Detection of Azuki Bean Wild Relatives Having - MIUSE
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Detection of Azuki Bean Wild Relatives Having - MIUSE
Doctoral Dissertation / 博士論文 Detection of Azuki Bean Wild Relatives Having Different Salt Tolerance Mechanism and Construction of Molecular Linkage Map of Tuber Cowpea 異なる耐塩性機構を持つアズキ近縁野生系統の発見とアカサ サゲ分子連鎖地図の作成 MARUBODEE, Rusama 三重大学, 2016. 内容の要旨・審査結果の要旨 / 資源循環学 http://hdl.handle.net/10076/15144 主指導教授 ( J j j l 紙様式第 6号) 学位論文要 と こ 』 問 専攻名 氏名 資源循環学 MARUBODEE RUSAI,,1A~ 題一息←_ D 旦担任i O f lo fA i u l dB e a D _ W i lQ _R e l a t i v e sH a v i n旦D i l l e r e n tS a l tT o l e r a n c eMechanisma n d 位回!i o n0白 川o l e c u l u rL11 広.!!民腿蛇玉江主功包必・, wpea Con (異なる耐j 鼠性機構を持つアズキ近縁日I f '生系統の発見とアカササゲ分子迎鍬地図の作成) T h ee l l e c ( so fs a l i n es o 1 i sa r eo n e0' 1t h ell10 s li m p o r t a n tp r o b l e m st h a tO C C U I 'i nmOl ' et h a n1 0 0c O l l n t r ; e s 1 o ft h ew o r l da n da r o u n d9 3 0川 n 1 ~,以与 泊〈仇仙 1 uki b c a 川1, m u n g b c a nH n dCOWpCi Ib e l o n ,g i n c l u d c sh i g h l yr e s i s t u n tw i l d日p e c i e sa g a i n s tu b i o t i cs t r e s s e ss l Ic h ‘ a 5sa)(~ h i g han~t l u wpH, a n ddJ'o u g h . t Theo h j e c t i v e so ft h i s~1Udy a r e( 1 )t oc s . f a h l i s ha na p pl 'o p r i u t ell1c t h o do fe v a l u a t i o nn g a i n s ts a J ts t T e S ! ) , ( 2 )t ou s et h cc s t a bi 1s h c dm c t h o df ( : ) I 'S C I ・ 0 じn i n也p r o m i s i n gw i l dトi g l l t la c c e s s i o n s' 1 01 'a~乙uki b e a nb r e e d i n ga n d ( 3 )t od e v e ) o pl1lo l c c u l a rJ i n k a g emapi n " イ l ' ハ ・i l l a l a ,al e s sknownf u t l l r ec r o p' I o rl o wp r o d u e t i v h yl a n d sa n d ラ し ・a n a l y s i sf ol 'c l a r i l y i n gg e n e l i c so fs a l tt o t e n m c e . ( 4 )1 0condudQ ' I F i r s l l y ,t h ee f T ωt .o fa e r a t i o nl In d e l 'h y d r o p o n i cc o n d i l I o nW H Si n v e s t i ,ga t e db y じv a l l l a t i n gp l a n t p el 'f o r l 1 1a n c e su s i n g. c owpea( " イ a z u k ib e u n(T~ l . I l 1 g u l a r i . 幻 0イl'odiala;ryokuto)and ,g 1 I l 1 g u i g l a t a ;J . a p a n e s eIlet m e :s a s ae ),m u n g b e n n a z u k i ),γhep l a n t so fa l lt h e3c r o ps p e c i c sg r o w ni nt h ep J o tw i t h o u tu e r a t i ol 1 s h o w e dh i g h c rd r yI 1 1H 1 te rp r o d u c t I o l la n dp l a n th e i g h tc o m p a r e dw i t hr h o s eg r o w ni nl h ep l o tw i t ha c r a t i o n . Ther e sl IJ tw u sc o m p l c t e l yd i f f c r e n t1 i ・ ' 0111 t h a t0 1 "s o ) ' h e a nt h a tn e c d sa e r a 1 i o nf o rp r c f e r a b l es r o w t h .l ti s c o n s i d e r e dt h a tl h er e s u l ti nt h ef i r s te x p e r il1le n t -i n d i ω t e snh i ,gha d a p ' a b i l i t yo ft h e -g c n u sV i g n aa g a i n s t r e d u c i n ge n v i r o l l m e n tw1 i hl o wo x y g e n . Secondly~ 7 4a c c e s s i o n so fa z u k ib e a na n d1 4 5a c c c s s i o n so f7c r o s sc o ! n p a t i b l ew i l ds p e c i e sw e r e 圃 s c r e e n e dt od e t e r m i n es a l tt o l e r a n ta c c e s s i o n su n qt oe x a m i n et h et o l e r a n c em e c h a n i sl11.P r i m a r ys c r e e n I n g 1 ic uI tu r ec o n d i t ; o na n dt h es e c o n d a r ys c r e e n i n g¥ ¥ ' a sc a r r i e do u ti nh y d r o p o n i cc u l t u r e w a sc a l T i e do u li ns o c o n d i t i o nw i t h o u ta e r a t i o n .Asar e s u l t , as t r a i nマ o j i n b a k a )o fJ'~ r i u k i u e n s i s( J a p a n e s en a m e :h i n a a z u k i )a n d as t r a i n' U k u s h i m a 'o fT . :nuk a . ' ihimae( J a p a n e s en a m e :h i m e t s u r u a z u k i )w e r ei d e n t i f i e da sv a l u a b l es o u r c e s o fs a l tt o l e r a n c ef o ra z u k ib e a nb r e e d i ng .Thes~ twos 甘a i n sh u dd i f f e r e n t5 a l tt o 1 e r a n tm e c h a n i s mw h e r e ヲ ' U k u s h i m a 'p r e v e n t e dNa+a c c u m u l a t i o ni nl e a v e s, w h i l e' T o j i n b a k a )a c c u m u l a t e dNa +t h r o u g h o u tt h ep l a n t . I na d d i t i o nラ ‘U k u s h i m a 'a n de s p e c i a l l y' ; T o j i n b a k a )s h o v v e de v e nb e t t e tg r o w t hi nas a l トd a m a g e df i e i di n , " 氏 名 一 旦 企RUBODEE R~ISAJ\1 A___, (jjlJ~;Æ機式第 6 号) F u k u s h i m a, J a p a nw h e r es o y b e a nc u l t i v a r‘ T a c h i n a g a h a 'c o u l dn 0 1s u r v i v e .T h e s er e s u l t swi 1 1f a c i ! h a t e tt o l el ' a n ta z u k ib e a nc u l t i v a r sb yi n t r o d u c i n gtwod i汀e r e n tm e c h a n i sl 1 1s0 's 1 a l tr e s i s t a n e e . d e v e l o p i n gs aJ ・ T h i l 叫y , w i l dC O ¥ N p e a(T~ v ωi c l 1 a l a ;a k a s a s a g e )wass e l e c t e df o rs t u d y i n gg e n e t i c so fs a ) tt o l e r a n c e .AnF2 p o p u l a t i o n ω n s i s to f300I n d i v i d u a l swasd e v e l o p e db e ' l weens a l tt o l e r a n t' V. ,nnds Cl 1s i t i v e‘¥ 15 ・u cじt刊日 i o n s . ' T ud e v c l o pa m o l e c u J a rg e n e l i cl i n k a g emap~ 1 ~336 S S I ミ( S i m p l es e q u c n c er e p e a 1 . )m a r k e r sc l e v e l o p e df r o m c m : v p e aa n dcommonb e a n(Ph ωe o l u 8vulg,印私~ i n g e n )w e r es c r e e n e d .R e l a t i v e l yg o o dt l ' a n s f e r a b i l i t y a z u k i, VASo b s e r v e dw h e r e8 7 4SSRm a r k e r s( 6 5. 4 0 / 0o na v ω ' a g e )じo u l da m p l i ( yDNAf h l g m e n t s .H o v . : e v e r 、 ' o n l y8 4 SSRm a r k e r s( 6 . 2l } ' O )s h o w e dp o l y m o r p h i s mb e t w e e np a r e n l s句お u g g ω t i n gv e r yc 10 s eg e n e t i er e l a l i o n s h i p .A t o t a jo f8 2p o l y m o r p h i cSSRl o c ic o u l db ea s s i g n e dl O1 1 LGsc o v e r i n gal o t a ll e n g t ho f5 1 0 . 5cMa ta n 'd i汎a n c eo f7. 2 cM ( 1 .4. -1 5 . 7c M ) .1 ' 0d e v e l o ph i g h e rd e n s i t yl i n k a g e malχ!ミAD a v c r a g em a r k el , ( R e s t r i c t i o l ls i l ea s ω c i a l e dDNA)l l 1a r k e r sw e r ed e ¥ 叫o p e da n dac o m b i n e dSSRa n dRADmal 'k e r sl i n k a g c mapva sc o n s t l・ l . Ic t c d .Al o t a lof559( 8 4SSRa n d' 1 7 51¥/¥1))l 1u l r k e r sI いじ i c n u l dh en s s i巴n c c lt o1 1l i n k a g 仁 l ' 忌w upss p a n n i n g9 7 3 . 9c l ¥ 1i nl c n g l hw i t hameandisWnωofI . 8cM( J. 4. -2 . . : ' 1じl 叶 ) . Fjnally~ q u a n t i t a 1 i v et r a i t sl o c i(QTし )o fs a l tt o l e r a n c ev ,,: c r ed e t e c t e dl l s i n gt h ec o n s t r u . c t e c tSSRi : ln d S S J しRADe o m b i n e . dV .v e x i l l a ! ' a1 in k a g em a p .S a f tt o l e r a . l l e ce v a l u a t i o nwasc o n d u c お df o rs e g r e g a t i n g 1 )¥ v i h i n gs c o r e ' o fr o o t e ds h o o i sofF2 i n d i v i d u a l su n d e iJ 5 0m M p o p u l a t i o nu s i n g3d i f f e r e n tm e t h o d s,( , NaClh y d r o p o n j cp o o l、( 2 )w i l t i n gs c o r eo fr o o t e ds i n g J el e a v e so fF2 l n d i v i d u a l slIJ吋 e 1・ 200ml ¥ 1NaCl n d( 3 )¥ v i1 li n gs c o r co fs e Q d l i n g '0 ' 1l-;;'~ l i n e si ns o i ls l Il 可m Cl'g.c dw i t h2 5 0m i V l NaCi h y d r o p o ni cp o o !a 島 , O I U ( I O l l .V ¥ / i l t i n gs c o r co ( ・5 r Hl l k s I1l11g i n gf fOm I( 1 1 0 clam~l 巴 c) t oり ( c o m p l d ew ; l1 )w e r c ' i slIe1l l ) 日 ls e c la sp h e lH . ヲI y p i cd n t a .Twol n n j c ・ I l QT l . , ぉ d e l e n n i n e db y3d i f f c r e n tp e r s o n sa n dt h ea v e r a g ev a l u e sw e r e¥ w e r ed c l e c t e do nt h eS8mcLG2a n dLG9f r o mb o t ho fiwomapsw i t ht h eh ;i g hp h e ' n o l y p i cViil・i . n i ol 1 c x p l a il . 1e d( P V l 己 )v a l u ew a s3 5. 5 4 ( 始。 nL C J 2[ln ! c1 4 . 4 21Y ( .o nLG9o nSSH , .l i n k a g emapa n d3 7. 2 . 1( ! ! ; ) の1L G2 a nc J1 1 .99%o nLG90 1 1日 汚 ! し RADc o m h i n e dmap A n o t h e r( . ) 1 "L0 1 1LC i1 1 waso n l yd e 1 e ( 、 t e df i ' οl l 1I h e , )l i n k a ι e map w i t h PVE v a l u c( ) f1 2 . 9 5 ( 均. I ' Ja l ' f o w i n g down t h e OTL pO~dli (l ri ' I rnm ! h e S S IしRAl n c i g h b o r i n gm a r kじ1'So f t h eS S I ミl i n k a ι emapt o. t h eS S R . .RADl i n< l a g emapc o u l db ed o n e . Asd e s c r i b e d .a b o v e . ,( l ) .s t a b l es a l tt o l e r a n c eevalu~tion I 1 l 1e t h o dwasd e v e l o p e d, ( 2 )h i g h l ys a 1 tt o l e r a n t1 " s t r a i n sw i t hd i f f e r e n ts a l tt o l e r a n t ' m e c h a n i s mwasd e t e c t e df o r a z u k ib e a nb r e e d i n g , ( 3 )註1 ef i r s tl n o l e c u J a r I i n k a g emapo fV .v e x i l l a t awasc o n s t r u s t e d, a n d( 4 )QTLsf o rs a l tt o l e r a n c ei nV .v e x i l l a t awered . e t e e t e d . 氏 名 一 旦AsUBODEE RUSAMA (別紙機式第 6号) ( ' v l H;考)日本務 (2000 字以内)または ~1i百・ (500 ~ワ}ド以内)にまとめて記載してください。