各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公 明細書で述べる方法参照。）特定の抗体−抗原相互作用 開公報第ＷＯ９３／０８８２９号、米国特許第６，２１ の測定される親和性は、異なる条件（たとえば塩濃度、 30 ０，６６８号、同第６，１９３，９６７号、同第６，１ ｐＨ）下で測定した場合異なり得る。従って、親和性お ３２，９９２号、同第６，１０６，８３３号、同第６， よび他の抗原結合パラメータ（たとえば、ＫＤ、Ｋａ、 ０６０，２８５号、同第６，０３７，４５３号、同第６ Ｋｄ）の測定は、好ましくは抗体および抗原の標準化溶 ，０１０，９０２号、同第５，９８９，５３０号、同第 液、ならびに本明細書で述べる緩衝液などの標準化緩衝 ５，９５９，０８４号、同第５，９５９，０８３号、同 液で行われる。 第５，９３２，４４８号、同第５，８３３，９８５号、 【００７７】 同第５，８２１，３３３号、同第５，８０７，７０６号 本発明の方法および組成物において有用な抗ＩＬ−６抗 、同第５，６４３，７５９号、同第５，６０１，８１９ 体は、ＩＬ−６に高い親和性で結合することならびに、 号、同第５，５８２，９９６号、同第５，４９６，５４ 場合によりおよび好ましくは、低い毒性を有することを ９号、同第４，６７６，９８０号、国際公開公報第ＷＯ 特徴とする。特に、可変領域、定常領域およびフレーム 40 ９１／００３６０号、同第ＷＯ９２／００３７３号、欧 ワークなどの個々の成分が、個別におよび／または集合 州特許第ＥＰ０３０８９号、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ 的に、場合によりおよび好ましくは、低い免疫原性を有 ｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ する、本発明の抗体、特定フラグメントまたは変異体は Ｊ．１０：３６５５（１９９１），Ｓｕｒｅｓｈ 、本発明において有用である。本発明において使用でき ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｅ ｅｔ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ る抗体は、場合により、症状の測定可能な緩和ならびに ｙ １２１：２１０（１９８６）に開示されている。 低いおよび／または許容される毒性で長期間にわたって 【００７９】 患者を治療するそれらの能力を特徴とする。低いまたは 核酸分子 許容される免疫原性および／または高い親和性、ならび 配列番号１、３、５、・・・３１、６８∼９８または１ に他の適切な特性は、達成される治療結果に寄与し得る ３０∼１６０の少なくとも１つの連続するアミノ酸の少 。「低い免疫原性」は、本明細書では、治療される患者 50 なくとも７０∼１００％をコードするヌクレオチド配列 ( 22 ) JP 41 2015-172048 A 2015.10.1 42 、その特定フラグメント、変異体もしくはコンセンサス トのアミノ酸配列をコードするもの；全長抗体またはそ 配列、またはこれらの配列の少なくとも１つを含む寄託 の一部のコード配列；抗体、フラグメントまたは部分の されたベクターなどの、本明細書で提供される情報を使 コード配列、ならびに付加的な配列、たとえば転写、ス 用して、少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体をコードする プライシングおよびポリアデニル化シグナルを包含する 本発明の核酸分子が、本明細書で述べるまたは当技術分 ｍＲＮＡプロセシングにおいて役割を果たす（たとえば 野で公知の方法を用いて入手できる。 リボソーム結合およびｍＲＮＡの安定性）、転写される 【００８０】 が翻訳されない配列のような、非コード５’および３’ 本発明の核酸分子は、ｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡ 配列が含むがこれらに限定されない、付加的な非コード または任意の他の形態などのＲＮＡの形態、またはクロ 配列と共に、少なくとも１つのイントロンのような上記 ーニングによって得られるもしくは合成によって生成さ 10 の付加的コード配列を伴うまたは伴わない、少なくとも れるｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを含むがこれらに限定 １つのシグナルリーダーまたは融合ペプチドのコード配 されない、ＤＮＡの形態、またはそれらの任意の組合せ 列；付加的な機能を提供するもののような、付加的なア であり得る。ＤＮＡは、三本鎖、二本鎖もしくは一本鎖 ミノ酸をコードする付加的なコード配列を包含するが、 、またはそれらの任意の組合せであり得る。ＤＮＡまた これらに限定されない。従って、抗体をコードする配列 はＲＮＡの少なくとも１本の鎖の任意の部分は、センス は、抗体フラグメントまたは部分を含む融合抗体の精製 鎖としても知られるコード鎖であり得、またはアンチセ を容易にするペプチドをコードする配列などの、マーカ ンス鎖とも称される非コード鎖であり得る。 ー配列に融合することができる。 【００８１】 【００８３】 本発明の単離された核酸分子は、場合により１またはそ 本明細書で述べるポリヌクレオチドに選択的にハイブリ れ以上のイントロンを伴う、オープンリーディングフレ 20 ダイズするポリヌクレオチド ーム（ＯＲＦ）、たとえば、限定されることなく、少な 本発明は、本明細書で開示するポリヌクレオチドに選択 くとも１つの重鎖（たとえば配列番号４、８、１２、１ 的ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする ６、２０、２４、２８、３２もしくは９９∼１２９）ま 単離核酸を提供する。従って、この実施形態のポリヌク たは軽鎖（たとえば配列番号２、６、１０、１４、１８ レオチドは、そのようなポリヌクレオチドを含む核酸を 、２２、２６、３０もしくは３７∼６７）のＣＤＲ１、 単離する、検出するおよび／または定量するために使用 ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３のような、少なくとも できる。たとえば、本発明のポリヌクレオチドは、寄託 １つのＣＤＲの少なくとも１つの特定部分を含む核酸分 されたライブラリー中の部分または完全長クローンを同 子；抗ＩＬ−６抗体または可変領域についてのコード配 定する、単離するまたは増幅するのに使用できる。一部 列（たとえば配列番号２、４、６、・・・３２、３７∼ の実施形態では、ポリヌクレオチドは、単離された、ま ６７または９９∼１２９）を含む核酸分子；ならびに上 30 たはさもなければヒトもしくは哺乳動物核酸ライブラリ 述したものと実質的に異なるが、本明細書に述べるよう ーからのｃＤＮＡに相補的な、ゲノム配列またはｃＤＮ におよび／または当技術分野において公知のように、遺 Ａ配列である。 伝暗号の縮重のために、まだなお少なくとも１つの抗Ｉ 【００８４】 Ｌ−６抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分 好ましくは、ｃＤＮＡライブラリーは、少なくとも８０ 子を包含し得る。言うまでもなく、遺伝暗号は当技術分 ％の完全長配列、好ましくは少なくとも８５％または９ 野において周知である。従って、本発明の特異的抗ＩＬ ０％の完全長配列、より好ましくは少なくとも９５％の −６抗体をコードするそのような縮重核酸変異体を作製 完全長配列を含む。ｃＤＮＡライブラリーは、まれな配 することは当業者にとって日常的である。たとえばＡｕ 列の表示を高めるために基準化され得る。 ｓｕｂｅｌ 低または中ストリンジェンシーのハイブリダイゼーショ ｅｔ ａｌ．、前出参照。そしてそのよう な核酸変異体は本発明に包含される。本発明の単離核酸 40 ン条件は、典型的には、しかし排他的ではなく、相補的 分子の非限定的な例は、それぞれ、ＨＣ ＣＤＲ１、Ｈ 配列に対して低い配列同一性を有する配列に関して使用 Ｃ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ１、ＬＣ される。中および高ストリンジェンシー条件は、場合に ＣＤＲ３、ＨＣ可変領域およびＬＣ より、より大きな同一性の配列に関して使用できる。低 可変領域をコードする核酸の非限定的な例に対応する、 ストリンジェンシー条件は、約７０％の配列同一性を有 配列番号２、４、６、・・・３２、３７∼６７または９ する配列の選択的ハイブリダイゼーションを可能にし、 ９∼１２ オーソロガスまたはパラロガス配列を同定するために使 ９を含む。 用できる。 【００８２】 【００８５】 本明細書で示すように、抗ＩＬ−６抗体をコードする核 場合により、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書で 酸を含む本発明の核酸分子は、単独で、抗体フラグメン 50 述べるポリヌクレオチドによってコードされる抗体の少 ＣＤＲ２、ＬＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ( 23 ) JP 43 2015-172048 A 2015.10.1 44 なくとも一部をコードする。本発明のポリヌクレオチド づくプローブを使用してスクリーニングできる。プロー は、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドへの選 ブを使用してゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ配列とハイブ 択的ハイブリダイゼーションのために使用できる核酸配 リダイズし、同じかまたは異なる生物において相同な遺 列を包含する。たとえば、各々全体が参照により本明細 伝子を単離することができる。当業者は、ハイブリダイ 書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ、前出；Ｃｏｌｌｉ ゼーションの様々な度合のストリンジェンシーがアッセ ｇａｎ、前出参照。 イにおいて使用できること；およびハイブリダイゼーシ 【００８６】 ョンまたは洗浄媒質のいずれかがストリンジェントであ 核酸の構築 り得ることを認識する。ハイブリダイゼーションの条件 本発明の単離核酸は、当技術分野において周知のように がストリンジェントになると共に、二本鎖の形成が起こ 、（ａ）組換え法、（ｂ）合成技術、（ｃ）精製技術、 10 るためにはプローブと標的との間により大きな度合の相 またはそれらの組合せを用いて作製することができる。 補性が存在しなければならない。ストリンジェンシーの 【００８７】 程度は、温度、イオン強度、ｐＨ、およびホルムアミド 核酸は、本発明のポリヌクレオチドに加えて配列を好都 などの部分的に変性する溶媒の存在の１またはそれ以上 合に含み得る。たとえば、ポリヌクレオチドの単離に役 によって制御され得る。たとえば、ハイブリダイゼーシ 立つように１またはそれ以上のエンドヌクレアーゼ制限 ョンのストリンジェンシーは、たとえば０％∼５０％の 部位を含むマルチクローニング部位を核酸に挿入するこ 範囲内のホルムアミドの濃度の操作を介して、反応物溶 とができる。また、本発明の翻訳されたポリヌクレオチ 液の極性を変えることによって好都合に変化する。検出 ドの単離に役立つように翻訳可能な配列を挿入すること 可能な結合のために必要とされる相補性（配列同一性） ができる。たとえば、ヘキサ−ヒスチジンマーカー配列 の程度は、ハイブリダイゼーション媒質および／または は、本発明のタンパク質を精製する好都合な手段を提 20 洗浄媒質のストリンジェンシーに従って異なる。相補性 供する。コード配列を除く本発明の核酸は、場合により の程度は、最適には１００％、または７０∼１００％、 、本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび／ま またはその中の任意の範囲もしくは値である。しかし、 たは発現のためのベクター、アダプターまたはリンカー プローブおよびプライマーにおける小さな配列変異は、 である。 ハイブリダイゼーションおよび／または洗浄媒質のスト 【００８８】 リンジェンシーを低下させることによって相殺され得る そのようなクローニングおよび／または発現配列に、ク ことが理解されるべきである。 ローニングおよび／または発現におけるそれらの機能を 【００９１】 最適化する、ポリヌクレオチドの単離に役立つ、または ＲＮＡまたはＤＮＡの増幅の方法は当技術分野において 細胞へのポリヌクレオチドの導入を改善するために付加 周知であり、本明細書で提示する教示および指針に基づ 的な配列を加えることができる。クローニングベクター 30 き、過度の実験を必要とせずに本発明に従って使用でき 、発現ベクター、アダプターおよびリンカーの使用は当 る。 技術分野において周知である。（たとえば、Ａｕｓｕｂ ＤＮＡまたはＲＮＡ増幅の公知の方法は、ポリメラーゼ ｅｌ、；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、前出参照）。 連鎖反応（ＰＣＲ）および関連増幅工程（たとえば、Ｍ 【００８９】 ｕｌｌｉｓ， 核酸を構築するための組換え法 ，１９５号、同第４，６８３，２０２号、同第４，８０ ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはそれらの任意の ０，１５９号、同第４，９６５，１８８号；Ｔａｂｏｒ 組合せなどの、本発明の単離核酸組成物は、当業者に公 ， ｅｔ 知の様々なクローニング方法を用いて生物学的ソースか および同第４，９２１，７９４号；Ｉｎｎｉｓへの米国 ら入手できる。一部の実施形態では、ストリンジェント 特許第５，１４２，０３３号；Ｗｉｌｓｏｎ， な条件下で、本発明のポリヌクレオチドに選択的にハイ 40 ａｌ．への米国特許第５，１２２，４６４号；Ｉｎｎｉ ブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブを、ｃＤＮ ｓへの米国特許第５，０９１，３１０号；Ｇｙｌｌｅｎ ＡまたはゲノムＤＮＡライブラリー中の所望配列を同定 ｓｔｅｎ，ｅｔ するのに使用する。ＲＮＡの単離ならびにｃＤＮＡおよ ５８４号；Ｇｅｌｆａｎｄ， びゲノムライブラリーの構築は当業者に周知である（た 特許第４，８８９，８１８号；Ｓｉｌｖｅｒ， とえば、Ａｕｓｕｂｅｌ、；またはＳａｍｂｒｏｏｋ、 ａｌへの米国特許第４，９９４，３７０号；Ｂｉｓｗａ 前出参照）。 ｓへの米国特許第４，７６６，０６７号；Ｒｉｎｇｏｌ 【００９０】 ｄへの米国特許第４，６５６，１３４号参照）ならび 核酸スクリーニングおよび単離方法 に二本鎖ＤＮＡ合成の鋳型として標的配列に対するアン ｃＤＮＡまたゲノムライブラリーは、本明細書で開示す チセンスＲＮＡを用いるＲＮＡ媒介増幅（Ｍａｌｅｋ， るもののような、本発明のポリヌクレオチドの配列に基 50 ｅｔ ｅｔ ａｌ．への米国特許第４，６８３ ａｌ．への米国特許第４，７９５，６９９号 ａｌ． ｅｔ への米国特許第５，０６６， ｅｔ ａｌ． への米国 ｅｔ ａｌ．への米国特許第５，１３０，２３８号、 ( 24 ) JP 45 2015-172048 A 2015.10.1 46 商標名ＮＡＳＢＡ）を含むが、これらに限定されず、前 調節配列に作動可能に連結された本発明のポリヌクレオ 記参考文献の内容全体が参照により本明細書に組み込ま チドを含む。異種および非異種（すなわち内因性）プロ れる。（たとえば、Ａｕｓｕｂｅｌ、前出；またはＳａ モーターの両方が、本発明の核酸の発現を指令するため ｍｂｒｏｏｋ、前出参照）。 に使用できる。 【００９２】 【００９５】 たとえば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術は、本 一部の実施形態では、プロモーター、エンハンサーまた 発明のポリヌクレオチドおよび関連遺伝子の配列をゲノ は他のエレメントとして働く単離核酸を、本発明のポリ ムＤＮＡまたはｃＤＮＡライブラリーから直接増幅する ヌクレオチドの発現を上方調節または下方調節するよう ために使用できる。ＰＣＲおよび他のインビトロ増幅方 に本発明のポリヌクレオチドの非異種形態の適切な位置 法はまた、たとえば、発現されるタンパク質をコードす 10 （上流、下流またはイントロン内）に導入することがで る核酸配列をクローニングするため、試料中の所望ｍＲ きる。たとえば、内因性プロモーターを、突然変異、欠 ＮＡの存在を検出するためのプローブとして使用する核 失および／または置換によってインビボまたはインビト 酸を作製するため、核酸配列決定のため、または他の目 ロで変化させることができる。 的のために有用であり得る。当業者をインビトロ増幅方 【００９６】 法へと導くのに十分な技術の例は、Ｂｅｒｇｅｒ、前出 ベクターおよび宿主細胞 、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、前出、およびＡｕｓｕｂｅｌ、前 本発明はまた、当技術分野において周知のように、本発 出、ならびにＭｕｌｌｉｓ， ａｌ．，米国特許 明の単離核酸分子を含むベクター、組換えベクターで遺 第４，６８３，２０２号（１９８７）；およびＩｎｎｉ 伝子操作される宿主細胞、および組換え技術による少な ｓ， くとも１つの抗ＩＬ−６抗体の作製に関する。たとえば Ａ ｅｔ ａｌ．， Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ｃ Ｐｒｅｓｓ ｅｔ ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｄｓ．， Ｉｎｃ．， Ｓａｎ ａｎｄ Ａｐ 20 、各々全体が参照により本明細書に組み込 Ａｃａｄｅｍｉ まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、前出；Ａｕｓｕｂｅｌ、前 Ｄｉｅｇｏ， 出参照。 ＣＡ（１９９０）に認められる。ゲノムＰＣＲ増幅用の 【００９７】 市販のキットは当技術分野において公知である。たとえ ポリヌクレオチドは、場合により、宿主における増殖に ば、Ａｄｖａｎｔａｇｅ−ＧＣ ＰＣ ついての選択可能なマーカーを含むベクターに連結する Ｒキット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）参照。加えて、たとえば ことができる。一般に、プラスミドベクターは、リン酸 Ｔ４遺伝子３２タンパク質（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍ カルシウム沈殿物などの沈殿物、または荷電脂質との複 ａｎｎｈｅｉｍ）は、長いＰＣＲ産物の収率を改善する 合体中に導入される。ベクターがウイルスである場合、 ために使用できる。 それを、適切なパッケージング細胞株を用いてインビト Ｇｅｎｏｍｉｃ 【００９３】 30 ロでパッケージングし、その後宿主細胞に形質導入する 核酸を構築するための合成方法 ことができる。 本発明の単離核酸はまた、公知の方法（たとえば、Ａｕ 【００９８】 ｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．、前出参照）による直接化学 ＤＮＡ挿入物は、適切なプロモーターに作動可能に連結 合成によって作製することもできる。化学合成は、一般 されるべきである。発現構築物は、転写開始部位、終結 に、一本鎖オリゴヌクレオチドを生成し、それを相補的 部位および、転写される領域内に、翻訳のためのリボソ 配列とのハイブリダイゼーションによって、または一本 ーム結合部位をさらに含む。構築物によって発現される 鎖を鋳型として用いるＤＮＡポリメラーゼでの重合によ 成熟転写産物のコード部分は、好ましくは、最初に翻訳 って、二本鎖ＤＮＡに変換することができる。当業者は 開始コドンおよび翻訳されるｍＲＮＡの末端に適切に位 、ＤＮＡの化学合成は約１００塩基またはそれ以上の配 置する終止コドン（たとえばＵＡＡ、ＵＧＡまたはＵＡ 列に限定され得るが、短い配列の連結によってより長い 40 Ｇ）を含み、哺乳動物または真核細胞発現のためにはＵ 配列が得られることを認識する。 ＡＡおよびＵＡＧが好ましい。 【００９４】 【００９９】 組換え発現カセット 発現ベクターは、好ましくは、しかし場合により、少な 本発明はさらに、本発明の核酸を含む組換え発現カセッ くとも１つの選択可能なマーカーを含む。そのようなマ トを提供する。本発明の核酸配列、たとえば本発明の抗 ーカーは、たとえば、真核細胞培養についてはメトトレ 体をコードするｃＤＮＡまたはゲノム配列は、少なくと キサート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸レダクターセ（ＤＨ も１つの所望宿主細胞に導入することができる組換え発 ＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号；同第４，６３ 現カセットを構築するために使用できる。 ４，６６５号；同第４，６５６，１３４号；同第４，９ 組換え発現カセットは、典型的には、意図される宿主細 ５６，２８８号；同第５，１４９，６３６号；同第５， 胞においてポリヌクレオチドの転写を指令する転写開始 50 １７９，０１７号）、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ ( 25 ) JP 47 2015-172048 A 2015.10.1 48 ４１８）、ミコフェノール酸、またはグルタミンシンテ 抗体、その特定部分もしくは変異体の生産のために有用 ターゼ（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号；同第 な細胞培養物の例は、哺乳動物細胞である。哺乳動物細 ５，７７０，３５９号；同第５，８２７，７３９号）耐 胞系はしばしば細胞単層の形態であるが、哺乳動物細胞 性遺伝子、ならびに大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および他の 懸濁液またはバイオリアクターも使用できる。無傷グリ 細菌または原核生物における培養についてはテトラサイ コシル化タンパク質を発現することができる多くの適切 クリンまたはアンピシリン耐性遺伝子を含むが、これら な宿主細胞株が当技術分野で開発されており、ＣＯＳ− に限定されない（上記特許は全体が参照により本明細書 １（たとえばＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５０）、ＣＯＳ− に組み込まれる）。上述した宿主細胞のための適切な培 ７（たとえばＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６５１）、ＨＥＫ２ 地および培養条件は当技術分野において公知である。適 ９３、ＢＨＫ２１（たとえばＡＴＣＣ ＣＲＬ−１０） 切なベクターは当業者に容易に明らかである。宿主細胞 10 、ＣＨＯ（たとえばＡＴＣＣ １６１０）およ へのベクター構築物の導入は、リン酸カルシウムトラン びＢＳＣ−１（たとえばＡＴＣＣ スフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランス 株、Ｃｏｓ−７細胞、ＣＨＯ細胞、ｈｅｐ フェクション、陽イオン脂質媒介トランスフェクション Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２／０−Ａｇ１４、２ 、電気穿孔法、形質導入、感染または他の公知の方法に ９３細胞、ＨｅＬａ細胞等を含み、これらは、たとえば よって実施できる。 Ａｍｅｒｉｃａｎ そのような方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ｓｕｐｒａ、Ｃ ｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ（ｗｗｗ．ａ ｈａｐｔｅｒｓ ｔｃｃ．ｏｒｇ）から容易に入手可能である。好ましい １−４ ａｎｄ １６−１８； Ａｕｓｕｂｅｌ， ａｐｔｅｒｓ １， ９， １３， ｓｕｐｒａ， １５， Ｔｙｐｅ ＣＲＬ ＣＲＬ−２６）細胞 Ｇ２細胞、 Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌ Ｃｈ 宿主細胞は、骨髄腫およびリンパ腫細胞などのリンパ球 １６に記 系由来の細胞が包含される。特に好ましい宿主細胞は、 載されている。 20 Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（ＡＴＣＣアクセッショ 【０１００】 ン番号ＣＲＬ−１５８０）およびＳＰ２／０−Ａｇ１４ 本発明の少なくとも１つの抗体は、融合タンパク質のよ 細胞（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−１８５１） うな修飾形態で発現され、分泌シグナルだけでなく、付 である。特に好ましい態様として、組換え細胞はＰ３Ｘ 加的な異種機能領域も含むことができる。たとえば、付 ６３Ａｇ８．６５３もしくはＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞 加的なアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域を、精製の間 である。 またはその後の取り扱いおよび保存の間の、宿主細胞に 【０１０３】 おける安定性および持続性を改善するために抗体のＮ末 これらの細胞の発現ベクターは、以下の発現制御配列、 端に付加することができる。また、精製を容易にするた たとえば、限定されることなく、複製起点；プロモータ めにペプチド部分を本発明の抗体に付加することができ ー（たとえば後期または初期ＳＶ４０プロモーター、Ｃ る。そのような領域は、抗体またはその少なくとも１つ 30 ＭＶプロモーター（米国特許第５，１６８，０６２号； のフラグメントの最終的な調製の前に除去できる。その 同第５，３８５，８３９号）、ＨＳＶ ような方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｃ ー、ｐｇｋ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）プロモータ １ ー、ＥＦ−１αプロモーター（米国特許第５，２６６， ｈａｐｔｅｒｓ １７．２９−１７．４２ ８．１−１８．７４； ｓｕｐｒａ， ｄ ｓｕｐｒａ， ａｎｄ Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｃｈａｐｔｅｒｓ １６， ｔｋプロモータ ４９１号）、少なくとも１つのヒト免疫グロブリンプロ １７ ａｎ モーター；エンハンサー、および／またはリボソーム結 １８などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載 合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（ されている。 たとえばＳＶ４０ラージＴ抗原ポリＡ付加部位）などの 【０１０１】 プロセシング情報部位、および転写終結配列などの１ま 当業者は、本発明のタンパク質をコードする核酸の発現 のために利用可能な数多くの発現系に精通している。 たはそれ以上を含むことができる。たとえば、Ａｕｓｕ 40 ｂｅｌ ｅｔ ａｌ．、前出； Ｓａｍｂｒｏｏｋ， あるいは、本発明の核酸は、本発明の抗体をコードする ｅｔ 内因性ＤＮＡを含む宿主細胞中で作動させることによっ 質の生産に有用な他の細胞は、公知である、および／ま て（操作によって）宿主細胞において発現させ得る。そ たは、たとえばＡｍｅｒｉｃａｎ のような方法は、たとえば、全体が参照により本明細書 ｕｒｅ に組み込まれる、米国特許第５，５８０，７３４号、同 Ｃａｔａｌｏｇｕｅ 第５，６４１，６７０号、同第５，７３３，７４６号お ｎｄ よび同第５，７３３ ｇ）もしくは他の公知のまたは商業的ソースから入手可 ，７６１号に記載されているように、当技術分野におい 能である。 て周知である。 【０１０４】 【０１０２】 50 ａｌ．、前出参照。本発明の核酸またはタンパク Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ ａ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒ 真核生物宿主細胞を用いる場合、典型的にはポリアデニ ( 26 ) JP 49 2015-172048 A 2015.10.1 50 ル化配列または転写終結配列がベクターに組み込まれる 意の他の適切な細胞株（たとえば、ｗｗｗ．ａｔｃｃ． 。終結配列の一例は、ウシ成長ホルモン遺伝子由来のポ ｏｒｇ、ｗｗｗ．ｌｉｆｅｔｅｃｈ．ｃｏｍ．参照）等 リアデニル化配列である。転写産物の正確なスプライシ を、単離されたまたはクローニングされた脾、末梢血、 ングのための配列も含まれ得る。スプライシング配列の リンパ、扁桃、または他の免疫細胞もしくはＢ細胞含有 一例は、ＳＶ４０由来のＶＰ１イントロンである（Ｓｐ 細胞、または内因性もしくは異種核酸のいずれかとして ｒａｇｕｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４５：７ 、組換えもしくは内因性の、ウイルス、細菌、藻類、原 ７３−７８１（１９８３））。さらに、当技術分野にお 核生物、両生類、昆虫、爬虫類、魚類、哺乳動物、げっ いて公知のように、宿主細胞における複製を制御する遺 歯動物、ウマ、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）、ヤギ、ヒツジ（ 伝子配列をベクターに組み込むことができる。 ｓｈｅｅｐ）、霊長動物、真核生物のゲノムＤＮＡ、ｃ 【０１０５】 10 ＤＮＡ、ｒＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡもしくはＲＮ 抗体の作製 Ａ、葉緑体ＤＮＡもしくはＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮ 本発明の少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体は、当技術分 Ａ、ｔＲＮＡ、一本鎖、二本鎖もしくは三本鎖、ハイブ 野で周知のように、場合により細胞株、混合細胞株、不 リダイズしたもの等またはそれらの任意の組合せとして 死化細胞または不死化細胞のクローン集団によって産生 、重鎖もしくは軽鎖定常もしくは可変もしくはフレーム され得る。たとえば、各々全体が参照により本明細書に ワークもしくはＣＤＲ配列を発現する任意の他の細胞な 組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ， どの、しかしこれらに限定されない、抗体産生細胞と融 ｄ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｅ ｉｎ 合することによって作製する。たとえば、全体が参照に Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ より本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ ｓ， ＮＹ， Ｉｎｃ．， ００１）； ａｔｏｒｙ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ａ ａｎｄ Ｎ．Ｙ． Ｌａｎｅ， Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｐｒｉｎｇ ｅｄｓ．， Ｊｏｈｎ ａｌ．， Ａ Ｃｏｌｄ Ｍ ｉｎ ＆ ｌｏｇｙ， ｓｕｐｒａ， Ｉｍｍｕｎｏ ｃｈａｐｔｅｒ ２参照。 任意の他の適切な宿主細胞も、本発明の抗体、その特定 フラグメントまたは変異体をコードする異種または内因 Ｓｐｒｉｎｇ 性核酸を発現するために使用できる。融合細胞（ハイブ Ｈａｒｌ リドーマ）または組換え細胞は、選択的培養条件または ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， 他の適切な公知の方法を用いて単離し、限界希釈または Ｍａｎｕａｌ， 細胞選別または他の公知の方法によってクローニングす Ｃｏｌｄ Ｎ．Ｙ． ｅｔ ることができる。所望の特異性を有する抗体を生産する ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｃｏｌｌｉｇａｎ， 【０１０７】 Ｌａｂｏｒ （１９８９）； Ｃｏｌｌｉｇａｎ， Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｐｒａ， ２．ｓｕｐ Ｈａｒｂｏｒ， （１９８９）． ＆ Ｓｏｎ （１９８７−２ 20 ｅｔ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ｍａｎｕａｌ， Ｈａｒｂｏｒ， ｏｗ Ｎ．Ｙ． Ｓａｍｂｒｏｏｋ， ｏｌｅｃｕｌａｒ ．ｎｄ Ｗｉｌｅｙ ｓｕ 細胞を適切なアッセイ（たとえばＥＬＩＳＡ）によって 30 選択できる。 Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， 【０１０８】 Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．， 本発明の抗体はまた、少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体 ＮＹ （１９９４−２００１）； Ｃｏｌｌｉｇａｎ をコードする核酸を使用して、乳中にそのような抗体を ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ 産生する、ヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジ等のようなトラン ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｓｏｎｓ， ＮＹ， Ｊｏｈｎ Ｎ．Ｙ．， スジェニック動物または哺乳動物を提供するように調製 することができる。そのような動物は公知の方法を用い （１９９７−２００１）参照。 て提供され得る。たとえば、限定されることなく、各々 【０１０６】 全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第 １つのアプローチでは、ハイブリドーマを、適切な不死 ５，８２７，６９０号；同第５，８４９，９９２号；同 細胞株（たとえばＳｐ２／０、ＳＰ２／０−ＡＧ１４、 40 第４，８７３，３１６号；同第５，８４９，９９２号； ＮＳＯ、ＮＳ１、ＮＳ２、ＡＥ−１、Ｌ．５、＞２４３ 同第５，９９４，６１６号、同第５，５６５，３６２号 、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、Ｓｐ２ ；同第５，３０４，４８９号等参照。 ＭＡＩ、ＳＰ２ 、ＭＬＡ ＳＳ１、ＳＰ２ １４４、ＡＣＴ ＳＡ３、Ｓｐ２ ＳＡ５、Ｕ９３７ 【０１０９】 ＩＶ、ＭＯＬＴ４、ＤＡ− 本発明の抗体は、さらに、少なくとも１つの抗ＩＬ−６ １、ＪＵＲＫＡＴ、ＷＥＨＩ、Ｋ−５６２、ＣＯＳ、Ｒ 抗体をコードする核酸を使用して、そのような抗体、特 ＡＪＩ、ＮＩＨ １４４ 定部分または変異体を植物の部分においてまたはそれら ２Ａなどの、しかしこ から培養された細胞において産生するトランスジェニッ ３Ｔ３、ＨＬ−６０、ＭＬＡ 、ＮＡＭＡＩＷＡ、ＮＥＵＲＯ れらに限定されない骨髄腫細胞株）等、またはヘテロ骨 ク植物および培養植物細胞（たとえば、限 髄腫、それらの融合産物、またはそれらに由来する任意 定されることなく、タバコおよびトウモロコシ）を提供 の細胞もしくは融合細胞、または当技術分野で公知の任 50 するように調製することができる。非限定的な例として ( 27 ) JP 51 2015-172048 A 2015.10.1 52 、組換えタンパク質を発現するトランスジェニックタバ ．，（１９９７−２００１），ｅ．ｇ．，ｃｈａｐｔｅ コ葉は、たとえば誘導的プロモーターを用いて、大量の ｒｓ 組換えタンパク質を提供するために成功裡に使用されて 【０１１１】 きた。たとえば、Ｃｒａｍｅｒ Ｃｕ 本発明の抗体は、天然精製された産物、化学合成手順の Ｉｍｍｕｎｏ 産物、ならびに、たとえば酵母、高等植物、昆虫および ｒｒ． ｌ． Ｔｏｐ． ｅｔ ａｌ．， Ｍｉｃｒｏｂｏｌ． ２４０：９５−１１８ １０参照。 およびそ 哺乳動物細胞を含む真核生物宿主から組換え技術によっ の中で引用される参考文献参照。また、トランスジェニ て生産される産物を包含する。組換え生産手順において ックトウモロコシは、他の組換え系において生産される 使用される宿主に依存して、本発明の抗体は、グリコシ ものまたは天然のソースから精製されたものと同等の生 ル化され得るかまたはグリコシル化されなくてもよく、 物活性で、哺乳動物タンパク質を商業生産レベルで発現 10 グリコシル化されることが好ましい。そのような方法は するために使用されている。たとえば、Ｈｏｏｄ 、すべて全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓ ａｌ．， ． Ａｄｖ． （１９９９） １，４，６，８，９，ａｎｄ Ｅｘｐ． ４６４：１２７−１４７ Ｍｅｄ． ｅｔ Ｂｉｏｌ （１９９９）およびその ａｍｂｒｏｏｋ，ｓｕｐｒａ，Ｓｅｃｔｉｏｎｓ １７ ．３７−１７．４２；Ａｕｓｕｂｅｌ，ｓｕｐｒａ，Ｃ 中で引用される参考文献参照。抗体はまた、タバコ種子 ｈａｐｔｅｒｓ およびジャガイモ塊茎を含む、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ） ｄ ２０，Ｃｏｌｌｉｇａｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎ などの抗体フラグメントを含有するトランスジェニック ｅｎｃｅ，ｓｕｐｒａ，Ｃｈａｐｔｅｒｓ 植物種子から大量に生産されてきた。たとえば、Ｃｏｎ １２−１４などの多くの標準的な実験室マニュアルに記 ｒａｄ 述されている。 ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ １０，１２，１３，１６，１８ ａｎ Ｓｃｉ ．３８：１０１−１０９（１９９８）およびその中で引 【０１１２】 用される参考文献参照。従って、本発明の抗体はまた、 20 精製抗体は、たとえばＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、フ 公知の方法に従って、トランスジェニック植物を用いて ローサイトメトリー、免疫細胞学、Ｂｉａｃｏｒｅ（登 作製することもできる。たとえば、Ｆｉｓｃｈｅｒ 録商標）分析、Ｓａｐｉｄｙｎｅ ｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ３０：９９−１０８ ｅｒ， １９９９）， ｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． （１９９５）； Ｐｈｙｓｉｏｌ． ； Ｍａ Ｍａ ｅｔ ｅｔ ｅ ）反応速度排除分析、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタ （Ｏｃｔｏｂ ンブロット法によって、またはＨＰＬＣ分析ならびに本 ａｌ．， Ｔｒｅ １３：５２２−７ ａｌ．， １０９：３４１−６ ＫｉｎＥｘＡ（商標 Ａｐｐｌ． 明細書で開示する多くの他の機能的アッセイによって特 徴づけることができ Ｐｌａｎｔ る。 （１９９５） 【０１１３】 Ｗｈｉｔｅｌａｍ 哺乳動物細胞におけるＩＬ−６抗体のクローニングおよ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ ｓ． ２２：９４０−９４４ Ｓｏｃ． Ｔｒａｎ 30 び発現 （１９９４）；およびそ 典型的な哺乳動物発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開 の中で引用される参考文献も参照のこと。上記参考文献 始を媒介する少なくとも１つのプロモーターエレメント の各々は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。 、抗体コード配列、ならびに転写の終結および転写産物 【０１１０】 のポリアデニル化に必要なシグナルを含有する。付加的 抗体の精製 なエレメントは、エンハンサー、コザック配列、ならび 抗ＩＬ−６抗体は、プロテインＡ精製、プロテインＧ精 にＲＮＡスプライシングのための供与および受容部位に 製、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、 隣接される介在配列を含む。高度に効率的な転写は、Ｓ 陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホス Ｖ４０からの初期および後期プロモーター、レトロウイ ホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロ ルス、たとえばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩからのロ マトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、 40 ングターミナルリピート（ＬＴＲ）、ならびにサイトメ ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチ ガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達 ンクロマトグラフィーを含むがこれらに限定されない、 成され得る。しかしながら、細胞エレメントも使用でき 周知の方法によって組換え細胞培養物から回収し、精製 る（たとえばヒトアクチンプロモーター）。本発明を実 することができる。高速液体クロマトグラフィー（「Ｈ 施する際に使用するための適切な発現ベクターには、た ＰＬＣ」）も、精製のために使用できる。たとえば、各 とえば、ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ、ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｆｆ、 々全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｏｌｌ ｐＲｅｔｒｏ−Ｏｎ、ＰＬＸＳＮまたはｐＬＮＣＸ（Ｃ ｉｇａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ ｉｎ ｌｏｎｔｅｃｈ Ｐｒ ｌｉｆ．）、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐｃＤＮＡ Ｓｃｉｅｎｃ ／Ｚｅｏ（＋／−）またはｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｏｒ Ｃｕｒｒｅｎｔ ｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｅ， Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ 50 Ｊｏｈｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌａｂｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａ ｏ（＋／−）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＰＳＶＬおよ ( 28 ) JP 53 2015-172048 A 2015.10.1 54 びＰＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓ 遺伝子を含有する。細胞を、１μｇ／ｍｌのＧ４１８ ｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ ）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ３７１５２ を添加したα−ＭＥＭに接種する。２日後、細胞をトリ ３７１４６）および プシン処理し、１０、２５または５０ｎｇ／ｍｌのメト ６７１０９））などのベク トレキサートおよび１μｇ／ｍｌのＧ４１８を添加した ターを含む。使用できる哺乳動物宿主細胞には、ヒトＨ α−ＭＥＭにおいてハイブリドーマクローニングプレー ｅｌａ ２９３、Ｈ９およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウス ト（Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に接種する。約 ＮＩＨ３Ｔ３およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ１、Ｃｏｓ７ １０∼１４日後、単一クローンをトリプシン処理し、次 およびＣＶ１、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞な に種々の濃度のメトトレキサート（５０ｎＭ、１００ｎ らびにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含 む。 Ｍ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して 10 ６穴ペトリ皿または１０ｍｌフラスコに接種する。次に 【０１１４】 、最も高い濃度のメトトレキサートで増殖するクローン あるいは、遺伝子は、染色体に組み込まれた遺伝子を含 を、さらに高い濃度のメトトレキサート（１ｍＭ、２ｍ 有する安定な細胞株において発現させることができる。 Ｍ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）を含有する新しい６ ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシンまたはハイグロマイシ 穴プレートに移す。１００∼２００ｍＭの濃度で増殖す ンなどの選択可能なマーカーとの同時トランスフェクシ るクローンが得られるまで同じ手順を反復する。所望遺 ョンは、トランスフェクトされた細胞の同定および単離 伝子産物の発現は、たとえばＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウ を可能にする。 エスタンブロット法、ＥＬＩＳＡによって、または逆相 【０１１５】 ＨＰＬＣ分析によって分析される。 トランスフェクトされた遺伝子はまた、大量のコードさ 【０１１８】 れる抗体を発現するために増幅することができる。ＤＨ 20 抗ＩＬ−６抗体組成物 ＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）マーカーは、数百、 本発明はまた、非天然に生じる組成物、混合物または形 さらには数千コピーの対象遺伝子を担持する細胞株を開 態で提供される、本明細書で述べるおよび／または当技 発するために有用である。もう１つ別の有用な選択マー 術分野で公知の、その少なくとも１、少なくとも２、少 カーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）（Ｍｕｒｐ なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも ｈｙ，ｅｔ ６またはそれ以上の抗ＩＬ−６抗体を含有する少なくと ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２２７：２ ７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ， も１つの抗ＩＬ−６抗体組成物を提供する。そのような ｅｔ １０： 組成物は、本明細書で述べる抗体のＣＤＲ領域またはそ １６９−１７５（１９９２））である。これらのマーカ の特定フラグメント、ドメインもしくは変異体の連続す ーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地において増殖さ るアミノ酸の７０∼１００％から成る群より選択される せ、最も高い耐性を有する細胞を選択する。これらの細 30 抗ＩＬ−６抗体アミノ酸配列の、少なくとも１つまたは 胞株は、染色体に組み込まれた増幅遺伝子（１または複 ２つの完全長、Ｃ末端および／またはＮ末端欠失変異体 数）を含有する。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ 、ドメイン、フラグメントまたは特定変異体を含有する ）細胞およびＮＳＯ細胞が、抗体の作製のためにしばし 非天然に生じる組成物を含む。好ましい抗ＩＬ−６抗体 ば使用される。 組成物は、本明細書で述べる抗ＩＬ−６抗体配列の少な 【０１１６】 くとも１つのＣＤＲまたはＬＢＲ含有部分として、少な ＣＨＯ細胞におけるクローニングおよび発現 くとも１つまたは２つの完全長、フラグメント、ドメイ 単離された可変および定常領域をコードするＤＮＡと脱 ンまたは変異体を含む。さらなる好ましい組成物は、本 リン酸化ベクターをＴ４ 明細書で述べる抗ＩＬ−６ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＤＮＡリガーゼで連結する。 次に、大腸菌ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞 ＡｂのＣＤＲ領域の７０∼ １００％の少なくとも１つの４０∼９９％を含む。その を形質転換し、たとえば制限酵素分析を用いて、プラス 40 ような組成物パーセンテージは、当技術分野で公知のよ ミドｐＣ４に挿入されたフラグメントを含有する細菌を うにまたは本明細書で述べるように、液体または乾燥溶 同定する。 液（ｄｒｙ 【０１１７】 濁液またはコロイドとしての重量、容量、濃度、モル濃 活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠くチャイニーズハムスター卵 度、または重量モル濃度比である。 巣（ＣＨＯ）細胞をトランスフェクションのために使用 【０１１９】 する。５μｇの発現プラスミドｐＣ４を、リポフェクチ 本発明の抗ＩＬ−６抗体組成物は、そのような調節、治 ンを用いてのプラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏと同時トラン 療または療法を必要とする細胞、組織、器官、動物また スフェクトする。プラスミドｐＳＶ２ｎｅｏは、優性選 は患者に対する少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体を含む 択マーカーである、Ｇ４１８を含む抗生物質の群に対す 組成物または医薬組成物の任意の適切で有効な量の少な る耐性を付与する酵素をコードするＴｎ５からのｎｅｏ 50 くとも１つをさらに含有することができ、場合により、 ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、混合物、懸濁液、乳 ( 29 ) JP 55 2015-172048 A 2015.10.1 56 少なくとも１つのＴＮＦアンタゴニスト（たとえば、限 病的細胞または組織を選択的に死滅させるように働くこ 定されることなく、ＴＮＦ抗体またはフラグメント、可 とができる。病的細胞は、癌細胞または他の細胞であり 溶性ＴＮＦ受容体またはフラグメント、それらの融合タ 得る。そのような毒素は、たとえばリシン、ジフテリア ンパク質、または低分子ＴＮＦアンタゴニスト）、抗リ 毒素、毒液毒素または細菌毒素の少なくとも１つから選 ウマチ薬（たとえばメトトレキサート、オーラノフィン 択される、毒素の少なくとも１つの機能的細胞傷害性ド 、金チオグルコース、アザチオプリン、エタネルセプト メインを含む精製または組換え毒素または毒素フラグメ 、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシクロロキ ントであり得るが、これらに限定されない。毒素という ン、レフルノミド、スルファサラジン）、筋弛緩薬、麻 用語はまた、死をもたらし得る、毒素ショックを含む、 酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬 ヒトおよび他の哺乳動物において何らかの病的状態を引 、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗菌薬 10 き起こし得る任意の天然に生じる、突然変異型または組 （たとえばアミノグリコシド、抗真菌薬、駆虫薬、抗ウ 換え細菌またはウイルスによって産生される内毒素およ イルス薬、カルバペネム、セファロスポリン、フルオロ び外毒素の両方を包含する。そのような毒素は、腸管毒 キノロン、マクロライド、ペニシリン、スルホンアミド 素原性大腸菌耐熱性エンテロトキシン（ＬＴ）、耐熱性 、テトラサイクリン、別の抗菌薬）、乾癬治療薬、コル エンテロトキシン（ＳＴ）、赤痢菌細胞毒素、アエロモ チコステロイド、タンパク質同化ステロイド、糖尿病関 ナスエンテロトキシン、トキシックショック症候群外毒 連薬、無機物、栄養素、甲状腺薬、ビタミン、カルシウ 素１（ＴＳＳＴ−１）、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ ム関連ホルモン、下痢止め薬、鎮咳薬、鎮吐薬、抗潰瘍 （ＳＥＡ）、Ｂ（ＳＥＢ）、またはＣ（ＳＥＣ）、連鎖 薬、緩下薬、抗凝固薬、エリスロポエチン（たとえばエ 球菌エンテロトキシン等を含み得るが、これらに限定さ ポエチンα）、フィルグラスチム（たとえばＧ−ＣＳＦ れない。そのような細菌は、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴ 、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチム（ＧＭ−ＣＳ 20 ＥＣ）、腸管出血性大腸菌の種の株（たとえば血清型Ｏ Ｆ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫、免疫グロブリン、免疫抑 １５７：Ｈ７の株）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃ 制薬（たとえばバシリキシマブ、サイクロスポリン、ダ ｏｃｃｕｓ）種（たとえば黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈ クリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エスト ｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ロゲン受容体調節剤、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキ カス・ピオゲネス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ル化剤、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害剤、放射性医薬品、 ｙｏｇｅｎｅｓ））、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）種（ 抗うつ薬、抗躁病薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、 たとえば志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ 交感神経様作用薬、興奮薬、ドネペジル、タクリン、喘 ｅｒｉａｓｅ）、フレクスナー赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌ 息治療薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリ ａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、ボイド赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌ エン阻害剤、メチルキサンチン ｌａ 、クロモリン、エピネフリンまたは類似体、ドルナーゼ 30 ｌｌａ α（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ）、サイトカインまたサイトカ ｅｌｌａ）種（たとえば腸チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌ インアンタゴニストから選択される少なくとも１つをさ ｌａ らに含有し得る。そのようなサイトカインの非限定的な ａ ｃｈｏｌｅｒａｓｕｉｓ）、腸炎菌（Ｓａｌｍｏｎ 例は、ＩＬ−１∼ＩＬ−３４のいずれかを含むが、これ ｅｌｌａ らに限定されない。適切な投与量は当技術分野において ウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種（たとえばウェルシ 周知である。たとえば、各々全体が参照により本明細書 ュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ に組み込まれる、Ｗｅｌｌｓ ｓ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒ ．， ｏｋ， ２ｎｄ ａｎｄ ｎ． Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｌａｎｇｅ， （２０００）； ｅｉａ， ａｌ．， ＰＤＲ Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ｓｈｉｎｇ， Ｌｏｍａ ｅｄｓ Ｈａｎｄｂｏ Ａｐｐｌｅｔｏｎ Ｓｔａｍｆｏｒｄ， Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ ｅ ｅｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｃｏｎ 40 Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏ Ｐｏｃｋｅｔ ２０００， Ｔａｒａｓｃｏｎ Ｌｉｎｄａ， ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッ ｐ ｄｙｓｅｎｔ ｂｏｙｄｉｉ）およびソンネ赤痢菌（Ｓｈｉｇｅ ｓｏｎｎｅｉ））、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎ ｔｙｐｈｉ）、豚コレラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌ ｉｄｉｕｍ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ））、クロストリジ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎ ｄｉｆｉｃｉｌｅ）、ボツリヌス菌（Ｃｌ ｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ））、カンピ ロバクター（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ）種（カンピ ロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、カンピロバクター・フィタス（Ｃａ Ｄｅｌｕｘ ｍｐｈｌｏｂａｃｔｅｒ Ｐｕｂｌｉ ター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）種（たとえばヘリコ Ｃａｌｉｆ． （２０００）参照。 【０１２０】 そのような抗癌剤または抗感染症薬はまた、本発明の少 ｆｅｔｕｓ））、ヘリコバク バクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌ ｏｒｉ））、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）種（ たとえばアエロモナス・ソブリア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｓｏｂｒｉａ）、アエロモナス・ヒドロフィラ（Ａｅ なくとも１つの抗体と会合、結合、同時製剤または同時 ｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、アエロモナ 投与される毒素分子を含有し得る。毒素は、場合により 50 ス・キャビエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅ）） ( 30 ) JP 57 2015-172048 A 2015.10.1 58 、プレシオモナス・シゲロイデス（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎ 本発明の組成物において有用な医薬的賦形剤および添加 ａｓ 剤は、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質および炭 ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、エルジシニア・エ ンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏ 水化物（たとえば、単糖、二糖、三糖、四糖およびオリ ｌｉｔｉｃａ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏｓ）種（たと ゴ糖；アルジトール、アルドン酸、エステル化糖等のよ えばコレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏｓ うな誘導体化糖；ならびに多糖または高分子糖を含む、 ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ビブリオ・パラヘモリチカス（Ｖ 糖類）を含むが、これらに限定されず、それらは単独で ｉｂｒｉｏｓ ｐａｒａｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ））、 または組み合わせて存在することができ、単独でまたは クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、緑膿菌（Ｐ 組み合わせて１∼９９．９９重量％または容量％を構成 ｓｅｕｄ する。例示的なタンパク質賦形剤には、ヒト血清アルブ ｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、および連鎖球 10 ミン（ＨＳＡ）、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）など 菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）を含むが、これらに限 の血清アルブミン、ゼラチン、カゼイン等を含む。緩衝 定されない。たとえば、その内容全体が参照により本明 能力においても機能を果たすことができる代表的なアミ 細書に組み込まれる、Ｓｔｅｉｎ，ｅｄ．，ＩＮＴＥＲ ノ酸／抗体成分は、アラニン、グリシン、アルギニン、 ＮＡＬ １ ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸 ＭＥＤＩＣＩＮＥ，３ｒｄ ｅｄ．，ｐｐ −１３，Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏ．， 、システイン、リシン、ロイシン、イソロイシン、バリ ｅｔ ａｌ ン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテーム等 Ｉｎｆｅｃｔｉｏ を含む。１つの好ましいアミノ酸は、グリシンである。 Ｂｏｓｔｏｎ，（１９９０）；Ｅｖａｎｓ ．，ｅｄｓ．，Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｎｓ ｏｆ ａｎｄ Ｈｕｍａｎｓ：Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ，２ｄ．Ｅｄ．，ｐｐ ９−２５４，Ｐｌｅｎｕｍ Ｃｏ．，Ｎｅｗ ｌｌ ｅｔ Ｍｅｄｉｃａｌ ２３ 本発明における使用に適する炭水化物賦形剤は、たとえ Ｂｏｏｋ 20 ば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコ Ｙｏｒｋ（１９９１）；Ｍａｎｄｅ ａｌ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｒａｃｔｉｃｅ 【０１２３】 ｏｆ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ース、Ｄ−マンノース、ソルボース等のような単糖；ラ Ｐ クトース、スクロース、トレハロース、セロビオース等 Ｄｉｓ のような二糖；ラフィノース、メレジトース、マルトデ ｅａｓｅｓ，３ｄ．Ｅｄ．，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉ キストリン、デキストラン、デンプン等のような多糖； ｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｎ．Ｙ．（１９９０）；Ｂｅｒｋ およびマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラ ｏｗ クチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトー ｅｔ ａｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ ａｎｕａｌ，１６ｔｈ ａｎｄ Ｗｏｏｄ ｏｇｙ Ｍｅｒｃｋ Ｍ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍｅｒｃｋ ル）、ミオイノシトール等のようなアルジトールを含む Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，１９９２； ｅｔ ａｌ，ＦＥＭＳ 。本発明における使用のための好ましい炭水化物賦形剤 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ は、マンニトール、トレハロースおよびラフィノースで Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７６：１２１−１３４ 30 （１９９１）；Ｍａｒｒａｃｋ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅ ある。 【０１２４】 ｎｃｅ，２４８：７０５−７１１（１９９０）参照。 抗ＩＬ−６抗体組成物はまた、緩衝剤またはｐＨ調整剤 【０１２１】 を含有してもよく、典型的には、緩衝剤は、有機酸また 本発明の抗ＩＬ−６抗体化合物、組成物または組合せは は塩基から調製される塩である。代表的な緩衝剤は、ク 、希釈剤、結合剤、安定剤、緩衝剤、塩、親油性溶媒、 エン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、 防腐剤、アジュバント等のような、しかしこれらに限定 コハク酸、酢酸またはフタル酸の塩などの されない任意の適切な助剤の少なくとも１つをさらに含 有機酸塩；トリス、トロメタミン塩酸塩またはリン酸緩 有し得る。医薬的に許容される助剤が好ましい。Ｇｅｎ 衝液を含む。本発明における使用のための好ましい緩衝 ｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｈａｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ 【０１２５】 Ｃ 加えて、本発明の抗ＩＬ−６抗体組成物は、ポリビニル ｏ．（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）１９９０などの、しかし ピロリドン、フィコール（高分子糖）、デキストレート これに限定されない、そのような滅菌溶液の非限定的な （たとえば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキ 例およびそのような滅菌溶液を調製する方法は、当技術 ストリンなどのシクロデキストリン）、ポリエチレング 分野において周知である。当技術分野で周知のようにま リコール、着香剤、抗菌剤、甘味料、抗酸化剤、帯電防 たは本明細書で述べるように、抗ＩＬ−６抗体、フラグ 止剤、界面活性剤（たとえば、「ＴＷＥＥＮ メントまたは変異体組成物の投与の方法、溶解度および よび「ＴＷＥＥＮ ／または安定性のために適切な、医薬的に許容される担 質（たとえばリン脂質、脂肪酸）、ステロイド（たとえ 体は、常套的に選択することができる。 ばコレステロール）、ならびにキレート化剤（たとえば 【０１２２】 Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ 剤は、クエン酸塩などの有機酸塩である。 40 50 ２０」お ８０」などのポリソルベート）、脂 ＥＤＴＡ）などの高分子賦形剤／添加剤を含み得る。 ( 31 ) JP 59 2015-172048 A 2015.10.1 60 【０１２６】 １、１．５、１．９、２．０、２．５％）、０．００１ 本発明による抗ＩＬ−６抗体、部分または変異体組成物 ∼０．５％のチメロサール（たとえば０．００５、０． における使用に適するこれらおよび付加的な公知の医薬 ０１）、０．００１∼２．０％フェノール（たとえば０ 賦形剤および／または添加剤は、たとえば、その開示全 ．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、１．０ 体が参照により本明細書に組み込まれる、“Ｒｅｍｉｎ ％）、０．０００５∼１．０％アルキルパラベン（１ま ｇｔｏｎ：Ｔｈｅ たは複数）（たとえば０．０００７５、０．０００９、 ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｅｄ ０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、 ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５ Ｐｈａｒｍａｃｙ”１９．ｓｕｐ．ｔｈ ０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７ ）、および“Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ ５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０． Ｄｅｓｋ ｆｅｒｅｎｃｅ”５２ｎｄｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅ Ｅ 10 ７５、０．９、１．０％）等を含む。 ｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（１９ 【０１２８】 ９８）に列挙されているように、当技術分野において公 上記のように、本発明は、包装材料ならびに、場合によ 知である。好ましい担体または賦形剤材料は、炭水化物 り水性希釈剤中に、所定の緩衝剤および／または防腐剤 （たとえば糖類およびアルジトール）ならびに緩衝剤（ と共に少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体の溶液を含有す たとえばクエン酸塩）または高分子剤である。 る少なくとも１つのバイアルを含む製品を提供し、前記 【０１２７】 包装材料は、そのような溶液が１、２、３、４、５、６ 製剤 、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４０、４ 上記のように、本発明は、医薬的に許容される製剤中に ８、５４、６０、６６、７２時間またはそれ以上の期間 少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体を含有する、好ましく にわたって保持され得ることを示すラベルを含む。本発 は食塩水または選択された塩を含むリン酸緩衝液である 20 明はさらに、包装材料、凍結乾燥された少なくとも１つ 安定な製剤、ならびに防腐剤を含有する保存溶液および の抗ＩＬ−６抗体を含有する第一バイアル、および所定 製剤、ならびに医薬または獣医学的用途に適する多回使 の緩衝剤または防腐剤の水性希釈剤を含有する第二のバ 用保存製剤を提供する。保存製剤は、水性希釈剤中に、 イアルを含む製品を包含し、前記包装材料は、２４時間 少なくとも１つの公知の防腐剤または場合により、少な またはそれ以上の期間にわたって保持され得る溶液を形 くとも１つのフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾ 成するために少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体を水性希 ール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルア 釈剤中で再構成することを患者に指示するラベルを含む ルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール 。 、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシ 【０１２９】 ウム（たとえば六水和物）、アルキルパラベン（メチル 本発明に従って使用される少なくとも１つの抗ＩＬ−６ 、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウ 30 抗体は、本明細書で述べるようにまたは当技術分野で公 ム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよ 知のように、哺乳動物細胞またはトランスジェニック標 びチメロサール、もしくはそれらの混合物から成る群よ 本からの方法を含む、組換え手段によって作製すること り選択される少なくとも１つの防腐剤を含有する。たと ができ、または他の生物学的ソースから精製することが えば０．００１∼５％、またはその中の任意の範囲もし できる。 くは値などの、たとえば０．００１、０．００３、０． 【０１３０】 ００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、 本発明の製品における少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体 ０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４ の範囲は、湿式／乾式系（ｗｅｔ／ｄｒｙ 、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、 ｍ）における場合、再構成の際に約１．０μｇ／ｍｌ∼ １．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１ 約１０００ｍｇ／ｍｌの濃度を生じさせる量を含むが、 ．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２． 40 より低いおよびより高い濃度も実施可能であり、意図さ ３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９ れる送達ビヒクルに依存し、たとえば溶液製剤は、経皮 、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、 パッチ、経肺、経粘膜または浸透圧もしくはマイクロポ ３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４ ンプ法とは異なる。 ．５、４．６、４．７、４．８、４．９、またはその中 【０１３１】 の任意の範囲もしくは値などの、しかしこれらに限定さ 好ましくは、水性希釈剤は、場合により、医薬的に許容 れない、任意の適切な濃度または混合物が当技術分野で される防腐剤をさらに含む。好ましい防腐剤は、フェノ 公知のように使用できる。非限定的な例は、防腐剤なし ール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾー 、０．１∼２％ｍ−クレゾール（たとえば０．２、０． ル、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキル ３、０．４、０．５、０．９、１．０％）、０．１∼３ パラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩 ％ベンジルアルコール（たとえば０．５、０．９、１． 50 化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢 ｓｙｓｔｅ ( 32 ) JP 61 2015-172048 A 2015.10.1 62 酸ナトリウムおよびチメロサール、またはそれらの混合 所望濃度のタンパク質および防腐剤を提供するのに十分 物から成る群より選択されるものを含む。製剤に使用さ な量の、緩衝液中の所望防腐剤と組み合わせる。この工 れる防腐剤の濃度は、抗菌作用を生じさせるのに十分な 程の変法は当業者によって認識される。たとえば、成分 濃度である。そのような濃度は、選択される防腐剤に依 を添加する順序、付加的な添加剤を使用するかどうか、 存し、当業者によって容易に決定される。 製剤を調製する温度およびｐＨは、すべて、使用される 【０１３２】 濃度および投与手段のために最適化することができる因 他の賦形剤、たとえば等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、保存 子である。 性増強剤を、場合によりおよび好ましくは、希釈剤に加 【０１３５】 えることができる。グリセリンなどの等張剤は、公知の 特許請求する製剤は、透明溶液として、または水性希釈 濃度で一般的に使用される。生理的に耐容される緩衝剤 10 剤中に、水、防腐剤および／または賦形剤、好ましくは を、好ましくは、改善されたｐＨ管理を与えるために添 リン酸緩衝液および／または食塩水および選択された塩 加する。製剤は、約ｐＨ４∼約ｐＨ１０などの、広範囲 を含有する第二のバイアルで再構成される凍結乾燥され のｐＨをカバーすることができ、好ましい範囲は約ｐＨ た少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体のバイアルを含むデ ５∼約ｐＨ９、最も好ましい範囲は約６．０∼約８．０ ュアルバイアルとして患者に提供され得る。単一溶液バ にわたり得る。好ましくは、本発明の製剤は約６．８∼ イアルまたは再構成を必要とするデュアルバイアルのい 約７．８のｐＨを有する。好ましい緩衝剤は、リン酸緩 ずれもが、複数回再使用でき、単回または複数サイクル 衝剤、最も好ましくはリン酸ナトリウム、特にリン酸緩 の患者治療のために十分であり得、従って、現在使用可 衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。 能なものよりも好都合な治療レジメンを提供することが 【０１３３】 できる。 Ｔｗｅｅｎ ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビ 20 タンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ 本特許請求の製品は、即時から２４時間また はそれ以上の期間にわたる投与に有用である。従って、 ４０（ポリオキシ 本発明の特許請求する製品は患者に有意の利点を提供す エチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、Ｔｗ る。本発明の製剤は、場合により、約２℃∼約４０℃の ｅｅｎ 温度で安全に保存することができ、また長期間にわたっ ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン モノオレエート）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（ポリオ てタンパク質の生物活性を保持することができ、従って キシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー 、溶液を６、１２、１８、２４、３６、４８、７２、ま ）およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、またはポ たは９６時間またはそれ以上の期間にわたって保持およ リソルベート２０もしくは８０またはポロキサマー１８ び／または使用できることを示す包装ラベルを許容する ４もしくは１８８、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）、ポ 。保存希釈剤を使用する場合、そのようなラベルは、１ リオール、他のブロックコポリマーなどの非イオン性界 ∼１２か月、半年、１年半および／または２年までの使 面活性剤のような医薬的に許容される可溶化剤、ならび 30 用を含み得る。 にＥＤＴＡおよびＥＧＴＡなどのキレート化剤のような 【０１３６】 他の添加剤を、場合により、凝集を低減するために製剤 本発明における少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体の溶液 または組成物に添加することができる。これらの添加剤 は、水性希釈剤中に少なくとも１つの抗体を混合するこ は、ポンプまたはプラスチック容器を使用して製剤を投 とを含む工程によって調製され得る。混合は、従来の溶 与する場合、特に有用である。医薬的に許容される界面 解および混合手順を用いて実施される。適切な希釈液を 活性剤の存在は、タンパク質が凝集する傾向を軽減する 調製するために、たとえば、水または緩衝液中の少なく 。 とも１つの抗体の測定量を、所望濃度のタンパク質およ 【０１３４】 び、場合により、防腐剤または緩衝剤を提供するのに十 本発明の製剤は、少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体と、 分な量で組み合わせる。この工程の変法は当業者によっ フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−ク 40 て認識される。たとえば、成分を添加する順序、付加的 レゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、ア な添加剤を使用するかどうか、製剤を調製する温度およ ルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等 びｐＨは、すべて、使用される濃度および投与手段のた ）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒ めに最適化することができる因子である。 ドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサールまたはそれらの 【０１３７】 混合物から成る群より選択される防腐剤を水性希釈剤中 特許請求する製品は、透明溶液として、または水性希釈 で混合することを含む工程によって調製され得る。水性 剤を含有する第二のバイアルで再構成される凍結乾燥さ 希釈剤中で少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体と防腐剤を れた少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体のバイアルを含む 混合することは、従来の溶解および混合手順を用いて実 デュアルバイアルとして患者に提供され得る。単一溶液 施される。適切な製剤を調製するために、たとえば、緩 バイアルまたは再構成を必要とするデュアルバイアルの 衝液中の少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体の測定量を、 50 いずれもが、複数回再使用でき、単回または複数サイク ( 33 ) JP 63 2015-172048 A 2015.10.1 64 ルの患者治療のために十分であり得、従って、現在使用 間またはそれ以上の期間にわたって溶液を使用するため 可能なものよりも好都合な治療レジメンを提供する。 に少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体を水性希釈剤中に再 【０１３８】 構成するための患者への指示書を提供する。単一バイア 特許請求する製品は、透明溶液または水性希釈剤を含有 ルの溶液製品に関しては、ラベルは、そのような溶液が する第二のバイアルで再構成される凍結乾燥された少な ２∼２４時間またはそれ以上にわたって使用できること くとも１つの抗体のバイアルを含むデュアルバイアルを を指示する。本特許請求の製品は、ヒト医薬品用途のた 、薬局、診療所、または他のそのような機関および施設 めに有用である。 に提供することによって患者に間接的に提供され得る。 【０１４１】 この場合の透明溶液は、１リットルまでまたはさらに大 本発明の製剤は、少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体と選 きいサイズであり得、そこから少なくとも１つの抗体溶 10 択された緩衝液、好ましくは食塩水または選択された塩 液の一部をより小さなバイアルに移すために１回または を含有するリン酸緩衝液とを混合することを含む工程に 複数回取り出し、薬局または診療所によってそれらの顧 より調製され得る。少なくとも１つの抗体と水性希釈剤 客および／または患者に提供さ 中の緩衝剤を混合することは、従来の溶解および混合手 れ得る、大きな容器を提供することができる。 順を用いて実施される。適当な製剤を調製するために、 【０１３９】 たとえば、水または緩衝液中の少なくとも１つの抗体の これらの単一バイアル系を含む広く認められている装置 測定量を、所望濃度のタンパク質および緩衝液を提供す は、溶液の送達用のペンインジェクター装置、たとえば るのに十分な量で水中の所望緩衝剤と組み合わせる。こ Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｅｎ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ の工程の変法は当業者によって認識される。たとえば、 Ｌａｋｅｓ，Ｎ．Ｊ．，ｗｗｗ．ｂｅｃｔｏｎｄｉｃ 成分を添加する順序、付加的な添加剤を使用するかどう ｋｅｎｓｏｎ．ｃｏｍ）、Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ（Ｂｕ 20 か、製剤を調製する温度およびｐＨは、すべて、使用さ ｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，ｗｗｗ．ｄｉ れる濃度および投与手段のために最適化することができ ｓｅｔｒｏｎｉｃ．ｃｏｍ；Ｂｉｏｊｅｃｔ，Ｐｏｒｔ る因子である。 ｌａｎｄ，Ｏｒｅｇ．（ｗｗｗ．ｂｉｏｊｅｃｔ．ｃｏ 【０１４２】 ｍ）；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕ 特許請求する安定なまたは保存された製剤は、透明溶液 Ｍｅｄｉｃａｌ（Ｐｅｔｅｒｂ として、または水性希釈剤中に防腐剤もしくは緩衝剤お ｏｒｏｕｇｈ，ＵＫ，ｗｗｗ．ｗｅｓｔｏｎ−ｍｅｄｉ よび賦形剤を含有する第二のバイアルで再構成される凍 ｃａｌ．ｃｏｍ）、Ｍｅｄｉ−Ｊｅｃｔ Ｃｏｒｐ（Ｍ 結乾燥された少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体のバイア ｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ．，ｗｗｗ．ｍｅｄｉ ルを含むデュアルバイアルとして患者に提供され得る。 ｊｅｃｔ．ｃｏｍ）によって製造または開発された、た 単一溶液バイアルまたは再構成を必要とするデュアルバ とえばＢＤ イアルのいずれもが、 ｃｔｓ，Ｗｅｓｔｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｅｎｓ、ＢＤ Ａｕｔｏｊｅｃｔｏｒ（ 30 登録商標）、Ｈｕｍａｊｅｃｔ（登録商標）、Ｎｏｖｏ 複数回再使用でき、単回または複数サイクルの患者治療 Ｐｅｎ（登録商標）、Ｂ−Ｄ（登録商標）Ｐｅｎ、Ａｕ のために十分であり得、従って、現在使用可能なものよ ｔｏＰｅｎ（登録商標）およびＯｐｔｉＰｅｎ（登録商 りも好都合な治療レジメンを提供する。 標）、ＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎＰｅｎ（登録商標）、Ｇｅ 【０１４３】 ｎｏｔｒｏｎｏｒｍ Ｐｅｎ（登録商標）、Ｈｕｍａｔ 本明細書中で述べる安定なまたは保存された製剤または Ｐｅｎ（登録商標）、Ｒｅｃｏ−Ｐｅｎ（登録商 溶液のいずれか中の少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体は ｒｏ 標）、Ｒｏｆｅｒｏｎ Ｐｅｎ（登録商標）、Ｂｉｏｊ 、当技術分野で周知のように、ＳＣまたはＩＭ注入、経 ｅｃｔｏｒ（登録商標）、ｉｊｅｃｔ（登録商標）、Ｊ 皮、経肺 −ｔｉｐ 、経粘膜、移植、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイク Ｎｅｅｄｌｅ−Ｆｒｅｅ Ｉｎｊｅｃｔｏｒ （登録商標）、Ｉｎｔｒａｊｅｃｔ（登録商標）、Ｍｅ 40 ロポンプ、または当業者によって認識される他の手段を ｄｉ−Ｊｅｃｔ（登録商標）などを含む。デュアルバイ 含む様々な送達方法を介して、本発明に従って患者に投 アル系を含む広く認められている装置は、Ｈｕｍａｔｒ 与することができる。 ｏｎＰｅｎ（登録商標）などの、再構成した溶液の送達 【０１４４】 用のカートリッジ中で凍結乾燥薬剤を再構成するための 治療への応用 ペンインジェクター系が包含される。 本発明の１つの実施形態では、本開示の抗ＩＬ−６抗体 【０１４０】 を含有する医薬組成物は、生物、好ましくは動物、好ま 本特許請求の製品は包装材料を含む。包装材料は、規制 しくは哺乳動物へのヒト化抗体の投与を容易にする。特 当局によって要求される情報に加えて、製品が使用でき 定の哺乳動物は、ウシ、イヌ、ウマ、ネコ、ヒツジおよ る条件を提供する。本発明の包装材料は、２つのバイア びブタ動物、非ヒト霊長動物、ならびにヒトを含む。ヒ ルの湿潤／乾燥製品のための溶液を形成し、２∼２４時 50 トが特に好ましい。 ( 34 ) JP 65 2015-172048 A 2015.10.1 66 【０１４５】 した（Ｊｅｅ ＩＬ−６は、その多面的活性のために、様々な疾患の病 ｉｏｎ 理に関与する。それゆえ、ＩＬ−６に対する高親和性の ｕｍａｎ 中和キメラまたはヒト抗体は、癌、悪液質、ＳＬＥ、関 ｅｔ ａｌ．，Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｉｎ ｈ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｌｉｎｅｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ａｎｔ 節リウマチ、骨粗しょう症、脳外傷、脳浮腫、うつ病お ｉ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ よびＣＨＦなどのＩＬ−６関連疾患において使用される ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ ｐｏｔｅｎｃｙ．Ｏｎｃｏｇ ことが望ましい。１つの好ましい態様では、本開示の抗 ｅｎｅ，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．２ ＩＬ−６抗体は関節リウマチを治療するために使用でき ８，２００１）。ＩＬ−６はまた、ｍｄｒ１遺伝子発現 る。抗ＩＬ−６抗体またはキメラもしくはヒト化を含む （ｍｄｒ１およびメタロチオネイン経路）を誘導するこ これらのｍＡｂの任意の誘導体、またはフラグメントは 10 とによって化学療法に対する乳癌細胞の耐性も促進し得 、骨痛を緩和するうえで、黒色腫、腎癌、前立腺癌、乳 る（Ｃｏｎｚｅ 癌、肺癌、結腸癌および多発性骨髄腫などの腫瘍の増殖 ｒｏｄｕｃｔｉｏｎ を抑制するうえで、リンパ増殖性障害およびＩＬ−６が ６ Ｃａｕｓｅｓ 関係づけられてきた他の疾患において使用できる。これ ａｎｃｅ らの抗体は、単一作用物質としてまたは他の治療薬と組 ｌｓ．Ｃ み合わせて使用できる。加えて、これらのＭａｂは、細 ａｎｃｅｒ 胞傷害性薬剤の治療効果を高めることができる化学療法 ０１）。（Ｃｏｎｚｅ 増感剤として使用できる。これらの抗体は、放射線の効 ｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ 果を改善し得る放射線増感剤として使用できる。それら ｉｎ はまた、ＩＬ−２、ＩＬ−１２および／またはＩＦＮα 20 ｉｓｔａｎｃｅ などの他の腫瘍免疫調節剤と組み合わせて使用すること Ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｅｒ もできる。加えて、抗ＩＬ−６抗体は、抗ＴＮＦ−α、 ８５８，２００１）。 ＩＬ−１２／ＩＬ−２３、ＩＬ−２、ＧｐＩＩｂ／ＩＩ 【０１４８】 Ｉａ受容体、ＣＤ５２、ＣＤ２０、ＲＳＶタンパク質、 腫瘍細胞の生存および疾患進行を媒介するＩＬ−６の能 ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体等のようなタンパク質のモノク 力は、インビトロおよびインビボの両方で腫瘍増殖への ローナル抗体；ならびにＲｉｔｕｘａｎ、Ｈｅｒｃｅｐ 抗ＩＬ−６ ｔｉｎ、Ｍｙｌｏｔａｒｇ、Ｃａｍｐａｔｈ、Ｚｅｖａ Ｌ−６の遮断は、インビトロでヒト脳腫瘍（グリア芽細 ｌｉｎ、Ｂｅｘｘａｒ、Ｅｒｂｉｔｕｘ、Ａｖａｓｔｉ 胞腫）の増殖を抑制できることが報告された（Ｇｏｓｗ ｎおよびＶｅｃｔｉｂｉｘを含む市販の承認された抗体 ａｍｉ と組み合わせて使用できる。 30 ｅｔ ａｎｄ ｐｐ．１９８−２０ ａｌ，Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ Ｐ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｉｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｒｅｓ Ｒｅｓｉｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌ ６１：８８５１−８８５８，２０ ｅｔ ａｌ，Ａｕｔｏｃｒｉｎ ６ Ｃａｕｓｅｓ ｉｎ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋ Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ Ｂｒｅａｓｔ Ｒｅｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６１：８８５１−８ ｍＡｂの阻害作用によって確認された。Ｉ ｅｔ ａｌ．，ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ− ６ −ｍｅｄｉａｔｅｄ 【０１４６】 ａｕｔｏｃｒｉｎｅ 従って、本発明はまた、本発明の少なくとも１つの抗Ｉ ｎ ｉｎ ｇｒｏｗｔｈ Ｌ−６抗体を使用して、当技術分野で公知のようにまた ｕｌｔｉｆｏｒｍｅ は本明細書で述べるように、細胞、組織、器官、動物ま ．Ｊ たは患者における少なくとも１つのＩＬ−６関連疾患を ，１９９８）。同じアプローチを使用して、マウスＣＬ 調節するまたは治療する方法を提供する。 Ｂ８抗ＩＬ−６抗体の注入はヒト腫瘍を担持するマウス 【０１４７】 の生存を延長させることが示された（Ｍａｕｒａｙ ＩＬ−６は、悪性細胞のアポトーシスの阻害を含む自己 ｔ ａｌ．，Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ 分泌またはパラ分泌機構を介して多発性骨髄腫（ＭＭ） ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ における悪性形質細胞の増殖、分化および生存を増強す 40 ｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ：ｃｒｉｔｉｃａｌ ることが公知である。ＭＭは治療不能の悪性形質細胞障 ｅ ｏｆ ＩＬ−６．Ｅｕｒ 害であるが、ＩＬ−６をブロックすることが有効な治療 ０（７）：２０６５−７３， であると主張されている（Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｍｏｔｉｏ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ ｍ Ｕ８７ＭＧ ７１：１８３７−１８４５ ｅ ｖｉｒｕｓ− ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａ Ｊ ｒｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ；３ ２０００）。また、ｍＣ ｅｔ ａ ＬＢ８抗ＩＬ−６抗体は、ヌードマウスにおいてヒト腎 ｌ．，Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｍｙｅｌｏｍａ：Ｎｅｗ Ｉ 癌腫瘍の増殖を後退させ、血清カルシウム濃度を低下さ ｎｓｉｇｈｔｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａ せることも報告された（Ｗｅｉｓｇｌａｓｓ ａｎｄ ｐｐｒｏａｃｈｅｓ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ：１４７− ｌ．，Ｔｈｅ １６５，２０００）。ＩＬ−６はまた、基底細胞癌にお ｎ−６ ｒｏｌｅ ける腫瘍形成作用も有するが、ＩＬ−６でトランスフェ ｙｐｅｒｃａｌｃｅｍｉａ クトした細胞は、アポトーシスを抑制することおよび活 ｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ 発に促進することの両方によって高い腫瘍増殖速度を示 50 ｉｎｔｏ ｉｎ ｔｈｅ ｅｔ ａ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｏｆ ｈ ｃｅｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ( 35 ) JP 67 ｎｕｄｅ 2015-172048 A 2015.10.1 68 １ ｌ．１９９９）が減少することが認められた。癌関連う ３８（５）：１８７９−８．，１９９５）。ＣＬＢ−８ つ病および脳腫瘍に続発する脳浮腫も、高レベルのＩＬ 抗体はまた、マウスにおける樹立したヒトホルモン不応 −６に関連してきた（Ｍｕｓｓｅｌｍａｎ 性前立腺腫瘍異種移植片も退縮させた ． ２００１）。本発明の抗ＩＬ−６抗体はまた、ヌー ｅｔ ｍｉｃｅ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ （Ｓｍｉｔｈ ａｌ．２００１）。抗インターロイキン−６モノ ａｌ ドマウスにおけるヒト黒色腫およびヒト前立腺癌誘発性 クローナル抗体は、ヌードマウスにおけるヒト前立腺癌 悪液質を抑制した。 異種移植片の退縮を誘導する（Ｓｍｉｔｈ 【０１５２】 ａｎｄ ｅｔ Ｋ ｅｌｌｅｒ，Ｐｒｏｓｔａｔｅ；４８（ｌ）：４７−５ 本発明は、多発性骨髄腫、白血病、急性白血病、急性リ ３）。 ンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＦ 【０１４９】 10 ＡＢ ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄 ＩＬ−６はまた、悪性疾患の予後因子およびマーカーで 性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、 もあり得る。腎細胞癌（ＲＣＣ）において、高レベルの ヘアリーセル白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リ ＩＬ−６は腫瘍転移、そして最終的には予後不良および ンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ 短い生存期間と相関することが報告された（Ｊｅａｎ− 腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、 Ｙｖｅｓ ａｌ．１９９２）。さらに 結腸直腸癌、腎細胞癌、膵癌、前立腺癌、鼻咽頭癌、悪 、ＲＣＣでは、高い血清ＩＬ−６は、ＩＬ−２治療に対 性組織球増殖症、腫瘍随伴症候群／悪性高カルシウム血 する応答不良に関連し（Ｆｕｍａｇａｌｌｉ ｅｔ ａ 症、固形腫瘍、腺癌、肉腫、悪性黒色腫、血管腫、転移 ｌ． ｓｅｒｕ 性疾患、癌関連骨吸収、癌関連骨痛の少なくとも１つを ｍ Ｂｌａｙ ｅｔ １９９９）Ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｍａｒｋｅｒｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｔｏ ｔｈｅｒａｐｙ． と相関する するまたは治療すること；癌転移の抑制；癌悪液質の改 １）、ＩＬ−２関連毒性の程度 善；およびメサンギウム増殖性糸球体腎炎等のような炎 （Ｃａｐｕｒｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｅｐｒｅｓｓｉｖｅ ｃｅｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ 物または患者において少なくとも１つの悪性疾患を調節 ８０（ ）Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｎｅ 含むが、これらに限定されない、細胞、組織、器官、動 ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２ 20 Ｂｒ ３−４）：４０７−ｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｅｔ ａｌ．２００１ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｎｄ ｉｍｍｕ ｅａｒｌｙ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ 症性疾患の治療のための方法を含む。そのような方法は ｉｎ 、場合により、そのようなＩＬ−６抗体の投与の前に、 ｄ 同時にまたは後に投与することにより、放射線療法、抗 ｃａｎ 血管新生薬、化学療法剤、ファルネシルトランスフェラ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ーゼ阻害剤等と組み合わせて使用することができる。 ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２−ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒ 【０１５３】 ａｐｙ．Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ ｏｇｙ；２６（８）：７９７−８０８）。 本発明はまた、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、全 30 身型若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎 【０１５０】 、胃潰瘍、血清反応陰性関節症、変形性関節症、炎症性 ＩＬ−６の高いレベルはまた、乳癌における予後不良お 腸疾患、潰瘍性結腸炎、全身性エリテマトーデス、抗リ よび転移性疾患の存在とも相関する（Ｋｕｒｅｂａｙａ ン脂質症候群、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、 ｓｈｉ 特発性肺線維症、全身性脈管炎／ヴェーゲナー肉芽腫症 ２０００ ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ −６ ｏｆ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｉｃａｌ ｃｅｌｌｓ Ｂｅｎｏｙ ２００２） ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ｆｒｏｍ ａｎｄ ｂｒｅａｓｔ ｉｔｓ ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ，ｓｅｒｕｍ ｅｌｅｔ ｒ 性／アトピー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、湿疹、 ｃｌｉｎ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ；７（２）：１２４−９．Ｓｅｒｕｍ ６， ｐｌａｓｍａ ＶＥＧＦ，ａｎｄ ｌｏａｄ ｉｎ ＶＥＧＦ ｂｒｅａｓｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｃｌｉｎ 、サルコイドーシス、精巣炎／精管復元術、アレルギー アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性結膜炎、過敏性 肺炎、移植、臓器移植拒絶反応、移植片対宿主病、全身 ｉ 性炎症反応症候群、敗血症症候群、グラム陽性菌敗血症 ＶＥＧＦ 40 、グラム陰性菌敗血症、培養陰性敗血症、真菌敗血症、 ｐｌａｔ 好中球減少性発熱、尿路性敗血症、髄膜炎菌血症、外傷 ｃａｎｃｅ ／出血、熱傷、電離放射線への暴露、急性膵炎、成人呼 Ｂｒｅａｓｔ Ｃａ 吸窮迫症候群、関節リウマチ、アルコール性肝炎、慢性 ｎｃｅｒ；２（４）：３１１−５。 炎症性病変、サルコイドーシス、クローン病、鎌状赤血 【０１５１】 球貧血、糖尿病、ネフローゼ、アトピー性疾患、過敏症 ＩＬ−６は、無力症／悪液質および骨吸収などの癌に関 反応、アレルギー性鼻炎、枯草熱（花粉症）、通年性鼻 連する病的状態における原因因子であると仮定される。 炎、結膜炎、子宮内膜症、喘息、蕁麻疹、全身性アナフ ＩＬ−６ノックアウトマウスでは、腫瘍誘発性悪液質（ ィラキシー、皮膚炎、悪性貧血、溶血性疾患、血小板減 Ｃａｈｌｉｎ 少症、何らかの器官または組織の移植片拒絶反応、腎移 ｅｔ ａｌ．２０００）および骨吸収（ その後の高カルシウム血症）（Ｓａｎｄｈｕ ｅｔ ａ 50 植拒絶反応、心移植拒絶反応、肝移植拒絶反応、膵移植 ( 36 ) JP 69 2015-172048 A 2015.10.1 70 拒絶反応、肺移植拒絶反応、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶反 症候群／血栓溶解性血小板減少性紫斑症、マラリア、デ 応、皮膚同種移植片拒絶反応、軟骨移植拒絶反応、骨移 ング出血熱、リーシュマニア症、ハンセン病、トキシッ 植拒絶反応、小腸移植拒絶反応、胎児胸腺移植片拒絶反 クショック症候群、連鎖球菌性筋炎、ガス壊疽、ヒト型 応、副甲状腺移植拒絶反応、何らかの器官または組織の 結核菌、トリ型結核菌群、ニューモシスティス・カリニ 異種移植拒絶反応、同種移植拒絶反応、抗受容体過敏症 （ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ 反応、グレーブス病、レイノー病、Ｂ型インスリン抵抗 骨盤内炎症性疾患、精巣炎／精巣上体炎、レジオネラ菌 性糖尿病、喘息、重症筋無力症、抗体媒介性細胞傷害、 、ライム病、インフルエンザＡ型、エプスタイン‐バー ＩＩＩ型過敏症反応、全身性エリテマトーデス、ＰＯＥ ウイルス、ウイルス関連血球貪食症候群、ウイルス性脳 ＭＳ症候群（多発性神経障害、臓器巨大症、内分泌障害 炎／無菌性髄膜炎等の少なくとも１つを含むが、これら 、単クローン性高ガンマグロブリン血症および皮膚変化 10 に限定されない、細胞、組織、器官、動物または患者に 症候群）、多発性神経障害、臓器巨大症、内分泌障害、 おける少なくとも１つの感染症を調節するまたは／治療 単クローン性高ガンマグロブリン血症、皮膚変化症候群 するための方法を提供する。 、抗リン脂質症候群、天疱瘡、強皮症、混合性結合組織 【０１５５】 病、特発性アジソン病、真性糖尿病、慢性活動性肝炎、 そのような方法のいずれもが、場合により、少なくとも 原発性胆汁性肝硬変、白斑、脈管炎、心筋梗塞（ＭＩ） １つの抗ＩＬ−６抗体を含有する少なくとも１つの組成 後心臓切開術症候群、ＩＶ型過敏症、接触皮膚炎、過敏 物または医薬組成物の有効量を、そのような調節、治療 性肺炎、同種移植拒絶反応、細胞内生物体に起因する肉 または療法を必要とする細胞、組織、器官、動物または 芽腫、薬物感受性、代謝性／特発性ウィルソン病、ヘモ 患者に投与することを含み得る。抗ＩＬ−６療法による クロマトーシス、α１−アンチトリプシン欠損症、糖尿 治療のための適応症は、参照により本出願に組み込まれ 病性網膜症、橋本甲状腺炎、骨粗しょう症、視床下部− 20 る、以下の参考文献：Ｖａｎ 下垂体−副腎軸評価、原発性胆汁性肝硬変、甲状腺炎、 ｒｌｅｕｋｉｎ−６：Ａｎ 脳脊髄炎 ｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８：２５３−２７８ 、悪液質、嚢胞性線維症、新生児慢性肺疾患、慢性閉塞 （１９９０）；Ｃａｍｐｂｅｌｌ 性肺疾患（ＣＯＰＤ）、家族性血球貪食性リンパ組織球 ｓｓｅｎｔｉａｌ 症、皮膚疾患、乾癬、脱毛、ネフローゼ症候群、腎炎、 ｒｏｎ−ｇａｍｍａ．Ａｎｄ 糸球体腎炎、急性腎不全、血液透析、尿毒症、毒性、子 −６ 癇前症、ｏｋｔ３療法、抗ｃｄ３療法、サイトカイン療 Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ 法、化学療法、放射線療法（たとえば無力症、貧血、悪 ／Ｗｅｈｉ 液質等を含むが、これらに限定されない）、慢性サリチ ｔ， ル酸中毒、睡眠時無呼吸、肥満症、心不全、副鼻腔炎、 30 ｒｉｃｈ 炎症性腸疾患等の少なくとも１つを含むが、これらに限 ６ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ 定されない、細胞、組織、器官、動物または患者におけ ｒａｐｙ る少なくとも１つのＩＬ−６媒介性免疫関連疾患を調節 ｌａｓｍａ するまたは治療するための方法も提供する。たとえば、 ｄ，７８（５）：１１９８−１２０４（１９９１）；Ｓ 各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、ｔｈｅ ｔａｒｎｅｓ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ，１２ｔｈ−１７ｔｈ Ｅ ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｐｐ ｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，Ｃｏｎｎ．（ １９９８，２０００）参照。 ｆｏｒ ａｌ．，“Ｅ Ｉｎｔｅｒｆｅ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ Ｉｎｓｕｌｉｎ− ｉｎ ＮＯＤ Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓ （１９９１）；Ｈｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ− ｆｏｒ ａ ｅｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐａｔｉｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐ ａｌ．，“Ａｎｔｉ−ＩＬ−６ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｇａｉｎｓｔ Ｌｅｔｈａｌ Ｔｈｅ ｗｉｔｈ Ｌｅｕｋｅｍｉａ，”Ｂｌｏｏ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ｒｉｃｈｉａ ｅｔ ａｌ 40 ｅｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｉｃｅ，”． ｔｅｃｔ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｗｅｌｌｓ Ｒｏｌｅ ８７：７３９−７４２ ｗａｙ，ＮＪ．（１９７２，１９７７，１９８２，１９ ｒａｐｙ Ｓｎｉｃｋ，“Ｉｎｔｅ Ｏｖｅｒｖｉｅｗ，”Ａｎ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｔｉｏｎｓ，Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒａｈ ８７，１９９２，１９９９），Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅ ｃａｒｉｎｉｉ）肺炎、 ｃｏｌｉ Ｌｅｔｈａｌ Ｐｒｏ Ｅｓｃｈｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ Ｔｕｍｏｒ ａｎｄ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ．Ｃｈａｌｌｅｎｇｅ Ｆａ ｉｎ Ｍ ｉｃｅ，”．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４５（１２）：４１ ８５−４１９１ ｅｔ （１９９０）； Ｓｔｒａｓｓｍａｎ ａｌ．，“Ｅｖｉｄｅｎｃｅ Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋ 【０１５４】 ｉｎ ６ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃａｎｃ 本発明はまた、急性または慢性細菌感染、細菌、ウイル ｅｒ Ｃａｃｈｅｘｉａ，”．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ スおよび真菌感染を含む急性および慢性の寄生または感 ，８９：１６８１−１６８４ 染過程、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、髄膜炎、肝炎（ 示されている。 Ａ型、Ｂ型またはＣ型等）、敗血症性関節炎、腹膜炎、 【０１５６】 肺炎、喉頭蓋炎、大腸菌Ｏ１５７：ｈ７、溶血性尿毒症 50 本発明の任意の方法は、少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗 （１９９２）において開 ( 37 ) JP 71 2015-172048 A 2015.10.1 72 体を含有する組成物または医薬 Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｔａｒａｓｃｏｎ 組成物の有効量を、そのような調節、治療または療法を ｃｋｅｔ 必要とする細胞、組織、器官、動物または患者に投与す ｅｌｕｘｅ ることを含み得る。そのような方法は、場合により、そ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔａｒａｓｃｏｎ のような免疫疾患もしくは悪性疾患を治療するための同 ｎｇ，Ｌｏｍａ 時投与または併用療法をさらに含むことができ、前記の ）参照。 少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体、その特定部分または 【０１５７】 変異体の投与は、前、同時および／または後に、少なく 本発明の組成物、併用療法、同時投与、装置および／ま とも１つのＴＮＦアンタゴニスト（たとえば、限定され たは方法（本発明の少なくとも１つの抗体、その特定部 ることなく、ＴＮＦ抗体またはフラグメント、可溶性Ｔ 10 分および変異体をさらに含む）に適するＴＮＦアンタゴ ＮＦ受容体またはフラグメント、それらの融合タンパク ニストは、抗ＴＮＦ抗体、その抗原結合フラグメント、 質、または低分子ＴＮＦアンタゴニスト）、ＩＬ−１８ およびＴＮＦに特異的に結合する受容体分子；サリドマ 抗体またはフラグメント、低分子ＩＬ−１８アンタゴニ イド、テニダップ、ホスホジエステラーゼ阻害剤（たと ストまたはＩＬ−１８受容体結合タンパク質、ＩＬ−１ えばペントキシフィリンおよびロリプラム）、Ａ２ｂア 抗体（ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの両方を含む）また デノシン受容体アゴニストおよびＡ２ｂアデノシン受容 はフラグメント、可溶性ＩＬ−１受容体アンタゴニスト 体エンハンサーなどの、ＴＮＦ合成、ＴＮＦ放出または 、抗リウマチ薬（たとえばメトトレキサート、オーラノ 標的細胞へのその作用を阻止および／または阻害する化 フィン、金チオグルコース、アザチオプリン、エタネル 合物；マイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナー セプト、金チオリンゴ酸ナトリウム、硫酸ヒドロキシク ゼ阻害剤などの、ＴＮＦ受容体シグナル伝達を阻止およ ロロキン、レフルノミド、スルファサラジン、放射線療 20 び／または阻害する化合物；メタロプロテイナーゼ阻害 法、抗血管新生薬、化学療法剤、サリドマイド、筋弛緩 剤などの、膜ＴＮＦ切断をブロックおよび／または阻害 薬、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、 する化合物；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害 鎮痛薬、麻酔薬、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、 剤（たとえばカプトプリル）などの、ＴＮＦ活性をブロ 抗菌薬（たとえばアミノグリコシド、抗真菌薬、駆虫薬 ックおよび／または阻害する化合物；ならびにＭＡＰキ 、抗ウイルス薬、カルバペネム、セファロスポリン、フ ナーゼ阻害剤などの、ＴＮＦ産生および／または合成を ルオロキノロン、マクロライド、ペニシリン、スルホン ブロックおよび／または阻害する化合物を含むが、これ アミド、テトラサイクリン、別の抗菌薬）、乾癬治療薬 らに限定されない。 、コルチコステロイド、タンパク質同化ステロイド、糖 【０１５８】 尿病関連薬、無機物、栄養素、甲状腺薬、ビタミン、カ 治療処置 ルシウム関連ホルモン、エリスロポエチン（たとえばエ 30 本発明の任意の方法は、少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗 ポエチンα）、フィルグラスチム（たとえばＧ−ＣＳＦ 体を含有する組成物または医薬組成物の有効量を、その 、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ）、サルグラモスチム（ＧＭ−ＣＳ ような調節、治療または療法を必要とする細胞、組織、 Ｆ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、免疫、免疫グロブリン、免疫抑 器官、動物または患者に投与することを含む、ＩＬ−６ 制薬（たとえばバシリキシマブ、サイクロスポリン、ダ 媒介性疾患を治療するための方法を含み得る。そのよう クリズマブ）、成長ホルモン、ホルモン補充薬、エスト な方法は、場合により、そのような免疫疾患を治療する ロゲン受容体調節剤、散瞳薬、毛様体筋麻痺薬、アルキ ための同時投与または併用療法をさらに含むことができ ル化剤、代謝拮抗薬、有糸分裂阻害剤、放射性医薬品、 、前記の少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体、その特定部 抗うつ薬、抗躁病薬、抗精神病薬、抗不安薬、催眠薬、 分または変異体の投与は、上述した少なくとも１つの作 交感神経様作用薬、興奮薬、ドネペジル、タクリン、喘 用物質を前に、同時におよび／または後に投与すること 息治療薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、ロイコトリ 40 をさらに含む。 エン阻害剤、メチルキサンチン、クロモリン、エピネフ 【０１５９】 リンまたは類似体、ドルナーゼα（Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ 典型的には、病的状態の治療は、組成物中に含まれるも ）、サイトカインまたサイトカインアンタゴニストから のの比活性に依存して、平均で、各投与につき患者の１ 選択される少なくとも１つを投与することをさらに含む キログラム当たり少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体が少 。適切な投与量は当技術分野において周知である。たと なくとも約０．０１∼５００ミリグラムの範囲、好まし えば、各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、 くは単回または多回投与につき患者の１キログラム当た Ｗｅｌｌｓ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃ り抗体が少なくとも約０．１∼１００ミリグラムの範囲 Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２ｎｄ Ｅｄｉ に合計でなる、少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体組成物 Ｌａｎｇｅ，Ｓ の有効量または投与量を投与することによって実施され ｅｔ ｏｔｈｅｒａｐｙ ｔｉｏｎ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ｔａｍｆｏｒｄ， ａｎｄ Ｃｏｎｎ．（２０００）；ＰＤＲ 50 Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ Ｐｏ ２０００，Ｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉ Ｌｉｎｄａ，Ｃａｌｉｆ．（２０００ る。あるいは、有効血清濃度は、単回または多回投与に ( 38 ) JP 73 2015-172048 A 2015.10.1 74 つき０．１∼５０００μｇ／ｍｌの血清濃度を含み得る 体重の１キログラム当たり約０．１∼１００ミリグラム 。適当な投与量は医師に公知であり、言うまでもなく、 であり得る。通常は、各投与につきまたは持続放出形態 特定の疾患状態、投与される組成物の比活性、および治 でキログラム当たり０．１∼５０、好ましくは０．１∼ 療を受けている特定の患者に依存し、一部の場合には、 １０ミリグラムが所望結果を得るために有効である。 所望治療量を達成するために、反復投与、すなわち特定 【０１６２】 の観測用量または測定用量の反復個別投与を与える必要 非限定的な例として、ヒトまたは動物の治療は、１日当 があり得、前記個別投与は、所望１日用量または作用が たり、０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、 達成されるまで反復される。 ３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３ 【０１６０】 、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、 好ましい用量は、場合により、０．１、０．２、０．３ 10 ２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３ 、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、 ０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０または １、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１ １００ｍｇ／ｋｇなどの、０．１∼１００ｍｇ／ｋｇの ２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０ 本発明の少なくとも１つの抗体の単回または定期的投与 、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、 量として、単回注射または反復用量を使用して、１、２ ２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３ 、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１ ７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５ ３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１ 、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、 、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、 ５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６２、６ ３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３ ３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１ ８、３９または４０日間の少なくとも１つ、あるいはま 、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、 20 たは加えて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１ ８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８ ０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８ ８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６ 、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、 、９７、９８、９９および／または１００∼５００ｍｇ ２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３ ／ｋｇ／投与、またはその任意の範囲、値もしくは割合 ５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３ 、または単回もしくは多回投与当たり０．１、０．５、 、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１ま ０．９、１．０、１．１、１．２、１．５、１．９、２ たは５２週間の少なくとも１つ、あるいはまたは加えて ．０、２．５、２．９、３．０、３．５、３．９、４． 、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、 ０、４．５、４．９、５．０、５．５、５．９、６．０ １２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９また 、６．５、６．９、７．０、７．５、７．９、８．０、 は２０年間の少なくとも１つ、またはそれらの任意の組 ８．５、８．９、９．０、９．５、９．９、１０、１０ 30 合せで提供され得る。 ．５、１０．９、１１、１１．５、１１．９、１２、１ 【０１６３】 ２．５、１２．９、１３．０、１３．５、１３．９、１ 体内投与に適する剤形（組成物）は、一般に、単位当た ４．０、１４．５、１４．９、１５、１５．５、１５． りまたは容器当たり約０．１ミリグラム∼約５００ミリ ９、１６、１６．５、１６．９、１７、１７．５、１７ グラムの有効成分を含有する。これらの医薬組成物にお ．９、１８、１８．５、１８．９、１９、１９．５、１ いて、有効成分は、通常、組成物の総重量に基づき約０ ９．９、２０、２０．５、２０．９、２１、２２、２３ ．５∼９９．９９９重量％の量で存在する。 、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、 【０１６４】 ４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８ 非経口製剤および投与 ０、８５、９０、９６、１００、２００、３００、４０ 非経口投与のために、抗体は、医薬的に許容される非経 ０、５００、６００、７００、８００、９００、１００ 40 口ビヒクルと結合してまたは別途に提供される、溶液、 ０、１５００、２０００、２５００、３０００、３５０ 懸濁液、乳剤または凍結乾燥粉末として製剤され得る。 ０、４０００、４５００および／または５０００μｇ／ そのようなビヒクルの例は、水、食塩水、リンガー液、 ｍｌの血清濃度、またはその任意の範囲、値もしくは割 デキストロース溶液、および１∼１０％ヒト血清アルブ 合を達成する用量を含み得る。 ミンである。リポソームおよび不揮発性油などの非水性 【０１６１】 ビヒクルも使用できる。ビヒクルまたは凍結乾燥粉末は あるいは、投与される用量は、特定作用物質の薬力学的 、等張性（たとえば塩化ナトリウム、マンニトール）お 特性、ならびにその投与方法および経路；受容者の年齢 よび化学的安定性（たとえば緩衝剤および防腐剤）を維 、健康状態および体重；症状の性質および程度、併用処 持する添加剤を含有し得る。製剤は、公知のまたは適切 置の種類、治療頻度、ならびに所望効果などの公知の因 な技術によって滅菌される。 子に依存して異なり得る。通常、有効成分の投与量は、 50 【０１６５】 ( 39 ) JP 75 2015-172048 2015.10.1 76 適切な医薬担体は、当技術分野における標準的な参考テ ０，Ｍａｒｃｅｌ キストであるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ ｅｕｔｉｃａｌ A Ｐｈａｒｍａｃ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌの最 Ｙｏｒｋ １９９４） などの化学増強剤を含む、またはタンパク質およびペプ 新版に記載されている。 チドを含有する製剤の皮膚への適用（国際公開公報第Ｗ 【０１６６】 Ｏ９８／５３８４７号）、または電気穿孔などの一時的 非経口投与用の製剤は、一般的な賦形剤として滅菌水ま 輸送経路を作り出すためもしくはイオン導入などの皮膚 たは食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキ を通しての荷電薬剤の移動性を高めるための電場の適用 レングリコール、植物起源の油、水素化ナフタレン等を 、または超音波導入（米国特許第４，３０９，９８９号 含有し得る。注射用の水性または油性懸濁液は、公知の および同第４，７６７，４０２号）などの超音波の適用 方法に従って、適切な乳化剤または増湿剤および懸濁化 10 を可能にする酸化剤を含む、ゲル、軟膏、ローション、 剤を使用することによって調製できる。注射剤は、水溶 懸濁液またはパッチ送達システムなどの、しかしこれら 液または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液などの非 に限定されない経皮的投与のために調製され得る（上記 毒性で非経口的に投与可能な希釈剤であり得る。使用可 の特許公開および特許は全体が参照により本明細書に組 能なビヒクルまたは溶媒として、水、リンガー液、等張 み込まれる）。 食塩水等が許容される；通常の溶媒または懸濁溶媒とし 【０１６８】 ては、滅菌不揮発性油が使用できる。これらの目的のた 経肺／経鼻投与 めに、天然または合成または半合成の脂肪油または脂肪 経肺投与は、好ましくは、少なくとも１つの抗ＩＬ−６ 酸；天然または合成または半合成のモノグリセリドまた 抗体組成物が肺または洞の下気道に達するために有効な はジグリセリドまたはトリグリセリドを含む、任意の種 粒径で送達される。本発明によれば、少なくとも１つの 類の不揮発性油および脂肪酸が使用できる。非経口投与 20 抗ＩＬ−６抗体は、吸入による治療薬の投与のための当 は当技術分野において公知であり、従来の注射手段、米 技術分野において公知の様々な吸入または点鼻装置のい 国特許第５，８５１，１９８号に記載されているガス加 ずれかによって送達され得る。エアロゾル化された製剤 圧無針注射装置、および全体が参照により本明細書に組 を患者の洞腔（ｓｉｎｕｓ み込まれる米国特許第５，８３９，４４６号に記載され に沈着させることができるこれらの装置は、定量吸入器 ているレーザー穿孔装置を含むが、これらに限定されな 、ネブライザー、ドライパウダー発生器、噴霧器等を含 い。 む。抗体の経肺または経鼻投与を導くのに適する他の装 【０１６７】 置も当技術分野において公知である。すべてのそのよう 選択的送達 な装置は、抗体をエアロゾルで配薬する投与に適した製 本発明はさらに、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節 剤を使用することができる。そのようなエアロゾルは、 内、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、小脳 30 溶液（水性および非水性の両方）または固体粒子のいず 内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨 れかで構成され得る。Ｖｅｎｔｏｌｉｎ（登録商標）定 内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内 量吸入器のような定量吸入器は、典型的には推進剤ガス 、直腸内、腎内、網膜内、髄腔内、滑液包内、胸腔内、 を使用し、吸気時の作動を必要とする（たとえば国際公 子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口腔、舌下、鼻 開公報第ＷＯ９４／１６９７０号、同第ＷＯ９８／３５ 腔内または経皮手段による少なくとも１つの抗ＩＬ−６ ８８８号参照）。Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（商標）（Ａｓ 抗体の投与に関する。少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体 ｔｒａ）、Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（登録商標）（Ｇｌａｘ 組成物は、特に液体溶液または懸濁液の形態で非経口（ ｏ）、Ｄｉｓｋｕｓ（登録商標）（Ｇｌａｘｏ）、Ｓｐ 皮下、筋肉内もしくは静脈内）または任意の他の投与に ｉｒｏｓ（商標）吸入器（Ｄｕｒａ）、Ｉｎｈａｌｅ 使用するため；クリームおよび坐薬などの、しかしこれ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって市販されている装置 らに限定されない、特に半固体形態で膣または直腸投与 40 、およびＳｐｉｎｈａｌｅｒ（登録商標）パウダー吸入 において使用するため；錠剤またはカプセル剤の形態な 器（Ｆｉｓｏｎｓ）のようなドライパウダー吸入器は、 どの、しかしこれらに限定されない口腔内または舌下投 混合パウダーの呼吸作動を用いる（全体が参照により本 与のため；または粉末、点鼻薬またはエアロゾルまたは 明細書に組み込まれる、米国特許第４，６６８，２１８ 特定作用物質の形態などの、しかしこれらに限定されな 号、Ａｓｔｒａ、欧州特許第ＥＰ い鼻腔内投与のため；または皮膚構造を改変するためも ｓｔｒａ、国際公開公報第ＷＯ９７／２５０８６号、Ｇ しくは経皮パッチにおける薬剤濃度を高めるためのジメ ｌａｘｏ、国際公開公報第ＷＯ９４／０８５５２号、Ｄ チルスルホキシド（全体が参照により本明細書に組み込 ｕｒａ、米国特許第５，４５８，１３５号、Ｉｎｈａｌ まれる、Ｊｕｎｇｉｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎ“Ｄｒ ｅ、国際公開公報第ＷＯ９４／０６４９８号、Ｆｉｓｏ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｎｓ）。ＡＥＲｘ（商標）（Ａｒａｄｉｇｍ）、Ｕｌｔ ｕｇ Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ 煤GＨｓｉｅｈ，Ｄ．Ｓ．，Ｅｄｓ．，ｐｐ．５９−９ 50 ｃａｖｉｔｙ）または肺胞 ２３７５０７号、Ａ ｒａｖｅｎｔ（登録商標）ネブライザー（Ｍａｌｌｉｎ ( 40 ) JP 77 ｃｋｒｏｄｔ）、およびＡｃｏｒｎ ネブライザー（Ｍａｒｑｕｅｓｔ 2015-172048 A 2015.10.1 78 ＩＩ（登録商標） Ｍｅｄｉｃａｌ タンパク質の安定化のための賦形剤または作用物質も含 Ｐ 有し得る。抗体組成物タンパク質を製剤するのに有用な ｒｏｄｕｃｔｓ）（米国特許第５，４０４，８７１号、 バルクタンパク質は、アルブミン、プロタミン等を含む Ａｒａｄｉｇｍ、国際公開公報第ＷＯ９７／２２３７６ 。抗体組成物タンパク質を製剤するのに有用な典型的な 号）（上記の参考文献は全体が参照により本明細書に組 炭水化物は、スクロース、マンニトール、ラクトース、 み込まれる）のようなネブライザーは溶液からエアロゾ トレハロース、グルコース等を含む。抗体組成物タンパ ルを生成し、一方定量吸入器、ドライパウダー吸入器等 ク質製剤はまた、エアロゾルを形成する際に溶液の噴霧 は小さな粒子エアロゾルを生成 化によって引き起こされる抗体組成物タンパク質の表面 する。市販の吸入装置のこれらの特定例は、本発明の実 誘導凝集を低減するまたは防止することができる界面活 施に適する特定装置を代表することが意図されており、 10 性剤も含有し得る。ポリオキシエチレン脂肪酸エステル 本発明の範囲を限定するものではない。好ましくは、少 およびアルコール、ならびにポリオキシエチレンソルビ なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体を含有する組成物は、ド トール脂肪酸エステルなどの、様々な従来の界面活性剤 ライパウダー吸入器または噴霧器によって送達される。 が使用できる。量は、一般に、製剤の０．００１∼１４ 本発明の少なくとも１つの抗体を投与するための吸入装 重量％の範囲である。本発明のために特に好ましい界面 置のいくつかの望ましい特徴がある。たとえば、吸入装 活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエー 置による送達は、好都合には信頼性があり、再現可能且 ト、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０等である つ正確である。吸入装置は、場合により、良好な呼吸適 。ＩＬ−６抗体または特定部分または変異体などのタン 用性のために、小さな乾燥粒子、たとえば約１０μｍ未 パク質の製剤のための当技術分野で公知の付加的な作用 満、好ましくは約１∼５μｍの乾燥粒子を送達すること 物質も、製剤に含めることができる。 ができる。 20 【０１７１】 【０１６９】 ネブライザーによるＩＬ−６抗体組成物の投与 スプレーとしてのＩＬ−６抗体組成物の投与 抗体組成物タンパク質は、ジェットネブライザーまたは ＩＬ−６抗体組成物タンパク質を含むスプレーは、少な 超音波ネブライザーなどのネブライザーによって投与す くとも１つの抗ＩＬ−６抗体の懸濁液または溶液を加圧 ることができる。典型的には、ジェットネブライザーで 下でノズルを通して押し出すことによって生成され得る は、開口部を通して高速空気ジェットを作り出すために 。ノズルの大きさおよび形状、適用圧、ならびに液体供 圧縮空気源を使用する。気体がノズルを越えて広がると 給速度は、所望出力および粒径を達成するように選択さ 共に、低圧領域が作られ、それが液体レザーバに接続さ れ得る。エレクトロスプレーは、たとえば毛管またはノ れた毛管を通して抗体組成物タンパク質の溶液を引き込 ズル供給口と接続した電場によって生成され得る。好都 む。毛管からの液体流は、管から出て行くときに不安定 合には、噴霧器によって送達される少なくとも１つのＩ 30 なフィラメントおよび小滴へと剪断され、エアロゾルを Ｌ−６抗体組成物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満 作り出す。所与のジェットネブライザーから所望性能特 、好ましくは約１μｍ∼約５μｍの範囲、最も好ましく 性を達成するために一連の形状、流速、およびバッフル は約２μｍ∼約３μｍの粒径を有する。 型が使用できる。超音波ネブライザーでは、高周波電気 【０１７０】 エネルギーを使用して振動機械エネルギーを作り出し、 噴霧器での使用に適する少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗 典型的には圧電変換器を用いる。このエネルギーは、直 体組成物タンパク質の製剤は、典型的には、溶液ｍｌ当 接またはカップリン たり約０．１ｍｇ∼約１００ｍｇまたはｍｇ／ｇｍの少 グ流体を介して抗体組成物タンパク質の製剤に伝達され なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体組成物タンパク質、また 、抗体組成物タンパク質を含むエアロゾルを作り出す。 はその中の任意の範囲もしくは値、たとえば、限定され 好都合には、ネブライザーによって送達される抗体組成 ることなく、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５ 40 物タンパク質の粒子は、約１０μｍ未満、好ましくは約 、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、 １μｍ∼約５μｍの範囲、最も好ましくは約２μｍ∼約 ５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、 ３μｍの粒径を有する。 １５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２ 【０１７２】 ３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０ ジェットまたは超音波のいずれかのネブライザーでの使 、４５、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍ 用に適する少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体の製剤は、 ｇ／ｍｌまたはｍｇ／ｇｍの濃度で水溶液中に抗体組成 典型的には、溶液ｍｌ当たり約０．１ｍｇ∼約１００ｍ 物タンパク質を含有する。製剤は、賦形剤、緩衝剤、等 ｇの少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体タンパク質の濃度 張剤、防腐剤、界面活性剤および、好ましくは亜鉛など を含む。製剤は、賦形剤、緩衝剤、等張剤、防腐剤、界 の作用物質を含有し得る。製剤はまた、緩衝剤、還元剤 面活性剤および、好ましくは亜鉛などの作用物質を含有 、バルクタンパク質または炭水化物などの、抗体組成物 50 し得る。製剤はまた、緩衝剤、還元剤、バルクタンパク ( 41 ) JP 79 2015-172048 A 2015.10.1 80 質または炭水化物などの、少なくとも１つの抗ＩＬ−６ カーボンである。界面活性剤は、少なくとも１つの抗Ｉ 抗体組成物タンパク質の安定化のための賦形剤または作 Ｌ−６抗体を噴射剤中の懸濁液として安定化する、有効 用物質も含有し得る。少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体 成分を化学分解から保護する、等のために選択され得る 組成物タンパク質を製剤するのに有用なバルクタンパク 。適切な界面活性剤は、ソルビタントリオレエート、ダ 質は、アルブミン、プロタミン等を含む。少なくとも１ イズレシチン、オレイン酸等を含む。一部の場合には、 つの抗ＩＬ−６抗体を製剤するのに有用な典型的な炭水 エタノールなどの溶媒を用いる溶液エアロゾルが好まし 化物は、スクロース、マンニトール、ラクトース、トレ い。タンパク質の製剤のために当技術分野において公知 ハロース、グルコース等を含む。少なくとも１つの抗Ｉ の付加的な作用物質も、製剤に含めることができる。 Ｌ−６抗体製剤はまた、エアロゾルを形成する際に溶液 【０１７５】 の噴霧化によって引き起こされる少なくとも１つの抗Ｉ 10 当業者は、本発明の方法が、本明細書に記載していない Ｌ−６抗体の表面誘導凝集を低減するまたは防止するこ 装置による少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体組成物の経 とができる界面活性剤も含有し得る。ポリオキシエチレ 肺投与によって達成され得ることを認識する。 ン脂肪酸エステルおよびアルコール、ならびにポリオキ 経口製剤および投与 シエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの、様々な 経口投与用の製剤は、腸壁の透過性を人工的に高めるた 従来の界面活性剤が使用できる。量は、一般に、製剤の めのアジュバント（たとえばレゾルシノールならびにポ ０．００１∼４重量％の範囲である。本発明の目的のた リオキシエチレンオレイルエーテルおよびｎ−ヘキサデ めに特に好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンソ シルポリエチレンエーテルなどの非イオン性界面活性剤 ルビタンモノオレエート、ポリソルベート８０、ポリソ ）の同時投与、ならびに酵素分解を阻害するための酵素 ルベート２０等である。抗体タンパク質などのタンパク 阻害剤（膵臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオ 質の製剤のための当技術分野で公知の付加的な作用物質 20 ロホスフェート（ＤＦＦ）およびトラジロール）の同時 も、製剤に含めることができる。 投与に基づく。経口投与用の固体型剤形の有効成分化合 【０１７３】 物は、スクロース、ラクトース、セルロース、マンニト 定量吸入器によるＩＬ−６抗体組成物の投与 ール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デ 定量吸入器（ＭＤＩ）では、噴射剤、少なくとも１つの キストラン、デンプン、寒天、アルギネート、キチン、 抗ＩＬ−６抗体、および任意の賦形剤または他の添加剤 キトサン、ペクチン、トラガカントゴム、アラビアゴム を、液化圧縮ガスを含む混合物として容器中に含む。定 、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成 量バルブが作動すると、好ましくは、約１０μｍ未満、 または半合成のポリマー、およびグリセリドを含む少な 好ましくは約１μｍ∼約５μｍ、最も好ましくは約２μ くとも１つの添加剤と混合することができる。これらの ｍ∼約３μｍのサイズ範囲の粒子を含有する、エアロゾ 剤形はまた、他のタイプ（１または複数）の添加剤、た ルとしてダイ混合物（ｄｉｅ とえば不活性希釈剤、ステアリン酸マグネシウム、パラ ｍｉｘｔｕｒｅ）を放出 30 する。所望エアロゾル粒径は、ジェットミル処理、噴霧 ベンなどの潤滑剤、ソルビン酸、アスコルビン酸、α− 乾燥、臨界点凝縮などを含む、当業者に公知の様々な方 トコフェロールなどの防腐剤、システインなどの抗酸化 法によって生成される抗体組成物タンパク質の製剤を使 剤、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、甘味料、着香料 用することによって得られる。好ましい定量吸入器は、 、香料等を含有し得る。 ３ＭまたはＧｌａｘｏによって製造される、ハイドロフ 【０１７６】 ルオロカーボン噴射剤を用いるものを含む。 錠剤および丸剤は、腸溶性製剤へとさらに加工され得る 【０１７４】 。経口投与用の液体製剤は、医療用途のために許容され 定量吸入器装置で使用するための少なくとも１つの抗Ｉ る乳剤、シロップ、エリキシル、懸濁液および溶液製剤 Ｌ−６抗体の製剤は、一般に、非水性媒質中の懸濁液と を含む。 して、たとえば界面活性剤を用いて噴射剤に懸濁した少 40 これらの製剤は、前記分野において通常使用される不活 なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体を含有する微細粉末を含 性希釈剤、たとえば水を含有し得る。リポソームもまた む。噴射剤は、このために使用される任意の従来の物質 、インスリンおよびヘパリンの薬剤送達システムとして 、たとえば、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフ 記述されている（米国特許第４，２３９，７５４号）。 ルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノールおよ 最近になって、混合アミノ酸（プロテイノイド）の人工 び１，１，１，２−テトラフルオロエタン、ＨＦＡ−１ ポリマーのミクロスフェアが医薬品を送達するために用 ３４ａ（ハイドロフルオロアルカン−１３４ａ）、ＨＦ いられている（米国特許第４，９２５，６７３号）。さ Ａ−２２７（ハイドロフルオロアルカン−２２７）等を らに、米国特許第５，８７９，６８１号および同第５， 含む、クロロフルオロカーボン、ハイドロクロロフルオ ８７１，７５３号に記載されている担体化合物は、当技 ロカーボン、ハイドロフルオロカーボン、または炭化水 術分野で公知の生物学的に活性な作用物質を経口的に送 素であり得る。好ましくは、噴射剤はハイドロフルオロ 50 達するために使用される。 ( 42 ) JP 81 2015-172048 A 2015.10.1 82 【０１７７】 せ、たとえばタンニン酸亜鉛塩を含有し得る。加えて、 経粘膜製剤および投与 本発明の化合物または、好ましくは上述したような比較 粘膜面を通しての吸収に関して、少なくとも１つの抗Ｉ 的不溶性の塩は、注射に適する、ゲル、たとえばゴマ油 Ｌ−６抗体を投与する組成物および方法は、乳剤粒子の を含むモノステアリン酸アルミニウムゲルに製剤するこ 粘膜接着を達成することによって粘膜表面を通しての吸 とができる。特に好ましい塩は、亜鉛塩、タンニン酸亜 収を促進する、複数のサブミクロン粒子、粘膜接着性高 鉛塩、パモ酸塩等である。注射用徐放性デポー剤のもう 分子、生物活性ペプチド、および水性連続相を含有する １つのタイプは、たとえば米国特許第３，７７３，９１ 乳剤を含む（米国特許第５，５１４，６７０号）。本発 ９号に記載されているポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリ 明の乳剤の適用に適する粘膜表面は、角膜、結膜、口腔 マーのような、緩やかに分解する非毒性の非抗原性ポリ 、舌下、鼻、膣、肺、胃、腸、および直腸投与経路を含 10 マーに封入するために分散された化合物または塩を含む み得る。膣または直腸投与のための製剤、たとえば坐薬 。化合物または、好ましくは上述したような比較的不溶 は、賦形剤として、たとえばポリアルキレングリコール 性の塩はまた、特に動物における使用のために、コレス 、ワセリン、ココアバター等を含有し得る。鼻腔内投与 テロールマトリックスシラスティックペレットに製剤す 用の製剤は、固体であって、たとえばラクトースを賦形 ることもできる。さらなる除放性製剤、デポー剤または 剤として含有し得るか、または点鼻薬の水溶液または油 埋め込み製剤、たとえばガスまたは液体リポソームは、 性溶液であり得る。口腔内投与については、賦形剤は、 文献において公知である（米国特許第５，７７０，２２ 糖類、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシ ２号および“Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ウム、アルファ化デンプン等を含む（米国特許第５，８ ｏｌｌｅｄ ４９，６９５号）。 ｒｙ 【０１７８】 20 Ｒｅｌｅａｓｅ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒ Ｄｅｌｉｖｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ”Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｄ．，Ｍａｒｃｅｌ ｅ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ 経皮製剤および投与 ．，１９７８）。 経皮投与のために、少なくとも１つの抗ＩＬ−６抗体は 【０１８０】 、リポソームまたはポリマーナノ粒子、マイクロ粒子、 略語： マイクロカプセル、またはミクロスフェア（特に明記し ＢＳＡ−ウシ血清アルブミン ない限り集合的に微粒子と称する）などの送達装置に封 ＥＩＡ−酵素免疫検定法 入される。多くの適切な装置が公知であり、ポリ乳酸、 ＦＢＳ−ウシ胎仔血清 ポリグリコール酸およびそのコポリマーなどのポリヒド Ｈ2 Ｏ2 −過酸化水素 ロキシ酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポ ＨＲＰ−ホースラディッシュペルオキシダーゼ リホスファゼンのような合成ポリマー、ならびにコラー Ｉｇ−免疫グロブリン ゲン、ポリアミノ酸、アルブミンおよび他のタンパク質 30 ＩＬ−６−インターロイキン６ 、アルギネートおよび他の多糖のような天然ポリマー、 ＩＰ−腹腔内 ならびにそれらの組合せで作られる微粒子を含む（米国 ＩＶ−静脈内 特許第５，８１４，５９９号）。 Ｍａｂ−モノクローナル抗体 【０１７９】 ＯＤ−光学密度 長期投与および製剤 ＯＰＤ−ｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩 時として、本発明の化合物を長期間にわたって、たとえ ＰＥＧ−ポリエチレングリコール ば単回投与から１週間∼１年間の期間にわたって被験者 ＰＳＡ−ペニシリン、ストレプトマイシン、アンホテリ に送達することが望ましいことがあり得る。様々な徐放 シン 性剤形、デポー剤または埋め込み剤形が利用できる。た ＲＴ−室温 とえば、剤形は、体液に低い溶解度を有する化合物の医 40 ＳＱ−皮下 薬的に許容される非毒性の塩、たとえば、（ａ）リン酸 ｖ／ｖ−容量／容量 、硫酸、クエン酸、酒石酸、タンニン酸、パモ酸、アル ｗ／ｖ−重量／容量 ギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンモノスルホン酸 【実施例１】 もしくはジスルホン酸、ポリガラクツロン酸等のような 【０１８１】 多塩基酸との酸付加塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビス アフィニティーおよび定量的ＥＬＩＳＡ マス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コ ＩＬ−６によるアフィニティーＥＬＩＳＡ バルト、ニッケル、カドミウム等のような多価金属陽イ Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏ オン、または、たとえばＮ，Ｎ’−ジベンジル−エチレ レートを、コーティング溶液中２μｇ／ｍｌ、０．２μ ンジアミンもしくはエチレンジアミンから形成される有 ｇ／ｍｌ、０．０２μｇ／ｍｌまたは０．００２μｇ／ 機陽イオンとの塩；または（ｃ）（ａ）と（ｂ）の組合 50 ｍｌの１ ＭａｘｉＳｏｒｐ ９６穴プ ( 43 ) JP 83 2015-172048 A 2015.10.1 84 ００μｌのＩＬ−６でコーティングし、プレートシーラ うした。プレートを空にし、軽くたたいて残留液をペー ーで覆って、４℃で一晩インキュベートした。プレート パータオル上に取り出した。洗浄液（ＰＢＳ中０．０５ を空にし、軽くたたいて残留液をペーパータオル上に取 ％Ｔｗｅｅｎ−２０）２００μｌを添加した。２００Ｒ り出した。 ＰＭにて室温で５分間振とうした。プレートを空にし、 洗浄液（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）２００ 軽くたたいて留液をペーパータオル上に取り出した。３ μｌを添加し、２００ＲＰＭにて室温で５分間振とうし 回反復した。ＰＢＳで希釈した、２μｇ／ｍｌ、０．２ た。プレートを空にし、軽くたたいて残留液をペーパー μｇ／ｍｌ、０．０２μｇ／ｍｌまたは０．００２μｇ タオル上に取り出した。ブロッキング溶液（ＰＢＳ中２ ／ｍｌの１００μｌのビオチニル化ＩＬ−６を添加した ％カーネーションミルク）２００μｌを添加し、２００ 。２００ＲＰＭにて室温で１時間振とうした。プレート ＲＰＭにて室温で１時間振とうした。プレートを空にし 10 を空にし、軽くたたいて残留液をペーパータオル上に取 、軽くたたいて残留液をペーパータオル上に取り出した り出した。洗浄液（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２ 。ＥＬＩＳＡ用の希釈試料１００μｌを使用した。試料 ０）２００μｌを添加した。２００ＲＰＭにて室温で５ を２００ＲＰＭにて室温で１時間振とうした；プレート 分間振とうした。プレートを空にし、軽くたたいて留液 を空にし、軽くたたいて残留液をペーパータオル上に取 をペーパータオル上に取り出した。３回反復した。ブロ り出した。洗浄液（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２ ッキング溶液（ＰＢＳ中２％カーネーションミルク）で ０）２００μｌを添加し、２００ＲＰＭにて室温で５分 希釈したＨＲＰと結合した抗ビオチン抗体の１：２００ 間振とうした；プレートを空にし、軽くたたいて残留液 ０希釈液１００μｌを添加した。２００ＲＰＭにて室温 をペーパータオル上に取り出した。この工程を３回反復 で１時間振とうした。プレートを空にし、軽くたたいて した。００１試料については、ブロッキング溶液（ＰＢ 残留液をペーパータオル上に取り出した。ＴＭＢ基質溶 Ｓ中２％カーネーションミルク）で希釈したＨＲＰと結 20 液１００μｌを添加した。室温でインキュベートした。 合した抗ヒトＩｇＧの１：２５００希釈液１００μｌを １Ｎ 添加した。対照抗体については、ブロッキング溶液（Ｐ ｍで読み取った。 ＢＳ中２％カーネーションミルク）で希釈したＨＲＰと 【０１８３】 結合した抗ウサギＩｇＧの１：２５００希釈液１００μ 定量的ＥＬＩＳＡ ｌを添加した。内容物を２００ＲＰＭにて室温で１時間 このＥＬＩＳＡは、細胞培養上清中の抗体の発現レベル 振とうし、プレートを空にして、軽くたたいて残留液を を測定するために使用した。Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏ ペーパータオル上に取り出した。洗浄液（ＰＢＳ中０． ＭａｘｉＳｏｒｐ ０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）２００μｌを添加し、２００ ｎｃ）を ＲＰＭにて室温で５分間振とうした；プレートを空にし 、コーティング溶液中１０μｇ／ｍｌのアフィニティー 、軽くたたいて残留液をペーパータオル上に取り出した 30 精製したＦｃ特異的ヤギ抗ヒトＩｇＧ 。この工程を３回反復した。ＴＭＢ基質溶液１００μｌ ーティングした。プレートシーラーで覆い、４℃で一晩 を添加し、室温でインキュベートした。１Ｎ ＨＣｌで インキュベートした。プレートを空にし、残留液をペー 反応を停止させ、プレートを４５０ｎｍで読み取った。 パータオル上に取り出した。洗浄液（ＰＢＳ中０．０５ 【０１８２】 ％Ｔｗｅｅｎ−２０）２００μｌを添加した。２００Ｒ ＨＣｌで反応を停止させた。プレートを４５０ｎ ９６穴プレート（Ｎａｌｇｅ Ｎｕ １００μｌでコ ビオチニル化ＩＬ−６によるアフィニティーＥＬＩＳＡ ＰＭにて室温で５分間振とうした。プレートを空にし、 Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏ ９６穴プ 軽くたたいて残留液をペーパータオル上に取り出した。 レートを、コーティング溶液中１０μｇ／ｍｌのアフィ ブロッキング溶液（ＰＢＳ中２％カーネーションミルク ニティー精製した１００μｌのＦｃ特異的ヤギ抗ヒトＩ ）２００μｌを添加した。２００ＲＰＭにて室温で１時 ＭａｘｉＳｏｒｐ ｇＧでコーティングした。プレートをプレートシーラー で覆い、４℃で一晩インキュベートした。 間振とうした。プレートを空にし、軽くたたいて残留液 40 をペーパータオル上に取り出した。ＥＬＩＳＡ用の希釈 プレートを空にし、軽くたたいて残留液をペーパータオ 試料１００μｌを使用した。２０ｎｇ／ｍｌのヒトＩｇ ル上に取り出した。洗浄液（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅ Ｇおよびその後１：２希釈液を標準品として使用した。 ｅｎ−２０）２００μｌを添加した。２００ＲＰＭにて トランスフェクションからの上清（５０ｎｇ∼２００ｎ 室温で５分間振とうした。プレートを空にし、軽くたた ｇ／ｍｌ）を、アッセイ用に未希釈から１：１０まで希 いて残留液をペーパータオル上に取り出した。ブロッキ 釈した。２００ＲＰＭにて室温で１時間振とうした。プ ング溶液（ＰＢＳ中２％カーネーションミルク）２００ レートを空にし、軽くたたいて残留液をペーパータオル μｌを添加した。２００ＲＰＭにて室温で１時間振とう 上に取り出した。洗浄液（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅ した。プレートを空にし、軽くたたいて残留液をペーパ ｎ−２０）２００μｌを添加した。２００ＲＰＭにて室 ータオル上に取り出した。ＥＬＩＳＡ用の希釈試料１０ 温で５分間振とうした。プレートを空にし、軽くたたい ０μｌを使用した。２００ＲＰＭにて室温で１時間振と 50 て留液をペーパータオル上に取り出した。３回反復した ( 44 ) JP 85 2015-172048 A 2015.10.1 86 。ブロッキング溶液（ＰＢＳ中２％カーネーションミル ０μｌのＩＬ−６でコーティングした（実験のために十 ク）で希釈したＨＲＰと結合したヤギ抗ヒトＩｇＧの１ 分なウエルを調製した）。プレートシーラーで覆って、 ：２５００または１：５０００希釈液１００μｌを添加 ４℃で一晩インキュベートした。プレート した。２００ＲＰＭにて室温で１時間振とうした。プレ を空にし、軽くたたいて残留液をペーパータオル上に取 ートを空にし、軽くたたいて残留液をペーパータオル上 り出した。洗浄液（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２ に取り出した。ＴＭＢ基質溶液（Ｓｉｇｍａ）１００μ ０）２００μｌを添加した。プレートを２００ＲＰＭに ｌを添加した。室温でインキュベートした。 て室温で５分間振とうした。プレートを空にし、軽くた １Ｎ たいて残留液をペーパータオル上に取り出した。ブロッ ＨＣｌで反応を停止させた。プレートを４５０ｎ ｍで読み取った。 キング溶液（ＰＢＳ中２％カーネーションミルク）２０ 【０１８４】 10 比活性 ０μｌを添加した。プレートを２００ＲＰＭにて室温で １時間振とうした。プレートを空にし、軽くたたいて残 各々の抗ＩＬ−６ ＭａｂについてのＥＬＩＳＡ比活性 （ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＥＬＩＳＡ 留液をペーパータオル上に取り出した。０μｇ／ｍｌ、 ａｃｔｉｖｉｔｙ） ０．００５μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ、０．５μ を、定量的ＥＬＩＳＡの値で除したアフィニティーＥＬ ｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌの精製００１抗体（各々の精製 ＩＳＡの値として計算する。図２９は、親和性成熟から ００１抗体量について２つの反応物を調製した）と共に の上位１０のＣＰＥヒットについての基準化した比活性 ＰＢＳで希釈した０．０５μｇ／ｍｌのビオチニル化０ を示す。図３２は、上位１０のＣＰＳヒットについての ０１ 基準化した比活性を示す。クローンのＥＬＩＳＡ比活性 ．００５μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ をクローンＢＡ３９９の比活性で除する。ＢＡ３９９の ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌの非抗ＩＬ−６抗体（任意の抗マ 基準化した比活性は、１（水平な黒い線）である。 20 １００μｌを添加した。また、０μｇ／ｍｌ、０ ウスＩｇＧまたは他の陰性対照対照抗体）（各々の精製 【０１８５】 ００１抗体量について２つの反応物を調製した）と共に ００１の機能的ＥＬＩＳＡ ＰＢＳで希釈した０．０５μｇ／ｍｌの１００μｌのビ このＥＬＩＳＡは、細胞培養上清中の抗体の親和性を比 オチニル化００１を添加した。プレートを２００ＲＰＭ 較するために使用した。Ｎｕｎｃ ｘｉＳｏｒｐ Ｉｍｍｕｎｏ−Ｍａ にて室温で１時間振とうした。プレートを空にし、軽く ９６穴プレートを２μｇ／ｍｌの００１ たたいて残留液をペーパータオル上に取り出した。洗浄 ＩＬ−６抗原１００μｌでコーティングし、４℃で一 液（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）２００μｌ 晩インキュベートした。プレートをデカンテーション（ を添加した。プレートを２００ＲＰＭにて室温で５分間 傾斜させて上澄みを移す）し、洗浄して（ＰＢＳ中０． 振とうした。プレートを空にし、軽くたたいて残留液を ０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）、ＰＢＳ中２％カーネーショ ペーパータオル上に取り出した。 ン脱脂乳で室温にて１時間ブロックした。２０ｎｇ／ｍ 30 ３回反復した。ブロッキング溶液（ＰＢＳ中２％カーネ ｌの抗００１対照抗体およびその後１：２希釈液を標準 ーションミルク）で希釈したＨＲＰと結合した抗ビオチ 品として使用した。２組のトランスフェクションからの ン抗体の１：２０００希釈液１００μｌを添加した。プ 上清１００μｌを、アッセイ用に未希釈から１：５０ま レートを２００ＲＰＭにて室温で１時間振とうした。プ で希釈し（５０ｎｇ∼２００ｎｇ／ｍｌ）、室温で１時 レートを空にし、軽くたたいて残留液をペーパータオル 間プレートに添加した。プレートをデカンテーションし 上に取り出した。ＴＭＢ基質溶液１００μｌを添加した 、３回洗浄した。各々のウエルに、ブロッキング溶液（ 。室温でインキュベートした。１Ｎ ＰＢＳ中２％カーネーションミルク）で希釈したＨＲＰ 止させた。プレートを４５０ｎｍで読み取った。結果を と結合したヤギ抗ヒトＩｇＧの１：５０００希釈液１０ 図１０に示す。図に示すように、本発明の抗ＩＬ−６ ０μｌを添加し、それを２００ＲＰＭにて室温で１時間 Ａｂのすべてが、ヒトＩＬ−６へのＢＡ００１の結合を 振とうした。プレートをデカンテーションし、洗浄した 40 低減する。これは、新規ヒト化抗体がＢＡ００１と同じ 。ＴＭＢ基質溶液（Ｓｉｇｍａ）１００μｌを添加し、 領域に結合することを示す。 ２∼５分ごとに検査しながら、室温でインキュベートし 【実施例３】 た。１Ｎ 【０１８７】 ＨＣｌで反応を停止させた。プレートを４５ ＨＣｌで反応を停 ０ｎｍで読み取った。 ＣＨＯ−Ｓ細胞トランスフェクション 【実施例２】 トランスフェクションの１週間前に、ＣＨＯ−Ｓ細胞（ 【０１８６】 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、血清を添加したダルベッコ ＢＡ００１と本発明の抗ＩＬ−６抗体との間のエピトー 改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ プ重複を確認するための競合的ＥＬＩＳＡ ｎ）中の単層培養に移した。トランスフェクションの１ Ｎｕｎｃ Ｉｍｍｕｎｏ−ＭａｘｉＳｏｒｐ ９６穴プ レートを、コーティング溶液中０．２μｇ／ｍｌの１０ 50 日前に、細胞を、９６穴形式でトランスフェクション試 料当たり１００μＬの血清添加Ｄ−ＭＥＭ中０．４×１ ( 45 ) JP 87 2015-172048 A 2015.10.1 88 5 ０ 細胞で塗布する ラムの弁をポジション３に切り替え、画分収集器を始動 。各トランスフェクション試料についてＤＮＡ−Ｌｉｐ させた（画分０．５ｍＬ）。基線が、システムが停止す ｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ複合体を調製した。０．２５μｇ る点に達するまで画分を収集した。溶出プロフィールを のＤＮＡをＯｐｔｉ−ＭＥＭ血清使用量低減培地２５μ クリップボードにコピーし、ＷＯＲＤドキュメントへと Ｌで希釈し、静かに混合して、室温で５分間インキュベ コピーした。ポンプを水、次に結合緩衝液で洗浄した。 ートした。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉ プロテインＧカラムを結合緩衝液（１０ｍＬ）で洗浄し ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）０．５μＬをＯｐｔｉ−ＭＥＭ血 た。ポンプを２０％エタノールで洗浄した。カラムを２ 清使用量低減培地２５μＬで希釈した。静かに混合し、 ０％エタノール（２０ｍＬ）で洗浄し、冷蔵室で保存し 室温で５分間インキュベートした。希釈したＤＮＡを希 た。 釈したＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅと一緒にした。静か 10 【実施例５】 に混合し、室温で２０分間インキュベートした。ＤＮＡ 【０１８９】 −Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ複合体５０μＬを、細胞 Ｓａｐｉｄｙｎｅ分析 と培地を含む各々のウエルに添加した。プレートを揺り Ｓａｐｉｄｙｎｅ 動かすことによって静かに混合した。細胞を５％ＣＯ2 アッセイ自動免疫検定システム（Ｓａｐｉｄｙｎｅ インキュベーターにおいて３７℃で一晩インキュベート ｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ） した。各ウエル中の培 を使用して、製造者のプロトコールに従って様々な抗体 地を吸引した。１００μＬの血清添加Ｄ−ＭＥＭを各ウ の平衡および速度定数を測定した。反応速度排除アッセ エルに添加した。ＥＬＩＳＡアッセイ用に上清を収集し イ（Ｋｉｎｅｔｉｃ 、β−ガラクトシダーゼアッセイ用に細胞溶解産物を収 ）（ＫｉｎＥｘＡ）は、非修飾分子に関して、溶液相中 集した。 20 ＫｉｎＥｘＡ（商標）反応速度排除 Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ｉ Ａｓｓａｙ で真の平衡結合親和性および反応速度を測定する方法で 【実施例４】 ある。たとえば、参照により本明細書に組み込まれる、 【０１８８】 Ｄａｒｌｉｎｇ ｅｔ 細胞培養上清からの抗体精製 ｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ 以下の緩衝液を標準的な方法で調製した。結合緩衝液： Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ １０ｍＭ ｕｌａｒ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ／ＮａＨ2 ＰＯ4 、ｐＨ７．０。 溶出緩衝液：１２．５ｍＭクエン酸、ｐＨ２．７（Ｎａ ｎｄ ａｌ．，Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： ｏｆ Ｍｏｌｅｃ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，ＡＳＳＡＹ ａ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２（６）： −クエン酸塩を使用する）。中和緩衝液：０．５Ｍ ２００４参照。簡単に述べると、ＫｉｎＥｘＡ（商標） Ｎａ2 ＨＰＯ4 ／ＮａＨ2 ＰＯ4 、ｐＨ８．０。２０％エタ システムは、ミクロ細孔性スクリーンを取り付けた毛管 ノールおよび水。すべての緩衝液を使用前にろ過した（ フロー／観察セル（内径＝１．６ｍｍ）から成り、前記 ０．４５μｍ）。ＨｉＴｒａｐ（商標）プロテインＧセ 30 ミクロ細孔性スクリーンを通して様々な溶液が陰圧下で ファロースＨＰ（容量１ｍＬ）カラムに取り付けたＡ 引き込まれる。スクリーンの平均細孔径（５３ｍｍ）よ ＫＴＡ（商標）ＦＰＬＣ（商標）システムを使用して上 り大きい均一な粒子が抗原で前コーティングされ、充填 清を精製した。試料を負荷するために、負荷チューブを 床においてスクリーンの上に沈着した。平衡であるかま エタノール（２０ｍＬ、５ｍＬ／分）、次に結合緩衝液 たは平衡に近い抗原と抗体の個々の溶液混合物を、次に （２０ｍＬ、５ｍＬ／分）で洗浄する。プロテインＧカ 、粒子の充填床を通して引き込んだ。占有されていない ラムをシステムに取り付け、結合緩衝液（１０ｍＬ、１ 結合部位を有する各々の混合物中の抗体だけが、固相上 ｍＬ／分）で洗浄する。試料を１ｍＬ／分またはより遅 にコーティングされた抗原に結合するために利用可能で い速度で（一晩負荷のため）負荷する。負荷後、カラム あった。このようにした捕捉された一次抗体の定量を、 を取り外し、負荷チューブを水（２０ｍＬ、５ｍＬ／分 粒子を蛍光標識抗種二次抗体に短時間暴露し、続いて過 ）、次に２０％エタノール（２０ｍＬ、５ｍＬ／分）で 40 剰の非結合試薬を除去した後、生じた粒子からの蛍光を 洗浄する。抗体精製のために、ＡＫＴＡシステムを結合 測定することによって実施した。 緩衝液で洗浄した（ポンプＡおよびすべてのチューブ類 【０１９０】 ）。中和緩衝液５０μｌを各チューブに添加することに 抗体を、滅菌１ＸＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．０２％アジ よって画分収集用に収集チューブを調製した。プロテイ 化ナトリウム、１０ｍｇ／ｍＬ ンＧカラムをシステムに取り付けた。流速を１ｍＬ／分 ＢＳＡ中で再構成した。抗原は、０．５ｍｇ、１ｍｇ、 に設定し、基線が安定するまで作動させた。カラムの弁 ０．５ｍｇおよび０．５ｍｇの４つの別々のバイアルに をポジション３に切り替えた。カラムを、基線に達する 入ったＩＬ−６（２１，０００ｋＤａ）であり、これを まで結合緩衝液（最小限１０ｍＬ）で洗浄した。ポンプ 滅菌１ＸＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．０２％アジ化ナトリ を停止させ、水、次に溶出緩衝液で洗浄した。流速を１ ウムで３７５μｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、５００μｇ／ ｍＬ／分に設定し、基線が安定するまで作動させた。カ 50 ｍＬおよび５００μｇ／ｍＬに希釈した。標識、Ｃｙ５ ３ ( 46 ) JP 89 2015-172048 2015.10.1 90 −結合ＡｆｆｍｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ） プラズモン共鳴）親和性測定 、Ｃｙ５、１．５μｇ／ｍＬは、Ｊａｃｋｓｏｎ ＢＩＡｃｏｒｅ ｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ（Ｗｅｓｔ A Ｉｍ ３０００、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒ Ｇｒｏｖｅ、Ｐ ｅを使用して、結合曲線および反応速度パラメータを決 Ａ）より購入した。標識を滅菌１ＸＰＢＳ、ｐＨ７．４ 定した。抗ヒトＦｃ（１．８ｍｇ／ｍｌ）をＮａＯＡｃ 、０．０２％アジ化ナトリウム中で再構成し、０．５０ 緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ４．８）で５０μｇ／ｍｌの濃 ０ｍｇ／ｍＬに希釈した。ランニング緩衝液は、１ＸＰ 度に希釈し、ＢＩＡｃｏｒｅシステムマニュアルに記載 ＢＳ、ｐＨ７．４、０．０２％アジ化ナトリウムであっ されているように製造者のアミンカップリング化学を用 た。試料緩衝液は、１ＸＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．０２ いてＣＭ−５センサーチップのカルボキシメチル化デキ ％アジ化ナトリウム、１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミ ン（ＢＳＡ）であった。ＰＭＭＡビーズ（Ｐａｒｔ番 ストランマトリックスにカップリングした。１００００ 10 ＲＵを目標とする表面処理ウィザードを使用して、セン 号４４０１９７／Ｌｏｔ３２５７）は、Ｓａｐｉｄｙｎ サー表面上のカルボキシル基を最初にＮＨＳ／ＥＤＣで ｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｉｎｃ．（Ｂｏｉｓｅ、 活性化し、続いて抗ヒトＦｃを添加した。残存する活性 ＩＤ）によって提供され、以下のようにして捕捉試薬で 化基を１Ｍエタノールアミンの注入によってブロックし コーティングした。ビーズを乾燥して２００ｍｇずつの た。フローセルの各々を個別に連結した。 アリコートに分け、コーティング溶液（ランニング緩衝 これらの条件を用いて、７５５４−９５７１ＲＵの抗ヒ 液中３０μｇ／ｍＬ トＦｃを含有する４つのフローセル表面を調製した。予 ＢＡＰ００１）１ｍＬ中で２時間 揺動した。次にビーズをブロッキング溶液（ランニング 備実験において、１００ｍＭ 緩衝液中１０ｍｇ／ｍＬ ＨＡＰＳの３回の注入（３０μｌ／分で１５μｌ）が結 ＢＳＡ）中で１時間揺動し、 ４℃で保存した。 Ｈ3 ＰＯ4 ／０．０５％Ｃ 合免疫グロブリンを効率的に除去し、固定化抗ヒトＦｃ 【０１９１】 20 の結合能力を保存することが測定された。 平衡分析のために、ＩＬ−６でコーティングしたＰＭＭ 【０１９３】 Ａビーズを使用して、受容体（抗ＩＬ−６抗体）とリガ ２５℃、３０μｌ／分の流速にてＢＩＡｃｏｒｅ ンド（抗原；ＩＬ−６）の平衡試料から遊離受容体の一 ００で実験を実施した。抗体候補物を５μｇ／ｍｌでＨ 部を捕捉した。各データ点について、リガンドコーティ ＢＳ（０．１５Ｍ ングビーズの新鮮カラムをフローセルに導入した。固定 よび０．０５％界面活性剤Ｐ２０を含む１０ｍＭ 化リガンドとの接触時間を最小限に抑えるためにカラム ＰＥＳ、ｐＨ を通して平衡試料を迅速に引き込んだ、これにより、固 −６を０．２５、０．１２５、０．０６２、０．０３１ 定化リガンドとの接触時間が試料の平衡を破壊しないこ および０．０１５μｇ／ｍｌでＨＢＳに溶解した。５μ とが確保された。固定化リガンドは、このようにして溶 ｇ／ｍｌの３×３０μｌの抗体ＢＡ００１をそのそれぞ 液中の遊離受容体を捕捉するためのプローブとして働い 30 れのフローセルに流し、続いて各々のＩＬ−６濃度２４ た。捕捉された抗体を、蛍光標識抗ヒト二次抗体で検出 ０μｌを３０μｌ／分で注入して（結合相）、緩衝液を した。非結合試薬を洗い流し、平衡試料中の遊離受容体 連続１２００秒間流した（解離相）。１００ｍＭ に比例するシグナルを残した。蛍光を、平衡試料中の遊 ＰＯ4 ／０．０５％ＣＨＡＰＳを各々１５μｌずつ３回 離受容体（抗体）の量に直接比例する電圧に変換した。 連続的に注入してチップの表面を再生させた。ＨＢＳの 実験を受容体の高濃度と低濃度の両方で実施し、その後 注入は、分析のためにバルク屈折率を差し引く参照（ブ 、最適結果についてのｎ曲線解析において一緒に利用し ランクセンソグラム）として役立つ。ＢＩＡｅｖａｌｕ た。反応速度分析の直接法（Ｄｉｒｅｃｔ Ｍｅｔｈｏ ａｔｉｏｎ４．１における１：１モデルを使用して、ロ Ａｎａｌｙｓｉｓ）のため ーカルフィットおよびグローバルフィットを解離（ｋｄ ｄ ｏｆ Ｋｉｎｅｔｉｃ ＮａＣｌ、３．４ｍＭ ３０ ＥＤＴＡお ＨＥ ７．４）に溶解した。分析物であるＩＬ − １ − ｓ １ Ｈ3 に、平衡実験用と同じ固定化リガンド（ＩＬ−６コーテ 、［ｓ−１］および結合（ｋａ、［Ｍ ィングＰＭＭＡ）を反応速度実験のための捕捉試薬とし 40 両方について実施し、解離定数（ＫＤ、［Ｍ］）を計算 ］）の て使用した。試料中の遊離受容体（抗体）の量を平衡前 した（ｋｄ／ｋａ）。 に測定し、試料が平衡に近づくのに伴う経時的な遊離受 【０１９４】 容体（抗体）の減少を観測するデータ点を生成した。図 分析は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎバージョン３．０ ３３は、ＢＡ００３（ＣＮＴＯ１３６）と比較した抗Ｉ を用いて行った。反応速度定数は、相互作用機構のモデ Ｌ−６抗体ＢＡＰ００１−クローン１∼ＢＡＰ００１− ルから得られる速度式に実験の曲線を適合させることに クローン１０についての上位１０のヒットのＳａｐｉｄ よってセンソグラムデータから導いた。ローカルＲＵｍ ｙｎｅ分析からのデータの表を示す。 ａｘフィットで１：１結合モデルを用いた大域解析によ 【実施例６】 ってｋａ、ｋｄおよびＫＤを決定した。 【０１９２】 【０１９５】 ＢＡ００１およびヒト化誘導体のＢｉａｃｏｒｅ（表面 50 以下の式を利用した： ( 47 ) JP 91 2015-172048 A 2015.10.1 92 【０１９６】 ＩＬ−６Ｒ（２００ｎｇ／ｍｌ）を含む、１０ｍｇ／ｍ 【数１】 ｌのＣＮＴＯ １３６、Ｎｏ．３９９、ＢＡ３９９クロ ーンＮｏ．２、またはＢＡ３９９クローンＮｏ．９のい ずれかを 含有した。ＩＬ−６、ｓＩＬ−６Ｒおよび抗体を３７℃ 親和性成熟前のヒト化抗ＩＬ−６ ＭａｂについてのＢ で１５分間インキュベートした。 ｉａｃｏｒｅデータを図１１に示す。ＢＡ３９９親和性 次に反応混合物をＴＨＰ−１細胞に添加した。３７℃で 成熟を抗ＩＬ−６ ＢＡ３９９に関して実施し １５分間のインキュベーション後、細胞を冷ＰＢＳで洗 た後、選択したクローンをＢｉａｃｏｒｅ分析によって 浄し、直ちに検定した。Ｓｔａｔ３のリン酸化レベルを 試験した。図３４は、それぞれクローンＢＡ３９９−２ 10 、製造者のプロトコールに従って使用した細胞シグナル 、ＢＡ３９９−５、ＢＡ−３９９−９およびＢＡ３９９ 伝達ホスホ−Ｓｔａｔ３サンドイッチＥＬＩＳＡキット −１０についてのＢｉａｃｏｒｅデータを示す。 （たとえばＰａｔｈＳｃａｎ（登録商標）ホスホ−Ｓｔ 【実施例７】 ａｔ３（Ｔｙｒ７０５）サンドイッチＥＬＩＳＡキット 【０１９７】 Ｎｏ．７３００、Ｃｅｌｌ ＴＨＰ−１細胞におけるＳｔａｔ３リン酸化の阻害 ｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）によって測定した。総Ｓｔ Ｓｔａｔ３転写因子は、多くのサイトカインおよび増殖 ａｔ３の発現レベルは、ヒトＳｔａｔ 因子受容体のための重要な細胞シグナル伝達分子である ０∼２４０）に対するＳａｎｔａ （Ｈｅｉｍ． クローナル抗体（Ｓａｎｔａ Ｍａｂ Ｔｈｅ Ｊａｋ−ＳＴＡＴ ａｙ：ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｍ ｔｈｅ ｐａｔｈｗ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｏ ｔｈｅ ｌｅｕｓ．Ｊ．Ｒｅｃｅｐｔ．Ｓｉｇｎａｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｎｕｃ 20 −１リン酸化データを図３５∼３８に示す。各々図にお Ｔｒａｎ いて、データを総Ｓｔａｔ３についてのウエスタンブロ ットに基づいて基準化している。 【０１９９】 ．Ｃｅｌｌ ａｎ ｅｔ ｏｎｃｏｇｅｎｅ 図３５に示すように、抗ＩＬ−６ （ＣＮＴＯ Ｍａｂ ＢＡ００３ １３６）、ＢＡ３９９、ＢＡ３９９−２お ９８（３）：２９５−３０３） よびＢＡ３９９−９の各々は、陽性対照と比較してＩＬ および抗アポトーシス活性を有する。Ｓｔａｔ３はＴｙ ６／ｓＩＬＲで刺激したＴＨＰ−１細胞におけるＳｔａ ｒ７０５のリン酸化によって活性化され、二量体形成、 ｔ３のリン酸化の濃度依存的低下を生じさせた。 核転座およびＤＮＡ結合を誘導する（ＩｈＩｅ，Ｃｙｔ 【０２００】 ｏｋｉｎｅ 図３６は、ＴＨＰ−１細胞を様々な条件下で１００ｎｇ Ｎａｔｕｒｅ １９９９ （Ｂｒｏｍｂｅｒｇ Ｂｉｏｔｅｃ ｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）によって測定した。ＴＨＰ Ｓｔａｔ３は多くのヒト腫瘍において構 ａｓ Ｃｒｕｚウサギポリ ｆｒｏ −１２０）。 ａｌ．，Ｓｔａｔ３ ３（アミノ酸５ Ｃｒｕｚ ｓｄｕｃｔ．Ｒｅｓ．１９９９．１９（ｌ−４）：７５ 成的に活性化され、発癌能 Ｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ． 30 １９９５，３７７（６５５０）：５９１ ／ｍＬのＩＬ−６およびｓＩＬ−６Ｒで刺激した場合の −４）。転写活性化は、ＭＡＰＫまたはｍＴＯＲ経路を リン酸化の相対レベルを示す（Ａ）。ウエスタンブロッ 介したＳｅｒ７２７のリン酸化によって調節されると考 トによる総Ｓｔａｔ３レベルを（Ｂ）に示す。抗ＩＬ− えられる（Ｙｏｋｏｇａｍｉ ６ Ｍａｂ ｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｒｉ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｘｉｍａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｓｔａｔ３ ｄｕｒｉｎｇ ｎｇ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ２０００ Ｃｕｒｒ ＣＮＴＦ ａｎｄ ｍａ ｏｆ １３６）、ＢＡ３ ９９、ＢＡ３９９−２およびＢＡ３９９−９の各々は、 陽性対照と比較してＩＬ６／ｓＩＬＲで刺激したＴＨＰ ｓｉｇｎａｌｉ ｔａｒｇｅｔ ＢＡ００３（ＣＮＴＯ −１細胞におけるＳｔａｔ３のリン酸化の有意の低下を 生じさせた。 ｍＴＯＲ． Ｂｉｏｌ．１０（ｌ）：４７− 40 【０２０１】 図３７は、ＴＨＰ−１細胞を様々な条件下で１０ｎｇ／ ５０）。 ｍＬのＩＬ−６およびｓＩＬ−６Ｒで刺激した場合のリ 【０１９８】 ン酸化の相対レベルを示す（Ａ）。ウエスタンブロット Ｓｔａｔ３リン酸化の阻害をＴＨＰ−１細胞において測 による総Ｓｔａｔ３レベルを（Ｂ）に示す。抗ＩＬ−６ 定した。ＴＨＰ−１（ＡＴＣＣ）細胞を標準的なプロト コールに従って使用した。各試験条件のために、２×１ ０ ６ Ｍａｂ ＢＡ００３（ＣＮＴＯ １３６）、ＢＡ３９ ９、ＢＡ３９９−２およびＢＡ３９９−９の各々は、陽 細胞を血清飢餓させた。陽性対照は、ヒトＩＬ−６ 性対照と比較してＩＬ６／ｓＩＬＲで刺激したＴＨＰ− （１００、５０、１０ｎｇ／ｍｌ）とｓＩＬ−６Ｒ（２ １細胞におけるＳｔａｔ３のリン酸化の有意の低下を生 ００ｎｇ／ｍｌ）で刺激したＴＨＰ−１細胞から成った じさせた。 。陰性対照は培地だけから成った。試験試料は、各々ヒ 【０２０２】 トＩＬ−６（１００、５０、１０ｎｇ／ｍｌ）およびｓ 50 図３８は、ＴＨＰ−１細胞を様々な条件下で１０ｎｇ／ ( 48 ) JP 93 2015-172048 A 2015.10.1 94 ｍＬのＩＬ−６およびｓＩＬ−６Ｒで刺激した場合のリ に添加した。血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）の発現レベル ン酸化の相対レベルを示す（Ａ）。ウエスタンブロット を、反応混合物の添加後２４時間目と４８時間目に製造 による総Ｓｔａｔ３レベルを（Ｂ）に示す。抗ＩＬ−６ 者のプロトコールに従ってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎヒトＳ Ｍａｂ ＢＡ００３（ＣＮＴＯ １３６）、ＢＡ３９ ＡＡ免疫検定法キットによって測定した。データを図３ ９、ＢＡ３９９−２およびＢＡ３９９−９の各々は、陽 ９および４０に示す。 性対照と比較してＩＬ６／ｓＩＬＲで刺激したＴＨＰ− 【０２０５】 １細胞におけるＳｔａｔ３のリン酸化の有意の低下を生 図３９は、ヒトＩＬ−６／ｓＩＬ−６およびＩＬ−１ｂ じさせた。 で刺激したＨｅｐＧ２細胞による２４時間目の血清アミ 【実施例８】 ロイドＡタンパク質産生の、抗ＩＬ−６ 【０２０３】 10 阻害を示す。抗ＩＬ６ Ｍａｂによる Ｍａｂ ００３（ＣＮＴＯ １ ＨｅｐＧ２細胞による血清アミロイドＡタンパク質産生 ３６）、ＢＡ３９９、ＢＡ３９９−２およびＢＡ３９９ の阻害 −５の各々は、ＳＡＡ産生を用量依存的に阻害した。ヒ 血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）は、その産生がＩＬ−６に トＩｇＧは陰性対照である。 よって誘導される急性期タンパク質である。ＩＬ−６、 【０２０６】 ＩＬ−１およびＴＮＦなどのサイトカインはＳＡＡタン 図４０は、ヒトＩＬ−６／ｓＩＬ−６およびＩＬ−１ｂ パク質合成のメディエイターとみなされる。それらは、 で刺激したＨｅｐＧ２細胞による４８時間目の血清アミ 肝細胞を刺激してＳＡＡを産生させ、血流中に放出させ ロイドＡタンパク質産生の、抗ＩＬ−６ る。急性および慢性炎症を有する患者において高いレベ 阻害を示す。抗ＩＬ６ ルのＳＡＡが認められる。続発性アミロイドーシスは、 ３６）、ＢＡ３９９、ＢＡ３９９−２およびＢＡ３９９ ＳＡＡが高いままである長期または反復炎症状態の結果 20 −５の各々は、ＳＡＡ産生を用量依存的に阻害した。ヒ として発症し得る。この進行性の致死的疾患は器官機能 トＩｇＧは陰性対照である。 の喪失を特徴とする。関節リウマチ、若年性関節炎、強 【実施例９】 直性脊椎炎、家族性地中海熱、進行性硬化症、ならびに 【０２０７】 結核および骨髄炎のような慢性感染症などの炎症性疾患 サルＩＬ−６との交差反応性 は、アミロイドーシスを発症する素因となる（Ｒｅｉｎ ＥＬＩＳＡプレートを抗サルＩＬ−６抗体でコーティン ｈｏｆｆ グした。３００ｐｇ／ｍＬのサルＩＬ−６を添加した。 ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ Ａ．１９９０ ｏｆ Ｍａｂによる Ｍａｂ ００３（ＣＮＴＯ １ 陽性対照はビオチニル化抗サルＩＬ−６から成った。陰 ｓｅｒｕｍ ａｍｙｌｏｉｄ 性対照は緩衝液だけから成った。０．１ｍｇ／ｍＬのビ ＭｏＩ．Ｂｉｏ オチニル化００１と５ｍｇ／ｍｌの００１、００３、Ｂ ．Ｍｅｄ．７：２８７−２９８）。 30 Ａ３９９、ＢＡ３９９−２およびＢＡ３９９−９の各々 【０２０４】 との試験試料を、非特異的ヒトＩｇＧと共に使用した。 ＩＬ−６／ｓＩＬ−６ＲとＩＬ−１ｂによって刺激した ストレプトアビジン−ＨＲＰでＥＬＩＳＡを実施した。 ＨｅｐＧ２細胞において血清アミロイドＡタンパク質産 データを図４１に示す。ビオチニル化抗ＩＬ−６ 生をブロックする抗ＩＬ−６ Ｍａｂの能力を以下のよ ｂは、サルＩＬ−６とある程度の交差反応性を示し、こ うに試験した。ＨｅｐＧ２細胞を２４穴形式にて２．２ れは抗ＩＬ−６ヒト化Ｍａｂの各々によって部分的にブ ５×１０ ５ 細胞／ウエルで接種した。各条件につき２組 Ｍａ ロックされたが、非特異的ヒトＩｇＧによってはブロッ のウエルを使用した。陽性対照は、ヒトＩＬ−６（１０ クされなかった。 ０ｎｇ／ｍｌ）＋ｓＩＬ−６Ｒ（２００ｎｇ／ｍｌ）＋ 【実施例１０】 ＩＬ−１ｂ（２５ｎｇ／ｍｌ）から成った。１つの陰性 【０２０８】 対照は培地だけから成った。もう１つの陰性対照は、ヒ 40 ＩＬ−６誘導性ＤＳ−１細胞増殖の阻害 トＩＬ−６（１００ｎｇ／ｍｌ）＋ｓＩＬ−６Ｒ（２０ ＤＳ−１は、腸リンパ管拡張症およびリンパ腫を有する ０ｎｇ／ｍｌ）から成った。抗ＩＬ６ ＣＮＴ 免疫不全患者に由来するＢ細胞株である。ヒトＩＬ−６ １３６、ＢＡ３９９、ＢＡ３９９−２、ＢＡ３９９ に応答して細胞増殖が増大するが、マウスＩＬ−６では Ｏ −９（１０ − １ − ５ 、１０ − ４ − ３ 、１０ Ｍａｂ 、１０ − ２ 、１０ 増殖は増大しない。構成的ＩＬ−６産生にもかかわらず 、１ｍｇ／ｍｌ）の各々とヒトＩＬ−６（１００ｎ 、ＤＳ−１のインビトロ増殖は外因性ＩＬ−６に依存す ｇ／ｍｌ）およびｓＩＬ−６Ｒ（２００ｎｇ／ｍｌ）お る。（Ｂｏｃｋ よびＩＬ−１ｂ（２５ｎｇ／ｍｌ）から連続希釈を作製 ｚａｔｉｏｎ した。ＩＬ−６、ｓＩＬ−６ＲおよびＭａｂを室温で３ ａ ｎｅｗ ０分間インキュベートした。ＩＬ−１ｂをＩＬ−６／抗 ｎ Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｍａ 体混合物に添加した。反応混合物全体をＨｅｐＧ２細胞 50 ａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ ｏｆ ＩＬ−６ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｌｏｎｇ ｔｅｒｍ ｃｅｌｌ ｈｕｍａ ｌｉｎｅ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｃｙｔｏ ( 49 ) JP 95 A 2015.10.1 96 ｋｉｎｅ ５（５）：４８０−４８９ 2015-172048 の阻害をそれぞれ図４２および４３に示す。ＢＡ００１ （１９９３）。 、ＢＡ３９９、ＢＡ４３６、ＢＡ８０２、ＢＡ８０８お 【０２０９】 よびＢＡ８４０を含むいくつかの抗ＩＬ−６ 簡単に述べると、各試験条件について９６穴形式で８０ 、４８時間目と９６時間目の両方でＤＳ−１細胞増殖を ０細胞を接種した。１０Ｕ／ｍＬのヒトＩＬ−６ならび 用量依存的に低下させた。 に０、０．００５、０．０５および０．５μｇ／ｍＬ 【０２１０】 ＣＮＴＯ１３６、ＢＡ３９９および様々な抗ＩＬ−６ 本発明が、前記の説明および実施例において特に記述さ Ｍａｂを使用した。Ｐｒｏｍｅｇａ れている以外の方法でも実施できることは明らかである ＣｅｌｌＴｉｔｅ ｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃ Ｍａｂは 。 ｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、抗体の 10 本発明の数多くの修正および変形が上記の教示に照らし 添加の０、２および４日後に細胞増殖を測定した。４８ て可能であり、それ故、添付の特許請求の範囲内である 時間目と９６時間目のＩＬ−６誘導性ＤＳ−１細胞増殖 。 【図１】 【図３】 【図２】 【図４】 ( 50 ) JP 【図５】 【図８】 【図６】 【図９】 【図７】 2015-172048 A 2015.10.1 ( 51 ) 【図１０】 JP 【図１２】 【図１３】 【図１１】 2015-172048 A 2015.10.1 ( 52 ) 【図１４】 JP 【図１６】 【図１５】 【図１７】 2015-172048 A 2015.10.1 ( 53 ) 【図１８】 JP 【図２０】 【図２１】 【図１９】 2015-172048 A 2015.10.1 ( 54 ) JP 【図２２】 【図２４】 【図２３】 【図２５】 2015-172048 A 2015.10.1 ( 55 ) 【図２６】 JP 【図２８】 【図２９】 【図２７】 2015-172048 A 2015.10.1 ( 56 ) 【図３０】 JP 【図３２】 【図３３】 【図３１】 2015-172048 A 2015.10.1 ( 57 ) 【図３４】 JP 【図３９】 【図３５】 【図４０】 2015-172048 A 2015.10.1 ( 58 ) 【図４１】 JP 【図４３】 【図４２】 【図４４】 2015-172048 A 2015.10.1 ( 59 ) 【図３６】 【図３７】 JP 【図３８】 2015-172048 A 2015.10.1 ( 60 ) 【配列表】 2015172048000001.app JP 2015-172048 A 2015.10.1 ( 61 ) JP 2015-172048 A 2015.10.1 ───────────────────────────────────────────────────── 【手続補正書】 、１３４、１４０、１４１、１４４、１４７、１４９、 【提出日】平成27年5月7日(2015.5.7) １５２、１５３または１５６のアミノ酸配列を有する重 【手続補正１】 鎖可変領域； 【補正対象書類名】特許請求の範囲 配列番号１、５、９、１３、１７、２１、２５、２９、 【補正対象項目名】全文 ６８、７１、７２、７５、７６、８０または８８のアミ 【補正方法】変更 ノ酸配列を有する軽鎖可変領域；および 【補正の内容】 １またはそれ以上のヒト抗体に由来する定常領域； 【特許請求の範囲】 を有するヒトＩＬ−６に結合する単離抗体または抗体フ 【請求項１】 ラグメント。 配列番号３、７、１１、１５、１９、２３、２７、３１ ──────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl. ＦＩ テーマコード（参考） Ａ６１Ｋ 45/00 (2006.01) Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｐ 29/00 (2006.01) Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 19/02 (2006.01) Ａ６１Ｐ 29/00 Ａ６１Ｐ 1/04 (2006.01) Ａ６１Ｐ 19/02 Ａ６１Ｐ 37/00 (2006.01) Ａ６１Ｐ 1/04 Ａ６１Ｐ 27/02 (2006.01) Ａ６１Ｐ 37/00 Ａ６１Ｐ 11/00 (2006.01) Ａ６１Ｐ 27/02 Ａ６１Ｐ 9/14 (2006.01) Ａ６１Ｐ 11/00 Ａ６１Ｐ 35/00 (2006.01) Ａ６１Ｐ 9/14 Ａ６１Ｐ 15/08 (2006.01) Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 37/08 (2006.01) Ａ６１Ｐ 15/08 Ａ６１Ｐ 11/06 (2006.01) Ａ６１Ｐ 37/08 Ａ６１Ｐ 11/02 (2006.01) Ａ６１Ｐ 11/06 Ａ６１Ｐ 17/02 (2006.01) Ａ６１Ｐ 11/02 Ａ６１Ｐ 27/14 (2006.01) Ａ６１Ｐ 17/02 Ａ６１Ｐ 37/06 (2006.01) Ａ６１Ｐ 27/14 Ａ６１Ｐ 31/04 (2006.01) Ａ６１Ｐ 37/06 Ａ６１Ｐ 31/10 (2006.01) Ａ６１Ｐ 31/04 Ａ６１Ｐ 13/02 (2006.01) Ａ６１Ｐ 31/10 Ａ６１Ｐ 39/00 (2006.01) Ａ６１Ｐ 29/00 Ａ６１Ｐ 1/18 (2006.01) Ａ６１Ｐ 13/02 Ａ６１Ｐ 11/16 (2006.01) Ａ６１Ｐ 39/00 Ａ６１Ｐ 1/16 (2006.01) Ａ６１Ｐ 1/18 Ａ６１Ｐ 25/32 (2006.01) Ａ６１Ｐ 11/16 Ａ６１Ｐ 7/06 (2006.01) Ａ６１Ｐ 1/16 Ａ６１Ｐ 3/10 (2006.01) Ａ６１Ｐ 25/32 Ａ６１Ｐ 13/12 (2006.01) Ａ６１Ｐ 7/06 Ａ６１Ｐ 17/04 (2006.01) Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 7/04 (2006.01) Ａ６１Ｐ 13/12 Ａ６１Ｐ 9/08 (2006.01) Ａ６１Ｐ 17/04 Ａ６１Ｐ 5/50 (2006.01) Ａ６１Ｐ 7/04 Ａ６１Ｐ 21/04 (2006.01) Ａ６１Ｐ 9/08 Ａ６１Ｐ 5/14 (2006.01) Ａ６１Ｐ 5/50 Ａ６１Ｐ 19/10 (2006.01) Ａ６１Ｐ 21/04 Ｕ ４Ｃ０８５ ４Ｈ０４５ １０１ ( 62 ) JP Ａ６１Ｐ 17/06 (2006.01) Ａ６１Ｐ 5/14 Ａ６１Ｐ 17/14 (2006.01) Ａ６１Ｐ 19/10 Ａ６１Ｐ 7/08 (2006.01) Ａ６１Ｐ 17/06 Ａ６１Ｐ 39/02 (2006.01) Ａ６１Ｐ 17/14 Ａ６１Ｐ 35/02 (2006.01) Ａ６１Ｐ 7/08 Ａ６１Ｋ 9/08 (2006.01) Ａ６１Ｐ 39/02 Ａ６１Ｋ 47/10 (2006.01) Ａ６１Ｐ 35/02 Ａ６１Ｋ 47/02 (2006.01) Ａ６１Ｋ 9/08 Ａ６１Ｋ 47/08 (2006.01) Ａ６１Ｋ 47/10 Ａ６１Ｋ 47/14 (2006.01) Ａ６１Ｋ 47/02 Ａ６１Ｋ 47/18 (2006.01) Ａ６１Ｋ 47/08 Ａ６１Ｋ 9/19 (2006.01) Ａ６１Ｋ 47/14 Ｃ１２Ｎ 15/09 (2006.01) Ａ６１Ｋ 47/18 Ａ６１Ｋ 9/19 Ｃ１２Ｎ 15/00 (72)発明者 2015-172048 A 2015.10.1 Ａ フライ、ゲルハルト アメリカ合衆国 ９２１２９ カリフォルニア州 サン ディエゴ ビア シマ シャドー ベラ １３７６ ８ (72)発明者 チャン、ホワイ ウェン アメリカ合衆国 ９２０６９ カリフォルニア州 サン マルコス ９２０１４ カリフォルニア州 デル マール ヒルズ ドライブ １３１８ (72)発明者 ショート、ジェイ アメリカ合衆国 ビア エスペリア Ｆターム(参考) 2B030 AB04 CA11 CA17 4B024 AA01 BA61 CA01 DA02 EA04 GA11 HA08 4B064 AG27 CA06 CA10 CA11 CA19 CA20 CC24 CE12 DA01 DA05 4C076 AA12 AA29 BB02 BB13 BB15 BB16 BB21 BB22 BB25 BB27 BB29 BB30 BB31 CC03 DD22R DD23R DD37R DD40R DD41R DD49R DD59R FF14 FF39 FF61 GG47 4C084 AA19 MA02 MA05 MA17 MA44 MA63 MA66 NA03 NA14 ZA021 ZA151 ZA331 ZA361 ZA441 ZA511 MA55 MA56 MA57 MA59 MA60 ZA531 ZA551 ZA591 ZA601 ZA661 ZA681 ZA751 ZA811 ZA891 ZA921 ZA942 ZA961 ZA971 ZB071 ZB081 ZB111 ZB131 ZB151 ZB261 ZB271 ZB351 ZC021 ZC061 ZC351 ZC371 ZC391 4C085 AA13 AA14 BB17 EE01 EE03 GG01 GG02 GG03 GG04 AA20 AA30 BA09 CA40 DA76 EA20 FA74 GA26 GG10 4H045 AA11 GG06 １２９８５