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フナコシニュース 2011 年 6 月 1 日号
●
http://www.funakoshi.co.jp/
遺伝子工学
New
遺伝子工学
cDNA
マウス／ラット由来の cDNA
NEW
マ ウ ス， ラ ッ ト か ら 調 製 し た mRNA を テ ン プ レ ー ト に，
oligo d（T）プライマーを使用した逆転写反応により合成され
た一本鎖 cDNA です。PCR にそのまま使用できます。
創薬研究
特 長
◆ PCR 15 回分の量が含まれています（50 μl の反応系の場合）
。
◆ 50 μl の反応系で PCR を行い，GAPDH 遺伝子が増幅することを
確認しています。
受託
NEW
製品ラインナップ／価格
マウス胎仔（14.5・16.5 日胚） 組織別由来 cDNA
脳
心臓
肺
肝臓
腎臓
眼
―
―
マウス胎仔（18.5 日胚）・新生児 組織別由来 cDNA
脳
心臓
肺
肝臓
腸
腎臓
眼
脾臓
各￥40,000
消化管（胃・腸管）
―
各￥40,000
胃
精巣＊ 1
本紙に掲載されている
製品はすべて研究用です
マウス／ラット胎仔由来 cDNA
9.5 日胚
10.5 日胚
14.5 日胚
15.5 日胚
11.5 日胚
16.5 日胚
マウス／ラット成体正常組織由来 cDNA
脳
心臓
肝臓
膵臓
胃
小腸
脾臓
胎盤
卵巣
胸腺
白色脂肪＊ 2
褐色脂肪＊ 2
前立腺
十二指腸
空腸
下垂体
副腎
―
測定受託
ヒト細胞を用いた遺伝毒性試験
受託サービス NESMAGET ®
食品安全研究所（日清食品ホールディングス株式会社）の遺
伝毒性試験受託サービス NESMAGET® は，p53R2 の発現に
基づくヒト細胞を用いた遺伝毒性試験法です。化学物質によっ
て DNA が損傷を受けると，活性化した p53 が DNA 修復遺
伝子である p53R2 に結合し，その発現を調節します。従来用
いられている Ames 試験や哺乳類細胞を用いる in vitro 遺伝
毒性試験と比較して，ヒト細胞を用いた本サービスは，ヒトに
対する遺伝毒性発癌物質の検出に優れていると考えられていま
す。
※NESMAGET ® ： N issin's E valuation S ystems for MA mmalian
GEnoToxicity
※本サービスは研究用です。臨床用途には利用できません。
特 長
◆ 野生型 p53 を発現するヒト乳癌培養細胞 MCF-7 を使用します。
◆ 試験期間が 24 時間と短いため，納期は約 1 週間です。
◆ 微生物では検出できなかった遺伝毒性物質の検出も可能です。
＊ 1 新生児由来の製品は受注発注品です。
マウス正常脳 部位別由来 cDNA
大脳皮質
小脳
嗅球
線条体
視床＋視床下部＋橋
変異原性
化学物質による遺伝毒性の初期スクリーニングに有用
1st Strand cDNA
受託
創薬研究
PCR
◆ 従来の哺乳類細胞を用いる in vitro 遺伝毒性試験に比べ，偽陽性反
海馬
―
各￥30,000
延髄
―
各￥20,000
13.5 日胚
18.5 日胚
◆ S9 ミックスによる代謝活性化を必要とする化学物質にも適用できま
12.5 日胚
17.5 日胚
◆ あらゆる化学物質の初期スクリーニングに最適です。
肺
大腸
精巣
眼
回腸
―
各￥12,000
腎臓
筋組織
皮膚
脊髄
直腸
―
＊ 2 ラット由来の製品は受注発注品です。
応が非常に少なくなります。
◆ 少量の試験物質で試験が可能です（Ames 試験と比べ 1/100 量）。
す。
◆ 発光による検出のため，蛍光物質や色素なども試験できます。
原 理
DNA損傷
p53
DNAの修復
（リボヌクレオチド還元酵素)
活性化
P P
転写
p53
p53R2 由来
p53 結合配列 ×3
promoter
p53R2
お問い合わせ先
PGV-p53BS-Luc
Luciferase
p53 結合領域
TGACATGCCCAGGCATGTCT
ご注文方法
フナコシホームページ（http://www.funakoshi.co.jp/download/）に
掲載の専用注文書に必要事項をご記入の上，販売店担当者へお渡し下さい。
受託
ＦＡＸ ０３ ５
- ６８４ ６
- ５３９
ＴＥＬ ０３ ５
- ６８４ １
- ６４５
数量割引いたします！
マウス／ラットの胎仔由来 cDNA（3 本以上），および成体正常組
織由来 cDNA（5 本以上＊）をまとめて注文される場合，1 本当たり
それぞれ￥17,000 または￥10,000 の割引価格で提供いたします。
DNA が損傷を受けると，DNA 修復遺伝子である p53R2 が発現する。p53R2 の発現
を PGV-p53BS-Luc（p53R2 由来 p53 結合配列を組み込んだホタルルシフェラーゼ
レポータープラスミド）でルシフェラーゼに変換し，発光で検出する。
試験方法概略
細胞を 96 穴プレートに播種
レポータープラスミド（ＰＧＶ−ｐ５３ＢＳ−Ｌｕｃ），
内部標準プラスミドを導入
試験物質添加（ＤＭＳＯの最終濃度：<0.1％）
プローブ作製用ミックスもあります！
24 時間培養
プローブ作製用に mRNA を鋳型に，oligo d（T）プライマーとラ
ンダムプライマーを用いて逆転写させた 1st Strand cDNA です。
正常マウス，マウス胎仔，正常ラット，ヒト組織由来のラインナップ
があり，それぞれ 30 反応分の量が含まれています。詳細は当社受注・
特注品業務担当までお問い合わせ下さい。
ＰＢＳ(-) 洗浄
110601s_p12-13_k_n_i.indd 12
細胞溶解
ルシフェラーゼアッセイ
2011/05/20 16:08:06
フナコシニュース 2011 年 6 月 1 日号
250
細胞生存率
2,200
200
1,800
150
1,400
1,000
100
600
50
200
0
コントロールに対する細胞生存率（％）
コントロールに対するp53R2依存性
ルシフェラーゼの相対的活性（％）
2,600
2. Ohno, K,. et al ., Mutation Research , 656, 27 ∼ 35 (2008).
3. 哺乳動物細胞を用いた変異原性試験法，特許第 4243716 号。
試験実施条件
● MCF-7 細胞を使用
受 託受 託
● S9 ミックス添加あり／なし条件で測定
NEW
● 6 段階の濃度で三重測定
● 生存細胞数の測定
.2
1
3
.4
0
4
0
0
.1
5
.0
5
1
0
.0
0
.0
陽性判定基準
オプション
0
コ
ン
ト
ロ
ー
A
ル
dr
ia
m
yc
in
0
1. Ohno, K,. et al ., Mutation Research , 588, 47 ∼ 57 (2005).
13
創薬研究
p53R2-Luc
http://www.funakoshi.co.jp/
参考文献・特許
300
3,000
●
フリルフラマイド（AF-2）
（µg/mL）
p53BS-Lucの活性（p53R2の相対的活性）
● 濃度設定のための細胞毒性試験
内部標準の活性（転写能を指標とした細胞毒性）
ご注文方法／価格
試験結果の一例
試験担当者の安全確保のため，性状，溶解性（DMSO および水），保
従来法との比較
管方法，皮膚刺激性および揮発性に関する情報をご提供下さい。ご注文
■ NESMAGET® と従来法との比較
方法および価格などの詳細については，当社受託・特注品業務担当まで
お問い合わせ下さい。
従来法
NESMAGET®
Adriamycin
Mitomycin C
Cisplatin
Bleomycin
5-FU
Acrylamide
MNNG
PhIP
2,4-DAT
B[a]P
Pyridine
Sodium ascorbate
＋
＋
＋
＋
−
＋
＋
＋
＋
＋
−
−
哺乳動物細胞を用い げっ歯類
Ames 試験
た in vitro アッセイ 発癌性試験
＋
＋
＋
＋
−
−
＋
＋
＋
＋
−
−
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
−
−
＋
＋
＋
＋
±
＋
＋
＋
＋
＋
＋
−
IARC
2A
2B
2A
2B
3
2A
2A
2B
2B
1
3
−
NESMAGET®：MCF-7 細胞で試験を行い，濃度依存性を示し，有意
なルシフェラーゼ活性の上昇が認められた時に陽性
（＋）と判断。
本紙に掲載されている
製品はすべて研究用です
化学物質
従来法：Ames と哺乳動物細胞を用いた in vitro アッセイ（マウスリ
ンフォーマ TK 試験および染色体異常試験），およびげっ歯類
発癌性試験の結果は，NTP および TOXNET のデータを参照
Cancer におけるハザード評価を表す。
■ 135 種 類 の 化 学 物 質 を 用 い た 評 価 試 験 に お け る
NESMAGET® と従来法との比較
一致率（NESMAGET® vs Ames 試験結果一致率）
Ames 陽性予測率（NESMAGET® 陽性 vs Ames 陽性）
Ames 陰性予測率（NESMAGET® 陰性 vs Ames 陰性）
Ames 試験との
比較
NESMAGET® 陰性，かつ，Ames 陽性の物質
NESMAGET® 陽性，かつ，Ames 陰性の物質
®
NESMAGET の発癌性試験との一致率
げっ歯類発癌性
Ames 試験の発癌性試験との一致率
試験との比較
他の変異原性試験と発癌性試験の一致率
110601s_p12-13_k_n_i.indd 13
81.5％
94.3％
67.2％
4 物質
（発癌性を持たない）
21 物質
（発癌性を有する）
86.6％
71.1％
74.0％
ＦＡＸ ０３ ５
- ６８４ ６
- ５３９
ＴＥＬ ０３ ５
- ６８４ １
- ６４５
測を行った。
受託
動物での発癌性試験や他の変異原性試験のデータが多く存在する変異
原性物質および非変異原性物質から計 135 物質を選択し，発癌性の予
お問い合わせ先
し た。IARC は International Agency for Research on
2011/05/20 16:08:11