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■ SUMMARY OF ASSAY PROCEDURE
1．Return all reagents to room temperature before use. When preparing the
TSH standard disc or sample blood filter paper disc φ= 3 mm, 1 disc
substrate solution, check that the substrate tablet has dissolved
↓
Enzyme-labeled Anti-TSH
completely, and stir before use.
2． Use reagents promptly after preparation.
3． Do not use reagents from different lots together.
4． Store the kit under the designated conditions, and use prior to the
expiration date.
5． Place the Substrate （ tablet ） directly into the Solution for Substrate
container. Do not touch the substrate with your hands.
6．Measurement results are affected by the incubation time and temperature.
Therefore, the sample and TSH standard disc must be incubated at the
same time under pre-established conditions. The results are particularly
susceptible to these effects when using the elution method; be sure to
incubate at the same time and under constant conditions.
7． After dispensing the Enzyme-labeled Anti-TSH into the well, stir to mix
the contents thoroughly. Check carefully that the blood filter paper is
immersed in the fluid.
8． Be sure to remove all blood filter paper from the well during the washing
operation.
9． Because the reagents are affected by substances such as sodium azide
and chlorine ions, be sure to use purified water when preparing the
reagents, and wash all tools well with purified water before their use.
10．The plate seals used at each reaction stage must be replaced with new
ones.
11．Before starting measurement, check that the bottom surfaces of the plates
are not dirty or contaminated. If there is any residue or foreign matter on
a plate, wipe it clean with alcohol-moistened cotton or similar material
before commencing measurement.
12．The TSH standard disc uses human blood for the material. This blood has
been tested for HBs antigens, HIV（ HIV－1,HIV－2）antibodies and HCV
antibodies, and only blood that tested negative is used. However because
the risk of infection and presence of pathogens other than those listed
above cannot be ruled out, these materials must be handled with the
same caution as patient blood samples.
13．Because the termination solution in this kit contains 2 mol/L sulfuric acid,
use caution when handling. If this solution comes in contact with the skin,
or enters the eyes or mouth, wash thoroughly with water and administer
other necessary first aid. If necessary, seek prompt medical attention.
Use caution when disposing of the termination solution; neutralize it or
take similar steps.
14．OPD（o-Phenylendiamine dihydrochloride）contained in the Substrate is
reported to be mutagenic. When handling, avoid contact with the eyes,
skin, or mucous membranes. Take care to avoid inhaling the powder. If
this substance comes in contact with the skin or other body part,
immediately wash the affected part thoroughly with water.
15．Do not use the contents of the kit for any other purpose.
16．After the containers are used, either incinerate them or separate and
dispose of them as infectious waste, in accordance with all regulations.
17．Clinical diagnosis based on these measurement results must be in the
form of a comprehensive decision made by the attending physician, with
consideration of clinical symptoms and other analysis results.
100 μL
＜Two-Day Method＞
4°C（2～8°C）for 16～20 hours
Mixing
＜Reduced-Time Method＞
25°C（20～30°C）for 3～4 hours（rotating）
↓Decanting
Washing solution
300 μL
↓Decanting
Washing solution
300 μL
↓Decanting
Washing solution
300 μL
↓Decanting
Substrate solution
100 μL
↓Incubation at 25°C for 30 minutes
Terminating Solution
100 μL
↓
Measurement of absorbance
Measure at 492 nm
Elution Method
Add saline solution to the standard disc and sample blood filter paper disc
beforehand, and perform elution. Use this eluate for measurement.
■ EXAMPLE OF STANDARD CURVE
（OD）
10
1
0.1
0
0
1.0
10.0
TSH concentration（ μ IU/mL）
100.0
■ PRECAUTION FOR USE
１. Properties of measurement samples and method of taking samples
Dried blood filter paper is used. When samples are to be stored, they
should be kept in a refrigerator or at －20℃.
２. Interfering substances
No effect of LH, FSH and hCG was observed up to 100 mIU/mL of LH,
FSH and 1000 IU/mL of hCG.
■ INTERPRETATION OF RESULTS
Cretinism is judged according to this method by determining the
distribution of neonatal sample values at the simultaneous measurement
time, resulting the samples in the 3～5 percentiles from the highest value,
and resampling and accurately testing the samples in the 3 percentile.
Storage
Expiration
製造販売届出番号
甲状腺刺激 ホルモンキット
09A2X10001000014
クレチンＴＳＨ ＥＬＩＳＡ Ⅱ
【全般的な注意】
３．測定（操作）法
測定は通常二重測定（ 2 ウエル）で行うこと。
１．本製品は体外診断用医薬品であり、それ以外の目的には使用できない。
◎
２．診断は、本製品による検査結果のみで行わず、他の検査結果や臨床症状を
考慮して総合的に判断すること。
1）ウエルの Ａ－1 及び Ｂ－1 をブランク（ ＢＫＧ）用にあけておく。ウエルの
３．添付文書に記載された内容に従い使用すること。それ以外の方法についての
Ｃ～Ｈ の 1 列，Ａ～Ｈ の 2 列を標準曲線作成用に使用する。
保証はできない。
2）ウエルの Ｃ－1 及び Ｄ－1 に標準ＴＳＨ 血液ろ紙 Ａ、ウエルの Ｅ－1 及び
４．標準ＴＳＨ 血液ろ紙はヒト血液を含むので、感染の危険があるものとして
Ｆ－1 に次の濃度を直径 3 mm に打ち抜いたものを 1 枚ずつ入れ、以下同様
注意して取り扱うこと。
に、順次ウエルの Ｇ－1，Ｈ－1，Ａ－2，Ｂ－2，Ｃ－2，Ｄ－2，Ｅ－2，Ｆ－2，
Ｇ－2，Ｈ－2 まで各標準ＴＳＨ 血液ろ紙を 1 枚ずつ入れる。
【 形状・構 造等（キットの構成）】
構成試薬名 （括弧内略号）
1
ＴＳＨ 抗体固相化プレート
（ＴＳＨ 抗体固相化プレート）
2
酵素標識ＴＳＨ 抗体
（酵素標識 TSH 抗体）
3
基質剤
（基質剤）
4
5
洗浄剤
（洗浄剤）
6
劇
反応 停止液
（反応停止液）
7
主 な
3）残りのウエルに直径 3 mm に打ち抜いた検体血液ろ紙を 1 枚ずつ入れる。
成 分
4）標準ＴＳＨ 血液ろ紙あるいは検体血液ろ紙を入れたウエルに、酵素標識
抗ヒトＴＳＨ マウスモノクローナル抗体
ＴＳＨ 抗体を 100μL ずつ加え、軽く振とうさせた後、プレートシールを貼り
固相化プレート
4 ℃（ 2～ 8℃）で 16～ 20 時間反応させる。
5）内容液を排除した後、洗浄液を300μL ずつ分注し、液を排除する。この操作
ペ ル オ キ シ ダーゼ 標 識 抗 ヒトＴＳＨ
を 3 回繰り返す。このとき、ウエル内に血液ろ紙が残っていないことを確認
マウスモノクローナル抗体
する。
ｏ－フェニレンジアミン二塩酸塩
6）各ウエルに基質液を 100μL ずつ順序よく一定の速度で加える。プレートシ
（ＯＰＤ）
ールを貼り、遮光し、25℃で 30 分間反応させる。
7）各ウエルに基質液を入れた順序に従って、反応停止液を一定の速度で 100
溶解液
（溶解液）
標準ＴＳＨ 血液ろ紙
（標準ＴＳＨ 血液ろ紙）
直接法
Ⅰ．2 日 法
過酸化水素水（30％）
μL ずつ加える。
8）マイクロプレート用分光光度計を用いて、波長 492nm（480～ 500nm）で、
モノラウリン酸ポリオキシエチレン
測定する。
ソルビタン（20 E.O.）
9）両対数方眼紙の横軸に標準ＴＳＨ 血液ろ紙の各濃度をとり、縦軸には吸光
度をとって標準曲線を作成する。
硫酸
1 ビン中
10）各検体の吸光度を、標準曲線にあてはめて各検体中の甲状腺刺激ホルモン
6.7 mL 含有
（ＴＳＨ ）濃度を読みとる。
（Ａ～Ｇ の 7 段階濃度）各スポット中
Ⅱ．短時間法
のＴＳＨ 濃度はろ紙に表示
原則的にはⅠ.2 日法と同じであるが、4）の操作で反応時間が異なる。
（付属品）プレートシール
相違点は以下の通りである。
・ 25℃（20～ 30℃）で、専用プレートローテーターで撹拌しながら、3 ～ 4
時間反応させる。
【使用目的】
全血（血液ろ紙）中の甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ ）の測定
■ウエル配置参考例
1
【測定原理】
Ａ
本製品は 1 ステップサンドイッチ法の Enzyme linked immunosorbent assay
（ELISA）である。
Ｂ
Ｄ
１．測定試料の性質・採取法
3
4
5
6
Ｆ
7
8
9 10 11 12
B
K
G
検
標
体
Ｅ
準
Ｇ
社内で検討した結果、ヒト黄体形成ホルモン（ＬＨ），ヒト卵胞刺激ホルモン
CRETIN TSH ELISAⅡ‘Eiken’
（480 tests）
・・・Ⅰ－ DA79
2
Ｃ
【操作上の注意】
２．交差反応性
： 2～8℃
： 6 months
■ PACKAGE UNIT・ PRODUCT CODE
■ PERFORMANCE CHARACTERISTICS
＊ 2011 年 4 月改訂（ 第 5 版 ）
体外診断用医薬品
乾燥血液ろ紙を使用する。冷所もしくは－20℃にて保存すること。
■ STORAGE AND EXPIRATION
＊＊ 2012 年 3 月改訂（ 第 6 版 ）
使用の前にこの添付文書をよく読むこと。
3DA799K－M
■ WARNING AND PRECAUTION
Ｈ
（ＦＳＨ）とは 100 mIU/mL，ヒト 胎 盤 性 性 腺 刺 激 ホルモン（ＨＣＧ）とは
1000 IU/mL までは測定値に影響は認められない。
■ 操作手順プロトコール
【用法・用量（操作方法）】
１. Sensitivity
標準ＴＳＨ 血液ろ紙又は検体血液ろ紙
１．試薬の調製方法
1）The absorbance of the TSH concentration at 80（±16）μIU/mL（B 80）
is 0.7～2.5.
2）The absorbance ratio of B80 to B5（TSH concentration at 5（±1）
μIU/mL）is 5～20（B 80 / B 5）.
冷蔵庫から出した試薬は、室内温度に戻してから使用する。
撹 拌
溶解液 1 ビンに基質剤 1 錠を加えて溶解する。
（ 2 日法 ）
4℃（2～8℃）16～20 時間
溶解後 30 分以内に使用し、使用後の試薬は再使用しないこと。
When control blood filter papers with known concentrations are measured,
the values obtained are within ±20％ of indicated values.
2）洗浄液
洗浄剤を別の容器にとり、精製水を加えて全量を 2,000 mL とする。
３. Precision
3）その他の試薬はそのまま使用する。
４. Assay range
WELLKANG TECH CONSULTING
Suite B, 29 Harley Street, London W1G 9QR, UK
■ CORRELATION
Correlation coefficient
Regression equation
Number of samples
r = 0.971
y = 1.026ｘ＋ 0.016
n = 290
4-19-9, Taito, Taito-ku, Tokyo 110-8408, Japan
3）連続分注器（ 300μL）又はプレート洗浄機
（ Date of revision：December 2008）
↓
デカント
↓
デカント
↓
25℃で 30 分間インキュベート
300μL
300μL
300μL
100μL
基質液
100μL
反応停止液
6）プレートミキサー
↓
7）専用プレートローテーター
吸光度の測定
8）メスシリンダー（2,000 mL）
2 ／2
デカント
洗浄液
2）マイクロピペット（ 100μL）
5）恒温槽
EIKEN CHEMICAL CO.,LTD.
（ y : Eiken k i t <Two-Day Method>， x : Another ELISA k i t ）
1）ディスクパンチャー（直径 3 mm 用）
4）マイクロプレート用分光光度計
MANUFACTURER
↓
洗浄液
２． 必要な器具・器材・試料等
AUTHORIZED REPRESENTATIVE
The assay range of this method is 0.5（±0.1）～ 80（±16）μIU/mL.
↓
（ 短時間法 ）
25℃（20～30℃）3～4 時間
デカント
洗浄液
2 ～ 8 ℃に保存し、2 カ 月以内に使用すること。
When the same sample is measured 10 times simultaneously, the
coefficient of variation（C.V.）of the TSH concentration is less than 15％.
100μL
酵素標識ＴＳＨ 抗体
1）基質液
２. Accuracy
φ＝3mm，1 枚
↓
1 ／2
測定波長 492 nm
◎
Read Carefully This Product Information Before Using This Kit
【使用上又は取扱い上の注意】
溶出法
標準あるいは検体血液ろ紙にあらかじめ生理食塩水を加え溶出操作を行い、
１．取扱い上（危険防止）の注意
その溶出液を用いて測定する。
1）試料（検体）は、ＨＩＶ，ＨＢＶ，ＨＣＶ 等の感染の危険があるものとして注意
して取り扱うこと。
■標準曲線例
抗原，ＨＩＶ（ ＨＩＶ ― 1，ＨＩＶ ― 2 ）抗体及び ＨＣＶ 抗体検査を行い、陰性
血液のみを使用しているが、感染の危険性及びその他の病原体の存在を否定
しきれないため、患者検体と同様に注意して取り扱うこと。
5）反応停止液には 2 mol/L の硫酸が含まれているので注意すること。誤って
皮膚に付着したり目や口に入った場合には、水で十分に洗い流す等の応急
処置を行い、必要があれば医師の手当てを受けること。
6）基質剤に含まれる o －フェニレンジアミン（OPD）には、変異原性が報告され
0
ている。取扱いの際は、目，皮膚，粘膜への接触を避け、粉末を吸引しない
0
1.0
10.0
ＴＳＨ 濃 度 （ μ IU/mL）
100.0
ように注意すること。万一皮膚等に付着した場合には、直ちに水で十分に
洗い流すこと。
＜測定にあたっての注意＞
7）試薬が誤って目や口，皮膚に付着したときは、直ちに大量の水で十分に洗い
1）試薬はアジ化ナトリウム，塩素イオン等の影響を受けるので、試薬の調製に
流し、必要があれば医師の手当てを受けること。
は必ず精製水を使用し、器具も精製水で十分に洗浄したものを用いること。
8）フリップキャップを外すときは、手を切らないように注意すること。
2）試薬調製後は速やかに使用すること。
２．使用上の注意
3）測定結果は、インキュベーションの時間や温度に影響されるので、検体及び
1）各試薬は指定の貯蔵方法で保存すること。
標準血液ろ紙共に決められた条件下で同時に操作すること。特に溶出法の
2）使用期限を過ぎた試薬は使わないこと。
場合には影響を受けやすいので検体，標準血液ろ紙共に一定条件で同時に
3）キット内の試薬は正確な測定値が得られるように組み合わせてあるので、
操作すること。
製造番号の異なる試薬を組み合わせないこと。
4）ウエル内に酵素標識 TSH 抗体を分注した後、十分に浸透撹拌して内容液を
4）本製品中の容器，付属品等を再利用又は他の目的に転用しないこと。
混和し、特に血液ろ紙が液に浸っていることを確認すること。
３．廃棄上の注意
5）洗浄操作中に血液ろ紙をウエル外に必ず排除すること。
効塩素濃度 1,000ppm 以上，1 時間以上浸漬）又はグルタールアルデヒド
7）基質液の調製に際しては基質剤（錠剤）が溶けていることを確認し、撹拌し
（2％， 1 時間以上浸漬）による消毒処理、あるいはオートクレーブ（121℃，
てから使用すること。
20 分間以上）による滅菌処理を行うこと。
8）各反応段階で使用するプレートシールは、交換して使用すること。
2）反応停止液には 2 mol/L の硫酸が含まれているので、廃棄する場合は中和す
9）測定前にプレートの底面に汚れのないことを確認し、汚れやゴミがある場合
は酒精綿等で清拭後測定すること。
る等の注意をはらうこと。
＊ 3）試薬ボトルはガラスとＰＰ，ゴム栓はゴム，キャップは金属とＰＰ・ＰＥ，
10）検量線は測定の都度、新たに作成すること。
プレートはＰＳ，アルミシートはアルミ，プレートシールはＰＥＴ，キットケ
＊＊11）逆性石けん液「例えば、塩化ベンザルコニウム等」の混入は測定値に影響
ースは紙を主な材質としている。
を与えることがあるので、採血ろ紙に飛び散ることが無いように保管場所
4）使用後の試薬や容器及び器具類は、医療廃棄物等に関する規定及び、水質
に留意すること、及び採血ろ紙を扱う前には逆性石けん液が手に残らない
汚濁防止法等の各種規制に従い、各施設の責任において処理すること。
よう水で十分に洗い流すこと。
【性
製
能】
品
名
クレチンＴＳＨ ＥＬＩＳＡ Ⅱ‘栄研’
１．性 能
1）感 度
包装単位
製品コード
480 回分
Ⅰ－ ＤＡ７９
【主要文献】
（1）ＴＳＨ 濃度が 80±16μIU/mL のときの吸光度（Ｂ80）は 0.7～ 2.5 で
■ CONTENTS OF THE KIT
（その他参考となる文献）
（2）ＴＳＨ 濃度が 80±16μIU/mL の吸光度（Ｂ80）と 5±1μIU/mL の
Klein, A.H.,et al. : J.Pediatr., 81 : 912―915, 1972.
吸光度（Ｂ5）の比率（Ｂ80/Ｂ5）は 5～ 20 倍である。
Sadler, W.A.,et al. : Clin.Chem., 25 : 933―938, 1979.
2）正確性
1） Substrate solution : Dissolve 1 tablet of Substrate in 12 mL of Solution
for Substrate.
2） Washing solution : Dispense Washing Solution into a separate container.
Dilute with purified water so total volume is 2000 mL.
3） No preparation is necessary for other reagents.
3．Storage method and expiration date for reagents after preparation
1） Substrate solution : Use within 30 minutes after dissolving the tablets.
Do not reuse the reagent after initial use.
2） Washing solution
Direct method
Ⅰ．Two - Day Method
Measurements are in principle performed in duplicate（in 2 wells）.
1） Of the wells on the plate, leave A-1 and A-2 open for blanks（BKG）.
（480 tests）
For horizontal arrangement, use wells A-3 through A-12（A row）and B-1
through B-4（B row）to establish a calibration curve.
Alternatively, for vertical arrangement, leave wells A-1 and B-1 open for
＊
blanks（BKG）. Use wells C through H in column 1 and wells A through H
（2）Enzyme-labeled Anti-TSH ·····························································12 mL・5 vials
[ 1 vial contains 380 mIU HRP labeled anti-TSH
3
＊
in column 2 to establish the calibration curve.
]
2） Place TSH standard disc A into wells A-3 and A-4. Place one 3-mm
punched disc with the next TSH concentration into wells A-5 and A-6. In
（3）Substrate······································································································ 5 tablets
[ 1 tablet contains 13 mg OPD 4 ]
the same way, place TSH standard discs of increasing concentration
＊
into wells A-7, A-8, A-9, A-10, A-11, A-12, B-1, B-2, B-3, and B-4
（4）Solution for Substrate ····································································12 mL・5 vials
[ 1 vial contains 6μL hydrogen peroxide（30％）]
（horizontal arrangement）.
（5）Washing Solution···············································································50 mL・1 vial
[ 1 vial contains 0.5 mL Polyoxiethylen（20）Sorbitan Monolaurate ]
Alternatively, place TSH standard disc A into wells C-1 and D-1. Place
（6）Terminating Solution ········································································60 mL・1 vial
and F-1. In the same way, place TSH standard discs of increasing
one 3-mm punched disc with the next TSH concentration into wells E-1
concentration into wells G-1, H-1, A-2, B-2, C-2, D-2, E-2, F-2, G-2, and
[ 1 vial contains 6.7 mL sulfuric acid ]
H-2（vertical arrangement）.
3） Place one 3-mm punched disc of sample blood filter paper into the
remaining wells – B-5 through B-12 and all of rows C through H
*2
（horizontal arrangement）, or wells A through H in columns 3 through 12
Anti-TSH monoclonal antibody-coated microplate : Anti-human TSH
mouse monoclonal antibody-coated microplate
（vertical arrangement）.
4） Add 100 μ L of Enzyme-labeled Anti-TSH to each of the wells that
1 well contains appropriate amount of anti-TSH monoclonal antibody
so that the obtained absorbance is 0.7～2.5 when 80（±16）μIU / mL
standard disc is measured.
*3
HRP labeled anti-TSH : Peroxidase labeled anti-human TSH mouse
monoclonal antibody
*4
OPD : o -Phenylendiamine dihydrochloride
contains a TSH standard disc or sample blood filter paper. Shake the
plate gently, then seal it and leave it at 4°C （2～8°C） for 16～20 hours
to allow the reaction to take place.
5） Remove the solution contents. Add 300μL of washing solution into each
well, then drain the washing solution. Repeat this operation three times.
At this time, confirm that no blood filter paper remains in the wells.
（Note） Basis for establishing standard : The TSH standard disc used in this kit has
6） Add 100μL of substrate solution to each well in sequence, at a constant
been calibrated with the WHO International Standards（2nd IRP80 / 558）.
speed. Seal the plate, and leave it in a dark location at 25°C for 30
松本 勝, 他 : 医学と薬学, 10 : 1317―1321, 1983.
濃度既知の管理用血液ろ紙を測定するとき、得られた値は表示値の± 20％
諏訪 城三 : ホルモンと臨床, 31 : 1227―1233, 1983.
以内である。
同一検体を 10 回同時に測定するとき、得られた値の変動係数（C.V.）は 15 ％
栄研化学株式会社
以下である。
フリーダイヤル
お 客様相談窓口
0120－308 － 421
２．測定範囲
【製造販売業者の名称及び住所】
0.5（±0.1）～ 80（±16）μIU/mL
３．相関性試験成績
栄研化学株式会社
クレチン TSH ELISA‘ 栄研’との相関
比較対照
例数
クレチン TSH ELISA‘ 栄 研’ 290
〒329－0114
相関係数
栃木県下都賀郡野木町野木 143 番地
回 帰 式
ｒ= 0.971 ｙ= 1.026ｘ ＋ 0.016
（ｙ：本法（2 日法），ｘ：クレチン TSH ELISA‘ 栄 研’
）
４．較正用基準物質に関する情報
本製品は、NIBSC WHO 80/558 を一次標準として性能を確認している。
製造販売元
栃 木 県 下 都 賀 郡 野 木 町 野 木 143 番 地
2 ／2
minutes to allow the reaction to take place.
■ APPLICATION
7） Add 100μL of the Terminating Solution to each well. Add the solution in
Determination of human thyroid stimulating hormone（TSH）in blood
（blood filter paper）.
【問い合わせ先】
3）同時再現性
: 2 months at 4℃
4．Assay procedure
[ 1 pack contains 1 plate of anti-TSH monoclonal antibody-coated
microplate 1， 2 ]
1）社内資料
ある。
2．Preparation of reagents
（1）Anti-TSH Coated Microplate····································································· 5 plates
*1
【包装単位】
採血又は精密検査を行う１）。
In neonates, the level of thyroid hormones in the blood rises rapidly
immediately after birth. However, in neonates with congenital hypothyroidism
（cretinism）, in which these thyroid hormones are congenitally deficient, the
level of thyroid-stimulating hormone（TSH）rises markedly, due to a negative
feedback mechanism. Cretinism, which results in systemic aplasia and
irreversible reduction in intelligence, can be treated in advance if it is detected
early in the neonatal period. Considering the frequency of its occurrence,
mass screening is essential.
Cretinism is difficult to discover in clinical findings. However, in 1979
screening began on the administrative level by using radioimmunoassay（RIA）
to measure TSH levels. Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）, which
uses blood filter paper as the sample, has since been developed as a more
rapid screening procedure.
This kit is based on a one-step sandwich enzyme immunoassay method,
and was developed for mass cretinism-screening tests using dried-blood filter
paper for samples.
[ Each spot contains quantity indicated on the disc. ]
有効期間 ： 6 ヵ月間
ルの検体について再検査を行い、更に 3 パーセンタイル以上の検体について再
5） Incubator
6） Microplate rotator（exclusive）
······························································································each spot・2 discs
貯蔵方法 ： 2 ～ 8 ℃
同時測定時の新生児検体値の分布を作成し、その高値より 3 ～ 5 パーセンタイ
4） Microplate spectrophotometer
（7）TSH Standard Disc（A～G : 7 different concentrations spots）······················
【貯蔵方法・有効期間】
【測定結果の判定法】
3） Serial dispenser（300μL）
■ INTRODUCTION
＊
1）試料（ 検体）に接触した器具や廃液等は、次亜塩素酸ナトリウム溶液（有
6）基質剤（錠剤）は直接溶解液容器に移し、手で触れたりしないこと。
2） Micropipettes（100, 300μL）
Ⅰ－DA79
4）標準ＴＳＨ血液ろ紙は、ヒト血液を材料としている。使用ヒト血液は、ＨＢｓ
0.1
1） Disc puncher（φ=3 mm）
Enzyme－Ⅰinked immunosorbent assay kit
Ⅰnstructions for use
3）口によるピペッティングはしないこと。
1
1．Materials required but not provided
CRETIN TSH ELISA Ⅱ
2）感染を避けるため、検査時は使い捨て手袋を着用すること。
（OD）
10
■ TEST PROCEDURE
the same sequence that the Substrate solution was added, also at a
constant speed.
8） Measure the absorbance at 492nm（480 ～ 500nm）using a microplate
■ PRINCIPLE
spectrometer.
This kit is an enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）kit utilizing a
one-step sandwich method.
A TSH standard disc or sample blood filter paper disc is placed on an
anti-TSH-coated microplate, and is caused to react with enzyme-labeled
anti-TSH. At this time, the TSH antigen is sandwiched between the
solid-phase antibodies and enzyme-labeled antibodies. After the reaction,
washing is performed and a substrate solution is added, causing enzyme
reaction to occur. Coloration results corresponding to the amount of TSH
antigens present. The absorbance is measured using a spectrophotometer for
microplates. A calibration curve is prepared from the obtained absorbance
results, and the level of thyroid-stimulating hormone（TSH）concentration in
the sample is thus found.
9） On log-log graph paper, prepare the calibration curve by plotting the
TSH standard disc concentrations on the horizontal axis, and the
absorbance on the vertical axis.
10） Read the human thyroid stimulating hormone（TSH）concentrations by
applying the absorbance of each sample to the calibration curve.
Ⅱ．Reduced-Time Method
In principle, this method is similar to the two-day method; however the
reaction conditions in Step 4 are different.
：At 25°C（20～30°C）, allow the reaction to occur while agitating the
samples with a plate rotator for 3～4 hours.
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