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抗体作製 - 和光純薬工業
ポリクローナル 抗体作製 ポリクローナル抗体作製 株式会社 ジャパン・バイオシーラム 02 ジャパン・バイオシーラムは、ウサギをはじめ、多種にわたる動物でのポリクローナル抗体の作製を受託いたします。 抗体作製 対応動物種 ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ニワトリ、モルモット、マウス、ラット、ブタ、その他 サービス 基本免疫スケジュール 内 容 希望納入価格 ・ウサギ２羽 ５回免疫 免疫 （1回目） 予備飼育 免疫 （2回目） 2 Week 免疫 （3回目） 免疫 （4回目） 2 Week 2 Week 免疫 （5回目） ・試採血２回 約 2.5ヶ月 ・力価測定 （ELISA法） ・全採血 1 Week 2 Week 113,600 円/2羽 ※記載金額には、試採血、製品送付費用も含まれております。 免疫前試採血 （Pre） 試採血 （1st） ■ペプチド抗原の場合 ウサギ40日法 免疫スケジュール 内 容 希望納入価格 ・ウサギ２羽 ６回免疫 免疫 免疫 （1回目）（2回目） 予備飼育 3 day 免疫 （3回目） 7 day 免疫 （4回目） 8 day 免疫 （5回目） 7 day 免疫 （6回目） 7 day 免疫前試採血 （Pre） 約2ヶ月 ・試採血２回 ・力価測定 （ELISA法） 7 day 113,400 円/2羽 ・全採血 ※記載金額には、試採血、製品送付費用も含まれております。 試採血 （1st） ■３回免疫法 （ペプチド抗原作製込み） の場合 ３回免疫法 スケジュール 内 容 免疫 （2回目） 免疫 （1回目） 抗原準備 予備飼育 12週間 免疫 （3回目） （Cys除く14AA、>50 %） 4 Week 2 Week 1 Week ※記載金額には、試採血、製品送付費用も含まれております。 ご依頼方法 納 期 希望納入価格 ̶ 3,600 円∼ /回 弊社ホームページにある依頼書フォームへ必要事項をご記入の上、 下記宛先へご連絡ください。 ̶ 3,600 円/回 ■お問い合わせ先 力価測定※ 約1 週間 6,500 円/回 E-mail： [email protected] アフィニティー精製 （∼ 20 ｍL） 約5 週間 86,000 円 硫安精製 （1個体全量） 約4 週間 照 会 IgGプロテイン精製 （∼ 20 ｍL） 約4 週間 58,000 円 血清分注 約1 週間 5,000 円 試採血 ※試採血費用は含まれておりません。 59,500 円/1羽 ・試採血１回 ・全採血 オプション 追加免疫 ・ウサギ１羽 ３回免疫 ・抗原探索、抗原作製 免疫前試採血 （Pre） サービス項目 希望納入価格 ■ホームページ 「和光 ポリクロ」⇒ ジャパン・バイオシーラム ポリクローナル抗体作製 URL： http://wako-chem.co.jp/siyaku/jutaku/antibody/index_03.htm 表示価格はすべて税別価格です。 010 受託カタログ 2016−2017 http://www.wako-chem.co.jp フリーダイヤル：0120-052-099 フリーファックス：0120-052-806 ポリクローナル 抗体作製 ポリクローナル抗体作製 株式会社ホクドー 格には、ELISAによる抗体価確認、追加免疫2回分を含みます。ペプチド抗原のカクテル免疫も下記価格にて承ります。 抗体作製 価格/納期 動物種 系 統 使用動物数 日本白色種 ウサギ (healthy) ニワトリ 白色レグホン マウス BALB/c 3羽 232,000 円 1羽 サフォーク 備 考 期間短縮法も実施しております。 短期間で良好な抗体価を示します。是非ご用命ください。 必要な抗原量はタンパク質1 mg以上/羽、合成ペプチド5 mg以上/羽。 1羽あたりの抗血清量は約50 mL。 2羽 170,000 円 146,000 円 必要な抗原量はタンパク質1 mg以上/羽、合成ペプチド5 mg以上/羽。 1羽あたりの抗血清量は約35 mL。 5匹 130,000 円 160,000 円 必要な抗原量はタンパク質0.25 mg以上/匹、合成ペプチド1 mg以上/匹。 1匹あたりの抗血清量は約0.5 mL。 2匹 日本ザーネン ヒツジ※ 136,000 円 165,000 円 140,000 円 5匹 SD ヤギ※ 1羽 2羽 2匹 Wistar ラット 希望納入価格 180,000 円 3匹 160,000 円 1頭 330,000 円 必要な抗原量はタンパク質1 mg以上/匹、合成ペプチド5 mg以上/匹。 1匹あたりの抗血清量は約5 mL。SDラットは期間短縮法を実施しております。 必要な抗原量はタンパク質10 mg以上/頭、合成ペプチド25 mg以上/頭。 1頭あたりの抗血清量は約1,000 mL。 1頭 390,000 円 1頭 照 会 血清納品の場合 必要抗原量は、タンパク質1 mg以上/頭、合成ペプチド5 mg以上/頭。 1頭あたりの抗血清量は約25 mL。 1頭 照 会 単核球納品の場合 必要抗原量は、タンパク質1 mg以上/頭、合成ペプチド5 mg以上/頭。 1頭あたりの単核球濃度は106 ∼ 107cells/mL。 アルパカ※ 02 ウサギ、マウスをはじめとしてヤギ、ヒツジ等の大型ほ乳動物、およびニワトリを用いた抗血清作製を行っております。価 血清量は免疫個体によって増減します。その他の動物種、系統ならびに多数免疫についてはお問い合わせください。 標準スケジュールはお問い合わせください。ご指定の免疫方法、スケジュールでも可能な限り承りますのでお問い合わせください。 ※動物移送費と購入費は別途請求させていただきます。 基本サービス サービス項目 数 量 追加免疫 （動物種：ウサギ1羽） 1抗原/4 週間 大量採血 （動物種：ウサギ1羽） 血液40 ｍLまで 希望納入価格 10,000 円 備 考 免疫回数は2回。 延長飼育費用および少量採血1回も含みます。 ̶ 4,000 円 ■抗体精製・標識 サービス項目 数 量 希望納入価格 納 期 備 考 1 週間 ̶ 抗体精製 硫安分画 プロテインA精製 アフィニティー精製 陰イオン交換樹脂精製 抗血清・腹水50 mLまで 7,500 円 抗血清・腹水100 mLまで 10,000 円 抗血清・腹水50 mLまで 40,000 円 抗血清・腹水100 mLまで 60,000 円 抗血清・腹水10 mLまで 90,000 円 抗血清・腹水20 mLまで 150,000 円 抗血清・腹水50 mLまで 350,000 円 抗血清・腹水50 mLまで 40,000 円 抗血清・腹水100 mLまで 60,000 円 2 週間 2 週間 硫安分画処理を含みます。 リガンドとして10 mg以上の抗原が 別途必要となります。 2 週間 ̶ 抗体断片化 F(ab） 化 抗体10 mgまで 120,000 円∼ 2 週間 F(ab’ ） 2化 抗体10 mgまで 120,000 円∼ 2 週間 抗体はプロテインAもしくはアフィニティー精 製した状態（IgG)が必要となります。 蛍光色素はFITCです。 抗体標識化 蛍光標識 抗体10 mgまで 90,000 円∼ 2 週間 ビオチン標識 抗体10 mgまで 90,000 円∼ 2 週間 酵素標識 抗体10 mgまで 90,000 円∼ 2 週間 ̶ 酵素はHRP、APです。 ・その他の精製・標識についてはお問い合わせください。 ・上記価格は条件検討が不要な場合の価格です。条件検討が必要な場合には別途お見積もりいたしますので、お問い合わせください。 お見積もり・ご注文には、 本カタログ巻末の「受託サービス見積依頼書」をご利用ください。 表示価格はすべて税別価格です。 受託カタログ 2016−2017 011 モノクローナル抗体作製 02 各メーカーの特長 抗体作製 メーカー 特 長 ,70 株式会社アイティーエム 腸骨リンパ節法を標準使用（マウス・ラット） 皮下免疫法も可能（マウス） ハイブリドーマ株を最短8 週間で作製 腹腔免疫法を標準使用（マウス） 腸骨リンパ節法も可能（ラット） ハイブリドーマ株を6 ヶ月で作製 株式会社ホクドー DNA免疫法によるモノクローナル抗体作製（マウス・ 和光純薬工業株式会社 ラット） ジーンフロンティア株式会社 独自のファージディスプレイによるモノクローナル抗 体作製 株式会社ジャパン・バイオシーラム ハイブリドーマ株を6 ヶ月で作製 腸骨リンパ節法によるモノクローナル抗体作製 （マウス・ラット） ,70 株式会社 アイティーエム 重井医学研究所の特許である 「マウス腸骨リンパ節法」を標準使用して、モノクローナル抗体を作製するサービスです。 初期段階から、担当研究員がお客様と密にコミュニケーションをとりながら進行してまいりますので、抗体産生ハイブ リドーマの確立に際しては、お客様にも安心してご利用いただけます。また、アイティーエムは、国内の抗体作製受託 会社として、初めて公益財団法人ヒューマンサイエンス振興財団の動物実験実施施設認証を取得しており、動物実験委 員会を設置した上で、適正な作業を実施しております。 特長 マウス3匹もしくはラット2匹を使用して実施します。 免疫は1回を原則とし、尾根部注射で行います。 感作リンパ球は従来法（脾臓法）の約25倍のため、抗体産生ハイブリドーマが効率よく作製できます。 最短8 週間でハイブリドーマを確立（納品）することができます。 安価なチャレンジコースを用意しております。 膜タンパクを認識する抗体作製に最適な「フローサイトスクリーニングコース」を用意しております。 各コースについて チャレンジコース 012 標準コース フローサイトスクリーニングコース 内 容 腸骨リンパ節法を用いて、細胞融合を 行う前に必要な抗体が得られる可能性 があるかどうかを最短2 週間で確認す るコースです。 抗体活性を確認した後は、標準コース へと進めることも可能です。 腸骨リンパ節法を用いて、モノクローナ ル抗体を作製するコースです。 標準コースのスクリーニング工程を全て フローサイトメーターで対応します。 対 象 抗体作製が難しいとお考えの抗原をお 持ちの方におすすめです。免疫用抗原 についてはご相談ください。 抗原についてはご相談ください。 抗原がご用意できない場合もご相談く ださい。 GPCRに代表される膜タンパク質に対す る抗体作製に最適です。安定発現株を お持ちの方におすすめです。 受託カタログ 2016−2017 http://www.wako-chem.co.jp フリーダイヤル：0120-052-099 フリーファックス：0120-052-806 ③ 細胞融合・HAT選択 チャレンジコースの流れ 採取したリンパ節を細胞融合し、96ウェルプレートを用いて ① 免疫：（最短 2 週間） 培養します。 尾根部へ免疫いたします。 ※96ウェルプレートは通常4枚です。 02 ※免疫源がお客様から提供がなかった場合 （キャリアタンパク質との結合等） の費用は別途ご請求申し上げます。 ※免疫中にマウスが死亡した場合は、お客様とご相談の上、対応いたします。 ④ 一次スクリーニング ※免疫原以外のサンプルを用いてスクリーニングを行うことも可能です。ご 相談ください。 ※ELISAによるスクリーニングで陽性が得られなかった場合には、費用は請求 いたしません。 ③ 抗体活性測定 ELISAにより、血清の抗体価を測定し、結果をご報告いたし ます。お客様でのスクリーニングをご希望される場合、試血 サンプルをお送りすることも可能です。 ※オプションでのウェスタンブロット、免疫沈降、Cell-ELISA、フローサイ トメーターによる評価も可能です。 抗体作製 ELISAにより一次スクリーニングを行います。 ② 試血 ⑤ 中間報告１ 結果をお客様にご報告し、24ウェルマイクロプレートに移す ウェルを選択していただきます（最大40ウェル）。 ※追加費用で選択ウェル数を増やすことが可能です。 ⑥ 二次スクリーニング ④ 採血・腸骨リンパ節採取 ELISAにより二次スクリーニングを行います。 得られたリンパ球は一時凍結保存を行います。 活性が低かった場合には追加免疫を実施して、脾臓法へ移行 することも可能です。 ⑤ 納品・結果報告 作業報告書と、ご希望により血清サンプルを納品します。 ※血清サンプル量は検体により変動いたしますのでご容赦ください。 ※免疫原以外のサンプルを用いてスクリーニングを行うことも可能です。ご 相談ください。 ※オプションでのウェスタンブロット、免疫沈降、Cell-ELISA、フローサイ トメーターによる評価も可能です。 ⑦ 中間報告2 結果をお客様にご報告し、クローニングする陽性ウェルを選 択していただきます（最大6ウェル）。 お客様でのスクリーニングをご希望される場合、培養上清を ⑥ 標準コースへの移行も可能 お送りすることも可能です。この場合、細胞は凍結保存させ お客様のご希望により、引き続き標準コースへ移行し、細胞 ていただきます。6ウェル以上は有償（4,000 円/ウェル）とな 融合をすることが可能です。 ります。 ※移行する場合、再度お見積もりをさせていただきます。 ※スクリーニング用に追加抗原が必要になります。 ⑧ クローニング 選択された陽性ウェルについて限界希釈法により単クローン 価格/納期 化いたします。 サービス項目 チャレンジコース 希望納入価格 納 期 98,000 円 最短 2 週間 ※追加費用でクローニング数を増やすことが可能です。 ⑨ 中間報告3 ■標準コースへの移行 サービス項目 希望納入価格 細胞融合∼二次スクリーニング 502,000 円 クローニング∼確立 600,000 円 ■オプション サービス項目 希望納入価格 キャリアタンパク質との結合 58,000 円 ウェスタンブロットによる評価 58,000 円 免疫沈降による評価 58,000 円 Cell-ELISA 100,000 円 フローサイトメーターによるスクリーニング 150,000 円 クローニング後の結果をご報告いたします（最低5クローンを 保証）。 ※1回のクローニングで5クローン得られなかった場合は、再クローニングい たします。 ※最終的に5クローン確立できなかった場合は、クローニングからの費用を 10 %割引いたします （最初に6ウェル選択された場合に限ります） 。 ⑩ 抗体産生ハイブリドーマ確立 ⑪ 中間報告4 確立できた抗体のlsotypeを測定し、その結果をご報告いたし ます。 表示価格はすべて税別価格です。 標準コースの流れ ① 免疫：（2 ∼ 3 週間） 尾根部へ免疫いたします（原則1回）。 ※免疫原がお客様から提供がなかった場合 （キャリアタンパク質との結合等） の費用は別途ご請求申し上げます。 ※免疫中にマウスが死亡した場合は、お客様とご相談の上、対応いたします。 ② リンパ節採取 ⑫ 培養・凍結保存 ⑬ 納品（最短8週間） 確立されたハイブリドーマおよび培養上清サンプルと作業報 告書を納品いたします。 アイティーエムより直送いたしますが、ご請求や支払い等は 代理店が承ります。 ※お客様スクリーニング納期により納期は変動いたしますので、予めご了承 ください。 お見積もり・ご注文には、 本カタログ巻末の「受託サービス見積依頼書」をご利用ください。 受託カタログ 2016−2017 013 価格/納期 フローサイトスクリーニングコースの流れ サービス項目 02 免疫∼リンパ節採取∼細胞融合∼ 二次スクリーニング 抗体作製 クローニング∼確立 希望納入価格 600,000 円 納 期※ 最短 8 週間 600,000 円 ※従来の脾臓法による受託も可能です。その場合、納期は約5 ヶ月となります （希望納入価格は同じです）。 ■オプション サービス項目 希望納入価格 キャリアタンパク質との結合 58,000 円 ウェスタンブロットによる評価（15ウェルまで） 58,000 円 免疫沈降による評価（15ウェルまで） 58,000 円 クローニングの追加（1ウェルにつき） 30,000 円 Cell-ELISA（1回につき） 100,000 円 フローサイトメーターによるスクリーニング 150,000 円 基本的な流れは標準コースと同様で、スクリーニングの全工程を フローサイトメーターで対応いたします。 価格/納期 サービス項目 希望納入価格 納 期 フローサイトスクリーニングコース 1,980,000 円 最短 8 週間 ご提供いただくもの 外来性タンパク質を高発現させた細胞株（stable細胞） mock細胞あるいは親株 ・stable細胞が複数種ある場合には、お知らせください。 ・お客様には、念のため遺伝子発現の確認を行っていただいております。 ・細胞内タンパク質あるいは細胞外領域が極端に小さい場合には、免疫応答が低 い （ない） ことがございます。 高密度無血清培養・無血清培養 ,70 株式会社 アイティーエム アイティーエムでは、動物愛護の観点から培養によるモノクローナル抗体取得を推奨しております。 腹水化と異なり、宿主由来のIgGが含まれないメリットがあります。 高密度無血清培養 無血清培養 お手持ちの抗体産生ハイブリドーマをご送付いただき、高密度無 お手持ちの抗体産生ハイブリドーマをご送付いただき、無血清培 血清培養を行います。 養を行います。 ① 無血清培地に順化 ① 無血清培地に順化 ② 抗体産生能の確認 ② 大量培養 ③ 本培養 ③ 培養上清の回収 ④ 培養上清の回収 培養量 希望納入価格 納 期 500 ｍL ∼ 50,000 円∼ 4 週間∼ ⑤ 納品 or 精製 工 程 014 希望納入価格 納 期 培地交換なし、上清1回採取 （1,000 mL） 148,000 円 5 週間∼ 培地交換１回、上清2回採取 （1,000 mL） 198,000 円 8 週間∼ 培地交換なし、上清1回採取 （350 mL） 98,000 円 4 週間∼ 受託カタログ 2016−2017 表示価格はすべて税別価格です。 http://www.wako-chem.co.jp フリーダイヤル：0120-052-099 フリーファックス：0120-052-806 抗体産生ハイブリドーマの保護預かり ,70 株式会社 アイティーエム 希望納入価格 1クローン、1年間、生存確認なし 10,000 円 1クローン、1年間、生存確認あり 20,000 円 表示価格はすべて税別価格です。 抗体精製、断片化、標識・修飾 ,70 抗体作製 内 容 02 お手持ちの抗体産生ハイブリドーマの保護預かりをいたします。 株式会社 アイティーエム お客様のご要望に応じて、各種作業をいたします。 項 目 内 容 希望納入価格 硫安塩析 硫安塩析を実施いたします。 各種アフィニティ̶精製 Protein AおよびProtein G、各種イオン交換、各種アフィニティ̶精製、抗原（抗体） 結合カラム作製を実施いたします。 照 会 抗体の断片化 F（ab ） 2等の作製を実施いたします。 抗体・抗原の標識・修飾 ペルオキダーゼ等の酵素、BSA等を標識または修飾いたします。 ※その他の精製・標識等についてはご相談ください。 抗体作製実績 膜タンパク、核内/細胞内タンパク、病原体関係、糖鎖、低分子、分泌タンパク、抗イディオタイプ抗体等さまざまなターゲットで実績が ございます。 Q&A Q01．マウス腸骨リンパ節法は特許とありましたが A 01．はい、マウス腸骨リンパ節法を用いたモノクローナル抗体 の作製は、日本において特許が成立しています。 【日本国特許（特許第4098796号）】 アイティーエムは特許取得者の重井医学研究所よりライセンスを 受けていますので、腸骨リンパ節法を用いたハイブリドーマの確 立、さらにその作製物を使用するにも、安心してご利用いただけ ます。 Q02．腸骨リンパ節法で抗体産生ハイブリドーマを作製するメ リットは何ですか A 02．腸骨リンパ節法は免疫後2 週間でリンパ節を採取し細胞融 合いたしますので、従来法とは比較にならないほど短期間 で抗体産生の有無を確認できます。また、免疫が１回です ので必要な免疫原も少なくてすみます。さらに、感作リン パ球数の多いリンパ節を使用することでハイブリドーマが 効率よく作製できます。 Q03．抗体作製が難しいと考えている抗原があるのですが A 03．アイティーエムでは安価なチャレンジコースをご用意して おります。マウス腸骨リンパ節法を用いて、細胞融合を行 う前に必要な抗体が得られる可能性があるかを約1 ヶ月で 確認することができます。まずは、ご相談ください。 Q04．チャレンジコースより標準コースへ移行した場合、費用は どうなるのでしょうか A 04．総額で標準コースをご注文いただいた費用となります。詳 細はご相談ください。 お見積もり・ご注文には、 本カタログ巻末の「受託サービス見積依頼書」をご利用ください。 Q05．ペプチドはあるがキャリアタンパクと結合してないのですが A 05．アイティーエムでキャリアタンパク質との結合（オプショ ン）も行っております。詳細はご相談ください。 Q06．スクリーニングは自分でしたいのですが A 06．お客様でのスクリーニングがご希望でございましたら、二 次スクリーニングの培養上清（約1 ml）をお送りいたします ので、ご相談ください。 Q07．ELISA以外の方法でスクリーニングを行って欲しいのです が A 07．標準コースでは、原則としてELISAでのスクリーニングと なりますが、オプションでウェスタンブロット・免疫沈降・ Cell ELISA・フローサイトメトリーをご用意しております ので、ご利用ください。 Q08．ハイブリドーマが確立されたら、精製抗体も欲しいのです が A 08．各種抗体精製もオプションで実施いたします。まずはご相 談ください。 Q09．ペプチド合成から依頼したいのですが A 09．配列をご連絡いただければ、外部委託にてご用意させてい ただきます。なお、その際は購入実費をご請求申し上げま す。まずはご相談ください。 Q10．チャレンジコースは、どのような抗原でも可能ですか A 10．可溶性のタンパク質以外に、 細胞での免疫も可能ですので、 ご相談ください。 受託カタログ 2016−2017 015 マウスモノクローナル抗体作製 モノクローナル 抗体作製 ― 腹腔免疫法 株式会社ホクドー 02 ミエローマ細胞株 （SP2)と脾臓B細胞との腹腔免疫法による、マウスモノクローナル抗体作製サービスです。 抗体作製 サービスの流れ 各項目 内 容 標準納期 BALB/cマウス4匹を用いて免疫感作を行い、ELISA ステップ １ 法による抗体価測定を行います。免疫したマウス4匹 （免疫） 8 週間∼ のうち、 抗体価の優れた1匹を細胞融合に使用します。 備 考 抗体価が上昇しなかった場合は 160,000 円となります。 ミエローマ細胞株（SP2)と脾臓B細胞をPEG法による 細胞融合を行います。HAT培地によるスクリーニン ステップ ２ グを行い、陽性ハイブリドーマ(最大20株）を選択し （細胞融合∼ スクリーニング） ます。第1回目の細胞融合で陽性ハイブリドーマが認 スクリーニング時に陽性ハイブリドーマが 3 週間∼ 認められなかった場合は600,000 円となり ます。 められない場合に限り、第2回目の細胞融合しスク リーニングを行います。 最大5株の陽性ハイブリドーマを用いて限界希釈法に ステップ ３ よるクローニングを行います。クローン化したハイブリ （クローニング∼ ドーマ株のうち1クローンを用いてBALB/cマウス5匹の ハイブリドーマ確立） 12 週間∼ ̶ 腹水採取を行います。1クローンあたり2本の凍結保 存細胞を作製し納品いたします。 価格/納期 サービス項目 希望納入価格 ハイブリドーマ作製(全工程） 1,200,000 円 作製時におけるオプション項目 希望納入価格 納 期 備 考 ６ヶ月∼ ̶ 納 期 備 考 4 週間∼ 場合には別途お見積もりいたします）。 3匹以上の場合の価格です（2匹以下の 腹水採取 BALB/c（2クローン目より） 8,000 円/匹 腹水採取量は2 ∼ 5 mL/匹。 追加クローニング 120,000 円/株 ハイブリドーマ株凍結保存 10,000 円/本 9 週間∼ 最大5 株 ̶ 1本あたり1 mL 腹水採取量は、個体によって増減します。樹立したハイブリドーマ株は、性質的にすべて異なるクローンとは限りませんので、予めご了承ください。 オプション お手持ちのハイブリドーマ株より細胞培養を行い、マウスへの細胞投与および腹水採取を行います。 サービス項目 腹水採取 希望納入価格 BALB/c 8,000 円/匹 ヌードマウス （BALB/c nu/nu） 12,000 円/匹 納 期 備 考 4 週間∼ 場合には別途お見積もりいたします）。 3匹以上の場合の価格です（2匹以下の 腹水採取量は2 ∼ 5 mL/匹。 表示価格はすべて税別価格です。 016 受託カタログ 2016−2017 http://www.wako-chem.co.jp フリーダイヤル：0120-052-099 フリーファックス：0120-052-806 ラットモノクローナル抗体作製 モノクローナル 抗体作製 ― 腸骨リンパ節法 株式会社ホクドー 02 腸骨リンパ節法を用いたラットモノクローナル抗体作製サービスです。 腹腔免疫法によるマウスモノクローナル抗体作製と比べ、短期間でクローンが得られます。 抗体作製 サービスの流れ 各項目 内 容 ステップ １ （免疫） 標準納期 ＳＤラット4匹を用いて免疫感作を行い、ＥＬ Ｉ ＳＡ法によ る抗体価測定を行います。免疫したラット4匹のうち、 3 週間∼ 抗体価の優れた2匹を細胞融合に使用します。 備 考 抗体価が上昇しなかった場合は 160,000 円となります。 ミエローマ細胞株(SP2)と腸骨リンパ節B細胞をPEG ステップ ２ （細胞融合∼ スクリーニング） 法による細胞融合を行います。HAT培地によるスク リーニングを行い、陽性ハイブリドーマ （最大20 株） を選択します。 第1回目の細胞融合で陽性ハイブリ スクリーニング時に陽性ハイブリドーマが 3 週間∼ 認められなかった場合は600,000 円となり ます。 ドーマが認められない場合に限り、第2回目の細胞融 合しスクリーニングを行います。 最大5株の陽性ハイブリドーマを用いて限界希釈法に ステップ ３ よるクローニングを行います。クローン化したハイブ （クローニング∼ リドーマ株のうち１クローンを用いてヌードマウス3匹 ハイブリドーマ確立） 12 週間∼ ̶ の腹水採取を行います。１クローンあたり２本の凍結 保存細胞を作製し納品いたします。 価格/納期 サービス項目 ハイブリドーマ作製（全工程） 作製時におけるオプション項目 ヌードマウス 腹水採取 （２クローン目より） 追加クローニング ハイブリドーマ株凍結保存 希望納入価格 1,300,000 円 納 期 備 考 4 ヶ月∼ ̶ 納 期 備 考 希望納入価格 3匹以上の場合の価格です（2匹以下の場合には別途お 12,000 円/匹 4 週間∼ 120,000 円/株 9 週間∼ 最大5 株 ̶ 1本あたり1 mL 10,000 円/本 見積もりいたします）。腹水採取量は2 ∼ 5 mL/匹。 腹水採取量は、個体によって増減します。樹立したハイブリドーマ株は、性質的にすべて異なるクローンとは限りませんので、予めご了承ください。 オプション お手持ちのハイブリドーマ株より細胞培養を行い、マウスへの細胞投与および腹水採取を行います。 サービス項目 腹水採取 ヌードマウス 希望納入価格 納 期 12,000 円/匹 4 週間∼ 備 考 3匹以上の場合の価格です（2匹以下の場合には別途お 見積もりいたします）。腹水採取量は2 ∼ 5 mL/匹。 表示価格はすべて税別価格です。 お見積もり・ご注文には、 本カタログ巻末の「受託サービス見積依頼書」をご利用ください。 受託カタログ 2016−2017 017 DNA免疫法による抗体作製 （マウス・ラット） 和光純薬工業株式会社 ライフサイエンス研究所 02 通常の抗体作製は、ペプチドや精製されたタンパク質を抗原とし、動物に免疫して作製しますが、 『DNA免疫法』は発現ベ クターに組み込んだ目的タンパク質の遺伝子を動物に導入し、動物の体内で発現させて、その目的タンパク質を抗原として 抗体作製 抗体を作製、回収する技術です。ドイツのAldevron社で開発された技術を導入したモノクローナル抗体作製サービスです。 特長 精製抗原を調整する必要がありません。 ネイティブフォームのタンパク質を認識する抗体作製が可能です。 複数回膜貫通型タンパク質に対する抗体作製の実績が多数あります。 ホモロジーの高いターゲットに対する抗体作製が可能です。 Protein Type/Localzation Projects 成功率（%） 12/14 85.7 3/3 97.9 膜貫通型タンパク質 TypeⅠ 30/34 88.2 TypeⅡ 3/4 75.0 分泌型タンパク質 GPIアンカータンパク質 MMP 原理 16/28 57.1 細胞内/閣内タンパク質 5/6 83.3 Total success rate : 69/89 77.5 DNA免疫抗体の解析系適合範囲 遺伝情報 タンパク抗原 非変性 リコンビナントタンパク質抗原の 生産・精製 ペプチド断片の合成 DN A免 疫 精製タンパク質抗原 を動物に免疫する 動物体内で抗原タンパク として生産され、それに対応する 抗体が動物体内で生産される 合成ペプチドを動物に免疫する 合成ペプチド ●プルダウン解析 ●ELISA ●FACS ●抗体アレイ ●治療、診断向け研究 変性 部分変性 ●免疫染色 ●パラフィン切片 ●凍結切片 ●ウェスタン ブロッティング ペプチド免疫 バクテリア 組換え タンパク質 抗原免疫 抗体 昆虫細胞 哺乳細胞 DNA免疫 DNA免疫によって得られる抗体はネイティブフォームのタンパク質 を認識するため、 「治療・診断を視野に入れた研究」には最適です。 ただ、変性タンパク質は認識しないケースが大部分のため、ウェス タンブロット用等には不向きです。 アプリケーション例：GPCRに対する機能的なモノクローナル抗体取得 FLIPRアッセイおよびフローサイトメトリーにてFPRL-1レセプターを阻害する抗体を選抜した。 Elagoz, A. 018 .（2004）: A truncated form of CK（b）8-1 is a potent agonist for human formyl peptide-receptor-like（FPRL）1 receptor. . 141（1） : 37-46. 受託カタログ 2016−2017 http://www.wako-chem.co.jp フリーダイヤル：0120-052-099 フリーファックス：0120-052-806 サービスの流れ Feasibility Study：抗体作製戦略の立案 ご依頼いただいた配列情報や使用目的を元に、ターゲットの構造および性質を分析し、抗体作製戦略を提案させていただきます。 抗体作製戦略の立案 性質を踏まえた最適なベクターを選択し、最適な免疫領域および免疫方法、スクリー ニング方法を報告書と共に提案させていただきます。 希望納入価格 納 期 95,000 円 2 週間 Milestone 1：哺乳細胞における抗原の発現解析（フローサイト） 細胞表面での発現確認：上記Feasibility Studyで決定した内容に基づき、ターゲット遺伝子をin-house発現ベクターにクローニング し、免疫プラスミドを作製いたします。それを用いてターゲットの細胞表面での発現レベルを一過性強制発現哺乳細胞を用いてフロー 抗体作製 Feasibility Study 02 具体的には、弊社の持つin-house発現ベクターの中から、ターゲットの構造および サイトメーターで評価します。このステップでの発現レベルが、Milstone 2（免疫）への移行の重要な判断材料となります。このベクター にはあらかじめtag配列が含まれており、発現確認には抗tag抗体を用いてターゲットの発現レベルを確認いたします。 哺乳細胞における抗原の発現解析 希望納入価格 納 期 Normal protein Multiple transmembrane protein 750,000 円 1.5 ヶ月 （cDNA合成※2の納期は含まれません） ※1 ※1 複数回膜貫通タンパク質以外のターゲット ※2 DNA合成を当社で実施する場合は別料金となります。 Milestone 2：抗血清（ポリクローナル抗体）の作製 動物への免疫：作製した免疫用プラスミドを動物に免疫いたします。免疫方法は皮下免疫です。６∼ 10 週間にわたって免疫を行った 後に抗血清を回収します。抗体価をMilestone 1で作製した一過性強制発現細胞を用いてフローサイトメーターで評価します。また、 抗血清は個体ごとに回収し、お客様へ評価用サンプルとしてお送りします。なお、この解析の際に用いる発現ベクターは、免疫に用い たものとは異なるtag配列が挿入されているものを用いるため、tagに対する抗体価は除外されますので、特異抗体価を測定することに なります。 抗血清（ポリクローナル抗体）の作製 動 物※3 マウス Normal protein※1 ラット Multiple transmembrane protein マウス ラット 5匹 10匹 希望納入価格 納 期 450,000 円 ２ヶ月 600,000 円 650,000 円 1,000,000 円 3 ヶ月∼ ※3 マウス=BALB/c、ラット = Wistarの場合の価格。それ以外の系統になる場合は、別途追加料金がかかります。 Milestone 3：モノクローナル抗体の作製 Cellベースのスクリーニング：モノクローナル抗体のスクリーニングは、一過性強制発現細胞を用いたフローサイトメーターとCellELISAによる解析を行います。場合によってはお客様ご指定の細胞を用いて、解析作業/スクリーニングを実施いたします。なお、本ス クリーニングに用いる発現ベクターもMilestone 2血清解析時に用いたものと同様、免疫に用いたものとは異なるtag配列が挿入されて いるものを用いるため、tagに対する抗体は除外されます。 最終的には、特異的反応性を示すハイブリドーマ細胞6クローンの培養上清20mL（増量可能）を納品させていただきます。 モノクローナル抗体の作製 希望納入価格 Normal protein※1 2,100,000 円 Multiple transmembrane protein 2,500,000 円 納 期 2 ∼ 3 ヶ月 Milestone 4：抗体大量生産 腹水生産：ヌードマウス腹水生産により、抗体の大量生産・ protein Gカラム精製もいたします。お客様がお持ちのハイブ リドーマを用いた腹水生産も対応いたします。 モノクローナル抗体の作製 希望納入価格 納 期 ヌードマウスを用いた腹水生産 14,500 円/1匹 ２ヶ月∼ 抗体精製・解析 200,000 円/1抗体 ２週間∼ 表示価格はすべて税別価格です。 参考文献 Nadkarni S .（2014）: Investigational Analysis Reveals a Potential Role for Neutrophils in Giant-Cell Arteritis Disease Progression. . 114 : 242-248, doi : 10.1161/CIRCRESAHA.114.301374 Peitsch C .（2014）: Activation of Influenza A Viruses by Host Proteases from Swine Airway Epithelium. 10.1128/JVI.01635-13 . 88/1 : 282-291. Neumann D .（2013）: Sensitive and Specific Antibody Probes Directed Against The Erythropoietin Receptor − From Basic Studies To Clinical Implementation. Poster 2175 presented at the 55th ASH Meeting, New Orleans 7-10 Dec 2013. ●●ヒト化抗体作製サービス●● DNA免 疫 法 の 技 術 導 入 元 で あ るAldevron社 に て『 ヒ ト 化 抗 体 作 製 サ ー ビ ス 』を 実 施 し て お り ま す。Open Monoclonal Technology社で作製したヒト化ラット『OmniRat』を使用し、DNA免疫法にて抗体を取得するサービスです。 技術融合のメリット ● 幅広いターゲットに対して応用可能 ● 強力な免疫応答の誘導 ● タンパク質 or ペプチドの精製不要 ● ヒト化ステップが不要 ● ネイテイブなタンパク質に対してスクリーニング可能 ● タンパク質のコンタミリスクなし ※本サービスご利用の場合、Open Monoclonal Technology社へのライセンスが発生します。詳細はお問い合わせください。 お見積もり・ご注文には、 本カタログ巻末の「受託サービス見積依頼書」をご利用ください。 受託カタログ 2016−2017 019 モノクローナル 抗体作製 HuCAL®モノクローナル抗体作製サービス 02 HuCAL（Human Conbinatorial Antibody Library）はヒト抗体の多様性を網羅する独自の組換えFab抗体のライブラ リーであり、さまざまな種類の抗原に対して特異性の高い人工抗体を作製するために開発された最高品質のライブラリー 抗体作製 です。独自の技術を利用したファージディスプレイ法により、戦略的な抗体選択法、そしてハイスループットなプロセ スを実現します。 この迅速かつ柔軟で、高度に自動化されたプロセスにより、お客様のご要望に合わせた特殊な特異性を持つ抗体の選択 や抗体フォーマットの調整が可能です。 HuCAL PLATINUM Library 約450億ものパターンからなるHuCAL PLATINUM は世界最大規 Highly Diverse CDR Cassettes 模の高品質抗体ライブラリーです。 このライブラリーは、大きな多様性を持つ相補性決定領域（CDRs） 遺伝子とフレームワークマスター遺伝子の組を基礎とし、 で の発現のために最適化されています。 6 x VL mastergenes 7 x VH mastergenes CysDisplay Technology CysDisplay Technologyは最新の効率的なファージディスプレ 抗体遺伝子 イの方法です。この技術では、開裂可能なジスルフィド結合をファー ジに導入することで、高親和性抗体の効率的な溶出を可能にしてお ジスルフィド結合 ファージコート タンパク質 ファージミド ります。 遺伝子III Fab抗体 gIIIタンパク質 サービスの流れ 酸化型DJ1ペプチドに特異的なHuCAL 抗体の例 プロジェクト概要のご相談 25,000 20,000 Fluorescence [arbitrary units] お見積もりの提示とご注文 抗原のご提出 15,000 10,000 5,000 抗体作製 （最短7 週間） 候補抗体 （5つまで） お届け 0 AbD03054 DJ1- C106 (SO3) - Transferrin 約200 μg DJ1- C106 - Transferrin 1 お客様による抗体の選択 AbD03053 AbD03055 DJ1- C106 (SO3) - BSA BSA Ooe, H., et.al. (2006) Neurosci Lett. 404:166-169 DJ1-C106（SO3）ペプチドではC106のシステイン残基が酸化され Fab抗体のお届け 最終1 mg ています。DJ1-C106 ペプチドは酸化されていない対照試料です。 HCA024（AbD03055）はウェスタンブロッティングで酸化された 必要に応じて追加注文 020 受託カタログ 2016−2017 抗原特異的に高い反応性を示しています。 http://www.wako-chem.co.jp フリーダイヤル：0120-052-099 フリーファックス：0120-052-806 作業内容 抗原の必要量は0.5 mg 抗体作製に必要な抗原量は精製タンパク質の場合、わずか0.5 mgです。抗原として 精製タンパク質、ペプチド、ハプテン等が利用可能です。また、オプションとして、 配列情報からの抗原調製も承ります。 一次スクリーニング 抗原を固相化し、HuCAL PLATINUM®ライブラリと反応させます。結合したファージ は独自の技術CysDisplay®を利用して回収されます。 抗体作製 450億通りのライブラリHuCAL PLATINUM®によるスクリーニング 02 抗原 CysDisplay® ELISAによるスクリーニング 二次スクリーニング 一次スクリーニングで絞り込まれたファージをクローニングし、各々 Fab抗体を発現 させ、抗原特異的なELISA陽性クローンを選定します。 大腸菌による生産と精製 候補抗体の生産 抗体 シーケンシングによりELISA陽性クローンが単一クローンであることを確認し、大腸菌 に導入して抗体を発現します。得られたFab抗体をアフィニティークロマトグラフィー により精製して候補抗体を得ます。 最終抗体の作製 候補抗体の中からお客様にお選びいただいた抗体を作製します。 抗体のフォーマットはFab断片一価もしくは二価から選択可能です。また、抗体に各種 タグを付加したり、アルカリフォスファターゼ等との融合タンパク化することも可能です （一部オプションとなります） 。 価格/納期 希望納入価格 納 期 1,500,000 円 7 週間∼ 表示価格はすべて税別価格です。 ライセンス HuCAL 抗体およびその付随物は全て での研究用途に限定してデザインおよび開発されています。お客様にはこの限定された用途のた めにご提供させていただいております。これ以外の用途へのご使用を希望される場合はお問い合わせください。 お見積もり・ご注文には、 本カタログ巻末の「受託サービス見積依頼書」をご利用ください。 受託カタログ 2016−2017 021 モノクローナル 抗体作製 マウスモノクローナル抗体作製 ― 皮下、腹腔内免疫法 株式会社 ジャパン・バイオシーラム 02 マウスモノクローナル抗体を作製するサービスです。 抗体作製 サービスの流れ ステップ 1 マウス免疫∼抗体価測定 希望納入価格 120,000 円 納期…約2 ∼ 3 ヶ月 抗原１種につきBALB/cマウス３匹に免疫いたします。 4回の免疫後ELISAにて力価測定を行います。細胞融合に十分な力価であるかご相談いたします。 力価が低い場合は、2回追加免疫を継続いたします。ELISA法で力価測定が不可能な場合は、予めご相談ください。 スケジュール 免疫回数 マウス搬入予備飼育 1 回目 1週間 2 回目 2週間 力価測定 3 回目 2週間 4 回目 2週間 5 回目 2週間 抗体価測定 低い 5 回目 6 回目 2週間 7 回目 2週間 抗体価測定 低い 免疫中止 ステップ 2 細胞融合∼陽性クローン確認 ステップ 3 モノクローナル抗体産生ハイブリドーマの樹立 細胞融合 良好 免疫継続 力価測定 回 数 3日間 3日後 良好 細胞融合 要相談 希望納入価格 480,000 円 納期…約2 ヶ月 最後の免疫後、細胞融合を行います。 目的ハイブリドーマ確認のため、ELISAにてスクリーニングいたします。 陽性クローンを10クローン獲得し、24ウェルプレートまで拡大培養し凍結細胞を作製いたします。 凍結時の培養上清を送付いたします。 希望納入価格 300,000 円 納期…約2 ヶ月 ステップ 2で得た陽性ハイブリドーマより2クローンをクローニングし、単一のモノクローナル抗体産生ハイブリドーマ（2株）を 樹立します。樹立ハイブリドーマ（2株）および培養上清（2株分）を送付いたします。 ハイブリドーマの樹立数はご相談に応じます。 価格/納期 サービス項目 ハイブリドーマ（2株） 作製一式 モノクローナル抗体 含有腹水作製（BALB/cマウス） モノクローナル抗体 含有腹水作製 モノクローナル抗体硫安精製 モノクローナル抗体プロテイン精製 （∼ 20 mL） オプション 希望納入価格 納期 900,000 円 約６ヶ月 9,000 円/匹＊ 約2 ヶ月 14,500 円/匹 約3 ヶ月 ＊ お問い合わせください 約２ 週間 58,000 円/回 約２ 週間 ＊ご依頼は、3匹∼とさせていただきます。 モノクローナル抗体腹水化の受託サービスも取り扱っております。 お問い合わせください。 腹水化のプロトコール プリスタン接種 マウス搬入予備飼育 1週間 細胞接種 3週間 腹水回収 10∼14日後 硫安精製はオプションにて対応可能です。 腹 水 回 収 → 遠 心 操 作（ 血 液 成 分 等 の 除 去 ） → 硫 安 精 製（ オ プ ション）（50％飽和2回実施） その他、ご希望がございましたら、お気軽にお問い合わせください。 【お問い合わせ先】E-mail：[email protected] 022 受託カタログ 2016−2017 表示価格はすべて税別価格です。 http://www.wako-chem.co.jp フリーダイヤル：0120-052-099 フリーファックス：0120-052-806