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制限酵素ハンドブック 2014-2015
タカラバイオ制限酵素ハンドブック 2014-2015 について 1979年に国産初の制限酵素として H I、 R I、 II、 III、 d III、 Iの6種類を発 売してから35年、現在では約100種類をラインナップし、皆様から変わらぬご愛顧をいただいておりま す。 本ハンドブックには、制限酵素関連情報や日常の実験のご参考になる情報なども掲載しています。 是非、 お手元に置いてご利用ください。 ■製品の使用目的 本ハンドブック掲載の製品は、 すべて研究用として販売しておりま す。試験研究目的以外には使用しないでください。特に、 ヒト、動 物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。 ま た、食品、 化粧品、 家庭用品などとして使用しないでください。 タカラバイオの承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡の ための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されていま す。 ■品質保証 製品は、Certificate of Analysis、 データシートや説明書に記載 された品質規格、使用方法の範囲での品質保証に限られており、 それ以外の弊社の責はご容赦ください。 ( 弊社の責は製品の交 換に限定されます。) なお、現在データシートおよび説明書は製品 に添付しておりません。 ウェブカタログよりダウンロードしてご利用 ください。 ■価格 本ハンドブックに記載されている価格は、2014年10月1日現在 ご注意ください。) の価格です。 (消費税は含まれていません。 諸般の事情により、価格が予告なく変更される場合がありますの で、 ご了承ください。 ■注文・在庫 弊社取扱い製品は、 最寄りの弊社製品取扱い店を通じてご注文 ください。 ご注文の際には、製品名・製品コード、容量 (包装量) 、 数量を明示してください。本ハンドブック掲載の製品は、通常在 庫製品です。平常時はご注文いただいてから2∼3日以内にお届 けできますが、詳細は最寄りの弊社製品取扱い店にお問い合わ せください。 ■返品・交換 弊社の誤りに起因する誤送、製造元に起因する製品の破損、汚 染、製品の相違、 および品質に関するクレーム以外の返品・交 換は、 製品の品質管理上、 ご容赦ください。 ■規格・仕様 製品の規格および仕様は、一部を除き2014年10月1日現在の ものです。諸般の事情により、予告なく変更される場合があります ので、 ご了承ください。 ■輸送と保存 製品添付のデータシートに記載された保存条件に従い、適切な 条件で保存してください。指示と異なる方法で保存した場合には 製品としての性能が低下する場合がありますのでご注意ください。 カタログについて 平素はタカラバイオ製品をご愛顧いただき、 厚く御礼申し上げます。 ■製品安全データシート(MSDS)について 本ハンドブック掲載の製品には、2014年10月1日時点で毒物 及び劇物取締法の毒物・劇物、化学物質管理促進法 (PRTR 法) 指定化学物質、労働安全衛生法の名称等を通知すべき危 険物および有害物を含むものはありません。 そのため、製品安全 データシート(MSDS)は添付しておりません。 今後、法規制の改定などによっては状況が変わる場合がありま すので、最新情報については弊社ウェブカタログをご確認くださ い。 ■バルク・特別分注品について 本カタログに掲載している制限酵素全製品について、バルク対 応や特別分注等、柔軟に対応可能です。 下記お問い合わせフォームよりご連絡ください。 https://www.takara-bio.co.jp/goods/bulk/bulk_entry.php ■ハンドブック中の記号 :反応用バッファー添付 :Loading Buffer添付 :Genome DNA Analysis Grade :pKF3 Cloning Test :ご注文の際にライセンス同意書の提出が必要 ■テクニカルサポートライン タカラバイオ取扱い製品に関する技術的なご質問に、専門の係 がお答えいたします。 ウェブサイトからのお問い合わせも承ります。 TEL . 077-565-6999 FAX. 077-565-6995 ■タカラバイオ<WEB会員>募集 タカラバイオでは、 バイオ研究者・技術者の皆様に有用な情報 サービスをご提供しております。e-メールでの会員様限定キャン ペーンや製品モニター募集のご案内、DNA合成やリアルタイム PCR用プライマー合成などのオンライン注文ほか、WEB会員様 特典をご利用いただけます。 タカラバイオWEB会員には弊社ウェブサイトで随時お申し込みい ただけます (登録は無料です) 。 http://www.takara-bio.co.jp/kaiin/ ※本ハンドブック掲載の情報は2014年10月1日現在の ものです。最新の情報については弊社ウェブカタログを ご覧ください。 (http://catalog.takara-bio.co.jp) 2014年10月1日発行 1 カタログについて タカラバイオ制限酵素ハンドブック 2014-2015 <目次> 1 目次 2 T107 I ( TaKaRa制限酵素認識配列検索ツール 4 H II ( T104 I ( II, PI( 制限酵素の使用に関して 6 Universal Buffer・Basal Bufferによる 制限酵素活性表示システム V) C I) 32 32 I) E II, O65 I) 32 XI 32 10 I 32 33 I 8 31 31 P I) 1107 I ( 制限酵素について I( II) 33 I 33 Double Digestion用推奨Universal Buffer 10 制限酵素Genome DNA Analysis Grade 11 I Ligation-Recutting効率品質規格 12 I( III) 34 制限酵素形状一覧 13 I( I) 34 制限酵素活性に対するメチル化の影響 14 1105 I 制限酵素のStar活性 18 52 I ( III) pBR322、 pUC19の完全分解に必要な反応時間 19 81 I ( I) pKF3 Cloning Test 20 O65 I ( E II, 16時間反応での完全分解に必要な酵素量 21 O109 I ( 長時間制限酵素を反応させたときの残存活性 22 RI 各種失活処理後の残存活性 23 RV エピジェネティクス解析実験フロー 24 T14 I ( I) 36 T22 I ( III) 36 DNAメチル化解析に利用可能な CpGメチル化感受性制限酵素 25 制限酵素 I( 33 34 34 35 P I) II) I 35 35 35 36 I) 36 I 36 II 37 III II 26 II ( 26 I 37 II, I) 37 37 II ( D II) 26 1I( I, III ( M II) 26 c II ( d II) 27 d III 38 27 fI 38 27 I 39 27 I 27 I( I 28 II LI 28 I( 28 I 28 I( II, 29 I( I) 29 I 41 29 I 41 29 I 41 30 I 41 30 I 42 30 I 30 I( 31 CI I( I) II I 13H I ( M II, 51H I ( 47 III) III) I HI II ( J II) T130 I ( I( R II, I) II) I II I( II) T110 I ( I) T120 I ( 13 I, 1102 I ( 1286 I ( 2 31 1407 I タカラバイオ制限酵素ハンドブック 2014-2015について I) I) I) 31 II) 38 38 39 3A I) 39 39 II) 40 40 AI II) 40 40 42 II, I) 42 42 42 I) カタログについて BI( 43 1406 I ( I) 43 I 43 I 43 44 II RS II ( I) 44 I 44 II 44 45 I 3A I ( I) 45 I 45 I 45 46 I I( I) 46 BI 46 I 46 I 46 8387 I 47 I 47 I 47 I( カタログについて HB8 I) 制限酵素について 47 111 I 48 91 I ( M I) K11B I ( 48 II) I 48 制限酵素 48 I 49 I( I, I) 49 50 Appendix Isoschizomer一覧 52 ライセンスについて mRNA Interferase™-MazF Appendix 認識部位による制限酵素の分類表 61 コドン表 63 遺伝子操作でよく利用される 大腸菌 (K-12由来株) の遺伝子型 64 基本試薬の調製方法 66 DNA分子量マーカーの泳動模式図 67 アガロース用途一覧ガイド 69 核酸のアガロースゲル電気泳動 70 pUC19 DNA (2686 bp) の制限酵素切断地図 71 pUC119 DNA (3162 bp) の制限酵素切断地図 72 pBR322 DNA (4361 bp) の制限酵素切断地図 73 ライセンスについて 74 プライスリスト 75 プライスリスト (製品コード順) 76 プライスリスト (アルファベット順) 80 プライスリスト 3 TaKaRa制限酵素認識配列検索ツール リニューアル! 制限酵素認識配列検索ツール Takara Cut-Site Navigator ウェブサイト http://www.takara-bio.co.jp/enzyme/ 1 配 列 読み込み 2 3 条 件 設定 検索開始 使 用 方 法 1 DNA配列の読み込み 「Sequence」横のBoxに、 DNA配列をCopy & Pasteしていただくか、配列ファイルを指定していただくことで、 配列を読み込むことができます。Fasta形式、 テキスト形式およびGenBank形式のファイルが使用可能です。 2 各種条件設定 使用可能な制限酵素候補を絞り込むために、 いろいろな条件を付加することができます。 Enzyme……………………………特定の制限酵素を選択することが可能です。 Cutting Type………………………切断サイトのタイプを選択することが可能です。(blunt end, 3' or 5' sticky end) Methylation…………………………メチル化の有無による切断可否を、検索条件に適用します。 Recognition Sequence Length…認識配列の長さを検索条件に適用します。 Frequency…………………………切断頻度を設定します。 3 検索開始 ボタンをクリックすると、 検索結果が表示されます。 検索結果は、 4種類から選択可能です。 4 タカラバイオでは、 TaKaRa制限酵素を便利にお使いいただくために、 弊社ウェブサイト上に 「制限酵素認識配列検索ツール Takara Cut-Site Navigator」 を公開しています。 DNA配列 & 検索条件設定画面 *Enzyme List: 切断サイトを一覧表で表示 *Cutting Image:切断サイトを模式図で表示 *Sequence:DNA配列詳細を表示(アミノ酸配列表示も可能) 弊社ウェブサイトにて 是非 お試しください! 5 制限酵素の使用に際して 制限酵素について 現在、発見されている制限酵素はその反応に必須な因子や切断点の特性等から次の3つの型に大きく分類される。 大分類 Ⅰ型 反応に必須な因子 ATP、S-アデノシルメチオニン、Mg Ⅱ型 Mg2+ Ⅲ型 ATP、Mg2+ 切断点 2+ 酵素例 認識部位と切断点は異なり、切断部位は一定でない EcoB、EcoK 認識部位内、 あるいは、 ごく近傍で特定の部位を切断する EcoR I、BamH I 認識部位と切断点は異なるが、特定の部位を切断する EcoP I、Hinf III これらのうち遺伝子工学実験で用いられているのは一般にⅡ型酵素であり、 現在市販されている制限酵素のすべてがⅡ型に属している。制限酵素はその 反応条件、基質DNAの種類により、切断状況、Star活性の出現頻度等に差 異が観察されており、 その程度も酵素によって千差万別である。 したがって制 限酵素の使用にあたっては、 これらの要因に充分な注意をはらい、 目的とする 切断が正しく行われるようにしなければならない。以下に制限酵素の使用に際 していくつかの注意点を紹介する。 1)メチル化の影響 DNAメチラーゼ遺伝子を持った宿主菌から調製したDNAはその塩基の一部 がメチル化を受けているため、 メチル化された部分を認識切断する制限酵素 を使用してもほとんど切断されない。 メチル化を受ける部位は基質DNAの種 類、宿主の種類によって異なり、例えば大腸菌の場合では、 その宿主の種類 により 2)Star活性 制限酵素の中には基質となるDNAに対して、特定の反応条件下で使用する ことにより、 その特異性が低下して本来の認識配列とは異なった塩基配列を 切断するものがある。 この現象を制限酵素のStar活性と呼んでいる。Star活 性の出現頻度は酵素、基質DNA、反応条件により異なるが、 ほぼすべての制 限酵素にStar活性があるといっても過言ではなく、認識配列のゆるみの他、 DNAに部分的に切れ目が入るニッキング活性が観察されることもある。いず れにせよStar活性を極力抑えるために、反応性は低下しても、一般的に低グ リセリン濃度、中性pH、高塩濃度での反応を推奨している。 なお、詳しくは 「制 限酵素のStar活性」の表を参照 (p18) 。 3)部分分解 基質DNAに対して予想される制限酵素を用いても充分に切断されない場 合、上記の1)、2) や酵素の失活の他にDNAの純度、反応阻害物の影響、 基質DNAの種類等が関係していることがある。特に、DNAの種類によりサ イズ、 サイト数が異なると、完全分解に要する酵素量も変化し、 それらの値か ら計算される 「1μgのDNAの完全分解に必要な制限酵素の推定量」 と 「実 際量」には、 それぞれの酵素により違いが生じる。 これらの違いは、酵素とその 認識サイト周辺の高次構造との相性によるものと考えられており、事実、制 限酵素Nae Iでは、pBR322 DNAにおいて極端に切断されにくいサイトがあ る (Site Preference) 。 また、反応液組成 (spermidineの添加) によりその切 断順序が変わることもある。 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ 4)DNA結合物質 制限酵素反応後の電気泳動において、 バンドが確認できない、 バンドが広が る、 バンドの移動度がおかしい等のトラブルが起きることがある。 これは、酵素 タンパク自体や他の夾雑タンパク質がDNAに絡まっているため、DNAがゲル 中に入っていかなかったり、DNAがエチジウムブロマイドにより染色されなくな ることが原因であると考えられる。 このような現象がみられる場合には、SDS等 の変性剤を終濃度 0.1% 程度になるようにサンプルに添加して泳動すると改 善されることがある。 5)その他 制限酵素の安定期間は基本的には製造後18ヵ月としているが、 ほとんどの 酵素はその期間を過ぎても急激に失活することはない。 したがって購入後長 期間保存した酵素でも充分使用できる可能性があるので、 それらの酵素につ いては使用前に一度、 力価検定を行った方がよい。 また、保存中に酵素を凍 結させても、 ほとんどの酵素で急激に失活することはないので、上述の長期保 存した場合と同様に取り扱うことが望ましい。 の影響を受ける。通常の形質転換によく使用される菌株 (C600、HB101、 JM109等) はdam、dcmとも保持しているためこれらの菌株から調製した DNAを使うときは注意する必要がある。 また、動物由来のDNAの場合、CG 配列は 5mCGとなっていることが多く、植物由来のDNAの場合、CGおよび 「制 CNG配列は 5mCGおよび 5mCNGとなっていることが多い。なお、詳しくは 限酵素活性に対するメチル化の影響」の表を参照 (p14~17) 。 6 【参考文献】 “DNA and spermidine provide a switch mechanism to regulate the activity of restriction enzyme Nae I” , Conrad, M. and Topal, M. D. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 9707-9711. Q&A Q-1 制限酵素にはそれぞれUniversal Bufferでの相対活性が表示してあ るが、添付Bufferよりも他のバッファーの方が高い活性を示している ことがある (例えばHind IIIの場合、添付BufferはMだが、K Bufferで 200% の活性を示している)。このような場合、活性の高い方のバッ ファーで反応しても問題はないのか? A-1 問題ありません。添付Bufferは活性測定を行っているバッファーで、 もと のBasal Bufferに近い組成のもの等を選んでいますので、必ずしも一番 高い活性を示すバッファーとは限りません。添付Buffer以外のバッファー で反応していただいても問題ありませんが、数字に ( ) の付いている バッファーはStar活性等の影響を受けやすいバッファーですので使用を 避けてください。 Q-2 タカラバイオの制限酵素の中には、Basal Bufferに比べて相対活性の 低いUniversal Bufferを添付している酵素があるのはなぜ? A-2 タカラバイオの制限酵素はDouble Digestionを想定して可能な限り Universal Bufferを添付しています。L、M、H Bufferは主に塩濃度が 異なるので、 まず低い塩濃度のBuffer中で第一の酵素で切断し、 その 後塩を加えて高い塩濃度下で第二の酵素で切断を行えば、 エタノール 沈澱等のBuffer交換の必要がありません。5種類のUniversal Buffer で相対活性があまり高くない酵素についてはBasal Bufferを添付して います。 このBasal Bufferは各制限酵素の至適Bufferであるため、組 成が制限酵素によって異なりますのでご注意ください。なお制限酵素 をお買い上げの際、 ご要望があればUniversal Buffer Set(5種類の ただし、本セットのみの発送はお受 Universal Buffer) を同封いたします。 けできませんのでご了承ください。 http://www.takara-bio.co.jp ■活性の定義 制限酵素活性の1Uは、各酵素反応液 50μl中、原則として37℃で 1時間 に 1μgのλDNAを完全に分解する酵素量とする。なお、活性測定に用いた 基質および反応温度については、酵素ごとに記載している。他のUniversal Bufferでの相対活性は、 「Universal Buffer・Basal Bufferによる制限酵素 活性表示システム」 (p8~9) に一括して記載している。 1. Overdigestion Test 各精製酵素について、基質DNA (通常λDNA) 1μgと過剰量の酵素とを 16時間反応させる。 その後、 アガロースゲル電気泳動のDNA泳動パター ンによりnon-specific DNaseの有無を判定している。 2. Genome DNA Analysis 選定した制限酵素(酵素ごとに明記)についてチェックする。適当な Bacterial Genome DNA (Agarose embedded、0.5μg DNA/50μl Gel) に対して、20~150 Uの制限酵素を加え、16時間反応させる。 その 後パルスフィールド電気泳動を行い、DNA泳動パターンに乱れがないこと を確認している。 概要については 「Genome DNA Analysis Grade」 (p11) に一括して記 載している。 3. Ligation-Recutting Test 基質DNAに対して、 まず、2~50倍過剰の酵素を作用させる。切断され たDNAを回収し、5′ 末端濃度が 0.1~1.0μMになるようにT4 DNA Ligase Buffer [66 mM Tris-HCI (pH7.6) 、6.6 mM MgCl2、10 mM DTT、0.4 mM ATP] に溶解させる。適当量のT4 DNA Ligaseを加え、 16℃で1時間あるいは16~18時間反応させる。DNA回収後、制限酵素 反応液に溶解させ、同じ制限酵素でDNAを再切断する。以上の結果に より、ligase inhibitor、phosphatase、exonucleaseの有無を判定してい る。なお、Ligation効率、Recutting効率について、 タカラバイオの品質規 格を 「Ligation Recutting効率品質規格」 (p12) に一括して記載してい る。 制限酵素について ■純度検定 各酵素Lotごとに下記の項目から必要項目をチェックしている。 各酵素Lotの情報は、 ウェブカタログからCertificates of Analysis (CoA) を ダウンロードして確認することができる。 ■制限酵素によるDNA切断の標準プロトコール 1) 制限酵素反応液の調製例*1 10×制限酵素Buffer 2 μl *2 DNA溶液(1 μg/μl 程度) 1 μl *3 制限酵素(2~15 U) 1 μl *4 滅菌水 16 μl 20 μl Total 2) 切断 各制限酵素の至適温度で、1時間インキュベート *5 3) 確認 アガロースゲル電気泳動で、切断状況を確認 *1:ここでは、20 μl 反応系での例を示してある。 クローニング等で必要DNA量が多い場合は、100~200 μl反応 系までスケールアップすることができる。 *2:各酵素には反応用の10×Bufferが添付されている。 本バッファーはー20℃での保存中に凍結するため、使用する際は、 融解して用いるが、融解後は不均一な溶液になっているので、 必ずボルテックスで混合して、使用すること。 *3:制限酵素で切断するDNAは、酵素反応阻害を防ぐために、 フェノール、 アルコール、EDTA、余分な塩などを極力除いてお く必要がある。アルコール沈殿などで、前もって精製しておくこ とが望ましい。 *4:制限酵素の失活を防ぐために、 フリーザーから取り出した後は、 氷上に置いて使用する。酵素液がチューブ壁面についている場 合は、遠心器でスピンダウンし、指先でタッピングして混合した後、 使用する。 また、制限酵素保存緩衝液には、50%グリセロールが含まれるた め、全体の反応液量の1/10量以下で使用することが望ましい。 *5:各制限酵素の至適温度は、各酵素の製品詳細で確認すること。 4. pKF3 Cloning Test Enforcement Cloning Vector pKF3 DNAのマルチクローニングサイ トに1ヵ所切断部位を持つ制限酵素について、 チェックしている。pKF3 DNAに対し、10倍過剰の制限酵素を作用させる。失活処理の後、切断さ (製品コード 6021) を用いて16℃ れたDNAをDNA Ligation Kit Ver.1 で30分間反応させる。 この反応液の一部でTH2コンピテントセルを形質 転換し、2種類 (LB-Cm-Sm、LB-Cm) のプレート上で37℃で二晩培養す る。LB-Cm-Smプレート上に出現するコロニーの有無により、 ごく微量の exonucleaseの有無を判定している。 概要については、 「 pKF3 Cloning Test」 ( p20) に一括して記載して いる。 ■保存温度・保存形状 各酵素とも-20℃で保存。各酵素とも一回程度の凍結溶解であれば失活は みられない。保存形状については、 「 制限酵素形状一覧」 (p13) にその保存 緩衝液および組成を一括して記載している。 ■添付反応Bufferについて タカラバイオでは、各制限酵素に活性測定に用いた 10×Buffer (1 ml) を添 付している。 ■添付10×Loading Bufferについて タカラバイオでは、全制限酵素に10×Loading Buffer (1 ml) を添付してい る。 反応液量の1/10量以上の10×Loading Bufferを添加し、酵素反応を止め、 アガロースゲルにアプライする。 また、室温での保存中にSDSが析出すること があるが、温浴で溶解して使用する。 ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 7 Universal Buffer・Basal Bufferによる制限酵素活性表示システム 制限酵素について 反応液別相対活性 タカラバイオでは、Universal Buffer [5種 Buffer中1種、■] で酵素活性を測定し、 その値を表示するシステムを採用している。 その酵素活性を 100% とした 際の、各Universal Bufferでの相対活性を以下に記載する。 ( ) は、Star活性等の影響を受けやすいバッファーを示している。 これらの影響を避けるため、 なる なお、Acc III、Bal I、Bcn I、Bgl I、Bpu1102 I、Cfr10 I、Eam1105 I、Eco52 I、Nru I、PshB I、SnaB I、 べく■か■のバッファーを使用することが望ましい。 Ssp I、Taq I、VpaK11B (14品目) I については、Basal Bufferを使用する。Basal Bufferの組成は各々の制限酵素で異なる (「Basal Buffer組成」、p9を参 を列挙した。 なお、反応温度につ 照) 。 また、Double digestionの参考に、各Universal Buffer別の使用推奨酵素 [反応液別相対活性■および■の酵素] いては酵素ごとに記載している。 ■添付Buffer ■使用可能なBuffer(Basal Bufferの組成は各々の制限酵素で異なる) 制限酵素 M H K T+BSA Basal*1 Aat II <20 <20 <20 <20 100 120 Acc I 20 100 <20 (<20) 160 80 100 <20 200 160 Acc II (260) Acc III (<20) (<20) Afa I 60 60 Afl II 20 80*2 Alu I 100 Aor 13H I Aor 51H I 20 20 (80) (<20) 制限酵素 相対活性 (%) L M H K T+BSA Basal*1 Hinc II 20 100 20 40 100 80 Hind III (60) 100 <20 200 Hinf I 80 100 100 160 100 Hin1 I 40 80*2 20 60 160 (80) 100 60 <20 <20 (100) 20 40 60 100 40 100 Mbo II 100 60 <20 <20 60 100 Mfl I 100 80 <20 <20 80 100 120 Mlu I 60 60 100 (100) 60 100 120 120 Msp I 40 100 Mun I 100 Hpa I <20 (40) <20 <20 140 120 Kpn I 100 100 <20 40 200 120 Mbo I <20 20 <20 80*2 80 100 80 100 <20 20 120 120 Apa I 100 <20 <20 <20 <20 ApaL I 100 20 <20 <20 20 20 <20 <20 (<20) (120) (120) <20 Bci T130 I (<20) Bcn I 100 100 100 Ban II 80 60 20 60 BamH I (100) <20 40 Bal I 80 (200) 80 80 <20 100 100 80 100*2 <20 <20 160 100 <20 <20 <20 100 120 40 100 (<20) 80 Nae I 100 80 (100) 100 Nco I (20) 80 100 (20) 100 Nde I <20 <20 20 40 60 60 100 Nhe I (120) Bgl I <20 <20 20 40 <20 100 Not I (<20) (<20) Bgl II <20 20 100 (100) (60) 100 Nru I 0 <20 20 20 <20 100 Bln I <20 20 40 100 20 120 Nsb I 40 20 <20 60 100 100 BmeT110 I <20 <20 20 100 <20 140 PmaC I 100 80 <20 <20 100 100 BmgT120 I <20 <20 100 40 <20 240 PshA I 20 40 <20 100 60 160 Bpu1102 I <20 <20 <20 40 60 100 PshB I (20) (40) 20 40 40 100 BspT104 I 100 60 <20 <20 100 120 Psp1406 I 20 60 <20 <20 100 100 BspT107 I <20 20 80 100 20 100 Pst I (<20) (60) 100 80 (20) 80 Bsp1286 I 100 20 <20 <20 60 100 Pvu I (<20) (20) 80*2 (40) 120 (80) 100 40 <20 (40) 100 80 100 100 100 100 100 80 100 (40) (60) 20 60*2 (60) 160 80 100 40 100 100 100 <20 <20 (160) 100 <20 (<20) 100 20*3 (40) 20 60 20 20 100 100 Pvu II BssH II 100 100 60 20 140 100 RspRS II BstP I (<20) (60) 100 100 Sac I 100 60 <20 <20 80 BstX I <20 40 100 <20 <20 120 Sac II 40 20 <20 <20 100 40 Bst1107 I (<20) 60 100 100 40 100 Sal I <20 <20 100 <20 120 Cfr10 I (<20) (<20) (<20) 80 100 Bsp1407 I (100) (100) 100 Sau3A I 100 120 100 60 100 Sca I Cpo I <20 <20 80 100 <20 100 Sfi I Dde I 40 60 60 100 80 Dpn I 60 60 120 140 100*4 Dra I 100 100 60 100 80 80 SnaB I (20) Eae I 60 100 <20 <20 120 160 Spe I (80) (20) Eam1105 I EcoO65 I EcoO109 I EcoR I 40 (60) (20) 40 Cla I 80 100 (<20) (<20) (40) <20 <20 <20 <20 <20 100 100 <20 100 40 <10 100 <20 <20 (40) 100 80 100 (80) 100 100 120 (20) 100 <20 <20 (60) 100 (100) (80) 100 (40) 100 Sph I (20) (60) 60*2 40 40 100 Sse8387 I (120) 100 (<20) (40) 100 (40) 60*2 <20 <20 160 Ssp I 100 (120) (80) 120 Stu I 60 (60) 100 60 80 140 20 80 20 60 80 100 (20) 80 40 100 (80) 120 (20) 60 100 (60) 100 (<20) (40) 100 (120) (40) 100 Taq I EcoT14 I (<20) (40) 100 120 (60) 100 Tth111 I EcoT22 I <20 20 100 (140) (20) 120 Van91 I <20 Eco52 I <20 <20 <20 <20 <20 100 VpaK11B I <20 Eco81 I <20 100 <20 <20 100 160 Xba I <20 80*2 (80) <20 40 60 (40) 20 <20 100 <20 100 120 120 100 (20) 100 Xho I <20 60 100 160 60 100 <20 <20 (200) 100 Xsp I <20 60 <20 100 160 100 <20 80 140 100 60 100 100 <20 100 80 120 100 Fok I (20) Hae II 80 100 Hae III 60 100 100 Hap II 100 60 <20 80 100 100 120 Hha I *2 (60) 100 100 <10 40 (<20) (<20) 100 100 <20 20 60 (80) Smi I (40) 100 <20 (60) (<20) Sma I (<20) (20) (100) 100 (20) 100 EcoR V Fba I 8 相対活性 (%) L 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ *1 Basal Bufferの組成は各々の制限酵素で異なる (次頁参照) *2 +0.01% BSA→ 100% Afl II、 Aor13H I、 EcoO65 I、 Fok I、 Hin1 I、 Mun I、 Nco I、 Pvu I、 Sse8387 I、Xba I *3 +0.01% BSA+0.01% Triton X-100→100% Not I *4 添付BufferはT http://www.takara-bio.co.jp Universal Buffer別酵素 L Universal Buffer Set M H K T + BSA Acc I Acc II Afa I Afl II *1 Alu I Ban II Bgl II BmgT120 I BspT107 I BssH II Afa I Aor13H I *1 BamH I Ban II Bci T130 I Aat II Acc I Acc II Afa I Afl II BspT104 I Bsp1286 I BssH II Dra I Eae I Aor 51H I BspT104 I Bsp1407 I BssH II Bst1107 I BstP I BstX I Bst1107 I Cla I Cpo I Bcn I Bln I Bme T110 I BspT107 I Bst1107 I Alu I Aor13H I Aor 51H I ApaL I Bcn I EcoO109 I Hae II Hae III Hap II Hha I Cla I Dra I Eae EcoO109 I Eco81 I Dra I EcoO65 I *1 EcoR I EcoR V EcoT14 I Cla I Cpo I Dde I Dra I EcoT14 I Bpu1102 I BspT104 I Bsp1286 I Bsp1407 I BssH II Hinf I Kpn I Mbo II Mfl I Mlu I Fok I *1 Hae II Hae III Hap II Hha I EcoT22 I Hae III Hha I Hinf I Mbo I Fba I Hae II Hae III Hha I Hind III Cla I Dra I Eae I EcoO109 I Eco81 I Msp I Nae I PmaC I Sac I Stu I Hinc II Hind III Hinf I Hin1 I *1 Kpn I Mlu I Nde I Not I *2 Pst I Sal I Hinf I Hpa I Mbo I Msp I Nco I *1 Hae II Hae III Hap II Hha I Hinc II Mbo II Mfl I Mlu I Msp I Mun I *1 Sau3A I Sca I Smi I Spe I Sph I Nde I Nsb I PshA I Pst I Pvu I *1 Hinf I Hin1 I Mbo II Mfl I Mlu I Nhe I PmaC I Psp1406 I Pvu II Sac I Stu I Taq I Van91 I VpaK11B I Xho I Spe I Sph I Stu I Taq I Tth111 I Msp I Mun I Nae I Nde I Nsb I Van91 I Xho I Xsp I PmaC I PshA I Psp1406 I RspRS II Sac I Sau3A I Sfi I Spe I Sse8387 I *1 Stu I Taq I Tth111 I Xba I *1 Xho I Xsp I タカラバイオでは、各制限酵素に活性測定に用いた 10×Bufferを添付してい ます。 また、 これらをセットにしたUniversal Buffer Setもご用意しております。 各制限酵素をお買い上げいただく際、 ご要望があれば1セットを無料で商品に 同封いたしますので、 ご用命ください。なお、当セットのみの発送はお受けでき ませんのでご了承ください。 制限酵素について Afa I Alu I Aor 51H I Apa I ApaL I ■ Universal Buffer Set内容物組成 1. 10 × L 1 ml 100 mM 100 mM 10 mM Tris-HCl (pH7.5) MgCl2 Dithiothreitol 2. 10 × M 1 ml 100 mM 100 mM 10 mM 500 mM Tris-HCl (pH7.5) MgCl2 Dithiothreitol NaCl 3. 10 × H 1 ml 500 mM 100 mM 10 mM 1000 mM Tris-HCl (pH7.5) MgCl2 Dithiothreitol NaCl 4. 10 × K 1 ml 200 mM 100 mM 10 mM 1000 mM Tris-HCl (pH8.5) MgCl2 Dithiothreitol KCl 5. 10 × T 1 ml (BSA-free) 330 mM 100 mM 5 mM 660 mM Tris-acetate (pH7.9) Mg-acetate Dithiothreitol K-acetate 6. 0.1% BSA 1 ml 滅菌水に溶解 7. 0.1% Triton X-100 1 ml ■使用上の注意 反応液中に1/10量になるよう、バッファーを加える。10×T 溶液には、BSA は含まれていないので必ず最終濃度0.01%になるように、BSA を使用時に 添加する。一部の制限酵素では反応系にBSA やTriton X-100 を加えた場 合に100% の活性を示すように設定されている (左表) 。酵素に添付されてい るBSAやTriton X-100 は 10×濃度 (0.1%) なので、 バッファーと同様に反 応液の1/10量を加えて反応を行うこと。 ■保存 -20℃ 【参考文献】 Sac II Sfi I Sma I Stu I Taq I 1) Maniatis, T., et al. (1982) “Molecular Cloning”Cold Spring Harbor Laboratory, 98-106. Farrell, P. H., et al.(1980) Mol. Gen. Genet. 179, 421-435. 2) O′ Xba I Xho I Xsp I 10 × Loading Buffer ■保存 開封後は室温 *1 + 0.01% BSA *2 + 0.01% BSA + 0.01% Triton X-100 Basal Buffer組成 (添付Bufferのみ) 制限酵素 Tris-HCI (mM) pH (25℃) MgCl2 (mM) DTT (mM) NaCl (mM) KCl (mM) BSA (%) Triton X-100 (%) その他 (mM) 反応温度 (℃) Acc III 10 8.5 7 1 200 - - - - 60 Bal I 20 8.5 7 1 - - 0.01 - - 37 Bcn I 20 8.2 10 1 60 - 0.01 - - 37 Bgl I 20 8.5 10 1 - 150 - - - 37 Bpu1102 I 20 8.2 10 1 60 - Cfr10 I 20 8.5 - - - 100 Eam1105 I 20 8.5 - - - 100 Eco52 I 10 8.9 3 - 100 - Nru I 10 7.5 7 1 - 150 0.01 - - 37 - 0.02 MgSO4 3 37 - 0.02 MgSO4 3 37 0.01 - - 37 0.01 - - 37 37 PshB I 10 8.5 10 1 50 - - - - SnaB I 10 8.0 7 - 50 - 0.01 - - 37 Ssp I 10 7.5 10 1 100 - - - - 37 Taq I 10 8.3 5 - 100 - 0.01 - - 65 VpaK11B I 20 7.5 7 1 - 200 - - - 30 ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 9 Double Digestion用推奨Universal Buffer 添付 Buffer Acc I 10 × M 10 × K 10 × H 10 × M 10 × H 10 × H 10 × M 10 × M 10 × L - 0.5 × K 1 × T 1×M 1 × M 0.5 × K 1 × M 1×M 1×M Xho I Xba I 10 × H 10 × K 10 × K 10 × T 10 × M 10 × H +BSA 10 × H 10 × L 10 × H 10 × M 10 × H 10 × H +BSA +BSA +BSA +BSA +Triton 1×M +BSA 1×T 0.5 × K 1×T 1 × M 0.5 × K 1 × M 1.5 × T +BSA +BSA 0.5 × K 1×K +BSA 1 × M 0.5 × K 1 × M - 1×K 1×K 1×K 1 × K 0.5 × K 1 × K 0.5 × K 1×K +BSA 1×K Bgl II 1×T 1×K - 1×H 1×H 1×H 2×K 1×K 1×T 1×K +BSA 1×H 1×H +BSA 1×H 1 × K 0.5 × K 1 × H 1×T +BSA 1×H 1×H 2×T 1×H Cla I 1×M 1×K 1×H - 1×H 1×H 1×M 1×M 1×M 1×K +BSA 1×H 1×H +BSA 1×H 1×K 1×M 1×H 1×T +BSA 1×M 1×H 1×M 1×H EcoR I 1×M 1×K 1×H 1×H - 1×H 1×M 1×M 1×M 1×K +BSA 1×H 1×H +BSA 1×H 1×K 1×M 1×H 1×T +BSA 1×H 1×H 1×M 1×H 0.5 × K 1 × K 1×H 1×H 1×H - 2×T 1 × K 0.5 × K 1×K +BSA 1×H 1×H +BSA 1×H 1 × K 0.5 × K 1 × H 0.5 × K 1×H +BSA 1×H 2×T 1×H Hinc II 1 × M 0.5 × K 2 × K 1×M 1×M 2×T - 1×M 1×M 1×M +BSA 1×T 0.5 × K 1×T 1 × M 0.5 × K 1 × M 1.5 × K +BSA +BSA 1×M 2×T 1×M 1×M Hind III 1×M 1×K 1×M 1×M 1×K 1×M - 1×M 1×K +BSA 1×K 0.5 × K 1×M +BSA 1×M 1×K 1×M 1×M Kpn I 1 × M 0.5 × K 1 × T 1×M 1 × M 0.5 × K 1 × M 1×M - 1 × M 0.5 × K 1 × M 1×M Nco I 1×M +BSA 1×K +BSA 1×K +BSA 1×K +BSA 1×K +BSA 1×K +BSA 1×M +BSA 1 × K 0.5 × K +BSA +BSA 1 × K 0.5 × K 1.5 × T 1 × T +BSA +BSA +BSA +BSA 1×K +BSA 1×K +BSA 1×M +BSA 1 ×K +BSA Nde I 1×T 1×K 1×H 1×H 1×H 1×H 1×T 1×K 1×T +BSA 1×H 1×H 1×T 1×H 0.5 × K 0.5 × K 1 × H +BSA +BSA +BSA 1×H +BSA 1×H +BSA 1 × H 0.5 × K 0.5 × K 0.5 × K 0.5 × K 1 × H +BSA +BSA +BSA +BSA +BSA +BSA EcoR V Not I Pst I Pvu I Sac I Sal I 1×M 1×K 1×K 1×H 1×H 1×H 1×H 0.5 × K 1 × K 1×K 1×K 1×K 1 × K 0.5 × K 1 × K 0.5 × K 1 × M 0.5 × K 0.5 × K 1 × M 1×M 1 × M 0.5 × K 1 × M 1×M 1×T 1×M 1 × H 1.5 × K 1.5 × K 1×M 1×L 1 × K 0.5 × K 1.5 × T 1×K 1 × M 1.5 × K - 1×K +BSA 1 × K 0.5 × K 1 × K +BSA +BSA +BSA - 1×H +BSA 1×H 1×K - 1×H +BSA 2 × K 0.5 × K 1 × H 0.5 × T 1 × H +BSA +BSA +BSA +BSA +BSA 1×T 1×H 1×H +BSA - 1×K 1×M 1×K +BSA 1×K 2×K +BSA 1×K - 0.5 × K 1.5 × K 1 × K +BSA +BSA 1×K - 1.5 × T 1 × T +BSA +BSA 1 × M 0.5 × K 1 × M 0.5 × K 0.5 × K 1×T 1 × M 0.5 × K +BSA +BSA 1.5 × T 1.5 × T 1×H +BSA +BSA 1×H +BSA 1.5 × K 1.5 × T +BSA +BSA 1×H Sma I 1 × T 0.5 × T 1 × T +BSA +BSA +BSA 1×T +BSA 1 × T 0.5 × K 1 × T +BSA +BSA +BSA 1×T +BSA 1×T +BSA 1×T +BSA 1 × T 0.5 × T 0.5 × T 1 × K +BSA +BSA +BSA +BSA Spe I 1×M 1×M 1×K +BSA 1×H 1×H +BSA 1×H 1×K 1×H +BSA 1×H 1 × K 0.5 × K 1 × H 1×K 1×H 1×M 1×H 1×H 1×M 1×M 0.5 × K 1 × K 1×H 1×H 1×H 1×H 2×T 1 × K 0.5 × K 1×K +BSA 1×H Xba I 1 × M 0.5 × K 2 × T 1×M 1×M 2×T 1×M 1×M 1×M 1×M +BSA 1×T Xho I 1×M 1×H 1×H 1×H 1×M 1×M 1×M 1×K +BSA 1×H 1×H 1 × H 0.5 × K 1 × H +BSA +BSA +BSA 1×H 1×H 1×H - 1 × T 1.5 × T +BSA +BSA 1×M 1×H 0.5 × T 1×H +BSA 1 × K 0.5 × K 1 × K 1×K +BSA 1×H 1×K 1×T +BSA 0.5 × K 0.5 × K 1.5 × T 1 × T 1×T 1 × M 0.5 × K 1 × L +BSA +BSA +BSA +BSA 1.5 × T 1.5 × T 1 × H Sph I 0.5 × T 1×K +BSA 1×M 0.5 × K BamH I 1.5 × T 1×H +BSA - 1×T +BSA 1×H +BSA 1×H 1×K 1×M 1×H - 1×T +BSA 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ 1×M 1×H 1 × K 0.5 × K 1 × K 1×M 1 × H 1.5 × T 1 × H 1×T +BSA 1×H 1×M 1×H - 2×T 1×H 1×M 2×T - 1×M 1×H 1×H 1×M - 0.5 × T 1×H +BSA 0.5 × K 1×T 1 × M 0.5 × K 1 × M 1.5 × T +BSA +BSA 1×H 1 × T 0.5 × T 1 × T +BSA +BSA +BSA 注1)1μg DNA/50μl 反応液に対し各酵素 10 Uを添加して37℃、1時間反応させることで完全分解できることを確認している。 注2)反応液中のグリセロール濃度は、Star活性をできるだけ抑えるために 10%以下で使用する。 注3)DNAの種類や高次構造、認識切断部位が近接している場合などは、完全分解できない場合がある。 10 Sph I Spe I Sma I Sal I Sac I Pvu I Pst I Not I Nde I Nco I Kpn I Hind III Hinc II EcoR V EcoR I Cla I Bgl II Enzyme BamH I 2種類の制限酵素を同時に用いて基質DNAを切断するDouble Digestionは、時間を節約する方法として一般的に用いられている。タカラバイオでは、 Universal Bufferを供給するとともに、各酵素ごとにUniversal Buffer別の相対活性を表示しているが、中にはDouble Digestionに使用するUniversal Buffer の選択に困る酵素の組合せがある。 この表は、pUC系プラスミドのクローニングサイトに切断部位を持つ酵素を中心に、Double Digestionに使用する最適な Universal Buffer条件を示している。 なお、表中のUniversal Bufferの前に記している 「数字×」 は、各Bufferの最終濃度を表示している。Universal Bufferはす また、BSAも10×濃度 (0.1%) なので、10倍希釈して最終濃度 べて10×濃度で供給しているので、0.5×は20倍、1×は10倍、2×は5倍に希釈して使用する。 0.01% にして使用する。 Acc I 制限酵素について 主要制限酵素 Double Digestion 用推奨 Universal Buffer http://www.takara-bio.co.jp 制限酵素Genome DNA Analysis Grade QC用 Genome DNA 一覧表・完全分解必要酵素量一覧表 QC用 Genome DNA 一覧表 制限酵素名 Aat II 認識配列*1 GACGTC 完全分解必要酵素量一覧表 QC用 Genome DNA Staphylococcus aureus 反応液*2 反応温度 (℃) T+BSA 37 完全分解に必要な酵素量 (U) 5 時間反応 20時間反応 50 5 Aor 51H I AGCGCT Staphylococcus aureus M 37 50 20 Bgl I GCCNNNNNGGC Staphylococcus aureus Basal 37 10 5 Bln I CCTAGG Escherichia coli K 37 5 5 BspT104 I TTCGAA Arthrobacter luteus L 37 40 5 BssH II GCGCGC Staphylococcus aureus M 50 5 5 Bst1107 I GTATAC Arthrobacter luteus K 37 5 5 20 Cla I ATCGAT Arthrobacter luteus M 30 50 Cpo I CGGWCCG Staphylococcus aureus K 30 5 Dra I TTTAAA Pseudomonas aeruginosa M 37 100 Eco52 I CGGCCG Staphylococcus aureus Basal 37 10 5 Mlu I ACGCGT Staphylococcus aureus H 37 5 5 Mun I CAATTG Arthrobacter luteus Nae I GCCGGC Staphylococcus aureus Nhe I GCTAGC Arthrobacter luteus Not I GCGGCCGC Escherichia coli Nru I TCGCGA Staphylococcus aureus Nsb I TGCGCA Arthrobacter luteus PshB I ATTAAT Pseudomonas aeruginosa Psp1406 I AACGTT Arthrobacter luteus Pvu I CGATCG Flavobacterium okeanokoites Sac II CCGCGG Staphylococcus aureus Sal I GTCGAC Staphylococcus aureus Sfi I GGCCNNNNNGGCC Escherichia coli Sma I CCCGGG Staphylococcus aureus Smi I ATTTAAAT Escherichia coli SnaB I TACGTA Arthrobacter luteus 5 *3 100 *3 M+BSA 37 5 5 L 37 50 50 M 37 50 20 H+BSA+Triton 37 5 5 Basal 37 50 5 T+BSA 37 5 5 Basal 37 5 5 T+BSA 37 5 5 K+BSA 37 20 5 T+BSA 37 10 5 H 37 150 5 M 50 100 50 T+BSA 30 5 5 H 30 50 5 Basal 37 10 10 Spe I ACTAGT Escherichia coli Sse8387 I CCTGCAGG Staphylococcus aureus Ssp I AATATT Arthrobacter luteus Xba I TCTAGA Escherichia coli Xho I CTCGAG Escherichia coli H 制限酵素について 各種Genome DNAを制限酵素で切断し、 そのGenome DNAを解析する場合、 その解析に適した制限酵素はGenome DNAの種類によって多種多様で ある。タカラバイオでは、各種Genome DNAの解析に適している制限酵素を選定し、 その酵素で各Lotごとに適当なBacterial Genome DNA(Agarose embedded、0.5μg DNA/50μl Gel) に対して、20~150 Uの制限酵素を加えて16時間反応させ、 その後パルスフィールド電気泳動を行い、DNA泳動パター ンに乱れがないことを確認している。 また、QC用Bacterial Genome DNAの完全分解に必要な酵素量を求めた。各酵素について、5、10、20、50 Uの酵素を 5時間および20時間反応させ、 それぞれの酵素の必要最小量を測定した。 M 37 50 20 M+BSA 37 5 5 Basal 37 5 5 M+BSA 37 50 5 37 20 5 *1 W:A or T、N:A or C or G or T *2 0.5μg DNA/50μl Gel + 100μl 反応液 *3 Dra I は、 Agarose Gel 中では、反応がきわめて進行しにくい。 そこで、 まず適当量を添加し、 4℃で16時間放置する。 その後、 37℃に移し、 5時間あるいは20時間反応を行った。 ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 11 制限酵素について Ligation-Recutting効率品質規格 制限酵素を使用するうえで重要な純度検定であるLigation-Recutting TestにおけるLigation-Recutting効率品質規格を一覧表にまとめた。 タカラバイオの制 限酵素は、 この規格により高い品質を保証している。具体的な試験方法は次の通りである。 Ligation-Recutting Test対象の基質DNAに対して、 まず、2~50倍過剰の酵素を作用させる。切断されたDNAを回収し、5′ 末端濃度が 0.1~1.0μMになる に溶解させる。適当量のT4 DNA Ligaseを加え、 ようにT4 DNA Ligase Buffer [66 mM Tris-HCl (pH7.6) 、6.6 mM MgCl2、10 mM DTT、0.4 mM ATP] 16℃で1時間あるいは16~18時間反応させる。DNA回収後、制限酵素反応液に溶解させ、同じ制限酵素でDNAを再切断する。以上の結果により、ligase exonucleaseの有無を判定している。 inhibitor、phosphatase、 制限酵素 Ligation Recutting 効率 (%) 効率 (%) 制限酵素 Ligation Recutting 効率 (%) 効率 (%) 制限酵素 Ligation Recutting 効率 (%) 効率 (%) 制限酵素 Aat II >90 >95 Bsp1407 I 90 100 Hap II >90 100 Pst I >95 100 Acc I >90 100 BssH II 90 100 Hha I >90 100 Pvu I >95 100 Acc II >90 100 BstP I >95 100 Hinc II >95 100 Pvu II >95 100 Acc III >95 100 BstX I >90 100 Hind III 100 100 RspRS II >95 >95 Afa I 90 100 Bst1107 I 90 90 Hinf I >90 100 Sac I >99 100 Afl II >95 100 Cfr10 I 90 100 Hin1 I 90 100 Sac II >90 95 Alu I >95 100 Cla I >95 100 Hpa I >95 100 Sal I >95 100 Aor13H I >95 100 Cpo I 100 100 Kpn I >90 >95 Sau3A I >95 100 Aor 51H I 90 95 Dde I >95 >95 Mbo I 95 100 Sca I >95 100 Apa I >95 100 Dra I >90 100 Mbo II 90 100 Sfi I 90 100 ApaL I >95 100 Dpn I >70 >90 Mfl I >95 100 Sma I >95 100 Bal I >90 100 Eae I 100 100 Mlu I 100 100 Smi I >80 >90 BamH I >95 100 Eam1105 I 90 90 Msp I 90 100 SnaB I 90 >95 Ban II 100 100 EcoO65 I 95 100 Mun I 90 100 Spe I >99 100 Bci T130 I * 90 90 EcoO109 I >95 100 Nae I 90 100 Sph I 100 100 Bcn I * 90 90 EcoR I 100 100 Nco I >95 100 Sse8387 I 100 100 Bgl I >95 100 EcoR V 90 100 Nde I 90 100 Ssp I 90 100 Bgl II >95 100 EcoT14 I 100 100 Nhe I 90 95 Stu I >95 100 90 100 EcoT22 I 90 100 Not I >95 100 Taq I >90 >90 BmeT110 I >90 100 Eco52 I 90 100 Nru I 95 95 Tth111 I >90 >90 BmgT120 I 90 100 Eco81 I * 90 90 Nsb I >90 >90 Van91 I 90 100 Bpu1102 I 90 100 Fba I 100 100 PmaC I 95 100 VpaK11B I >90 100 BspT104 I >95 100 Fok I >95 100 PshA I >90 100 Xba I 100 100 BspT107 I >95 100 Hae II >95 100 PshB I 95 100 Xho I >95 100 Bsp1286 I 90 100 Hae III >95 100 Psp1406 I 90 100 Xsp I >90 100 Bln I * ライゲーション反応にはTaKaRa DNA Ligation Kit Ver. 2.1を使用し、26℃で10分間反応させる。 12 Ligation Recutting 効率 (%) 効率 (%) 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp 制限酵素形状一覧 各酵素の保存緩衝液およびその組成は下表の通りである。 pH (25℃) KCl (mM) NaCl (mM) MgCl2 (mM) DTT (mM) EDTA (mM) 10 - 7.5 - 100 - 1 0.1 - 0.01 50 - 10 7.4 - 200 - 1 1 - 0.02 50 3 10 - 7.5 100 - - 1 0.1 - 0.01 50 4 10 - 7.5 100 - - 1 0.1 - 0.02 50 5 10 - 7.5 50 - - 1 0.1 - 0.01 50 6 10 - 7.5 200 - - 1 0.1 - 0.01 50 7 10 - 7.5 200 - - 1 0.1 0.15 0.02 50 8 10 - 7.5 400 - - 1 0.1 - 0.01 50 9 10 - 7.5 400 - - 1 0.1 0.15 0.01 50 10 10 - 7.5 - 50 - 1 0.1 - 0.01 50 11 10 - 8.0 100 - - 1 0.1 0.15 0.01 50 12 10 - 8.0 100 - - 1 0.1 - 0.02 50 13 10 - 8.0 200 - - 1 0.1 - 0.01 50 14 10 - 7.5 100 - - 1 0.1 0.15 0.01 50 15 10 - 7.5 100 - - 1 1 - 0.01 50 16 10 - 7.4 100 - - 1 1 - 0.02 50 17 10 - 7.5 100 - 10 1 0.1 - 0.01 50 18 10 - 7.5 - 100 10 1 0.1 0.15 0.01 50 19 10 - 7.5 300 - CaCl2 5 1 0.1 0.15 0.02 50 20 10 - 7.5 300 - - 1 0.1 - 0.05 50 21 10 - 7.5 400 - - 1 0.1 - 0.02 50 22 10 - 7.5 100 - MnCl2 1 1 0.1 0.15 0.01 50 23 10 - 7.5 - 100 - 1 1 - 0.02 50 Tris-HCl (mM) 1 2 保存緩衝液 Triton X-100(%) BSA (%) Glycerol (%) 制限酵素について KPO4 (mM) 保存 緩衝液 酵素名 1 Smi I 2 Bcn I Cfr10 I Hin1 I 3 Acc III Bln I Nco I 4 Afa I Aor13H I Cpo I Mbo II 5 Sca I Sma I Ssp I Xba I 6 Bal I EcoT14 I 7 Aor 51H I BmgT120 I 8 Hinc II Hind III Mlu I Sal I VpaK11B I 9 BamH I BstX I EcoO109 I Hae III BspT104 I 10 Afl II Sac II 11 Pvu I 12 Dde I 13 Bgl I 14 Acc I Acc II Alu I Apa I BssH II BstP I Cla I Dra I Fok I Hap II Hha I Hinf I Nhe I Not I PmaC I Sse8387 I Xho I Xsp I Bst1107 I Eco52 I 15 Hae II 16 Bpu1102 I Bsp1407 I 17 Bgl II EcoT22 I Pst I 18 Bci T130 I 19 Sfi I 20 Taq I 21 Dpn I 22 Aat II 23 RspRS II Msp I Nde I PshA I PshB I Stu I ApaL I Ban II BmeT110 I BspT107 I Bsp1286 I Eae I EcoO65 I EcoR I EcoR V Fba I Hpa I Kpn I Mbo I Mfl I Nae I Pvu II Sac I Sau3A I SnaB I Spe I Sph I Eam1105 I Eco81 I Mun I Nsb I Psp1406 I Van91 I Tth111 I Nru I ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 13 制限酵素について 制限酵素活性に対するメチル化の影響 14 多くのDNAは、 メチル化された塩基を含んでいる。制限酵素認識配列中の塩基がメチル化を受けると、 メチル化された塩基の種類および位置によっては、 その DNAを切断できなくなる場合がある。大腸菌の多くは2つのsite specific DNA methylase (dam methylase;G6mATCおよびdcm methylase;C5mCWGG) によりメチル化を受けてい をもっており、 その大腸菌由来のDNAはそれぞれの配列でメチル化を受けている。 また、哺乳類由来のDNAはCG methylase ( 5mCG) ることがある。下表に、dam methylase、dcm methylase、CG methylaseによって影響を受けることが知られている酵素について、酵素ごとにその影響とメチル 化により切断されない塩基配列を示している。 あわせて、 これらのメチル化が制限酵素活性に与える影響について、現在までに文献等で報告されているものを記 載した。 制限酵素 認識配列*1 切断に影響を及ぼす methylase とその認識配列 文献等の報告 methylase の影響を 受け切断されない配列*2 メチル化による影響を 受けない配列 メチル化による影響を 受ける配列 Aat II GACGTC CG methylase 5m Acc I GTMKAC CG methylase 5m Acc II CGCG CG methylase 5m Acc III TCCGGA dam methylase G ATC Afa I GTAC CG methylase 5m Afl II CTTAAG 5m Alu I AGCT 6m Aor13H I TCCGGA CG methylase 5m Aor 51H I AGCGCT CG methylase 5m Apa I GGGCCC dcm methylase CG methylase C CWGG 5m CG ApaL I GTGCAC CG methylase Bal I TGGCCA dcm methylase BamH I GGATCC GGATC4mC GGATC5mC GG6mATCC GG6mATC5mC GGAT4mCC GGAT5mCC GGAT5hmC5hmC Ban II GRGCYC GRGCY5mC GRG5mCYC Bcn I CCSGG 5m CCSGG C5mCSGG C4mCSGG Bgl I GCCN5GGC GC5mCN5GGC G5mCCN5GGC GCCN5GG5mC GC4mCN5GGC Bgl II AGATCT AG6mATCT AGAT5mCT AGAT5hmCT Bln I CCTAGG BmeT110 I CYCGRG BmgT120 I GGNCC Bpu1102 I GCTNAGC CG GA5mCGTC GA5mCGTC GACGT5mC CG GTMKA5mCG GT5mCGAC GTMK6mAC GTMKA5mC*3 GT5mCGAC*4 CG 5m CG5mCG 6m TCCGG ATC CG GTA5mCG 6m CGCG 5m T CCGGA TC5mCGGA*3 TCCGG6mA 5m GTA5mC*3,*4 CTTAAG CTTA6mAG AGCT AG4mCT AG5mCT AG5hmCT CG methylase CG TC 5mCGGA TC5mCGGA CG AG CGCT AG5mCGCT*4 5m GGGCC CWGG GGGCC5mCG GGG5mCCC GGGCC5mC 5m CG GTGCA5mCG C5mCWGG TGGC5mCAGG CG 5m 5m 5m GCCN5GG5mCG GTG5mCAC GTGC6mAC GTGCA5mC TGG5mCCA TGGC5mCA CC5mCGRG CTCG6mAG AG5mCTCGGG 5m CCCGGG dcm methylase CG methylase C5mCWGG 5m CG CG methylase 5m BspT104 I TTCGAA BspT107 I GGYRCC Bsp1286 I GDGCHC Bsp1407 I TGTACA BssH II GCGCGC BstP I GGTNACC BstX I CCAN6TGG Bst1107 I GTATAC CG methylase 5m Cfr10 I RCCGGY CG methylase Cla I ATCGAT Cpo I CGGWCCG CG GGNC5mCWGG GGNC5mCG GGNC5mC GG5mCCC GGK5mCC TT5mCGAA TT5mCGAA GDGCH5mC CG methylase CG 5m GDG5mCHC G5mCG5mCGC G5mCGCGC GGTNAC C 5m *4 CCAN4C5mCTGG*4 5m CCAN6TGG CG GTATA5mCG GTATA5mC 5m CG RC5mCGGY R5mCCGGY RC5mCGGY*4 dam methylase CG methylase G6mATC 5m CG G6mATCGAT ATCG6mATC AT5mCGAT 6m CG methylase 5m CG CGGWC5mCG 5m 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp ATCGAT ATCG6mAT AT5mCGAT CGGW5mCCG*4 CGGWC5mCG*4 制限酵素 認識配列*1 Dra I TTTAAA Eae I YGGCCR 切断に影響を及ぼす methylase とその認識配列 文献等の報告 methylase の影響を 受け切断されない配列*2 メチル化による影響を 受けない配列 メチル化による影響を 受ける配列 TTTA6mAA dcm methylase CG methylase C CWGG CG 5m 5m YGGC CAGG YGGC5mCG YGG5mCCR YGGC5mCR 5m GACN5GTC EcoO65 I GGTNACC EcoO109 I RGGNCCY dcm methylase C CWGG EcoR I GAATTC CG methylase 5m EcoR V GATATC EcoT14 I CCWWGG EcoT22 I ATGCAT Eco52 I CGGCCG Eco81 I CCTNAGG Fba I TGATCA Fok I GGATG (CATCC) Hae II RGCGCY Hae III GGCC Hap II CCGG CG methylase 5m Hha I GCGC CG methylase 5m Hinc II GTYRAC GTYRA5mC GT5mCGAC*4 GTYR6mAC GTYRA5hmC Hind III AAGCTT A6mAGCTT AAGC5hmU5hmU 6m Hinf I GANTC GANT5mC*3 G6mANTC GANT5hmC Hin1 I GRCGYC GRCGY5mC*3,*4 GR5mCGYC Hpa I GTTAAC GTTAA C GTTA6mAC GTTAA5hmC G5hmU5hmUAAC Kpn I GGTACC GGTA5mCC GGTA5mC5mC GGTAC5mC GGT6mACC GGTAC4mC Mbo I GATC dam methylase G6mATC G6mATC GAT4mC GAT5mC GA5hmUC G6mATC GAT5hmC Mbo II GAAGA (TCTTC) dam methylase G6mATC GAAG6mATC T5mCTT5mC*3 G6mAAGA GA6mAGA GAAG6mA Mfl I RGATCY dam methylase G6mATC RG6mATCY 6m Mlu I ACGCGT CG methylase 5m A5mCG5mCGT 6m A5mCGCGT Msp I CCGG CCGG C4mCGG C5mCGG*3 5m Mun I CAATTG Nae I GCCGGC Nco I CCATGG GA5mCN5GTC*4 GACN5GT5mC*4 GGTNAC5mC*4 5m RGGNC CTGG CG GAATT5mCG RGGNC5mCY 5m GAATT5hmC GAA5hmU5hmUC G6mAATTC GA6mATTC GAATT5mC*3 GATAT5mC GATAT5hmC G6mATATC GAT6mATC ATG5mCAT ATGC6mAT CG CGGC5mCG CG methylase 5m 5m dam methylase G6mATC TG6mATCA CGGCCG*4 CGGC5mCG*4 CGG5mCCG*4 5m TG6mATCA CAT CC CATC4mC CATC5mC*3 C6mATCC GG6mATG 5m CG methylase CG 5m RG5mCGCY RG5mCGCY RGCG5mCY*3 RG5hmCG5hmCY GGC5mC CG methylase GG5mCC*3 GG5hmC5hmC CG C5mCGG C5mCGG CG G CGC G5mCGC GCG5mC G5hmCG5hmC CG 5m 5m GR5mCGYC 5m CG 制限酵素について Eam1105 I AGATCY*3 ACGCGT 4m AAGCTT AAG5mCTT AAG5hmCTT RG6mATCY RGAT4mCY RGAT5mCY CCGG C5hmCGG 5hm CA6mATTG CG methylase CG 5m G5mCCGGC GC5mCGGC GCCGG5mC GC CGGC GCCGG5mCG 5m CC6mATGG CCATGG CCATGG 4m 5m CATATG Nde I CATATG Nhe I GCTAGC CG methylase 5m Not I GCGGCCGC CG methylase Nru I TCGCGA dam methylase CG methylase Nsb I TGCGCA 5m CG methylase CG GCTAG CG 5m CG G CGGC CGC GCGGCCG C GCGG5mCCGC GCGGC5mCGC G6mATC CG TCGCG6mATC T5mCG5mCGA TCG5mCGA T5mCGCGA TCGCG6mA TG5mCGCA TGCGC6mA TG5mCGCA 5m CG 5m GCTAG5mC 5m 5m 5m 5m ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 15 制限酵素について 制限酵素 認識配列*1 切断に影響を及ぼす methylase とその認識配列 PmaC I CACGTG CG methylase 5m PshA I GACN4GTC CG methylase 5m PshB I ATTAAT CG methylase 5m Psp1406 I AACGTT Pst I CTGCAG Pvu I CGATCG Pvu II CAGCTG 文献等の報告 methylase の影響を 受け切断されない配列*2 CG CA5mCGTG CG GA CGN3GTC CG AA5mCGTT 5m メチル化による影響を 受けない配列 メチル化による影響を 受ける配列 CA5mCGTG*4 GACN4GT C 5m *4 GA5mCN4GTC*4 AA5mCGTT CTGCAG CTGC6mAG C5hmUGCAG 5m CG methylase CG 5m CGAT5mCG 5m CG6mATCG CGAT4mCG CGAT5mCG CAG4mCTG CAG5mCTG RspRS II TTAA Sac I GAGCTC Sac II CCGCGG CG methylase 5m Sal I GTCGAC CG methylase 5m Sau3A I GATC CG methylase 5m Sca I AGTACT Sfi I GGCCN5GGCC dcm methylase C CWGG CG methylase 5m Sma I CCCGGG CG methylase 5m G6mAGCTC GAGCT5mC GAG5mCTC CG C5mCG5mCGG CCGCGG C5mCGCGG CG GT5mCGAC GTCGA5mC GT5mCGAC GTCG6mAC CG GAT5mCG G6mATC GA5hmUC GAT4mC GAT5mC*3 GAT5hmC 5m AGTA5mCT GG5mCCN5GG5mCC CG GGC CWGGN2GGCC GGCCN5GGC5mCWGG GGCCN5GGC5mCG GG4mCCN5GGCC GGC5mCN5GGCC GGCCN5GGC5mC CG CC5mCGGG C5mCCGGG 4m 5m 5m CCCGGG CCCGGG C4mCCGGG CC4mCGGG CC5mCGGG*3 5m 16 Smi I ATTTAAAT SnaB I TACGTA Spe I ACTAGT Sph I GCATGC GCATG5mC G5hmCATG5hmC Sse8387 I CCTGCAGG 5m CG methylase CG 5m TA5mCGTA T6mACGT6mA TA5mCGTA ACTAGT A5mCTAGT 6m CGCCTGCAGG5mCG*4 GC6mATGC CCTGCAGG*4 C5mCTGCAGG*4 CCTG5mCAGG*4 CCTGC6mAGG*4 5m Ssp I AATATT Stu I AGGCCT dcm methylase C5mCWGG AGGC5mCTGG AATATT Taq I TCGA dam methylase G6mATC TCG6mATC Tth111 I GACN3GTC Van91 I CCAN5TGG dcm methylase C5mCWGG C5mCAGGN3TGG C5mCAN5TGG VpaK11B I GGWCC dcm methylase CG methylase C CWGG CG GGWC CWGG GGWC5mCG GGWC5mC G6mATC TCTAG6mATC T5mCTAGA*3 TCTAG6mA T5hmCTAGA 6m AGG5mCCT AGGC4mCT AGGC5mCT T5mCGA TCG6mA T5hmCGA GA5mCN3GT5mC GACN3GT5mC*4 dam methylase 5m 5m 5m Xba I TCTAGA Xho I CTCGAG CT5mCGAG*3,*4 Xsp I CTAG 5m CTAG 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp CTCGAG CTCG6mAG 5m :A or C :G or T :A or C or G or T :A or G :C or T :A or T :C or G :A or C or T :A or G or T :N4-methyl cytosine :C5-methyl cytosine :C5-hydroxymethyl cytosine :N6-methyl adenine :hemi-methylated GG5mCC のunmethylated strand をニッキングする。 :hemi-methylated AAG5mCTT をゆっくりと切断する。 :GANT5mC をゆっくり切断する (1/10)。 :GRCGY5mC を非常にゆっくり切断する。 5m :hemi-methylated GGTA CC、GGTAC5mC によって影響を受けることが 報告されており、 hemi-methylated GGTA5mC5mC をゆっくりと切断する。 Mbo II :hemi-methylated T5mCTT5mC を切断できないことが報告されている。 Mfl I : 6mAGATCY をゆっくり切断する。 Msp I :GGC5mCGG を非常にゆっくり切断する。 Mva I :hemi-methylated CC6mAGG、 hemi-methylated 4mCCWGG の unmethylated strand をニッキングする。 Pst I :hemi-methylated 5mCTG5mCAG をゆっくりと切断する。 Pvu II :hemi-methylated 5mCAG5mCTG をゆっくりと切断する。 Sal I :hemi-methylated GT5mCGAC をゆっくりと切断する。 Sau3A I :hemi-methylated GAT5mC のunmethylated strand をニッキングする。 また、6mAGATC の切断速度が遅くなることが報告されている。 Sma I :hemi-methylated CC5mCGGG のunmethylated strand をニッキングする。 Spe I :hemi-methylated A5mCTAGT をゆっくりと切断する。 Xba I :hemi-methylated T5mCTAGA を切断するが、 その切断速度は非常に遅く (1/100以下) なる。 5m Xho I :CT CGAG を非常にゆっくり切断する。 Hae III Hind III Hinf I Hin1 I Kpn I *2 CG methylaseの場合には一部が切断できることもある。 :hemi-methylated GTMKA5mC のunmethylated strand をゆっくりニッキン グする。 Acc III :TC5mCGGA をゆっくり切断する (1/75)。 Afa I :hemi-methylated GTA5mC をゆっくり切断するが、bi-methylatedGTA5mC を切断できない。 Bal I その切断速度 :dcm site とオーバーラップする場合 (TGGC5mCAGG)には、 は非常に遅く (1/50以下) なる。 Bgl I :hemi-methylated GC5mCN5GGC、 GC4mCN5GGC、 GCCN5GG5mC をゆっく り切断するが、 bi-methylated M. Hae III-Bgl I site はほとんど切断できない。 Cla I :hemi-methylated AT5mCGAT をゆっくり切断する。 EcoR I :hemi-methylated GAATT5mC をゆっくり切断するが、 bi-methylatedGAATT5mC を切断できない。 Fok I :CATC5mC をゆっくり切断する (1/2 ~1/4) 。 Hae II :RGCG5mCY を非常にゆっくり切断する。 *3 Acc I なお、hemi-methylated DNA とは二本鎖のうち片方の鎖のみメチル化されたDNAであ り、 ( ) は相対速度を示す。 制限酵素について *1 M K N R Y W S H D 4m C 5m C 5hm C 6m A *4 TaKaRa unpublished observations. 【参考文献】 McClelland, M. and Nelson, M. (1993) Nucleic Acids Res. 21, 3139-3154. ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 17 制限酵素について 制限酵素のStar活性 制限酵素の中には基質となるDNAに対して大過剰量を用いた場合に、 その特異性が低下して本来の認識配列とは一部異なる塩基配列を切断するものがあ り、 この現象を制限酵素のStar活性と呼んでいる。 ここではStar活性の認められている酵素とその出現を促進する条件、 さらにStar活性によって切断される塩 基配列が報告されているものについてはその配列を示した。 制限酵素 正常な認識配列*1 反応条件*2 認識し得る配列*1 参考文献 正常な認識配列*1 反応条件*2 認識し得る配列*1 参考文献 Aat II GACGT↓C E 22 Sca I AGT↓ACT Aor13H I T↓CCGGA A, C, E 22 Sfi I GGCCNNNN↓NGGCC B, E 22 BamH I G↓GATCC A, B, E, F GRATCC GGNTCC GGANCC GGATYC 1, 2, 3, 4 Smi I ATTT↓AAAT A, B, C, E 22 22 22 Ban II GRGCY↓C A, E, F BciT130 I CC↓WGG A, E Bgl I GCCNNNN↓NGGC F 22 Bgl II 22 22 A↓GATCT E BmeT110 I C ↓YCGRG E BspT104 I TT↓CGAA A, E BstP I G↓GTNACC A, F 22 Bst1107 I GTA↓TAC F 22 Dde I C ↓TNAG A, B, E 22 Eam1105 I GACNNN↓NNGTC A, C, F 18 制限酵素 EcoO65 I G↓GTNACC E, F EcoR I G↓AATTC A, B, E, F NAATTN 4, 8, 9,10,11 EcoR V GAT↓ATC E 12, 22 RATATC GNTATC GANATC GATNTC GATANC GATATY 22 EcoT22 I ATGCA↓T F, H 22 Fba I T↓GATCA A, C, E, F 22 Hae III GG↓CC A 1 Hha I GCG↓C A, E 4 Hinc II GTY↓RAC E 22 Hind III A↓AGCTT B, E RAGCTT ANGCTT AAKCTT AAGMTT AAGCNT AAGCTY 10,13, 22 Hpa I GTT↓AAC A, E 1, 22 Kpn I GGTAC↓C E 22 Mun I C↓AATTG A, F 22 Nco I C↓CATGG A, E 22 Nhe I G↓CTAGC A, C, E, F 22 Nsb I TGC↓GCA B 22 PshB I AT↓TAAT D 22 Psp1406 I AA↓CGTT E 22 Pst I CTGCA↓G A, E 1, 4, 22 Pvu II CAG↓CTG A, E NAGCTG CNGCTG CANCTG CAGNTG CAGCNG CAGCTN 15,16, 22 22 RspRS II T↓TAA A Sac I GAGCT↓C A, E Sal I G↓TCGAC A, E 4, 22 Sau3A I ↓GATC A, E SATC GMTC GAKC GATS 17, 22 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ B, C, F 21 Spe I A↓CTAGT E, F Sse8387 I CCTGCA↓GG E, F 22 Ssp I AAT↓ATT A, C, E, F 22 Taq I T↓CGA A, B, E, G Tth111 I GACN↓NNGTC B, C Van91 I CCANNNN↓NTGG A VpaK11B I G↓GWCC Xba I T↓CTAGA 22 NACNNNGTC 19 GNCNNNGTC GANNNNGTC GACNNNNTC GACNNNGNC GACNNNGTN 22 A, C, E, F 22 A, E 1, 4 *1 M :A or C K :G or T N :A or C or G or T R :A or G Y :C or T W :A or T S :G or C *2 A :高濃度グリセロール存在 B :Mn2+ 存在 C :アルカリpH D :低pH E :DMSO 存在 F :低イオン強度 G :高イオン強度 H :2-メルカプトエタノール存在 【参考文献】 1)Nath, K. and Azzolina, B. A.(1981)in“Gene Amplification and Analysis”1 : Restriction Endonucleases(Chirikjian, J.G.ed.),113-130. 2)George, J., et al.(1980)J. Biol. Chem. 255, 6521-6524. 3)George, J. and Chirikjian, J. G.(1982)Proc. Natl. Acad. Sci. USA79, 2432-2436. 4)Malyguine, E., et al.(1980)Gene 8, 163 -177. 5)Clarke, C. M. and Hartley, B. S.(1979)Biochem.J. 177, 49-62. 6)Heininger, K., et al.(1977)Gene 1, 291-303. 7)Makula, R. A. and Meagher, R. B.(1980)Nucleic Acids Res. 8, 3125-3131. 8)Polisky, B., et al.(1975)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72, 3310-3314. 9)Tikchonenko, T. I., et al.(1978)Gene 4,195-212. 10)Hsu, M. and Berg, P.(1978)Biochemistry 17, 131-138. 11)WoodBury, C. P., et al.(1980)J. Biol.Chem. 255, 11534-11546. 12)Halford, S. E., et al.(1986)Gene 41,173-181. 13)Nasri, M. and Thomas, D.(1986)Nucleic Acids Res. 14, 811-822. 14)Gingeras, T. R. and Brooks, J. E.(1983)Proc.Natl. Acad. Sci.USA 80, 402406. 15)Nasri, M., et al.(1985)FEBS Letters 185, 101-104. 16)Nasri, M. and Thomas, D.(1987)Nucleic Acids Res.15,7677-7687. 17)Pech, M., et al.(1979)Cell 18, 883-893. 18)Barany, F.(1988)Gene 65, 149-165. 19)Shinomiya, T., et al.(1982)J. Biochem. 92,1823-1832. 20)Kessler, C., unpublished observations. 21)Grosskopt, R. and Kessler, C., unpublished observations. 22)TaKaRa, unpublished observations. http://www.takara-bio.co.jp pBR322、pUC19の完全分解に必要な反応時間 ■ pUC19 ■ pBR322 制限酵素 反応液 使用 酵素量 (U) Aat II T+BSA Acc III Basal 10 K+BSA 10 Aor13H I Bal I Basal 5 5 BamH I K 10 BmeT110 I K 10 Bst1107 I K 5 Cla I M 10 Dde I K 10 Eam1105 I EcoR I Basal H 5 10 EcoR V H 10 EcoT14 I H 10 Eco52 I Basal 5 Hind III M 10 Nde I H 10 Nhe I M 10 Nru I Basal 10 Nsb I T+BSA PshA I K 10 5 PshB I Basal 10 Pst I H 10 Pvu I K+BSA 10 Pvu II M 10 Sal I H 10 Sca I H 10 Sph I H 10 Ssp I Basal 10 K 10 Tth111 I *1 Acc III Bal I Eco52 I Nhe I PshA I Sal I Sca I Tth111 I 活性 測定用 DNA λ λ λ 1μg DNA /10μl (hour) 1μg DNA /50μl (hour) 制限酵素 反応液 0.25 0.25 Aat II T+BSA -*1 -*1 Acc I M 使用 酵素量 (U) 5 10 0.25 0.25 BamH I K 10 λ >20*1 >20*1 Ban II H 10 0.25 0.5 BmeT110 I K 10 λ 0.25 0.25 Cfr10 I 0.5 0.5 Dde I λ 2 2 Eam1105 I Basal λ 0.25 0.25 EcoO109 I L 0.25 0.25 EcoR I H 10 λ 0.25 0.25 Hinc II M 10 0.25 0.25 Hind III M 10 λ 1 1 Kpn I L 10 3*1 3 Nde I H 10 λ λ λ λ λ λ Basal K 5 10 5 10 0.5 0.5 Nsb I T+BSA λ 0.25 0.25 Pst I H 2*1 2*1 Sac I L 10 λ 0.5 0.5 Sal I H 10 0.5 0.5 Sca I H 10 λ 0.5 >2*1 Sma I T+BSA 10 λ 0.25 0.25 Sph I H 10 0.25 0.25 Sse8387 I M+BSA 10 λ 0.25 0.25 Ssp I Basal 10 0.25 0.25 Xba I M+BSA 10 λ 5 20*1 λ 0.25 >2*1 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 1 2*1 λ λ λ λ λ λ :通常のpBR322 DNA中のAcc III認識配列は、dam methylaseによりメ チル化を受けており (TCCGG6mA) 、 ほとんど切断できない。 :通常のpBR322 DNA中のBal I認識配列は、dcm methylaseによりメ チル化を受けており (TGGC5mCA) 、 ほとんど切断できない。 :Triton X-100 (final 0.01%) を添加すると、2時間で完全分解できる。 :Triton X-100 (final 0.01%) を添加すると、両濃度とも1時間で完全分 解できる。 :高DNA濃度の方が、切断性がよい。2時間反応後でも、 ごく微量のccDNAが残存している。 :高DNA濃度の方が、切断性がよい。 また、Triton X-100 (final 0.01%) を添加すると、5時間で完全分解できる。 :高DNA濃度の方が、切断性がよい。2時間反応後でも、 ごく微量のccDNAが残存している。 :高DNA濃度の方が、切断性がよい。 5 10 活性 測定用 DNA λ 1μg DNA /10μl (hour) 1μg DNA /50μl (hour) 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 0.25 1 λ 1*2 >2*2 0.25 0.25 λ 0.5 >2*2 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 λ 2*2 2*2 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 0.5 0.25 λ >5*2 >5*2 λ 0.25 0.25 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 3 3 λ 20 >20*2 0.25 >2*2 λ λ λ λ λ λ λ λ λ 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 0.5 0.5 λ 0.5 0.5 2*2 1 λ λ*3 制限酵素について 制限酵素は用いる基質DNAによって、 その相対活性が異なる。 タカラバイオで販売している制限酵素の中で、pBR322、pUC19 を1ヵ所切断する酵素につい て、同DNA (反応液量 10μl、50μl) の完全分解に必要な反応時間を求めた。 また、Triton X-100 (終濃度 0.01%) の添加によって切断性が上昇する酵素に ついては、脚注に記載した。 *2 Ban II :高DNA濃度の方が、切断性がよい。2時間反応後でも、 ごく微量のccDNAが残存している。 また、Triton X-100 (final 0.01%) を添加すると、 両濃度共0.25時間で完全分解できる。 Cfr10 I :高DNA濃度の方が、切断性がよい。2時間反応後でも、 ごく微量のccDNAが残存している。 EcoO109 I :Triton X-100 (final 0.01%) を添加すると、両濃度共1時間で完全分解 できる。 Kpn I :Triton X-100 (final 0.01%) を添加すると、両濃度共1時間で完全分解 できる。 Sal I :高DNA濃度の方が、切断性がよい。20時間反応後でも、 ごく微量のccDNAが残存している。Triton X-100 (final 0.01%) を添加すると、20時 間で完全分解できる。 Sca I :高DNA濃度の方が、切断性がよい。2時間反応後でも、 ごく微量のccDNAが残存している。 Xba I :低DNA濃度の方が、切断性がよい。 また、Triton X-100 (final 0.01%) を添加すると、 1時間で完全分解できる。 *3 N6-methyladenine free λDNA ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 19 制限酵素について pKF3 Cloning Test ■制限酵素 Quality Control pKF3 Cloning TestはEnforcement Cloning Vector pKF3 DNAのマルチクローニングサイトに1ヵ所切断部位を持つ制限酵素についてテストしている。 このDNAのマルチクローニングサイトはその全塩基配列がrpsL遺伝子をコードしており、rpsL遺伝子が発現すると、宿主をストレプトマイシン (Sm) 耐性からSm感 受性に強制する。制限酵素にエキソヌクレアーゼ等の微量のヌクレアーゼが混在すると、rpsL遺伝子に欠失が生じて、宿主はSm耐性のままとなる。 この性質を 利用することにより、制限酵素中に混在する微量のヌクレアーゼを検出することができる。 図1 pKF3 Cloning Testの原理図 ■pKF3完全分解に必要な反応時間 タカラバイオで販売している制限酵素の中でpKF3を1カ所切断する酵素について、同DNA (反応液量 10μl、50μl) の完全分解に必要な反応時間を求めた。 また、Triton X-100 (終濃度 0.01%) の添加によって切断性が上昇する酵素については、脚注に記載した。 制限酵素 Acc III Basal 使用 酵素量 (U) 5 Aor13H I K+BSA Aor 51H I M 10 ApaL I L 10 Bal I BamH I Basal 10 5 K 10 Ban II H 10 Bgl II H 10 BspT104 I L 10 BstP I H 10 Bst1107 I K 5 Cla I M 10 EcoO65 I EcoR I EcoT14 I Eco52 I 20 反応液 H+BSA 10 H 10 H 10 Basal 5 Fba I K 10 Fok I M+BSA 10 Hind III M 10 Hpa I K 10 Kpn I L 10 Mlu I H 10 Nco I K+BSA 10 Nde I H 10 Nhe I M 10 活性 測定用 DNA λ 1μg DNA /10μl (hour) 1μg DNA /50μl (hour) 制限酵素 反応液 使用 酵素量 (U) 活性 測定用 DNA 1μg DNA /10μl (hour) 1μg DNA /50μl (hour) 1 0.5 Not I H+BSA+Tri 10 Ad2 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 Nsb I T+BSA 10 λ 0.25 0.25 0.25 0.25 PshB I Basal 10 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 Pst I H 10 λ 0.25 0.25 0.25 0.5 Pvu I K+BSA 10 1 1 λ 0.25 0.25 Pvu II M 10 λ 0.25 0.25 0.25 0.25 Sac I L 10 λ 0.5 0.5 λ 0.25 0.25 Sac II T+BSA 10 Ad2 20*2 20*2 0.25 0.25 Sal I H 10 λ 0.25 0.25 Sca I H 10 0.5 0.5 Sma I T+BSA 10 λ >20*1 >20*1 Sph I H 10 0.25 0.25 Sse8387 I λ 0.25 0.25 Ssp I 0.25 0.25 Stu I λ 2 3 VpaK11B I >20*1 >20*1 λ 0.5 0.5 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 λ 0.5 0.5 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 0.5 1 λ 0.25 0.25 λ λ λ λ λ λ λ λ*3 λ λ λ 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ M+BSA 10 Basal 10 M 10 Basal 10 Xba I M+BSA 10 Xho I H 10 *1 Cla I Fba I *2 Sac II Sca I λ λ λ 0.5 1 λ 0.25 >2*2 0.5 0.5 λ 0.25 0.5 0.25 0.25 λ 0.25 0.25 0.25 0.5 λ 0.25 0.25 0.25 0.25 λ 0.5 0.5 λ λ λ λ*3 :通常のpKF3 DNA中のCla I認識配列は、dam methylaseによりメチル 化を受けており (6mATCGAT) 、 ほとんど切断できない。 :通常のpKF3 DNA中のFba I認識配列は、dam methylaseによりメチル 化を受けており (TG6mATCA) 、 ほとんど切断できない。 :pKF3 DNAのスーパーコイル状態に対する切断性が悪い。 :高DNA濃度の方が、切断性がよい。 また、Triton X-100 (final 0.01%) を添加すると、 0.25時間で完全分解できる。 *3 N6-methyladenine free λDNA http://www.takara-bio.co.jp 16時間反応での完全分解に必要な酵素量 長時間反応における活性量は制限酵素の種類によりさまざまである。 そこで、 それぞれの酵素について、活性測定用DNA 1μgを完全分解するのに必要な酵素 量を検討した。 この表はタカラバイオ活性測定条件で0.13、0.25、0.50、1.00 Uの酵素を16時間反応させ、完全分解に至った最小酵素量を示している。 完全分解必要酵素量 (U) 制限酵素 完全分解必要酵素量 (U) 制限酵素 完全分解必要酵素量 (U) 0.50 Dde I 0.13 Nhe I 0.13 Acc I 0.25 Dra I 0.13 Not I 0.13 Acc II 0.13 EaeI 1.00 Nru I 0.13 Acc III 0.13 Eam1105 I 0.13 Nsb I 0.25 Afa I 0.25 EcoO65 I 0.25 PmaC I 0.50 Afl II 0.13 EcoO109 I 0.13 PshA I 1.00 Alu I 0.13 EcoR I 0.50 PshB I 0.25 Aor13H I 0.13 EcoR V 0.13 Psp1406 I 0.25 Aor 51H I 0.13 EcoT14 I 0.50 Pst I 0.50 Apa I 0.25 EcoT22 I 0.50 Pvu I 0.13 ApaL I 0.13 Eco52 I 0.25 Pvu II 0.13 Bal I 1.00 Eco81 I 0.25 RspRS II 0.13 BamH I 0.50 Fba I 0.13 Sac I 0.50 Ban II 0.50 Fok I 0.50 Sac II 0.13 Bci T130 I 0.25 Hae II 0.50 Sal I 0.13 Bcn I 0.50 Hae III 0.13 Sau3A I 0.25 Bgl I 0.25 Hap II 0.13 Sca I 1.00 Bgl II 0.50 Hha I 0.13 Sfi I 0.13 Bln I 0.25 Hinc II 0.50 Sma I 0.25 BmeT110 I 0.50 Hind III 0.50 Smi I 0.13 BmgT120 I 0.50 Hinf I 0.25 SnaB I 0.50 Bpu1102 I 0.13 Hin1 I 0.13 Spe I 0.13 BspT104 I 0.50 Hpa I 0.25 Sph I 0.50 BspT107 I 0.13 Kpn I 0.50 Sse8387 I 0.50 Bsp1286 I 0.25 Mbo I 0.13 Ssp I 0.50 Bsp1407 I 0.13 Mbo II 0.50 Stu I 0.50 BssH II 0.13 Mfl I 0.13 Taq I 0.13 BstP I 0.13 Mlu I 0.25 Tth111 I 0.25 BstX I 0.25 Msp I 0.50 Van91 I 0.50 Bst1107 I 0.50 Mun I 0.13 VpaK11B I 0.25 Cfr10 I 0.13 Nae I 0.50 Xba I 0.25 Cla I 0.25 Nco I 0.13 Xho I 0.13 Cpo I 0.50 Nde I 0.50 Xsp I 0.50 制限酵素について 制限酵素 Aat II ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 21 長時間制限酵素を反応させたときの残存活性 制限酵素について 標準的な制限酵素の反応時間は1時間であるが、長時間のインキュベーションを行うことがしばしばある。 この表は、2、5、16時間後の残存活性 (完全に残存: +、一部残存:±、残存活性なし:-、未試験:NT) を示している。 22 2時間 5時間 16時間 2時間 5時間 16時間 Aat II 制限酵素 + + + Hinc II 制限酵素 + - - Acc I + + + Hind III + + + Acc II + + + Hinf I NT + + Acc III + + ± Hin1 I NT NT + Afa I ± ± ± Hpa I + + + Afl II NT + + Kpn I + + + Alu I NT NT + Mbo I + + + Aor13H I + + + Mbo II ± ± ± Aor 51H I + + + Mfl I + ± ± Apa I + + + Mlu I NT + + ApaL I NT NT + Msp I + + ± Bal I ± - - Mun I NT + + BamH I + + - Nae I + + ± Ban II NT + + Nco I NT + + Bci T130 I + + ± Nde I ± ± ± Bcn I + + - Nhe I + + + Bgl I NT + - Not I NT + + Bgl II NT + + Nru I NT + + Bln I + + ± Nsb I + + + BmeT110 I + + ± PmaC I + ± - BmgT120 I + ± ± PshA I - - - Bpu1102 I + + + PshB I + + - BspT104 I + + + Psp1406 I + + + BspT107 I + + + Pst I NT + + Bsp1286 I + + + Pvu I NT + + Bsp1407 I + + + Pvu II + + + BssH II + + + RspRS II + + + BstP I + + + Sac I + + + BstX I + + + Sac II + + + Bst1107 I + + ± Sal I NT + + Cfr10 I + ± ± Sau3A I ± ± ± Cla I + + + Sca I - - - Cpo I ± - - Sfi I + + + Dde I + + + Sma I + + + Dra I + - - Smi I + + + Eae I + + + SnaB I + + - Eam1105 I + + + Spe I NT + + EcoO65 I + + ± Sph I - - NT EcoO109 I + + ± Sse8387 I + + + EcoR I + + + Ssp I NT + ± EcoR V NT + + Stu I + ± ± EcoT14 I + ± - Taq I + + + EcoT22 I + ± - Tth111 I + + + Eco52 I ± ± - Van91 I + + - Eco81 I + + + VpaK11B I + + + Fba I + + ± Xba I NT + + Fok I + + + Xho I NT + + Hae II + + + Xsp I + + ± Hae III + + + Hap II + + + Hha I + + + 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ +:完全に残存 ±:一部残存 -:残存活性なし NT:未試験 http://www.takara-bio.co.jp 各種失活処理後の残存活性 1. 60℃、15 min加熱処理 2. 70℃、15 min加熱処理 3. エタノール沈殿処理 4. フェノール処理-エタノール沈殿処理 60℃ 15 min 70℃ 15 min エタノール 沈殿 フェノール 処理 60℃ 15 min 70℃ 15 min エタノール 沈殿 フェノール 処理 Aat II + - - NT Acc I + - - NT Hha I + - - NT Hinc II + - - Acc II + + - NT NT Hind III + - - Acc III NT - NT - NT Hinf I + - - Afa I + NT - + - Hin1 I - NT + Afl II - - NT - NT Hpa I - NT - NT Alu I - NT + - Kpn I - NT - NT Aor13H I NT + + - Mbo I + - - NT Aor 51H I - NT - NT Mbo II + - - NT Apa I - NT - NT Mfl I + + + - ApaL I + - - NT Mlu I + + - NT Bal I - NT + - Msp I - NT + - BamH I - NT - NT Mun I + - + - Ban II - NT - NT Nae I - NT - NT 制限酵素 制限酵素 Bci T130 I + + - - Nco I + - + - Bcn I + + - NT Nde I + - - NT Bgl I - NT + - Nhe I + - - NT Bgl II + - + - Not I + + + - Bln I + + - NT Nru I - NT + - BmeT110 I - NT - NT Nsb I + - + - BmgT120 I + + - NT PmaC I - NT - NT Bpu1102 I + + + - PshA I - NT - NT BspT104 I + + - - PshB I + - - NT BspT107 I - NT - NT Psp1406 I - NT + - Bsp1286 I - NT - NT Pst I - NT - NT Bsp1407 I + - + - Pvu I - NT - NT BssH II + - - NT Pvu II + + + - BstP I NT + - NT RspRS II NT + + - BstX I - NT - NT Sac I - NT - NT Bst1107 I + + + - Sac II + - + - Cfr10 I + + + - Sal I - NT - NT Cla I - NT - NT Sau3A I + - - NT Cpo I - NT - NT Sca I - NT - NT Dde I + - - - Sfi I + - + - Dra I - NT - NT Sma I - NT + - Dpn I + - + - Smi I + + + - Eae I - NT - NT SnaB I - NT - NT Eam1105 I - NT + - Spe I - NT - NT EcoO65 I + - + - Sph I - NT - NT EcoO109 I - NT - NT Sse8387 I - NT - NT EcoR I - NT - NT Ssp I - NT - NT EcoR V + - + - Stu I - NT + - EcoT14 I - NT - NT Taq I NT + + - EcoT22 I - NT - NT Tth111 I NT + - NT Eco52 I - NT + - Van91 I - NT + - Eco81 I + - - NT VpaK11B I - NT - NT Fba I + + - NT Xba I - NT + - Fok I - NT + - Xho I + + - NT Hae II - NT - NT Xsp I + + + - Hae III + - - NT Hap II + - + - 制限酵素について 切断反応後の制限酵素を失活させるには、一般的に加熱処理が行われている。 しかし、酵素によってその耐熱性が異なり、DNAの変性を考慮すると、制限酵素 を完全失活させるには加熱処理だけでは不充分な場合もある。 そこで、 それぞれの酵素について4通りの失活処理を行ってその残存活性を測定し、制限酵素完 全失活条件を検討した。 +:残存活性あり -:残存活性なし NT:未試験 ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 23 制限酵素について エピジェネティクス解析実験フロー タカラバイオではDNAメチル化解析用試薬をはじめ、 エピジェネティクス研究をサポートするさまざまな製品や受託サービスを提供している。胚発生、遺伝子発現、 クロマチン機能、 ゲノムインプリンティング、癌研究など、 さまざまな場面でのエピジェネティクス解析に利用することができる。 次ページにはDNAメチル化解析に利用可能なCpGメチル化感受性制限酵素をリストアップして紹介している。 特定領域の詳細な解析 バイサルファイト処理 ▶ 制限酵素処理 MethylEasy™ Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit ▶ MSP解析 ▶ EpiScope® MSP Kit メチル化感受性 制限酵素 McrBC など ゲノムワイドな網羅的解析 メチル化DNA 濃縮 ▶ ▶ SYBR® Premix Ex Taq ™ GC (Perfect Real Time) ▶ EpiScope® Promoter qPCR Array ( Human) ▶ ▶ ChIP qPCR Primer ▶ Magnetic Stand ▶ コントロールDNA EpiScope® Methylated/ EpiScope ® Nucleosome Preparation Kit HumanMethylation450 BeadChip など Unmethylated HCT116 gDNA TaKaRa EpiTaq™ HS ( for bisulfite-treated DNA ) 制限酵素処理 クローニング 制限酵素 ・ 電気泳動解析 ▶ COBRA法 ▶ ChIP-Seq ▶ メチル化解析 など マイクロアレイ解析 CpG Island Microarray など ▶ 各種試薬 シーケンス解析 バイサルファイトシーケンス ゲノムDNA精製 各工程でご使用いただける製品を示しています。 解析受託サービスをご利用いただけます。 詳細は下記 までお気軽にお問い合わせください。 https://www.takara-bio.co.jp/support/jutaku/ TEL:077-565-6999 NucleoSpin® Tissue NucleoSpin® Blood ▶ NucleoSpin® DNA FFPE XS ▶ NucleoSpin® Plasma XS ▶ ▶ 24 ▶ ビーズアレイ解析 高速シーケンス解析 ▶ ヌクレオソーム 調製 ▶ EpiScope ® ChIP Kit EpiXplore™ Methylated DNA (anti-mouse IgG) Enrichment Kit ▶ Anti-Histone antibody リアルタイムPCR ▶ PCR増幅 クロマチン 免疫沈降 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp DNAメチル化解析に利用可能なCpGメチル化感受性制限酵素 ■ CpG methylase(5mCG)によるメチル化の影響を受ける制限酵素 ■ 配列条件によりCpG methylase(5mCG)によるメチル化の影響を受け る制限酵素 大腸菌由来のmethylaseの影響も併記した。 ◆ dam methylase(G6mATC)によるメチル化の影響を受ける制限酵素 ◆ dcm methylase(C5mCWGG)によるメチル化の影響を受ける制限酵素 CpG methylaseの影響を受ける制限酵素 制限酵素名 認識配列 Bss H II G/CGCGC Cfr 10 I R/CCGGY 切断されない配列*2 GA5mCGTC (G) GACGT5mC GT5mCGAC (G) GTMKA5mC 5m CG5mCG 5m CGCG GTA5mC (G) TC5mCGGA AG5mCGCT GGGCC5mC (G) GTGCA5mC (G) GCCN5GG5mC (G) GGNC5mC (G) TT5mCGAA G5mCG5mCGC G5mCGCGC RC5mCGGY Cla I AT/CGAT AT CGAT ■ Cpo I Eae I CG/GWCCG Y/GGCCR CGGWC5mCG YGGC5mCG 5m CGGC5mCG 5m CGGCCG CGGC5mCG RG5mCGCY C5mCGG G5mCGC (G) GCG5mC A5mCG5mCGT GC5mCGGC (G) GCCGG5mC G5mCGGC5mCGC T5mCG5mCGA T5mCGCGA TG5mCGCA CA5mCGTG AA5mCGTT 5m CGAT5mCG C5mCG5mCGG C5mCGCGG GT5mCGAC GAT5mC (G) CC5mCGGG TA5mCGTA GGWC5mC (G) ■ ■ Aat II GACGT/C Acc I GT/MKAC Acc II CG/CG Afa I Aor 13H I Aor 51H I Apa I ApaL I Bgl I Bmg T120 I Bsp T104 I GT/AC T/CCGGA AGC/GCT GGGCC/C G/TGCAC GCCN4/NGGC G/GNCC TT/CGAA Eco 52 I C/GGCCG Hae II Hap II*1 RGCGC/Y C/CGG 5m Hha I GCG/C Mlu I A/CGCGT Nae I GCC/GGC Not I GC/GGCCGC Nru I TCG/CGA Nsb I Pma C I Psp 1406 I Pvu I TGC/GCA CAC/GTG AA/CGTT CGAT/CG Sac II CCGC/GG Sal I Sau 3A I Sma I Sna B I Vpa K11B I G/TCGAC GATC CCC/GGG TAC/GTA G/GWCC 5m CpG dam dcm 切断されない配列*2 ◆ GGGCC5mC (WGG) ◆ ◆ GGNC5mC (WGG) GGNC5mC (WGG) 制限酵素について 制限酵素の中には、 そのDNA認識配列中の塩基がメチル化を受けると、 メチル化された塩基の種類および位置によってDNAを切断できなくなるものがある。 こういったメチル化感受性制限酵素と、PCRあるいはリアルタイムPCRなどの遺伝子工学的手法を組み合わせることで、 エピジェネティクス解析の一つである哺 乳類ゲノムのDNAメチル化解析を比較的容易に行うことができる。 下記表には、哺乳類ゲノムのDNAメチル化解析に利用可能なCpGメチル化感受性制限酵素、 すなわち、CpG methylase( 5mCG)によるメチル化の影響を受 けDNA切断ができなくなる制限酵素を記載した。 ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ 6m ATCGAT (G) (C) ATCG6mAT ◆ ◆ YGGC5mCA (GG) ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ (TC) TCGCG6mA ◆ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ◆ GGWC5mC (WGG) *1 Hap IIのisoschizomerであるMsp I はCpG methylaseの影響を受けない ( )内の配列は制限酵素認識配列以外の配列を示す *2 M :A or C N :A or C or G or T R :A or G Y :C or T W:A or T S :C or G H :A or C or T D :A or G or T K :G or T ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 25 制限酵素 Aat II 製 品 名 Aat II Aat II メーカー TKR TKR 製品コード 1112A 1112B(A×5) 容 量 100 U 500 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer T + BSA ■反応温度 37℃ Acc I 製 品 名 Acc I Acc I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer M 製品コード 1001A 1001B(A×5) 容 量 100 U 500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■メチル化の影響 認識部位またはそれに続く塩基配列によっては、CG methylaseの影響を受 けることがある。 ■反応温度 37℃ Acc II(Fnu D II) 製 品 名 Acc ( II Fnu D II) Acc ( II Fnu D II) メーカー TKR TKR 製品コード 1002A 1002B(A×5) 容 量 100 U 500 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 価 格 ¥9,500 ¥37,000 Acc III(Bsp M II) 製 品 名 Acc III (Bsp M II) Acc III (Bsp M II) メーカー TKR TKR ■濃度 2 U/μl ■添付・活性測定Buffer Acc III Buffer ■反応温度 60℃ 26 製品コード 1113A 1113B(A×5) 容 量 20 U 100 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■メチル化の影響 TC5mCGGAを切断できるが、 その切断速度は1/75に低下する。一方、認識 部位に続く塩基配列によっては、dam methylaseの影響を受けることがある。 ■pBR322の切断 × × 市販のpBR322中のAcc III認識配列TCCGGAのAはdam methylaseに よりメチル化を受けており、 ほとんど切断されない。 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp Afa I(Rsa I) メーカー TKR TKR 製品コード 1116A 1116B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer T + BSA ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、CG methylaseの影響を受けることが ある。 制限酵素 製 品 名 Afa ( I Rsa I) Afa ( I Rsa I) C T T A A G Afl II G A A T T C 製 品 名 Afl II Afl II メーカー TKR TKR 製品コード 1236A 1236B(A×5) 容 量 200 U 1,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■Ligation-Recutting Test 本酵素によって生じた突出末端は、一般的な4塩基突出末端よりもライゲー ション効率が低い。このため、平滑末端ライゲーションと同等の反応条件が 必要となる。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer M + BSA ■反応温度 37℃ Alu I 製 品 名 Alu I Alu I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1004A 1004B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 製品コード 1224A 1224B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer L Aor 13H ( I Bsp M II, Acc III) 製 品 名 Aor 13H ( I Bsp M II, Acc III) Aor 13H ( I Bsp M II, Acc III) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■反応温度 55℃ ■添付・活性測定Buffer K + BSA ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 Aor 51H I(Eco 47 III) 製 品 名 Aor 51H ( I Eco 47 III) Aor 51H ( I Eco 47 III) メーカー TKR TKR 製品コード 1118A 1118B(A×5) 容 量 400 U 2,000 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 27 制限酵素 Apa I 製 品 名 Apa I Apa I Apa (高濃度) I Apa (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 15 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1005A 1005B(A×5) 1005AH 1005BH(AH×5) 容 量 10,000 U 50,000 U 10,000 U 50,000 U 価 格 ¥9,500 ¥31,000 ¥9,500 ¥31,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer L ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、dcm methylase、CG methylaseの 影響を受けることがある。 Apa L I 製 品 名 Apa L I Apa L I メーカー TKR TKR 製品コード 1237A 1237B(A×5) 容 量 600 U 3,000 U 価 格 ¥9,500 ¥35,000 ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer L ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、CG methylaseの影響を受けることが ある。 Bal I 製 品 名 Bal I Bal I メーカー TKR TKR ■濃度 2 U/μl ■添付・活性測定Buffer Bal I Buffer+BSA ■反応温度 37℃ 製品コード 1009A 1009B(A×5) 容 量 20 U 100 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、dcm methylaseの影響を受けることが ある。 ■pBR322の切断 × × 市販のpBR322中のBal I 認識配列TGGCCAのCはdcm methylaseによ りメチル化を受けており、切断されにくい。 Bam H I 製 品 名 Bam H I Bam H I Bam H (高濃度) I Bam H (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 15 U/μl [高濃度:50 U/μl] 容 量 10,000 U 50,000 U 10,000 U 50,000 U 価 格 ¥6,500 ¥25,000 ¥6,500 ¥25,000 ■反応温度 30℃ ■添付・活性測定Buffer K 28 製品コード 1010A 1010B(A×5) 1010AH 1010BH(AH×5) 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ ■メチル化の影響 dam methylase、dcm methylaseおよびCG methylaseの影響を受けない。 http://www.takara-bio.co.jp Ban II(Hgi J II) メーカー TKR TKR 製品コード 1012A 1012B(A×5) 容 量 2,000 U 10,000 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer H ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 Bci T130 ( I Eco R II, Mva I) 製 品 名 Bci T130 ( I Eco R II, Mva I) Bci T130 ( I Eco R II, Mva I) C C A T G G G G T A C C メーカー TKR TKR 製品コード 1232A 1232B(A×5) 容 量 2,000 U 10,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 制限酵素 製 品 名 Ban ( II Hgi J II) Ban ( II Hgi J II) 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■Ligation-Recutting Test 本酵素で切断したDNA フラグメントは、 その末端塩基配列の影響でライゲー ション効率が低くなる。 ライゲーション反応には、DNA Ligation Kit Ver.2.1 を用いた長時間反応を推奨する。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer K ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 dcm methylaseの影響を受けない。 Bcn I(Cau II) 製 品 名 Bcn ( I Cau II) Bcn ( I Cau II) メーカー TKR TKR 製品コード 1019A 1019B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■Ligation-Recutting Test 本酵素で切断したDNAフラグメントはその末端塩基配列の影響でライゲー ション効率が低いことが知られている (Janulaitis私信) 。 環状化ライゲーションには、DNA Ligation Kit Ver.2.1 を用いたオーバーナ イト反応が必要である。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer Bcn I Buffer+BSA ■反応温度 37℃ Bgl I 製 品 名 Bgl I Bgl I メーカー TKR TKR 製品コード 1020A 1020B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、CG methylaseの影響を受けることが ある。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer Bgl I Buffer ■反応温度 37℃ ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 29 制限酵素 Bgl II 製 品 名 Bgl II Bgl II Bgl (高濃度) II Bgl (高濃度) II メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1021A 1021B(A×5) 1021AH 1021BH(AH×5) 容 量 2,000 U 10,000 U 2,000 U 10,000 U 価 格 ¥7,000 ¥27,000 ¥7,000 ¥27,000 ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 dam methylaseの影響を受けない。 ■添付・活性測定Buffer H Bln I(Avr II) C C T A G G G G A T C C 製 品 名 Bln ( I Avr II) Bln ( I Avr II) メーカー TKR TKR 製品コード 1022A 1022B(A×5) 容 量 400 U 2,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■Ligation-Recutting Test 本酵素によって生じた突出末端は、一般的な4塩基突出末端よりもライゲー ション効率が低い。このため、平滑末端ライゲーションと同等の反応条件が 必要となる。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer K ■反応温度 37℃ Bme T110 ( I Ava I) 製 品 名 Bme T110 ( I Ava I) Bme T110 ( I Ava I) メーカー TKR TKR 製品コード 1207A 1207B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer K ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 価 格 ¥8,500 ¥33,000 Bmg T120 ( I Cfr 13 I, Asu I) 製 品 名 Bmg T120 ( I Cfr 13 I, Asu I) Bmg T120 ( I Cfr 13 I, Asu I) 30 メーカー TKR TKR 製品コード 1231A 1231B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer H ■メチル化の影響 認識配列に続く塩基配列によっては、dcm methylase、CG methylaseの 影響を受けることがある。 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp Bpu 1102 I(Esp I) G C T N A G C C G A N T C G メーカー TKR TKR 製品コード 1023A 1023B(A×5) 容 量 150 U 750 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■Ligation-Recutting Test 本酵素によって生じた突出末端は、一般的な3塩基突出末端よりもライゲー ション効率が低い。このため、平滑末端ライゲーションと同等の反応条件が 必要となる。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer Bpu 1102 I Buffer+BSA ■反応温度 37℃ 制限酵素 製 品 名 Bpu 1102 ( I Esp I) Bpu 1102 ( I Esp I) Bsp 1286 I(Sdu I) 製 品 名 Bsp 1286 ( I Sdu I) Bsp 1286 ( I Sdu I) メーカー TKR TKR 製品コード 1024A 1024B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U ■濃度 10 U/μl ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 ■添付・活性測定Buffer L 本製品は理化学研究所の特許に基づき製造されたものです。 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ■反応温度 30℃ Bsp 1407 I 製 品 名 Bsp 1407 I Bsp 1407 I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1107A 1107B(A×5) 容 量 300 U 1,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 製品コード 1225A 1225B(A×5) 容 量 2,500 U 12,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer T + BSA Bsp T104 ( I Asu II, Nsp V) 製 品 名 Bsp T104 ( I Asu II, Nsp V) Bsp T104 ( I Asu II, Nsp V) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer L ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 Bsp T107 ( I Hgi C I) 製 品 名 Bsp T107 ( I Hgi C I) Bsp T107 ( I Hgi C I) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1223A 1223B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer K ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 31 制限酵素 Bss H II(Bse P I) 製 品 名 Bss H ( II Bse P I) Bss H ( II Bse P I) メーカー TKR TKR 製品コード 1119A 1119B(A×5) 容 量 300 U 1,500 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 50℃ ■添付・活性測定Buffer M ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 価 格 ¥9,500 ¥37,000 Bst 1107 I(Sna I) 製 品 名 Bst 1107 ( I Sna I) Bst 1107 ( I Sna I) メーカー TKR TKR 製品コード 1028A 1028B(A×5) 容 量 150 U 750 U 価 格 ¥10,500 ¥42,000 ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer K ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、CG methylaseの影響を受けることが ある。 Bst P I(Bst E II, Eco O65 I) 製 品 名 Bst P ( I Bst E II, Eco O65 I) Bst P ( I Bst E II, Eco O65 I) メーカー TKR TKR 製品コード 1025A 1025B(A×5) 容 量 2,000 U 10,000 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 60℃ ■添付・活性測定Buffer H ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 価 格 ¥9,500 ¥37,000 Bst X I 製 品 名 Bst X I Bst X I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1027A 1027B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 製品コード 1120A 1120B(A×5) 容 量 200 U 1,000 U 価 格 ¥10,500 ¥42,000 ■反応温度 45℃ ■添付・活性測定Buffer H Cfr 10 I 製 品 名 Cfr 10 I Cfr 10 I 32 メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer Cfr 10 I Buffer ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp A T C G A T T A G C T A Cla I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1034A 1034B(A×5) 1034AH 1034BH(AH×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ¥8,500 ¥33,000 ■反応温度 30℃ 制限酵素 製 品 名 Cla I Cla I Cla (高濃度) I Cla (高濃度) I ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 また、認識部位に続く塩基配列によっては、 dam methylaseの影響を受けることがある。 ■添付・活性測定Buffer M Cpo I(Rsr II) 製 品 名 Cpo ( I Rsr II) Cpo ( I Rsr II) メーカー TKR TKR 製品コード 1035A 1035B(A×5) 容 量 400 U 2,000 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 30℃ ■添付・活性測定Buffer K ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 価 格 ¥8,500 ¥33,000 C T N A G G A N T C Dde I 製 品 名 Dde I Dde I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1248A 1248B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥10,000 ¥40,000 製品コード 1235A 1235B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer K Dpn I 製 品 名 Dpn I Dpn I メーカー TKR TKR ■メチル化の影響 GmATC (Aがメチル化されている) は切断するが、GATC (Aがメチル化されて いない) は切断しない。 より調製したDNAは切断するが、PCR産物は 一般的な大腸菌 (dam+菌株) 切断しない。 dam methylaseの影響は受けない。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer T ■反応温度 37℃ ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 33 制限酵素 Dra I(Aha III) 製 品 名 Dra ( I Aha Dra ( I Aha Dra ( I Aha Dra ( I Aha III) III) III) (高濃度) III) (高濃度) ■濃度 15 U/μl [高濃度:50 U/μl] メーカー TKR TKR TKR TKR 製品コード 1037A 1037B(A×5) 1037AH 1037BH(AH×5) 容 量 4,000 U 20,000 U 4,000 U 20,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 容 量 200 U 1,000 U 価 格 ¥7,000 ¥27,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M Eae I(Cfr I) 製 品 名 Eae ( I Cfr I) Eae ( I Cfr I) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer M 製品コード 1123A 1123B(A×5) ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、dcm methylase、CG methylaseの 影響を受けることがある。 ■反応温度 37℃ Eam 1105 I 製 品 名 Eam 1105 I Eam 1105 I メーカー TKR TKR 製品コード 1124A 1124B(A×5) 容 量 100 U 500 U 価 格 ¥10,500 ¥42,000 ■添付・活性測定Buffer Eam 1105 I Buffer ■Ligation-Recutting Test 本酵素によって生じた突出末端は、 ライゲーション効率が低い。 このため、平 滑末端ライゲーションと同等の反応条件が必要となる。 ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 ■濃度 10 U/μl Eco 52 I(Xma III) 製 品 名 Eco 52 ( I Xma III) Eco 52 ( I Xma III) 34 メーカー TKR TKR 製品コード 1039A 1039B(A×5) 容 量 200 U 1,000 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer Eco 52 I Buffer+BSA ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp 価 格 ¥8,500 ¥33,000 Eco 81 I(Sau I) メーカー TKR TKR 製品コード 1131A 1131B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■Ligation-Recutting Test 本酵素で切断したDNAフラグメントは,その末端塩基配列の影響でライゲー ション効率が低いことが知られている (Janulaitis私信) 。環状化ライゲーショ ンにはDNA Ligation Kit Ver.1 または Ver.2.1 を用いたオーバーナイト反 応が必要である。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer M ■反応温度 37℃ 制限酵素 製 品 名 Eco 81 ( I Sau I) Eco 81 ( I Sau I) Eco O65 I(Bst E II, Bst P I) 製 品 名 Eco O65 ( I Bst E II, Bst P I) Eco O65 ( I Bst E II, Bst P I) メーカー TKR TKR 製品コード 1135A 1135B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer H + BSA ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 価 格 ¥8,500 ¥33,000 Eco O109 I(Dra II) 製 品 名 Eco O109 ( I Dra II) Eco O109 ( I Dra II) メーカー TKR TKR 製品コード 1043A 1043B(A×5) 容 量 2,000 U 10,000 U 価 格 ¥9,000 ¥35,000 ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、dcm methylaseの影響を受けることが ある。 ■濃度 15 U/μl ■添付・活性測定Buffer L ■反応温度 37℃ Eco R I 製 品 名 Eco R I Eco R I Eco R (高濃度) I Eco R (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 15 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1040A 1040B(A×5) 1040AH 1040BH(AH×5) 容 量 10,000 U 50,000 U 10,000 U 50,000 U 価 格 ¥6,500 ¥25,000 ¥6,500 ¥25,000 ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、CG methylaseの影響を受けることが ある。 ■添付・活性測定Buffer H ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 35 制限酵素 Eco R V G A T A T C C T A T A G 製 品 名 Eco R V Eco R V Eco R V (高濃度) Eco R V (高濃度) メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 15 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1042A 1042B(A×5) 1042AH 1042BH(AH×5) 容 量 3,000 U 15,000 U 3,000 U 15,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ¥8,500 ¥33,000 ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 ■添付・活性測定Buffer H Eco T14 I(Sty I) 製 品 名 Eco T14 ( I Sty I) Eco T14 ( I Sty I) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1038A 1038B(A×5) 容 量 3,000 U 15,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 製品コード 1125A 1125B(A×5) 容 量 2,000 U 10,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 製品コード 1045A 1045B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer H Eco T22 I(Ava III) 製 品 名 Eco T22 ( I Ava III) Eco T22 ( I Ava III) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer H Fba I(Bcl I) T G A T C A A C T A G T 製 品 名 Fba ( I Bcl I) Fba ( I Bcl I) メーカー TKR TKR ■濃度 12 U/μl ■添付・活性測定Buffer K ■メチル化の影響 dam methylaseの影響を受ける。 よって、一般的な大腸菌由来のDNAは切 断できない。 ■反応温度 37℃ Fok I 製 品 名 Fok I Fok I 36 メーカー TKR TKR 製品コード 1046A 1046B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M + BSA ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp 価 格 ¥9,500 ¥37,000 Hae II メーカー TKR TKR 製品コード 1052A 1052B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 価 格 ¥9,500 ¥37,000 制限酵素 製 品 名 Hae II Hae II G G C C Hae III C C G G 製 品 名 Hae III Hae III Hae III (高濃度) Hae III (高濃度) メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1051A 1051B(A×5) 1051AH 1051BH(AH×5) 容 量 4,000 U 20,000 U 4,000 U 20,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ¥8,500 ¥33,000 ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 ■添付・活性測定Buffer M Hap II (Hpa II, Msp I) 製 品 名 Hap ( II Hpa Hap ( II Hpa Hap ( II Hpa Hap ( II Hpa II, II, II, II, Msp Msp Msp Msp メーカー TKR TKR TKR TKR I) I) I) (高濃度) I) (高濃度) ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1053A 1053B(A×5) 1053AH 1053BH(AH×5) 容 量 2,000 U 10,000 U 2,000 U 10,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 ■添付・活性測定Buffer L Hha I 製 品 名 Hha I Hha I メーカー TKR TKR 製品コード 1056A 1056B(A×5) 容 量 2,000 U 10,000 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 37 制限酵素 Hin 1 ( I Acy I, Bbi II) 製 品 名 Hin 1 ( I Acy I, Bbi II) Hin 1 ( I Acy I, Bbi II) メーカー TKR TKR 製品コード 1057A 1057B(A×5) 容 量 300 U 1,500 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M + BSA ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 価 格 ¥9,500 ¥37,000 Hin c II(Hin d II) 製 品 名 Hin c ( II Hin d Hin c ( II Hin d Hin c ( II Hin d Hin c ( II Hin d メーカー TKR TKR TKR TKR II) II) II) (高濃度) II) (高濃度) ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 容 量 1,000 U 5,000 U 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ¥8,500 ¥33,000 ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 ■添付・活性測定Buffer M Hin d III A A G C T T T T C G A A 製 品 名 Hin d III Hin d III Hin d III (高濃度) Hin d III (高濃度) メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 15 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1060A 1060B(A×5) 1060AH 1060BH(AH×5) 容 量 10,000 U 50,000 U 10,000 U 50,000 U 価 格 ¥6,500 ¥25,000 ¥6,500 ¥25,000 容 量 6,000 U 30,000 U 6,000 U 30,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ■添付・活性測定Buffer M ■反応温度 37℃ G A N T C C T N A G Hin f I 製 品 名 Hin f I Hin f I Hin f (高濃度) I Hin f (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1238A 1238B(A×5) 1238AH 1238BH(AH×5) ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer H 38 製品コード 1059A 1059B(A×5) 1059AH 1059BH(AH×5) 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 http://www.takara-bio.co.jp G T T A A C Hpa I C A A T T G メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1064A 1064B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 容 量 5,000 U 25,000 U 5,000 U 25,000 U 価 格 ¥7,500 ¥29,000 ¥7,500 ¥29,000 制限酵素 製 品 名 Hpa I Hpa I ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer K G G T A C C Kpn I C C A T G G 製 品 名 Kpn I Kpn I Kpn (高濃度) I Kpn (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1068A 1068B(A×5) 1068AH 1068BH(AH×5) ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 ■添付・活性測定Buffer L Mbo ( I Sau 3A I) 製 品 名 Mbo ( I Sau 3A I) Mbo ( I Sau 3A I) メーカー TKR TKR 製品コード 1069A 1069B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ■メチル化の影響 CG methylaseの影響は受けないが、dam methylaseの影響を受ける。 よっ て、一般的な大腸菌由来のDNAは切断できない。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer K ■反応温度 37℃ Mbo II 製 品 名 Mbo II Mbo II メーカー TKR TKR 製品コード 1145A 1145B(A×5) 容 量 400 U 2,000 U 価 格 ¥9,000 ¥35,000 ■Ligation-Recutting Test 本酵素によって生じた突出末端は、 ライゲーション効率が低い。 このため、平 滑末端ライゲーションと同等の反応条件が必要となる。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer L ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、dam methylaseの影響を受けるが、 CG methylaseの影響は受けない。 ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 39 制限酵素 Mfl I(Xho II) 製 品 名 Mfl ( I Xho II) Mfl ( I Xho II) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer L 製品コード 1070A 1070B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■メチル化の影響 dam methylaseの影響を受ける。 よって、一般的な大腸菌由来のDNAは切 断できない。 ■反応温度 37℃ Mlu I 製 品 名 Mlu I Mlu I Mlu (高濃度) I Mlu (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1071A 1071B(A×5) 1071AH 1071BH(AH×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ¥8,500 ¥33,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer H ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 Msp I(Hap II, Hpa II) 製 品 名 Msp ( I Hap Msp ( I Hap Msp ( I Hap Msp ( I Hap II, II, II, II, Hpa Hpa Hpa Hpa II) II) II) (高濃度) II) (高濃度) ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] メーカー TKR TKR TKR TKR 製品コード 1150A 1150B(A×5) 1150AH 1150BH(AH×5) 容 量 3,000 U 15,000 U 3,000 U 15,000 U 価 格 ¥10,500 ¥42,000 ¥10,500 ¥42,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer T + BSA ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 Mun I(Mfe I) 製 品 名 Mun ( I Mfe I) Mun ( I Mfe I) メーカー TKR TKR ■濃度 5 U/μl 製品コード 1153A 1153B(A×5) ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M + BSA 40 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp 容 量 150 U 750 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 G C C G G C Nae I C G G C C G メーカー TKR TKR 製品コード 1155A 1155B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■濃度 10 U/μl ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 ■添付・活性測定Buffer L ■使用上の注意 pBR322を4ヵ所切断するが、 position No. 1283のカッティングサイトは切断 されにくい。 ■反応温度 37℃ 制限酵素 製 品 名 Nae I Nae I Nco I 製 品 名 Nco I Nco I Nco (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1160A 1160B(A×5) 1160BH 容 量 500 U 2,500 U 2,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ¥37,000 容 量 400 U 2,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■添付・活性測定Buffer K + BSA ■反応温度 37℃ Nde I 製 品 名 Nde I Nde I メーカー TKR TKR 製品コード 1161A 1161B(A×5) ■Ligation-Recutting Test 本酵素によって生じた突出末端は、一般的な2塩基突出末端よりもライゲー ション効率が低い。このため、平滑末端ライゲーションと同等の反応条件が 必要となる。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer H ■反応温度 37℃ Nhe I G C T A G C C G A T C G 製 品 名 Nhe I Nhe I メーカー TKR TKR 製品コード 1241A 1241B(A×5) 容 量 700 U 3,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、CG methylaseの影響を受けることが ある。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer M ■反応温度 37℃ ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 41 制限酵素 Not I 製 品 名 Not I Not I Not (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1166A 1166B(A×5) 1166BH 容 量 500 U 2,500 U 2,500 U 価 格 ¥9,000 ¥35,000 ¥35,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer H + BSA + Triton X-100 ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 Nru I 製 品 名 Nru I Nru I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer Nru I Buffer+BSA 製品コード 1168A 1168B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 また、認識部位に続く塩基配列によっては、 dam methylaseの影響を受けることがある。 ■反応温度 37℃ Nsb ( I Avi II, Mst I) 製 品 名 Nsb ( I Avi II, Mst I) Nsb ( I Avi II, Mst I) メーカー TKR TKR 製品コード 1226A 1226B(A×5) 容 量 200 U 1,000 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer T + BSA ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 価 格 ¥9,500 ¥35,000 Pma C I 製 品 名 Pma C I Pma C I メーカー TKR TKR 製品コード 1177A 1177B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer L ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 価 格 ¥9,500 ¥37,000 Psh A I 製 品 名 Psh A I Psh A I 42 メーカー TKR TKR 製品コード 1074A 1074B(A×5) 容 量 200 U 1,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer K ■メチル化の影響 認識部位の塩基配列によっては、CG methylaseの影響を受けることがある。 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp Psh B I(Vsp I) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1109A 1109B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 製品コード 1108A 1108B(A×5) 容 量 200 U 1,000 U 価 格 ¥10,500 ¥42,000 制限酵素 製 品 名 Psh B ( I Vsp I) Psh B ( I Vsp I) ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer Psh B I Buffer Psp 1406 ( I Acl I) 製 品 名 Psp 1406 ( I Acl I) Psp 1406 ( I Acl I) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer T + BSA ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 Pst I 製 品 名 Pst I Pst I Pst (高濃度) I Pst (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 15 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1073A 1073B(A×5) 1073AH 1073BH(AH×5) 容 量 10,000 U 50,000 U 10,000 U 50,000 U 価 格 ¥6,500 ¥25,000 ¥6,500 ¥25,000 容 量 400 U 2,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■添付・活性測定Buffer H ■反応温度 37℃ Pvu I 製 品 名 Pvu I Pvu I メーカー TKR TKR 製品コード 1242A 1242B(A×5) ■Ligation-Recutting Test 本酵素によって生じた突出末端は、一般的な2塩基突出末端よりもライゲー ション効率が低い。このため、平滑末端ライゲーションと同等の反応条件が 必要となる。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer K + BSA ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けるが、dam methylaseの影響は受けない。 ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 43 制限酵素 Pvu II 製 品 名 Pvu II Pvu II Pvu (高濃度) II Pvu (高濃度) II メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 15 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1243A 1243B(A×5) 1243AH 1243BH(AH×5) 容 量 4,000 U 20,000 U 4,000 U 20,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥10,000 ¥40,000 容 量 2,000 U 10,000 U 2,000 U 10,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ■添付・活性測定Buffer M ■反応温度 37℃ Rsp RS II (Mse I) 製 品 名 Rsp RS ( II Mse I) Rsp RS ( II Mse I) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1247A 1247B(A×5) ■添付・活性測定Buffer T + BSA ■反応温度 60℃ G A G C T C Sac I C T C G A G 製 品 名 Sac I Sac I Sac (高濃度) I Sac (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1078A 1078B(A×5) 1078AH 1078BH(AH×5) ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer L ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 Sac II 製 品 名 Sac II Sac II メーカー TKR TKR 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■濃度 15 U/μl ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 ■添付・活性測定Buffer T + BSA ■使用上の注意 λ-DNAを4ヵ所切断するが、position No. 40386のカッティングサイトは切 断されにくい。 ■反応温度 37℃ 44 製品コード 1079A 1079B(A×5) 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp G T C G A C Sal I C A G C T G メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 15 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1080A 1080B(A×5) 1080AH 1080BH(AH×5) 容 量 3,000 U 15,000 U 3,000 U 15,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ■反応温度 37℃ 制限酵素 製 品 名 Sal I Sal I Sal (高濃度) I Sal (高濃度) I ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 ■添付・活性測定Buffer H Sau 3A ( I Mbo I) 製 品 名 Sau 3A ( I Mbo I) Sau 3A ( I Mbo I) Sau 3A ( I Mbo I) (高濃度) メーカー TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1082A 1082B(A×5) 1082BH 容 量 200 U 1,000 U 1,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ¥33,000 ■反応温度 37℃ ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、CG methylaseの影響を受けることが あるが、dam methylaseの影響は受けない。 ■添付・活性測定Buffer H Sca I 製 品 名 Sca I Sca I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1084A 1084B(A×5) 容 量 1,500 U 7,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 製品コード 1244A 1244B(A×5) 容 量 1,000 U 5,000 U 価 格 ¥8,000 ¥31,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer H Sfi I 製 品 名 Sfi I Sfi I メーカー TKR TKR ■メチル化の影響 認識部位またはそれに続く塩基配列によっては、 dcm methylaseの影響を受 けることがある。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer M ■反応温度 50℃ ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 45 制限酵素 Sma I 製 品 名 Sma I Sma I Sma (高濃度) I Sma (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1085A 1085B(A×5) 1085AH 1085BH(AH×5) 容 量 2,000 U 10,000 U 2,000 U 10,000 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 ¥8,500 ¥33,000 ■反応温度 30℃ ■添付・活性測定Buffer T + BSA ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 Smi ( I Swa I) 製 品 名 Smi ( I Swa I) Smi ( I Swa I) メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1111A 1111B 容 量 200 U 1,000 U 価 格 ¥21,000 ¥73,000 製品コード 1245A 1245B(A×5) 容 量 200 U 1,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■反応温度 30℃ ■添付・活性測定Buffer H Sna B I 製 品 名 Sna B I Sna B I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer Sna B I Buffer+BSA ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受ける。 Spe I 製 品 名 Spe I Spe I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl 製品コード 1086A 1086B(A×5) 容 量 300 U 1,500 U 価 格 ¥8,500 ¥33,000 製品コード 1246A 1246B(A×5) 容 量 600 U 3,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M Sph I 製 品 名 Sph I Sph I 46 メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer H ■メチル化の影響 CG methylaseの影響を受けない。 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp Sse 8387 I メーカー TKR TKR TKR 製品コード 1183A 1183B(A×5) 1183BH 容 量 400 U 2,000 U 2,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ¥37,000 製品コード 1185A 1185B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 製品コード 1088A 1088B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■ご注意 巻末の「ライセンスについて」 をご確認下さい。 ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] 製品コード 1183A 1183B 1183BH ■添付・活性測定Buffer M + BSA ■反応温度 37℃ ラベルライセンス M4 M4 M4 制限酵素 製 品 名 Sse 8387 I Sse 8387 I Sse 8387 (高濃度) I Ssp I 製 品 名 Ssp I Ssp I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer Ssp I Buffer Stu I 製 品 名 Stu I Stu I メーカー TKR TKR ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、dcm methylaseの影響を受けることが ある。 Taq ( I Tth HB8 I) 製 品 名 Taq ( I Tth HB8 I) Taq ( I Tth HB8 I) メーカー TKR TKR 製品コード 1189A 1189B(A×5) 容 量 2,000 U 10,000 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■濃度 10 U/μl ■反応温度 65℃ ■添付・活性測定Buffer Taq I Buffer+BSA ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、dam methylaseの影響を受けることが あるが、CG methylaseの影響は受けない。 ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 47 制限酵素 Tth 111 I 製 品 名 Tth 111 I Tth 111 I メーカー TKR TKR 製品コード 1090A 1090B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■添付・活性測定Buffer K ■Ligation-Recutting Test 本酵素によって生じた突出末端は、 ライゲーション効率が低い。 このため、平 滑末端ライゲーションと同等の反応条件が必要となる。 ■反応温度 65℃ 本製品は三菱化学株式会社で製造されたものです。 ■濃度 12 U/μl Van 91 I(Pfl M I) 製 品 名 Van 91 ( I Pfl M I) Van 91 ( I Pfl M I) メーカー TKR TKR 製品コード 1193A 1193B(A×5) 容 量 300 U 1,500 U 価 格 ¥10,500 ¥42,000 ■濃度 10 U/μl ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer K ■メチル化の影響 認識部位の塩基配列によっては、 dcm methylaseの影響を受けることがある。 Vpa K11B ( I Ava II) 製 品 名 Vpa K11B ( I Ava II) Vpa K11B ( I Ava II) メーカー TKR TKR 製品コード 1196A 1196B(A×5) 容 量 300 U 1,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■濃度 10 U/μl ■反応温度 30℃ ■添付・活性測定Buffer Vpa K11B I Buffer ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、dcm methylase, CG methylaseの 影響を受けることがある。 Xba I 製 品 名 Xba I Xba I Xba (高濃度) I Xba (高濃度) I メーカー TKR TKR TKR TKR ■濃度 15 U/μl [高濃度:50 U/μl] 容 量 3,000 U 15,000 U 3,000 U 15,000 U 価 格 ¥9,000 ¥35,000 ¥9,000 ¥35,000 ■反応温度 37℃ ■添付・活性測定Buffer M + BSA 48 製品コード 1093A 1093B(A×5) 1093AH 1093BH(AH×5) 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ ■メチル化の影響 認識部位に続く塩基配列によっては、dam methylaseの影響を受けることが ある。 http://www.takara-bio.co.jp Xho I メーカー TKR TKR TKR TKR 製品コード 1094A 1094B(A×5) 1094AH 1094BH(AH×5) 容 量 5,000 U 25,000 U 5,000 U 25,000 U 価 格 ¥7,500 ¥29,000 ¥7,500 ¥29,000 ■Ligation-Recutting Test 本酵素によって生じた突出末端は、一般的な4塩基突出末端よりもライゲー ション効率が低い。このため、平滑末端ライゲーションと同等の反応条件が 必要となる。 ■濃度 10 U/μl [高濃度:50 U/μl] ■添付・活性測定Buffer H ■反応温度 37℃ 制限酵素 製 品 名 Xho I Xho I Xho (高濃度) I Xho (高濃度) I ■メチル化の影響 。 CG methylaseの影響を受ける (CT5mCGAGを非常にゆっくり切断する) Xsp ( I Bfa I, Mae I) 製 品 名 Xsp ( I Bfa I, Mae I) Xsp ( I Bfa I, Mae I) メーカー TKR TKR 製品コード 1095A 1095B(A×5) 容 量 500 U 2,500 U 価 格 ¥9,500 ¥37,000 ■Ligation-Recutting Test 本酵素によって生じた突出末端はライゲーション効率が低い。 このため、平滑 末端ライゲーションと同等の反応条件が必要となる。 ■濃度 10 U/μl ■添付・活性測定Buffer K ■反応温度 37℃ ※記号がある場合は巻頭の「タカラバイオ制限酵素ハンドブックについて」の「カタログ中の記号」 をご確認ください。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 49 RNA制限酵素 RNA制限酵素 一本鎖RNAを配列特異的に切断するユニークな酵素 mRNA InterferaseTM -MazF 製 品 名 mRNA InterferaseTM -MazF メーカー TKR ■製品説明 MazFは大腸菌のトキシン-アンチトキシンモジュールのトキシンタンパク質で、 一本鎖RNA中のACA配列を認識し特異的に切断するエンド型リボヌクレ アーゼ活性を有している。本製品は大腸菌のシャペロンであるトリガーファク ターとの融合タンパク質として提供している。 ■添付 5×MazF Buffer組成 200 mM 0.05% リン酸ナトリウム緩衝液 (pH7.5) Tween 20 ■特長 1. 本酵素は、一本鎖RNA中のACA配列の5’ 側を特異的に切断するエンド 型リボヌクレアーゼである。 2. 本酵素は、 ニ本鎖RNA、 ニ本鎖DNAおよび一本鎖DNAを切断しない。 3. 本酵素を用いて一本鎖RNAを配列依存的に切断することができる。 製品コード 2415A 容 量 1,000 U 価 格 ¥55,000 ■使用上の注意 mRNA Interferase-MazFは、New Jersey医科歯科大学よりライセンスを 受け、 タカラバイオ (株) が製造、販売しています。本製品は研究目的にのみ使 用が許可されています。本製品または、本製品を利用して製造したものを商業 目的で使用する際は、別途、商業利用契約を締結します。 また、本製品、 その 構成部分またはその誘導体、 ならびにこれらで製造されたものを第三者に譲渡 (無料配布、販売) できません。 製品ご購入に際しては、 ライセンス同意書に必要事項を記入の上、 ご注文の 際に弊社販売店までお渡しください。本同意書が添付されていない場合は製 品の出荷ができませんのでご注意ください。 ライセンスに関するご質問は下記 へご連絡ください。 タカラバイオ (株) 営業部 営業企画担当 TEL: 077-565-6972 FAX: 077-565-6987 ■内容 ■用途 一本鎖RNAの限定分解 mRNA Interferase-MazF (20 U/μl) 5×MazF Buffer ■注意事項 1. 本酵素による切断末端は2',3'-cyclic phosphateおよび5'-OHとなる。 2. 本酵素は一本鎖RNA中のACA配列を優先的に切断するが、 周辺配列に よってはAC配列でも切断する場合があることが報告されている。 ■保存 -20℃ 1,000 U 1 ml ■ご注意 巻末の「ライセンスについて」 をご確認下さい。 製品コード ラベルライセンス 2415A L13b, L20 マークのある製品は巻末のライセンス確認事項を確認のうえ、 ご注文の際 にはライセンス同意書を提出してください。 50 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp Appendix Appendix 詳細情報は、 タカラバイオウェブカタログ (http://catalog.takara-bio.co.jp) でご覧ください。 Isoschizomer一覧表 Appendix ★は、タカラバイオで販売している酵素です。 制限酵素 認識配列* 制限酵素 Aar I CACCTGC (4/8) Alo I ★Aat II ★Alu I 制限酵素 (7/12)GAACNNNNNNTCC(12/7) AG↓CT 認識配列* 制限酵素 認識配列* Cfr33 I GGNCC Ssp152 I TT↓CGAA Cfr45 I Cfr46 I GGNCC GGNCC Uba1385 I Uba1452 I TTCGAA TTCGAA Ppu1253 I GACGTC AGCT AG↓CT GGNCC GACGT↓C BsaL I Mlt I Cfr47 I Ssp5230 I Cfr52 I GGNCC Zra I GAC↓GTC Otu I AGCT OtuN I AGCT Cfr54 I Eco39 I GGNCC GGNCC Acr I Ama87 I CYCGRG C↓YCGRG Oxa I Uba1433 I AGCT AGCT Eco47 II GGNCC Aqu I C↓YCGRG Eco196 II GGNCC AspB I CYCGRG Uba1441 I AGCT Eco201 I Fmu I GGNCC GGNC↓C AspC I AspD I CYCGRG CYCGRG CAGNNN↓CTG CAGNNN↓CTG Gse I GGNCC Avr I CYCGRG Hin5 II Mja II GGNCC GGNCC Bco I ★BmeT110 I C↓YCGRG C↓YCGRG GGGCC↓C G↓GGCCC Msp24 I GGNCC BsiHKC I C↓YCGRG MthB I GGNCC BsoB I C↓YCGRG EciE I GGGCCC PspOM I G↓GGCCC MthT I NlaD II GGNCC GGNCC BspLU4 I BstS I C↓YCGRG C↓YCGRG Psp30 I Uba1156 I GGGCCC GGGCCC NmuE II GGNCC Bst7Q I CYCGRG Uba1157 I GGGCCC NmuS I Nsp IV GGNCC G↓GNCC Eco27k I Eco88 I C↓YCGRG C↓YCGRG Uba1165 I Uba1202 I Uba1241 I GGGCCC GGGCCC GGGCCC NspL II GGNCC EspHK29 I CYCGRG Uba1368 I GGGCCC Nsp7121 I Pde12 I Pph1579 I GGNCC G↓GNCC GGNCC Nli I Nli3877 I NmuA I CYCGRG CYCGR↓G CYCGRG Pph1773 I GGNCC Nsp III C↓YCGRG GCANNNN↓NTGC Pse I Psp I PspP I GGNCC GGNCC G↓GNCC NspD I NspE I NspSA I G↓TGCAC GTGCAC SauB I Sau2 I Sau5 I Sau13 I Sau14 I GGNCC GGNCC GGNCC Uba1205 II Uba1436 I Uba1440 I CYCGRG CYCGRG C↓YCGRG CYCGRG CYCGRG CYCGRG GGNCC GGNCC Umi5 I CYCGRG ★Acc I GT↓MKAC Dsa VI GTMKAC Fbl I Xmi I GT↓MKAC GT↓MKAC Ace III CAGCTC(7/11) Aci I CCGC(-3/-1) AlwN I Cai I ★Apa I Bsp120 I Acl I ★Psp1406 I AA↓CGTT AA↓CGTT Acy I Aha II GR↓CGYC GR↓CGYC Aos II GR↓CGYC AstW I Asu III Bbi II GR↓CGYC GR↓CGYC GR↓CGYC BsaH I GR↓CGYC BstAC I Hgi I HgiD I GR↓CGYC GR↓CGYC GR↓CGYC ApaB I HgiG I HgiH II GR↓CGYC GR↓CGYC ★ApaL I Aaq I ★Hin1 I Hin8 I Hsp92 I Alw44 I Ame I Bsp146 I Pfl23 I G↓TGCAC GTGCAC Msp17 I NlaS II Pam II GR↓CGYC GRCGYC GR↓CGYC GR↓CGYC GRCGYC GR↓CGYC Pfr12 I Pli I GTGCAC GTGCAC SspJ II SspM1 II GRCGYC GRCGYC Sno I Uba1203 I G↓TGCAC GTGCAC SspM2 II Uba1381 I GRCGYC GRCGYC Uba1387 I Vne I GTGCAC G↓TGCAC ★Afl II Bfr I BsaF I BspT I Bst98 I Cfr92 I Esp4 I MspC I Uba1265 I Uba1266 I Uba1299 I Uba1312 I Uba1313 I Uba1331 I Uba1374 I Uba1420 I Uba1426 I Uba1443 I Vfi I Vha464 I 52 GACGT↓C 認識配列* C↓TTAAG C↓TTAAG CTTAAG C↓TTAAG C↓TTAAG CTTAAG C↓TTAAG C↓TTAAG CTTAAG CTTAAG CTTAAG CTTAAG CTTAAG CTTAAG CTTAAG CTTAAG CTTAAG CTTAAG CTTAAG C↓TTAAG Afl III A↓CRYGT Age I AsiA I AsiG I BshT I CspA I PinA I A↓CCGGT A↓CCGGT A↓CCGGT A↓CCGGT A↓CCGGT A↓CCGGT Aha III ★Dra I TTT↓AAA TTT↓AAA Alf I GCANNNNNN↓TGC BstAP I GCANNNNN↓TGC GTGCAC GTGCAC Apo I Acs I Fsi I Xap I R↓AATTY R↓AATTY R↓AATTY R↓AATTY Asc I PalA I Sgs I GG↓CGCGCC GG↓CGCGCC GG↓CGCGCC AspCN I GCCGC Asu I AhaB1 I Apu I AspS9 I Avc I Bac36 I Bal228 I BavA II BavB II Bce22 I ★BmgT120 I BsaS I BshK I BsiZ I BspB II BspF4 I Bsp1894 I Bsu54 I CfrN I Cfr4 I Cfr8 I Cfr13 I Cfr23 I G↓GNCC GGNCC GGNCC G↓GNCC G↓GNCC G↓GNCC G↓GNCC G↓GNCC G↓GNCC G↓GNCC G↓GNCC GGNCC G↓GNCC G↓GNCC G↓GNCC G↓GNCC G↓GNCC G↓GNCC GGNCC GGNCC GGNCC G↓GNCC GGNCC 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ Ava I C↓YCGRG Sau17 I Sau96 I GGNCC G↓GNCC Sdy I Uba1099 I Uba1134 I GGNCC GGNCC GGNCC AspB II AspC II AspD II GGWCC GGWCC GGWCC Uba1160 I GGNCC Uba1164 I Unb I VpaK15 I VpaK25 I GGNCC ↓GGNCC GGNCC GGNCC Asp697 I Asp745 I GGWCC G↓GWCC BamNx I Bme18 I Bme216 I BspF53 I BspJ105 I Bsp71 I Bsp100 I Bsp128 I Bsp132 I Bsp133 I Bsp1260 I BsrA I Bst4Q I BthA I Bti I Cau I Cli I Clm II Dsa IV EagM I Eco47 I Erp I Fdi I FspMS I GspA I HgiB I HgiC II HgiE I HgiH III HgiJ I Hsp2 I Kzo49 I Mfo I Mli I MspA I G↓GWCC G↓GWCC G↓GWCC GGWCC GGWCC GGWCC GGWCC GGWCC GGWCC GGWCC GGWCC G↓GWCC GGWCC G↓GWCC GGWCC G↓GWCC GGWCC GGWCC G↓GWCC G↓GWCC G↓GWCC G↓GWCC G↓GWCC G↓GWCC GGWCC G↓GWCC G↓GWCC G↓GWCC G↓GWCC G↓GWCC GGWCC G↓GWCC GGWCC GGWCC GGWCC Asu II Aca I Acp I Asp10H I Avi I Bim I Bim19 I Bpu14 I BsiC I ★BspT104 I Bsp82 I Bsp119 I Bsp148 I BstB I Cbi I Csp45 I Fsp II Lsp I Mla I Nsp V NspB I NspF I NspJ I Nsp29132 I Osp I Pla II Sfu I Sgr1839 I SspRF I Ssp1 I Ssp48 I TT↓CGAA TTCGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TTCGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TTCGAA TT↓CGAA TTCGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TTCGAA TTCGAA TTCGAA TTCGAA TTCGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TTCGAA TT↓CGAA TT↓CGAA TTCGAA Ava II Afl I http://www.takara-bio.co.jp G↓GWCC G↓GWCC ★は、 タカラバイオで販売している酵素です。 認識配列 * 認識配列 * 制限酵素 認識配列 * Nli II GGWCC Atu1 II GGATCC Nli3877 II NmuA II GGWCC GGWCC BamF I BamK I GGATCC GGATCC Bbv16 II GAAGAC (2/6) BsaB I GATNN↓NNATC Bco102 II Bpi I GAAGAC GAAGAC (2/6) Bco63 I BseJ I GATNNNNATC GATNN↓NNATC NspD II GGWCC BamN I NspG I GGWCC 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TGATCA T↓GATCA Uba1278 I Uba1304 I Gin I Gox I Gse III Mle I Bco102 I BsiQ I GCGCGC G↓CGCGC GGWCC GGWCC Mlu23 I NasB I G↓GATCC GGATCC TGATCA TGATCA TGATCA Kpn30 I Uba1314 I Uba1373 I Uba1413 I Uba1438 I GGWCC GGWCC NspSA IV G↓GATCC Nsp29132 II G↓GATCC BstG I BstK I Bst77 I Cpe I Cth I VpaK11 I VpaK11A I GGWCC ↓GGWCC ★VpaK11B I VpaK65 I G↓GWCC GGWCC Pac1110 I Par177 I Psp56 I GGATCC GGATCC GGATCC Rhs I Rlu4 I GGATCC GGATCC Ava III ATGCAT BfrB I BfrC I ★EcoT22 I ATG↓CAT ATGCAT ATGCA↓T Sur I Uba19 I G↓GATCC GGATCC Uba31 I Uba38 I Uba51 I GGATCC GGATCC GGATCC Uba88 I GGATCC Uba1098 I Uba1163 I Uba1167 I GGATCC GGATCC GGATCC Uba1172 I Uba1173 I Uba1205 I Uba1224 I Uba1242 I Uba1250 I Uba1258 I Uba1297 I Uba1302 I Uba1324 I Uba1325 I Uba1334 I Uba1339 I Uba1346 I Uba1383 I Uba1398 I Uba1402 I Uba1414 I GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC GGATCC Mph1103 I Nsi I PinB I ATGCA↓T ATGCA↓T ATGCA↓T Ppu10 I A↓TGCAT Sep I SmuC I Uba1353 I Uba1367 I Uba1384 I Zsp2 I ATGCA↓T ATGCAT ATGCAT ATGCAT ATGCAT ATGCA↓T Avr II AspA2 I AvrB II ★Bln I Bsp2A I XmaJ I Bae I 制限酵素 C↓CTAGG C↓CTAGG C↓CTAGG C↓CTAGG C↓CTAGG C↓CTAGG (10/15)ACNNNNGTAYC(12/7) ★Bal I Mls I MluN I Mlu31 I Msc I Msp20 I TGG↓CCA TGG↓CCA TGG↓CCA TGG↓CCA TGG↓CCA TGG↓CCA ★BamH I Aac I Aae I Aca II AccEB I Ain II Ali II Ali12257 I Ali12258 I ApaC I AspT II G↓GATCC GGATCC GGATCC GGATCC G↓GATCC GGATCC G↓GATCC GGATCC GGATCC G↓GATCC GGATCC 認識配列 * 制限酵素 (9/12)ACNNNNNCTCC(10/7) BbvC I CC↓TCAGC BsaX I G↓GATCC Bcc I CCATC Bsb I CAACAC GGATCC GGATCC Bcef I ACGGC (12/13) BscG I CCCGT BceA I Bce83 I BpuE I Bfu I Bcl I GAAGAC (2/6) GAAGAC (7/11) GAAGAC (2/6) タカラバイオ ウェブカタログ ▶ CCCGT BseM II BspCN I CTCAG (10/8) CTCAG (9/7) BseP I BscE I G↓CGCGC GCGCGC BsoP I GCGCGC GTATCC (6/5) BsrH I GCGCGC T↓GATCA TGATCA TGATCA ★BssH II CfrJ5 I Pau I Uba69 I G↓CGCGC GCGCGC GCGCGC BseR I GAGGAG (10/8) BseS I Bme1580 I BseS I GKGCM↓C GKGCM↓C GKGCM↓C BseY I C↓CCAGC TGATCA TGATCA Bsg 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Bsc4 I Bsc107 I BseL I Bse23 I Bsl I CTCGTG (-5/-1) CCNNNNN↓NNGG CCNNNNN↓NNGG CCNNNNN↓NNGG CCNNNNN↓NNGG CCNNNNNNNGG CCNNNNN↓NNGG Bsm I Asp26H I Asp27H I Asp35H I Asp36H I Asp40H I Asp50H I BsaM I BscC I Mva1269 I Pct I Uba1382 I Uba1415 I GAATGC (1/-1) GAATGC (1/-1) GAATGC (1/-1) GAATGC (1/-1) GAATGC (1/-1) GAATGC (1/-1) GAATGC (1/-1) GAATGC (1/-1) GAATGC (1/-1) GAATGC (1/-1) GAATGC (1/-1) GAATGC GAATGC BsmA I Alw26 I BsoMA I GTCTC (1/5) GTCTC (1/5) GTCTC (1/5) BspG I CTGGAC BspH I Pag I Rca I Rhc I RspX I T↓CATGA T↓CATGA T↓CATGA TCATGA T↓CATGA BspLU11 I Pci I A↓CATGT A↓CATGT http://catalog.takara-bio.co.jp Appendix 制限酵素 53 ★は、 タカラバイオで販売している酵素です。 制限酵素 Psc I Appendix BspM I 制限酵素 A↓CATGT ACCTGC(4/8) Acc36 I ACCTGC(4/8) BfuA I ACCTGC(4/8) BstT I BtgZ I Btr I BmgB I 認識配列 * 制限酵素 CCANNNNNNTGG CjeP I GCGATG (10/14) CACGTC (-3/-3) CstM I AAGGAG (20/18) CACGTC (-3/-3) Asp707 I ATCGAT Ban III AT↓CGAT CviJ I RG↓CY BavC I BbvA II ATCGAT AT↓CGAT CviK I RGCY CviL I RGCY GCN↓NGC BciB I AT↓CGAT GCN↓NGC Bci29 I AT↓CGAT CviM I CviN I RGCY RGCY Bcm I Bdi I AT↓CGAT AT↓CGAT CviO I RGCY CviT I RG↓CY BfrA I ATCGAT BliR I Bli41 I AT↓CGAT AT↓CGAT Bli86 I AT↓CGAT ★Aor13H I Bbf7411 I T↓CCGGA TCCGGA BbvA III T↓CCGGA Bla7920 I TCCGGA Blf I BseA I T↓CCGGA T↓CCGGA Cau II Aha I CC↓SGG CC↓SGG BsiM I T↓CCGGA Ase II CC↓SGG BspE I Bsp13 I T↓CCGGA T↓CCGGA Asp1 I AsuC2 I CCSGG CC↓SGG Bsu22 I TCCGGA Bsu23 I T↓CCGGA BspF105 I CauB3 I T↓CCGGA BspJ67 I CCSGG Cfr57 I EspHK26 I TCCGGA TCCGGA Bsp7 I Bsp8 I CCSGG CCSGG Kpn2 I Mro I T↓CCGGA T↓CCGGA Bsp55 I EciD I CCSGG CCSGG PinB II T↓CCGGA EcoH I Pta I T↓CCGGA Eco121 I Uba1136 I TCCGGA Eco179 I CCSGG Uba1279 I Uba1375 I TCCGGA TCCGGA TCCGGA Eco190 I HgiS21 I CCSGG CCSGG HgiS22 I Hin3 I CC↓SGG CCSGG CCAGA Kpn49k II Nci I Pae181 I Rsh II Ssp2 I ↓CCSGG CC↓SGG CCSGG BspNC I Bsp24 I (8/13)GACNNNNNNTGG(12/7) ★Bsp1407 I Aau I T↓GTACA T↓GTACA BsrG I BstAU I T↓GTACA T↓GTACA Bst170 I SspB I TGTACA T↓GTACA Bsr I ACTGG(1/-1) ★Bcn I BsiX I AT↓CGAT BspD I BspJ II 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Uba1416 I Uba1427 I Uba1430 I Uba1451 I Uba1453 I ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT ATCGAT Tsp1 I ACTGG(1/-1) Uba1423 I CCSGG Uba1424 I CCSGG ★BstX I BscJ I BssG I C↓TNAG AT↓CGAT AT↓CGAT AT↓CGAT CCSGG CCSGG CCSGG G↓GTNACC G↓GTNACC G↓GTNACC GGTNACC G↓GTNACC GGTNACC G↓GTNACC GGTNACC GGTNACC GGTNACC G↓GTNACC G↓GTNACC G↓GTNACC G↓GTNACC G↓GTNACC GGTNACC G↓GTNACC G↓GTNACC GGTNACC GGTNACC TG↓CA Bsc I BseC I Uba1378 I Uba1389 I Uba1401 I BstE II Acr II AspA I Bse59 I Bse64 I BstD I ★BstP I Bst31 I Cfr7 I Cfr19 I Eca I Eci125 I ★EcoO65 I EcoO128 I Eco91 I Kox I NspSA II PspE I SciA I Uba1291 I ★Dde I TG↓CA Bsa29 I ACTGG(1/-1) ACTGG(1/-1) GCAATG(2/0) GCAATG(2/0) GCAATG(2/0) HpyCH4 V CCSGG BsrS I Bst11 I BsrD I Bse3D I BseM I CviR I (11/13)CAANNNNNGTGG(12/10) CC↓SGG ACTGG ACTGG(1/-1) ACTGG(1/-1) 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Aca IV AspT III Asp742 I AvrB I Bal475 I Bal3006 I Bce71 I Bco33 I Bfi458 I Bim19 II Bli I http://catalog.takara-bio.co.jp Appendix ↓CCWGG Acc38 I EcoR II CTGGAG (16/14) CTGGAG CTGGAG (16/14) CTGGAG CTGGAG CTGGAG CTGGAG CTGGAG WGG↓CCW RGCGC↓Y RGCGC↓Y RGC↓GCY RGCGCY RGCGC↓Y RGCGC↓Y RGCGCY RGCGCY RGC↓GCY RGCGCY GG↓CC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GG↓CC GGCC 55 ★は、 タカラバイオで販売している酵素です。 Appendix 制限酵素 56 認識配列 * 制限酵素 認識配列 * 制限酵素 認識配列 * 制限酵素 認識配列 * Blu II GGCC Uba1230 I GGCC EcoT95 I GRGCYC Hin1076 III AAGCTT BsaR I Bse I GGCC GGCC Uba1231 I Uba1235 I GGCC GGCC Eco24 I Eco25 I GRGCY↓C GRGCYC Hsu I Mki I A↓AGCTT AAGCTT BseQ I GG↓CC Uba1288 I GGCC Eco26 I GRGCYC Ssb I A↓AGCTT Bsh I GG↓CC Uba1292 I GGCC Eco35 I GRGCYC Uba83 I AAGCTT BshA I BshB I GGCC GGCC Uba1293 I Uba1319 I GGCC GGCC Eco68 I Eco113 I GRGCYC GRGCYC Uba1164 II Uba1219 I AAGCTT AAGCTT BshC I GGCC Uba1322 I GGCC Eco180 I GRGCYC Uba1435 I AAGCTT BshD I BshE I GGCC GGCC Uba1336 I Uba1377 I GGCC GGCC Eco211 I Eco215 I 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Uba1363 I Hhg I MfoA I Mni I NgoA II Uba1409 I Uba1421 I NgoP II NgoS II GGCC GGCC Nla I Och I Pai I GGCC GGCC GGCC Pal I GG↓CC Pde133 I PflK I Pla I GG↓CC GG↓CC GG↓CC Ple214 I Ppu I Psp29 I Sbv I Sfa I Spl III Sua I Sul I TspZN I TteA I Ttn I Uba9 I Uba54 I Uba61 I Uba1097 I Uba1140 I Uba1146 I Uba1147 I Uba1150 I Uba1152 I Uba1153 I Uba1155 I Uba1169 I Uba1174 I Uba1175 I Uba1176 I Uba1178 I Uba1179 I Uba1207 I Uba1208 I Uba1209 I Uba1210 I Uba1214 I Uba1223 I Uba1228 I GGCC GGCC GGCC GG↓CC GG↓CC GGCC GG↓CC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC GGCC Hae IV Hga I HgiA I (7/13)GAYNNNNNRTC(14/9) GACGC (5/10) GWGCW↓C ★Hinf I Hin4 I Hin4 II HpyA V ★Hpa I G↓ANTC (8/13)GAYNNNNNVTC(13/8) CCTTC CCTTC (6/5) GTT↓AAC Alw21 I GWGCW↓C GG↓CC GGCC GG↓CC AspH I Bbv12 I BsaG I Bsh45 I GWGCW↓C GWGCW↓C GGCC GG↓CC BsiHKA I BsmP I GWGCW↓C GWGCWC GGCC GGCC Pph3215 I GWGCW↓C ★Hha I AspLE I GCG↓C GCG↓C Hpa II 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I http://www.takara-bio.co.jp GGTAC↓C G↓GTACC ★は、 タカラバイオで販売している酵素です。 制限酵素 認識配列 * 制限酵素 認識配列 * 制限酵素 認識配列 * 制限酵素 認識配列 * AhaB8 I G↓GTACC Bsp66 I GATC SauG I GATC Esp5 I GCCGGC Asp718 I BspJ106 I G↓GTACC GGTACC Bsp67 I ↓GATC GATC GATC SauM I Sau15 I GATC GATC MauA I Mis I GCCGGC GCCGGC GGTACC Sau6782 I GATC Mlu9273 II GCCGGC Esp19 I GGTACC Bsp76 I GATC SinM I GATC MroN I G↓CCGGC KpnK14 I Nmi I GGTACC GGTACC Bsp91 I GATC GATC GATC NasW I Nba I GCCGGC GCCGGC GGTACC ↓GATC GATC Tru II Uba4 I Sau10 I Bsp105 I Bsp122 I Uba59 I GATC Nbr I GCCGGC Sth I SthA I G↓GTACC GGTACC Bsp135 I GATC NgoA IV NgoM IV G↓CCGGC G↓CCGGC GGTACC GATC GATC GATC GATC SthB I Bsp136 I Bsp138 I Uba1101 I Uba1177 I Uba1182 I GATC Nmu I GCCGGC SthC I GGTACC Bsp143 I ↓GATC Uba1183 I GATC NmuF I GCCGGC SthD I SthE I GGTACC GGTACC Bsp147 I GATC Bsp2095 I GATC GATC NspW I NtaS II GCCGGC GCCGGC SthF I GGTACC BsrM I ↓GATC GATC Uba1204 I Uba1259 I Uba1317 I GATC Pdi I GCC↓GGC SthG I SthH I GGTACC GGTACC BsrP II GATC BssG II GATC Uba1323 I Uba1366 I GATC GATC Pgl I Psp61 I GCCGGC GCCGGC SthJ I GGTACC GATC GAT↓C GATC Rlu I GCCGGC GGTACC BstE III BstKT I Vha44 I SthK I SacA I GCCGGC SthL I GGTACC BstMB I ↓GATC GAAGA (8/7) SalC I GCCGGC SthM I SthN I GGTACC GGTACC BstX II Btc I GATC GATC GAAGA GAAGA Sao I SauA I GCCGGC GCCGGC Uba76 I Uba85 I GGTACC GGTACC Btk II ↓GATC Btu33 I GATC CGRY↓CG SauBMK I SauHP I GCC↓GGC GCC↓GGC Uba86 I GGTACC GATC GATC CGRY↓CG SauLP I GCC↓GGC GGTACC Btu34 I Btu36 I BsaO I Uba87 I Bsh1285 I CGRY↓CG SauN I GCC↓GGC Uba1201 I GGTACC Btu37 I GATC BsiE I CGRY↓CG SauS I GCC↓GGC CTCTTC(1/4) Btu39 I Btu41 I GATC GATC BstMC I Uba1303 I CGRY↓CG CGRYCG Ska I Slu1777 I GCCGGC GCC↓GGC Smo40529 I GCCGGC GCC↓GGC SspC I Uba1122 I GCCGGC Ksp632 I ★Mbo II Ncu I Tce I Mcr I Bco5 I Bco116 I BseZ I BsrE I CTCTTC(1/4) CTCTTC(1/4) Cac I ↓GATC Ccy I ↓GATC Mfe I C↓AATTG CTCTTC(1/4) CTCTTC C↓AATTG CTCTTC(1/4) CTCTTC GATC↓ GATC GATC ★Mun I Bst6 I Bst158 I Cha I Cin1467 I Cpa I Mja IV GTNNAC Bsu6 I Eam1104 I Ear I CTCTTC(1/4) CTCTTC(1/4) CTCTTC(1/4) Cpf I Csp5 I Cte1179 I ↓GATC GATC GATC Uba1192 I CTCTTC Uba1276 I CTCTTC Mae I C↓TAG Bfa I FspB I Mja I C↓TAG C↓TAG CTAG MthF I CTAG MthZ I Rma I ★Xsp I C↓TAG C↓TAG C↓TAG Mae II HpyCH4 IV Tai I Tsc I A↓CGT A↓CGT ACGT↓ ACGT↓ Mae III ↓GTNAC ★Mbo I AspMD I Bce243 I Bme12 I BsaP I BscF I Bsp I BspA I BspF I BspJ I BspJ64 I BspKT6 I Bsp9 I Bsp18 I Bsp49 I Bsp51 I Bsp52 I Bsp54 I Bsp57 I Bsp58 I Bsp59 I Bsp60 I Bsp61 I Bsp64 I Bsp65 I ↓GATC ↓GATC ↓GATC ↓GATC GATC ↓GATC GATC ↓GATC ↓GATC ↓GATC GATC GAT↓C GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC Hpy8 I ★Mlu I Ape I GTN↓NAC BbeA I BinS II Eco78 I GGCGCC GGCGCC GGC↓GCC ACGCGT Ege I GGC↓GCC Ehe I Kas I McaA I GGC↓GCC G↓GCGCC GGCGCC Mch I Mly113 I Msa I GG↓CGCC GG↓CGCC GGCGCC Nam I GGCGCC Nda I Nun II Pmn I GG↓CGCC GG↓CGCC GGCGCC Sfo I SseA I GGC↓GCC GG↓CGCC GATC Cty I CviA I CviB II GATC ↓GATC GATC Mme I TCCRAC (20/18) CviH I Dpn II GATC ↓GATC Mnl I CCTC (7/6) FnuA II FnuC I FnuE I GATC 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Nar I Bbe I GCC↓GGC GCCGGC GCCGGC GCCGGC GCCGGC GCCGGC G↓CCGGC ★Nco I Ate I Bsp19 I NspSA III C↓CATGG CCATGG C↓CATGG CCATGG ★Nde I FauND I CA↓TATG CA↓TATG ★Nhe I Ace II Bmt I PstNH I G↓CTAGC GCTAG↓C GCTAG↓C G↓CTAGC Nla III CviA II Fat I Hin1 II Hin8 II HpyCH4 I Hsp92 II CATG↓ C↓ATG ↓CATG CATG CATG CAT↓G CATG↓ Nla IV AspN I Bcr I BsaE I BscB I BspL I Bsp29 I Bss I PspN4 I GGN↓NCC GGN↓NCC GGNNCC GGNNCC GGN↓NCC GGN↓NCC GGNNCC GGNNCC GGN↓NCC http://catalog.takara-bio.co.jp Appendix Eco149 I Bsp72 I Bsp74 I 57 ★は、 タカラバイオで販売している酵素です。 制限酵素 認識配列 * 制限酵素 Rlu3 I GGNNCC Psr I Uba1305 I Uba1445 I GGNNCC GGNNCC Appendix ★Not I CciN I ★Nru I 制限酵素 (7/12)GAACNNNNNNTAC(12/7) CTGCA↓G 認識配列 * 制限酵素 認識配列 * SprL I CTGCAG Gsp I CAGCTG UbaHKB I Uba46 I CTGCAG CTGCAG Mzi I NmeR I CAGCTG CAGCTG CAGCTG Ain I AliAJ I CTGCAG CTGCA↓G Uba71 I CTGCAG Psp3 I GC↓GGCCGC Uba72 I CTGCAG Psp5 I CAGCTG GC↓GGCCGC Ali2882 I CTGCAG Api I CTGCA↓G Uba1112 I Uba1115 I CTGCAG CTGCAG PvuHKU I Pvu84 II CAGCTG CAG↓CTG AspT I Asp36 I CTGCAG CTGCAG Uba1116 I CTGCAG Sba I CAGCTG Asp708 I CTGCAG Uba1119 I Uba1123 I CTGCAG CTGCAG SciA II SmaA IV CAGCTG CAGCTG Asp713 I Bbi I CTGCA↓G CTGCAG Uba1149 I CTGCAG Sol3335 I CAGCTG Uba1184 I CTGCAG SplA IV CAGCTG Uba1186 I Uba1211 I CTGCAG CTGCAG Uba1227 I Uba1245 I CAGCTG CAGCTG Uba1212 I CTGCAG Uba1213 I Uba1215 I CTGCAG CTGCAG RleA I TCG↓CGA Ama I Bsp68 I TCGCGA TCG↓CGA MluB2 I TCG↓CGA Mlu9273 I TCGCGA PspD I SalD I TCGCGA TCGCGA Bce170 I CTGCAG BmeB I CTGCAG Sbo13 I TCG↓CGA Sna3286 I Spo I TCGCGA TCG↓CGA BsaN II BsaQ I CTGCAG CTGCAG BscD I CTGCAG Uba1117 I TCGCGA CTGCA↓G CTGCAG CTGCAG Rsa I GT↓AC TCGCGA BspB I Bsp17 I Uba1216 I Uba1386 I Uba1225 I CTGCAG ★Afa I GT↓AC CCCACA (12/9) Bsp43 I CTGCAG Uba1232 I CTGCAG Asp16H I GTAC RCATG↓Y RCATG↓Y Bsp63 I CTGCA↓G Bsp78 I CTGCAG Uba1256 I Uba1262 I CTGCAG CTGCAG Asp17H I Asp18H I GTAC GTAC Lsp1270 I NspH I RCATGY RCATG↓Y Bsp81 I Bsp93 I CTGCAG CTGCAG Uba1287 I Uba1294 II CTGCAG CTGCAG Asp29H I Csp6 I GTAC G↓TAC Xce I RCATG↓Y Bsp107 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CGA↓TCG BmaA I BmaB I BmaC I CGATCG CGATCG CGATCG BmaD I BspC I Cas2 I Cfr51 I Drd III EclJ I ErhB9 I Kpl79 I Nbl I Ple19 I Psu161 I Pvu84 I Rsh I Rsp I SmaA III SplA III Uba1129 I Uba1139 I Xgl3216 I Xgl3217 I Xgl3218 I Xgl3219 I Xgl3220 I Xml I XmlA I Xni I Xor II CGATCG CGAT↓CG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGAT↓CG CGATCG CGAT↓CG CGAT↓CG CGAT↓CG CGATCG CGAT↓CG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGATCG CGAT↓CG ★Pvu II Bav I BavA I BavB I BspO4 I Cfr6 I Dma I CAG↓CTG CAG↓CTG CAG↓CTG CAG↓CTG CAG↓CTG CAG↓CTG CAG↓CTG ★Sac I Ecl136 II Ecl137 I EcoICR I Mxa I GAGCT↓C GAG↓CTC GAGCTC GAG↓CTC GAG↓CTC NasS I Pfl18 I GAGCTC GAGCTC Psp124B I Sco I Sst I GAGCT↓C GAGCTC GAGCT↓C ★Sac II Aos III Asp32H I CCGC↓GG CCGCGG CCGCGG Bac I Bac465 I Bsp12 I CCGCGG CCGCGG CCGCGG Cfr37 I Cfr41 I Cfr42 I Cfr43 I Cfr45 II Csc I Cte1 I DrdA I DrdB I DrdC I DrdE I DrdF I Dsp1 I Eae46 I Ecc I Ecl1 I Ecl28 I Ecl37 I Eco29k I Eco55 I Eco92 I Eco96 I Eco99 I Eco100 I 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EciC I PaeA I CCGC↓GG Eco76 I PaeQ I Pae7 I CCGCGG CCGCGG ★Eco81 I Eco115 I Pae17 I CCGCGG Eco118 I CCTNAGG Pae36 I CCGCGG Lmu60 I CC↓TNAGG Pae42 I CCGCGG Mst II CC↓TNAGG Pae43 I Pae44 I CCGCGG CCGCGG OxaN I SauH I CC↓TNAGG CCTNAGG Plf1108 II Saa I CCGCGG CCGCGG Sec III SshA I CCTNAGG CC↓TNAGG Sab I CCGCGG Uba1184 II CCTNAGG Sak I CCGCGG Uba1294 I CCTNAGG Sbo I CCGCGG Uba1332 I Sfr I Sfr303 I CCGCGG CCGC↓GG Uba1333 I CCTNAGG CCTNAGG Sfr382 I SgrB I Shy I Spu I CCGCGG CCGC↓GG CCGCGG CCGC↓GG Sse II Ssp1725 I CCGCGG CCGCGG Sst II Sta I Tgl I CCGC↓GG CCGCGG CCGCGG Tto I CCGCGG UbaHKA I Uba66 I Uba77 I CCGCGG CCGCGG CCGCGG Uba90 I Uba1093 I Uba1095 I CCGCGG CCGCGG CCGCGG Uba1111 I CCGCGG Uba1113 I Uba1126 I Uba1187 I CCGCGG CCGCGG CCGCGG Uba1229 I Uba1234 I Uba1244 I Uba1306 I Uba1364 I Uba1369 I CCGCGG CCGCGG CCGCGG CCGCGG CCGCGG CCGCGG ★Sal I Acs1371 I Acs1372 I Acs1373 I Acs1421 I Acs1422 I HgiC III HgiD II Koy I Nop I Psp32 I Psp33 I Psp89 I RflF I Rhe I Rhp I Rrh I Rrh4273 I Rro I Rtr I Uba89 I Xam I Xci I SanD I Sse1825 I G↓TCGAC GTCGAC GTCGAC GTCGAC GTCGAC GTCGAC G↓TCGAC G↓TCGAC GTCGAC G↓TCGAC GTCGAC GTCGAC GTCGAC GTCGAC GTCGAC GTCGAC GTCGAC GTCGAC GTCGAC G↓TCGAC GTCGAC GTCGAC G↓TCGAC GG↓GWCCC GG↓GWCCC SfaN I Sau I ★Sca I SmaA I CGTACG C↓TRYAG CTRYAG SplA I SspK I CGTACG CGTACG BdiS I C↓TRYAG Sun I C↓GTACG Bfm I C↓TRYAG CC↓TNAGG CCTNAGG Bpc I BstSF I C↓TRYAG C↓TRYAG Srf I CCTNAGG LlaB I C↓TRYAG Sse232 I CG↓CCGGCG CC↓TNAGG CCTNAGG Sfc I C↓TRYAG Mre I CG↓CCGGCG ★Sfi I Sdi I Sgf I AsiS I Rga I GGCCNNNN↓NGGCC GGCCNNNN↓NGGCC AGT↓ACT AGTACT GCGAT↓CGC GCGAT↓CGC Asp763 I BshH I AGTACT AGTACT BsoS I BstM I Dpa I AGTACT AGTACT AGT↓ACT Eco255 I Pin I AGT↓ACT AGTACT RflF II Uba1094 I AGT↓ACT AGTACT Uba1158 I AGTACT CC↓NGG Bme1390 I CC↓NGG BsaC I Bso I Bsp53 I CCNGG CCNGG CCNGG Bsp73 I BssK I Dsa V Eco43 I Eco51 II Eco80 I Eco85 I Eco93 I Eco153 I Eco200 I MspR9 I Msp67 I Nla X Sso II Uba17 I Uba1391 I CCNGG ↓CCNGG ↓CCNGG CCNGG CCNGG CCNGG CCNGG CCNGG CCNGG CCNGG CC↓NGG CC↓NGG CCNGG ↓CCNGG CCNGG CCNGG Sdu I Aoc II Bka1125 I Bmy I BsoC I BspLS2 I ★Bsp1286 I Nsp II Nsp7524 II Uba1362 I GDGCH↓C GDGCH↓C GDGCHC GDGCH↓C GDGCHC GDGCH↓C GDGCH↓C GDGCH↓C GDGCH↓C GDGCHC Sec I BsaJ I BseD I BssEC I Uba1442 I C↓CNNGG C↓CNNGG C↓CNNGG C↓CNNGG CCNNGG タカラバイオ ウェブカタログ ▶ ★Sse8387 I CCTGCA↓GG Sbf I CCTGCA↓GG Sda I CCTGCA↓GG Sse8647 I ★Ssp I SgrA I CR↓CCGGYG Sim I GGGTC (-3/0) Sth132 I BtsP I GGGTC Sai I GGGTC ★Sma I GCCC↓GGGC GCGAT↓CGC AGT↓ACT Acc113 I Afl IV ScrF I Sfe I Bco163 I CCC↓GGG Ahy I CfrJ4 I C↓CCGGG CCC↓GGG Cfr9 I EaeA I C↓CCGGG C↓CCGGG CCCGGG ★Stu I Aat I AG↓GWCCT AAT↓ATT CCCG (4/8) AGG↓CCT AGG↓CCT Asp78 I Chy I AGGCCT AGGCCT Eco147 I Gdi I GobA I AGG↓CCT AGG↓CCT AGGCCT AGGCCT AGG↓CCT EclR I PaeB I PspA I CCC↓GGG C↓CCGGG NtaS I Pce I Pme55 I Ppu13 I PspAL I Uba1220 I CCC↓GGG CCCGGG Sar I SseB I AGG↓CCT AGG↓CCT Uba1393 I UthS I CCCGGG CC↓CGGG Xcy I Xma I XmaC I C↓CCGGG C↓CCGGG C↓CCGGG Ssv I Ste I Uba40 I AGGCCT AGGCCT AGGCCT Uba1170 I AGGCCT Uba1180 I Uba1217 I Uba1239 I AGGCCT AGGCCT AGGCCT Uba1371 I Uba1403 I Uba1419 I AGGCCT AGGCCT AGGCCT Sml I Smo I Sna I BspM90 I BssNA I BstBS I BstZ17 I ★Bst1107 I Xca I Appendix 認識配列 * C↓TYRAG C↓TYRAG GTATAC GTA↓TAC GTA↓TAC GTA↓TAC GTATAC GTA↓TAC GTA↓TAC ★SnaB I BstSN I EciA I Eco105 I Eco158 II SspJ I SspM1 I SspM2 I Uba1240 I TAC↓GTA TAC↓GTA TACGTA TAC↓GTA TACGTA TACGTA TACGTA TACGTA TACGTA ★Spe I AclN I Ahl I Bcu I A↓CTAGT A↓CTAGT A↓CTAGT A↓CTAGT ★Sph I Asp5H I Bbu I Bsp121 I Pae I PaeC I SpaX I Uba1162 I Uba1226 I GCATG↓C GCATGC GCATG↓C GCATGC GCATG↓C GCATGC GCATGC GCATGC GCATGC AGG↓CCT AGGCCT Sty I BsmS I BssT1 I Bst224 I ★EcoT14 I EcoT104 I Eco130 I Eco208 II Erh I ErhB9 II SblA I SblB I SblC I Uba1311 I C↓CWWGG CCWWGG C↓CWWGG CCWWGG C↓CWWGG CCWWGG C↓CWWGG CCWWGG C↓CWWGG C↓CWWGG CCWWGG CCWWGG CCWWGG CCWWGG Swa I ★Smi I ATTT↓AAAT ATTT↓AAAT ★Taq I CviS III EsaBC3 I Tfl I TthHB8 I T↓CGA TCGA TC↓GA TCGA T↓CGA Taq II GACCGA (11/9) CACCCA (11/9) Tat I W↓GTACW Tau I BspU I GCSG↓C GCSG↓C http://catalog.takara-bio.co.jp 59 ★は、 タカラバイオで販売している酵素です。 制限酵素 Tfi I Pfe I Appendix Tse I Tso I TspDT I TspE I MluC I 認識配列 * 制限酵素 認識配列 * G↓AWTC UbaF2 I GAAAYNNNNNRTG GAWTC ↓AATT ↓AATT ↓AATT Tsp4C I Bst4C I ACN↓GT ACN↓GT HpyCH4 III ACN↓GT Taa I ACN↓GT Tsp45 I NmuC I ★Tth111 I GACN↓NNGTC CTCGAG Uba1154 I CTCGAG CTCGAG CTCGAG Dde II CTCGAG Uba1166 I Uba1237 I UbaF5 I CTGATG DraD I CTCGAG Uba1248 I CTCGAG UbaF6 I GCGAC Eae2 I CTCGAG Uba1271 I CTCGAG UbaG I CACNNNNGTG Mav I Mca I C↓TCGAG CTCGAG Uba1298 I Uba1335 I CTCGAG CTCGAG CTCGAG CTCGAG CTCGAG GCANNNNNNTGC Mec I Mha I Uba1397 I UbaH I MlaA I CT↓CGAG Uba1448 I Xpa I CTCGAG C↓TCGAG CGAACG Mpu I CTCGAG Mrh I CT↓CGAG Xho II R↓GATCY UbaT I TGANNNNNNTCA MscA I Msi I CTCGAG CTCGAG Ait II AitA I RGATCY RGATCY Vsp I Ase I AT↓TAAT AT↓TAAT Msp23 II Oco I CTCGAG CTCGAG Asp1H I RGATCY Asn I AT↓TAAT PaeR7 I RGATCY RGATCY ★PshB I AT↓TAAT Pan I PflN I C↓TCGAG C↓TCGAG CTCGAG Asp6H I Asp8H I Asp14H I RGATCY Asp17 I RGATCY PflW I CTCGAG T↓CTAGA Pfl67 I CTCGAG Asp21H I Asp22 I RGATCY RGATCY BspLU11 II BsrX I TCTAGA TCTAGA Psp4 I Sal1974 I CTCGAG CTCGAG BstX2 I R↓GATCY Msp23 I TCTAGA Sau3239 I C↓TCGAG BstY I Dsa III CCANNNNN↓NNNNTGG Sbi68 I Sca1827 I Sci I C↓TCGAG CTCGAG CTC↓GAG ★Mfl I Psu I Tru201 I R↓GATCY R↓GATCY R↓GATCY R↓GATCY R↓GATCY C↓TCGAG C↓TCGAG SciB I Sci1831 I CTCGAG CTCGAG Asp15 I Asp47 I CTCGAG CTCGAG Scu I Sex I CTCGAG CTCGAG Asp703 I Bad I CTCGAG CTCGAG CTCGAG CTCGAG Sfr274 I Sfu1762 I Sga I C↓TCGAG CTCGAG CTCGAG BseX3 I BsoD I BstZ I C↓GGCCG CGGCCG C↓GGCCG Sgo I CTCGAG Sgr1841 I Shy1766 I Sla I CTCGAG CTCGAG C↓TCGAG Eag I EclX I C↓GGCCG C↓GGCCG ★Eco52 I C↓GGCCG Slu I Sol10179 I Spa I CTCGAG C↓TCGAG CTCGAG Xmn I Asp700 I BbvA I GAANN↓NNTTC GAANN↓NNTTC GAANN↓NNTTC Sph1719 I CTCGAG MroX I GAANN↓NNTTC Ssp4 I StaA I CTCGAG CTCGAG Pdm I Syn II GAANN↓NNTTC GAANNNNTTC ATTAAT GACN↓NNGTC Ats I Fsu I GACN↓NNGTC GACNNNGTC Xcm I Nta I PflF I Psy I GACNNNGTC GACNNNGTC GACN↓NNGTC ★Xho I Abr I SmaA II Spl II GACNNNGTC GACNNNGTC SplA II Tel I Tsp I Tte I GACNNNGTC GACN↓NNGTC GACNNNGTC GACNNNGTC Ttr I GACNNNGTC Bbf I Bbi III Blu I Bsp92 I CAARCA(11/9) Bsp129 I Bsp139 I CTCGAG CTCGAG CTCGAG CTCGAG CTCGAG C↓TCGAG CTCGAG UbaD I GAACNNNNNNTCC Bsp140 I Bsp141 I Bsp142 I UbaE I CACCTGC BssH I CTCGAG BstH I CTCGAG *R : A or G Y : C or T W : A or T S : G or C Uba1148 I C↓TCGAG CTCGAG Asp I Tth111 II C↓TCGAG CTCGAG Ccr I Cja I ★Xba I ↓GTSAC CTCGAG Tli I Uba1130 I GAANNNNNNNTTGG Srl17D I ↓GTSAC Sve194 I CTCGAG UbaF4 I UbaP I CASTGNN↓ CTCGAG BstV I CTCGAG CTCGAG ACGGA(11/9) TspR I 認識配列 * BstL I BsuM I Bth I ATGAA(11/9) Tas I Tsp509 I 制限酵素 CACNNNNNNTCC TARCCA ↓AATT AATT 認識配列 * UbaF3 I G↓CWGC Sse9 I TspGW I 制限酵素 K : G or T M : A or C B : C or G or T D : A or G or T Uba1432 I Xma III Aaa I RGATCY C↓GGCCG C↓GGCCG H : A or C or T V : A or C or G N : A or C or G or T → 3′ の方向に一本鎖のみ書いており、切断点は矢印 (↓) で示した。矢印がないものは、正確な切断点が判明していないことを示す。 ●認識部位は5′ ●Eco31 I やFok I 等のように認識部位と切断点が離れている酵素は、切断点をカッコ内に示した。 例として Eco31 I GGTCTC (1/5) の切断点を下に示す。 5′GGTCTCN↓ 3′ 3′CCAGAGN NNNN↑ 5′ ●Nci I は3′ -リン酸になるように切断する。 ※一覧は2004年現在の情報を元に作成したものです。 60 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp ACGT AGCT TspE I Mae II Tsp4C I Alu I CviJ I ATAT CATG CCGG CGCG Nla III BciT130 I Mva I Acc II Hpy99 I Bcn I BseM II ScrF I Mun I Apo I EcoR I Psp1406 I BsaA I PmaC I Aat II Hin1 I Hind III NspB II Pvu II Ban II Bsp1286 I HgiA I Sac I Ssp I Nde I EcoR V Nsp I Sph I BspH I Ava I BmeT110 I Sma I Cfr10 I Nae I Tau I Acc III Aor13H I Bet I Afl III Mlu I Dsa I NspB II Sac II BssH II Tau I Nru I Dde I Spe I Bln I EcoT14 I Nhe I Xba I Mcr I Pvu I BamH I Mfl I Fba I Bbe I BspT107 I Hae II HgiC I Hin1 I Nsb I Apa I Ban II Bsp1286 I Bal I Eae I Hae I CTAG Mae I Xsp I GATC Dpn I Mbo I Sau3A I Tfi I Hinf I Bgl II Mfl I Hha I Tse I Fnu4H I Aor51H I Hae II CviJ I Hae III Ava II VpaK11B I BmgT120 I Cfr13 I Hae I Stu I Eae I Eco52 I Mcr I Mae III Sca I Tat I Spl I BspT107 I Bsp1407 I HgiC I Tat I Kpn I Sfe I Acc I Bst1107 I Psi I Nsp V BspT104 I GGCC GTAC Afa I Tsp45 I TATA Taq I Cla I Ava I BmeT110 I Sml I Xho I Acc I Hinc II Sal I CviR I EcoT22 I Pst I Sfe I ApaL I Bsp1286 I HgiA I Mse I RspRS II PshB I Afl II Sml I Hinc II Hpa I TCGA TGCA TTAA N C T N A * * G G * * N * * T C * * N BsaA I SnaB I Age I Bet I Cfr10 I GCGC A * * A * * T * * C Apo I Afl III Dsa I BspLU11 I EcoT14 I Nsp I Nco I Hap II Msp I G * * G * * * * C * * * * T * * * * A * * * * * * N * * * * * * * * C G Appendix AATT A T * * * * * * 認識部位による制限酵素の分類表 Pfo I Eco81 I EcoO109 I Bpu1102 I EcoO109 I BstP I EcoO65 I Dra I 下線:複数の塩基配列を認識する制限酵素 太字:タカラバイオで販売している制限酵素 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 61 [分類表以外の認識切断部位のわかっている酵素] 太字:タカラバイオで発売している制限酵素 ■複数の塩基配列を認識する制限酵素 Appendix Acc I Afl III Apo I Ava I Bae I Ban II Bcn I Bet I BsaA I BseM II BseS I BspT107 I Bsp1286 I Cfr10 I Cpo I CviJ I Dsa I Eae I EcoO109 I EcoT14 I Eco57M I FspA I 62 GT↓AGAC AT CG CT A↓CACGT AT GC GT A↓AATTC A T G C G T C↓CCGAG C G T A T G (10/15)ACNNNNGTACC(12/7) T GAGCC↓C A T G C G T CC↓CGG G A↓CCGGA A T T A T T CAC↓GTA C G T A T G CTCAG G GGGCA↓C G C T A T C G↓GCACC CG TA TG GAGCA↓C A C A T G A G C G T T A T C T T A↓CCGGC A T G C G T CG↓GACCG T AG↓CC A T G C G T C↓CACGG AT GC GT C↓GGCCA C G T A T G AG↓GNCCC A T G C G T C↓CAAGG AT TA TT CTGAAG(16/14) G ATGC↓GCAC A T G C G T Hae I ■8塩基配列を認識する制限酵素 AGG↓CCA A T T A T T Hae II AGCGC↓C A T G C G T HgiA I GAGCA↓C A T T A T T Hinc II GTC↓AAC C G T A T G Hin1 I GA↓CGCC A T G C G T Mcr I CGAC↓CG AT GC GT Mfl I A↓GATCC A T G C G T Mva I CC↓AGG T Nsp I ACATG↓C A T G C G T NspB II CAG↓CGG A T C G C T Pas I CC↓CAGGG T PpuM I AG↓GACCC A A T G A C G A T A T C A T T G T C G T T GG↓GACCC SanD I T SexA I A↓CCAGGT T Sfe I C↓TACAG AT GC GT SgrA I CA↓CCGGCG A T G C G T Sml I CTCAAG CG TA TG Sse8647 I AG↓GACCT T GAGNNNNNNGTAC StySJ I G Taq II GACCGA(11/9) CACCCA(11/9) Tat I AGTACA A T T A T T Tfi I G↓AATC T Tse I G↓CAGC T Tsp45 I ↓GTCAC G 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ Asc I Fse I Not I Pac I Pme I PspX I Sfi I GG↓CGCGCC GGCCGG↓CC GC↓GGCCGC TTAAT↓TAA GTTT↓AAAC VC↓TCGAGB GGCCNNNN↓NGGCC Sgf I Srf I Sse232 I Sse8387 I Smi I http://www.takara-bio.co.jp GCGAT↓CGC GCCC↓GGGC CG↓CCGGCG CCTGCA↓GG ATTT↓AAAT コドン表 ※コドンは、 5′ 末端が左側にくるように書いてある。 SECOND U C Phe (F) UUU U Leu (L) UUC UCC UUA UCA UUG UCG CUU C FIRST I le ( I ) A UCU Pro (P) CCC CUA CCA CUG CCG AUU Thr (T) A ACC AUA ACA Met (M) AUG Val (V) GUU STOP His (H) Gln (Q) G GUC GCC GUA GCA GUG GCG 放射能単位換算早見表 UGC UAA STOP UGA UAG Trp (W) UGG CAU Arg (R) CGU CAC CGC CAA CGA CGG AAU Ser (S) AGU Lys (K) AAA Arg (R) AGA Asp (D) GAU Gly (G) GGU GAC GGC Glu (E) GAA GGA GAG GGG AAC AGC AAG GCU UGU Asn (N) ACG Ala (A) Cys (C) CAG ACU AUC UAU UAC CCU CUC G Tyr (Y) Appendix Leu (L) Ser (S) AGG ポリアクリルアミドゲル電気泳動における色素マーカーの移動度*1 旧単位(Ci) ポリアクリルアミドゲル 新単位(Bq) 27 pCi 1 Bq 1 μ Ci 37 kBq 10 μ Ci ゲル濃度 460 bp 5.0% 65 bp 260 bp 8.0% 45 bp 160 bp 12.0% 20 bp 70 bp 20.0% 12 bp 45 bp 1.85 MBq 100 μ Ci 3.7 MBq 250 μ Ci 9.25 MBq キシレンシアノール*2 100 bp 370 kBq 50 μ Ci ブロモフェノールブルー*2 3.5% 500 μ Ci 18.5 MBq 1 mCi 37 MBq 1 Ci 37 GBq 400 Ci 14.8 TBq ゲル濃度 3,000 Ci 111 TBq 5.0% 35 bp 6.0% 26 bp 106 bp 8.0% 19 bp 70 ~ 80 bp 10.0% 12 bp 55 bp 20.0% 8 bp 28 bp 変性ポリアクリルアミドゲル デオキシヌクレオチド3リン酸の吸光係数 (pH7.0) ε dNTP dATP ブロモフェノールブルー*2 キシレンシアノール*2 130 bp * Maniatis, T. et al. (1982) Molecular Cloning. *2 色素マーカーとほぼ同じ移動度を示すDNAフラグメントの大きさ 1 260 15.2 × 10 3 dCTP 7.4 × 103 dGTP 11.5 × 103 dTTP 8.3 × 103 オリゴヌクレオチド1 OD260 のモル換算表 base数 平均分子量 平均重量数 (μg/ml) 5 1,650 30 平均モル数 (nmol/ml) 18.2 10 3,300 30 9.1 15 4,950 30 6.1 20 6,600 30 4.5 25 8,250 30 3.6 30 9,900 30 3.0 塩基の種類に偏りがある場合は、 ヌクレオチドの吸光係数を用いて以下のように計算してください。 重量数 (μg/ml) = 330 (ヌクレオチドの平均分子量) × base 数 (15.2 × A 数) + (7.4 × C 数) + (11.5 × G 数) + (8.7 × T 数) モル数 (μmol/ml) = 1 (15.2 × A 数) + (7.4 × C 数) + (11.5 × G 数) + (8.7 × T 数) タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 63 遺伝子操作でよく利用される大腸菌 (K-12 由来株) の遺伝子型 Appendix Strain BB4 Genotype supF58, supE44, hsdR514, galK2, galT22, trpR55, metB1, tonA, Δ lacU169/F′ [proAB+, lac I q, lacZΔM15Tn10 (tet r) ] BL21 (DE3) *1 - - F-, ompT, hsdS(r B B mB ) , gal (λ cI857, ind1, Sam7, nin5, lacUV5-T7gene1) , dcm (DE3) BM25.5 r , , cm r, rK-mK+, tet r F-, λ imm 434kan(P1) BMH71-18mutS Δ (lac-proAB) , supE, thi, mutS215::Tn10 (tet r) /F′ (traD36, proAB+, lac I q, lacZ ΔM15) BW313 HfrKL16PO/45 [lys (61-62) /dut1, ung1, thi-1, relA1] C-la A wild type strain (C strain) C600 supE44, hsdR, thi-1, thr-1, leuB6, lacY1, tonA21 CJ236 dut1, ung1, thi-1, relA1/pCJ105 (F′ cam r) (C 株由来) DH1 supE44, hsdR17, recA1, endA1, gyrA96, thi-1, relA1 DH5 supE44, hsdR17, recA1, endA1, gyrA96, thi-1, relA1 DH5α F-, φ80lacZΔM15, Δ (lacZYA-argF) U169, deoR, recA1, endA1, hsdR17 (rK-mK+) , phoA, supE44, λ-, thi-1, gyrA96, relA1 DH10B F-, mcrA,Δ (mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ,ΔM15, ΔlacX74, deoR, recA1 , araD139, Δ (ara leu) 7697, galU, galK, λ-, rpsL, end A1, nupG DP50supF supE44, supF58, hsdS3 (rB-mB-) , dapD8, lacY1, glnV44, Δ (gal-uvrB) 47, tyrT58, gyrA29, tonA53, Δ (thyA57) ED8654 supE, supF, hsdR, metB, lacY, gal, trpR ED8767 supE44, supF58, hsdS3 (rB-mB-) , recA56, galK2, galT22, metB1 ER1647 (strr) , fhuA2, Δ (lacX) r1, supE44, xyl-7, mtl-2, metB1, recD1014, mcrA1272::Tn10, F-, trp-31, his-1, rpsL104 Δ (mcrB, hsdRMS, mrr) 102::Tn10 (tet r) HB101 supE44, Δ (mcrC-mrr) , recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1, leuB6, thi-1 HMS174*1 F-, recA1, hsdR, Rif r HST02 - - F′ [traD36, proA+B+, lac Iq, lacZΔM15] /Δ (lac-proAB) , recA, endA, gyrA96, thi, e14(mcrA ) , supE44, relA, ΔdeoR, Δ (mrr-hsdRMS-mcrBC) HST04 dam-/dcm- HST08 Premium JM83 JM101 JM105 JM106 JM107 JM108 JM109 JM110 K802 K803 F-, ara, Δ (lac-proAB) [φ80dlacZΔM15] , rpsL (str) , thi, Δ (mrr-hsdRMS-mcrBC) , ΔmcrA, dam, dcm F-, endA1, supE44, thi-1, recA1, relA1, gyrA96, phoA, φ80dlacZΔM15, Δ (lacZYA-argF) U169, Δ (mrr-hsdRMS-mcrBC) , ΔmcrA, λ- F-, ara, Δ (lac-proAB) , rpsL (φ80 lacZΔM15) supE, thi, Δ (lac-proAB) /F′ [traD36, proAB+, lac I q, lacZΔM15] endA1, supE, sbcB15, thi, rpsL, Δ (lac-proAB) /F′ [traD36, proAB+, lac I q, lacZΔM15] (lac-proAB) F-, endA1, gyrA96, thi, hsdR17, supE44, relA1, Δ endA1, gyrA96, thi, hsdR17, supE44, relA1, Δ (lac-proAB) /F′ [traD36, proAB+, lac I q, lacZΔM15] F-, recA1, endA1, gyrA96, thi, hsdR17, supE44, relA1, Δ (lac-proAB) - - recA1, endA1, gyrA96, thi, hsdR17 (rK-mK+) , e14(mcrA ) , supE44, relA1, Δ (lac-proAB) /F′ [traD36, proAB+, lac I q, lacZΔM15] dam, dcm, supE44, hsdR17, thi, leu, rpsL1, lacY, galK, galT, ara, tonA, thr, tsx, Δ (lac-proAB) /F′ [traD36, proAB+, lac I q, lacZΔM15] F-, lacY1 or Δ (lac I q-Y) 6 (lac-3) , supE44, galK2, galT22, mcrA, rfbD, metB1, mcrB1, hsdR2 F-, lacY1 or Δ (lac I q-Y) 6 (lac-3) , supE44, galK2, galT22, mcrA, rfbD, metB1, mcrB1, hsdR3 LE392 supE44, supF58, hsdR514, galK2, galT22, metB1, trpR55, lacY1 MC1061 hsdR, mcrB, araD139, Δ (araABC-leu) 7679, ΔlacX74, galU, galK, rpsL, thi MV1184 MV1193 (φ80 lacZΔM15) ,Δ (srl-recA) 306::Tn10 (tet r) ara, Δ (lac-proAB) , rpsL, thi /F′ [traD36, proAB+, lac I q, lacZΔM15] Δ (lac-proAB) , rpsL, thi, endA1, sbcB15, hsdR4, Δ (srl-recA) 306::Tn10 (tet r) /F′ [traD36, proAB+, lac I q, lacZΔM15] NovaBlue*1 + endA1, hsdR17, (rK-mK+) , supE44, thi-1, gyrA96, relA1, lac, recA1/F′ [proAB , , lac I qZ ΔM15, Tn10 (tet r) ] RR1 supE44, hsdS20, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1 TAP90 supE44, supF58, hsdR, pro, leuB, thi-1, rpsL, lacY1, tonA1, recD1903::mini-tet TG1 supE, hsdΔ5, thi, Δ (lac-proAB) /F′ [traD36, proAB+, lac I q, lacZΔM15] TG2 /F′ [traD36, proAB+, lac I q, lacZΔM15] supE, hsdΔ5, thi, Δ (lac-proAB) Δ (srl-recA) 306::Tn10 (tet r) TH2 supE44, hsdS20 (rB-mB-) , recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1, thi-1, trpR624 XL1-Blue hsdR17, supE44, recA1, endA1, gyrA46, thi, relA1, lac/F′ [proAB+, lac I q, lacZΔM15::Tn10 (tet r) ] χ1776 F-, thuA53, dapD8, minA1, minB2, rfb-2, glnV44 (supE44) ,Δ (gal-uvrB) 47, tyrA142, gyrA29, oms-2, metC65, osm-1 (tte-1) , Δ (bioH-asd) 29, cycA1, cycB2, hsdR2 Y-1088 Y-1089 Y-1090 F-, ΔlacU169, supE, supF, hsdR, metB, trpR, fhuA21, proC::Tn5/pMC9*2 F-, Δ lacU169, lon-100, araD139, rpsL, hflA150 [chr::Tn10/pMC9*2] F-, Δ lacU169, lon-100, araD139, rpsL, supF, mcrA, trpC22::Tn10/pMC9*2 太字は、 タカラバイオでコンピテントセル、 エレクトロセルとして販売している菌株 *1 メルク社 (Novagen ) でコンピテントセルとして販売している菌株 q *2 pMC9 is pBR322 with lac I inserted. 64 (B株由来) 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp ■遺伝子操作によく使用される大腸菌遺伝子記号 Appendix 1) 制限修飾系およびメチレーション系遺伝子 dam GATC 配列中Adenine のN-6 位メチル化能欠損 制限酵素認識配列中および近傍にGATC 配列が存在し、 メチル化により影響 (メチル化の影響の項参照) 。 を受ける酵素の場合にはdam- 株を使用する dcm CCWGG 配列中2番目Cytosine の 5 位メチル化能欠損 制限酵素認識配列中および近傍にCCWGG 配列が存在し、 メチル化によ (メチル化の影響の項参 り影響を受ける酵素の場合にはdcm- 株を使用する 照) 。 hsd (R-M-S) EcoK制限修飾系遺伝子;hsdR:制限系欠損、hsdS:制限修飾系欠損 mcrA 5′ -meCpG配列の制限欠損 mcrB、C 5′ -GpmeC配列の制限欠損 mrr メチル化Adenine による制限系欠損;damおよびEcoKによるメチル化塩基 には関与しない。 Δ (mcrC-mrr) はmcrC-merB-hsdS-hsdM-hsdR-mrrの6遺伝子を欠損してい る。 hsd (R-M-S) 、mcrA、BC、mrr株は、 メチル化DNA (genomic、cDNA) のクロー ニングに使用される。 2) 相同組換え系遺伝子 recA 相同組換え能欠損 recBC Exonuclease V 活性および相同組換え能欠損 recD Exonuclease V 活性欠損。 ただし相同組換え能には影響しない。 recF、J 相同組換え能減少 sbcB、C Exonuclease I 活性欠損 recA以外のrec、sbc系遺伝子は、ゲノムクローニング等、invert repeat、 tandem repeat を多く含むDNA のクローニング用宿主として利用される。 3) ラクトース系遺伝子 lac repressor の過剰生産 (プロモーター変異) lac I q lacZ β-ガラクトシダーゼ欠損 β-ガラクトシダーゼのC 末端フラグメント (ω-fragment) を lacZΔM15 は、 コードしているが、 そのままでは活性がなく、種々ベクターにコードされるlacαfragment の共存下で β - ガラクトシダーゼ活性が回復し、X-Gal でのカラーセ レクションが可能となる。 lacY Lactose permease 欠損 ΔU169、 ΔX111、 ΔX74 は、lac operonが完全に欠失している。 4) その他よく利用される遺伝子 dut dUTPase 活性欠損 ung Uracil N-glycosilase 活性欠損;dut、ung株は、Kunkel 法による部位特異 的変異処理に用いられる。 endA Endonuclease I 活性欠損 lon ATP dependent protease 活性欠損;異常タンパク質の分解に関与するた め、異種タンパク質を発現する際の宿主にlon株が用いられる。 membrane-associated protease 活性欠損;発現異種タンパク質の精製時 ompT 分解に関与 hflA λファージ溶原化頻度の上昇;λgt10 を用いたクローニングの宿主に用いら れる。 supE Amber (UAG) suppressor tRNA (glutamine) ;suppressor 要求性λファー ジ増殖用宿主等に用いられる。 supF Amber(UAG) suppressor tRNA (tyrosine) ;suppressor 要求性λファージ 増殖用 (Sam7、Sam100 のlytic growth) 宿主等に用いられる。 Tn 5 Transposon5:カナマイシン耐性 Tn10 Transposon10:テトラサイクリン耐性 F 接合伝達因子;M13 ファージ感染に必須。 は、大腸菌ゲノムの一部 (proAB+、 F′ [traD36、proAB +、lac I q、lacZΔM15] q をもち、接合伝達能の著しく低下 (traD36) した性質を有す lac I 、lacZΔM15) るFプラスミドであることを示す。 (P1) P1 ファージ溶原化株:P1 制限修飾系、P1 dam+は通常発現している。 (Spi- selection) (P2) P2 ファージ溶原化株:λ red + dam+の増殖制限 rpsL リボゾームタンパク質の変異に由来したストレプトマイシン耐性 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 65 Appendix 基本試薬の調製方法 1 M Tris-HCl buffer(pH 8.0) 500 ml 1)Tris(hydroxymethyl)aminomethane (MW 121.2) を60.55 g量り取り、400 mlの水に溶かす。 2)6 N塩酸を加えながらpH 8.0にあわせ、500 mlに水でメスアップする。 3)密栓して、 オートクレーブする。 (保存:室温あるいは冷蔵庫で保管する。) 0.5 M EDTA(pH 8.0) 500 ml 1)400 mlの水に、EDTA粉末 (EDTA 2Na・2H2O, MW 372.24)93.06 gを懸濁し、攪拌しながらpHを測定する。 2)水酸化ナトリウムを徐々に加えて溶解する。 (約10 g) 3)pHの上昇に注意しながら、pH 8.0に合わせ、500 mlにメスアップする。 4)オートクレーブする。 (保存:室温あるいは冷蔵庫で保管する。) TE buffer(10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0) 500 ml 1)5 mlの1 M Tris-HCl buffer (pH 8.0) と、1 mlの0.5 M EDTA (pH 8.0) を混合する。 2)水で500 mlにメスアップする。 3)オートクレーブする。 (保存:室温あるいは冷蔵庫で保管する。) 3 M 酢酸ナトリウム 500 ml を123 g量り取り、400 mlの水に溶かす。 1)酢酸ナトリウム無水物 (CH3COONa, MW 82.03) 2)500 mlにメスアップして、 オートクレーブする。 (保存:室温あるいは冷蔵庫で保管する。) 7.5 M 酢酸アンモニウム 200 ml を115.6 g量りとり、滅菌水80 ml加えて溶かす。 1)酢酸アンモニウム (CH3COONH4, MW 77.08) 2)200 mlにメスアップする。 オートクレーブは避ける。滅菌が必要な場合は、 フィルター滅菌を使用。 分解揮発しやすいので、 (保存:冷蔵庫あるいは-20℃で保管する。) 10×TBE 1 L 1)以下を用意する。 ・Tris(hydroxymethyl)aminomethane (MW 121.2) ・ほう酸 (H3BO3, MW 61.83) ・0.5 M EDTA (pH 8.0) 2)以上を溶かし、水で1 Lにメスアップする。 3)オートクレーブして保存する。 (保存:室温で保管する。) 60.55 g(最終濃度 500 mM) 30 g(最終濃度 485 mM) 40 ml(最終濃度 20 mM) 50×TAE(Tris-Acetate-EDTA) 1 L 1)以下を用意する。 ・Tris(hydroxymethyl)aminomethane (MW 121.2) 242 g(最終濃度 2 M) 57.1 ml(最終濃度 1 M) ・酢酸 (99.7%,17 mol/L) 100 ml(最終濃度 50 mM) ・0.5 M EDTA (pH 8.0) 2)以上を溶かし、水で1 Lにメスアップする。 (保存:室温で保管する。) CIA(Chloroform/Isoamyl alcohol) 250 ml 1)以下を用意する。 240 ml ・クロロホルム (CHCl3, MW 119.38) ・イソアミルアルコール (Isoamyl alcohol, MW 88.15) 10 ml 2)混合する。 (保存:室温で保管する。取り扱いはドラフト内で、手袋を着用しておこなうこと。) TE飽和フェノール 1)500 gのフェノール結晶をガラスのメディウム瓶に移し、65℃のウォーターバスに入れて溶かす。 2)フェノールが溶けたら、0.5 gの8-ヒドロキシキノリン (最終濃度0.1%) を加える。 ※8-ヒドロキシキノリンは酸化防止剤として加えている。 また、黄色に着色されるのでフェノール層を判別しやすくなる。 (pH 8.0) を加え、 よく混合する。 3)400 mlの0.5 M Tris-HCl buffer (水層) を除去する。 4)しばらく静置して2層に分離したら、上層 この際、 フェノールの酸化を防ぐため、少し残すと良い。 5)保存中の酸化防止のため、 さらに400 ml の0.5 M Tris-HCl bufferを加え混合し、2層の状態で保管する。 使用するのは、下層のフェノール層になる。 また、使用時は必ず手袋を着用すること。 (保存:遮光して冷蔵庫で保管する。) PCI(Phenol/chloroform/Isoamyl alcohol DNA用) 500 ml 1)以下を用意する。 ・TE飽和フェノール 250 ml 240 ml ・クロロホルム (CHCl3, MW 119.38) ・イソアミルアルコール (Isoamyl alcohol, MW 88.15) 10 ml 2)混合する。 (保存:室温で保管する。取り扱いはドラフト内で、手袋を着用しておこなうこと。) 66 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp DNA分子量マーカーの泳動例&模式図 Appendix 1.5% PrimeGel Agarose LE 1-20K GAT 1% PrimeGel Agarose LE 1-20K GAT 1% PrimeGel Agarose LE 1-20K GAT 1.5% PrimeGel Agarose LE 1-20K GAT * 3% PrimeGel Agarose PCR-Sieve 3% PrimeGel Agarose PCR-Sieve 1.5% Agarose L03「TAKARA」 3% PrimeGel Agarose PCR-Sieve 50 bp DNA Ladder 250 bp DNA Ladder * * 3% PrimeGel Agarose PCR-Sieve 3% PrimeGel Agarose PCR-Sieve * * 1% Agarose L03「TAKARA」 1% Agarose L03「TAKARA」 * :Loading Dyeを含むタイプがあります。 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ http://catalog.takara-bio.co.jp 67 Appendix 1% Agarose L03「TAKARA」 1% Agarose L03「TAKARA」 DL2,000 DNA Marker 0.4% Agarose L03「TAKARA」 1% PrimeGel Agarose LE 1-20K DL5,000 DNA Marker * 3% PrimeGel Agarose PCR-Sieve * * * * 1% Agarose L03「TAKARA」 * :Loading Dyeを含むタイプがあります。 68 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp アガロース用途一覧ガイド 核酸関連 ◎:使用推奨 ◯:使用可能 PrimeGel Agarose LE 1-20K GAT PrimeGel Agarose GOLD 3-40K PrimeGel Agarose LMT PCR-Sieve GAT PrimeGel Agarose LMT 1-20K GAT ◎ 1 kbまでのフラグメントの分離 1 kb以上のフラグメントの分離 ◎ ◎ ◎(PFGE) ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ ◎ 2 ~ 6 Mbのフラグメントの分離 高ゲル強度 低濃度ゲル ◎ Appendix Genetic Technology Grade ○ 高移動度 ○ ○ ◎ ◎ 制限酵素処理 ○ ○ ライゲーション ○ ○ ○ ○ ○ ○ PCR ○ ○ シーケンシング ○ ○ ◎ ◎ ブロッティング サンプル回収 In-Gel クローニング 反応 DNAラベリング ◎ ○ パルスフィールド電気泳動 ○ 低融点アガロース Analytical Grade ◎:使用推奨 ◯:使用可能 L03 H14 ◎ ◎ PrimeGel Agarose PCR-Sieve PrimeGel Agarose PCR-Sieve HRS ◎ ◎ ◎ ○ 1 kbまでのフラグメントの分離 1 kb以上のフラグメントの分離 ブロッティング PrimeGel Agarose LE 1-20K PrimeGel Agarose LMT 1-20K ◎ ◎ ◎ ○ ○ DNAタイピング ◎ 低融点アガロース アガロース選択の目安 1 kb - 10 Mb PrimeGel Agarose GOLD 3-40K PrimeGel Agarose LMT 1-20K GAT 200 bp - 20 kb PrimeGel Agarose LMT 1-20K 200 bp - 20 kb 0 ★ PrimeGel Agarose LE 1-20K GAT 100 bp - 20 kb ★■ PrimeGel Agarose LE 1-20K 100 bp - 20 kb ■ 20 bp - 1 kb ★ PrimeGel Agarose PCR-Sieve 50 bp - 1 kb ■ PrimeGel Agarose PCR-Sieve HRS 20 bp - 1 kb PrimeGel Agarose LMT PCR-Sieve GAT 200 bp 400 bp 600 bp 800 bp 1,000 bp 20,000 bp ■ 高ゲル強度 フラグメントサイズ タカラバイオ ウェブカタログ ▶ ★■ 10,000,000 bp ★ 高純度品 http://catalog.takara-bio.co.jp 低融点 69 Appendix 核酸のアガロースゲル電気泳動 アガロースゲル電気泳動は、遺伝子操作を行う上で必須の手法であり、核酸の分析および分離回収に汎用されている。現在市販されているアガロースは、以 前に比べ品質的にもほとんど問題がなくなっている。 しかし実験目的によっては、高純度のアガロースを用いた方がよい場合、 より適切なものを用いた方がよい 場合もある。 タカラバイオでは種々の実験目的にかなうアガロースを多種類取り揃えている。 実験目的別アガロースゲルの適性 DNA 回収 アガロースの種類 使用濃度 分析範囲 1 kb ~ 10 Mb PFGE Electroelution Phenol Extract Southern In-Gel NucleoSpin NucleoTrap Northern Reaction Gel and PCR Clean-up PrimeGel Agarose GOLD 3-40K 0.3 ~ 1.8% +++ +++ - +++ +++ +++ PrimeGel Agarose LE 1-20K GAT 0.6 ~ 2% 100 bp ~ 20 kb ++ +++ - +++ +++ +++ - - PrimeGel Agarose LMT 1-20K GAT 0.75 ~ 2% 200 bp ~ 20 kb ++ +++ +++ +++ +++ + +++ 0.75 ~ 2% 200 bp ~ 20 kb + ++ ++ ++ ++ + - PrimeGel Agarose LE 1-20K 0.6 ~ 2% 100 bp ~ 20 kb + ++ - ++ ++ ++ - Agarose L03, H14 0.5 ~ 2% 500 bp ~ PrimeGel Agarose LMT 1-20K PrimeGel Agarose LMT PCR-Sieve GAT PrimeGel Agarose PCR-Sieve PrimeGel Agarose PCR-Sieve HRS 20 kb + + - + + ++ - 2~ 5% 20 bp ~ 1 kb - +++ +++ ++ +++ + +++ 2~ 5% 50 bp ~ 1 kb - + - + + +++ - 1.8 ~ 5% 20 bp ~ 1 kb - + - + + ++ - +++:もっとも適している ++:充分適している +:適している -:適していない *サンプル調製用gel-plugとして使用 電子レンジを使ったアガロースの溶解 アガロースが溶解するときには、 まず分散、 次に水和、 最後に溶解の3つのステップを経るが、 アガロースをうまく溶かすためのコツは、 バッファー等の溶液にアガ ロース粒子が固まりを作らないように分散させることにある。分散が不充分なまま加熱すると、外側はアメ状で内側は粉末のままの固まりになることがある。 この ような固まりの発生は、 バッファーを撹拌しながらアガロース粉末を加えることで抑えることができる。 このとき、決して温めたバッファーにアガロースを加えてはな らない。 アガロース粒子の水和は時間に依存する。電子レンジによる加熱は素早く温度を上昇させるが、水和のためには充分な時間が必要である。 さらに、 アガロース 粒子の中には若干の溶けにくい “硬い” 粒子が少量含まれているため、 アガロース溶液を型に流し込む前に、溶液中に透明だが溶けていない粒子が存在して いないかをよくチェックすることが望ましい。 突沸は三角フラスコの代わりに溶液の2~5倍容量のビーカーを使うことで防止できる。3%以上の高濃度ゲル (例えばPrimeGel Agarose LMT PCRSieve GAT等) を調製するときは、 さらに大きな容器を使うことをお勧めする。高濃度ゲルを調製するときの注意点は、第一にアガロース粒子が充分分散してい るかをよく確かめることである。高濃度アガロースの場合はなかなか分散しないこともあるため、 そのときはあらかじめバッファーを氷上で10分間ほど冷却しておく と、 アガロース粉末を加えたときに固まりが生じにくくなり、分散しやすい。第二に加熱するとき、最初はゆっくりと温める。 まず “低” または “中” の出力で始め、 そし て突沸を防ぐために時々加熱を止め、容器ごとゆっくりと撹拌する。 操作方法 1)適切な大きさの容器中で、室温または冷却したバッファーを撹拌しながら、 アガ ロース粉末を加える。 2)容器全体の重量を計っておき、 ラップで覆った後蒸気抜きの穴を開け、 電子レン ジにセットする。 3) “中” の強さで20~60秒ごとに止め、撹拌しながら沸騰するまでゆっくりと加熱 する。完全に沸騰したら出力を全開にしてもかまわない。1~3分間沸騰させるこ とでアガロース粒子は完全に水和し、 ほとんどの場合この時点で完全に溶解す る。アガロース溶液を電子レンジで加熱する際は、容器全体が過熱し激しく沸騰 することがあるので、容器を動かしたり、触れたりするときには充分に注意が必要 である。加熱終了後、容器を電子レンジから出し、室温に置いて静かに撹拌しな がら泡を取り除く。火傷を防ぐためにholderや断熱性手袋を使用することが望ま しい。 4)アガロースが完全に溶解したことを確かめるため、溶液をゆっくりと撹拌し、再び よく 重量を計り、必要に応じて蒸発した水分を補うために温めた蒸留水を加え、 混ぜた後50~60℃まで冷却し、型に流し込む。 (注意:時間や出力調整はマイクロ波の強度や溶液の容量により変わります) FMC BioProducts “RESOLUTIONS” Vol. 9 No. 3. 1993より 70 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp pUC19 DNA (2686 bp) の制限酵素切断地図 数字は、TCGCGCGTTTの最初のTを1として、 その位置から制限酵素の最初の認識塩基までの数を表した。円の内側にはpUC19を1ヵ所切断する制限酵素 を列挙した。外側にはクローニングサイトおよび2ヵ所と3ヵ所切断する酵素を列挙し、 ( ) 内はその制限酵素の切断数を示した。 Appendix )2 e Nd BsaX Sap Afl 94 4 178 79 17 761 5 1 71 ae 1 H r10 Cf 31 o 8 Ec 110 l Pf m Ea u 2 40 2 po 41 3 n a B 43 a v A M p Bs A Bsp LU11 16 Amp r 22 1 217 5 7 94 11 Alw 05 Gs N )1 73 5 7 121 (3)1380 Bsp H Bsp 24 ColE Tth111 )1 58 15 2 63 (3) 152 6 (3) 148 Sim 6 (3)1 480 Tth111 (3)141 9 Tth111 (3)1404 Hg i E (2)1387 (3) (3 a Dra Dr 659 683 806 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ oR Ec 2 40 ac S pn 8 40 2 41 7 41 8 Sm H 38 ) 3 3 m c (3 42 35 87 Ba Hin 2) 2)3 di ( u a c ( b G X Pv fi f Ac ) B e (3 434 Sal 9 Bc e 7 40 838 e Ea (3) s S 435 a 441 Af (3) Pst 6 441 p 9 s 4 N (3) Sph 447 B 6 r 7 Bs (3)5 Hind PshB )628 Pvu (2 K a 429 PshB (3)635 Tfi (2)641 Eae (3) Gdi (3)645 Hae (3)680 Ksp632 (3)684 Bs r B (3)737 Tfi (2 )781 A c e (3)746 Nsp Hae (3)806 (3)8 19 Ha e (3) Ec 83 Dr i 0 Bs d (3)8 i (2 78 M )9 Sim me (3)9 08 7 (2 9 ) (3 )9 996 ( (2 3)1 99 )1 01 01 2 5 4 02 )1 50 t (3 )10 Be i (3 Bc i Ec ae H 20 11 (3) aL Ap 159 (3)1 180 Bet (2)1 e Mm 82 (3)12 Hae 2 (2)129 Bcef )1308 Bsp24 (3 Eco57 (2)1333 1 ori (3 Z 22 c la 2674 Sca Pvu (2)2066 Ava (2)2059 Bet (3)1990 Ace (3)1986 Msl (3)1947 35 Bs r D (2)19 24 9 6 (2)1 19 Psp140 9 1 (2) Avi 870 (3)1 859 1 ) PshB (3 2 185 Bcc (3) 37 8 i 1 c ) E (2 813 1 8 ) a 2 Av l ( )176 3 (3 175 3 Bg ) (2 173 im ) )S (2 4 (2 s r D 69 B fi )1 n4 i B (2 H c Bc 4 n Hi 01 n g 2617 25 Xm Bc EcoO109 Aat Ssp 36 (2 a 3 ) (3 229 )2 7 Hin 2 74 1 (3) Afa 22 35 (3) Tat 217 8 (2)2 Bcc 1 (3)2 77 146 Msl (3)21 0 (3) Gd i (3)2 6 087 Bs Sty b 1 18 183 Ap SJ 159 aB Bb 179 e 23 5 39 6 (3 6 39 (2)2683 (3)2670 06 Bsi (2 L Eae 7 Dr i Bs p1 4 Esp3 BspH (3)2639 )2617 Hin1 (3 611 )2 4 (3 42 Bsp2 (2)25 8 53 Bci (3)2 534 BsrB (3)2 H 88 Bsp 24 (3) 65 24 2 63 (3) 81 Ksp l 23 ) Ms 6 36 )2 (3 o5 Ec pa A Ps Nsp (3 )37 Esp3 (2)46 Ace Drd (3)42 (2)9 1 Afa Apa (3)168 Ta t ( H g L (3 2)16 )17 iE 7 7 (2) 181 Hin 1 Bg Av l ( (3) H 2)2 a Pv i 45 e (2 u (3) Ks ) 23 p6 (2 256 5 32 )27 6 (2 (3 )3 ) 06 290 Gene Acc Afl Age Aor 51H Apa Asc Bae Bal Bbv Bgl Bln Bmg Bpl Bpu10 Bpu1102 BsaA BsaB BseR Bsg Bsm BspG Bsp1407 BssH Bst P Bst X Bst1107 CfrA Cla Cpo Dra Drd Dsa EcoE EcoN EcoO65 EcoR EcoT14 EcoT22 Eco52 Eco81 Fba Fin Fse Hpa Mlu Mun Nae Nco Nhe Not Nru Nsp Pac PmaC Pme PpuM PshA RleA Sac SanD http://catalog.takara-bio.co.jp SexA Sfi Sgf SgrA SnaB Spe Spl Srf Sse8647 Stu Swa Tth111 UbaD UbaE Van91 Xcm Xho 71 pUC119 DNA (3162 bp) の制限酵素切断地図 Ap a Bsb Ssp L (3 (2)11 8 (2) )177 T a t Ap 201 (2)1 o 67 Ap Psp ( 3 140 )21 o 6 3 Av (3) (3)1 a 22 95 Dr 4 (2) d 30 0 (3 )3 (3 60 B Bsb )3 sa 63 X (2)3 16 (2 )3 55 Esp3 Appendix 数字は、TCGCGCGTTTの最初のTを1として、 その位置から制限酵素の最初の認識塩基までの数を表した。円の内側にはpUC119を1ヵ所切断する制限酵 素を列挙した。外側にはクローニングサイトおよび2ヵ所と3ヵ所切断する酵素を列挙し、 ( ) 内はその制限酵素の切断数を示した。 (3)37 (3)3146 Nsp Bsi Esp3 (2)46 Drd (3)91 (2)3159 BspH (3)3115 )3093 Hin1 (3 087 3)3 4 ( 18 Bsp2 (2)30 0 Bci (3)301 977 BspH (2)2 964 Ssp (3)2 941 2 632 (3) Ksp l 7 Ms 85 2 )2 ( 2 284 9 3 ) 7 (3 )28 73 o5 (3 )27 Ec aL (3 Ap Bsi 6 ra D n Hi p1 Ps 40 26 91 53 26 159 3 35 6 40 9 40 4 Ub Dra 41 A a 2 Bs rd 51 D e Na Bbe 2260 7 Gsu 223 1 91 3 o 21 2176 Ec 08 5 0 1 1 0 Pfl 11 217 m Ea ae H BspM 1693 63 18 AlwN Hg 82 12 iE 59 11 11 6 (3)1635 (3)1596 (3)165 Mme X a Acc Afl Age Aor 51H Apa ApaB Asc Bae Bal Bbv Bgl Bln Bmg Bpl Bpu10 Bpu1102 Bsa B Bse R Bsg Bs Bsp 24 di (2)1491 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ 909 1 (3)71 Hin1 1 (2)72 l g B )732 Avi (2 Pvu (2)752 Ksp632 (3)766 Pvu (2)782 Bfi (2)829 EcoR Bcef (3)863 872 Eae (3) Gdi (3)8 64 Sac 878 Apo Kpn 88 (3)872 4 Ban Sma 888 (2)87 Ava 8 BamH (2)8 893 88 Nsp Xba 899 (3) Acc 917 905 Ps Hinc Pv hB u 9 ( 05 Ps 3) Sal Tfi hB (2)1 105 905 2 1 S ( s 0 e8 (2 3)1 4 )1 38 Ps 7 1 11 t 63 (3 17 1 91 ) 91 Sp 2 0 1 h (3 Hi 9 n )1 17 d 16 (3) 11 0 92 21 3 G 24 Tth (3 Tth 111 )1 96 Tth 111 (3 2 11 ) 1 (3 89 1 ) (3 188 5 (3) )1 178 Ec 85 0 4 o5 6 7 ( 2)1 Bce 809 f (3) Hae 176 8 (3)1 758 p Sa LU Bsp ColE ori 711 82 )4 ef (2 )512 Bc (2 n Ba 10 r Cf 7 e 25 Ea p )1 82 (2 Ks 12 ) (3 95 Tfi 12 p (3) Ns 6 e 130 Ha (3) e 4 Ha 135 (3) 384 Eci (3)1 Drd 455 (3)1 Bsi 72 (3)14 Mme )1488 Bci Bet (3 Eci (3)1500 (2)2395 (3)2346 (3)2328 (2)2313 9 (2)228 55 2)22 ( 240 Cfr10 (2)2 29 2 Hin4 (2)2 209 2 ) BsrD 2 ( 70 Bfi 21 (2) 058 2 39 ) 4 (3 )20 Hin 2 (3 a 00 Dr )2 a (3 Dr pH Bs p Bs Afl 72 aD 38 )4 (3 lacZ Am p r 3150 a 3093 (3)2466 (3)2423 g Sc 70 27 Bet (2)2411 Msl (3)2400 Avi PshB Eci Ava Bgl Bc IG (3) J Aat 1 M 0 St yS 71 (2 )2 Ms 65 l 3 Gd (3) i 25 8 (3) Pvu 256 2 3 (2)2 Ava 542 (2)2 535 e m 75 n Psp1406 )2 )2 Xm BsrD (3 (3 EcoO109 Eae t Bet ApaL 1 Ta (2 )1 13 5 Bsm BspG Bsp1407 BssH Bst P Bst X Bst 1107 CfrA Cla Cpo Dsa EcoE EcoN EcoO65 EcoR EcoT14 EcoT22 Eco52 Eco81 http://www.takara-bio.co.jp Fba Fin Fse Hpa Mlu Mun Nco Nde Nhe Not Nru Nsp Pac PmaC Pme PpuM PshA RleA Sac SanD SexA Sfi Sgf SgrA SnaB Spe Spl Srf Sse8647 Stu Swa Tth111 UbaE Van91 Xcm Xho pBR322 DNA (4361 bp) の制限酵素切断地図 数字は、 その位置から制限酵素の最初の認識塩基までの数を表した。円の内側にはpBR322を1ヵ所切断する制限酵素を Eco R 認識部位の中央を0として、 列挙した。外側には2ヵ所と3ヵ所切断する酵素を列挙し、 ( ) 内はその制限酵素の切断数を示した。 Appendix (3 (2 pr Am 4 305 E 000 3 (2) E1 ( ol )5 Ba n (2 )4 85 28 (2 )4 71 (3)164 (2 Afa B Eco sm 1 353 T1 Av 4 1 36 a 142 9 EcBal 144 5 10 oE 14 4 15 57 80 Van9 1 Van 91 Pp uM Ds a Pp (2) (2 )1 15 (2) 364 143 8 47 )1 (3 (2)13 (2)1 14 uM v p nc Hi BspG (3)1134 Hae (3)1137 Bcef (3)1151 Bgl (3)116 3 Bb A aL 7 78 )2 (3 i Bc or ef 59 9 3)2 C 57 Eco ) (2 (2 9 (3)92 Bgl )1045 (2 ApaB Bsp G (3)1057 48 0 59 4 タカラバイオ ウェブカタログ ▶ Bsb Tat 999 (3)1 G 29 Bsp (2)20 Xmn 3 (3)206 Bcg BsmA (3)2117 Drd (2)2162 Bc i Bs (2 i ) Drd (3 268 ) 2 (2) 2646 25 75 Bsr B (2)2 Ksp 632 404 (2)2 351 HgiE (2)229 3 ApaB (2)2291 ApaL (3)2289 Afa (3)2280 (2)2279 Acc (2)2244 (2)2189 (2) 28 (3 51 )6 4 9 )5 08 )7 c (3 731 ) Ac g 3 ( Bc v 756 Bb (2) 8 0 1 Pfl1 50 16 64 16 68 u sg 16 Bp B c Ac aB 64 Bs u 20 Pv 2117 Esp3 Hgi 84 N Alw 73 (3)3230 2 62 1 h 5 6 p S oN 2 l 71 Ec Sa A Psh 939 52 Eco 72 Nru 9 55 BspM 10 4359 Dra 37 Pst 33 36 Psh 07 B 353 Eco3 1 3 7 Eam1105 428 3361 44 (3)3249 u tr 480 BsmA (3)342 8 B sr D (2 )3420 Pfl1108 (2)3382 Hae (3)336 1 Dra Pv 38 (3)3 f ce B Te 2 a Bgl sa D EcoR 4284 4168 360 Sc (2) 84 5 4 2 24 D B 88 Afl Bsp Sap LU 2350 11 Nde 2295 S tyS J 2271 Bst1107 22 44 2225 BsaA 17 22 1 11 Tth Bsr 84 Apo Aat Ssp )3 )3 )3 an Cla 23 Hind 29 EcoR 185 N Ba he 229 m Sg H rA 37 5 40 9 56 2 t Hae Bbv (3)4345 Bsi (3)4337 9 Bc i (2)42005 (2)42 BsrB 8 9 (3)41 BsmA 155 (2)4 8 6 32 404 Ksp (2) 57 33 40 Ec o (3) 4030 1 ) aL (3 )396 1 Ap i (2 94 07 3 Bs ) (3 )39 05 n Xm ra (2 )39 D b (2 Bs nc Hi g Bc a f A Ta (3 (3)12 Cold Spring Harbor Symposium Gene Gene Afl Age Apa Asc Bae Bgl Bln Bmg Bpl Bpu1102 BsaX BseR Bsp1407 BssH Bst P Bst X Cfr A Cpo Dra Drd EcoO65 EcoT22 Eco81 Fba Fse Hpa Kpn Mlu Mun Nco Not Nsp Pac PmaC Pme RleA Sac Sac SanD SexA Sfi Sgf http://catalog.takara-bio.co.jp Sma SnaB Spe Spl Srf Sse8387 Sse8647 Stu Swa UbaD UbaE Xba Xcm Xho 73 ライセンスについて ラベルライセンス[L13b] :ColdShock & MazF This product is covered by the claims of U.S. Patent No.5,981,280, 6,686,174 and their foreign counterpart patent claims, assigned to the UMDNJ. This product is covered by the claims of U.S. Patent No.6,479,260, 6,897,042 and their foreign counterpart patent claims. ラベルライセンス[L20] :mRNA Interferase ライセンスについて This product is the subject of the pending U.S. patent application and its foreign counterparts. ラベルライセンス[M4] : 8387 I This product is covered by the claims of U.S. Patent No. 5,179,016. 商標について EpiScope はタカラバイオ株式会社の登録商標です。 Interferase, PrimeGel はタカラバイオ株式会社の商標です。 は宝ホールディングス株式会社の登録商標です。 他社の商標について SYBR は Molecular Probes Inc. の登録商標です。 MethylEasy は Human Genetic Signatures 社の商標です。 本ハンドブックに記載されている商品名は、特に記載がなくても各社の商標、 または登録商標です。 74 最新情報は 『タカラバイオウェブサイト』▶ http://www.takara-bio.co.jp プライスリスト 76 80 1. 本プライスリスト記載の製品は、 すべて研究用として販売しております。 ヒト、動物へ の医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。 また、食品、化粧品、家庭 用品等として使用しないでください。 タカラバイオ㈱の承認を得ずに製品の再販・譲渡、再販・譲渡のための改変、商 用製品の製造に使用することは禁止されています。 2. 単位UはUnitの略であり、各製品の活性の定義に基づいた表示です。 3. 本プライスリスト記載の価格は希望小売価格です。 また、価格には消費税は含まれ ておりません。 4. 本プライスリスト記載の内容は2014年10月1日現在のものです。価格は予告なし に変更することがありますのでご了承ください。 最新情報については、 ウェブカタログでご確認ください。 5. 本プライスリストに記載されている商品名等は、特に記載はなくても各社の商標ま たは登録商標です。 メーカー略称 TKR: タカラバイオ (株) ■バルク・特別分注品について 本カタログに掲載している制限酵素全製品について、 バルク対応や特別分注 等、柔軟に対応可能です。 下記お問い合わせフォームよりご連絡ください。 https://www.takara-bio.co.jp/goods/bulk/bulk_entry.php プライスリスト 製品コード順 アルファベット順 プライスリスト/製品コード順 プライスリスト / 製品コード順 製品コード 76 1001A 1001B 1002A 1002B 1004A 1004B 1005A 1005AH 1005B 1005BH 1009A 1009B 1010A 1010AH 1010B 1010BH 1012A 1012B 1019A 1019B 1020A 1020B 1021A 1021AH 1021B 1021BH 1022A 1022B 1023A 1023B 1024A 1024B 1025A 1025B 1027A 1027B 1028A 1028B 1034A 1034AH 1034B 1034BH 1035A 1035B 1037A 1037AH 1037B 1037BH 1038A 1038B 1039A 1039B 1040A 1040AH 1040B 1040BH 1042A 1042AH 1042B 1042BH 1043A 1043B 製 品 名 Acc I Acc I Acc II Acc II Alu I Alu I Apa I Apa I(高濃度) Apa I Apa I(高濃度) Bal I Bal I Bam H I Bam H I(高濃度) Bam H I Bam H I(高濃度) Ban II Ban II Bcn I Bcn I Bgl I Bgl I Bgl II Bgl II(高濃度) Bgl II Bgl II(高濃度) Bln I Bln I Bpu 1102 I Bpu 1102 I Bsp 1286 I Bsp 1286 I Bst P I Bst P I Bst X I Bst X I Bst 1107 I Bst 1107 I Cla I Cla I(高濃度) Cla I Cla I(高濃度) Cpo I Cpo I Dra I Dra I(高濃度) Dra I Dra I(高濃度) Eco T14 I Eco T14 I Eco 52 I Eco 52 I Eco R I Eco R I(高濃度) Eco R I Eco R I(高濃度) Eco R V Eco R V(高濃度) Eco R V Eco R V(高濃度) Eco O109 I Eco O109 I 包装量 (U) 100 500 100 500 500 2,500 10,000 10,000 50,000 50,000 20 100 10,000 10,000 50,000 50,000 2,000 10,000 1,000 5,000 1,000 5,000 2,000 2,000 10,000 10,000 400 2,000 150 750 500 2,500 2,000 10,000 1,000 5,000 150 750 1,000 1,000 5,000 5,000 400 2,000 4,000 4,000 20,000 20,000 3,000 15,000 200 1,000 10,000 10,000 50,000 50,000 3,000 3,000 15,000 15,000 2,000 10,000 価格 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥9,500 ¥31,000 ¥31,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥6,500 ¥6,500 ¥25,000 ¥25,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥7,000 ¥7,000 ¥27,000 ¥27,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥10,500 ¥42,000 ¥8,500 ¥8,500 ¥33,000 ¥33,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥9,500 ¥37,000 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥6,500 ¥6,500 ¥25,000 ¥25,000 ¥8,500 ¥8,500 ¥33,000 ¥33,000 ¥9,000 ¥35,000 メーカー略称 掲載ページ TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR 26 26 26 26 27 27 28 28 28 28 28 28 28 28 28 28 29 29 29 29 29 29 30 30 30 30 30 30 31 31 31 31 32 32 32 32 32 32 33 33 33 33 33 33 34 34 34 34 36 36 34 34 35 35 35 35 36 36 36 36 35 35 プライスリスト/製品コード順 製品コード Fba I Fba I Fok I Fok I Hae III Hae III(高濃度) Hae III Hae III(高濃度) Hae II Hae II Hap II Hap II(高濃度) Hap II Hap II(高濃度) Hha I Hha I Hin 1 I Hin 1 I Hin c II Hin c II(高濃度) Hin c II Hin c II(高濃度) Hin d III Hin d III(高濃度) Hin d III Hin d III(高濃度) Hpa I Hpa I Kpn I Kpn I(高濃度) Kpn I Kpn I(高濃度) Mbo I Mbo I Mfl I Mfl I Mlu I Mlu I(高濃度) Mlu I Mlu I(高濃度) Pst I Pst I(高濃度) Pst I Pst I(高濃度) Psh A I Psh A I Sac I Sac I(高濃度) Sac I Sac I(高濃度) Sac II Sac II Sal I Sal I(高濃度) Sal I Sal I(高濃度) Sau 3A I Sau 3A I Sau 3A I(高濃度) Sca I Sca I Sma I 包装量 (U) 500 2,500 1,000 5,000 4,000 4,000 20,000 20,000 1,000 5,000 2,000 2,000 10,000 10,000 2,000 10,000 300 1,500 1,000 1,000 5,000 5,000 10,000 10,000 50,000 50,000 500 2,500 5,000 5,000 25,000 25,000 1,000 5,000 500 2,500 1,000 1,000 5,000 5,000 10,000 10,000 50,000 50,000 200 1,000 2,000 2,000 10,000 10,000 1,000 5,000 3,000 3,000 15,000 15,000 200 1,000 1,000 1,500 7,500 2,000 価格 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 ¥8,500 ¥33,000 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥9,500 ¥37,000 ¥37,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 ¥8,500 ¥33,000 ¥33,000 ¥6,500 ¥6,500 ¥25,000 ¥25,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥7,500 ¥7,500 ¥29,000 ¥29,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 ¥8,500 ¥33,000 ¥33,000 ¥6,500 ¥6,500 ¥25,000 ¥25,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥9,500 ¥37,000 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥9,500 ¥37,000 ¥37,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 メーカー略称 掲載ページ TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR 36 36 36 36 37 37 37 37 37 37 37 37 37 37 37 37 38 38 38 38 38 38 38 38 38 38 39 39 39 39 39 39 39 39 40 40 40 40 40 40 43 43 43 43 42 42 44 44 44 44 44 44 45 45 45 45 45 45 45 45 45 46 プライスリスト / 製品コード順 1045A 1045B 1046A 1046B 1051A 1051AH 1051B 1051BH 1052A 1052B 1053A 1053AH 1053B 1053BH 1056A 1056B 1057A 1057B 1059A 1059AH 1059B 1059BH 1060A 1060AH 1060B 1060BH 1064A 1064B 1068A 1068AH 1068B 1068BH 1069A 1069B 1070A 1070B 1071A 1071AH 1071B 1071BH 1073A 1073AH 1073B 1073BH 1074A 1074B 1078A 1078AH 1078B 1078BH 1079A 1079B 1080A 1080AH 1080B 1080BH 1082A 1082B 1082BH 1084A 1084B 1085A 製 品 名 77 プライスリスト / 製品コード順 製品コード 78 1085AH 1085B 1085BH 1086A 1086B 1088A 1088B 1090A 1090B 1093A 1093AH 1093B 1093BH 1094A 1094AH 1094B 1094BH 1095A 1095B 1107A 1107B 1108A 1108B 1109A 1109B 1111A 1111B 1112A 1112B 1113A 1113B 1116A 1116B 1118A 1118B 1119A 1119B 1120A 1120B 1123A 1123B 1124A 1124B 1125A 1125B 1131A 1131B 1135A 1135B 1145A 1145B 1150A 1150AH 1150B 1150BH 1153A 1153B 1155A 1155B 1160A 1160B 1160BH 製 品 名 Sma I(高濃度) Sma I Sma I(高濃度) Spe I Spe I Stu I Stu I Tth 111 I Tth 111 I Xba I Xba I(高濃度) Xba I Xba I(高濃度) Xho I Xho I(高濃度) Xho I Xho I(高濃度) Xsp I Xsp I Bsp 1407 I Bsp 1407 I Psp 1406 I Psp 1406 I Psh B I Psh B I Smi I Smi I Aat II Aat II Acc III Acc III Afa I Afa I Aor 51H I Aor 51H I Bss H II Bss H II Cfr 10 I Cfr 10 I Eae I Eae I Eam 1105 I Eam 1105 I Eco T22 I Eco T22 I Eco 81 I Eco 81 I Eco O65 I Eco O65 I Mbo II Mbo II Msp I Msp I(高濃度) Msp I Msp I(高濃度) Mun I Mun I Nae I Nae I Nco I Nco I Nco I(高濃度) 包装量 (U) 2,000 10,000 10,000 300 1,500 500 2,500 500 2,500 3,000 3,000 15,000 15,000 5,000 5,000 25,000 25,000 500 2,500 300 1,500 200 1,000 1,000 5,000 200 1,000 100 500 20 100 1,000 5,000 400 2,000 300 1,500 200 1,000 200 1,000 100 500 2,000 10,000 500 2,500 1,000 5,000 400 2,000 3,000 3,000 15,000 15,000 150 750 500 2,500 500 2,500 2,500 価格 ¥8,500 ¥33,000 ¥33,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,000 ¥9,000 ¥35,000 ¥35,000 ¥7,500 ¥7,500 ¥29,000 ¥29,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥10,500 ¥42,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥21,000 ¥73,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥10,500 ¥42,000 ¥7,000 ¥27,000 ¥10,500 ¥42,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,000 ¥35,000 ¥10,500 ¥10,500 ¥42,000 ¥42,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥37,000 メーカー略称 掲載ページ TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR 46 46 46 46 46 47 47 48 48 48 48 48 48 49 49 49 49 49 49 31 31 43 43 43 43 46 46 26 26 26 26 27 27 27 27 32 32 32 32 34 34 34 34 36 36 35 35 35 35 39 39 40 40 40 40 40 40 41 41 41 41 41 プライスリスト/製品コード順 製品コード Nde I Nde I Not I Not I Not I(高濃度) Nru I Nru I Pma C I Pma C I Sse 8387I Sse 8387I Sse 8387I (高濃度) Ssp I Ssp I Taq I Taq I Van 91 I Van 91 I Vpa K11B I Vpa K11B I Bme T110 I Bme T110 I Bsp T107 I Bsp T107 I Aor 13H I Aor 13H I Bsp T104 I Bsp T104 I Nsb I Nsb I Bmg T120 I Bmg T120 I Bci T130 I Bci T130 I Dpn I Dpn I Afl II Afl II Apa L I Apa L I Hin f I Hin f I(高濃度) Hin f I Hin f I(高濃度) Nhe I Nhe I Pvu I Pvu I Pvu II Pvu II(高濃度) Pvu II Pvu II(高濃度) Sfi I Sfi I Sna B I Sna B I Sph I Sph I Rsp RS II Rsp RS II Dde I Dde I mRNA Interferase™-MazF 包装量 (U) 400 2,000 500 2,500 2,500 1,000 5,000 500 2,500 400 2,000 2,000 500 2,500 2,000 10,000 300 1,500 300 1,500 500 2,500 1,000 5,000 1,000 5,000 2,500 12,500 200 1,000 1,000 5,000 2,000 10,000 1,000 5,000 200 1,000 600 3,000 6,000 6,000 30,000 30,000 700 3,500 400 2,000 4,000 4,000 20,000 20,000 1,000 5,000 200 1,000 600 3,000 500 2,500 500 2,500 1,000 価格 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,000 ¥35,000 ¥35,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥37,000 ¥9,500 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1224A 1224B 1225A 1225B 1226A 1226B 1231A 1231B 1232A 1232B 1235A 1235B 1236A 1236B 1237A 1237B 1238A 1238AH 1238B 1238BH 1241A 1241B 1242A 1242B 1243A 1243AH 1243B 1243BH 1244A 1244B 1245A 1245B 1246A 1246B 1247A 1247B 1248A 1248B 2415A 製 品 名 79 プライスリスト/アルファベット順 製 品 名 プライスリスト / アルファベット順 A 包装量 (U) 価格 メーカー略称 掲載ページ Aat II Aat II Acc I Acc I Acc II Acc II Acc III Acc III Afa I Afa I Afl II Afl II Alu I Alu I Aor 13H I Aor 13H I Aor 51H I Aor 51H I Apa I Apa I(高濃度) Apa I Apa I(高濃度) Apa L I Apa L I 1112A 1112B 1001A 1001B 1002A 1002B 1113A 1113B 1116A 1116B 1236A 1236B 1004A 1004B 1224A 1224B 1118A 1118B 1005A 1005AH 1005B 1005BH 1237A 1237B 100 500 100 500 100 500 20 100 1,000 5,000 200 1,000 500 2,500 1,000 5,000 400 2,000 10,000 10,000 50,000 50,000 600 3,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥9,500 ¥31,000 ¥31,000 ¥9,500 ¥35,000 TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR 26 26 26 26 26 26 26 26 27 27 27 27 27 27 27 27 27 27 28 28 28 28 28 28 Bal I Bal I Bam H I Bam H I(高濃度) Bam H I Bam H I(高濃度) Ban II Ban II Bci T130 I Bci T130 I Bcn I Bcn I Bgl I Bgl I Bgl II Bgl II(高濃度) Bgl II Bgl II(高濃度) Bln I Bln I Bme T110 I Bme T110 I Bmg T120 I Bmg T120 I Bpu 1102 I Bpu 1102 I Bsp 1286 I Bsp 1286 I Bsp 1407 I Bsp 1407 I Bsp T104 I Bsp T104 I Bsp T107 I Bsp T107 I 1009A 1009B 1010A 1010AH 1010B 1010BH 1012A 1012B 1232A 1232B 1019A 1019B 1020A 1020B 1021A 1021AH 1021B 1021BH 1022A 1022B 1207A 1207B 1231A 1231B 1023A 1023B 1024A 1024B 1107A 1107B 1225A 1225B 1223A 1223B 20 100 10,000 10,000 50,000 50,000 2,000 10,000 2,000 10,000 1,000 5,000 1,000 5,000 2,000 2,000 10,000 10,000 400 2,000 500 2,500 1,000 5,000 150 750 500 2,500 300 1,500 2,500 12,500 1,000 5,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥6,500 ¥6,500 ¥25,000 ¥25,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥7,000 ¥7,000 ¥27,000 ¥27,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 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36 36 36 36 36 36 36 36 Fba Fba Fok Fok 1045A 1045B 1046A 1046B 500 2,500 1,000 5,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 TKR TKR TKR TKR 36 36 36 36 C D E F I I I I プライスリスト / アルファベット順 Bss H II Bss H II Bst 1107 I Bst 1107 I Bst P I Bst P I Bst X I Bst X I 包装量 (U) 81 製 品 名 プライスリスト / アルファベット順 H 包装量 (U) 価格 メーカー略称 掲載ページ Hae II Hae II Hae III Hae III(高濃度) Hae III Hae III(高濃度) Hap II Hap II(高濃度) Hap II Hap II(高濃度) Hha I Hha I Hin 1 I Hin 1 I Hin c II Hin c II(高濃度) Hin c II Hin c II(高濃度) Hin d III Hin d III(高濃度) Hin d III Hin d III(高濃度) Hin f I Hin f I(高濃度) Hin f I Hin f I(高濃度) Hpa I Hpa I 1052A 1052B 1051A 1051AH 1051B 1051BH 1053A 1053AH 1053B 1053BH 1056A 1056B 1057A 1057B 1059A 1059AH 1059B 1059BH 1060A 1060AH 1060B 1060BH 1238A 1238AH 1238B 1238BH 1064A 1064B 1,000 5,000 4,000 4,000 20,000 20,000 2,000 2,000 10,000 10,000 2,000 10,000 300 1,500 1,000 1,000 5,000 5,000 10,000 10,000 50,000 50,000 6,000 6,000 30,000 30,000 500 2,500 ¥9,500 ¥37,000 ¥8,500 ¥8,500 ¥33,000 ¥33,000 ¥9,500 ¥9,500 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TKR TKR TKR TKR 39 39 39 39 40 40 40 40 40 40 50 40 40 40 40 40 40 Nae Nae Nco Nco Nco 1155A 1155B 1160A 1160B 1160BH 500 2,500 500 2,500 2,500 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥37,000 TKR TKR TKR TKR TKR 41 41 41 41 41 K I I(高濃度) I I(高濃度) M N 82 製品コード I I I I I(高濃度) プライスリスト/アルファベット順 製 品 名 製品コード 包装量 (U) 価格 メーカー略称 掲載ページ 1161A 1161B 1241A 1241B 1166A 1166B 1166BH 1168A 1168B 1226A 1226B 400 2,000 700 3,500 500 2,500 2,500 1,000 5,000 200 1,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,000 ¥35,000 ¥35,000 ¥8,500 ¥33,000 ¥9,500 ¥35,000 TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR 41 41 41 41 42 42 42 42 42 42 42 Pma C I Pma C I Psh A I Psh A I Psh B I Psh B I Psp 1406 I Psp 1406 I Pst I Pst I(高濃度) Pst I Pst I(高濃度) Pvu I Pvu I Pvu II Pvu II(高濃度) Pvu II Pvu II(高濃度) 1177A 1177B 1074A 1074B 1109A 1109B 1108A 1108B 1073A 1073AH 1073B 1073BH 1242A 1242B 1243A 1243AH 1243B 1243BH 500 2,500 200 1,000 1,000 5,000 200 1,000 10,000 10,000 50,000 50,000 400 2,000 4,000 4,000 20,000 20,000 ¥9,500 ¥37,000 ¥9,500 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Xho Xho Xho Xsp Xsp 1093A 1093AH 1093B 1093BH 1094A 1094AH 1094B 1094BH 1095A 1095B 3,000 3,000 15,000 15,000 5,000 5,000 25,000 25,000 500 2,500 ¥9,000 ¥9,000 ¥35,000 ¥35,000 ¥7,500 ¥7,500 ¥29,000 ¥29,000 ¥9,500 ¥37,000 TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR TKR 48 48 48 48 49 49 49 49 49 49 T V X 84 製品コード I I(高濃度) I I(高濃度) I I(高濃度) I I(高濃度) I I