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反応性蛍光色素とその標識 - Thermo Fisher Scientific
細胞生物学カタログ 2012-2013 Chapter 2 反応性蛍光色素とその標識 Molecular Probes® / Antibody 製品： 2012年8月現在、ライフテクノロジーズから供給している細胞培養用製品を記載しています。このカタログに記載されている製品は、すべ て研究用です。これら研究用製品は、ヒト、動物の診断あるいは治療用としては承認されていません。研究用以外の目的には使用しないで ください。予告なしに仕様の変更、販売を終了することがありますので、予めご了承ください。販売条件はwww.lifetechnologies.com/TC をご覧ください。 価格： 記載価格は2012年8月現在の希望小売価格（単位：円）で、消費税は含まれていません。価格・包装等は予告なしに変更する場合がありま すので、予めご了承ください。なお、本価格には荷造費・運送費・保険料等の諸経費は含まれておりません。実費を申し受ける場合もあり ますので併せてご了承ください。 バルク包装： 本カタログ記載以外の包装・バルクにつきましては、当社営業部へご相談ください（TEL：03-6832-9300）。 注文： 製品番号ならびに製品名が似ている製品が多々ございます。ご注文の際には正確に製品番号、製品名、サイズ、数量等をご記入ください。 配送： 原則として製品は当社取扱販売店へ配送いたします。当社取扱販売店からの午後2時までのご注文を翌日お届けいたします。金曜日のご注 文は月曜日にお届けします。なお、温度の影響を受けやすい−70℃保存品につきましては、ご要望に応じてお客様への直送も承っております。 直送 できます ：対象となる製品は、このマークが目印です。ご注文時に直送希望の旨を当社取扱販売店へご連絡ください。 返品： 納品された製品がご注文内容と異なっている、あるいは梱包の不備、製品の破損、または品質上問題がある場合は速やかに対応させていた だきますので、ご購入先の取扱販売店へご連絡ください。上記以外の返品はご容赦願います。また、製品番号ならびに製品名が似ている製 品が多々ございます。ご返品の際は正確に製品番号、製品名、サイズ、数量等をご連絡ください。 保存： 製品の品質上、保存、配送の温度管理は厳重に注意しております。納品、検収後の保存は表示温度を厳守してください。詳細は、マニュア ルまたは、製品添付書をご覧ください。 機器の保証： 機器については販売から1年以内は、通常の使用状況での破損または故障について保証を行ないます。保証にはご希望と状況に応じて修理、 交換、支払金の返却などがございます。 ラベルをお読みください： それぞれの製品のラベルに記載の有効期限に注意し、保存に関する指示を守ってください。当社は、有効期限を過ぎた製品、あるいは不適 当な保存、取扱いによって生じた問題に関しては一切責任を負いません。 毒物・劇物： 毒物及び劇物取締法に基づく該当品は、本文中に以下の略号を記してありますのでご注意ください。毒物、劇物の判定は法令の改正及び新 しい知見に基づき改定されることがあります。 毒 劇 GHS（Global Harmonized System）ルールに基づいた製品ラベルへのピクトグラム表示を順次進めております。 カルタヘナ法： カルタヘナ法の該当の有無については弊社WEBサイト（www.lifetechnologies.com/cartagena/）をご参照、またはテクニカルサポート （TEL：0120-477-392）までお願いいたします。 MSDS（Material Safety Data Sheet）： 製品のMSDSは、当社ホームページ（www.lifetechnologies.com）をご参照ください。 内容についてのお問い合わせはテクニカルサポート（TEL：0120-477-392）までお願いいたします。 カスタムオーダー： 当社では、下記の項目についてカスタムオーダーを受けております。お問い合わせください。 ・カスタムオリゴDNA ・特注培地 ・カスタムcDNAライブラリー ・ペプチド合成／ペプチド抗体 など お客様情報の登録について： 1.ライフテクノロジーズ取扱い製品の中に、ライセンスに関する規定（お客様の情報をライセンス元に連絡することが義務づけられている） のあるものがあります。該当製品ご購入の際に、お客様登録用紙への記載をお願いしております。お客様登録用紙は当社取扱販売店から お渡しいたします。当社ホームページからダウンロードできます。また、各製品の使用説明書にもライセンスに関する記載がございます。 ご使用前に必ずお読みください。 お客様登録 ：対象となる製品は、このマークが目印です。 2.毒素、他該当製品ご購入の際に、弊社指定用紙への記載をお願いしております。 その他： 論文記載時の表記について ライフテクノロジーズの製品をご使用になり、論文に社名を記載される場合は“Life Technologies, Carlsbad, CA USA”とお書きください。 その他関連製品については当社マーケティング部（TEL：03-6832-9350）までお問い合せください。 i Chapter 2 反応性蛍光色素とその標識 反応性蛍光色素とその標識 反応性蛍光色素とそのコンジュゲート （アミン／チオール／アルデヒド／ケトン反応性試薬） 蛍光色素（フルオロフォア） とその反応性誘導体 38 Alexa Fluor®色素 39 BODIPY®色素 48 その他の色素（Cascade Blue® ／フルオレセイン／ Oregon Green® ／テトラメチルローダミン等） 52 光増感剤 67 消光剤 68 架橋剤 69 その他の反応性プローブ 70 ビオチンとハプテン 72 タンパク質標識キット （モノクローナル抗体／ APEX ／ Zenon®） 30 31 74 小動物 in vivo イメージングキット 81 核酸標識キット 82 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog 反応性蛍光色素とそのコンジュゲート （アミン／チオール／アルデヒド／ケトン反応性試薬） Molecular Probes®製品の広範なリストから反応性フルオロフォアまたはハプテンを選択するためには、反応の両側に 関する情報が必要です。通常、標識する分子上の利用できる官能基から、色素またはハプテンの反応性が決まります。 多くは標識分子が放出される実験系や検出機器によってフルオロフォア標識のスペクトル特性（またはハプテンの検出 方法）の適正が決定されます。この情報が手に入ると、実験に最適な反応性色素候補が特定できます。 この章ではMolecular Probes®のフルオロフォアとハプテン上で利用できるさまざまな反応部分について論じ、主なコ ンジュゲーション反応の一般的なガイドラインを示します。これらのフルオロフォアはほぼすべてがいくつかの異なっ た反応に利用でき、したがって以下の製品リストはフルオロフォアのスペクトル特性、吸光率および各化合物の反応性 に応じて反応性色素をグループ分けしています。 光増感剤、消光剤、架橋剤などのいくつかの特殊な反応性分子に加えて、本章では反応性色素やハプテン、タンパク質 と核酸の標識キットを解説し、その全リストおよび必要に応じて精製方法を記載しています。 本章は他の分子と共有結合を形成する色素のみを扱っています。核酸染色（たとえばSYBR® Green核酸染色、エチジウ ムブロマイド）などの分子を非共有結合により標識する色素は本カタログの別の箇所で論じています。 アミン反応性試薬の選択 サクシニミジルエステル（SE）、テトラフルオロフェニル（TFP）エステル、スルホサクシニミジルエステル（SSE） 、 スルホジクロロフェニル（SDP）、4-スルホ-2,3,5,6-テトラフルオロフェニル（STP）エステルなどの活性エステル （図1） イソチオシアネート（ITC）（図2） スルホニルクロライド（SC）（図3） サクシニミジル、テトラフルオロフェニルおよびスルホジクロロフェニルエステルは、色素またはハプテンとタンパク 質の間にきわめて安定なアミド結合を形成するので、タンパク質コンジュゲートに適しています。これらの試薬は十分 に乾燥させると一般に安定で、脂肪族アミンと高い反応性を示し、芳香族アミン、アルコール、フェノール（チロシン を含む）およびヒスチジンとはきわめて低い反応性を示します。TFPエステルはサクシニミジルエステルより加水分解 を受けにくく、SDPエステルはこれら3種類の活性エステルの中では加水分解に対して最も安定です。サクシニミジル エステルと比較して、TFPおよびSDPエステルは水溶液中ではより長い反応時間を示します。 疎水性の高いフルオロフォアの一部のサクシニミジルエステルは水溶液にほとんど溶けないので、用途によっては互換 性のないことがあります。これらのフルオロフォアのカルボン酸誘導体はスルホサクシニミジルエステルまたはSTPエ O O R 1C O N 1 R N C O サクシニミジル エステル F O O + R 2NH2 R C O F F + 2 R NH イソチオシアネート F 1 S 2 S 2 1 R NH C NHR チオ尿素 図2 イソチオシアネートと第一アミンの反応 R 1C NHR 2 カルボキサミド TFPエステル O 1 R SO CI 2 Cl R 1CO SO 3 + 2 R NH スルホニルクロライド 2 1 R SO 2 NH R 2 + HCI スルホンアミド Cl SDPエステル 図3 スルホニルクロライドと第一アミンの反応 図1 サクシニミジル、テトラフルオロフェニル（TFP）またはス ルホジクロロフェニル（SDP）エステルと第一アミンの反応 www.lifetechnologies.com 2 反応性蛍光色素とそのコンジュゲート ︵アミン／チオール／アルデヒド／ケトン反応性試薬︶ アミン反応性色素（表1）はタンパク質やペプチド、リガンド、アミン修飾オリゴヌクレオチドやその他の生体分子を 修飾するために広く用いられています。タンパク質の構造と機能のプローブとしてしばしば用いられるチオール反応性 色素とは対照的に、アミン反応性色素は免疫化学、蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）、細胞トレーシングお よび蛍光アナログ細胞化学の生体コンジュゲートを調製するために最もよく用いられています。アミン反応性色素には 主に以下の3つのクラスがあります。 31 反応性蛍光色素とその標識 ステルに変換することができます。これらのスルホン化誘導体は単純なサクシニミジルエステルより水溶性が高く、コ ンジュゲーション反応に有機溶媒を必要としないことがあります。スルホサクシニミジルエステルは一般に、単にカル ボン酸誘導体色素をN-ヒドロキシスルホサクシニミド（NHSS）および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボ ジイミド（EDAC）を含み、アミンを含まないバッファーに溶解することによりin situで調製することができます。STP エステルは4-スルホ-2,3,5,6-テトラフルオロフェノールから同じ方法で調製され、これらはクロマトグラフィーによっ てスルホサクシニミジルエステルよりも容易に精製できることを見出しています。 表1 Amine-reactivedyes. Fluorophore Alexa Fluor® 350 Abs (nm) 346 Em (nm) 442 COOH * SE * A10168 Alexa Fluor® 405 400 424 A30000, A30100 Alexa Fluor® 430 433 539 A10169 Alexa Fluor® 488 495 519 A20000 †, A20100 † Alexa Fluor® 514 518 540 A30002 † Alexa Fluor® 532 531 554 A20001, A20101MP Alexa Fluor® 546 556 575 A20002 †, A20102 † Alexa Fluor® 555 555 565 A20009, A20109 Alexa Fluor® 568 578 603 A20003 † , A20103 † Alexa Fluor® 594 590 617 A20004 †, A20104 † Alexa Fluor® 610-X 602 624 A30050 Alexa Fluor® 633 632 647 A20005 †, A20105 † Alexa Fluor® 647 650 668 A20006, A20106 Alexa Fluor® 660 663 690 A20007 Alexa Fluor® 680 682 702 A20008, A20108 Alexa Fluor® 700 696 719 A20010, A20110 Alexa Fluor® 750 752 779 A20011, A20111 Alexa Fluor® 790 785 810 A30051 AMCA 349 448 Bimane 380 458 BODIPY® 493/503 500 506 BODIPY® FL 505 513 BODIPY® R6G 528 550 D6180 BODIPY® 530/550 534 554 D2187 BODIPY® TMR 542 574 D6117 (X) BODIPY® 558/568 558 569 D2219 BODIPY® 564/570 565 571 D2222 BODIPY® 576/589 576 590 D2225 BODIPY® 581/591 584 592 D2228 BODIPY® TR 589 617 D6116 (X) BODIPY® 630/650 625 640 D10000 (X) BODIPY® 650/665 646 660 D10001 (X) Other * A30005 (TFP), A30052 (SDP) A6118 (X) B30250 D2191 D2183, D3834 (C5) D2184 , D6140 (SSE) , D6102 (X), D6184 (C5) Cascade Blue® dye 400 420 Cascade Yellow™ dye 402 545 CBQCA 465 560 Dabcyl 453 none D2245 B10006 (STP) C2284 (AA) C10164 A6222 (AD) Dansyl 340 520 ‡ D6104 (X) D21 (SC) Dapoxyl® dye 373 551 ‡ D10161 D10160 (SC) Dialkylaminocoumarin 375 § 435 ** 470 § 475 ** 4',5'-Dichloro-2',7'dimethoxy fluorescein (6-JOE) 522 550 D126 , D1421 D374 , D1412 C6171MP The absorption (Abs) and fluorescence emission (Em) maxima listed in this table are for the goat anti–mouse IgG antibody or dextran conjugates in aqueous buffer. Full spectra for many dyes are available from our website. * COOH = carboxylic acid; SE = succinimidyl ester; (AA) = acetyl azide; (AD) = aldehyde. (AH) = aryl halide; (C5) = pentanoic acid; (CASE) = cysteic acid; succinimidyl ester; (DTA) = dichlorotriazine; (EX) = seven-atom spacer that is more hydrophilic than X; (ITC) = isothiocyanate; (SC) = sulfonyl chloride; (SDP) = sulfodichlorophenol ester; (SSE) = sulfosuccinimidyl ester; (STP) = 4-sulf otetrafluorophenyl ester; (TFP) = tetrafluorophenyl ester; (X) = an aminohexanoyl spacer between the dye and SE. † Mixed isomers. ‡ Emission spectra of dansyl and Dapoxyl® conjugates may vary considerably depending on the dye attachment site and the degree of labeling. Spectral maxima for D374. ** Spectral maxima for D1412. †† Spectral maxima for H1193. continued on next page 32 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog イソチオシアネートもタンパク質のコンジュゲーションに広く用いられていますが、生じるチオ尿素産物は時間とともに 劣化することが報告されています。アミン反応性フルオロフォアの選択肢は増えていますが、蛍光バイオコンジュゲート の調製にはフルオレセインイソチオシアネート（FITC）およびテトラメチルローダミンイソチオシアネート（TRITC）が反 応性色素としてなおも広く用いられています。 スルホニルクロライドは活性エステルやイソチオシアネートより反応性が高く、完全加水分解にも耐えるきわめて安定な スルホンアミドを形成します。しかし、これらの試薬は特に脂肪族アミンとの反応に必要な高pHの水溶液中で速やかに加 水分解するので、したがってルーチンのタンパク質コンジュゲーションには一般に勧められません。 スルホニルクロライドもフェノール（チロシンなど） 、脂肪族アルコール（多糖類など） 、チオール（システインなど）お よびイミダゾール（ヒスチジンなど）と反応しますが、これらの反応はタンパク質や水溶液中では一般的ではありません。 continued from previous page 表1 Amine-reactivedyes. Fluorophore 2',7'-Dichlorofluorescein Abs (nm) 510 Em (nm) 532 COOH * C368 † SE * Other * Eosin 524 544 Fluorescamine 380 464 F2332 E18 (ITC) Fluorescein 494 518 C194 †, C1359 , C1360 , C1904 † C2210 , C6164 , C1311†,F6106 (X) , F2181 (X) †, F6129 (X) †, F6130 (EX), C20050 (C) FQ 486 591 Hydroxycoumarin 385 445 †† H185 , H1428 H1193 Lissamine™ rhodamine B 570 590 LanthaScreen® Tb3+ Chelate Complex 346 548 Malachite green 630 none A10192 (AD) L20 (SC) †, L1908 (SC) † PV3583, PV3582, PV3581 M689 (ITC) 365 460 340 405 M1420MP M10165 Naphthofluorescein 605 675 C652 † NBD 465 535 NDA 419 493 OPA 334 455 Oregon Green® 488 496 524 O6146 O6147, O6149, O6185 (X) Oregon Green® 514 511 530 O6138 O6139 OxyBURST® Green diacetate <300 none D2935 Pacific Blue™ dye 410 455 P10163 Pacific Orange™ dye 404 553 P30253 pHrodo™ dye 560 585 P36600 PyMPO 415 570 S6110 Pyrene 345 378 P130, P6114 (CASE) QSY® 7 560 none Q10193 QSY® 9 562 none Q20131 QSY® 21 661 none Q20132 QSY® 35 475 none Q20133 Rhodamine 6G 525 555 C6127 , C6128 , C6157 † Rhodamine Green™ dye 502 527 R6107 † , R6113 (X) † M1410 C653 † S1167 (X) P2331MP (AD) Rhodamine Red™ dye 570 590 R6160 (X) † SNARF®-1 acetate <300 none S22801 SYBR® 101 494 510 S21500 Tetramethylrhodamine (TMR) 555 580 Texas Red® dye 595 615 580 605 F486 (AH), C20260 (AH) N1138 (AD) O6080 (ITC) † P24 (SC) , O6185 (X) C6121 , C6122 , C300 † C2211 , C6123 , C1171 † , T6105 (X) † T6134 (X) †, T20175 (X) T353 (SC) † , T1905 (SC) †) C6124 , C6156 C6125 , C6126 , C1309 † X491 (ITC) † T1480 (ITC) , T1481 (ITC) , T490 (ITC) † The absorption (Abs) and fluorescence emission (Em) maxima listed in this table are for the goat anti–mouse IgG antibody or dextran conjugates in aqueous buffer. Full spectra for many dyes are available from our website. * COOH = carboxylic acid; SE = succinimidyl ester; (AA) = acetyl azide; (AD) = aldehyde. (AH) = aryl halide; (C5) = pentanoic acid; (CASE) = cysteic acid; succinimidyl ester; (DTA) = dichlorotriazine; (EX) = seven-atom spacer that is more hydrophilic than X; (ITC) = isothiocyanate; (SC) = sulfonyl chloride; (SDP) = sulfodichlorophenol ester; (SSE) = sulfosuccinimidyl ester; (STP) = 4-sulf otetrafluorophenyl ester; (TFP) = tetrafluorophenyl ester; (X) = an aminohexanoyl spacer between the dye and SE. † Mixed isomers. ‡ Emission spectra of dansyl and Dapoxyl® conjugates may vary considerably depending on the dye attachment site and the degree of labeling. Spectral maxima for D374. ** Spectral maxima for D1412. †† Spectral maxima for H1193. www.lifetechnologies.com 2 反応性蛍光色素とそのコンジュゲート ︵アミン／チオール／アルデヒド／ケトン反応性試薬︶ Marina Blue® dye Methoxycoumarin X-rhodamine D16 (DTA) , F143 (ITC) , F1906 (ITC) , F1907 (ITC) 33 反応性蛍光色素とその標識 スルホニルクロライドはジメチルスルホキシド（DMSO）中で不安定であり、これを溶媒として用いることはできません。 これら3種類の主なアミン反応性試薬のクラスに加えて、o-フタルジアルデヒド（OPA） 、ナフタレンジカルボキシアルデ ヒド（NDA） 、3-アシルキノリンカルボキシアルデヒド（ATTO-TAG™）などのアルデヒド試薬CBQCAおよびFQはアミンと 反応としてシッフ塩基を形成します。これらの試薬はいずれもHPLCやキャピラリー電気泳動（CE）だけでなく溶液中の アミンの高感度定量に有用です。その他のアミン反応性試薬としてジクロロトリアジン、ハロゲン化アリール、アシルア ジドなどがあります。 チオール反応性試薬の選択 上述のアミン反応性試薬とは対照的に、チオール反応性色素（表2、次ページ）は生物学的構造、機能および相互作用を 調べるための蛍光ペプチド、タンパク質およびスルフヒドリル-修飾オリゴヌクレオチドを調製するために主に用いられま す。チオール官能基は多くのタンパク質にはあまり含まれておらず、高い選択性で標識できるので、チオール反応性試薬 はタンパク質を指定部位で修飾することが可能です。チオール反応性色素には主に以下の4つのクラスがあります。 ヨードアセトアミドなどのハロアルキル誘導体（図4） マレイミド（図5） Hg-Link™フェニル水銀試薬（図6） TS-Link™チオ硫酸試薬（図7） ヨードアセトアミドはペプチドやタンパク質、チオール化ポリヌクレオチドなどで見出されるすべてのチオールと容易に 反応し、ブロモアセトアミドより若干反応性の高いチオエーテルを形成します。ヨードアセトアミドがタンパク質チオー ルと反応した時に形成されるチオエーテル結合はきわめて安定ですが、バイオコンジュゲートはアミノ酸加水分解中にフ ルオロフォアを失ってS-カルボキシメチルシステインを形成します。ヨードアセトアミドはアミンの遊離塩基と反応しま すが、多くの脂肪族アミンはタンパク質のN-末端に位置するα-アミノ基を除いてプロトン化され、pH8以下では比較的反 応性が低くなります。遊離チオールの非存在下ではヨードアセトアミドはメチオニン、ヒスチジンおよびチロシン残基と 結合することもあります。本来、ヨードアセトアミドは特に溶液中では光に対して不安定であり、したがって反応は遮光 下で行なう必要があります。反応混合液にシステインやグルタチオン、メルカプトコハク酸を添加するとチオール反応性 プローブの反応が止まり、透析やゲルろ過で容易に除去できる水溶性の高い付加物を形成します。 1 R CH X 2 2 + R SH 1 2 R CH SR + 2 ハロゲン化アルキルまたは ハロアセトアミド （X=I、Br、 Cl） HX チオエーテル O 図4 チオールとハロゲン化アルキルの反応 1 R NH C CH2S SO3 R2SH O 1 R N O 1 R N + R2SH O O マレイミド O 2 SR 1 R NH C CH2S SR2 DTT or TCEP チオエーテル 図5 チオールとマレイミドの反応 O 1 R NH C CH2SH + R2SH R1 Hg+ Hg-Link™ フェニル水銀 + R SN O 2 R1 HgSR2 図7 TS-Link™試薬とチオールの反応、 および還元剤による標識の除去 チオレート 図6 Hg-Link™フェニル水銀化合物とニトロシル化チオールの反応 34 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog 表2 チオール反応性色素 Derivative Alexa Fluor® 350 Abs * 346 Em * 442 Maleimide A30505 Alexa Fluor® 405 402 412 Alexa Fluor® 488 495 519 A10254M Alexa Fluor® 532 532 553 A10255 Alexa Fluor® 546 556 575 A10258M Alexa Fluor® 555 555 565 A20346 Alexa Fluor® 568 578 603 A20341M Alexa Fluor® 594 590 617 A10256M Alexa Fluor® 633 632 647 A20342M Alexa Fluor® 647 650 665 A20347 Alexa Fluor® 660 663 690 A20343 Alexa Fluor® 680 679 702 A20344 Anilinonaphthalene † 326 462 M8 (MIANS) Benzophenone 282 NA B1508 B30501 Haloacetamide Alkyl halide Other H30461 (HG-Link™) H30462 (HG-Link™) I7 (IAANS) Bimane 375 456 BODIPY® 493/503 493 503 B30500 BODIPY® 499/508 499 508 D20350 BODIPY® FL 505 513 B10250 BODIPY® 507/545 508 543 BODIPY® TMR 544 570 B30466 BODIPY® 577/618 577 618 D20351 BODIPY® TR 589 617 T30455 (TS-Link™) BODIPY® 630/650 625 640 B22802 ‡, T30456 (TS-Link™) Dibromobimane 394 490 B2103 ‡ T30453 (TS-Link™), B20340 § D6003 D6004 T30454 (TS-Link™) Diethylaminocoumarin 384 470 D10251 †† (DACM) D10252 (DACIA) D404 (DCIA) Dimethylaminocoumarin 376 465 Dimethylamino naphthalene † 391 500 4-Dimethylaminophenylaz ophenyl 419 NA D1521 (DABMI) Eosin 524 544 E1185 Fluorescein 494 518 F1505 Lucifer yellow 426 531 Monobromobimane 394 490 Monochlorobimane 394 490 Naphthalene † 336 490 I14 (IAEDANS) NBD 478 541 I9 §§, D2004 B6057 (badan) I304515, I304526 A433 (acrylodan) B13555 ‡ L1338 M1378 †† (mBBr), M20381 †† ‡‡ (mBBr) M1381MP †† (mBCl) Oregon Green® 488 496 524 O60345 Pacific Blue™ dye 410 455 P30506 Pacific Orange™ dye 403 552 P30507 PyMPO 415 570 M6026 Pyrene † 339 384 P28 QSY® 7 560 NA Q10257 QSY® 9 522 NA Q30457 QSY® 35 475 NA Rhodamine Red™ dye 570 590 R6029M Stilbene 329 408 A485 F486, F6053 ***, C20260 O6010M P29, P2007MP Q20348 A484 continued on next page www.lifetechnologies.com 反応性蛍光色素とそのコンジュゲート ︵アミン／チオール／アルデヒド／ケトン反応性試薬︶ D1379 †† (bBBr) D346 †† (CPM), D10253 (MDCC) 2 35 反応性蛍光色素とその標識 continued from previous page 表2 チオール反応性色素 Derivative Sulfonerhodamine Abs * 555 Em * 580 Maleimide Haloacetamide B10621 ††† Tetramethylrhodamine 555 580 T60275, T60286 T60065 Texas Red® dye 595 615 T6008M T6009M ‡ Alkyl halide Other * Approximate absorption (Abs) and emission (Em) maxima, in nm, for the reagent (if fluorescent) or the fluorescent thiol adduct. † Environmentsensitive fluorophore. ‡ Bromomethyl. Disulfide; undergoes a thiol–disulfide interchange to form a mixed disulfide. **Dansyl aziridine. †† Very weakly Iodoacetate ester. *** Like the NBD probes, ABD-F (F6053) is a benz-2-oxa-1,3-diazole, fluorescent until reacted with thiols. ‡ ‡ FluoroPure™ grade. , except that it is sulfonated (i.e., an SBD probe) instead of nitrated (i.e., an NBD probe); its reaction product with dimethylaminoethanethiol has abs/em maxima of 376/510 nm. ††† Bifunctional crosslinker. 5 = 5-Isomer. , 6 = 6-Isomer. M = Mixed isomers. NA = Not applicable. マレイミドはチオール選択的修飾、定量および分析に広く用いられる試薬です。この反応ではチオールがマレイミドの 二重結合をまたいで付加されチオエーテルを形成します。これらのN-エチルマレイミド（NEM）の蛍光および発色ア ナログの用途はヨードアセトアミドと重複していますが、マレイミドはメチオニンやヒスチジン、チロシンとは反応せ ず、マレイミドとアミンの反応には通常、マレイミドとチオールの反応より高いpHを必要とします。マレイミドの加 水分解により非反応生成物に変化すると、特にpH8以上ではチオール修飾に対して有意に競合するようになります。ピ レンやスチルベン誘導体に加えて7-ジエチルアミノ-3-(4'-マレイミジルフェニル)-4-メチルクマリン（CPM）、N-(7-ジメ チルアミノ-4-メチルクマリン-3-yl)マレイミド（DACM）などいくつかのマレイミドはチオールと結合するまで蛍光を 生じず、したがってチオールの定量に有用です。 Hg-Link™フェニル水銀試薬は遊離チオールと安定なチオレートを形成しますが、ニトロシル化チオール（SNO）など の他のチオール部分と反応することもできます。ヨードアセトアミドやマレイミドによって形成される安定なチオエー テル結合とは異なり、Hg-Link™試薬によって形成されるチオレート結合は塩酸（HCl）やジチオスレイトール（DTT） などの還元剤に対して可逆的です。 TS-Link™チオ硫酸試薬（R-S-SO₃-）は水にきわめて溶けやすく、ジスルフィドと同様に遊離スルフヒドリル基と化学式 通りに反応してジスルフィド結合を形成します。ヨードアセトアミドやマレイミドによって形成される安定なチオエー テル結合とは異なり、TS-Link™試薬によって形成されるジスルフィド結合はジチオスレイトール（DTT）やtris-(2-カル ボキシエチル)ホスフィン（TCEP）などの還元剤に可逆的で当該分子が未変化のまま残ります。 他にもハロゲン化アルキル、ハロゲン化アリル（塩化NBD、フッ化ABD）、蛍光ジスルフィドBODIPY® FL L-シスチン およびN,N'-ジダンシル-L-シスチンなど、さまざまなチオール反応性プローブが販売されています。対称性ジスルフィ ドはチオール-ジスルフィド置換反応を受けて新たな非対称性ジスルフィドを生成します。この反応は完全に可逆的で、 チオールに対して特異的です。蛍光シスチン、TS-Link™およびHg-Link™チオール反応性プローブから生成された共有 結合付加物は、一般にヨードアセトアミドやマレイミドから生成されたものより安定で、フルオロフォアを反応基に結 合させているアミド結合の加水分解に対して若干感受性があります。 アルデヒド反応性試薬またはケトン反応性試薬の選択 アルデヒドとケトンは薬物やステロイドホルモン、還元糖、代謝中間産物（たとえばピルビン酸塩やα-ケトグルタル 酸塩）など多くの低分子量分子に存在します。遊離還元糖を含む多糖類を除き、生体ポリマーは一般にアルデヒドとケ トン基を欠いています。開環型の単純な糖に見いだされるアルデヒドやケトンも通常は閉環型の糖と平衡状態にありま す。アルデヒドとケトンの稀な発生が、これらの官能基を生体分子に選択的に導入する技術を促進し、こうして化学修 飾のためのユニークな部位が得られる様になり、アルデヒドおよびケトン反応性プローブの用途が大きく拡大されまし た（表3、次ページ）。アルデヒドおよびケトン反応性プローブには以下のものが挙げられます。 ヒドラジド、セミカルバジド、カルボヒドラジドなどのヒドラジン誘導体（図8） ヒドロキシルアミン誘導体（アミノオキシ化合物） 8-アミノナフタレン-1,3,6-トリスルホン酸（ANTS）、2-アミノアクリドン、8-アミノピレン-1,3,6-トリスルホン酸 （APTS）などの芳香族アミン（図9） R1 C O R2 R3NHNH2 R1 C NNHR3 R2 図8 ヒドラジン誘導体によるアル デヒドとケトンの修飾 36 1 R C O 2 R 3 R NH 2 1 3 R C NR 2 R NaCNBH 3 1 3 R CH NHR 2 R 図9 アミン誘導体によるアルデヒドとケトンの修飾 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog ヒドラジン誘導体はケトンと反応して比較的安定なヒドラゾンを生成し、アルデヒドと反応して若干不安定ですが速や かに形成されるヒドラゾンを生成します。ヒドロキシルアミン誘導体はアルデヒドとケトンと反応してオキシムを生成 します。ヒドラゾンとオキシムはともに水素化ホウ素ナトリウム（NaBH₄）で還元することができ、結合の安定性がさ らに上昇します。ヒドラジンとヒドロキシルアミン誘導体もアミン様の反応性を有し、薬物やペプチド、タンパク質の 水溶性カルボジイミド-活性化カルボン酸基に結合させることができます。ヒドラジドやヒドロキシルアミンを含む試 薬の蛍光はアルデヒドやケトンとの反応後、特に化学還元後は有意な変化を示さないので、平衡反応の促進に必要ない、 過剰な試薬は洗浄やゲルろ過、透析などによってコンジュゲートから分離しなければなりません。 第一脂肪族および芳香族アミンはアルデヒドやケトンと可逆的に結合させて加水分解に対して不安定なシッフ塩基を形 成することができます。この修飾は可逆性のため、アミンを含む試薬はシッフ塩基を水素化ホウ素ナトリウム（NaBH₄） やシアノ水素化ホウ素ナトリウム（NaCNBH₃）により安定なアミン誘導体に還元することが望まれます。また化学的 還元はアミンの本来の電荷を保持させます。いくつかの芳香族アミンはアルデヒドやケトン、単糖類、炭水化物ポリマー の還元末端に結合するために広く利用されています。 表3 Hydrazine,hydroxylamine,andaminederivatives. Derivative Acridone Hydrazines Hydroxylamines Cadaverines Alexa Fluor® 350 A10439 A30627 A30674 Alexa Fluor® 488 A10436 A30629 Alexa Fluor® 555 A20501MP A30677 Alexa Fluor® 568 A10437 A30680 Alexa Fluor® 594 A10438 A30678 Alexa Fluor® 633 A30634 Alexa Fluor® 647 A20502 Alexa Fluor® 405 2 A30675 A30632 A30676 A30679 A10550 Bimane B30633 B1603, B2600, D20653 A1594, B1596 B30300 t-BOC BODIPY® FL A10550 † M6248 D2371 BODIPY® TR A1593, B1592, N6356 D2390 D6251 Cascade Blue® dye C687, C3221, C3239 Coumarin D355 Dansyl D100 C621 A191 * D113 D112 Dapoxyl® dye D10460 2,3-Diaminonaphthalene D7918 * Dimethoxybenzene D1463 * Dinitrophenyl D1552 Fluo-4 F36201 Fluorescein C356, F121 Lucifer yellow L453 A10466 Naphthalene NBD A91, A350 * M20490 Oregon Green® 488 Pyrene A1351, A1353, A1363 A1339 O10465 P101 A6257 * QSY® 7 Q10464 QSY® 9 Rhodamine Texas Red® dye A1318 T6256 L2424 T2425 * Aromatic amines used extensively for modifying aldehydes and ketones. † ARP is the abbreviation for N-(aminooxyacetyl)-N -(D-biotinoyl)hydrazine. www.lifetechnologies.com 反応性蛍光色素とそのコンジュゲート ︵アミン／チオール／アルデヒド／ケトン反応性試薬︶ ARP † Biotin and DSB-X biotin § Other Amines A6289 * 37 反応性蛍光色素とその標識 蛍光色素（フルオロフォア） とその反応性誘導体 この章ではMolecular Probes®のフルオロフォアと入手可能な反応性誘導体の化学的およびスペクトル特性を要約しま す。ここでは蛍光テクニックとそれが適用される広範な領域に革命をもたらしたAlexa Fluor® 色素シリーズやOregon Green®色素、BODIPY®色素シリーズなどの革新的なフルオロフォアだけでなく、フルオレセイン（FITC）やテトラメ チルローダミン（TRITC）などの古典的な色素と蛍光フィコビリタンパク質のR-フィコエリスリンおよびアロフィコシ アニンについても解説します。 反応性色素や生体分子を標識する際に好ましいコンジュゲートは、溶解度やタンパク質、核酸に対する選択的結合、生 体膜透過性といった未標識生体分子の重要なパラメーターを保持しながら、高い蛍光収量（あるいはハプテニル化コン ジュゲートの場合は適当な標識度）を備えています。しかし、最高の標識度を備えたコンジュゲートはしばしば沈殿や、 非特異的な結合を示します。したがって、機能や結合特異性を保持するためには最大以下の蛍光収量を有する必要があ ります。当社は生体分子の標識における反応性色素の使用方法を記載した詳細なプロトコールを提供しています。これ らの方法は簡単で、特別な装置は必要ありません。コンジュゲーション後に通常はゲルろ過、透析、生体コンジュゲー トの沈殿と再溶解、HPLC、またはこれらのテクニックの組み合わせによりコンジュゲートしていない標識試薬を可能 な限り除去することがきわめて重要です。特に化学反応性を保持した遊離色素が存在すると、生体コンジュゲートのそ の後の実験が非常に複雑になることがあります。当社ではタンパク質と核酸を標識するためのいくつかの特殊なキット も開発しており、その多くは生体コンジュゲートを精製する単純な方法を提供しています。 蛍光によるメリットを十分に活用するためには、検出システムの光学特性に色素特性を対応させることが重要です。色 素を効率的に励起および検出できないと、蛍光度や光安定性などの利点は無意味になります。表4は一般的な蛍光励起 光源の主波長を示しています。 一般に、ある用途に複数の色素を用いる場合は、シグナルを容易に分離するため色素間のスペクトルの重複を最小にし なければなりません。ただし、蛍光エネルギー共鳴転移（FRET）を介して2種類の標的の共存を検出する用途では、最 初の色素の蛍光波長と二番目の色素の励起波長を有意に重複させる必要があります（図10）。 用途や機器に適したフルオロフォアを選択する上での詳細なヘルプに関しては、テクニカルサポートまでお問い合わせ いただくか、当社のオンラインスペクトルビューワをご覧ください。 このjavaをベースとするプログラムにより、5種類までの色素の励起スペクトルと放出スペクトルをプロットすること ができます。また励起および検出フィルターや励起光線を入力することで、お持ちの機器用にプログラムをカスタマイ ズすることができます。最後にプログラムは特定の波長における励起の割合と、指定された放出フィルターの蛍光漏れ の割合を算出できます。 表4 蛍光励起光源 光源 主波長（nm） 水銀アークランプ 366, 405, 436, 546, 578 * キセノンアークランプ 250–1000 * タングステンハロゲンランプ 350–1000 * ブルーダイオードレーザー 405 ヘリウムカドミウムレーザー 325, 442 アルゴンイオンレーザー 457, 488, 514 Nd:YAGレーザー 532 † ヘリウムネオンレーザー 543, 594, 633 イエローダイオードレーザー 561 クリプトンイオンレーザー 568, 647 レッドダイオードレーザー 635 ドナー蛍光 J(λ) アクセプター 吸光 波長 (λ) 図10 FRETスペクトル重複インテグラル *連続白色光源。†第2高調波 38 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog ABD-F スルホン化ベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾールのチオール反応性誘導体のABD-F（7-フルオロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾー ル-4-スルホンアミド）はチオールと反応するまで蛍光を生じず、したがってHPLCやTLCで分離されたチオールだけで なく、溶液中のチオールの定量にも用いることができます。ABD-Fのチオールコンジュゲートは水溶液中では塩化NBD やフッ化NBDで調製したチオールコンジュゲートよりはるかに安定です。また、ABD-Fはいくつかのタンパク質のα- アミノ基だけでなくチロシン残基のヒドロキシル基とも緩やかに反応し、蛍光は生じませんが385nmでの吸光度で検 出できる産物を形成することが報告されています。 反応部分 反応性 Abs ABD-F (7-Fluorobenz-2-oxa- amines, thiols 1,3-diazole-4- sulfonamide) (mercaptans, sulfhydryls) 376 Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 510 ~8000 (methanol) 10 mg F6053 ¥20,100 2.2 アクリドン 2-アミノアクリドンはアミンを含む小さなフルオロフォアで、還元糖、オリゴ糖類およびグリコスフィンゴリピドの 標識に用いられます。蛍光標識糖鎖電気泳動（FACE）によるpmolオーダー以下の誘導産物の検出が報告されています （Electrophoresis 24:611-21(2003)）。この色素のその他の主な用途は、キャピラリー電気泳動（CE）、高速液体クロマト グラフィー（HPLC）などです。 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 2-Aminoacridone aldehydes, ketones 425 531 5200 25 mg A6289 ¥26,400 3.3 近紫外線領域から可視、近赤外線領域のスペクトルにわたってすぐれた蛍光を発するこの色素シリーズは蛍光ラベリン グ試薬開発における主な成功の代表です。これらの色素は例外なく、当社が今まで試験した中でも最良で最も明るいコ ンジュゲートを生成します。色素の色は青から近赤外にわたり、多色検出や蛍光共鳴エネルギー転移（FRET）など多 くのオプションが得られます。Alexa Fluor®とR-フィコエリスリンまたはアロフィコシアニンとのタンデムコンジュゲー トにより、多色用途でのAlexa Fluor®色素の有用性をさらに拡張できます。Alexa Fluor®色素とそのコンジュゲートは下 記の利点を備えています。 明るさ Alexa Fluor® コンジュゲートは同様なスペクトルの他のコンジュゲートより強力な蛍光を示します。 光安定性 Alexa Fluor® コンジュゲートは他の蛍光コンジュゲートより光安定性が高いので、より長い時間、画像を取得できます。 蛍光色素とその反応性誘導体／ Alexa Fluor®色素 2 ® r o u l F a x e l A 反応部分 機器の互換性 Alexa Fluor® コンジュゲートの吸収スペクトルは一 4 35 687 色の選択性 Alexa Fluor® 色素コンジュゲートは青から遠赤外ま で、いくつもの蛍光色が利用できます。 9 1011 12 13 14 15 16 17 18 Fluorescence emission 2 1 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 1. Alexa Fluor® 350 2. Alexa Fluor® 405 3. Alexa Fluor® 430 4. Alexa Fluor® 488 5. Alexa Fluor® 514 6. Alexa Fluor® 532 7. Alexa Fluor® 546 8. Alexa Fluor® 555 9. Alexa Fluor® 568 10. Alexa Fluor® 594 11. Alexa Fluor® 610 12. Alexa Fluor® 633 13. Alexa Fluor® 647 14. Alexa Fluor® 660 15. Alexa Fluor® 680 16. Alexa Fluor® 700 17. Alexa Fluor® 750 18. Alexa Fluor® 790 色素 般的な励起光源の主要出力波長に適合しています。 Wavelength (nm) 図11 AlexaFluor®色素シリーズの放出スペクトル www.lifetechnologies.com 39 反応性蛍光色素とその標識 水溶性 Alexa Fluor® 反応性色素は水に対する溶解度が高く、したがって有機溶媒を用いることなくコンジュゲートでき、保存 中でも沈殿が生じにくくなっています。 pH不感性 Alexa Fluor® 色素は広範なpHにわたって高い蛍光を示します。 AlexaFluor®350色素－明るい青色とUV光で励起可能 強力な青色の蛍光を示すAlexa Fluor® 350色素はUV光で励起可能な標識を行ないたい場合に適しています。スルホン 化クマリン誘導体のAlexa Fluor® 350色素はAMCAやAMCA-Xより水溶性が高く、非スルホン化アナログのAMCAから 作製したタンパク質コンジュゲートより高い蛍光を示します。さらに、Alexa Fluor® 350コンジュゲートはAMCAや AMCA-Xコンジュゲートより最大蛍光波長が若干短い（448nmに対し442nm）ので、Alexa Fluor® 350コンジュゲート の蛍光は広く用いられているグリーンフルオロフォアの蛍光からの分離に優れています。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 346 442 19,000 5 mg A10168 ¥36,100 1.3, 1.7 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 345 444 17,000 1 mg A30505 ¥40,300 2.3 345 445 13,000 5 mg A10439 ¥36,600 3.3, 14.3 353 437 20,000 1 mg A30674 ¥37,700 3.4 353 437 20,000 1 mg A30627 ¥43,400 3.3, 14.3 Hydrazide Cadaverine Hydroxylamine タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76をご覧ください。 AlexaFluor®405－可視光線で励起可能な最適の青色フルオロフォア カスケードブルー、Alexa Flour® 405はブルー（バイオレット）ダイオードの405nm波長にほぼ適応します。これら は緑蛍光色素の重複を最小にし、理想的な多重染色アプリケーションが可能です。しかも、長波長の励起によりAlexa Flour® 405はUVで励起される青色素より明るく、自家蛍光を抑制します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 400 424 35,000 Cadaverine aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 399 422 29,000 サイズ 製品番号 価格 1 mg A30000 ¥56,000 5 mg A30100 ¥216,100 1 mg A30675 ¥37,700 1.3, 1.7, 4.2, 14.3 1.3, 1.7, 4.2, 14.3 3.4, 14.3 Zenon®抗体標識キットに関してはP.78をご覧ください。 AlexaFluor®430－430nmに最大吸光度を有するストークスシフトの大きな色素 400∼450nmの波長を吸収し、水溶液中で500 nmを超える波長の蛍光を発する反応性色素はほとんどありません。当 社のAlexa Fluor® 430色素はこのスペクトルギャップを満たしています。約430nmの最大吸光度付近で励起し、540 nm付近で強力な蛍光を示します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 433 539 15,000 5 mg A10169 ¥36,100 1.3, 1.7 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76をご覧ください。 40 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog AlexaFluor®488－最高のグリーンフルオロフォア Alexa Fluor® 488色素で作製したタンパク質コンジュゲートはフルオレセインのコンジュゲートより優れており、Cy™2 色素などの当社で試験したどのグリーンフルオロフォアのコンジュゲートよりもはるかに優れています。Alexa Fluor® 488コンジュゲートはフルオレセインコンジュゲートより明るい蛍光を発するだけでなく、光安定性もはるかに高く なっています。また、Alexa Fluor® 488フルオロフォアの蛍光は4-10までのpHには依存しません。このpH非感受性が、 pHによって蛍光放出が大きく左右されるフルオレセインより特に優れた点です。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 494 517 73,000 amines 494 520 amines 494 thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids Tetrafluorophenyl ester (TFP) Sulfodichlorophenyl ester (SDP) Maleimide Hydrazide Cadaverine Hydroxylamine サイズ 製品番号 価格 1 mg A20000 ¥48,500 1.3, 4.2 5 mg A20100 ¥216,100 1.3, 4.2 72,000 1 mg A30005 ¥48,500 1.3, 4.2 520 73,000 1 mg A30052 ¥48,500 1.3, 4.2 493 516 72,000 1 mg A10254 ¥37,700 2.2 493 517 73,000 1 mg A10436 ¥36,600 3.3, 14.3 493 516 73,000 1 mg A30676 ¥37,700 3.4 494 518 77,000 1 mg A30629 ¥43,400 3.3, 14.3 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76、P.80をご覧ください。 2 AlexaFluor®514Dye の緑蛍光のAlexa Fluor®は、明るさと光安定性でフルオレセインよりはるかに優れていて、標準的なフルオレセイン、 オレゴングリーンまたはAlexa Fluor® 488の蛍光フィルターセットで蛍光を検出することができます。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 518 540 80,000 1 mg A30002 ¥48,500 1.3 Alexa Fluor® 高度で専門的な検出システム用の試薬です。多重蛍光波長用の画像装置は、5nmの蛍光波長の重なりを区別する能力 を示します。それにより、多重蛍光標識実験で使用できる蛍光波長のパレットを拡大します。Alexa Fluor® 514 は研究 者に視覚的には他と類似していますが、特殊に異なった蛍光プロファイルを提供します。Alexa Fluor® 488のようなこ 色 素 AlexaFluor®532－532nm励起光源に最適な色素 緑蛍光Alexa Fluor® 488色素とオレンジ蛍光Alexa Fluor® 546色素の中間の励起および発光スペクトルを持ちます。 Alexa Fluor® 532色素とそのコンジュゲートは、第二高調波Nd：YAGレーザーなどの532nm励起光源に適しています。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 530 555 81,000 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 528 552 78,000 サイズ 1 mg 5 mg 1 mg 製品番号 価格 A20001 ¥48,500 1.3 A20101MP ¥216,100 1.3 A10255 ¥37,700 2.2 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76、P.80をご覧ください。 www.lifetechnologies.com 41 反応性蛍光色素とその標識 AlexaFluor®546－Cy™3色素やテトラメチルローダミンに代わる蛍光色素 Alexa Fluor® 546色素で作製したコンジュゲートはオレンジ領域のスペクトルを放出する蛍光プローブを必要とする用 途に最適です。これらの強力な蛍光を発するコンジュゲートはテトラメチルローダミン（TRITCおよびTAMRA）やCy™ 3のコンジュゲートより優れた性能を持ち、水銀アークランプの強力な546nm放出光やHe-Neレーザーの543nmスペク トルで容易に励起します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 554 570 112,000 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 554 570 93,000 サイズ 製品番号 価格 1 mg A20002 ¥48,500 1.3 5 mg A20102 ¥216,100 1.3 1 mg A10258 2.2 ¥37,700 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76、P.80をご覧ください。 AlexaFluor®555－Cy™3に代わる色素 Alexa Fluor® 555コンジュゲートのスペクトルはCy™ 3色素のスペクトルに対応しており、Cy™ 3用のフィルターと同じ フィルターが使用できます。しかし、Alexa Fluor® 555コンジュゲートの総蛍光量は高くなっています。また、Alexa Fluor® 555色素は光安定性が高いのでより長時間にわたって画像を取得できます。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 555 572 155,000 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 556 572 554 555 Hydrazide Cadaverine サイズ 製品番号 価格 1 mg A20009 ¥48,500 1.3 5 mg A20109 ¥216,100 1.3 158,000 1 mg A20346 567 150,000 1 mg 572 155,000 1 mg ¥37,700 A20501MP ¥36,600 A30677 ¥37,700 2.2 3.3, 14.3 3.4 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76、P.80をご覧ください。 AlexaFluor®568－568nm励起光源に最適 赤-オレンジ蛍光Alexa Fluor® 568色素は多くの共焦点レーザースキャニング顕微鏡で用いられているAr-Kr混合ガス レーザーの波長568nmで最適な励起を示します。Alexa Fluor® 568コンジュゲートは、最大励起/蛍光波長の類似した Lissamine™ ローダミンBコンジュゲートやローダミンRed-Xコンジュゲートより明るい蛍光を示します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 578 602 88,000 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 575 600 576 578 Hydrazide Cadaverine サイズ 製品番号 価格 1 mg A20003 ¥48,500 1.3 5 mg A20103 ¥216,100 1.3 92,000 1 mg A20341 ¥37,700 2.2 599 86,000 1 mg A10437 ¥36,600 3.3, 14.3 602 93,000 1 mg A30680 ¥37,700 3.4 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76、P.80をご覧ください。 42 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog AlexaFluor®594－テキサスレッドに代わる色素 Alexa Fluor® 594コンジュゲートは赤領域のスペクトルを放出し、緑蛍光プローブと組み合わせる多重標識実験にとく に有用です。Alexa Fluor® 594コンジュゲートはオレンジHe-Neレーザーの波長594nmで効率的に励起されます。また テキサスレッドコンジュゲートよりはるかに強力な蛍光を発し、高い光安定性を示します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 590 617 92,000 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 588 612 588 588 Hydrazide Cadaverine サイズ 製品番号 価格 1 mg A20004 ¥48,500 1.3 5 mg A20104 ¥216,100 1.3 96,000 1 mg A10256 ¥37,700 2.2 613 97,000 1 mg A10438 ¥36,600 3.3, 14.3 612 105,000 1 mg A30678 ¥37,700 3.4 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76、P.80をご覧ください。 AlexaFluor®610-X色素 明度と光安定性の高いAlexa Fluor® 610-X色素はTexas Red®およびAlexa Fluor® 594色素で用いられるものと同じ光学 機器で視覚化できる強力な赤色蛍光を放出します。この赤色蛍光は多色標識に対して理想的な候補になります。Alexa Fluor® 633色素やより長波長のフルオロフォアとは異なり、Alexa Fluor® 610-X色素の蛍光は人間の眼でも見ることが できます。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 612 628 144,000 1 mg A30050 ¥48,500 1.3 Alexa Fluor® -610-R-フィコエリスリンタンデムコンジュゲートは長波長蛍光Alexa Fluor® アクセプター色素にコンジュ ゲートしたR-フィコエリスリン（R-PE）から構成されています。このタンデムコンジュゲートにはエネルギー転移カ スケードが構成されており、蛍光共鳴エネルギー転移（FRET）によりR-PEの励起からアクセプター色素の蛍光を生成 します。このプロセスは非常に効率的で、フィコビリタンパク質からのエネルギーのほぼすべてがアクセプター色素 に転移されます。R-PEで調製されたタンデムコンジュゲートはアルゴンイオンレーザーの488nmで励起します。R-PE のAlexa Fluor® 610コンジュゲートからの蛍光波長は約630nmで、Texas Red®色素をベースとするR-PEのタンデムコン ジュゲートの蛍光波長より若干長くなっています。Alexa Fluor® R-PEタンデムコンジュゲートは単一の励起波長で3、4 Alexa Fluor® AlexaFluor®610-R-フィコエリスリンタンデムコンジュゲート 2 色 素 または5色の同時標識に利用できる可能性があります。 Zenon®抗体標識キットに関してはP.78をご覧ください。 AlexaFluor®633－633nmHe-Neレーザーに適した色素 近赤外スペクトルはたいていの試料の自己蛍光の範囲を超えているので、近赤外蛍光色素は蛍光画像用の最も需要の高 い標識です。633nmのスペクトルを持つHe-Neレーザーと635nmのスペクトルを持つ赤色ダイオードレーザーが普及 しつつあることから、当社ではそれに適応性のある色素を開発しました。Alexa Fluor® 633コンジュゲートは明るく光 安定性が高く、最大吸光波長の中心は632nm、He-Neレーザーの633nmで効果的に励起されます。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 621 639 159,000 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 622 640 624 643 Hydrazide サイズ 製品番号 価格 1 mg A20005 ¥48,500 1.3 5 mg A20105 ¥216,100 1.3 143,000 1 mg A20342 ¥37,700 2.2 110,000 1 mg A30634 ¥37,000 3.3, 14.3 タンパク質標識キットも販売されています。P.74をご覧ください。 www.lifetechnologies.com 43 反応性蛍光色素とその標識 AlexaFluor®647－Cy™5に代わる色素 Alexa Fluor 647®コンジュゲートのスペクトルはCy™ 5色素のスペクトルに対応しており、Cy™ 5用と同じフィルターが 使用できます。しかし、Alexa Fluor® 647色素の二次抗体コンジュゲートの総蛍光量はCy™5コンジュゲートの総蛍光 より高くなっています。また、Cy™ 5色素とは異なりAlexa Fluor® 647色素は多くのタンパク質やオリゴヌクレオチド、 核酸とコンジュゲートしても吸光度や蛍光スペクトルはほとんど変化せず、そのため同じ置換度において大きな総蛍光 量が得られます。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 1 mg A20006 ¥48,500 1.3 5 mg A20106 ¥216,100 1.3 Succinimidyl ester amines 651 672 270,000 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 651 671 250,000 1 mg A20347 ¥37,700 2.2 649 666 250,000 1 mg A20502 ¥36,600 3.3, 14.3 651 672 245,000 1 mg A30679 ¥37,700 3.4 651 672 250,000 1 mg A30632 ¥43,400 3.3, 14.3 Hydrazide Cadaverine Hydroxylamine タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76、P.80をご覧ください。 AlexaFluor®647-R-フィコエリスリンタンデムコンジュゲート Alexa Fluor® -R-フィコエリスリンタンデムコンジュゲートは長波長蛍光Alexa Fluor® アクセプター色素にコンジュゲー トしたR-フィコエリスリン（R-PE）から構成されています。このタンデムコンジュゲートにはエネルギー転移カスケー ドが構成されており、蛍光共鳴エネルギー転移（FRET）によりR-PEの励起からアクセプター色素の蛍光を生成します。 このプロセスは非常に効率的で、フィコビリタンパク質からのエネルギーのほぼすべてがアクセプター色素に転移され ます。Alexa Fluor® 647-R-PEタンデムコンジュゲートのスペクトルはR-PEのCy™5コンジュゲートと事実上同じですが、 約3倍明るくなっています。Alexa Fluor® -R-PEタンデムコンジュゲートは単一の励起波長で3、4または5色の同時標識 に利用できる可能性があります。 Zenon®抗体標識キットに関してはP.78をご覧ください。 AlexaFluor®660－647nmクリプトンイオンレーザーに最適の色素 Alexa Fluor® 660色素はクリプトンイオンレーザーの波長647nmで最高の励起を示し、He-Neレーザーの波長633nm においてもよく励起します。AlexaFluor® 660色素のタンパク質コンジュゲートは明るい遠赤外蛍光を放出し、その ピークは690 nmです。他のフルオロフォアからの蛍光波長からは大きく離れるので、Alexa Fluor® 660色素をAlexa Fluor®545、Cy™ 3、フィコエリスリンコンジュゲートなどの蛍光標識とともに用いることができます。Alexa Fluor® 660色素はフローサイトメトリーにおけるアロフィコシアニン（APC）コンジュゲートの二次標識に適しています。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 663 690 132,000 1 mg A20007 ¥48,500 1.3 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 668 697 112,000 1 mg A20343 ¥37,700 2.2 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76をご覧ください。 AlexaFluor®680－Cy™5.5に代わる色素 最大励起波長679nm、最大発光スペクトル702nmのAlexa Fluor® 680色素はCy™ 5.5色素のスペクトルに類似していま す。Alexa Fluor® 680色素の蛍光放出はテトラメチルローダミン、テキサスレッド、R-フィコエリスリン、Alexa Fluor® 594、Alexa Fluor® 647色素などの他に広く用いられている赤色フルオロフォアからよく分離します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 684 707 183,000 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 684 714 175,000 サイズ 製品番号 価格 1 mg A20008 ¥48,500 1.3 5 mg A20108 ¥216,100 1.3 1 mg A20344 2.2 ¥37,700 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76をご覧ください。 44 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog AlexaFluor®680–R-Phycoerythrinタンデムコンジュゲード Alexa Fluor® 680–R-Phycoerythrin タンデムコンジュゲード は、長波長のAlexa Fluor®放出蛍光アクセプターにR-フィ コエリスリン（R-PE）をコンジュゲードする事により、エネルギー転移カスケードが形成され、この蛍光共鳴エネルギー 転移（FRET）によりR-PEが励起しアクセプター色素の蛍光を生成します。これはきわめて効率的で、ほぼすべてのエ ネルギーがフィコビリタンパク質からこれらのタンデムコンジュゲードのアクセプター色素に転移されます。Alexa Fluor® 680–R-PE のタンデムコンジュゲードの長波長蛍光波長特性はCy™ 5.5-R-PEのタンデムコンジュゲードと実質的 に同一ですが、より激しい長波長を放出し、Cy™のタンデムコンジュゲードよりR-PE channelの補正は大変少なくなり ます。そのため、単一励起で３，４，５色の同時標識化ができる可能性を持っています。 Zenon®抗体標識キットに関してはP.78をご覧ください。 AlexaFluor®700－遠赤外ダイオードレーザーに最適の色素 702nmに最大吸光を有するAlexa Fluor® 700色素は、675∼700nmの間で操作するキセノンアークランプや遠赤外ダイ オードレーザー、色素ポンプレーザーで励起させることができます。Alexa Fluor® 700色素は719nmにピークを有する 赤外蛍光を放出します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 702 723 196,000 サイズ 製品番号 価格 1 mg A20010 ¥48,500 1.3 1 kit A20110 ¥216,100 1.3 Zenon®抗体標識キットに関してはP.78をご覧ください。 この色素は、長波長の放出蛍光アクセプター Alexa Fluor® 700にアロフィコシアニン（APC）をコンジュゲードするこ とにより形成されます。このタンデムコンジュゲードによりエネルギー転移カスケードが形成され、この蛍光共鳴エネ ルギー転移（FRET）によりAPCが励起しアクセプター色素の蛍光を生成します。これはきわめて効率的で、ほぼすべ てのエネルギーがフィコビリタンパク質からこれらのタンデムコンジュゲードのアクセプター色素に転移されます。こ の Alexa Fluor® 700-APCコンジュゲードは、単一励起で３，４，５色の標識化ができる可能性を持っています。 Alexa Fluor® AlexaFluor®700アロフィコシアニン タンデムコンジュゲード 2 色 素 Zenon®抗体標識キットに関してはP.78をご覧ください。 AlexaFluor®750－Cy™7に代わる色素 Cy™ 7とスペクトルが類似したAlexa Fluor®色素です。779nmの最大放出蛍光は、Alexa Fluor® 647、Alexa Fluor® 660、 アロフィコシアニン（APC）など、広く用いられている遠赤外フルオロフォアからの蛍光から充分離れているので、多 色分析が可能です。約752nmが励起のピークなので、Alexa Fluor® 700色素のコンジュゲートは720∼750nmで操作す るキセノンアークランプや色素ポンプレーザーでよく励起されます。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines 749 782 240,000 サイズ 製品番号 価格 1 mg A20011 ¥48,500 1.3 5 mg A20111 ¥216,100 1.3 Zenon®抗体標識キットに関してはP.78をご覧ください。 www.lifetechnologies.com 45 反応性蛍光色素とその標識 AlexaFluor®750アロフィコシアニン タンデムコンジュゲード この色素は、長波長の放出蛍光アクセプター Alexa Fluor® 750にアロフィコシアニン（APC）をコンジュゲードするこ とにより形成されます。このタンデムコンジュゲードによりエネルギー転移カスケードが形成され、この蛍光共鳴エネ ルギー転移（FRET）によりAPCが励起しアクセプター色素の蛍光を生成します。これはきわめて効率的で、ほぼすべ てのエネルギーがフィコビリタンパク質からこれらのタンデムコンジュゲードのアクセプター色素に転移されます。こ の Alexa Fluor® 750-APCコンジュゲードは、単一励起で３，４， ５色の同時標識化ができる可能性を持っています。 Zenon®抗体標識キットに関してはP.78をご覧ください。 AlexaFluor®790－当社の最長波長のAlexaFluor®色素 励起および蛍光波長784/814nm、インドシアニングリーンやIRDye® 800に似たスペクトルを持ちます。Alexa Fluor® 647やアロフィコシアニン（APC）のような蛍光色素から波長が十分離れているので多色解析が容易です。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester Amines 784 814 260,000 100 µg A30051 ¥26,900 1.3 その他の色素 アロフィコシアニン（APC） フィコビリタンパク質は安定で可溶性の高いタンパク質であり、その集光器としての生物学的役割には最大の吸光度と 内部や外部の蛍光消光を受けることのない蛍光が必要です。したがって、その吸光特性と蛍光特性はひときわすぐれ、 量子収量は0.98、モル吸光率は2.4 10に達すると報告されています。アロフィコシアニン（APC）とそのコンジュゲー トはCy™ 5コンジュゲートより総蛍光量と光安定性が高く、そのためAPCは633nm のHe-Neレーザーや647nm Ar-Kr レーザーを利用した機器による検出において、現在利用できる最も高感度のフルオロフォアです。フィコビリタンパク 質を安定させるためAPCは架橋型（APC-XL）として用いられ、当社のAPCタンパク質コンジュゲートはすべてこの架 橋型を用いて調製されています。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Allophycocyanin (4 mg/ml) requires crosslinker for conjugation (e.g. Protein–Protein crosslinker kit, P6305) 650 660 700,000 0.5 ml A803 ¥33,900 6.4, 14.7 Zenon®抗体標識キットに関してはP.78をご覧ください。 AMCA（7-アミノ-4-メチルクマリン） UV-励起AMCAフルオロフォアから放出される青色蛍光は多重染色用途における対比色として用いることができます。 その蛍光は他の色素ほど明るくない、または自家蛍光によって不明瞭になることがあるので、 AMCAは多量に存在する 標的にのみ使用することをお勧めします。反応性を高めるため、そのサクシニミジルエステルにはフルオロフォアと反 応基との間に"X"または7原子のアミノヘキサノイルスペーサーが含まれています。 46 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester (X) amines 353 442 19,000 10 mg A6118 ¥33,900 1.7 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog Bimane Bimaneは∼ 200以下の分子量で、最も小さなフルオロフォアの1つです。この青い蛍光色素は、いくつかの異なる反応 基を持ち利用できます。チオール反応性monochlorobimaneとmonobromobimaneは遊離したチオール共に反応する まで非蛍光です。それはしばしばグルタチオンの測定に使用されます。 反応部分 反応性 thiols (mercaptans, sulfhydryls), Monobromobimane including glutathione (GSH) thiols (mercaptans, sulfhydryls), Dibromobimane including glutathione (GSH) thiols (mercaptans, sulfhydryls), Monochlorobimane (mBCl) including glutathione (GSH) Monobromobimane (mBBr) thiols (mercaptans, sulfhydryls), including glutathione (GSH) *FluoroPure™ grade* Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 394 490 5,000 25 mg M1378 ¥16,500 2.3, 14.2 394 490 5,000 25 mg D1379 ¥14,700 2.3, 5.2 394 490 6,000 25 mg M1381MP ¥28,100 2.3, 14.2, 15.6 394 490 6,000 25 mg M20381 ¥25,000 2.3, 14.2 2 Alexa Fluor® 色 素 www.lifetechnologies.com 47 反応性蛍光色素とその標識 BODIPY®色素 BODIPY®色素は可視スペクトルの範囲にわたっており（図 12）、蛍光を発する酵素基質、脂肪酸、リン脂質、リポ多 1 2 3 4 5 6 7 製だけでなく、タンパク質、ヌクレオチド、オリゴヌク レオチド、デキストランの蛍光コンジュゲートの生成に も用いることができます。BODIPY®色素は比較的極性がな く、発色団は電気的に中性であるという点で珍しい色素で す。これらの特性により、コンジュゲート全体の脂肪親和 性が高すぎない場合に低分子量コンジュゲートの細胞透過 性だけでなく、受容体に対するリガンドコンジュゲートの 親和性を高められることがあります。また、いくつかの 蛍光 糖類、受容体リガンド、ポリスチレンミクロスフェアの調 BODIPY®色素のオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、色 素が電気泳動におけるフラグメントの移動性にほとんど影 響を及ぼさないため、DNA配列決定に有用と報告されて います。BODIPY®色素とそのコンジュゲートの利点として 以下の事柄が挙げられます。 500 550 600 650 波長 (nm) 700 750 図12 一部のBODIPY®フルオロフォアのメタノール中にお ける標準化蛍光放出スペクトル。 1）BODIPY®FL、2）BODIPY®R6G、3）BODIPY® TMR、4）BODIPY®581/591、5）BODIPY®TR、 6）BODIPY®630/650、7）BODIPY®650/665 明 る さ：BODIPY®色 素 は 大 き な 吸 光 率（ ε>60,000 M-¹cm-¹）と高い量子収率を示します。 蛍光帯域幅が狭い：ピーク強度が高いので、反応性BODIPY®色素は高速液体クロマトグラフィー（HPLC）やキャ ピラリー電気泳動（CE）に利用できる、最も性能の高いアミン-誘導産物試薬です。 励起状態の寿命が長い：BODIPY® FL、その他のBODIPY®色素は蛍光偏光に基づくアッセイにおいてフルオレセイ ンやカルボシアニンより有用です。 環境に影響を受けない：BODIPY®色素のスペクトルは溶媒の極性や、pH3-10の範囲において比較的pHの影響を受 けません。 BODIPY®493/503Dye 小さな緑蛍光色素BODIPY®493/503は標準的なフルオレセイン蛍光フィルターで検出できます。この電気的に中性の分 子は、キャピラリ電気泳動(Electrophoresis 23, 3537–3544 (2002)や脂質滴(J Biol Chem 275, 38486–38493 (2000))を検 出するのに使用されました。 48 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 500 506 79,000 5 mg D2191 ¥49,700 Methyl bromide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 500 506 79,000 5 mg B2103 ¥40,900 2.2, 3.4, 14.2 1.4 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog BODIPY®507/545色素 大部分のBODIPY®色素のストークスシフト（最大蛍光と最大励起との間の差）はかなり狭くなっていますが、BODIPY® 507/545色素はこの色素シリーズの中ではストークスシフトが大きいもののひとつです。他のBODIPY®色素と同様、フ ルオロフォアはコンパクトなのでペプチドやタンパク質、オリゴヌクレオチド、脂質のコンジュゲーションに有用です。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Iodoacetamide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 508 543 69,000 5 mg D6004 ¥35,300 2.2 BODIPY®530/550色素 BODIPY® 530/550色素は第2高調波Nd:YAGレーザーなどの532nm励起光源で使用するようにデザインされています。 構造がコンパクトなので、タンパク質-脂質相互作用や薬物相互作用をよく理解するための脂質などの小分子の修飾 （Biochem Biophys Res Commun 207:508-514 (1995)）やタンパク質結合部位（J Biol Chem 279:20447-20450 (2004)） に適しています。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 534 554 77,000 5 mg D2187 ¥49,700 1.4 BODIPY®558/568色素 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 588 569 97,000 5 mg D2219 ¥49,700 1.4 2 BODIPY® 赤色蛍光を放出するBODIPY® 558/568色素は、緑色蛍光EGFPと黄色蛍光EYFPの蛍光共鳴エネルギー転移（FRET）を介 したリガンド-受容体相互作用の研究に用いられています（J Med Chem 47:4300-4315(2004), J Neurochem 85:768-778 (2003)）。 色 素 BODIPY®564/570色素 オレンジ蛍光を放出するBODIPY® 564/570色素は、薬物のデザインと伝達における脂肪親和性の研究において脂肪親和 性の低いOregon Green® 488とBODIPY® FL色素の比較研究で成功を収めています（Eur J Pharm Sci 18:329-336 (2003); J Control Release 83:253-262 (2002)）。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 565 571 142,000 5 mg D2222 ¥49,700 1.4 BODIPY®576/589色素 赤オレンジ蛍光を放出するBODIPY® 576/589色素は、レーザーを用いたキャピラリー電気泳動（CE）において、 BODIPY® 503/512色素などの緑色蛍光を放出するBODIPY®色素からスペクトル分離することができます（Anal Chem 67, 39-44 (1995)）。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 576 590 83,000 5 mg D2225 ¥49,700 1.4 www.lifetechnologies.com 49 反応性蛍光色素とその標識 BODIPY®577/618色素 対称性マレイミジルフェニルの赤色蛍光を放出するBODIPY® 577/618誘導体は、タンパク質やチオール化オリゴヌクレ オチドのシステイン残基の標識や、超高感度レーザースキャニングテクニックを用いた高速液体クロマトグラフィー （HPLC）やキャピラリー電気泳動（CE）によるチオールコンジュゲートの検出に適しています。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 577 618 60,000 5 mg D20351 ¥34,800 2.2 BODIPY®581/591色素 赤色蛍光を放出するBODIPY® 581/591色素の脂質コンジュゲートは、トリパンブルーと共に細胞の増殖と分化をモニ ターするための比蛍光顕微鏡検査に用いられています（Cell Transplant 12:743-756 (2003)）。脂質過酸化アッセイにお いても、コンジュゲートされたBODIPY® 581/591色素の二重結合の酸化感受性が利用されています。BODIPY® 581/591 フルオロフォアの赤色蛍光は過酸化により緑蛍光にシフトするので、この性質が生存細胞における脂質酸化の比率測定 に利用されています（Biochem Biophys Res Commun 302:409-414 (2003); J Nutr 133:2688-2691 (2003)）。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 584 592 136,000 5 mg D2228 ¥49,700 1.4 BODIPY®630/650色素 他の多くのBODIPY®色素と同様に、長波長のBODIPY® 630/650色素は帯域幅が狭く、吸光率が大きく、量子収量にすぐ れ、 励起状態の寿命が比較的長い（>3ナノ秒）色素です（Bioconjug Chem 14:195-204 (2003); Bioimaging 6:14 (1998)） 。 この反応性色素にはフルオロフォアとサクシニミジルエステル基との間にさらに7原子のアミノヘキサノイルスペー サー（"X"）が含まれています。このスペーサーはフルオロフォアをその結合部から離し、それによってコンジュゲー トされる生体分子とフルオロフォアとの相互作用を低下させる役目を果たします。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester (X) amines 625 640 101,000 5 mg D10000 ¥49,700 1.4 BODIPY®650/665色素 BODIPY® 650/665-X色素は現在販売されているBODIPY®フルオロフォアの中で波長が最も長いアミン反応性フルオロ フォアです。この反応性色素にはフルオロフォアとサクシニミジルエステル基との間にさらに7原子のアミノヘキサノ イルスペーサー（"X"）が含まれています。このスペーサーはフルオロフォアをその結合部から分離し、それによって コンジュゲートされる生体分子とフルオロフォアとの相互作用を低下させる役目を果たします。 50 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester (X) amines 646 660 102,000 5 mg D10001 ¥49,700 1.4 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog BODIPY®FL色素 フルオレセインに最も近いスペクトルの緑色蛍光を生じる、電子的に中性のBODIPY® FL色素は、蛍光偏光に基づくアッ セイにおいて吸光率が大きい（ε>80,000M-¹cm-¹）、量子収率が高い（水中においてもしばしば1.0に接近する）、スペ クトルが溶媒の極性やpHに対して比較的感受性が低い、放出帯域幅が狭い（フルオレセインよりピーク強度が高い）、 励起状態の寿命が長い（通常4ナノ秒以上）、多光子励起において2光子断面積が大きいなど、いくつかの用途において フルオレセインに勝る特徴を備えています。また、BODIPY® FL色素はテトラメチルローダミンやTexas Red®などの長 波長色素とスペクトルの重複がほとんどないので、多色用途において有用な緑色フルオロフォアです。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester (X) Succinimidyl ester (propionic acid) Succinimidyl ester (pentanoic acid) Sulfosuccinimidyl ester 4-Sulfotetrafluorophenyl ester (STP) Maleimide amines 504 510 85,000 5 mg D6102 ¥49,700 1.4, 4.2, 9.3 amines 502 510 82,000 5 mg D2184 ¥49,700 1.4 amines 504 511 82,000 5 mg D6184 ¥49,700 1.4 amines 502 510 75,000 5 mg D6140 ¥49,700 1.4 amines 502 510 80,000 5 mg B10006 ¥49,700 1.4, 4.2 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 504 510 79,000 5 mg B10250 ¥35,300 2.2 Iodoacetamide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 502 510 76,000 5 mg D6003 ¥35,300 2.2 Cystine thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids amines via carbodiimide activation of the carboxylic acid amines via carbodiimide activation of the carboxylic acid 504 511 132,000 1 mg B20340 ¥14,700 2.2 503 510 71,000 5 mg D2371 ¥34,800 3.3 503 510 76,000 5 mg D2390 ¥49,700 3.4 505 511 91,000 5 mg D2183 ¥35,300 1.4 505 511 96,000 1 mg D3834 ¥21,200 1.4, 13.2 Hydrazide Ethylenediamine Carboxylic acid (propionic acid) Carboxylic acid (pentanoic acid) BODIPY® BODIPY®R6G色素 親分子の置換基を変更するだけでBODIPY®色素は大きな吸光率、狭い蛍光帯域幅、イオン荷電を持たないなどの BODIPY®の中心となる特性を維持しながら共通のフルオロフォアにスペクトルを対応させることができます。電子的に 中性のBODIPY® R6G色素のスペクトルは正荷電したローダミン6Gに類似しています。 反応部分 Succinimidyl ester 2 反応性 amines Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 528 550 70,000 5 mg D6180 ¥49,700 色 素 1.4 BODIPY®TMR色素 電子的に中性のBODIPY® TMR色素のスペクトルは正荷電したテトラメチルローダミン色素に類似しています。イオン 荷電を持たないため、このフルオロフォアとコンジュゲートした標準的なタンパク質の等電点はほとんど影響を受けま せん（Electrophoresis 24, 2348-2358 (2003)）。BODIPY® TMR色素はサイズが小さく励起状態の寿命が比較的長いので、 蛍光偏光によるリガンド-受容体相互作用の研究に有用であることが証明されています（J Recept Signal Transduct Res 22:333-343 (2002)）。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester (X) amines 544 570 60,000 5 mg D6117 ¥49,700 1.4 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 544 570 60,000 1 mg B30466 ¥29,900 2.2 www.lifetechnologies.com 51 反応性蛍光色素とその標識 BODIPY®TR色素 電子的に中性のBODIPY® TR色素のスペクトルはTexas Red®フルオロフォアに類似しています。BODIPY® TR色素は異方 性および蛍光強度の測定におけるヌクレオチドなど小分子の標識に用いられています（J Biol Chem 279, 28402-28410 (2004); Anal Biochem 291, 109-117 (2001)）。このフルオロフォアはコンパクトで脂質親和性なので、脂質A（the toxic center of lipopolysaccharide）の置換アッセイに利用されています（Comb Chem High Throughput Screen 7:239-249 (2004)）。サクシニミジルエステルにはフルオロフォアとサクシニミジルエステル基との間にさらに7原子のアミノヘキ サノイルスペーサー（"X"）が含まれています。このスペーサーはフルオロフォアをその結合部から分離し、それによっ てコンジュゲートされる生体分子とフルオロフォアとの相互作用を低下させる役目を果たします。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester (X) amines 588 616 68,000 5 mg D6116 ¥49,700 Thiosulfate thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 589 617 63,000 5 mg T30455 588 616 64,000 5 mg D6251 Cadaverine 1.4, 9.3 2.2 ¥35,300 3.4 その他の色素（Cascade Blue® ／フルオレセイン／ Oregon Green® ／テトラメチルローダミン等） CascadeBlue®色素 アミノクマリン誘導体と比較してスルホン化ピレンのCascade Blue®色素はフルオレセインとのスペクトルの重複が少 なく、このことは多重染色において重要な長所です。また、Cascade Blue®色素は高い吸光率と蛍光を示し、多くの色 素とは異なりタンパク質コンジュゲーション時の消光に抵抗を示します。タンパク質コンジュゲートの調製に加えて、 細胞膜を透過せず水溶性のCascade Blue®色素は細胞表面に存在するタンパク質の同定に有用です。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 Acetyl azide amines aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 396 410 29,000 5 mg C2284 ¥43,500 1.7, 4.2, 14.3 399 421 30,000 10 mg C687 ¥33,900 3.3, 14.3, 16.1 399 419 29,000 10 mg C3239 ¥32,000 14.3 399 423 29,000 10 mg C621 ¥33,900 3.4, 14.3 Hydrazide, trisodium salt Hydrazide, trilithium salt Ethylenediamine 価格 CascadeYellow™色素 Alexa Fluor® 430やPacific Blue®色素と同様に、Cascade Yellow™色素の最大励起はUV励起色素とフルオレセインの間 に位置します。このスルホン化ピリジルオキサゾール（PyMPO）色素は410nm付近に最大吸収を示し、ストークスシ フトが非常に大きく、550-570nmに比較的強い蛍光を示します。この大きなストークスシフトのため、多くのサンプ ルの自家蛍光をはるかに超えた波長の検出が可能になり、同じ波長で複数のフルオロフォアを励起させて異なる波長で 検出することができます。たとえば、Cascade Yellow™タンパク質コンジュゲートは405nmでPacific Blue®コンジュゲー トと同時に励起させ、より長い波長で別々に検出することができます。 52 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 409 558 24,000 (methanol) 5 mg C10164 ¥36,500 1.7 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog ダンシル色素 塩化ダンシルはアミンと反応するまで蛍光を生じません。生じたダンシルアミドは環境感受性の量子収率と放出極 大、大きなストークスシフトを示します。ダンシルスルホンアミドの吸光率は低く（330-340nmにおける吸光率=約 4000M-¹cm-¹）、量子収率は中程度であるにもかかわらず、塩化ダンシルはタンパク質の末端基分析、アミノ酸分析およ びHPLC検出における誘導試薬として広く用いられています。ダンシルアミノヘキサン酸（ダンシル-X、SE）のサクシ ニミジルエステルにはダンシルフルオロフォアを反応部位から遠ざける7原子のスペーサー（"X"）が含まれており、そ れによってコンジュゲートされる生体分子とフルオロフォアとの相互作用を低下させ、抗体が結合しやすくなっていま す。塩化ダンシルの2つの異性体（2,5-塩化ダンシル、2,6-塩化ダンシル）のコンジュゲートは、1,5-塩化ダンシルのコ ンジュゲートよりストークスシフトが小さく、蛍光寿命が明らかに長くなっているため（30ナノ秒まで）、これらの異 性体は蛍光偏光の研究において最も優れたプローブになります。これらの色素はタンパク質や細胞膜の疎水性部位に結 合することが予想される蛍光薬物やリガンド類似体の調製に有用です。反応性ダンシル色素の脂肪親和性もタンパク質 の膜貫通部位の標識に有用です。 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 amines 335 518 4,200 (methanol) 25 mg D6104 ¥19,700 1.7, 4.2 Sulfonyl chloride (1-position) amines 337 492 D21 ¥13,800 1.7, 9.5 Sulfonyl chloride (5-position) amines 375 D22 ¥42,700 1.7 Sulfonyl chloride (6-position) amines 375 5,300 (chloroform) 1g 3,100 (methanol, 470 butylamine 100 mg derivative) 13,000 (chloroform, 419 butylamine 100 mg derivative) D23 ¥42,700 1.7 336 534 4,400 (methanol) 100 mg D100 ¥10,100 3.3, 9.5 335 518 4,600 (methanol) 100 mg D113 ¥26,400 3.4, 12.3 335 526 4,600 (methanol) 100 mg D112 ¥26,400 3.4 337 517 4,700 (methanol) 100 mg D2281 ¥17,300 3.2 Hydrazide Cadaverine Ethylenediamine Boronic acid aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids vicinal diols Dapoxyl®色素 Dapoxyl®色素は特に用途の広い誘導試薬で、環境感受性プローブの前駆体です。Cascade Yellow™ 色素と同様に、 Dapoxyl®色素は最大励起/蛍光波長は約370/570nmと、非常に大きなストークスシフトを示します。Dapoxyl®スルホ ニルクロライドから生成されるスルホンアミドは、塩化ダンシルから生成されるものより吸光率がはるかに高く（約 26,000M-1cm-1対約4000M-¹cm-¹）、有機溶媒溶解時の量子収率は同等以上です。しかし、Dapoxyl®誘導体の蛍光はきわ めて環境感受性が高く、水中での蛍光は非常に弱いため、Dapoxyl®コンジュゲートは立体構造の変化、変性、リン酸 化状態および相変化のプローブとして有用です。一部の溶媒でのDapoxyl®誘導体の非常に大きなストークスシフト（約 200nmまで）および大きな吸光率、吸収が、水銀アークランプの強力な365nmスペクトル線に近接していることから、 反応性Dapoxyl®誘導体はクロマトグラフィーおよび電気泳動分析における誘導試薬として有用です。 反応部分 反応性 Abs Em Succinimidyl ester amines 367 574 Sulfonyl chloride amines 373 551 吸光率 25,000 (methanol, butylamine derivative) 26,000 (methanol, butylamine derivative) サイズ 製品番号 価格 5 mg D10161 ¥19,700 1.7 10 mg D10160 ¥33,900 1.7 www.lifetechnologies.com 2 色素／その他の色素︵ Cascade Blue® ／フルオレセイン／ BODIPY® ／テトラメチルローダミン等︶ Oregon Green® 反応部分 Succinimidyl ester (X) 53 反応性蛍光色素とその標識 7-ジアルキルアミノクマリン（MDCC、CPM、DACM、DACIA、DCIA、DCCH、DMACA） AMCAコンジュゲートと比較して、UV光励起7-ジアルキルアミノクマリンフルオロフォアのコンジュゲートはわずか に長波長の蛍光スペクトルを示します。これらの蛍光は他の色素ほど明るくなく、自家蛍光によって不明瞭になること があるので、7-ジアルキルアミノクマリン誘導体は多く存在する標的にのみ使用することをお勧めします。 反応部分 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester (DMACA) amines 375 470 22,000 Succinimidyl ester amines 442 483 64,000 25 mg D374 ¥39,000 1.7 25 mg D1412 ¥28,600 Isothiocyanate amines 400 476 1.7 36,000 10 mg D10166 ¥17,300 Azide amines 436 1.7 478 57,000 25 mg D1446 ¥28,600 Maleimide (MDCC) thiols (mercaptans, sulfhydryls) 3.2 419 466 50,000 5 mg D10253 ¥33,900 Maleimide (CPM) 2.3 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 384 469 33,000 25 mg D346 ¥53,200 2.3 Maleimide (DACM) thiols (mercaptans, sulfhydryls) 383 463 27,000 10 mg D10251 ¥42,700 2.3 Iodoacetamide (DACIA) thiols (mercaptans, sulfhydryls) 376 465 24,000 10 mg D10252 ¥42,700 2.3 Iodoacetamide (DCIA) thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids amines via carbodiimide-activated carboxylic acids amines via carbodiimide-activated carboxylic acids 384 470 31,000 25 mg D404 ¥53,200 2.3 420 468 46,000 25 mg D355 ¥32,000 3.3 370 459 22,000 100 mg D126 ¥28,600 1.7 409 473 34,000 100 mg D1421 ¥12,000 1.7 Hydrazide (DCCH) Carboxylic acid (DMACA) Carboxylic acid 反応性 ジメトキシベンゼン この芳香族ジアミンは、グリオキサールやメチルグリオキサールなどのストレス化合物を含むケトンおよびカルボニル と反応し（Clin Chem Lab Med 42:147-153 (2004)）、逆相高速液体クロマトグラフィーで分離・定量可能な蛍光付加物 を形成します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Aromatic amine carboxylic acids, aldehydes 298 359 3,100 100 mg D1463 ¥25,400 3.3 ジメチルアミノナフタレン アクリロダンや6-ブロモアセチル-2-ジメチルアミノナフタレン（バダン）は一般に、ヨードアセトアミドやマレイミ ドより反応が緩やかですが、アミノ酸分析で求められる条件下においても、安定した非常に強力なチオエーテル結合を 形成します。これらの付加生成物の蛍光ピークと強度は立体構造の変化やリガンド結合に対して敏感なので、これらの 色素はタンパク質の構造研究における最も有用なチオール反応性プローブのひとつになっています。たとえば、腸脂肪 酸結合タンパク質のアクリロダンコンジュゲートのADIFAB™は遊離脂肪酸のセンサーとなります。アクリロダンとバダ ンコンジュゲートはその環境感受性スペクトルシフトのため、細胞膜内に存在するチオールと細胞内部の水性溶液に暴 露されたチオールを区別する上で有用です。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Acrylodan thiols (mercaptans, sulfhydryls) 391 500 20,000 (methanol) 25 mg A433 ¥53,200 2.3 Badan (bromoacetamide) thiols (mercaptans, sulfhydryls) 387 520 21,000 (methanol) 10 mg B6057 ¥25,900 2.3, 3.4 フルオレスカミン フルオレスカミンは本来蛍光を生じませんが、ペプチドやタンパク質などの第一脂肪族アミンと速やかに反応して青緑 色蛍光を発する誘導体を生成します。反応プロトコールを変更することで、フルオレスカミンはプロリンなどの第２級 アミンを含むアミノ酸の検出にも用いることができます（Biochem Biophys Res Commun 50:352-356 (1973)）。過剰な 試薬は水との反応により速やかに蛍光を生じない産物に変換されるので、フルオレスカミンは溶液中のタンパク質濃度 キャ の測定に有用です。フルオレスカミンは薄層クロマトグラフィー（TLC）や高速液体クロマトグラフィー（HPLC）、 ピラリー電気泳動（CE）によるゲル中のタンパク質の検出や低分子量アミンの分析にも用いることができます。 54 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Fluorescamine amines 380 464 7,800 100 mg F2332 ¥15,900 1.8, 9.2, 9.3 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog フルオレセイン（FAM、FITC） フルオレセインは生体分子を標識する最も一般的な蛍光誘導体です。比較的高い吸光率に加えて優れた量子収率と水溶 性を備えたフルオレセインは、アルゴンイオンレーザーの488nmスペクトル線に近接する励起極大を示します。しかし、 フルオレセインをベースとする色素とそのコンジュゲートはpH7以下ではpH-感受性蛍光が有意に低下することに加え て、光退色率が比較的高いなどの欠点があります。 Succinimidyl ester (mixture amines of 5- and 6-isomers) CMNB caged succinimidyl amines ester (5-isomer) Succinimidyl ester (5-isomer) amines Isothiocyanate (5-isomer) Isothiocyanate (5-isomer) (special packaging) Fluorescein-5-maleimide 5-Iodoacetamidofluorescein (5-IAF) 6-Iodoacetamidofluorescein (6-IAF) Bromomethyl サイズ 製品番号 価格 495 519 74,000 100 mg C1311 ¥25,900 1.5 1.5, 5.3 289 NA 9,500 1 mg C20050 ¥27,700 494 520 78,000 10 mg C2210 ¥33,900 1.5 amines 496 516 83,000 10 mg C6164 ¥33,900 1.5 amines 494 520 74,000 10 mg F2181 ¥22,400 1.5, 4.2 amines 494 520 74,000 10 × 1 mg F6129 ¥27,700 1.5 amines 494 521 75,000 5 mg F6106 ¥22,400 1.5 amines 491 515 86,000 10 mg F6130 ¥22,400 1.5, 4.2 amines <300 NA ND 25 mg C1157 ¥46,000 14.2, 15.4, 20.2 amines <300 NA ND 25 mg C1165 ¥46,100 amines, alcohols (hydroxyl) <300 NA ND 10 mg F6218 ¥26,400 3.2 amines, alcohols (hydroxyl) 492 516 83,000 100 mg D16 ¥29,000 1.5, 3.2 amines 494 519 77,000 14.2 1g F143 ¥33,900 1.5 10 × 10 mg F1906 ¥16,200 1.5 10 × 100 mg F1907 494 519 77,000 ¥42,700 1.5 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 492 515 83,000 25 mg F150 ¥50,700 2.2 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 492 515 78,000 25 mg I30451 ¥43,500 2.2 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 491 516 82,000 25 mg I30452 ¥43,500 2.2 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 492 515 81,000 10 mg B1355 ¥42,700 2.2, 3.4 491 515 78,000 25 mg A685 ¥33,900 5.2 493 517 82,000 25 mg A10466 ¥47,900 3.4 492 516 76,000 25 mg C356 ¥45,300 3.3 492 516 85,000 100 mg F121 ¥33,900 3.3 492 516 80,000 25 mg A1351 ¥34,400 3.4 492 516 68,000 10 mg A1353 ¥34,400 3.4 491 515 80,000 10 mg A1363 ¥34,400 3.4 492 518 79,000 100 mg C1359 ¥20,100 1.5 492 515 81,000 100 mg C1360 ¥20,100 1.5 492 517 78,000 100 mg C1904 ¥20,100 1.5, 14.3, 20.2 492 517 78,000 5g C194 ¥29,400 14.3, 20.2 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76をご覧ください。 NA = Not applicable. ND = Not determined. www.lifetechnologies.com 2 ／テトラメチルローダミン等︶ amines thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideCadaverine activated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideHydrazide activated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideThiosemicarbazide activated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimide4'-Aminomethyl activated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimide5-Aminomethyl activated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideGlycine amide activated carboxylic acids amines via carbodiimide activation Carboxylic acid (5-isomer) of the carboxylic acid amines via carbodiimide activation Carboxylic acid (6-isomer) of the carboxylic acid Carboxylic acid, FluoroPure™ amines via carbodiimide activation (mixture of 5- and 6-isomers) of the carboxylic acid Carboxylic acid (mixture of amines via carbodiimide activation 5- and 6-isomers) of the carboxylic acid 吸光率 ／フルオレセイン／ SAMSA Em その他の色素 ︵ Succinimidyl ester (6-isomer) Succinimidyl ester (X) (mixture of 5- and 6-isomers) Succinimidyl ester (X) (mixture of 5- and 6-isomers) Succinimidyl ester (X) (6-isomer) Succinimidyl ester (EX) (5-isomer) 5-(and-6)Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester (5(6)-CFDA, SE; CFSE) (mixed isomers) 5-(and-6)-Carboxy-2',7' -dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester (mixed isomers) Fluorescein-5-carbonyl azide, diacetate Dichlorotriazine (5-isomer) Abs ® n e e r G n o g e r O 反応性 ® e u l B e d a c s a C 反応部分 55 反応性蛍光色素とその標識 ヒドロキシクマリン UV光励起のヒドロキシクマリンが発する青色蛍光は、多色用途の対比色として用いることができます。これらの蛍光 は他の色素ほど明るくなく、自家蛍光によって不明瞭になることがあるので、ヒドロキシクマリン誘導体は多く存在す る標的にのみ使用することをお勧めします。AMCAやAlexa Fluor® 350色素とは異なり、ヒドロキシクマリンはpH感受 性スペクトルを示します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 Succinimidyl ester amines amines via carbodiimide-activated carboxylic acids 419 445 360 455 Carboxylic acid サイズ 製品番号 価格 36,000 25 mg H1193 ¥25,900 1.7 19,000 100 mg H1428 ¥19,700 1.7 JOE フルオレセインのキサンチン環を化学修飾すると、吸収極大と励起極大が長波長方向に移動します。塩化フルオレセイ ン誘導体のJOEはDNA配列決定に広く用いられています。しかし、中間波長のスペクトルを示し量子収量が高い（約0.75） ことから、蛍光共鳴エネルギー転移（FRET）における蛍光ドナーとして用い、ローダミンをベースとする蛍光アクセ プターとしばしば併用してプライマーやハイブリダイゼーションプローブを標識することもできます。 反応部分 反応性 Succinimidyl ester (6-isomer) amines 56 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 520 548 75,000 5 mg C6171MP ¥45,300 1.5 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog Lissamine™ローダミンB Lissamine™ローダミンBタンパク質コンジュゲートの蛍光スペクトルは、テトラメチルローダミンとTexas Red®コン ジュゲートの中間に位置します。テトラメチルローダミンに比べて、吸収スペクトルのシフトは大きくありませんが、 多くの共焦点レーザー顕微鏡で用いられるAr-Kr混合ガスレーザーの568nmスペクトル線は、Lissamine™ローダミンB コンジュゲートを励起させるには十分です。さらに、Lissamine™ローダミンBのタンパク質コンジュゲートはテトラ メチルローダミンのコンジュゲートより精製が容易で化学的に安定です。Texas Red®スルホニルクロライドと同様に、 Lissamine™ローダミンBスルホニルクロライドは実際には異性体スルホニルクロライドの混合物です。 反応部分 反応性 Sulfonyl chloride (mixed amines isomers) Sulfonyl chloride (mixed amines isomers) *special packaging* aldehydes, ketones, carbodiimideEthylenediamine activated carboxylic acids Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 570 590 88,000 1g L20 ¥45,300 1.6 570 590 88,000 10 × 10 mg L1908 ¥22,400 1.6 561 581 122,000 10 mg L2424 ¥39,200 3.4 ルシファーイエロー色素 ルシファーイエロー CHはその高い水溶性からニューロンの極性トレーサーとしてよく知られています。ルシファーイ エローヨードアセトアミドの主な用途は、生細胞の細胞膜だけでなく溶液中に暴露されたチオールの標識です。また、 ルシファーイエローヨードアセトアミドはα-クリスタリンのサブユニット構造を追跡するため、スチルベンヨードア セトアミドからの蛍光エネルギーのアクセプターとしても用いられています（J Biol Chem 272:29511-29517 (1997)） 。 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 Iodoacetamide thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 426 531 11,000 25 mg L1338 ¥34,400 2.2, 4.2, 14.3 428 536 12,000 25 mg L453 ¥19,100 3.3, 14.3, 16.1 425 532 12,000 25 mg A1339 Hydrazide Ethylenediamine 価格 ¥17,000 3.4, 14.3 その他の色素 ︵ 反応部分 2 MarinaBlue®色素 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 365 460 19,000 5 mg M10165 ¥34,400 1.7 ® e u l B e d a c s a C 放出します。 ／フルオレセイン／ Marina Blue®色素は6,8-ジフルオロ-7-ヒドロキシクマリンフルオロフォアをベースとし、強力な365nmの水銀アークラ ンプによって最適に励起され、460nm付近の明るい青色蛍光を放出します。Marina Blue®誘導体のpKa値は7-ヒドロキ シクマリンコンジュゲートより2-3ユニット低いので、Marina Blue®コンジュゲートは中性pHにおいても強力な蛍光を ® n e e r G n o g e r O ／テトラメチルローダミン等︶ www.lifetechnologies.com 57 反応性蛍光色素とその標識 メトキシクマリン UV励起のメトキシクマリンフルオロフォアが発する青色蛍光は多色用途の対比色として用いることができます。その 蛍光は他の色素ほど明るくなく、自家蛍光によって不明瞭になることがあるので、メトキシクマリンは多く存在する標 的にのみ使用することをお勧めします。7-ヒドロキシクマリン誘導体とは異なり、メトキシクマリンはpH-感受性スペ クトルを示しません。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 358 410 26,000 25 mg M1410 ¥22,400 1.7 Carbonyl azide amines amines via carbodiimide activation of the carboxylic acid 360 415 25,000 25 mg M1445 ¥29,000 3.2 336 402 20,000 100 mg M1420MP ¥15,400 1.7 Carboxylic acid ナフタレン IAEDANSの蛍光は環境に大きく依存しますが、IAANSやMIANSコンジュゲートほどではありません。そのコンジュゲー トはリガンドとの結合によりスペクトルシフトと蛍光強度の変化が起き、それらは水性溶媒和によって確認されます。 この試薬はpH4以上で高い水溶性を示し、蛍光寿命が比較的長い（通常は10-15ナノ秒だが、20ナノ秒を超えることも ある）ので、このコンジュゲートは蛍光偏光や施光分析の研究に有用です。さらに、IAEDANSはストークスシフトが 大きく、フルオレセインやAlexa Fluor® 488、Oregon Green®色素、BODIPY® FL色素の吸収と重複する蛍光を示すので、 約60Åまでの近接部における蛍光共鳴エネルギー転移（FRET）の測定に適した試薬です。 反応部分 Iodoacetamide (1,5-IAEDANS) Amine (EDANS) Amine (ANTS) 反応性 thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 336 490 5,700 (2-mercaptoethanoladduct) 100 mg I14 ¥12,800 2.3 335 493 5,900 (pH 8) 1g A91 ¥25,000 3.4, 9.5 353 520 7,200 (H2O) 1g A350 ¥33,600 3.3, 14.3 ナフトフルオレセイン ナフトフルオレセインのpH10の水溶液中における蛍光極大は約670nmです。この色素からの蛍光はpH依存性（pKa約 7.6）で、最大の蛍光を得るためには比較的アルカリ側のpHが必要です。 反応部分 Succinimidyl ester (mixed isomers) Carboxylic acid (mixed isomers) 58 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 amines 602 672 42,000 25 mg C653 ¥18,900 1.6, 20.4 amines via carbodiimide activation of the carboxylic acid 598 668 49,000 100 mg C652 ¥16,500 1.6, 20.2 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog NBD ベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール（あるいはbenzofurazan）はNBDシリーズのニトロ化誘導体とSBDシリーズのスルホ ン化アナログの両者を含む、反応性色素の多様なグループです。アミンの修飾には塩化NBDとさらに反応性の高いフッ 化NBDが広く用いられていますが、これらはいくつかのタンパク質に含まれるチオールやシステインとも反応してチ オエーテルを生成します。チオールのNBDコンジュゲートは通常、アミンのNBDコンジュゲートよりはるかに短波長 の吸収と弱い蛍光を示します。OPAやフルオレスカミンとは異なり、塩化NBDとフッ化NBDはともに第二級アミンと反 応するので、プロリンとヒドロキシプロリンを誘導体化させることができます。塩化NBDとフッ化NBDはアミノ酸や、 その他の低分子量アミンのクロマトグラフィー分析における誘導体化試薬として広く用いられています。NBDコンジュ ゲートの吸収と蛍光スペクトル、量子収率および吸光率はいずれも溶媒に大きく依存し、中でも第二級アミンのNBD 付加生成物の水中での量子収率はきわめて低くなる（<0.01）ことがあります。またNBDはジニトロフェニルハプテン の機能的アナログで、その蛍光は抗-ジニトロフェニル抗体と結合すると消光します。NBDフルオロフォアをタンパク 質の疎水部に位置するチオールにコンジュゲートする際は、NBDヨードアセテートエステル（IANBDエステル）もしく は、加水分解に対して安定なNBDヨードアセトアミド（IANBDアミド）を用いることをお勧めします。これらの反応試 薬は埋もれた、または溶解していないチオールと反応した場合にのみ蛍光を生じ、この蛍光はフルオロフォアの溶液環 境の変化にきわめて敏感です。 反応性 Abs Em amines 466 535 Aryl Halide (chloride) amines, thiols (mercaptans, sulfhydryls) 465 535 Aryl Halide (fluoride) amines 485 540 Iodoacetamide (amide) thiols (mercaptans, sulfhydryls) Iodoacetamide (ester) thiols (mercaptans, sulfhydryls) Hexanoic acid amines via carbodiimide activation of the carboxylic acid none 487 until 2,400 (methanol) 25 mg reacted 25,000 (methanol, 478 541 2-mercaptoethanol 25 mg adduct) 23,000 (methanol, 472 536 2-mercaptoethanol 100 mg adduct) 467 439 23,000 (methanol) 100 mg 製品番号 価格 S1167 ¥33,900 1.8 C20260 ¥10,200 1.8, 2.2 F486 ¥33,900 1.8, 2.2 M20490 ¥28,600 3.3, 10.5, 18.3, 21.2 D2004 ¥33,900 2.2 I9 ¥34,400 2.2 N316 ¥22,200 1.8, 13.2 2 ／フルオレセイン／ ／テトラメチルローダミン等︶ ® n e e r G n o g e r O aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids サイズ その他の色素 ︵ Hydrazide 吸光率 22,000 (methanol) 25 mg 22,000 (methanol, aliphatic amjne 100 mg derivative) 25,000 (methanol, secondary amine 25 mg derivative) ® e u l B e d a c s a C 反応部分 Succinimidyl ester (X) www.lifetechnologies.com 59 反応性蛍光色素とその標識 OregonGreen®488色素 Oregon Green® 488色素（2',7'-ジフルオロフルオレセイン）の吸収および蛍光スペクトルはフルオレセインと完全に対 応しています。最大吸収（約498nm）が強力なアルゴンイオンレーザーの488nmスペクトル線とほぼ対応しているので、 Oregon Green® 488は共焦点レーザー顕微鏡とフローサイトメトリー用途の両者において重要な色素です。このフルオ レセインのフッ化アナログは、高い標識率においても蛍光が消光しない、光安定性が高い、pKa値が低い（フルオレセ インpKa ＝6.4に対しpKa ＝4.7）など、フルオレセインにおける制限のいくつかを克服しており、そのためこの蛍光は 生理学的pHの範囲ではその影響を受けません。しかし、Oregon Green®色素は弱い酸性（pH4-6）ではpH感受性を示 すため、生存細胞の酸性細胞小器官のpH指示薬としても有用です。 反応部分 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester (5-isomer) amines 496 524 76,000 5 mg O6147 ¥35,300 1.5, 20.4 Succinimidyl ester (6-isomer) Succinimidyl ester (X) (6-isomer) Carboxylic acid diacetate, succinimidyl ester (carboxyDFFDA, SE) (mixed isomers) Isothiocyanate (mixture of 5and 6-isomers) Maleimide Iodoacetamide (mixed isomers) amines 496 516 82,000 5 mg O6149 ¥35,300 1.5, 20.4 amines 494 517 84,000 5 mg O6185 ¥35,300 1.5, 4.2 amines <300 NA ND 1 mg O34550 ¥40,900 14.2, 15.4 amines 493 520 78,000 5 mg O6080 ¥35,300 1.5 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 491 515 81,000 5 mg O6034 ¥35,300 2.2 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 491 516 68,000 5 mg O6010 ¥35,300 2.2 494 521 75,000 5 mg O10465 ¥34,800 3.4 492 518 85,000 5 mg O6146 ¥26,400 1.5, 14.3, 20.3 Cadaverine Carboxylic acid (5-isomer) 反応性 aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids amines via carbodiimide activation of the carboxylic acid タンパク質標識キットも販売されています。P.74、P.76およびP.80をご覧ください。NA = Not applicable. ND = Not determined. OregonGreen®514色素 フルオレセインの「ボトムリング」がフッ化されたOregon Green® 514色素は吸光と蛍光のスペクトルがフルオレセイ ンやOregon Green® 488色素より約15nm移動しています。最大吸収（約512nm）が強力なアルゴンイオンレーザーの 514nmスペクトル線とほぼ一致しているので、Oregon Green® 514フルオロフォアは共焦点レーザー顕微鏡とフロー サイトメトリーの両用途において重要な色素です。このフルオレセインのフッ化アナログは、高い標識率においても蛍 光が消光しない、光安定性が高い、pKa値が低い（フルオレセインpKa ＝6.4に対しpKa ＝4.7）など、フルオレセインに おける制限のいくつかを克服しており、この蛍光は生理学的pHの範囲ではpHの影響を受けません。しかし、Oregon Green®色素は弱い酸性（pH4-6）ではpH感受性を示すため、生細胞の酸性細胞小器官のpH指示薬としても有用です。 反応部分 反応性 Succinimidyl ester (6-isomer) amines Carboxylic acid (mixture of amines via carbodiimide activation 5- and 6-isomers) of the carboxylic acid 60 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 489 526 26,000 5 mg O6139 ¥34,400 489 526 26,000 5 mg O6138 ¥26,400 1.5, 14.3, 20.3 1.5, 20.4 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog PacificBlue™色素 6,8-ジフルオロ-7-ヒドロキシクマリンをベースとするPacific Blue™色素は455nm付近の明るい青色蛍光を放出します。 410nmで最大吸収を示すPacific Blue™色素は、最近開発された蛍光顕微鏡とフローサイトメトリー用のブルーダイオー ド（バイオレット）レーザーの405nmスペクトル線によって効率的に励起します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 410 455 46,000 5 mg P10163 ¥45,000 1.7 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 402 451 40,000 1 mg P30506 ¥54,000 2.3 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76ご覧ください。 PacificOrange™色素 Pacific Orange™色素の反応性誘導体は最大励起/蛍光波長、約400/551nmのコンジュゲートを生成し、バイオレットレー ザーを装着したフローサイトメトリーと蛍光顕微鏡での使用に適しています。さらに、Pacific Blue™とPacific Orange™ のコンジュゲートはともにブルーダイオードレーザーの405nmスペクトル線で励起し、それぞれ455および551nmの蛍 光を放出するので、405nmの励起を用いた2色分析と他のフローサイトメーターチャネルを用いたマルチパラメーター 分析に利用できます。 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 404 553 25,000 1 mg P30253 ¥33,400 1.7 タンパク質標識キットも販売されています。P.74およびP.76ご覧ください。 アミン反応性サクシニミジルエステルとチオール反応性マレイミドを含むピリジルオキサゾール誘導体は、UV光-励起 色素とフルオレセインのスペクトルギャップを埋めます。これらのPyMPO誘導体は415nm付近の最大吸収と、蛍光波 長560-580nmのきわめて大きなストークスシフトを示します。ナフタレンをベースとする色素と同様に、ピリジルオ キサゾール色素は環境感受性蛍光スペクトルを示します。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester amines 415 570 26,000 (methanol) Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 412 561 23,000 (methanol) 5 mg S6110 ¥33,900 1.7 5 mg M6026 ¥33,900 2.2 その他の色素 ︵ PyMPO 2 ／フルオレセイン／ ® e u l B e d a c s a C 反応部分 ® n e e r G n o g e r O ／テトラメチルローダミン等︶ www.lifetechnologies.com 61 反応性蛍光色素とその標識 ピレン ピレンコンジュゲートはきわめて長い励起状態寿命（100ナノ秒を超えることがある）と比較的短い波長スペクトルを 示します。1-ピレン酪酸の長い蛍光寿命により蛍光の時間分解（time-gating）測定が可能になり、これは色素シグナル とサンプルの自家蛍光を区別する有用なテクニックで蛍光免疫アッセイに利用されています。また、ピレンの長い蛍光 寿命により、6-10Å以内で隣接するピレン環がスペクトルの異なるエキシマを形成するのに十分な時間が得られます。 エキシマは単一タンパク質の標識部位間または相互作用している生体分子の標識部位間で形成され、拡散をモニターし たり生体分子の機能単位内において相互作用する分子を明らかにすることができます。 これらのアミン反応性ピレン誘導体は主にポリヌクレオチドの標識や、タンパク質の立体構造の研究に用いられていま す。蛍光寿命の長いピレンコンジュゲートを調製する際は、より水溶性の高いN-(1-ピレンブタノイル)システイン酸のサ クシニミジルエステルまたは1-ピレン酪酸の4-スルホ-2,3,5,6-テトラフルオロフェニル(STP)エステルをお勧めします。 アミン反応性1-ピレンスルホニルクロリドは主に誘導体化試薬として用いられます。ピレンマレイミドはチオールと反 応するまで蛍光を生じませんが、励起されるとピレン-チオールコンジュゲートは相互作用して単独での励起より長波長 を放出する励起二量体（エキシマ）を形成します。 ピレンヨードアセトアミドで標識したアクチンモノマーの蛍光は重合すると変化することが知られており、このプロー ブはアクチン重合の動態を追跡するツールとしてきわめて広く用いられています。 62 反応部分 反応性 Abs Em Succinimidyl ester amines 340 376 Succinimidyl ester (CASE) amines 341 376 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 338 Iodoacetamide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 339 Iodoacetamide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 341 Hydrazide aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 341 吸光率 サイズ 43,000 (methanol) 100 mg 製品番号 価格 P130 ¥39,200 1.7 ¥25,900 1.7 ¥25,900 2.3 ¥39,200 2.3, 11.1 ¥33,900 2.3 ¥33,900 3.3 38,000 (methanol) 5 mg P6114 40,000 (methanol, 375 2-mercaptoethanol 100 mg P28 adduct) 26,000 (methanol, 384 2-mercaptoethanol 100 mg P29 adduct) 41,000 (methanol, 377 2-mercaptoethanol 25 mg P2007MP adduct) 376 43,000 (methanol) 100 mg P101 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog R-フィコエリスリン（R-PE） フィコビリタンパク質は安定で可溶性の高いタンパク質であり、その集光器としての生物学的役割には最大の吸光度と 内部および外部の蛍光消光を受けることのない蛍光が必要です。したがって、その吸光特性と蛍光特性はひときわ優れ、 量子収率は0.98、モル吸光率は2.4 10に達すると報告されています。フローサイトメトリーや免疫アッセイなどの実 際の用途におけるR-PE-コンジュゲート抗体の感度は、対応するフルオレセインコンジュゲートの5-10倍です。 反応部分 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 R-phycoerythrin 4 mg/ml R-phycoerythrin pyridyldisulfide derivative *2 mg/ml* requires crosslinker for conjugation requires crosslinker for conjugation (e.g. Protein–Protein crosslinker kit, P6305) 565 578 1,960,000 0.5 ml P801 ¥32,000 6.4, 14.7, 18.2 565 578 1,960,000 1 ml P806 ¥45,300 6.4 Zenon®抗体標識キットに関してはP.78をご覧ください。 ローダミン6G カルボキシローダミン6G（CR 6G）の励起/蛍光スペクトルはフルオレセインとテトラメチルローダミンの間に位置し ます。最大吸収が525nmのカルボキシローダミン6Gのコンジュゲートは、アルゴンイオンレーザーの514nmスペクト ルとよく対応しています。またカルボキシローダミン6Gのコンジュゲートは光安定性に優れているだけでなく、テト ラメチルローダミンのコンジュゲートより高い量子収率を示す傾向があります。Rhodamine Green™と同様に、カル ボキシローダミン6Gはタンパク質コンジュゲートよりヌクレオチドやオリゴヌクレオチドとのコンジュゲート調製に 適しています。カルボキシローダミン6Gのオリゴヌクレオチドコンジュゲートの分光上および電気泳動上の特性は、 DNA配列決定によく用いられているJOE色素より優れています。 反応性 Succinimidyl ester (5-isomer) amines Succinimidyl ester (mixed amines isomers) Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 525 555 108,000 5 mg C6127 ¥42,700 1.6 524 552 92,000 5 mg C6157 ¥28,600 1.6 その他の色素 ︵ 反応部分 2 RhodamineGreen™色素 反応部分 反応性 Succinimidyl ester amines (mixture of 5- and 6-isomers) Succinimidyl ester (X) amines (mixture of 5- and 6-isomers) Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 502 527 78,000 5 mg R6107 ¥47,900 1.5 503 528 74,000 5 mg R6113 ¥47,900 1.5 ／テトラメチルローダミン等︶ ® n e e r G n o g e r O Green™サクシニミジルエステルもお勧めしません。しかし、ペプチドやデキストラン、ヌクレオチド、オリゴヌクレ オチドにコンジュゲートする時は、Rhodamine Green™フルオロフォアは十分な蛍光を維持します。 ® e u l B e d a c s a C 性の高いフルオレセイン置換体のひとつですが、タンパク質とコンジュゲートした時に蛍光が大きく消光する場合や、 溶液中で沈殿する傾向があります。したがって、当社ではタンパク質コンジュゲートの調製にはいずれのRhodamine ／フルオレセイン／ Alexa Fluor® 488色素の非スルホン化アナログのRhodamine Green™ 色素は、特にヌクレオチドと核酸のコンジュ ゲートにおいて優れた光安定性、大きな吸光率（>75,000M-¹cm-¹）、高い量子収率などの好ましい特性を示します。 Rhodamine Green™の光安定性はOregon Green® 488色素より高く、Oregon Green® 514色素とほぼ同程度です。さ らに、そのコンジュゲートの蛍光はpH4-9の範囲において感受性を示しません。Rhodamine Green™色素は最も光安定 www.lifetechnologies.com 63 反応性蛍光色素とその標識 RhodamineRed™色素 Lissamine™ローダミンBスルホニルクロライドは特に水溶液中において不安定で、この色素を用いて再現性のあるコン ジュゲートを得るのは若干困難です。異性体スルホニルクロライド混合物のLissamine™ローダミンBスルホニルクロラ イドとは異なり、Rhodamine Red™-Xサクシニミジルエステルは異性体としては純粋で、コンジュゲーションで通常用 いられるpHでは加水分解に対して抵抗性を示します。インビトロジェンでは、Rhodamine Red™-X色素のタンパク質 コンジュゲートはLissamine™ローダミンBのタンパク質コンジュゲートより明るいことが多く、保存中に沈殿を起こし にくいことを見いだしています。サクシニミジルエステルにはフルオロフォアとサクシニミジルエステル基との間にさ らに7原子分のアミノヘキサノイルスペーサー（"X"）が含まれています。このスペーサーはフルオロフォアをその付着 点から分離し、それによってコンジュゲートされる生体分子とフルオロフォアとの相互作用を低下させる役目を果たし ます。 反応部分 反応性 Succinimidyl ester (X) (5-isomer) amines Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 560 580 129,000 5 mg R6160 ¥27,700 1.6, 4.2 560 580 119,000 5 mg R6029 ¥34,800 2.2 FluoReporter®タンパク質標識キットも販売されています。P.80をご覧ください。 スチルベン IAEDANSと同様に、スチルベンのヨードアセトアミドとマレイミドの誘導体は水溶性が高く、チオールと容易にコン ジュゲートを形成します。その極性の高さと細胞膜不透過性から、これらのポリスルホン化色素はチオールを含むタン パク質やポリペプチド鎖が細胞外部に露出しているか、細胞膜表面にあるかを判定する上で有用です。スチルベンタン パク質付加生成物は荷電しており、ゲルまたはキャピラリー電気泳動で検出することができます。 反応部分 64 反応性 Abs Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 322 Iodoacetamide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 329 Em 吸光率 サイズ 35,000 (methanol, 411 2-mercaptoethanol 25 mg adduct) 39,000 (methanol, 408 2-mercaptoethanol 25 mg adduct) 製品番号 価格 A485 ¥34,800 2.3 A484 ¥34,800 2.3 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog テトラメチルローダミン（TMR、TRITC、TAMRA） テトラメチルローダミン（TMR、TRITC）はとくに免疫化学で用いられる蛍光抗体やアビジン誘導体などのバイオコン ジュゲートを調製するために広く用いられているフルオロフォアです。TAMRAと名づけられたTMRのカルボン酸もオ リゴヌクレオチドの標識や自動DNAシーケンシング用途に用いられる色素として有名です。キャピラリー電気泳動に よるTMR-標識アミノ酸の検出限界は分子約600個と報告されています（J Chromatogr 608:117 (1992)）。TMRコンジュ ゲートの量子収率は通常フルオレセインコンジュゲートの約1/4しかありませんが、TMRは多くの蛍光顕微鏡で用いら れている水銀アークランプの強力な546nmスペクトル線によって容易に励起し、本来フルオレセインより光安定性が 高いので、TMRコンジュゲートはフルオレセインコンジュゲートよりしばしば明るく見えます。またTMRは分析用に 次第に多く用いられるようになっている緑色He-Neレーザーの543nmスペクトル線によっても効率的に励起します。 TMRコンジュゲートは多くの共焦点レーザースキャニング顕微鏡で用いられているAr-Kr混合ガスレーザーの568nmス ペクトル線によってはあまり励起されません。 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 555 580 95,000 25 mg C1171 ¥40,900 1.6 95,000 5 mg C2211 ¥48,800 1.6 573 91,000 5 mg C6123 ¥48,800 1.6 543 571 92,000 10 mg T6105 ¥40,000 1.6, 4.2 543 571 99,000 5 mg T1480 ¥25,900 1.6 Isothiocyanate (6-isomer) Isothiocyanate (mixed isomers) Azide Tetramethylrhodamine-5iodoacetamide dihydroiodide (5-TMRIA) (single isomer) Tetramethylrhodamine-5maleimide (single isomer) Tetramethylrhodamine-6maleimide (single isomer) amines 544 572 90,000 5 mg T1481 ¥25,900 1.6 amines 544 572 84,000 10 mg T490 ¥28,600 1.6 amines 545 578 90,000 5 mg T6219 ¥33,900 3.2 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 543 567 87,000 5 mg T6006 ¥57,700 2.2 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 541 567 95,000 5 mg T6027 ¥45,300 2.2 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 541 567 91,000 5 mg T6028 ¥45,300 2.2 544 571 78,000 10 mg A1318 ¥34,400 3.4 540 565 95,000 100 mg C300 ¥27,700 1.6 542 568 91,000 10 mg C6121 ¥33,900 1.6 540 564 103,000 10 mg C6122 ¥33,900 1.6 543 570 92,000 25 mg F11830 ¥42,700 9.5 Cadaverine Carboxylic acid (mixed isomers) Carboxylic acid (5-isomer) Carboxylic acid (6-isomer) α-FMOC-ε-TMR-l-lysine aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids amines via carbodiimide activation of the carboxylic acid amines via carbodiimide-activated carboxylic acids amines via carbodiimide activation of the carboxylic acid peptide synthesis FluoReporter®タンパク質標識キットも販売されています。P.80をご覧ください。 2 ／フルオレセイン／ 579 547 その他の色素 ︵ 546 Succinimidyl ester (6-isomer) amines Succinimidyl ester (X) (mixed amines isomers) Isothiocyanate (5-isomer) amines ® e u l B e d a c s a C 反応部分 Succinimidyl ester (mixed amines isomers) Succinimidyl ester (5-isomer) amines ® n e e r G n o g e r O ／テトラメチルローダミン等︶ www.lifetechnologies.com 65 反応性蛍光色素とその標識 TexasRed®色素 Texas Red®色素はテトラメチルローダミンやLissamine™ ローダミンBより長い波長を放出するので、Texas Red®コン ジュゲートは蛍光顕微鏡における長波長「第三の標識」として最も広く用いられています。他のローダミンとは異なり、 Texas Red®フルオロフォアのスペクトルはフルオレセインとほとんど重複せず、その蛍光はフィコエリスリンと区別 することができます。さらに、Texas Red®コンジュゲートの量子収率は通常、テトラメチルローダミンやLissamine™ ローダミンBコンジュゲートより高くなっています。Texas Red®コンジュゲートはAlexa Fluor® 594色素を除く他の多く の赤色蛍光色素のコンジュゲートより明るく、低いバックグランドを示します。Texas Red®コンジュゲートは多くの共 焦点レーザースキャニング顕微鏡で現在用いられているAr-Kr混合ガスレーザーの568nmスペクトル線またはオレンジ He-Neレーザーの594nmスペクトル線による励起に特に適しています。 反応部分 Succinimidyl ester (X) (mixed isomers) Succinimidyl ester (X) (single isomer) 反応性 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 amines 583 603 112,000 5 mg T6134 ¥36,500 1.6, 4.2 amines 587 602 96,000 1.6, 4.2 2 mg T20175 ¥34,800 10 mg T353 ¥33,900 1.6 10 × ~1 mg T1905 ¥40,000 1.6 Sulfonyl chloride (mixed isomers) amines 588 601 Dichlorotriazine amines, alcohol (hydroxyl) 583 604 87,000 5 mg T30200 ¥34,800 1.6, 3.2 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 582 600 112,000 5 mg T6008 ¥34,800 2.2 Bromoacetamide Hydrazide, >90% single isomer thiols (mercaptans, sulfhydryls) aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids aldehydes, ketones, carbodiimideactivated carboxylic acids 583 603 115,000 5 mg T6009 ¥34,800 2.2 582 602 109,000 5 mg T6256 ¥34,400 3.3 591 612 85,000 5 mg T2425 ¥42,700 3.4 Cadaverine 84,000 タンパク質およびZenon®抗体標識キットも販売されています。P.74およびP.78をご覧ください。 X-ローダミン（ROX） カルボキシ-X-ローダミン（ROX）の誘導体はオリゴヌクレオチドの標識や自動DNAシーケンシング用途に広く用いら れています。この色素のコンジュゲートはLissamine™ローダミンBコンジュゲートのスペクトルより長い波長を示しま すが、Texas Red®コンジュゲートの波長より若干短い波長のスペクトルを示します。 反応部分 66 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Succinimidyl ester (5-isomer) amines 反応性 580 605 78,000 5 mg C6125 ¥48,800 1.6 Succinimidyl ester (6-isomer) amines Succinimidyl ester amines (mixed isomers) Isothiocyanate amines (mixed isomers) amines via carbodiimide activation Carboxylic acid (5-isomer) of the carboxylic acid amines via carbodiimide activation Carboxylic acid (6-isomer) of the carboxylic acid 575 602 82,000 5 mg C6126 ¥48,800 1.6 576 601 80,000 25 mg C1309 ¥40,000 1.6 572 596 92,000 10 mg X491 ¥33,900 1.6 567 591 92,000 10 mg C6124 ¥33,900 1.6 570 590 113,000 10 mg C6156 ¥33,900 1.6 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog 光増感剤 当社では2種類の光増感剤の反応性誘導体─蛍光エオシンと非蛍光マラカイトグリーン─を提供しており、いずれ も特定の波長の光に暴露されるとフリーラジカルを生成します。 エオシン 反応性エオシン（2',4',5',7'-テトラブロモフルオレセイン）色素は通常はその蛍光特性から選択されることはなく─エ オシンの量子収率はフルオレセインの10-20％に過ぎません─、むしろリン光プローブまたは光増感剤として作用す ることから選択されます。エオシンとそのコンジュゲートは単一酸素原子生成あたりの量子収量が大きく（約0.57） 、 高解像度電子顕微鏡や相関蛍光電子顕微鏡におけるジアミノベンジジン（DAB）の光酸化剤として用いることができま す。 マラカイトグリーン マラカイトグリーンは長波長（約630nm）を吸収する非蛍光性光増感剤です。その光増感作用は、特異的抗体にマラ カイトグリーンイソチオシアネートをコンジュゲートすることにより特定の細胞部位を標的にすることができます。マ ラカイトグリーン-標識抗体の結合部位の10Å以内に存在する酵素その他のタンパク質を、長波長光を照射することで 選択的に破壊することができます（J Cell Biol 134:1197-207 (1996); Nature 376:686-690 (1995)）。Jayらの研究から、こ の発色団に近接する酵素の光誘導破壊は、寿命が短いために生成部位からの拡散が制限されるヒドロキシルラジカルの 局所的生成によるものであることが明らかにされています（Proc Natl Acad Sci USA 91:2659-2663 (1994)）。 Abs Em 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Diacetate succinimidyl ester amines <300 NA ND 5 mg C22803 Isothiocyanate (5-isomer) amines 524 544 95,000 100 mg E18 ¥46,100 14.2, 15.4, 16.3 ¥34,400 1.5, 16.3 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 524 545 103,000 25 mg E118 ¥53,200 2.2 amines 628 none 76,000 10 mg M689 ¥45,300 1.6, 18.2 Malachite green Isothiocyanate NA = Not applicable. ND = Not determined. その他の色素︵ Cascade Blue® ／フルオレセイン／ 反応性 テトラメチルローダミン等︶／光増感剤 反応部分 Eosin 2 ／ Oregon Green® www.lifetechnologies.com 67 反応性蛍光色素とその標識 消光剤 蛍光共鳴エネルギー転移（FRET）ではダブシル、 DABMI、QSY®シリーズなどの非蛍光消光色素が効率的なFRETアクセプター になります。可視光線の吸収が広いので、これらの色素はブルー、グリーン、オレンジおよび赤色蛍光FRETドナーの蛍 光を効率的に消光することができます。さらに、これらの色素は蛍光を生じないのでFRET測定時のバックグラウンドが ゼロになり、直接的な（感作によらない）アクセプター励起によるバックグラウンド蛍光の問題を排除できます。 ダブシル ダブシルは広範な可視光線を強力に吸収しますが蛍光を生じないので、FRET用途におけるアクセプターとして有用です。 ダブシルと適当なフルオロフォアで二重標識した生体分子を用いて、タンパク質の分解、立体構造の変化その他の動的な 空間移動をモニターすることができます。ダブシルサクシニミジルエステルはHIVプロテアーゼなどのプロテアーゼの消 光させた蛍光基質の調製において特に有用です。 DABMI 発色団マレイミドのDABMIも広範な可視光線を吸収するので、FRET研究におけるもう一つの非蛍光チオール反応性アク セプターとして有用です。 QSY®色素 QSY®7、QSY®9およびQSY®21色素は、エネルギー転移に基づくアッセイで用いるバイオコンジュゲートを調製する際に 広く用いられているダブシル発色団より優れたいくつかの特性を有するジアリルローダミン誘導体です。 広範な可視光線スペクトルを吸収：最大吸収はQSY®7およびQSY®9でともに560nm付近、 QSY®21で660nm付近です 大きな吸光率：通常、90,000M-¹cm-¹を上回ります pH-非感受性吸収スペクトル：pH4-10 量子収率がきわめて低い：水溶液中で通常0.001未満 QSY®7およびQSY®9色素は、青色蛍光のクマリン、緑色および橙色蛍光色素のすべて、および赤色蛍光のAlexa Fluor® 594、Texas Red®色素などのドナー色素の蛍光放出を効率的に消光します。QSY®9はスルホン化されたQSY®7で、水溶性 が高くなっています。きわめて長波長の光を吸収するQSY®21は、 すべての赤色蛍光色素の蛍光放出を効率的に消光します。 非蛍光のニトロベンズオキサジアゾール（NBD）誘導体のQSY®35酢酸サクシニミジルエステルは、ダブシル色素より長 波長の光線を強力に吸収するので、多くの青色蛍光色素の非常に優れたアクセプターです。すべてのQSY®色素は、ダブ シル消光剤が消光可能な波長範囲よりはるかに広範囲の多くのフルオロフォアの蛍光を効率的に消光します。 反応部分 反応性 MW Abs 吸光率 サイズ 製品番号 価格 Dabcyl Succinimidyl ester amines 366.38 453 32,000 100 mg D2245 ¥25,000 1.8, 9.5 FMOC-lysine peptide synthesis 619.72 427 30,000 100 mg D6216 ¥57,700 9.5 thiols (mercaptans, sulfhydryls) 320.35 419 34,000 100 mg D1521 ¥19,100 2.2 amines aldehydes, ketones, carbodiimide activated carboxylic acids thiols (mercaptans, sulfhydryls) 791.32 560 90,000 5 mg Q10193 ¥34,800 1.6, 9.5 560 92,000 5 mg Q10464 ¥33,900 3.4, 9.5 858.45 560 92,000 5 mg Q10257 ¥34,800 2.2, 9.5 Succinimidyl ester amines 951.43 562 88,000 5 mg Q20131 ¥35,300 1.6, 9.5 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 1083.3 562 90,000 5 mg Q30457 ¥35,300 2.2 amines 815.34 661 90,000 5 mg Q20132 ¥35,300 1.6, 9.5 Succinimidyl ester amines 411.33 475 23,000 5 mg Q20133 ¥35,300 1.8, 9.5 Iodoacetamide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 453.2 475 24,000 5 mg Q20348 ¥35,300 2.2, 9.5 FMOC-lysine peptide synthesis 565.54 475 23,000 5 mg Q21931 ¥37,000 9.5 DABMI maleimide QSY® 7 dye Succinimidyl ester Amine Maleimide 814.87 QSY® 9 dye QSY® 21 dye Succinimidyl ester QSY® 35 dye 68 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog 架橋剤 二官能性架橋試薬には2つの反応基が含まれており、それによって2つの標的基を共有結合させることができます。本 章の最初に述べたように、サクシニミジルエステル、マレイミド、ヨードアセトアミドなどの化学的架橋試薬の反応基 は通常、官能基のクラスに属します。対照的に、光反応性架橋試薬の一方の反応基は、標的基と反応する前に光活性化 を要します。生体ポリマー（抗体、酵素、アビジン、核酸など）と低分子量分子（薬物、毒素、ペプチド、オリゴヌク レオチドなど）の架橋やもう一つの生体ポリマーとの架橋により、安定なヘテロコンジュゲートが形成されます。この バイオコンジュゲートは広範な研究や診断アッセイにおける検出試薬、あるいは抗体産生を誘導する抗原になります。 架橋試薬は生体分子内または分子間における空間関係や相互作用を探索する際にも有用です。 反応部分 反応性1 反応性2 photoreactive amine photoreactive MW サイズ 製品番号 価格 239.29 100 mg B1526 ¥28,600 5.3 thiol 277.28 100 mg B1508 ¥28,600 5.3 amine thiol 334.33 100 mg S1534 ¥33,900 5.2 photoreactive amine 332.17 25 mg A2522 ¥28,600 5.3 photoreactive amine 323.3 100 mg B1577 ¥13,500 5.3 amine thiol 231.22 100 mg S1553 ¥33,900 5.2 amine thiol 312.36 100 mg S1531 ¥33,900 5.2 thiol thiol 840.47 5 mg B10621 ¥33,900 2.2, 5.2 carboxylic acid amine 191.7 100 mg E2247 ¥6,600 3.4, 5.2 SPDP SMCC NA 1 kit P6305 ¥57,700 5.2 NA = Not applicable. www.lifetechnologies.com 2 消光剤／架橋剤 Benzophenone-4isothiocyanate Benzophenone-4maleimide SMCC (Succinimidyl trans4-(maleimidylmethyl) cyclohexane-1-carboxylate) ATFB, SE (4-Azido-2,3,5,6tetrafluorobenzoic acid, succinimidyl ester) 4-Benzoylbenzoic acid, succinimidyl ester SATA (Succinimidyl acetylthioacetate) SPDP (Succinimidyl 3-(2-pyridyldithio) propionate) bis-((N-Iodoacetyl) piperazinyl) sulfonerhodamine EDAC (1-Ethyl-3-(3dimethylaminopropyl) carbodiimide, hydrochloride) Protein-Protein Crosslinking Kit 69 反応性蛍光色素とその標識 その他の反応性プローブ 先述の反応性フルオロフォア、光増感剤、消光剤、架橋剤に加えて、いくつかのその他の蛍光性および非蛍光性反応性 プローブが利用できます。 反応性アクリロイル-X誘導体 アクリロイル-Xのサクシニミジルエステルはタンパク質のアミン、アミン修飾核酸その他の生体分子と反応して、マイ クロアレイやバイオセンサーなどのポリアクリルアミドマトリックス内部やその表面と共重合できるアクリルアミドを 生成します。 反応性tert-ブチルオキシカルボニル（t-BOC）誘導体 t-BOCのTFPエステルは有機溶媒中で新しいアルデヒド-およびケトン-反応性プローブを合成する上で有用な、アミン反 応保護ヒドロキシルアミンです。t-BOCのプロピレンジアミン誘導体は、有機溶媒可溶性カルボン酸を脂肪族アミンに 変換する上で有用な半保護ジアミンです。いずれの場合もt-BOC基はトリフルオロ酢酸で除去できます。 反応性OxyBURST®グリーンジアセテート OxyBURST®グリーンH₂DCFDAのサクシニミジルエステルは、アミン反応性酸化感受性2',7'-ジクロロジヒドロフルオレ セインジアセテートで、抗体、抗原、ペプチド、タンパク質、デキストラン、細菌、酵母、ポリスチレンマイクロスフェ アなどの生体分子や粒子とコンジュゲートを形成します。 反応性pHrodo™酸センサー pHrodo™センサーのサクシニミジルエステルはこの新規酸センサーのアミン反応型で、溶液のpHが酸性になるにつれ て蛍光（最大励起/蛍光波長=560/585nm）が増加します。 70 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog 反応性SNARF®-1pH指示薬 SNARF®-1カルボン酸アセテートのサクシニミジルエステルは、比率測定型の赤色蛍光pHセンサー SNARF®-1（pKa約7.5） のアミン反応型で、pH7から8の間のpHの変化を測定します。アセテートが指示薬の陰荷電をブロックするので、細胞 透過性pH-感受性コンジュゲートの調製が促進されます。 4-スルホ-2,3,5,6-テトラフルオロフェノール（STP） STPはカルボン酸からの水溶性活性化エステルの調製に用いられます。 カルボン酸ケージングキット カルボン酸塩、フェノール、リン酸塩などの弱いオキシ酸（pKa=3-7）を含む広範な化合物が1-(4,5-ジメトキシ-2-ニト ロフェニル)ジアゾエタンと反応して1-(4,5-ジメトキシ-2-ニトロフェニル)エチル(DMNPE)-cagedアナログを形成しま す。DMNPE生成キットには不安定なジアゾエタンを生成し、光活性化DMNPEエステルを調製するための試薬が含まれ ています。 反応性 Application MW サイズ 製品番号 価格 Acryloyl-X 6-((Acryloyl)amino)hexanoic acid, succinimidyl ester t-BOC amines amine-reactive acryloyl 282.3 5 mg A20770 ¥18,900 5.2, 9.4 TFP Ester amines amine-reactive protected hydroxylamine 339.24 25 mg B30300 ¥21,500 1.8, 3.3 Propylenediamine aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids amine-containing protected amine 174.24 1g M6248 ¥12,800 3.4 amines amine-reactive ROS sensor 584.37 5 mg D2935 ¥23,700 16.1, 18.2 amines amine-reactive acid sensor ~650 1 mg P36600 ¥88,200 20.4 amines 10 × 50 cell-permeant amine-reactive 592.56 pH indicator µg S22801 ¥67,900 14.2, 15.4, 20.4 amines water-soluble amine-reactive 268.11 100 mg molecule S10490 ¥16,200 3.4 weak oxo-acids (pKa = 3 to 7) such as carboxylates, phenols, or phosphates complete kit to attach a photoactivatable caging group NA (DMNPE) D2516 ¥29,000 5.3 OxyBURST® Green diacetate Succinimidyl ester pHrodo™ acid sensor Succinimidyl ester SNARF®-1 pH indicator SNARF®-1 carboxylic acid, acetate, succinimidyl ester (special packaging) STP 4-Sulfo-2,3,5,6-tetrafluorophenol, sodium salt (STP) Kit for caging carboxylic acid DMNPE (1-(4,5-dimethoxy2-nitrophenyl) diazoethane) Generation Kit 1 kit 2 その他の反応性プローブ 製 品 名 NA = Not applicable. www.lifetechnologies.com 71 反応性蛍光色素とその標識 ビオチンとハプテン 免疫学、組織化学、in situハイブリダイゼーション、アフィニティクロマトグラフィーその他さまざまな領域の用途に おいてアビジン-ビオチンおよび抗体-ハプテン相互作用の高い親和性と特異性が利用されています。ビオチン化および ハプテン化試薬を用いると、検出の困難な分子を標識検出試薬やアフィニティキャプチャーマトリックスで認識できる プローブに変換する「タグ」が得られます。抗体やレクチン、薬物、ポリヌクレオチド、多糖類、受容体リガンドなど の分子にビオチンやハプテンでタグをつけると、それを用いてタンパク質や核酸のブロットやアレイだけでなく細胞や 組織、複合溶液をプローブすることができます。このタグ付き分子は適当なアビジンや抗-ハプテン抗体コンジュゲー トで検出したり、固定されたアビジンまたはハプテンの結合マトリックスでキャプチャーすることができます。 当社では反応性ハプテンのジニトロフェニル（DNP）やジゴキシゲニンだけでなく、広範なビオチン化およびデスチ オビオチン化（DSB-Xビオチニル化）試薬を提供しています。DSB-Xビオチンテクノロジーはきわめて緩やかな条件下 において生存細胞を含む生体分子を標識および分離できる修飾ビオチンを用いています（Anal Biochem 308, 343-57 (2002)）。7原子の'X'スペーサーが付着したデスチオビオチンの誘導体のDSB-Xビオチン試薬は、中性pHおよび室温に おいて低濃度の遊離ビオチンまたはデスチオビオチンによって速やかに置換する、アビジンおよびストレプトアビジン に対する中程度の親和性を示します。このテクニックにより当社のDSB-Xビオチンバイオコンジュゲート分離キットを 用いてDSB-Xビオチン-標識分子のキャプチャーと放出が可能になります。また当社ではビオチン化タンパク質および 核酸の標識度（DOL）を測定するFluoReporter®キットや、哺乳動物の細胞と組織のアビジン-ビオチン実験におけるバッ クグラウンドレベルを低下させるEndogenous Biotin-Blockingキットだけでなく、標識および未標識ビオチンも用意し ています。 製 品 名 反応性 MW サイズ 製品番号 価格 Biotin Succinimidyl ester amines 341.38 100 mg B1513 ¥18,000 Iodoacetamide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 454.33 25 mg B1591 ¥29,400 4.2, 14.3 4.2 Ethylenediamine aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids 367.3 25 mg A1593 ¥26,400 4.2, 14.3 Cadaverine aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids 442.5 25 mg A1594 ¥33,600 4.2, 14.3 Norbiotinamine aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids 251.77 10 mg N6356 ¥26,400 4.2 Hydroxylamine (ARP) aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids 445.41 10 mg A10550 ¥34,400 4.2, 8.2 Biocytin (biotin-l-lysine) aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids 372.48 100 mg B1592 ¥22,400 4.2, 14.3 Hydrazide aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids 386.51 25 mg B1603 ¥28,600 4.2, 14.3 Maleimide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 523.6 25 mg M1602 ¥25,900 4.2, 14.3 Succinimidyl ester amines 454.54 100 mg B1582 ¥28,600 4.2, 14.3 Sulfosuccinimidyl ester amines 556.58 25 mg B6353 ¥25,900 4.2, 14.3 Cadaverine aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids 555.65 10 mg B1596 ¥28,600 4.2, 14.3 Biocytin Biotin-X DSB-X™ biotin Iodoacetamide thiols (mercaptans, sulfhydryls) 537.44 5 mg D30753 ¥33,000 4.2 Hydrazide aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids 341.45 5 mg D20653 ¥26,900 4.2, 14.3 Biotin-XX* Succinimidyl ester amines 567.7 100 mg B1606 ¥46,200 4.2 Sulfosuccinimidyl ester amines 669.74 25 mg B6352 ¥25,900 4.2, 14.3 Hydrazide aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids 484.66 25 mg B2600 ¥27,700 4.2 amines 861.97 5 mg B2604 ¥48,800 4.2 394.34 Biotin / DNP* DNP-X–biocytin-X, succinimidyl ester Dinitrophenyl (DNP) Succinimidyl ester (DNP-X, SE) Amine 25 mg D2248 ¥25,900 4.2 aldehydes, ketones, carbodiimide-activated carboxylic acids 384.26 100 mg D1552 ¥39,900 12.3 amines 586.68 A2952 ¥36,500 4.2 Digoxigenin Succinimidyl ester 5 mg * Available as a protein labeling kit. NA = Not applicable. 72 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog Adjunctreagentsforbiotin-avidinapplications 製 品 名 d-Biotin サイズ 製品番号 価格 1g B1595 ¥14,200 d-Biotin, 50 mM aqueous solution 10 ml B20656 ¥16,400 4.2, 7.6 4.2, 7.6 Biotin-4-fluorescein 5 mg B10570 ¥33,900 4.3, 14.3 d-Desthiobiotin, 50 mM aqueous solution 10 ml D20657 ¥16,400 4.2, 7.6 Endogenous Biotin-Blocking Kit, 100 assays 1 kit E21390 ¥32,600 7.6 Fluorescein biotin 5 mg B1370 ¥33,900 4.3, 14.3 FluoReporter® Biotin DOL Quantitation Kit for biotinylated proteins, 5 determinations 1 kit F30751 ¥42,900 1.2, 4.2 2 ビオチンとハプテン www.lifetechnologies.com 73 反応性蛍光色素とその標識 タンパク質標識キット（モノクローナル抗体／ APEX ／ Zenon®） Molecular Probes® のタンパク質標識キットを用いると、明るい Alexa Fluor®、従来の蛍光色素またはハプテンを抗体 やタンパク質に直接標識できます。精製等の合理化されたプロトコールと水溶性試薬を特徴とした、有効性が実証され た革命的な使いやすいタンパク質標識キットです。 AlexaFluor®タンパク質標識キット 当社では長年にわたるタンパク質標識の経験と価値のあるフルオロフォアを組 合わせたタンパク質標識キットを扱っています。このキットを用いると、Alexa Fluor®色素によるタンパク質の標識が簡単に行えます： プロトコールが単純で簡単です。 バッファーと精製試薬が全て含まれています。 反応性の色素があらかじめ計測されているので、少量の色素を測り取る必要 がありません。 作業（精製を含む）は約2時間で済み、手作業がほとんどありません。 取り扱いが容易なタンパク質標識キット 当社の取り扱い容易なタンパク質標識キットはタンパク質の標識、とくに蛍光色 素を用いたIgG抗体の標識が容易に行えます。あらかじめ量が測定されたアミン Drosophila melanogaster の卵巣小管。 D. melanogaster卵巣小管の細胞膜および 細胞間橋または環状管付近に局在する線 維状アクチン（F-アクチン）を赤蛍光テ キサスレッド-Xファロイジン（T7471）で 染色した。卵巣小管周囲の小胞細胞およ び卵腔内の栄養細胞の核をHoechst 33258 （H1398、H3569、H21491） で 染 色 し た。 Hoechst 33258色 素 か ら の シ グ ナ ル は 疑 似 カ ラ ー の グ リ ー ン。 こ の 画 像 はMing- 反応性色素と磁気撹拌バーの入った3本のバイアルのうちのひとつに約1 mgのタ ンパク質（約500 µlでTrisなどのアミンを含まないバッファー）を入れるだけです。 精製はキットに含まれているグラビィティーフローのサイズ排斥カラムを使用し ます。本キットはIgG抗体に最適化されていますが、約30,000ダルトンより大き なタンパク質のコンジュゲート精製にも使用できます。 Der Lin, Department of Zoology, National Taiwan Universityからの提供。 15 分間 インキュベーション タンパク質溶液に 重炭酸塩を添加 反応性色素に タンパク質を添加 カラムで コンジュゲートを精製 取り扱いが容易なタンパク質標識キットでタンパク質を簡単に標識 74 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog モノクローナル抗体標識キット モノクローナル抗体標識キットを用いると、当社のすぐれたAlexa Fluor®色素で少量のIgG抗体を簡単かつ効率的に標 識できます。ポリクローナル抗体やその他の多くの市販されているタンパク質とは異なり、モノクローナル抗体は通常 ごく少量しか得られません。本キットではキットに含まれているバッファーでタンパク質濃度を約1 mg/ml溶液に調製 し、アミン反応性色素の5本のバイアルのうち1本に添加するだけです。精製は分子量30,000ダルトン以上のタンパク 質に最適化されたサイズ排斥スピンカラムを用います。 1 時間 インキュベーション スピンカラムで コンジュゲートを精製 モノクローナル抗体標識キットで少量のIgG抗体を簡単に標識 非常に少量（10-20μg）のIgG 抗体に直接フルオロフォアを付ける便利なキットです。APEX抗体標識キットは固相標 識技術を用います。APEX抗体標識チップ（右下図）内のレジン上にIgG 抗体を捕捉します。アミン反応性の標識試薬 に干渉しうるコンタミやBSA のような安定化タンパク質を含んでいる溶液中の抗体でも共有結合的に標識できます。ど のようなコンタミもチップを通ってシンプルに溶出します。アミン反応性標識の付加後、蛍光性IgG コンジュゲートは イメージングまたはフローサイトメトリー用にご使用できます。非常に少量（10-20μg）のIgG への標識を共有結合で 結合します。標識したい抗体溶液にBSA のような安定化タンパク質が共存していても標識可能です。蛍光標識抗体は2.5 時間（手作業は約15 分）でご使用できます。mouse、rabbiｔ IgGに利用できます。Rat、hamster、goat IgGには適し ておりません。 Cap Tip sheath Apex Antibody labeling カラム HeLa 細胞：ミトコンドリア、抗 OxPhos Complex V inhibitor protein mouse IgG1 モノクロ ー ナ ル 抗 体 APEX Alexa Fluor® 488（A10468） 、ゴルジ体抗 golgin-97 mouse モノクローナル抗体 APEX Alexa Fluor® 555（A10470）、核 染 色 DAPI (D1306, D3571, D21490). ／ Resin タンパク質標識キット︵モノクローナル抗体／ 少量抗体用共有結合標識キット （APEXAntibodyLabelingKit） 2 ︶ ® n o n e Z 反応性色素に タンパク質を添加 X E P A タンパク質溶液に 重炭酸塩を添加 www.lifetechnologies.com 75 反応性蛍光色素とその標識 標識可能なタンパク質量と標識キット キット名 IgG量 〈1-20µg Zenon® 抗体標識キット APEX ラベリングキット 10-20µg マイクロスケールラベリングキット 20-100µg モノクローナル抗体ラベリングキット 100µg タンパク質ラベリングキット 1mg 蛍光色素別標識キット タンパク質 ラベリングキット モノクローナル抗体 ラベリングキット Alexa Fluor® 350 A10170 A20180 Alexa Fluor® 430 A10171 Alexa Fluor® 488 A10235 A20181 Alexa Fluor® 532 A10236 A20182 Alexa Fluor® 546 A10237 A20183 Alexa Fluor® 555 A20174 A20187 Alexa Fluor® 568 A10238 A20184 Alexa Fluor® 594 A10239 Alexa Fluor® 633 A20170 Alexa Fluor® 647 A20173 Alexa Fluor® 660 A20171 Alexa Fluor® 680 A20172 Dye マイクロスケールタンパク質 ラベリングキット APEX ラベリングキット A30006 A10468 A30007 A10470 A20185 A30008 A10474 A20186 A30009 A10475 Oregon Green® 488 A10476 Pacific Blue™ A10478 タンパク質標識キット ラベル No. of labelings Labeled amount Abs Em サイズ 製品番号 価格 Alexa Fluor® 350 3 1 mg 346 442 1 kit A10170 ¥53,700 1.2, 1.3, 1.7 Alexa Fluor® 430 3 1 mg 433 539 1 kit A10171 ¥75,000 1.2, 1.3, 1.7 Alexa Fluor® 488 3 1 mg 495 519 1 kit A10235 ¥74,700 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 532 3 1 mg 531 554 1 kit A10236 ¥75,000 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 546 3 1 mg 556 573 1 kit A10237 ¥74,700 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 555 3 1 mg 555 565 1 kit A20174 ¥74,700 1.2, 1.3 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 568 3 1 mg 578 603 1 kit A10238 ¥74,700 Alexa Fluor® 594 3 1 mg 590 617 1 kit A10239 ¥74,700 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 633 3 1 mg 632 647 1 kit A20170 ¥74,700 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 647 3 1 mg 650 668 1 kit A20173 ¥74,700 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 660 3 1 mg 663 690 1 kit A20171 ¥74,700 1.2, 1.3 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 680 3 1 mg 679 702 1 kit A20172 ¥74,700 DSB-X™ Biotin 5 0.5–3 mg <300 NA 1 kit D20655 ¥75,100 1.2, 4.2 Fluorescein-EX 3 1 mg 491 515 1 kit F10240 ¥74,100 1.2, 1.5 Oregon Green® 488 3 1 mg 492 518 1 kit O10241 ¥74,100 1.2, 1.5 Pacific Blue™ dye 3 1 mg 410 455 1 kit P30012 ¥78,000 1.2, 1.7 Pacific Orange™ dye 3 1 mg 404 553 1 kit P30016 ¥78,000 1.2, 1.7 Texas Red® dye 3 1 mg 583 603 1 kit T10244 ¥74,100 1.2, 1.6 NA = Not applicable. 76 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog モノクローナル抗体標識キット ラベル Abs Em サイズ 製品番号 価格 Alexa Fluor® 350 No. of labelings Labeled amount 5 100 µg 346 442 1 kit A20180 ¥77,900 Alexa Fluor® 488 5 100 µg 495 519 1 kit A20181 ¥77,900 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 532 5 100 µg 531 554 1 kit A20182 ¥77,900 1.2, 1.3 1.2, 1.3, 1.7 Alexa Fluor® 546 5 100 µg 556 573 1 kit A20183 ¥77,900 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 555 5 100 µg 555 565 1 kit A20187 ¥77,900 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 568 5 100 µg 578 603 1 kit A20184 ¥77,900 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 594 5 100 µg 590 617 1 kit A20185 ¥77,900 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 647 5 100 µg 650 668 1 kit A20186 ¥77,900 1.2, 1.3 Pacific Blue™ dye 5 100 µg 410 455 1 kit P30013 ¥78,000 1.2, 1.7 Pacific Orange™ dye 5 100 µg 404 553 1 kit P30014 ¥78,000 1.2, 1.7 Abs Em サイズ 製品番号 価格 マイクロスケールタンパク質標識キット ラベル No. of labelings Labeled amount Alexa Fluor® 488 3 20–100 µg 495 519 1 kit A30006 ¥93,400 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 555 3 20–100 µg 555 565 1 kit A30007 ¥93,400 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 594 3 20–100 µg 590 617 1 kit A30008 ¥93,400 1.2, 1.3 Alexa Fluor® 647 3 20–100 µg 650 668 1 kit A30009 ¥93,400 1.2, 1.3 Biotin-XX 3 20–100 µg <300 NA 1 kit B30010 ¥80,900 1.2, 4.2 Biotin-XX* 3 20–100 µg <300 NA 1 kit B30756 ¥96,500 1.2, 4.2 少量抗体用共有結合標識キット（APEXAntibodyLabelingkit） サイズ 製品番号 価格 APEX Alexa Fluor® 488 Antibody Labeling Kit 1 kit A10468 ¥58,300 1.2, 1.3 APEX Alexa Fluor® 555 Antibody Labeling Kit 1 kit A10470 ¥58,300 1.2, 1.3 APEX Alexa Fluor® 594 Antibody Labeling Kit 1 kit A10474 ¥58,300 1.2, 1.3 APEX Alexa Fluor® 647 Antibody Labeling Kit 1 kit A10475 ¥58,300 1.2, 1.3 APEX Oregon Green® 488 Antibody Labeling Kit 1 kit A10476 ¥58,300 1.2, 1.5 APEX Pacific Blue™ Antibody Labeling Kit 1 kit A10478 ¥58,300 1.2, 1.7 ／ X E P A ︶ ® n o n e Z 製品名 タンパク質標識キット︵モノクローナル抗体／ * Includes FluoReporter® Biotin Quantitation Assay Kit. NA = Not applicable. 2 www.lifetechnologies.com 77 反応性蛍光色素とその標識 Zenon®抗体標識キット 直接標識法の代わりとして、Zenon®テクノロジーは、開始材料がµgオーダーのマウス、ウサギ、ヤギおよびヒトIgG と蛍光色素（Alexa Fluor® 色素、フィコビリタンパク質とそのタンデムコンジュゲートその他の従来のフルオロフォ ア）やビオチンを非共有結合により標識する、融通性が高く取扱いの容易な方法を提供します （P.15も参照）。Zenon®抗 体標識テクノロジーは抗体結合反応の免疫選択性を利用して、インタクトな一次IgG抗体と、そのIgGのFc部分に対す るフルオロフォアまたはビオチン標識Fabフラグメントの間で複合体を形成させます。Zenon®抗体標識キットに入っ ている標識Fabフラグメントと対応する一次抗体を混合するだけで、標識前後に精製することなく10分以内にFab-抗体 複合体が定量的に生成されます。この標識一次抗体が生成されると、それを用いて共有結合標識一次抗体と同じ方法で 細胞や組織その他の標的を直ちに染色することができます。Zenon®抗体標識キットは、精製抗体フラクションや血清、 腹水、ハイブリドーマ上清などの粗抗体原料を用いて1 µg未満から50 µgまでのインタクトな抗体を標識するようにデ ザインされています。 他の直接標識法と同様に、Zenon®抗体標識テクノロジーは多くの用途において二次検出試薬が不要になるだけでなく、 同じプロトコールで同じ動物種に由来する複数の抗体を用いたり、抗体と組織がともに同じ動物種に由来する場合にそ の組織に結合する抗体を検出するなどの、従来は時間がかかり実際的ではなかった免疫標識用途を単純にします。また、 Zenon®標識抗体複合体は多重アッセイにおいて直接標識抗体コンジュゲートと併用することもできます。 当社ではマウスIgG、マウスIgGa、マウスIgGb、ウサギIgG、ヤギIgGおよびヒトIgG抗体で使用するZenon®抗体 標識キットを提供しており、それぞれのキットには対応する一次抗体のFc部分に対応し広範な検出可能標識の組 み合わせで共有結合標識されたヤギ二次抗体から生成されたFabフラグメントを含むZenon®標識試薬（ヤギIgG抗 体用のZenon®標識試薬の場合はウサギ二次抗体）が入っています。標識に応じてZenon®抗体標識キットにはサ ンプル1 µgに対して10-50回の標識が可能な十分量の試薬が入っています。これらは特定の抗体クラス（Zenon® マウスIgG標識キットの場合はサブクラス）のFc部分に対する二次抗体に由来しているので、Zenon®標識試薬は抗体 の種類と動物種に対して選択的で、対応する抗体の標識に用いると最も安定な複合体を形成します。 注）Zenon®はウエスタンにはご使用いただけません。生物種・アイソタイプを選んでご使用ください。 ラベル No. of labelings Labeled amount Abs Em サイズ 製品番号 価格 Zenon® Antibody Labeling Kits for Goat IgG Alexa Fluor® 488 50 1 µg 495 519 1 kit Z25602 ¥62,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 555 50 1 µg 555 565 1 kit Z25605 ¥62,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 568 50 1 µg 578 603 1 kit Z25606 ¥62,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 594 50 1 µg 590 617 1 kit Z25607 ¥62,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 647 50 1 µg 650 668 1 kit Z25608 ¥62,200 1.2, 1.3, 7.3 1 µg 346 442 1 kit Z25400 ¥59,200 Zenon® Antibody Labeling Kits for Human IgG Alexa Fluor® 350 50 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 488 50 1 µg 495 519 1 kit Z25402 ¥59,200 Alexa Fluor® 555 50 1 µg 555 565 1 kit Z25405 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 594 50 1 µg 590 617 1 kit Z25407 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 647 50 1 µg 650 668 1 kit Z25408 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Allophycocyanin 25 1 µg 650 660 1 kit Z25451 ¥58,000 1.2, 6.4, 7.3 Biotin-XX 25 1 µg <300 NA 1 kit Z25452 ¥59,200 1.2, 4.2, 7.3 R-Phycoerythrin (R-PE) 25 1 µg 565 578 1 kit Z25455 ¥58,000 1.2, 6.4, 7.3 Zenon® Antibody Labeling Kits for Mouse IgG 78 Alexa Fluor® 488 50 1 µg 495 519 1 kit Z25002 ¥59,200 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 532 50 1 µg 531 554 1 kit Z25003 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 546 50 1 µg 556 573 1 kit Z25004 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 555 50 1 µg 555 565 1 kit Z25005 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 350 50 1 µg 346 442 1 kit Z25000 ¥59,200 Alexa Fluor® 405 50 1 µg 402 421 1 kit Z25013 ¥58,000 Alexa Fluor® 430 50 1 µg 433 539 1 kit Z25001 ¥58,000 Alexa Fluor® 568 50 1 µg 578 603 1 kit Z25006 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 594 Alexa Fluor® 610– R-Phycoerythrin Alexa Fluor® 647 Alexa Fluor® 647– R-phycoerythrin Alexa Fluor® 660 50 1 µg 590 617 1 kit Z25007 ¥59,200 10 1 µg 496 630 1 kit Z25020 ¥58,000 50 1 µg 650 668 1 kit Z25008 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 1.2, 1.3, 6.4, 7.3 1.2, 1.3, 7.3 1.2, 1.3, 6.4, 7.3 1.2, 1.3, 7.3 10 1 µg 496 668 1 kit Z25021 ¥58,000 50 1 µg 663 690 1 kit Z25009 ¥59,200 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog ラベル No. of labelings Labeled amount Abs Em サイズ 製品番号 価格 Alexa Fluor® 680 Alexa Fluor® 680– R-phycoerythrin Alexa Fluor® 700 Alexa Fluor® 700– allophycocyanin Alexa Fluor® 750– allophycocyanin Allophycocyanin 50 1 µg 679 702 1 kit Z25010 ¥59,200 10 1 µg 496 702 1 kit Z25022 ¥58,000 10 1 µg 650 775 1 kit Z25031 ¥58,000 25 1 µg 650 660 1 kit Z25051 ¥58,000 Biotin-XX 25 1 µg <300 NA 1 kit Z25052 ¥59,200 1.2, 4.2, 7.3 Fluorescein (FITC) 50 1 µg 495 519 1 kit Z25042 ¥59,200 1.2, 1.5, 7.3 50 1 µg 702 723 1 kit Z25011 ¥58,000 10 1 µg 650 723 1 kit Z25030 ¥58,000 1.2, 1.3, 7.3 1.2, 1.3, 6.4, 7.3 1.2, 1.3, 7.3 1.2, 1.3, 6.4, 7.3 1.2, 1.3, 6.4, 7.3 1.2, 6.4, 7.3 Pacific Blue™ dye 50 1 µg 410 455 1 kit Z25041 ¥58,000 1.2, 1.7, 7.3 Pacific Orange™ dye 50 1 µg 404 553 1 kit Z25256 ¥58,000 1.2, 1.7, 7.3 R-Phycoerythrin (R-PE) 25 1 µg 565 578 1 kit Z25055 ¥58,000 1.2, 6.4, 7.3 Texas Red® dye 50 1 µg 595 615 1 kit Z25045 ¥59,200 1.2, 1.6, 7.3 1 µg 495 519 1 kit Z25090 ¥100,700 1.2, 1.3, 6.2, 7.3 1 µg 346 442 1 kit Z25100 ¥59,200 Zenon® Antibody Labeling Kits for Mouse IgG1 w/TSA Alexa Fluor® 488 50 Zenon® Antibody Labeling Kits for Mouse IgGa Alexa Fluor® 405 50 1 µg 402 421 1 kit Z25113 ¥58,000 Alexa Fluor® 488 50 1 µg 495 519 1 kit Z25102 ¥59,200 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 546 50 1 µg 556 573 1 kit Z25104 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 555 50 1 µg 555 565 1 kit Z25105 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 568 50 1 µg 578 603 1 kit Z25106 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 50 1 µg 590 617 1 kit Z25107 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 50 1 µg 650 668 1 kit Z25108 ¥59,200 10 1 µg 496 668 1 kit Z25121 ¥58,000 50 1 µg 679 702 1 kit Z25110 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 1.2, 1.3, 6.4, 7.3 1.2, 1.3, 7.3 Allophycocyanin 25 1 µg 650 660 1 kit Z25151 ¥58,000 1.2, 6.4, 7.3 Biotin-XX 25 1 µg <300 NA 1 kit Z25152 ¥59,200 1.2, 4.2, 7.3 Pacific Orange™ dye 50 1 µg 404 553 1 kit Z25257 ¥58,000 1.2, 1.7, 7.3 R-Phycoerythrin (R-PE) 25 1 µg 565 578 1 kit Z25155 ¥58,000 1.2, 6.4, 7.3 1 µg 346 442 1 kit Z25200 ¥59,200 Zenon® Antibody Labeling Kits for Mouse IgGb Alexa Fluor® 350 50 Alexa Fluor® 405 50 1 µg 402 421 1 kit Z25213 ¥58,000 Alexa Fluor® 488 50 1 µg 495 519 1 kit Z25202 ¥59,200 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 546 50 1 µg 556 573 1 kit Z25204 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 555 50 1 µg 555 565 1 kit Z25205 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 568 50 1 µg 578 603 1 kit Z25206 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 594 50 1 µg 590 617 1 kit Z25207 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 647 Alexa Fluor® 647– R-phycoerythrin Alexa Fluor® 680 50 1 µg 650 668 1 kit Z25208 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 1.2, 1.3, 6.4, 7.3 1.2, 1.3, 7.3 10 1 µg 496 668 1 kit Z25221 ¥59,200 50 1 µg 679 702 1 kit Z25210 ¥59,200 Allophycocyanin 25 1 µg 650 660 1 kit Z25251 ¥59,200 1.2, 6.4, 7.3 Biotin-XX 25 1 µg <300 NA 1 kit Z25252 ¥59,200 1.2, 4.2, 7.3 R-Phycoerythrin (R-PE) 25 1 µg 565 578 1 kit Z25255 ¥58,000 1.2, 6.4, 7.3 50 1 µg 346 442 1 kit Z25300 ¥59,200 Alexa Fluor® 405 50 1 µg 402 421 1 kit Z25313 ¥58,000 Alexa Fluor® 430 50 1 µg 433 539 1 kit Z25301 ¥58,000 Alexa Fluor® 488 50 1 µg 495 519 1 kit Z25302 ¥59,200 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 1.7, 7.3 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 532 50 1 µg 531 554 1 kit Z25303 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 546 50 1 µg 556 573 1 kit Z25304 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 555 50 1 µg 555 565 1 kit Z25305 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 ︶ Alexa Fluor® 350 ／ Zenon® Antibody Labeling Kits for Rabbit IgG タンパク質標識キット︵モノクローナル抗体／ Alexa Fluor® 594 Alexa Fluor® 647 Alexa Fluor® 647– R-phycoerythrin Alexa Fluor® 680 2 ® n o n e Z 50 X E P A Alexa Fluor® 350 continued on next page www.lifetechnologies.com 79 反応性蛍光色素とその標識 continued from previous page ラベル No. of labelings Labeled amount Abs Em サイズ 製品番号 価格 Alexa Fluor® 568 50 1 µg 578 603 1 kit Z25306 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 594 50 1 µg 590 617 1 kit Z25307 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 647 50 1 µg 650 668 1 kit Z25308 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 680 50 1 µg 679 702 1 kit Z25310 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Alexa Fluor® 750 50 1 µg 749 775 1 kit Z25312 ¥59,200 1.2, 1.3, 7.3 Allophycocyanin 25 1 µg 650 660 1 kit Z25351 ¥58,000 1.2, 6.4, 7.3 Biotin-XX 25 1 µg <300 NA 1 kit Z25352 ¥59,200 1.2, 4.2, 7.3 Fluorescein (FITC) 50 1 µg 495 519 1 kit Z25342 ¥59,200 1.2, 1.5, 7.3 Pacific Blue™ dye 50 1 µg 410 455 1 kit Z25341 ¥58,000 1.2, 1.7, 7.3 R-Phycoerythrin (R-PE) 25 1 µg 565 578 1 kit Z25355 ¥58,000 1.2, 6.4, 7.3 NA = Not applicable. FluoReporter®タンパク質標識キット FluoReporter®タンパク質標識キットは当社の最もポピュラーな蛍光色素で標識されたタンパク質コンジュゲートを研 究スケールで調製するためにデザインされています。キットに入っている詳細なプロトコールにはタンパク質を標識す るために必要な色素の量の計算方法が記載されており、コンジュゲートは40kDaより大きなタンパク質コンジュゲート の精製に適したキット中の簡便なスピンカラムを用いて簡単に精製できます。コンジュゲートの標識と精製は通常、3 時間以内に完了します。各キットにはタンパク質0.2-2 mgの5-10サンプルを標識するために十分な、以下の試薬が入っ ています。 アミン-反応性色素5本 無水ジメチルスルホキシド（DMSO） 撹拌バー、スピンカラムおよび収集チューブを含む反応チューブ 詳細なプロトコール FluoReporter®ビオチン-XXおよびミニビオチン-XXタンパク質標識キットには、それぞれタンパク質5-20mgまたは0.13 mgのビオチン化反応を5回行なうために十分な試薬が入っています。これらのキットには水溶性のビオチン-XXスル ホサクシニミジルエステル（XXはビオチン部分から反応性エステルを分離する14原子のスペーサー）が含まれており、 ビオチンはアビジンやストレプトアビジンにより接近しやすくなっています。他のタンパク質標識キットと同様に、こ れらのキットにはコンジュゲートを簡単に精製するためのゲルろ過カラムまたはスピンカラムが入っています。 FluoReporter®ビオチン/DNPタンパク質標識キットには特色として新しい試薬、DNP-X-ビオシチン-X-サクシニミジル エステルが入っており、360 nm付近のDNPの吸光度を測定することによりビオチニル化を定量することができます（ε =15,000 M-¹cm-¹）。このキットで標識されたタンパク質は抗-DNP抗体やストレプトアビジンまたはアビジンで検出す ることができます。このキットにはタンパク質0.2-2 mgを5-10回標識するために十分な試薬が入っています。 ラベル Biotin-XX 製品名 FluoReporter® Protein Labeling Kit FluoReporter® FITC Protein Fluorescein (FITC) Labeling Kit No. of labelings Labeled amount Abs Em サイズ 製品番号 価格 5 0.1–3 mg <300 NA 1 kit F6347 ¥64,600 1.2, 4.2 5–10 0.2–2 mg 494 519 1 kit F6434 ¥77,200 1.2, 1.5 NA = Not applicable. 80 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog 小動物 in vivo イメージングキット SAIVI™迅速抗体標識キット SAIVI™迅速抗体標識キットによりAlexa Fluor® 680またはAlexa Fluor® 750色素で抗体を標識するための簡便な方法が得 られます。キット中のコンジュゲーションプロトコールにより、反応容積や色素の濃度、必要な抗体濃度を調節する ことなく6倍の抗体濃度の範囲でin vivoイメージングに適した標識度（DOL=約2）が得られます。キット中には凍結乾 燥され直ちに使用できる、水溶性の近赤外蛍光のAlexa Fluor® 反応性色素が入っています。標識反応には有機溶媒は不 要で、標識後の反応も必要ありません。色素標識コンジュゲートは迅速でシンプルなプロトコールにより10分以内に 精製できます。SAIVI™Rapid抗体標識キットで調製したAlexa Fluor® 色素-標識抗体は、生存細胞の撮影や動物への直接 注入などのアジドを含まない試薬が必要な用途で直ちに使用できます。各SAIVI™Rapid抗体標識キットにはタンパク質 0.5-3mgで3回の標識反応を行なうのに十分な、以下の試薬が入っています。 Alexa Fluor® 反応性色素 重炭酸ナトリウム DOL調節試薬 サイズ排斥カラム、シリンジおよびシリンジフィルター DOL算出ガイドラインなどの詳細なプロトコール SAIVI™AlexaFluor®647抗体/ タンパク質標識キット DOL 3.9 DOL 6.0 Tumor Fluorescence Intensity 2000 1800 Fluorescence Intensity 1600 1400 1200 DOL 1.1 DOL 2.4 1000 DOL 3.9 800 DOL 6.0 2 タンパク質標識キット︵モノクローナル抗体／ 入っています。 この方法を用いるとタンパク質に対する色素の割合を変化 させてタンパク質を調製できるので、DOLがバックグラウ ンド蛍光や生体内分布、血液クリアランスに大きな作用を 及ぼすin vivoイメージングなどの用途を効率的に最適化さ せることができます。 SAIVI™抗体/タンパク質標識キットで調製したAlexa Fluor® 647色素標識抗体は、生存細胞の画像取得や動物への直 接注入などのアジドを含まない試薬が必要な用途で直ち に使用できます。各SAIVI™ 抗体/タンパク質100µgおよび SAIVI™抗体/タンパク質1mg標識キットには、タンパク質 100µgで5回の標識反応、タンパク質1mgで3回の標識反 応を行なうのに十分な、以下の試薬が入っています。 DOL 2.4 小動物 in vivo イメージングキット SAIVI™ Alexa Fluor® 647抗体/タンパク質標識キット（反 応あたり1mgタンパク質標識用と100 µgタンパク質標識 用があります）により、近赤外蛍光Alexa Fluor® 647色素 で少量のIgGその他のタンパク質（>30 kDa）を簡単に標 識することができます。これらのキットにはDOL調節試薬 と、標識反応中に高値のDOLを低下させるための説明書が DOL 1.1 600 400 200 0 0 12 24 36 48 Time (hours) Alexa Fluor® 647反応性色素 重炭酸ナトリウム DOL調節試薬 サイズ排斥カラム、洗浄バッファーおよび収集チューブ DOL算出ガイドラインなどの詳細なプロトコール 製品名 Alexa Fluor® 647 SAIVI™ Antibody/Protein Labeling Kit Alexa Fluor® 680 SAIVI™ Rapid Antibody Labeling Kit Alexa Fluor® 750 SAIVI™ Rapid Antibody Labeling Kit No. of labelings Labeled amount Abs 3 1 mg 3 0.5–3 mg 3 0.5–3 mg Em サイズ 製品番号 価格 650 668 1 kit S30044 ¥101,700 1.2, 1.3 679 702 1 kit S30045 ¥112,000 1.2, 1.3 749 775 1 kit S30046 ¥112,000 1.2, 1.3 www.lifetechnologies.com ︶／ Zenon® ラベル SAIVI™試薬ではDOLを調節でき、より鮮明な画像が得られます。 ／ APEX 81 反応性蛍光色素とその標識 核酸標識キット Molecular Probes®核酸標識キットを用いて強力な蛍光を発するAlexa Fluor® 色素でDNA、RNAおよびオリゴヌクレオ チドを直接標識します。 ARES™DNA標識キット ARES™ DNA標識キットを用いると融通性の高い2ステップ法により、当社の優れた蛍光色素でDNAを標識することが できます。最初のステップでは従来の酵素標識法を用いてアミン修飾ヌクレオチドの5-(3-アミノアリル)-dUTPをDNA に組み込みます。このステップによりプローブが第一アミン基で比較的均一に標識されます。この反応で用いられる アミノアリルdUTP基質は逆転写またはニックトランスレーションにより効率的に取り込まれ、この反応について当社 ではプロトコールを提供しています。他の酵素法も同等と思われます。二番目のステップではアミン修飾DNAがアミ ン-反応性Alexa Fluor® 色素を用いて化学的に標識されます。この化学反応は色素が異なっても効率がほとんど変動せ ず、したがって最も明るく光安定性の高いこの色素の広範な選択肢とARES™キットを組み合わせることができ、一貫 したDNA標識を得ることができます。キット中の標識プロトコールにより一般に塩基12-15個あたり約1個の色素が組 み込まれ、蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）およびドットブロットハイブリダイゼーションに最適です。各 ARES™ DNA標識キットには以下の試薬が入っています。 5-(3-アミノアリル)-dUTP アミン-反応性Alexa Fluor® 色素および溶媒 重炭酸ナトリウム ヌクレアーゼを含まない水 1-5 µgのDNAを5-10回標識できる、十分な材料が入っています。 AlexaFluor®オリゴヌクレオチドアミン標識キット Alexa Fluor® オリゴヌクレオチドアミン標識キットには、5'-または3'-末端にアミン基が組み込まれた合成オリゴヌクレ オチドを標識するために必要な試薬が入っています。標準的なクロマトグラフィーまたは電気泳動法により精製した後、 これらの単一標識オリゴヌクレオチドはさまざまな用途におけるプライマーとして用いることができます。また、色素 標識オリゴヌクレオチドはハイブリダイゼーション反応において蛍光共鳴エネルギー転移（FRET）のアクセプターま たはドナーとして用いることもできます。各Alexa Fluor® オリゴヌクレオチドアミン標識キットには以下の試薬が入っ ています。 アミン-反応性Alexa Fluor® 色素および溶媒 標識バッファー 詳細なプロトコール 各Alexa Fluor® オリゴヌクレオチドアミン標識キットにはサンプル50 µgを3回標識するのに必要な試薬が入っていま す。コンジュゲートを精製し分析するための推奨法も入っています。 ULYSIS®核酸標識キット ULYSIS®核酸標識キットは当社のいくつかのAlexa Fluor® フルオロフォアと、KREATECH Diagnosticsで開発されたプラ チナをベースとする融通性の高い特許取得済みのUniversal Linkage System（ULS）を結合し、蛍光ハイブリダイゼーショ ンプローブを生成するシンプルで確実な方法を実現しています。ULS法はKREATECH Biotechnology BVが特許を取得し たプラチナ色素複合体を使用して、DNA、RNA、ペプチド-核酸コンジュゲート（PNA）およびオリゴヌクレオチドの グアニン塩基および少し低いですがアデニン塩基のN-7位と安定な付加生成物を生成します。標識反応は15分で完了し、 未反応ULS複合体からの標識核酸の分離はシンプルなスピンカラムを用いて行なうことができます。1000塩基対より長 いDNAは標識前にDNaseで10分間分解する必要があり、この操作により効率的なハイブリダイゼーションを行なうプ ローブの標識と断片化が最適化されます。ULYSIS®キットを用いて標識されたプローブはいつまでも安定で、標的DNA と効率的にハイブリダイズします。ULS法はドット、SouthernおよびNorthernブロット分析、RNAおよびDNAのin situ ハイブリダイゼーション、多色FISH、比較ゲノムハイブリダイゼーション（CGH）およびマイクロアレイ分析用の標 識プローブの調製に用いられています。各ULYSIS®核酸標識キットには以下の試薬が入っています。 ULS標識試薬と適切な溶媒 標識バッファー 標識前に1000塩基対を超えるDNAを分解するためのデオキシリボヌクレアーゼI（DNase I） DNase I保存バッファー 濃縮DNase I反応バッファー ウシ胸腺のコントロールDNA ヌクレアーゼを含まない水 詳細なプロトコール 各キットには1µgのDNAを20回標識できる材料が入っています。 82 Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s). 記載価格は 2012 年 8 月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。 Cell Biology Catalog FISHTag™DNA標識キット FISH Tag™ DNA標識キットは蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）用途における完全なワークフローソリューショ ンを提供します。各キットにはプローブの合成、標識および精製、褪色防止剤等、FISH標本作製に必要な試薬が入っ ています。FISH Tag™ DNA標識キットは2ステップ標識テクノロジーを用いており、ニックトランスレーションにより アミン修飾ヌクレオチド（アミノアリルdUTP）を酵素的に組み込み、ついでAlexa Fluor® 色素で化学的に標識します。 次にPureLink™核酸精製テクノロジーを用いて標識されたプローブを迅速かつ効率的に精製し、SlowFade® Gold褪色防 止剤を用いて画像取得中にすぐれた光安定性を実現します。 FISH Tag™ DNA標識キットは染色体におけるDNA標的の標識、およびミトコンドリアDNAの局在および構造物に関す るin situ分析に適しています。FISH Tag™ DNA標識キットは4種類のAlexa Fluor® 色素のうち1種類を含む単色キット、 または4種類すべての色素を含む多色キットとして販売されています。 FISHTag™RNA標識キット ラベル 2 ショウジョウバエ胚中の標識したRNAターゲット Labeling reactions Abs Em サイズ 製品番号 価格 ARES™ DNA Labeling Kits Alexa Fluor® 488 10 × 1–5 µg of amine-modified DNA 495 519 1 kit A21665 ¥69,500 1.2, 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 546 10 × 1–5 µg of amine-modified DNA 556 573 1 kit A21667 ¥69,500 1.2, 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 555 10 × 1–5 µg of amine-modified DNA 555 565 1 kit A21677 ¥69,500 1.2, 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 594 10 × 1–5 µg of amine-modified DNA 590 617 1 kit A21669 ¥69,500 1.2, 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 647 10 × 1–5 µg of amine-modified DNA 650 668 1 kit A21676 ¥69,500 1.2, 1.3, 8.2 核酸標識キット FISH Tag™ RNA標 識 キ ッ ト は 蛍 光in situハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン （FISH）用途における完全なワークフローソリューションを提供し ます。各キットにはプローブの合成、標識および精製、FISH標本作 製に必要なすべての試薬が入っています。FISH Tag™ RNA標識キッ トは2ステップ標識テクノロジーを用いており、in vitro転写を用い てアミン修飾ヌクレオチド（アミノアリルUTP）を酵素的に組み込 み、ついでAlexa Fluor® 色素で化学的に標識します。次にPureLink™ 核酸精製テクノロジーを用いて標識されたプローブを迅速かつ効率的 に精製し、SlowFade® Gold褪色防止剤を用いて画像撮影中に優れた光 安定性を実現します。 FISH Tag™ RNA標識キットは細胞、組織および胚全身における単一ま たは複数のRNAの広範なFISH分析に適しています。FISH Tag™ RNA標 識キットは4種類のAlexa Fluor® 色素のうち1種類を含む単色キット、 または4種類すべての色素を含む多色キットとして販売されています。 Oligonucleotide Amine Labeling Kits Alexa Fluor® 488 3 × 50 µg oligonucleotide 495 519 1 kit A20191 ¥76,800 1.2, 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 647 3 × 50 µg oligonucleotide 650 668 1 kit A20196 ¥76,800 1.2, 1.3, 8.2 ULYSIS® Nucleic Acid Labeling Kits Alexa Fluor® 488 20 × 1 µg of DNA 495 519 1 kit U21650 ¥69,500 1.2, 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 532 20 × 1 µg of DNA 531 554 1 kit U21651 ¥69,500 1.2, 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 546 20 × 1 µg of DNA 556 573 1 kit U21652 ¥69,500 1.2, 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 594 20 × 1 µg of DNA 590 617 1 kit U21654 ¥69,500 1.2, 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 647 20 × 1 µg of DNA 650 668 1 kit U21660 ¥69,500 1.2, 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 488 10 reactions 495 519 1 kit F32947 ¥75,700 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 555 10 reactions 555 565 1 kit F32948 ¥75,700 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 594 10 reactions 590 617 1 kit F32949 ¥75,700 1.3, 8.2 Alexa Fluor® Multicolor Kit 10 reactions NA NA 1 kit F32951 ¥86,100 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 488 10 reactions 495 519 1 kit F32952 ¥91,300 1.3, 8.2 Alexa Fluor® 594 10 reactions 590 617 1 kit F32954 ¥91,300 1.3, 8.2 Alexa Fluor® Multicolor Kit 10 reactions NA NA 1 kit F32956 ¥101,700 1.3, 8.2 FISH Tag™ DNA Kits FISH Tag™ RNA Kits NA = Not applicable. www.lifetechnologies.com 83 ライフテクノロジーズジャパン株式会社 販売店 本社：〒108-0023 東京都港区芝浦 4-2-8 TEL.03-6832-9300 FAX. 03-6832-9580 大阪：〒564-0052 大阪府吹田市広芝町 10-28 TEL.06-6339-8165 FAX. 06-6339-8138 コールセンター テクニカルサポート オーダーサポート カスタムプライマーについて サービスラボ 営業部 0120-650591（携帯からでもご利用いただけます） 0120-477-392 FAX：0120-477-120 TEL：03-6832-6980 FAX：03-6832-9584 TEL：03-6832-6980 FAX：03-6832-9585 TEL：03-5753-3006 FAX：03-5753-3007 TEL：03-6832-9300 FAX：03-6832-9580 WEB002 www.lifetechnologies.com