Comments
Description
Transcript
恒常発現ベクター
SBIカタログ_P01.indd 1 2011/09/07 9:24:16 Contents レンチウイルスベクター発現システム miRNA 研究用製品 恒常発現ベクター......................................................4 miRNA 発現のプロファイリング ........................22 cDNA Cloning Vector ...................................................... 4 QuantiMir RT Kit Small RNA Quantitation shRNA Cloning Vector.................................................... 5 System .......................................................................... 22 siRNA Cloning Vector ..................................................... 6 MicroRNA qPCR Array with QuantiMir ................... 23 誘導発現ベクター......................................................6 SparQ Cumate Switch Inducible System ................. 6 エキソソーム濃縮／ エキソソーム中の miRNA 解析 .......................24 レンチウイルス導入用製品 ......................................8 ExoQuick Exosome Precipitation Solution ........... 24 LentiSuite / LentiStarter Kit .......................................... 8 SeraMir Exosome RNA Amplification Kit .............. 25 pPACK Lentivector Packaging Kit ............................. 8 PureFection Transfection Reagent ........................... 9 small RNA の濃縮／クローニング .....................26 PEG-it Virus Precipitation Solution ............................ 9 miR-SNaREs .................................................................... 26 TransDux Virus Transduction Reagent .................... 9 PIWI-SNaREs ................................................................... 27 LentiMag Magnetotransduction Kit ....................... 10 Global MicroRNA Amplification Kit.......................... 27 UltraRapid Lentiviral Global Titer Kit ...................... 10 miRNA の過剰発現 ...............................................28 Positive Transduction Control .................................. 10 Lentivector-Based MicroRNA Precursor Construct...................................................................... 28 Human MicroRNA Precursor Clone Module ......... 29 トランスポゾン組み込み発現システム PiggyBac Transposon Vector System .................. 11 Pooled MicroRNA Precursor Library ....................... 29 miRNA の抑制 .......................................................30 miRZip Lentivector-Based Anti-microRNA Construct...................................................................... 30 miRZip Pooled Anti-microRNA Library ................... 31 ミニサークル発現システム Minicircle DNA System ............................................... 13 幹細胞研究用製品 iPS 細胞作製用製品および iPS 細胞...................14 mRNA と miRNA の相互作用解析 .....................32 miR-Selection 3' UTR Target Selection Kit ......... 32 RNAi ライブラリー製品 GeneNet siRNA Library ............................................... 33 Reprogramming Minicircle DNA ............................... 14 Human mc-iPS Cell Line.............................................. 15 miRNA Reprogramming Vector ................................ 15 多分化能／分化レポーター検出用製品 ................17 Pluripotency / Differentiation Transcriptional Reporter Lentivector ................................................ 17 pGreenFire Pluripotency Response Reporter Lentivector ................................................................... 18 AP Staining Kit............................................................... 18 遺伝子工学関連製品 Interferon Response Detection Kit ......................... 34 Cold Fusion Cloning Kit ............................................... 35 MetaMorph Mutagenesis Kit .................................... 35 Cyto-Tracer ...................................................................... 36 Full Spectrum Complete Transcriptome RNA Amplification Kit......................................................... 37 MycoQuick Mycoplasma Detection Kit ................. 38 Retro-Concentin Virus Precipitation Solution ..... 38 転写応答研究用製品 pGreenFire Transcriptional Reporter Lentivector ................................................................... 19 Transcriptional Reporter Cell Line ........................... 22 2 SBIカタログ_P02.indd 2 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 受託サービス レンチウイルス関連受託サービス ................................... 39 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 9:25:03 ̶̶̶ System Biosciences （システム バイオサイエンシズ）社について ̶̶̶ System Biosciences 社（メーカー略称：SBI）は，米国カリフォルニア州 Mountain View に本拠を置く メーカーで，レンチウイルスベクター関連製品のリーディングカンパニーです。同社のレンチウイルスベクター は，第 3 世代 HIV（ヒト免疫不全ウイルス）ベースおよび，FIV（ネコ免疫不全ウイルス）ベースです。 また，レンチウイルスベクターを応用した，幹細胞，転写応答，siRNA，miRNA 研究に有用な製品および， トランスポゾン組み込み発現システム，ミニサークル発現システムといったユニークな発現システム用製品など を多数取りそろえています。 System Biosciences 社レンチウイルスベクターの安全性について ●3' ⊿ LTR の U3 領域のエンハンサーを欠損させているため，標的細胞への形質転換・ゲノム DNA への組み 込み後に，偽ウイルス粒子は自己不活性化します。 ●パッケージング，複製，形質転換に必要なレンチウイルス由来遺伝子の数を 3 種類（gag , pol , rev ）にまで 減らし，それらのタンパク質は，packaging signal を欠損したそれぞれ異なる plasmid から発現します （HIV ベース packaging plasmid の場合）。 またこれらのタンパク質の発現ベクターは，レンチベクター， pVSV-G 発現ベクターを始めとするベクターと有意な相同配列を持たず，相同組換えによって自己複製能を 有するウイルスが産生することを防いでいます。 System Biosciences 社の各種発現システムについて システム名 宿主細胞ゲノムへの 特 長 目的配列の組み込み ・トランスフェクションが困難な細胞にも，高効率で導入できる。 レンチウイルスベクター あり 発現システム ・幅広い製品ラインナップを取りそろえている。 ・cDNA，miRNA，shRNA，siRNA 発現用製品および，レポー ター遺伝子発現用製品がある。 トランスポゾンを用いて組み トランスポゾン組み込み 込む。 発現システム 組み込んだ配列は痕跡を残さ ずに除去することができる。 ・トランスポゾンを用いて，宿主細胞ゲノムへの目的配列の組み 込み・除去ができる。 ・cDNA，miRNA，shRNA 発現用製品がある。 ・通常のプラスミドよりも効率的に細胞への導入ができる。 ・高効率かつ長期間（最大 14 日間）発現が持続する。 ミニサークル発現システム 組み込まれない ・バクテリア由来配列を含まないため，免疫応答を引き起こす恐 れがない。 ・cDNA 発現用製品がある。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P03.indd 3 3 2011/09/07 9:25:20 レンチウイルスベクター発現システム 特 長 レンチウイルスベクター発現システム ◆ 目的の cDNA を本ベクターに挿入し，広範な種類の哺乳動物細胞に 発現させることができます。 恒常発現ベクター ◆ cDNA の挿入方法：制限酵素処理 ＊ 2 本ベクターを使用して組換え体ウイルスを作製する際は，pPACK Lentivector Packaging Kit（#LV100A-1（FIV 用 ）， cDNA 発現用レンチウイルスベクター #LV500A-1（HIV 用）：p.8 参照）を併せてご使用下さい。 cDNA Cloning Vector レンチウイルスベースの cDNA 発現ベクターです。分裂細胞， 非分裂細胞のいずれにも高効率で導入できます。FIV ベースお よび HIV ベースの製品があります。HIV ベースのベクターは， 幅広い種類のプロモーター，マーカーおよびレポーター遺伝子 の製品があります。 レンチウイルスへのパッケージング＊ 2 により，初代培養細胞， 幹細胞，神経細胞といったトランスフェクションが困難な細胞 にも，高効率で発現ベクターを導入できます。 プロモーターの種類 プロモーター 発現量 適用細胞 CMV 高 HeLa，HEK293，HT1080 など，多くの細胞株 MCSV 高 造血細胞，幹細胞 EF1 中 多くの細胞株，初代培養細胞，幹細胞 UbC 低 多くの細胞株，初代培養細胞，幹細胞 ■ FIV レンチウイルスベクター ベクター名 ［メーカー：SBI］ マーカー遺伝子 選択マーカー pCDF1-MCS1 pCDF1-MCS2-EF1-Puro pCDF1-MCS2-EF1-copGFP − − copGFP − Puro − マーカー遺伝子 バイシストロニック発現 cDNA 発現用 プロモーター 発現用プロモーター の場合の挿入ペプチド配列 − CMV EF1 − 商品コード CD100A-1 CD110B-1 CD111B-1 ■ HIV レンチウイルスベクター pCDH-CMV-MCS pCDH-CMV-MCSr ＊ 3 pCDH-EF1-MCS pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro ＊ 4 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP ＊ 4 pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP ＊ 4 pCDH-CMV-MCS-EF1-GreenPuro pCDH-CMV-MCS-EF1-Neo pCDH-CMV-MCS-EF1-Hygro pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP+Puro pCDH-MSCV-MCS-EF1-Puro† pCDH-MSCV-MCS-EF1-GFP pCDH-MSCV-MCS-EF1-GFP+Puro pCDH-UbC-MCS-EF1-Hygro† pCDH-CMV-MCS-T2A-copGFP pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV pCDH-EF1-MCS-IRES-GFP pCDH-EF1-MCS-IRES-RFP pCDH-EF1-MCS-IRES-Puro pCDH-EF1-MCS-IRES-Neo pCDH-MSCV-MCS-IRES-GFP† pCDH-UbC-MCS-IRES-GFP † − − − − copGFP RFP copGFP − − RFP − copGFP copGFP − copGFP − copGFP − copGFP copGFP RFP − − copGFP copGFP CMV − − CMV EF1 − MSCV EF1 − EF1 − EF1 UbC CMV EF1 T2A MSCV EF1 IRES MSCV UbC CD500B-1 CD501A-1 CD502A-1 CD510B-1 CD511B-1 CD512A-1 CD513B-1 CD514B-1 CD515B-1 CD516B-1 CD710B-1 CD711B-1 CD713B-1 CD615B-1 CD524A-1 CD527A-1 CD526A-1 CD522A-1 CD523A-1 CD530A-1 CD531A-1 CD532A-1 CD533A-1 CD731A-1 CD630A-1 10 μg / 68,000 10 μg / 68,000 10 μg / 68,000 10 μg / 80,000 10 μg / 80,000 10 μg / 80,000 10 μg / 80,000 10 μg / 80,000 10 μg / 80,000 10 μg / 84,000 1 plate / 80,000 10 μg / 80,000 10 μg / 80,000 1 plate / 80,000 10 μg / 86,000 10 μg / 86,000 10 μg / 86,000 10 μg / 82,000 10 μg / 82,000 10 μg / 82,000 10 μg / 82,000 10 μg / 82,000 10 μg / 82,000 1 plate / 82,000 1 plate / 82,000 ＊ 4 miRNA 発現にも使用できます。 受注発注品。各ベクターは E. coli に導入され，プレートに植菌した状態で納品されます。製品到着後，E. coli を直ちに培養して下さい。 CMV 5’LTR gag AmpR MCS2 RRE cPPT CMV promoter FIV-Based pUC ORI pCDF1-MCS2-EF1-copGFP #CD111B-1 掲載されている製品はすべて研究用です。 SV40 ORI SV40 poly-A 3’ ΔLTR 4 10 μg / 68,000 10 μg / 80,000 10 μg / 80,000 ［メーカー：SBI］ − − − Puro − − Puro Neo Hygro Puro Puro − Puro Hygro − Puro − Puro − − − Puro Neo − − ＊ 3 #CD501A-1 は，マルチクローニングサイトが逆方向に配置されています。 † 包装 / 価格 （￥） MCS2 EF1 promoter copGFP 5’ Ⅰ Ⅰ Ⅰ HⅠ Ⅱ Ⅰ Ⅰ RⅠ Ⅰ3’ WPRE System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P04-10_k_i.indd 4 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:54:29 レンチウイルスベクター発現システム デュアルマーカー shRNA 高発現のレンチウイルスベクター shRNA Cloning Vector レンチウイルスベースの shRNA 発現ベクターです。分裂細 胞，非分裂細胞のいずれにも高効率で導入できます。FIV また は HIV ベースの製品があり，レポーター遺伝子の異なる用途に 応じた各種製品を取りそろえています。 特 長 ◆ H1 プロモーターの制御により，目的の shRNA を高発現するベク ターです。 ◆ 目的 shRNA のテンプレートとなる DNA 断片を本ベクターへ導入 し，広範な種類の哺乳動物細胞で発現させることができます。 ◆ レンチウイルスへのパッケージング＊により，初代培養細胞，幹細胞， 神経細胞といったトランスフェクションが困難な細胞にも，高効率 で発現ベクターを導入できます。 ◆ 導 入 し た DNA が 宿 主 細 胞 の 染 色 体 に 組 み 込 ま れ る た め， 導 入 shRNA を恒常的に発現する細胞株の樹立を，簡便かつ効率的に行え ます。 ◆ マーカー遺伝子が H2Kk である製品は，宿主細胞の染色体に組み込 まれると，細胞表面に H2Kk タンパク質を発現させるため，市販の 抗 H2Kk 抗体による検出が可能です。 ＊ 本ベクターを使用して組換え体ウイルスを作製する際は，pPACK Lentivector Packaging Kit（#LV100A-1（FIV 用） ，#LV500A-1 （HIV 用）：p.8 参照）を併せてご使用下さい。 シングルマーカー ピューロマイシン濃度：8μg/ml ピューロマイシン濃度：50μg/ml HEK-293 細胞に pGreenPuro shRNA Cloning and Expression Vector を導入し， 24 時間後に図に示した濃度のピューロマイシンを加えて薬剤選択した。写真は薬剤添加 24 時間後の位相差像（左）および蛍光像（右）。 キット内容 ● Vector ● Luciferase control shRNA template oligonucleotide mix ● Forward and reverse PCR primers（pGreenPuro を除く） ■ FIV レンチウイルスベクター ベクター名 マーカー遺伝子 選択マーカー − copGFP Puro − H1 マーカー遺伝子発現用 プロモーター 商品コード CMV SI100C-1 SI101B-1 ■ HIV レンチウイルスベクター pSIH1-H1-Puro pSIH1-H1-copGFP pSIH1-H1-H2Kk pGreenPuro (GFP+Puro) pGreenPuro (EF1) − copGFP H2Kk copGFP copGFP 包装 / 価格 （￥） 1 kit / 66,000 1 kit / 75,000 ［メーカー：SBI］ Puro − Puro Puro Puro H1 CMV EF1 SI500A-1 SI501A-1 SI502A-1 SI505A-1 SI506A-1 1 kit / 66,000 1 kit / 73,000 1 kit / 66,000 1 kit / 82,000 1 kit / 85,000 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P04-10_k_i.indd 5 掲載されている製品はすべて研究用です。 pSIF1-H1-Puro pSIF1-H1-copGFP ［メーカー：SBI］ shRNA 発現用 プロモーター 5 2011/09/07 15:54:33 レンチウイルスベクター発現システム 誘導発現ベクター siRNA 高発現のレンチウイルスベクター siRNA Cloning Vector クローニング部位の上流および下流に H1 および U6 プロ モーターが配されており，挿入配列を双方向から発現すること で二本鎖 siRNA を発現できるベクターです。 特 長 ◆ 二本鎖 DNA からセンス・アンチセンスの両鎖を合成できるため，簡 便かつ低コストです。 ◆ FIV ベースのレンチウイルスベクターです。 ◆ レポーター遺伝子を copGFP またはピューロマイシン耐性遺伝子か 厳密な発現誘導ができるレンチウイルスベクター SparQ Cumate Switch Inducible System レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を 用 い て， 目 的 cDNA ま た は miRNA を厳密かつ可逆的に発現誘導できるシステムです。目 的配列発現用ベクターと，CymR リプレッサー発現用ベクター を細胞に導入し，発現誘導物質 Cumate の添加により誘導を 行います。 ら選択できます。 特 長 ◆ レンチウイルスへのパッケージング＊により，初代培養細胞，幹細胞， 神経細胞といったトランスフェクションが困難な細胞にも，高効率 で発現ベクターを導入できます。 ◆ 強力な CMV5 プロモーターを Cumate オペレーター配列により発 現調節しています。 ◆ 導 入 し た DNA が 宿 主 細 胞 の 染 色 体 に 組 み 込 ま れ る た め， 導 入 ◆ 非誘導時のバックグラウンド発現が極めて低く抑えられています。 siRNA を恒常的に発現する細胞株の樹立を，簡便かつ効率的に行え ◆ 発現誘導物質 Cumate は，細胞毒性を有さない低分子化合物です。 ます。 ◆ Cumate の添加量により，誘導レベルを容易に調節できます。 ＊ 本ベクターを使用して組換え体ウイルスを作製する際は，pPACK Lentivector Packaging Kit（#LV100A-1（FIV 用）：p.8 参照） を併せてご使用下さい。 ◆ 特殊な培地や培養条件は必要ありません。 ◆ 発現誘導の ON と OFF を可逆的に繰り返すことができます（次ペー ジの図参照）。 RSV ◆ GFP または RFP をマーカー遺伝子として，目的配列と同時に発現 5'LTR 誘導できます（マーカー遺伝子を恒常発現させるベクターもありま AmpR す）。 ※ 本ベクターを使用して組換え体ウイルスを作製する際は，pPACK cPPT pFIV-H1/U6-Puro cat.#SI110A-1 6,345 bp pUC ORI BbsⅠ BbsⅠ U6 SV40 ORI H1 Lentivector Packaging Kit（#LV500A-1（HIV 用）：p.8 参照） CMV promoter を併せてご使用下さい。 原 理 Puro （or copGFP） 本システムでは，Cumate オペレーター配列（CuO）に強く結合し WPRE SV40 poly-A ている CymR リプレッサーを介して発現の ON/OFF が行われます。 3'ΔLTR ＋1 U6 promoter CymR リプレッサーにより遺伝子の発現が抑制されている状態（図： T5 T5 Transcription H1 promoter Cumate Switch OFF）に Cumate を加えると，Cumate が CymR リプレッサーに結合し CymR リプレッサーが CuO から解離するため， ＋1 遺伝子発現が起こります（図：Cumate Switch ON） 。 sense 5' 3' - gNNNNNNNNNNNNNNNNNNNuu uucNNNNNNNNNNNNNNNNNNN - 3' - 5' antisense キット内容 ● pFIV-H1 / U6-copGFP vector または pFIV-H1 / U6-Puro vector ● Luciferase control siRNA oligonucleotide ● Forward and reverse PCR primers 添加 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） pFIV-H1/U6-copGFP siRNA Cloning and Expression Vector SBI SI111A-1 1 kit / pFIV-H1/U6-Puro siRNA Cloning and Expression Vector SBI SI110A-1 1 kit / 75,000 66,000 掲載されている製品はすべて研究用です。 6 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P04-10_k_i.indd 6 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:54:38 品 名 メーカー 商品コード Cumateなし Cumate 添加 (3 days) Cumate の添加により遺伝子発現が誘導 されていることが，GFP の発現により確 認できる。 Cumate の除去 培養液から Cumate を除去することで， 徐々に遺伝子発現が抑制されている。 Cumate の再添加 (4 days) 包装 / 価格（￥） pCDH-CuO-MCS-IRES-GFP Co-Inducible IRES Lentivector SBI QM530A-1 10μg / pCDH-CuO-MCS-IRES-RFP Co-Inducible IRES Lentivector SBI QM531A-1 10μg / pCDH-CuO-MCS-T2A-GFP Co-Inducible T2A Lentivector SBI QM521A-1 10μg / pCDH-CuO-MCS-T2A-RFP Co-Inducible T2A Lentivector SBI QM522A-1 10μg / pCDH-CuO-MCS-EF1-GFP Dual Promoter Lentivector SBI QM511B-1 10μg / pCDH-CuO-MCS-EF1-RFP Dual Promoter Lentivector SBI QM512B-1 10μg / pCDH-CuO-MCS Empty Cloning Lentivector SBI QM500A-1 10μg / pCDH-Cuo-RFP-T2A-GFP (Positive Control) SBI QM350PA-1 Plasmid 10μg / −80℃ M Virus ＊ 1 SBI QM350VA-1 1 vial / 86,000 86,000 86,000 86,000 86,000 86,000 75,000 75,000 80,000 レンチウイルスベクター発現システム Cumate による可逆的な発現誘導 ■ CymR Repressor Lentivector CymR Repressor 発現用レンチウイルスベクターです。CymR リプ レッサー発現細胞の樹立に用います。 再び Cumate を添加することで，遺伝子 発現が再度誘導されている。 T2A によりピューロマイシン耐性遺伝子または RFP をマーカー遺伝 子として発現します。 ■ SparQ Cumate Inducible Lentivector cDNA および miRNA 用の発現ベクターです。シングルまたはデュ アルプロモーターの製品があります。 マーカー遺伝子は，シングルプロモーターの製品では IRES または T2A に よ り Cumate 依 存 的 に， デ ュ ア ル プ ロ モ ー タ ー の 製 品 で は EF1 プロモーターにより Cumate の有無に関係なく恒常発現します。 マーカー遺伝子は GFP および RFP から選択できます。 ※ T2A を 用 い た 製 品（#QM521A-1，#QM522A-1） は，miRNA の発現には適していません。IRES またはデュアルプロモーターを用 いた製品をご使用下さい。 ベクター選択表 プロモーター シングル 目的配列 の発現 IRES T2A Cumate Switch Promoter デュアル 発現物 マーカー マーカー の発現 cDNA siRNA GFP （IRES） ○ ○ RFP GFP （T2A） ○ × RFP GFP EF1 ○ ○ RFP 商品コード #QM530A-1 #QM531A-1 #QM521A-1 #QM522A-1 #QM511B-1 #QM512B-1 pCDH-EF1-CymR-T2A-Puro SBI QM200PA-1 SBI QM200VA-1 pCDH-EF1-CymR-T2A-RFP SBI QM300PA-1 SBI QM300VA-1 Plasmid −80℃ M Virus ＊ 1 10μg / 1 vial / 75,000 80,000 Plasmid −80℃ M Virus ＊ 1 10μg / 1 vial / 75,000 80,000 ※ウ イ ル ス 粒 子 に パ ッ ケ ー ジ ン グ 済 み の 製 品（#QM350VA-1, #QM200VA-1，#QM300VA-1）の力価は 1×106 cfu/ml です。 ■ Cumate Solution Cumate Solution, 1000 × SBI QM100A-1 500μl / 15,000 ■ Cumate Starter Pack SparQ Cumate Inducible Lentivector（1 種類）と CymR Repressor Lentivector（#QM-200VA-1）および Cumate Solution をセット シングルプロモーター にしたスターターパックです。 IRES T2A デュアルプロモーター Starter Pack, pCDH-CuO-MCS-IRES-GFP (QM530A-1) ＊ 1 QM600A-1+QM530A-1 −80℃ M 1 kit / Starter Pack, pCDH-CuO-MCS-IRES-RFP (QM531A-1) ＊ 1 QM600A-1+QM531A-1 −80℃ M 1 kit / Starter Pack, pCDH-CuO-MCS-T2A-GFP (QM521A-1) ＊ 1 QM600A-1+QM521A-1 −80℃ M 1 kit / Starter Pack, pCDH-CuO-MCS-T2A-RFP (QM522A-1) ＊ 1 QM600A-1+QM522A-1 −80℃ M 1 kit / Starter Pack, pCDH-CuO-MCS-EF1-GFP (QM511B-1) ＊ 1 QM600A-1+QM511B-1 −80℃ M 1 kit / Starter Pack, pCDH-CuO-MCS-EF1-RFP (QM512B-1) ＊ 1 QM600A-1+QM512B-1 −80℃ M 1 kit / Starter Pack, pCDH-CuO-MCS (QM500A-1) ＊ 1 QM600A-1+QM500A-1 −80℃ M 1 kit / Starter Pack, pCDH-Cuo-RFP-T2A-GFP (QM350PA-1) ＊ 1 QM600A-1+QM350PA-1 −80℃ M 1 kit / Starter Pack, pCDH-Cuo-RFP-T2A-GFP (QM350VA-1) ＊ 1 QM600A-1+QM350VA-1 −80℃ M 1 kit / 168,000 168,000 168,000 168,000 168,000 168,000 168,000 168,000 168,000 ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P04-10_k_i.indd 7 掲載されている製品はすべて研究用です。 Cumate SBI Cumate SBI Cumate SBI Cumate SBI Cumate SBI Cumate SBI Cumate SBI Cumate SBI Cumate SBI 7 2011/09/07 15:54:40 レンチウイルスベクター発現システム レンチウイルス導入用製品 レンチウイルス用パッケージングキット pPACK Lentivector Packaging Kit レンチウイルス導入用試薬のセット LentiSuite / LentiStarter Kit レンチウイルスベクター関連製品のリーディングカンパニー である System Biosciences 社では，レンチウイルス導入用 製品を各種取り扱っています。また，各種製品をセットにした 製品（LentiSuite および LentiStarter Kit）もあります。 PureFection Transfection Reagent System Biosciences 社製レンチウイルス発現ベクターを， VSV-G 偽型ウイルス粒子にパッケージングするのに必要なウ イルス構造タンパク質発現用ベクターの混合液です。ウイルス 粒子で感染させることにより，幅広い種類の哺乳動物細胞に目 的遺伝子を効率良く導入でき，安定に発現させることが可能で す。FIV ベース（pPACKF1）または HIV ベース（pPACKH1） のパッケージングキットがあります。 Your Lentivector Construct 293TN Producer Cells + Packaging Plasmid (s) pVSV-G pPACK Packaging Mix ウイルス粒子を含む 培養上清 5×PEGSolution ウイルス粒子の濃縮 TransDux Virus Transduction Reagent UltraRapid Global Titer Kit ウイルス粒子の導入 定量的PCRによる ウイルス力価の測定 System Biosciences 社のレンチウイルス導入用製品 A：LentiSuite，B：LentiStarter Kit 品 名 製品内容 セット製品 掲載 ページ A B ■ pPACKF1 Lentivector Packaging Kit pPACK Lentivector Packaging Kit System Biosciences 社製 ベクター用レンチウイルス ○＊ 2 ○＊ 3 パッケージングキット p.8 293TN Producer Cell Line 組換えウイルスの産生に最 適化された細胞株 p.8 PureFection Transfection Reagent ＊ 4 レンチウイルス発現ベク ターやパッケージングベク ターの細胞導入用のポリ マーベースのトランスフェ クション試薬 − PEG-it Virus Precipitation Solution PEG 沈殿によるウイルス 粒子濃縮用試薬 ○ ○ p.9 TransDux Virus Transduction Reagent ウイルス粒子の細胞導入用 試薬 − ○ p.9 LentiMag Magnetotransduction Kit ＊ 4 磁性ナノ粒子を用いた組換 えウイルス粒子の細胞導入 用試薬 − − p.10 UltraRapid Lentiviral Global Titer Kit 定量的 PCR によるレンチウ イルスの力価測定用キット ○ − p.10 ○ − ■ pPACKH1 Lentivector Packaging Kit ● Packaging plasmid mix : mixture of pPACKH1-GAG, − p.9 掲載されている製品はすべて研究用です。 包装 / 価格（￥） 1 kit / 187,000 1 kit / 187,000 1 kit / 67,000 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P04-10_k_i.indd 8 品 名 メーカー 商品コード pPACKF1 Lentivector, FIV, Packaging Kit ＊ 1 SBI LV100A-1 pPACKH1 Lentivector, HIV, Packaging Kit ＊ 1 SBI LV500A-1 200 μl SBI LV510A-1 500 μl 包装 / 価格（￥） 1 kit / 73,000 1 kit / 73,000 1 kit / 179,000 ■ 293TN Producer Cell Line セット内容：pPACKH1（40 μl），PEG-it （5 ml） ，TransDux（200 μl） 8 pPACKH1-REV and pVSV-G ● pSIH1-H1-siLuc-copGFP positive control vector 品 名 LentiSuite (10 reactions) ＊ 1 SBI LV300B-1 E FIV ベース System SBI LV300A-1 E HIV ベース System LentiStarter Kit (pPACKH1, PEG-it , TransDux) ＊ 1 SBI LV050A-1 ● Packaging plasmid mix : mixture of pFIV-34N and pVSV-G ● pSIF1-H1-siLuc-copGFP positive control vector ＊ 2：FIV ベース（pPACKF1）と HIV ベース（pPACKH1）の製品があります。 ＊ 3：HIV ベース（pPACKH1）の製品のみです。 ＊ 4：本製品はセット製品に含まれていません。 メーカー 商品コード キット内容 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） 293TN Producer Cell Line SBI LV900A-1 E 1 vial / 45,000 組換え体ウイルスの産生に最適化された細胞株。 ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:54:46 PureFection Transfection Reagent 操作方法概略 操作法概略 ウイルス粒子を含む培養上清 + 5×PEG- レンチウイルスベクター発現システム レンチウイルス発現ベクターやパッケージングベクターの導入試薬 Solution レンチウイルス発現ベクターやパッケージングベクターの細 胞導入に適したポリマーベースのトランスフェクション試薬で す。 特 長 ◆ 幅広い宿主細胞に，高効率かつ，高い再現性で導入可能です。 ◆ 血清や抗生物質の存在下でも使用できます。 4℃で イ ン キ ュ ベ ー ト 後， 1,500 × g，30 分間遠心 ◆ 本製品 1 ml で 24 ウェルプレート 1,000 回分の導入が可能です。 脂質ベース試薬 10∼100 倍に濃縮された ウイルス ウイルス産生細胞 H9 ES 細胞 pGreenZeo-CMV 導入 H9 ES 細胞 pGreenZeo-mOct4 pGreenZeo-mNanog 導入 導入 H9 ES 細胞 H9 ES 細胞 位相差像 GFP CMV，Oct4，Nanog 各プロモーターの下流に GFP レポーター遺伝子を組み込んだ発 現ベクターを，本製品により濃縮したウイルスを使用してヒト ES 細胞 H9 に導入した。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Virus Precipitation Solution, PEG-it SBI LV810A-1 SBI LV825A-1 100 ml / 250 ml / 35,000 87,000 組換えウイルス粒子の細胞導入用試薬 各種細胞に PureFection および脂質ベース試薬を用いて， GFP 発現ベクターを導入した。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） PureFection Transfection Reagent SBI LV750A-1 SBI LV750A-5 1 ml / 43,000 5 ml / 179,000 TransDux Virus Transduction Reagent 組換えウイルス粒子の細胞導入用試薬です。 簡便・高効率なレンチウイルス濃縮試薬 特 長 ◆ DMEM 完全培地に 1/200 量を加えて使用します。 ◆ 24 ウェルプレートの細胞に 80 回導入できます。 PEG-it Virus Precipitation Solution TransDux ポリブレン レンチウイルスのポリエチレングリコール（PEG）沈殿によ る濃縮を，簡便に行える試薬です。 特 長 ◆ 滅菌済みで毒性を示す物質を含んでいないため，濃縮したウイルス は ES 細胞をはじめとする様々な細胞に適用できます。 ◆ in vivo での感染実験に使用する高力価ウイルスの調製にも最適です。 ◆ 超遠心機などの特殊な機器設備は不要です。 ◆ スケールアップが容易です。 ◆ 本製品 100 ml で， 400 ml の培養上清からウイルス濃縮が行えます。 HepG2 細胞および HT1080 細胞に，TransDux およびポリブレンを用いて，ウイルス 粒子を導入した。 品 名 メーカー 商品コード TransDux Virus Transduction Reagent SBI LV850A-1 包装 / 価格（￥） 200μl / System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P04-10_k_i.indd 9 36,000 掲載されている製品はすべて研究用です。 ◆ レンチウイルスを 10 ∼ 100 倍に濃縮できます。 9 2011/09/07 15:54:47 レンチウイルスベクター発現システム 磁気粒子を用いた組換えウイルス粒子の細胞導入用試薬 LentiMag Magnetotransduction Kit 磁気ナノ粒子を用いた組換えウイルス粒子の細胞導入用試薬 です。 原 理 一般的なレンチウイルスベクターに含まれる WPRE（Woodchuck Hepatitis Virus Post-transcriptional Regulation Element）遺伝 子を増幅するプライマーと，内部対照である UCR1 を増幅するプライ マーを用いて定量的 PCR を行い，WPRE（ウイルス数）と UCR1（細 胞数）を定量します。この値から細胞当たりのウイルス感染数（MOI） 特 長 を算出します。 ◆ レンチウイルスおよびレトロウイルスの組換えウイルス粒子を細胞 操作方法概略 に導入できます。 ◆ 操作は簡便で，ポリブレンを用いた場合よりも効率的かつ迅速にウ 間加熱する。 イルス粒子を導入できます。 2. 上清を Master mix に加え，リアルタイム PCR を行う。 ◆ 接着細胞，浮遊細胞のいずれにも使用できます。 ◆ 細胞毒性はありません。 ◆ 本製品 50 μ l で，24 ウェルプレートの細胞に 24 回導入できます。 ウイルス粒子 1. レンチウイルス感染細胞に Cell lysis buffer を加え，95℃で 2 分 LentiMag キット内容 ● Forward and reverse WPRE primer mix ● Cell lysis buffer ● Forward and reverse UCR1 primer mix ● SYBRTaq mix ● Calibration standards 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） UltraRapid Lentiviral Global Titer Kit, for Titering in Human and Mouse Cell SBI LV961A-1 1 kit / 84,000 ウイルス粒子・ 磁性ナノ粒子 複合体 ポジティブコントロール用ウイルス粒子 細胞 Positive Transduction Control System Biosciences 社の各種レンチウイルスベクターを 用いて作製した，ポジティブコントロール用のウイルス粒子で す。 磁石 キット内容 品 名 ● LentiMag reagent メーカー 商品コード ● Magnetic plate 品 名 メーカー 商品コード Magnetotransduction Kit, LentiMag SBI LV800A-1 包装 / 価格（￥） 1 kit / 92,000 50μl / 57,000 ■ キット別売品 LentiMag Reagent SBI LV801A-1 レンチウイルスベクターの力価測定キット UltraRapid Lentiviral Global Titer Kit 定量的 PCR を用いてレンチウイルスベクターの力価を測定 するキットです。従来の p24 ELISA 法と比較して迅速に力価 を測定できます。 特 長 掲載されている製品はすべて研究用です。 ◆ 細胞を溶解し，そのまま定量的 PCR のテンプレートとして使用しま す。 ◆ 3 時間以内に測定できます。 ◆ WPRE 遺 伝 子 を 含 む レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー（System Biosciences 社レンチウイルスベクター，pLVCT-H1，pLVTHM， 包装 / 価格（￥） pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro cDNA Vector, Pre-packaged ＊ 1 SBI CD510VB-1 −80℃ M 1 vial / 103,000 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP cDNA Cloning and Expression Vector, Pre-packaged ＊ 1 SBI CD511VB-1 −80℃ M 1 vial / 103,000 pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP cDNA Cloning and Expression Vector, Prepackaged ＊ 1 SBI CD512VA-1 −80℃ M 1 vial / 103,000 pSIF1-H1-siLuc-copGFP Positive Transduction Control ＊ 1 SBI LV201B-1 −80℃ M 1 vial / 85,000 HIV/FIV, Positive Transduction Control Virus, Sampler Kit ＊ 1 SBI LV401A-1 −80℃ M 1 kit / 93,000 pSIH1-H1-siLuc-copGFP Packaged Positive Transduction Control ＊ 1 SBI LV601B-1 −80℃ M 1 vial / 85,000 pPS-EF1-GFP-RFP, Pre-packaged ＊ 1 SBI LV603VA-1 −80℃ M 1 vial / 66,000 pPS-PGK-GFP-RFP, Pre-packaged ＊ 1 SBI LV604VA-1 −80℃ M 1 vial / 66,000 pPS-MSCV-GFP-RFP, Pre-packaged ＊ 1 SBI LV605VA-1 −80℃ M 1 vial / 66,000 pPS-UBC-GFP-RFP, Pre-packaged ＊ 1 SBI LV606VA-1 −80℃ M 1 vial / 66,000 pGreenPuro Scramble Hairpin Control Virus ＊ 1 SBI MZIP000-VA-1 −80℃ M 1 vial / 93,000 pGreenPuro shRNA Expression Lentivector (CMV), Packaged Virus ＊ 1 SBI SI505VA-1 −80℃ M 1 vial / 93,000 ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 pGIPz，HiPerform（Life Technologies 社）など）の力価を測定 できます。 ◆ キットには 42 回分の試薬が含まれています。 10 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P04-10_k_i.indd 10 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:54:59 トランスポゾン組み込み発現システム 使用例 − PiggyBac Transposase + PiggyBac Transposase ゲノムへの組み込み・除去が可能な発現システム PiggyBac Transposon Vector System トランスポゾンを用いて，目的 cDNA・miRNA・shRNA 配列を宿主細胞のゲノムに組み込み，安定発現細胞株を樹立す ることができる発現システムです。また，一旦ゲノムに組み込 んだ目的配列を，PiggyBac Transposase により痕跡を残 さずに除去することができます。 ピューロマイシン選択 特 長 図 1：1 つのベクターを組み込んだ例 ◆ 一度のトランスフェクションで，ウイルスベクターを用いずに安定 発現細胞株の樹立が可能です。 PiggyBac Dual Promoter Vector （#PB513B-1） と， Super PiggyBac Transposase Expression Vector を HeLa 細胞にコトランスフェクションし，ピューロマイシンで選 択した。GFP を発現する細胞株が得られた。 ◆ ヒト・マウス・ラット由来細胞で使用できます。 ◆ 複数のベクターを同時に組み込むことも可能です（図 2 参照）。 ◆ cDNA・miRNA の誘導発現が可能な Cumate Switch ベクターも あります（図 3 参照）。 ◆ ゲノムに組み込んだ目的配列は，PiggyBac Transposase により 高効率に痕跡を残さずに除去することができます（図 4 参照）。 ◆ 高効率での遺伝子導入，iPS 細胞の樹立，可逆的な遺伝子改変など に有用です。 原 理 1. 目的 cDNA 配列などを挿入した PiggyBac Transposon Vector と，Super PiggyBac Transposase Expression Vector を宿主 細胞にコトランスフェクションする。 2. Super PiggyBac Transposase Expression Vector から発現し トランスポゾン組み込み発現システム + PiggyBac Transposase ◆ 10 ∼ 100 kb の配列も導入可能です。 た PiggyBac Transposase に よ り，PiggyBac Transposon Vector 中の両端に存在するトランスポゾン特異性末端逆位配列 （PiggyBac Terminal Repeat）の部分で配列が切り出される。 3. 切り出された配列が，宿主細胞ゲノム中の TTAA 部位に組み込まれ， 安定発現細胞株が樹立される。 4. 安 定 発 現 細 胞 株 に Super PiggyBac Transposase Expression Vector の み を 再 度 ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン す る と， 発 現 し た PiggyBac Transposase により，組み込んだ目的配列が痕跡を残 さずに除去される。 PiggyBac Transposon 図 2：2 つのベクターを同時に組み込んだ例 PiggyBac Dual Promoter Vector（#PB513B-1），PiggyBac Single Promoter Vector（#PB531A-1） と Super PiggyBac Transposase Expression Vector を 293 細胞にコトランスフェクションし，ピューロマイシンで選択した。GFP および RFP を発現する細胞が得られた。 PiggyBac Transposase + PiggyBac Transposase + Cumate − Cumate “ 切り出し ” “ 組み込み ” ゲノム DNA TTAA 部位 PiggyBac Transposase 痕跡を残さずに除去 ピューロマイシン選択細胞 図 3：Cumate 誘導発現ベクターの使用例 PiggyBac Cumate Switch Inducible Vector （#PBQM530A-1） と Super PiggyBac Transposase Expression Vector を細胞にコトランスフェクションし，ピューロマイ シンで選択した。樹立した細胞株に Cumate を添加して GFP を誘導発現した。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P11-12_k.indd 11 掲載されている製品はすべて研究用です。 “ 再切り出し ” 11 2011/09/07 9:26:18 − PiggyBac Transposase + PiggyBac Transposase (0.5μg) + PiggyBac Transposase (2.5μg) ［メーカー：SBI］ 目的遺伝 マーカーの プロモーター 子の発現 発現 シングル EF1 α （IRES） デュアル CMV EF1 α マーカー 商品コード 包装 GFP RFP Neo Puro GFP RFP GFP ＋ Puro RFP ＋ Puro PB530A-1 PB531A-1 PB533A-1 PB510B-1 PB511B-1 PB512B-1 PB513B-1 PB514B-1 10μg 10μg 10μg 10μg 10μg 10μg 10μg 10μg 価格 （￥） 93,000 93,000 93,000 93,000 93,000 93,000 93,000 93,000 ■ cDNA・miRNA 誘導発現用ベクター 発現誘導物質 Cumate の添加により，cDNA または miRNA を厳密 トランスポゾン組み込み発現システム RFP 陽性の細胞数 140 に誘導発現できるベクターです。非誘導時のバックグラウンド発現が低 88％除去 100 RFP を 組 み 込 ん だ PiggyBac Vector “ 再切り出し ” 60 20 ゲノム DNA TTAA 部位 PiggyBac Transposase く抑えられています。本製品ではひとつのベクターで，目的誘導遺伝子 と CymR リプレッサーを共発現します。 ※ Cumate Switch System の原理については，p.6 をご覧下さい。 痕跡を残さずに除去 0 0μg 0.5μg 2.5μg PiggyBac Transposase 発現ベクターの添加量 図 4：組み込んだ目的配列の除去例 PiggyBac Single Promoter Vector（#PB531A-1）を導入した HEK293 細胞を 6 well plate で培養し，それぞれの量の Super PiggyBac Transposase Expression Vector トランスフェクションした。RFP 発現細胞数により，組み込んだ配列の除去を確 認した。 ■ cDNA・miRNA 恒常発現用ベクター 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） PB-Cuo-MCS-IRES-GFP-EF1-CymR-Puro Inducible cDNA Cloning and Expression Vector SBI PBQM530A-1 10μg / 93,000 Cumate Solution, 10000 × SBI PBQM100A-1 0.5 ml / 16,000 ■ shRNA 発現用ベクター PB-CMV-GreenPuro-H1-MCS shRNA Expression Vector SBI PBSI505A-1 PB-EF1-GreenPuro-H1-MCS shRNA Expression Vector SBI PBSI506A-1 10μg / 93,000 10μg / 93,000 10μg / 75,000 ■ Transposase 発現ベクター 掲載されている製品はすべて研究用です。 Super PiggyBac Transposase Expression Vector SBI PB200PA-1 12 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P11-12_k.indd 12 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 9:26:21 ミニサークル発現システム 6 時間 Minicircle 8日 2日 Minicircle Minicircle Minicircle ミニサークル作製用製品 in vivo での目的遺伝子の長期間発現 Minicircle DNA System 目的遺伝子を発現する Minicircle を作製するためのベクター と宿主 E. coli 株です。 Expression cassette options SV40 poly-A MN502A-1 KanR pUC c ssion assette op t ns io Minicircle（MC）は非ウイルス性の DNA で，ΦC31 を介した分子 内組換えにより，元となるプラスミド（Parental Plasmid）DNA か ら作製されます。通常のプラスミド DNA と異なりバクテリア由来の複 製開始点や抗生物質耐性遺伝子を有していません。また，メチル化やサ イレンシングなどの影響を受けないため，Minicircle からの発現は長期 間に渡って持続します。 pre Ex O RI 32× Ⅰ Sites Minicircle とは 商品コード MN501A-1 attB attP MN511A-1 MN512A-1 MN530A-1 MN531A-1 MN601A-1 MN602A-1 ■ Parental Plasmid 特 長 品 名 メーカー 商品コード ◆ 作製した Minicircle は，ウイルスを用いずに Ready-to-use でその ままトランスフェクションに使用でき，宿主細胞のゲノムに組み込 まれることもありません。 in vivo および in vitro でのトランスフェクショ ◆ 作製した Minicircle は， ンに使用できます。 ◆ Minicircle によるタンパク質発現は，通常のプラスミドを用いた場 合よりも，高効率かつ長期間（最大 14 日間）発現が持続します。 ◆ 元となるプラスミド（Parental Plasmid）や，Minicircle に組み込 まれないバックボーン部分の混入がなく，免疫応答を引き起こす恐 れはありません。 ◆ プロモーターやレポーター遺伝子の異なる製品を多数ラインナップ しています。 操作方法概略 pMC.CMV-MCS-SV40PolyA ＊ SBI MN501A-1 pMC.EF1-MCS-SV40PolyA ＊ SBI MN502A-1 pMC.CMV-MCS-EF1-GFP-SV40PolyA ＊ SBI MN511A-1 pMC.CMV-MCS-EF1-RFP-SV40PolyA ＊ SBI MN512A-1 pMC.EF1-MCS-IRES-GFP-SV40PolyA ＊ SBI MN530A-1 pMC.EF1-MCS-IRES-RFP-SV40PolyA ＊ SBI MN531A-1 pMC.BESPX-MCS1 (Empty Vector) ＊ SBI MN100A-1 pMC.BESPX-MCS2 (Empty Vector) ＊ SBI MN100B-1 包装 / 価格（￥） 10μg / 98,000 10μg / 98,000 10μg / 114,000 10μg / 114,000 10μg / 114,000 10μg / 114,000 10μg / 98,000 10μg / 98,000 ■ ポジティブコントロール 2. 宿主 E. coli ZYCY10P3S2T 株に Parental Plasmid を導入する。 pMC.CMV-GFP-SV40PolyA (Positive Control) ＊ SBI MN601A-1 10μg / pMC.CMV-rRFP-SV40PolyA (Positive Control) ＊ SBI MN602A-1 10μg / Pre-made Minicircle CMV-GFP-SV40PolyA (Positive Control) SBI MN601MC-1 40μg / Pre-made Minicircle CMV-rRFP-SV40PolyA (Positive Control) SBI MN602MC-1 40μg / 3. Arabinose を添加すると，E. coli 株内で φC31 インテグラーゼが 発現し，Minicircle が作製される。また，Sce Ⅰエンドヌクレアー ゼが発現し，Parental Plasmid およびバックボーンが分解される。 4. 市販のプラスミド精製キットで Minicircle を精製する。 attR SV40 poly-A pUC ORI プロモーター 目 attB 的 遺 伝 32× Ⅰ Sites プロモーター 目 的 遺 伝 子 KanR 子 ＋ Arabinose （ΦC31 インテグラーゼ および Ⅰ エンドヌクレ アーゼが発現する） pUC ORI attP SV40 poly-A 32× Ⅰ Sites attL Arabinose M − ＋ PP 3 kb MC KanR 分解 1 kb 目的遺伝子の相対的発現量 E. coli ZYCY10P3S2T 株に Arabinose を添加すると，Parental Plasmid（PP）か ら Minicircle（MC）が作製されていることがわかる。 10,000 Minicircle DNA Plasmid DNA 1,000 98,000 98,000 98,000 ■ 宿主 E. coli 株 ZYCY10P3S2T E. coli Minicircle Producer Strain ＊ SBI MN900A-1 −80℃ M 5 vials / 73,000 20 ml / 11,000 20 ml / 11,000 ■ 関連試薬 Kanamycin Solution, 50 mg/ml SBI MN800A-1 Arabinose Induction Solution, 20％ SBI MN850A-1 Minicircle 作製用ベクターおよび宿主 株ご購入時のご注意 Minicircle 作製用ベクターおよび宿主 株（上記＊印製品）は， 大学・官公庁の研究所（Academic）にご所属の方が基礎研究目的で 使用される場合にのみご購入いただけます。ご注文の際は，フナコシ ホームページ（http://www.funakoshi.co.jp/download/）に掲載の 専用注文書に必要事項をご記入の上，販売店担当者にお渡し下さい。 100 1 48 時間 2 週間 3 週間 掲載されている製品はすべて研究用です。 10 kb 98,000 ミニサークル発現システム 1. Parental Plasmid に目的遺伝子を挿入する。 での目的遺伝子の長期間発現 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P13_k.indd 13 13 2011/09/07 9:26:51 GFP (MC-DNA) 1.0 幹細胞研究用製品 幹細胞研究用製品 Fold Change Oct4 (endogenous) iPS 細胞作製用製品および iPS 細胞 0.5 ウイルスを用いない iPS 細胞樹立用ベクター 0 Reprogramming Minicircle DNA Minicircle (MC) DNA（ 前 ペ ー ジ 参 照 ） と 呼 ば れ る 環 状 DNA に，体細胞から iPS 細胞を樹立する際に用いられる 4 種 類のリプログラミング因子（Lin28，Nanog，Sox2，Oct4） と，レポーターとして GFP 遺伝子を組み込んだベクターです。 バクテリア DNA などの外来因子を含まない iPS 細胞を樹立で きます。 3 6 9 12 15 18 時間（日数） 21 24 本製品をトランスフェクションした細胞の GFP 発現量と内因性の多能性マーカー Oct4 の発現量を時間経過とともに定量的 PCR により確認した。Minicircle DNA の減少とと もに GFP シグナルは減衰していくが，内因性の多能性マーカー（Oct4）が発現し始め， 増加していく様子がわかる。 参考文献：Jia, F., et al. , Nature Methods , 7 (3), 197 ∼ 199 (2010). Nanog ※本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。 Reprogramming Minicircle Parental Vector（#SRM101PA-1） 9493 Mfel (2) M − ＋ Arabinose Kb Plasmid Backbone 7466...9805 32 ISce1 site 1...730 attB site 739...773 CMV promoter 1065...1345 10 hLin28 1536...2162 MC 6 本製品をヒト脂肪幹細胞にトランスフェクションし，18 日後に抗多能性マーカー抗体を 用いて免疫染色を行った。形態的に hES 細胞コロニーに類似しており，多能性マーカー （SSEA4，Nanog）を発現している様子が確認できる。 4 pMC_LGNSOmap Kanamycin Resistance 7465...6905 3 2 9805 bp attP 6487...6525 6335 Mfel (2) pMC-LGNSO を導入した 株 に Arabinose を 添 加 す る と Minicircle（MC）が作製される。 hOct4 4977...6059 GFP 2235...2887 hNanog 2967...3881 MC-LGNSO 774...6478 hSox2 3954...4904 操作方法概略 1. エレクトロポレーションなどにより Minicircle DNA を細胞に導入 する。 2. エレクトロポレーションした細胞を 100 mm ディッシュに播種し， 10％ FBS を含む DMEM/F12 培地で 3 日間培養する。 3. GFP を発現している細胞のみをフローサイトメトリーでソーティン Oct4 グし，ゼラチンコートした 6 ウェルプレートに約 0.5×105 cells/ Ready-to-use で トランスフェクション 可能 Reprogramming Minicircle DNA （#SRM100PA-1） well となるよう播種する。 4. 1 日後，ES 細胞用培地に交換し培養を続ける。培地交換は 2 ∼ 3 日ごとに行う。 5. 培 養 4 日 目，6 日 目 に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン 試 薬 を 用 い て Na no x2 So g Minicircle DNA を再度トランスフェクションする。 6. 最初の導入から約 18 日後，ES 細胞様のコロニー形成が確認できる。 7. さらに培養を続け，最初の導入から 26 ∼ 28 日後，GFP ネガティ ブな iPS 細胞コロニーが形成される。コロニーごとに回収し，解析・ 特 長 ◆ Minicircle DNA はウイルスを用いずに Ready-to-use でそのまま トランスフェクションに使用でき，宿主細胞のゲノムに組み込まれ ることもありません。 ◆ Minicircle の導入後，GFP の発現を指標に細胞をスクリーニングし ます。Minicircle は宿主細胞のゲノムに組み込まれないため，細胞 分裂により希釈されて消失します。その間に細胞のリプログラミン グは完了し，GFP を発現していない ES 細胞様のコロニーとして iPS 細胞が確認できます。 ◆ Minicircle DNA 100 μg で約 20 回のトランスフェクションが行え ます。 ◆ Parental Vector（#SRM101PA-1） を 専 用 の 宿 主 E. coli （#MN900A-1）に導入後，Arabinose（#MN850A-1：前ページ 掲載されている製品はすべて研究用です。 参照）を添加すると E. coli 株内で Minicircle が作製されます。市販 のプラスミド精製キットで Minicircle を精製して使用します。 ※ 1 回のリプログラミング実験には 3 回のトランスフェクションが必 要です（右記参照）。 14 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P14-18_k.indd 14 実験に用いる。 ※ 上記操作方法はヒト脂肪幹細胞を用いた場合の一例です。細胞種に より培養条件，トランスフェクション方法などは異なります。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Reprogramming Minicircle DNA, Ready-to-Transfect SBI SRM100PA-1 100μg / 104,000 作製済み Reprogramming Minicircle DNA。 Reprogramming Minicircle DNA, Parental Vector SBI SRM101PA-1 10μg / 280,000 Reprogramming Minicircle DNA 作製用ベクター。 ※大学・官公庁の研究所にご所属の方のみ購入可能。購入時に使用者確認書が必要。 ※ Minicircle 作製用宿主 株および関連試薬については，前ペー ジをご覧下さい。 Minicircle 作製用ベクターおよび宿主 株ご購入時のご注意 Minicircle 作製用ベクターおよび宿主 株は，大学・官公庁の 研究所（Academic）にご所属の方が基礎研究目的で使用される場合 にのみご購入いただけます。ご注文の際は，フナコシホームページ （http://www.funakoshi.co.jp/download/）に掲載の専用注文書に 必要事項をご記入の上，販売店担当者にお渡し下さい。 な お，営 利 目 的 の 研 究 施 設・法 人 に ご 所 属 の 方 は，作 製 済 み Minicircle をご使用下さい。 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:57:04 Minicircle DNA で樹立したヒト iPS 細胞株 Human mc-iPS Cell Line ※本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。 特 長 ◆ 多能性細胞マーカー因子の発現を遺伝子レベル，タンパク質レベル メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） mc-iPS Cell Line, Human (2×105 cells) SBI SC301A-1 E 1 vial / 384,000 miRNA による iPS 細胞樹立用ベクター miRNA Reprogramming Vector miRNA-302bcad / 367 のクラスターを発現するベクター です。ヒトまたはマウスの体細胞に導入することにより，効率 良く iPS 細胞を樹立できます。 幹細胞研究用製品 前 ペ ー ジ の「Reprogramming Minicircle DNA」 （#SRM100PA-1）を用いて，成体ヒト脂肪幹細胞（hASCs） から樹立したヒト iPS 細胞株です。多能性細胞マーカー因子の 発現を確認済みで，多分化能を有した iPS 細胞として各種実験 に使用できます。 品 名 特 長 で確認しています。 ◆ 分化誘導プロトコルの樹立や新規トランスジェニック細胞の開発な ◆ miRNA を用いての iPS 細胞の樹立法は，4 種類のリプログラム因 子（Oct4 / Sox2 / Klf4 / Myc）を用いた標準的な方法よりも， どに有用です。 1 H 9SC 内皮細胞 U D U D U D hA SC m ciP SC LV -iP SC ※ mc-iPS 細胞の培養にはフィーダー細胞が別途必要となります。 た生殖細胞系伝達を示すキメラマウス作製の実績があります。 ◆ Minicircle，PiggyBac System およびレンチウイルスフォーマッ 神経細胞 Ectoderm Sox1 Pax6 については p.11 をご覧下さい。 心筋細胞 Endoderm Sox17 FoxA2 トの製品があります。 ※ Minicircle の詳細については p.13 を，PiggyBac System の詳細 Mesoderm T KDR ◆ miRNA により樹立した iPS 細胞は，形態，多能性マーカーの発現， テラトーマ形成能において通常の iPS 細胞と同様の性質を示し，ま mc-iPSCが形成した胚様体 Pluripotent Oct4 Nanog 1,000 倍以上効率的であるという報告があります 。 Oct4 / Sox2 / Klf4 / Myc miR-302bcad / 367 AII 18S 1×105 個細胞中の iPS 様細胞のコロニー数 U：Undifferentiated（未分化） D：Differentiated（分化後） mc-iPS 細胞の多系統への分化能検証 mc-iPS 細胞が胚様体を形成し，分化誘導条件により内皮細胞，神経細胞，心筋細胞へと それぞれ分化可能なことが確認できた。心筋細胞では拍動も認められた。また，RT-PCR により，分化誘導を行った細胞では三胚葉マーカー遺伝子の発現が確認できた。 mc-iPSC：mc-iPS 細胞 LV-iPSC：レンチウイルスにより作製された iPS 細胞 H9-SC：ヒト H9 幹細胞 hASC：ヒト脂肪幹細胞 Oct4（内因性） Oct4 Sox2（内因性） Nanog（内因性） 12,000 10,000 10,000 1,000 100 10 ＜5 ＜5 1 18 日 26 日 iPS 細胞を樹立する効率の比較。下記文献より改変。 参考文献 1. Anokye-Danso, F., , 8 (4), 376 ∼ 388 (2011). Nanog （内因性） mc-iPS 細胞株の多能性を各種実験により確認した。 上図： 位相差顕微鏡による観察。hES 細胞コロニーに類似しており，アルカリホスファ ターゼ活性が認められた。 中図： 各種抗多能性マーカー抗体（Oct4，TRA-1-60，Nanog，SSEA4）による免疫 染色像。 下図： マウス皮下への mc-iPS 細胞のインジェクションにより，テラトーマが形成され， 腺，軟骨，神経細胞が確認できた。 右図： RT-PCR により各種多能性マーカー遺伝子の発現を確認した。mc-iPS 細胞はレ ンチウイルスにより作製された iPS 細胞（LV-iPSC） ，ヒト H9 幹細胞（H9-SC） と同様の発現パターンを示している。ネガティブコントロールとしてヒト脂肪幹細 胞（hASC）を用いた。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P14-18_k.indd 15 掲載されている製品はすべて研究用です。 mc-iPS 細胞の多能性の検証 ヒト線維芽細胞に miRNA-302bcad / 367 発現レンチウイルスベクターを導入し，経 過観察した。 左：pre-iPS 細胞のコロニー形成例（10 ∼ 15 日後）。緩やかに組織化したコロニーが， フィーダー細胞の上に観察された。 右：iPS 細胞のコロニー形成例（3 ∼ 4 週間後） 。大きく平たいコロニーが観察された。 15 2011/09/07 15:57:08 誘導発現ベクター ■ miRNA-302bcad / 367 発現 Minicircle ウイルスベクターを用いずに，ゲノム DNA へ組み込まれることなく iPS 細胞を樹立できます。Ready-to-use フォーマットと，別売りの専 用 株で minicircle を作製する Parental ベクターフォーマット 幹細胞研究用製品 の製品があります。 品 名 メーカー 商品コード 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Pre-made Minicircle, CMV-hsa-miR-302bcad/367-EF1-GFP SBI TDH101MC-G 30μg / 120,000 ヒト iPS 細胞樹立用の作製済み Minicircle。 pMC.CMV-hsa-miR-302bcad/367-EF1-GFP, Parental DNA SBI TDH101MN-G 10μg / 275,000 ヒト iPS 細胞樹立用の Minicircle 作製用ベクター。 ※大学・官公庁の研究所にご所属の方のみ購入可能。購入時に使用者確認書が必要。 Pre-made Minicircle, CMV-mmu-miR-302bcad/367-EF1-GFP SBI TDM102MC-G 30μg / 120,000 PB-CMV-miR-302bcad/367-EF1-GFP iPSC Vector SBI PB-miR302 包装 / 価格（￥） 10μg / 168,000 恒常発現ベクター。ヒト iPS 細胞樹立用。 PB-Cuo-miR-302bcad/367-IRES-GFP-EF1-CymR-Puro Inducible iPSC Vector SBI PBQM-miR302 10μg / 187,000 誘導発現ベクター。ヒト iPS 細胞樹立用。 ※ Transposase 発現ベクターおよび発現誘導物質については，p.11 をご覧下さい。 ■ miRNA-302bcad / 367 発現レンチウイルスベクター マーカー遺伝子として GFP を用いる製品と，GFP とピューロマイシ マウス iPS 細胞樹立用の作製済み Minicircle。 pMC.CMV-mmu-miR-302bcad/367-EF1-GFP, Parental DNA SBI TDM102MN-G 10μg / 275,000 ン耐性遺伝子を用いる製品があります。 マウス iPS 細胞樹立用の Minicircle 作製用ベクター。 ※大学・官公庁の研究所にご所属の方のみ購入可能。購入時に使用者確認書が必要。 ※ Minicircle 作製用宿主 株および関連試薬については，p.13 をご覧下さい。 Minicircle 作製用ベクターおよび宿主 株ご購入時のご注意 Minicircle 作製用ベクターおよび宿主 株は，大学・官公庁の 研究所（Academic）にご所属の方が基礎研究目的で使用される場合 にのみご購入いただけます。ご注文の際は，フナコシホームページ （http://www.funakoshi.co.jp/download/）に掲載の専用注文書に 必要事項をご記入の上，販売店担当者にお渡し下さい。 な お，営 利 目 的 の 研 究 施 設・法 人 に ご 所 属 の 方 は，作 製 済 み Minicircle をご使用下さい。 ■ miRNA-302bcad / 367 発現 PiggyBac Transposon Vector ウイルスベクターを用いず，トランスポゾンを用いて，miRNA を宿 主細胞のゲノムに組み込むことができます。また，iPS 細胞を樹立後， 一旦ゲノムに組み込んだ目的配列を PiggyBac Transposase により 痕跡を残さずに除去することができます。 miRNA を恒常発現する製品と，誘導発現する製品があります。 恒常発現ベクター 品 名 メーカー 商品コード pTD.CMV-hsa-miR-302bcad/367-EF1-GFP SBI TDH101PA-G Plasmid SBI TDH101VA-G −80℃ M Virus ＊ 1 包装 / 価格（￥） 10μg / 255,000 1 vial / 131,000 ヒト iPS 細胞樹立用。 pTD.CMV-hsa-miR-302bcad/367-EF1-GFP-T2A-Puro SBI TDH101PA-GP Plasmid SBI TDH101VA-GP −80℃ M Virus ＊ 1 10μg / 234,000 1 vial / 120,000 ヒト iPS 細胞樹立用。 pTD.CMV-mmu-miR-302bcad/367-EF1-GFP SBI TDM102PA-G Plasmid SBI TDM102VA-G −80℃ M Virus ＊ 1 10μg / 255,000 1 vial / 131,000 マウス iPS 細胞樹立用。 pTD.CMV-mmu-miR-302bcad/367-EF1-GFP-T2A-Puro SBI TDM102PA-GP Plasmid SBI TDM102VA-GP −80℃ M Virus ＊ 1 10μg / 234,000 1 vial / 120,000 掲載されている製品はすべて研究用です。 マウス iPS 細胞樹立用。 ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 16 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P14-18_k.indd 16 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:57:15 多分化能／分化レポーター検出用製品 ■ Differentiation Reporter ◆ 各種細胞の分化過程で特異的に発現する各種遺伝子のプロモーター が，pGreenZeo レンチウイルスベクターにクローニングされてい 多分化能・分化マーカー発現のレポーターベクター 多分化能を有する細胞や，血球，神経，筋細胞等の各種分化 細胞に特異的に発現している遺伝子のプロモーターを GFP/ RFP 遺伝子の上流に組み込んだ，レンチウイルスベースのレ ポーターベクターです。各種細胞の未分化／分化状態をモニ ターするのに大変有用です。それぞれウイルス粒子にパッケー ジングされている製品と，プラスミド DNA として供給される 製品があります。 RSV グできます。 ◆ 各応答配列の制御下で発現するゼオシン耐性遺伝子を含み，ゼオシ ンによる分化マーカー発現細胞の薬剤選択が可能です。 ［メーカー：SBI］ プロモーター 標的細胞 生物種 Ψ ウイルス粒子＊ 1 − 80℃ M プラスミド 血球分化 B29 B 細胞 Human SR1004VA-1 1 vial / 98,000 SR1004PA-1 10μg / 255,000 HLA-DRa 赤血球 Human SR1007VA-1 1 vial / 93,000 SR1007PA-1 10μg / 255,000 LCK リンパ球 Human SR10032VA-1 1 vial / 93,000 SR10032PA-1 10μg / 255,000 CD2 全 T 細胞 Human SR1009VA-1 1 vial / 98,000 SR1009PA-1 10μg / 255,000 ACTC Human SR10049VA-1 1 vial / 98,000 SR10049PA-1 10μg / 255,000 ACTC2 Human SR10068VA-1 1 vial / 98,000 SR10068PA-1 10μg / 255,000 Human SR10067VA-1 1 vial / 98,000 SR10067PA-1 10μg / 255,000 MLC-2v Human SR10011VA-1 1 vial / 98,000 SR10011PA-1 10μg / 255,000 TNNT2 Human SR10012VA-1 1 vial / 98,000 SR10012PA-1 10μg / 255,000 アストロサイト Human SR10015VA-1 1 vial / 93,000 SR10015PA-1 10μg / 255,000 HIV 5' LTR Ampr 商品コード 包装 / 価格（￥） 幹細胞研究用製品 Pluripotency / Differentiation Transcriptional Reporter Lentivector ます。 ◆ 分化マーカー遺伝子の転写状態を copGFP の蛍光によりモニタリン 筋分化 pUC ori cPPT pGreenZeo lenti-reporter SV40 ORI SV40 Poly-A 分化細胞特異的 プロモーター 3'ΔLTR WPRE NKX2.5 心筋細胞 copGFP ZeoR T2A ■ Pluripotency Reporter Lentivector ◆ ES 細胞の多分化能維持に必須とされている遺伝子である Oct4, Nanog の発現を，copGFP または RFP の蛍光によりモニターでき ます。 ◆ pGreenZeo, pRedZeo, pRedTK の 3 種のレポーターベクターか ら選択できます。 神経分化 GFAP CD11b ミクログリア Human SR10017VA-1 1 vial / 98,000 SR10017PA-1 10μg / 255,000 Nestin 神経幹細胞 Human SR10035VA-1 1 vial / 98,000 SR10035PA-1 10μg / 255,000 BM88 Human SR10021VA-1 1 vial / 93,000 SR10021PA-1 10μg / 255,000 Doublecortin Human SR10041VA-1 1 vial / 98,000 SR10041PA-1 10μg / 255,000 FABP7 Human SR10048VA-1 1 vial / 98,000 SR10048PA-1 10μg / 255,000 MAP2 Human SR10047VA-1 1 vial / 98,000 SR10047PA-1 10μg / 255,000 Human SR10027VA-1 1 vial / 98,000 SR10027PA-1 10μg / 255,000 Human SR1003VA-1 1 vial / 93,000 SR1003PA-1 10μg / 255,000 Human SR1002VA-1 1 vial / 98,000 SR1002PA-1 10μg / 255,000 上皮細胞 Human SR10038VA-1 1 vial / 98,000 SR10038PA-1 10μg / 255,000 Insulin β細胞 Human SR10028VA-1 1 vial / 98,000 SR10028PA-1 10μg / 255,000 PDX1 島細胞 Human SR10039VA-1 1 vial / 98,000 SR10039PA-1 10μg / 255,000 ◆ Oct4 または Nanog プロモーターの制御下で発現するゼオシン耐性 遺伝子を含み，Oct4 または Nanog 発現細胞の薬剤選択が可能です。 また RFP レポーターベクターにはゼオシン耐性遺伝子の代わりにチ ミジンキナーゼ（TK）を組み込んだ製品があり，ガンシクロビルに よる Oct4 または Nanog 発現細胞の排除が行えます。 ［メーカー：SBI］ プロモーター 生物種 Human レポーター／ 薬剤選択遺伝子 copGFP / Zeo SR10033PA-1 10μg / 255,000 Osteocalcin RFP / Zeo SR10043VA-1 1 vial / 98,000 SR10043PA-1 10μg / 255,000 SPP1 RFP / TK SR10053VA-1 1 vial / 98,000 SR10053PA-1 10μg / 255,000 Keratin 14 copGFP / Zeo SR10029VA-1 1 vial / 93,000 SR10029PA-1 10μg / 255,000 RFP / Zeo SR10045VA-1 1 vial / 98,000 SR10045PA-1 10μg / 255,000 RFP / TK SR10054VA-1 1 vial / 98,000 SR10054PA-1 10μg / 255,000 copGFP / Zeo SR10030VA-1 1 vial / 93,000 SR10030PA-1 10μg / 255,000 RFP / Zeo SR10042VA-1 1 vial / 98,000 SR10042PA-1 10μg / 255,000 RFP / TK SR10055VA-1 1 vial / 98,000 SR10055PA-1 10μg / 255,000 copGFP / Zeo SR10031VA-1 1 vial / 98,000 SR10031PA-1 10μg / 255,000 RFP / Zeo SR10044VA-1 1 vial / 98,000 SR10044PA-1 10μg / 255,000 RFP / TK SR10056VA-1 1 vial / 98,000 SR10056PA-1 10μg / 255,000 Nanog Mouse 骨・脂肪・上皮分化 骨芽細胞 膵分化 ※ マウス，ラット用の製品も取り扱っています。詳細については，当 社テクニカルサポート（試薬担当：最終ページ参照）までお問い合 わせ下さい。 ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P14-18_k.indd 17 掲載されている製品はすべて研究用です。 Human プラスミド 視細胞 Opsin ウイルス粒子＊ 1 − 80℃ M SR10033VA-1 1 vial / 93,000 Oct4 Mouse 商品コード 包装 / 価格（￥） 神経細胞 17 2011/09/07 15:57:19 多能性細胞のアルカリホスファターゼ染色キット 多分化能解析用レポーターベクター 幹細胞研究用製品 pGreenFire Pluripotency Response Reporter Lentivector copGFP とルシフェラーゼを共発現するレンチウイルスベー スのベクターに，Oct4 の転写制御領域である CR4（Oct4 Conserved Region 4） ，または Sox2 の転写制御領域であ る SRR2（Sox2 Regulatory Region 2）をそれぞれ組み込 んだレポーターベクターです。 特 長 AP Staining Kit アルカリホスファターゼ（AP）は，ES 細胞や EG 細胞を含 むすべての多能性細胞に適用される多能性マーカーです。多能 性 状 態 で は，Nanog, Sox2, SSEA-1, SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60, TRA-1-81 などのステージ特異的な胚抗原と共 に，AP が高発現しています。 本製品は多能性細胞のAPを2時間以内で染色できるキットです。 ※本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。 特 長 ◆ ES 細胞の多分化能維持に必須とされている遺伝子である Oct4， Sox2 の発現を，copGFP の蛍光により検出できます。また，同時 にルシフェラーゼアッセイにより転写応答を定量的に評価すること もできます。 ◆ 赤（∼赤紫）と青の 2 色から選択できます。 ◆ Dual Staining Kit（#AP100D-1）には 2 色の試薬が含まれてい ます。単色のみのキットもあります。 ◆ 幹細胞の品質管理，細胞の分化，多能性状態の確認，in situ でのア ◆ レンチウイルスベクターは，初代培養細胞や非分裂細胞といったト ルカリホスファターゼ活性の測定などに利用できます。 ランスフェクションが困難な細胞を含む，ほぼすべての種類の細胞 各多能性細胞における発現マーカー に高効率で導入できます。 ◆ 選択マーカーとしてネオマイシンまたはピューロマイシン耐性遺伝 子が組み込まれた製品もあり，発現細胞の薬剤選択が可能です。 NdeⅠRSV Amp 5'LTR R Oct4 CR4 or Sox2 SRR2 Ψ Response Elements pGreenFire lenti-reporter pUC ori 細胞の種類 ES 細胞 EG 細胞 ES 細胞 EG 細胞 EC 細胞 mCMV BamHⅠ SV40 ORI SV40 Poly-A ES 細 胞（Embryonic stem cell） ，EG 細 胞（Embryonic germ cell） ，EC 細胞（Embryonic carcinoma cell）などに適用できます。 copGFP 動物種 AP ● ● ● ● ● マウス ヒト 多能性マーカー SSEA-1 SSEA-4 TRA-1-60 TRA-1-81 ● − − − ● − − − − ● ● ● ● ● ● ● − ● ● ● T2A peptide 3'ΔLTR WPRE 染色例 Luciferase Mark er EF1a 薬剤耐性遺伝子 Oct4 CR4 Sox2 SRR2 Blue Color Kit （#AP100B-1）を使用 Red Color Kit （#AP100R-1）を使用 本製品を用いてヒト iPS 細胞における Oct4 CR4 および Sox2 SRR2 を検出した。 写真右下の白矢印部分は分化した細胞。青または赤矢印の未分化の細胞のみ染色されてい る。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） 掲載されている製品はすべて研究用です。 Oct4 CR4, Plasmid, Response Reporter, pGreenFire SBI SR20070-PA-1 10μg / 255,000 SBI SR20070-PA-N 10μg / 255,000 with EF1-Neo SBI SR20070-PA-P 10μg / 255,000 with EF1-Puro Oct4 CR4, Packaged, Response Reporter, pGreenFire ＊ 1 SBI SR20070-VA-1 −80℃ M 1 vial / 103,000 Sox2 SRR2, Plasmid, Response Reporter, pGreenFire SBI SR20071-PA-1 10μg / 255,000 SBI SR20071-PA-N with EF1-Neo 10μg / 255,000 SBI SR20071-PA-P with EF1-Puro 10μg / 255,000 Sox2 SRR2, Packaged, Response Reporter, pGreenFire, with EF1-Puro ＊ 1 SBI SR20071-VA-P −80℃ M 1 vial / 98,000 ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 キット内容 キット構成品 Fixation solution（25 ml） Solution A Blue（10 ml） Solution B Blue（10 ml） Solution A Red（10 ml） Solution B Red（10 ml） #AP100B-1 ● ● ● − − #AP100R-1 ● − − ● ● #AP100D-1 ●（2 本） ● ● ● ● 品 名 メーカー 商品コード AP Staining Kit SBI AP100B-1 SBI AP100R-1 SBI AP100D-1 包装 / 価格（￥） Blue-Color (50 assays) Red-Color (50 assays) Dual-Color (100 assays) 1 kit / 1 kit / 1 kit / 30,000 30,000 50,000 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 18 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P14-18_k.indd 18 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:57:19 転写応答研究用製品 特 長 ◆ 生細胞における copGFP の蛍光により転写活性化を検出可能で，同 時にルシフェラーゼアッセイにより転写応答を定量的に評価するこ 転写制御解析用レポーターベクター ともできます。 pGreenFire Transcriptional Reporter Lentivector copGFP とルシフェラーゼを共発現するレンチウイルスベー スのレポーターベクターです。任意の転写応答配列をマルチク ローニングサイトに組み込むことができるベクターの他に，各 種の転写応答配列が既に組み込まれているベクターがありま す。それぞれウイルス粒子にパッケージングされている製品と， プラスミド DNA として供給される製品があります。 ◆ レンチウイルスベクターは，初代培養細胞や非分裂細胞といったト ランスフェクションが困難な細胞を含む，ほぼすべての種類の細胞 に高効率で導入できます。 ◆ 導入されたベクターは宿主細胞のゲノム DNA に組み込まれるため， エピジェネティック的な影響などをより正確に反映した転写制御解 析が期待できます。 ◆ mCMV プロモーターは転写応答配列がない状態では活性がほとんど なく，バックグラウンド発現は最小限に抑えられています。 ［メーカー：SBI］ 商品コード 包装 / 価格（￥） 転写応答配列 パスウェイ名 ウイルス粒子＊ 1 −80℃ M プラスミド ネオマイシン 耐性 ピューロマイシン 耐性 薬剤耐性 マーカーなし ネオマイシン 耐性 ピューロマイシン 耐性 ネガティブコントロール （mCMV プロモーター） TR010PA-1 10 μg / 82,000 TR010PA-N 10 μg / 86,000 TR010PA-P 10 μg / 86,000 TR010VA-1 1 vial / 103,000 TR010VA-N 1 vial / 108,000 TR010VA-P 1 vial / 108,000 − ポジティブコントロール （CMV プロモーター） TR011PA-1 10 μg / 82,000 − − TR011VA-1 1 vial / 93,000 − − C / EBP α C / EBP TR040PA-1 10 μg / 103,000 TR040PA-N 10 μg / 108,000 TR040PA-P 10 μg / 108,000 TR040VA-1 1 vial / 103,000 TR040VA-N 1 vial / 108,000 TR040VA-P 1 vial / 108,000 c-Jun Wnt TR033PA-1 10 μg / 103,000 TR033PA-N 10 μg / 108,000 TR033PA-P 10 μg / 108,000 TR033VA-1 1 vial / 103,000 TR033VA-N 1 vial / 108,000 TR033VA-P 1 vial / 108,000 GAL4 Yeast Reporter TR017PA-1 10 μg / 103,000 TR017PA-N 10 μg / 108,000 TR017PA-P 10 μg / 108,000 TR017VA-1 1 vial / 103,000 TR017VA-N 1 vial / 108,000 TR017VA-P 1 vial / 108,000 GAS IFN- γ TR027PA-1 10 μg / 103,000 TR027PA-N 10 μg / 108,000 TR027PA-P 10 μg / 108,000 TR027VA-1 1 vial / 103,000 TR027VA-N 1 vial / 108,000 TR027VA-P 1 vial / 108,000 HIF-1 Hypoxia TR026PA-1 10 μg / 103,000 TR026PA-N 10 μg / 103,000 TR026PA-P 10 μg / 103,000 TR026VA-1 1 vial / 103,000 TR026VA-N 1 vial / 108,000 TR026VA-P 1 vial / 103,000 ISRE Type Ⅰ Interferon TR016PA-1 10 μg / 103,000 TR016PA-N 10 μg / 108,000 TR016PA-P 10 μg / 108,000 TR016VA-1 1 vial / 103,000 TR016VA-N 1 vial / 108,000 TR016VA-P 1 vial / 108,000 MEF2 MEF2 TR030PA-1 10 μg / 103,000 TR030PA-N 10 μg / 108,000 TR030PA-P 10 μg / 108,000 TR030VA-1 1 vial / 103,000 TR030VA-N 1 vial / 108,000 TR030VA-P 1 vial / 108,000 Nanog Stem Cell TR019PA-1 10 μg / 103,000 TR019PA-N 10 μg / 108,000 TR019PA-P 10 μg / 108,000 TR019VA-1 1 vial / 103,000 TR019VA-N 1 vial / 108,000 TR019VA-P 1 vial / 108,000 NFAT PKC / Ca2+ TR034PA-1 10 μg / 103,000 TR034PA-N 10 μg / 108,000 TR034PA-P 10 μg / 108,000 TR034VA-1 1 vial / 103,000 TR034VA-N 1 vial / 108,000 TR034VA-P 1 vial / 108,000 NF κ B NF κ B TR012PA-1 10 μg / 103,000 TR012PA-N 10 μg / 108,000 TR012PA-P 10 μg / 103,000 TR012VA-1 1 vial / 103,000 TR012VA-N 1 vial / 103,000 TR012VA-P 1 vial / 103,000 Pax6 Oculogenesis TR031PA-1 10 μg / 103,000 TR031PA-N 10 μg / 108,000 TR031PA-P 10 μg / 108,000 TR031VA-1 1 vial / 103,000 TR031VA-N 1 vial / 108,000 TR031VA-P 1 vial / 108,000 PPAR γ Adipocyte Differentitation TR032PA-1 10 μg / 103,000 TR032PA-N 10 μg / 108,000 TR032PA-P 10 μg / 108,000 TR032VA-1 1 vial / 103,000 TR032VA-N 1 vial / 108,000 TR032VA-P 1 vial / 108,000 RARE Retinoic Acid Receptor TR037PA-1 10 μg / 103,000 TR037PA-N 10 μg / 108,000 TR037PA-P 10 μg / 108,000 TR037VA-1 1 vial / 103,000 TR037VA-N 1 vial / 108,000 TR037VA-P 1 vial / 108,000 RBP-Jk Notch TR020PA-1 10 μg / 93,000 TR020PA-N 10 μg / 108,000 TR020PA-P 10 μg / 108,000 TR020VA-1 1 vial / 103,000 TR020VA-N 1 vial / 108,000 TR020VA-P 1 vial / 108,000 SP1 SP1 TR036PA-1 10 μg / 103,000 TR036PA-N 10 μg / 108,000 TR036PA-P 10 μg / 108,000 TR036VA-1 1 vial / 103,000 TR036VA-N 1 vial / 108,000 TR036VA-P 1 vial / 108,000 SREBP Sterol Response TR028PA-1 10 μg / 103,000 TR028PA-N 10 μg / 108,000 TR028PA-P 10 μg / 108,000 TR028VA-1 1 vial / 103,000 TR028VA-N 1 vial / 108,000 TR028VA-P 1 vial / 108,000 SRF MAPK / ERK TR029PA-1 10 μg / 103,000 TR029PA-N 10 μg / 108,000 TR029PA-P 10 μg / 108,000 TR029VA-1 1 vial / 103,000 TR029VA-N 1 vial / 108,000 TR029VA-P 1 vial / 108,000 STAT1 IFN- γ TR015PA-1 10 μg / 103,000 TR015PA-N 10 μg / 108,000 TR015PA-P 10 μg / 108,000 TR015VA-1 1 vial / 103,000 TR015VA-N 1 vial / 108,000 TR015VA-P 1 vial / 103,000 TCF / LEF1 Wnt TR013PA-1 10 μg / 103,000 TR013PA-N 10 μg / 108,000 TR013PA-P 10 μg / 108,000 TR013VA-1 1 vial / 103,000 TR013VA-N 1 vial / 108,000 TR013VA-P 1 vial / 108,000 ※ NF κ B 転写応答配列と GFP または GFP・Luciferase 融合タンパ ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 ク質の配列を細胞に導入した細胞株については，p.22 をご覧下さい。 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P19-22_k.indd 19 掲載されている製品はすべて研究用です。 − 転写応答研究用製品 薬剤耐性 マーカーなし 19 2011/09/07 9:30:53 RSV Sample Luciferase data 5'LTR Ψ AmpR cPPT ClaⅠ EcoRⅠ XbaⅠ SpeⅠ mCMV pGreenFire lenti-reporter pUC ori Multiple Cloning Site for TRE BamHⅠ SV40 ORI copGFP SV40 Poly-A ルシフェラーゼ活性（×1,000） NdeⅠ 3,000 2,000 1,000 T2A peptide 3'ΔLTR WPRE Control Luciferase 1μM 5μM 10μM Nutilin 濃度 10 ng/ml TNF-α 100 ng/ml TNF-α 3,500 3,000 2,500 2,000 1,500 1,000 500 0 Control pGF1-NFκB 4.0×105 pGF1-mCMV 3.0×105 2.0×105 1.0×105 0 0 1 10 TNF-α 濃度（ng/ml） 100 ルシフェラーゼによる転写活性化の定量 NFκB 転写応答配列を含むベクター（青，#TR012VA-1） ，または含まないコントロー ルベクター（赤，#TR010VA-1）を 293TN 細胞に導入した。2 日後に細胞を継代し， 図に示した濃度の TNF-αを添加し，18 時間後にルシフェラーゼアッセイを行った。 ルシフェラーゼ活性（×1,000） 5.0×105 ルシフェラーゼ活性 転写応答研究用製品 copGFP による転写活性化のモニタリング NFκB 転写応答配列を含むベクター（#TR012VA-1）を 293TN 細胞に導入した。2 日後に細胞を継代し，図に示した濃度の TNF-αを添加し，18 時間後に蛍光顕微鏡で観 察した。 EGR1 Reporter ルシフェラーゼ活性（×1,000） 1 ng/ml TNF-α AP1 Reporter 4,000 CREB Reporter 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 Control 300 250 200 150 100 50 0 PMA 添加 ルシフェラーゼ活性（×1,000） 0 ng/ml TNF-α ルシフェラーゼ活性（×1,000） p53 転写応答配列を含むベクターを導入した HT1080 細胞株に，図で示した濃度の Nutilin を添加し，蛍光顕微鏡での観察（左下）およびルシフェラーゼアッセイ（上）を行っ た。 Control PMA 添加 SMAD2/3/4 Reporter 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Control ＴＧＦ-β3 添加 PMA 添加 図中で示した各レポーターベクターを細胞に導入し，PMA または TGF-β3 で処理後， ルシフェラーゼアッセイを行った。 ［メーカー：SBI］ ■ 癌関連転写因子解析用製品 癌関連パスウェイの転写因子応答配列を組み込んだレポーターベク ターです。 転写 応答 パスウェイ名 配列 E MAPK / JNK TR201VA-P 1 vial / 108,000 TR201A-P 1 vial / 469,000 CREB cAMP / PKA TR202PA-P 10 μg / 108,000 TR202VA-P 1 vial / 108,000 TR202A-P 1 vial / 469,000 EGR1 TR204PA-P 10 μg / 108,000 TR204VA-P 1 vial / 108,000 TR204A-P 1 vial / 469,000 AP1 p53-pGF Reporter (HT1080 cell line) 細胞株 TR201PA-P 10 μg / 108,000 レポーターベクターが細胞に安定的に組み込まれた細胞株もあります （p53 のみ HT1080 細胞，その他は 293 細胞に組み込み） 。 プラスミド 商品コード 包装 / 価格（￥） ウイルス粒子＊ 1 −80℃ M p53 p53 / DNA 修復 TR200PA-P 10 μg / 108,000 TR200VA-P 1 vial / 108,000 TR200A-P 1 vial / 469,000 SMAD 2/3/4 TGF- β TR203PA-P 10 μg / 108,000 TR203VA-P 1 vial / 108,000 TR203A-P 1 vial / 469,000 ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 掲載されている製品はすべて研究用です。 0μM 10μM ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 Nutilin 濃度 20 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P19-22_k.indd 20 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 9:30:54 copGFP とルシフェラーゼが組み込まれたレンチウイルスベースのレ ポーターベクターです。コレステロール流出メカニズムの解明や，標的 遺伝子特異的な LXR アゴニストの開発などに有用です。それぞれウイ 600 RLU (x1,000) コレステロール代謝に関わる遺伝子群の発現制御領域の下流に， ルス粒子にパッケージングされている製品，プラスミド DNA として供 SREBP-1c（#TR100） 300 100 0 給される製品，および各レポーターベクターが安定的に組み込まれた HepG2 細胞株の製品があります。 200 RLU (x1,000) ■ 脂質代謝遺伝子の発現解析用 100 40 0 0 nM 5 nM 50 nM TO-901317 濃度 CETP（#TR109） RLU (x1,000) 34 200 100 0 0 nM 5 nM 1μM TO-901317 濃度 Cyp7A1（#TR105） 350 RLU (x1,000) コレステロール代謝経路における LXR の重要性 LXRα （#TR102） 0 nM 5 nM 50 nM 1μM TO-901317 濃度 26 18 10 0 nM 5 nM TO-901317 濃度 図中に示した各レポーターベクターについて，導入された細胞を TO-901317 で処理し， ルシフェラーゼアッセイを行った。アゴニストの濃度依存的に，ルシフェラーゼ活性が上 昇している。 生体内において脂質の恒常性を維持する上で，特に重要な役割を果た 標的であるコレステロール制御遺伝子のプロモーター領域に含まれる LXR 応答配列に結合します。LXR 応答配列は 6 つの塩基が 4 塩基を挟 んで 2 回繰り返された配列をしており，コレステロール生成，輸送，代 商品コード 包装 / 価格（￥） 転写応答配列 プラスミド ウイルス粒子＊ 1 − 80℃ M HepG2 細胞株 E 謝などに関与する遺伝子群のプロモーター領域で見られます。LXR は， LXRE in ABCA1 末梢組織からのコレステロール流出を促進することによる，生体内にお ける正常なコレステロールバランスの維持など，コレステロール代謝に TR106PA-P 10 μl /103,000 TR106VA-P 1 vial /103,000 TR106A-P 1 vial /469,000 LXRE in ABCG1 TR107PA-P 10 μl /103,000 TR107VA-P 1 vial /103,000 TR107A-P 1 vial /469,000 LXRE in ApoA1 TR104PA-P 10 μl /103,000 TR104VA-P 1 vial /103,000 TR104A-P 1 vial /469,000 LXRE in ApoE TR108PA-P 10 μl /103,000 TR108VA-P 1 vial /103,000 TR108A-P 1 vial /469,000 LXRE in CETP TR109PA-P 10 μl /103,000 TR109VA-P 1 vial /103,000 TR109A-P 1 vial /469,000 LXRE in Cyp7A1 TR105PA-P 10 μl /103,000 TR105VA-P 1 vial /103,000 TR105A-P 1 vial /469,000 LXRE in LXR α TR102PA-P 10 μl /103,000 TR102VA-P 1 vial /103,000 TR102A-P 1 vial /469,000 LXRE in SREBP1c TR100PA-P 10 μl /103,000 TR100VA-P 1 vial /103,000 TR100A-P 1 vial /469,000 PPRE TR101PA-P 10 μl /103,000 TR101VA-P 1 vial /103,000 TR101A-P 1 vial /469,000 おける重要なセンサーとしての働きが示唆されています。 未処理 TO-901317（10μM）処理 転写応答研究用製品 ［メーカー：SBI］ しているのが，LXR（Liver X Receptor）と呼ばれる核内レセプター です。LXR は RXR （Retinoid X Receptor）とヘテロダイマーを形成し， ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 ABCA1（#TR106）レポーターベクターを導入した HepG2 細胞株を，LXR アゴニス トである TO-901317 で処理すると，レポーター遺伝子 GFP の発現が誘導される（右 下段右側）。右上段は未処理のコントロール。左側は同一視野の位相差像。 掲載されている製品はすべて研究用です。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P19-22_k.indd 21 21 2011/09/07 9:31:14 転写レポーター細胞株 Transcriptional Reporter Cell Line 転 写 因 子 NF κ B の 応 答 配 列 と GFP ま た は GFP・ Luciferase 融合タンパク質の配列を HIV ベースのレンチウイ ルスベクターにより導入した細胞株です。 特 長 ◆ NF κ B パスウェイの活性化により，GFP の発現が約 30 倍に増強 されます。そのため，蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーで検出可 能です。 ◆ NF κ B パ ス ウ ェ イ の 亢 進・ 阻 害 物 質 の 同 定 に 最 適 で す。 ま た， GeneNet siRNA Library（p.33 参照）を用いた，NFκB パスウェ miRNA 研究用製品 miRNA 発現のプロファイリング miRNA の検出・定量用一本鎖 cDNA 合成キット QuantiMir RT Kit Small RNA Quantitation System small RNA の検出および定量に使用する一本鎖 cDNA を合 成するキットです。全 RNA を試料として poly(A) を付加した 後，逆転写反応により cDNA を合成します。合成した cDNA はリアルタイム PCR および通常の PCR に使用できます。 イを亢進・阻害する siRNA の同定にも最適です。 ◆ GFP・Luciferase 融合タンパク質の配列を 293 細胞に導入した製 特 長 品と，GFP の配列を Jurkat 細胞に導入した製品があります。 ◆ 200 pg ∼ 1 μg の全 RNA から cDNA を調製できます。 A ◆ 全 RNA から small RNA を精製する必要はありません。 6,000 ◆ キットには，ヒト U6 および miR-16 に対するコントロールプライ GFP 蛍光強度 転写応答研究用製品 5,000 マーが含まれています。 4,000 操作方法概略 3,000 2,000 miRNA / siRNA 200 pg ∼ 1μg 全 RNA 1,000 0 0 2 4 6 8 TNF-α濃度（ng/ml） 10 12 miRNA / siRNA poly（A）polymerase . poly（A）の付加 B インキュベート（37℃，30 分） . アダプターの アニーリング oligo dT アダプターとアニーリング（60℃，5 分） . cDNA の合成 逆転写反応（42℃，60 分） 研究用製品 miRNA cDNA A） Jurkat / NF κ B / GFP Reporter Cell Line に TNF-α を添加して，24 時間後に 蛍光強度を測定した。 B） 同様に蛍光顕微鏡で撮影した。 NF κ B レポーターの構造 NFκB パスウェ イが不活性の場 合，最 小 CMV プロモーターも 不活性化されて いる . リアルタイム PCR または通常の PCR による検出・定量 キット内容 NFκB 応答配列 NFκB パスウェイの活性化 ● Poly A polymerase ● ATP ● Oligo dT adaptor ● Buffers ● Reverse transcriptase ● MnCl2 ● dNTP mix ● DTT ● RNase-free water NFκB パスウェ イが活性化され る と，最 小 CMV プ ロ モ ー ターも活性化さ れる ● 3' universal reverse PCR primer ● 5' human U6 control forward primer NFκB 応答配列 ● 5' human miR-16 control forward primer 掲載されている製品はすべて研究用です。 ※ 得られた cDNA から PCR を行う際には，目的の small RNA に対 品 名 するプライマーを別途用意する必要があります。 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） 293/NF κ B/GFP-Luc Transcriptional Reporter Cell Line SBI TR860A-1 E 1 vial / 469,000 細胞数：∼ 2 × 106 cells Jurkat/NF κ B/GFP Transcriptional Reporter Cell Line SBI TR850A-1 E 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Small RNA Quantitation System, QuantiMir RT Kit (20 reactions) SBI RA420A-1 1 kit / 80,000 1 vial / 554,000 細胞数：∼ 2 × 106 cells 22 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P19-22_k.indd 22 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 9:31:21 ■ QuantiMir Assay Primer QuantiMir RT Kit Small RNA Quantitation System で調製した 操作方法概略 cDNA を用いて，PCR を行う際のコントロール用プライマーです。 total RNA 3' Universal Reverse PCR Primer と組み合わせて使用して下さ い。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） miR-16, Assay Primer, QuantiMir (50 assays) SBI RA420A-miR-16 U6, Assay Primer, QuantiMir (50 assays) SBI RA420A-hU6 Human SBI RA420A-mU6 Mouse SBI RA420A-rU6 Rat RNU1, Assay Primer, QuantiMir (50 assays) SBI RA420A-RNU1 1 vial / 15,000 1 vial / 1 vial / 1 vial / 15,000 15,000 15,000 1 vial / 15,000 Human, Mouse, Rat, Monkey 試料で使用可能。 RNU43, Assay Primer, QuantiMir (50 assays) SBI RA420A-RNU43 1 vial / . small RNA への poly（A） の付加 インキュベート （37℃, 30 min） . アダプターのアニーリング oligo-dT アダプターと アニーリング（60℃, 5 min） . cDNA の合成 逆転写反応（42℃, 60 min） 15,000 Human, Mouse, Rat 試料で使用可能。 3' Universal Reverse PCR Primer, QuantiMir (10000 qPCR reactions) SBI RA420AU-3 1 vial / 18,000 . リアルタイム PCR による 検出 リアルタイム PCR で miRNA を定量解析できるキット MicroRNA qPCR Array with QuantiMir リアルタイム PCR で miRNA を定量解析できるキットです。 cDNA の調製用試薬およびプライマーセットが含まれており， バイオマーカーとしての miRNA 同定および miRNA 発現パ ターン解析に有用です。 Specific Forward Primer ■ Cancer microRNA qPCR Array with QuantiMir 癌化，分化，アポトーシスなどに関わると考えられている 95 種類の miRNA を一度にリアルタイム PCR で定量できます。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Cancer microRNA qPCR Array, with QuantiMir SBI RA610A-1 1 kit / 150,000 ■ Stem Cell microRNA qPCR Array with QuantiMir 幹細胞の自己複製，造血系，神経発生，分化特異性などに関わると考 特 長 えられている 95 種類の miRNA を一度にリアルタイム PCR で定量で ◆ Poly（A）を付加し，すべての small RNA の cDNA を合成します。 ◆ ピコグラムレベル（Cancer / Stem Cell Array）または 400 ng （miRNome Profiler）の全 RNA を出発試料＊ 2 として，高感度かつ 定量的に miRNA を解析できます。 きます。 Lymph Node 1000 Normal Tumor 100 Colon ◆ コントロールとして U6 snRNA（Cancer / Stem Cell Array）ま 10 Breast Ovary Lung 研究用製品 miRNA たは U6, RNU43, U1（miRNome Profiler）に対応するプライマー Log ΔCt ◆ 様々な細胞や組織試料のハイスループットスクリーニングに有用です。 1 ◆ 検出できる microRNA の詳細およびデータ解析に便利なソフトウェ ア は，System Biosciences 社 ホ ー ム ペ ー ジ（http://www. systembio.com/）の各製品の『Technical Details』からダウンロー ドできます。 miR-92 各癌組織および正常組織における miRNA の発現 品 名 メーカー 商品コード Stem Cell microRNA qPCR Array, with QuantiMir SBI RA620A-1 ＊ 2 small RNA 画分を含む全 RNA を使用して下さい。 miR-20a miR-18a miR-17-3p miR-7 miR-145 miR-125b miR-125b 0.01 の試薬が含まれています。 miR-9-1 0.1 Cell Array）または 20 回（miRNome Profiler）行うのに十分な量 miR-155 が含まれています。 ◆ キ ッ ト に は cDNA 合 成 お よ び PCR を 10 回（Cancer / Stem 包装 / 価格（￥） 1 kit / 150,000 ■ QuantiMir miRNome MicroRNA Profiler キット内容 最新の Sanger's miRBase (http://www.mirbase.org/）に登録さ ● DTT ● dNTP mix ● Poly A polymerase buffer ● MnCl2 ● ATP ● Reverse transcriptase ● 3' oligo dT adaptor ● Reverse transcriptase buffer ● RNase-free water ● 3' universal reverse PCR primer ● 5' microRNA specific forward primer（Cancer / Stem Cell Array のみ） ● MicroRNA assay + three controls（miRNome Profiler のみ） ® ※ 本製品には Taq ポリメラーゼ，SYBR Green qPCR Mastermix は含まれていません。Power SYBR® Master Mix（Life Technologies 社） ，SYBR® GreenER qPCR SuperMix for ABI PRISM instrument （Life Technologies 社），または RT2 Real-Time SYBR® Green / 390 種類の miRNA 発現量を，リアルタイム PCR により一度にプロ ファイリングできる 384 ウェルフォーマットのキットです。すべての スターフォーム＊ 3 を含む miRNA を一度に発現解析できます。 ＊ 3 2 種類の成熟 miRNA が同一の前駆体に由来する場合に，主に合成され る miRNA とは反対側の配列より生じる miRNA をスターフォームと し，ID にスター（＊）を付加して区別しています。 品 名 メーカー 商品コード microRNA Profiler, miRNome, QuantiMir SBI RA660A-1 Human SBI RA670A-1 Mouse SBI RA680A-1 Rat 包装 / 価格（￥） 1 kit / 255,000 1 kit / 236,000 1 kit / 165,000 掲載されている製品はすべて研究用です。 ● Poly A polymerase れているヒト約 1,110 種類，マウス約 710 種類，またはラット約 ROX PCR（SuperArray 社）のご使用をお勧めします。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P23-32_k.indd 23 23 2011/09/07 15:58:18 Anti-CD63 Anti-CD9 （26 kDa）（25 kDa） エキソソーム濃縮／エキソソーム中の miRNA 解析 kDa MW Sup EXO Sup EXO MW Sup EXO 55 エキソソーム濃縮用試薬 35 ExoQuick Exosome Precipitation Solution mer 27 300 200 15 血清，腹水などの体液試料や細胞培養液から，高純度かつ高 収量のエキソソームを簡便に，濃縮できる試薬です。 血清，腹水試料用の ExoQuick と，尿，髄液や細胞培養液 試料用の ExoQuick-TC があります。 ※本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。 100 ExoQuick を用いてヒト血清から単離したエキソソーム画分（EXO）と上清画分（Sup） のタンパク質および RNA を解析した。 左：各画分を電気泳動後，エキソソームのバイオマーカーである CD63 および CD9 を ウエスタンブロッティングで検出した。 右：各画分から RNA を精製後，15％ポリアクリルアミド RNA 用ゲルで電気泳動し， SYBR® Green で RNA を検出した。 ［FU］ 30 ExoQuick で濃縮 エキソソームとは small RNA: 16,660.5 pg/μl miRNA: 8,904.1 pg/μl 25 Ratio: 53％ 20 15 10 5 miRNA 0 25 ［FU］ 30 35 50 ◆ 本 製 品 で 濃 縮 し た エ キ ソ ソ ー ム か ら 精 製 し た miRNA は， MicroRNA qPCR Array with QuantiMir（ 前 ペ ー ジ 参 照 ） や， SeraMir Exosome RNA Amplification Kit（次ページ参照）によ ンパク質は，電気泳動などによる解析に有用です。 65 ［S］ miRNA 25 20 30 35 40 45 50 55 60 65 ［S］ small RNA: 11,116.0 pg/μl miRNA: 5,255.4 pg/μl Ratio: 47％ 15 10 5 miRNA 0 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ［S］ ヒト卵巣癌患者の腹水を ExoQuick または抗体結合磁気ビーズで濃縮したものおよび， 濃縮前のものから RNA を精製し，Bioanalyzer（Agilent 社）で解析した。 データ提供：Dr. Douglas Taylor, Louisville 大学，KY 操作方法概略 える（下表参照）。 3. 4℃で静置する（下表参照）。 1.74×109 個 /ml 粒径（nm） 3.33×108 個 /ml 粒径（nm） ヒト尿 濃度（×109 個 /ml） する。 2. 上清を滅菌チューブに移し，ExoQuick または ExoQuick-TC を加 HEK293 細胞の培養液 濃度（×108 個 /ml） HT1080 細胞の培養液 1. 試料を 3,000 × g で 15 分間遠心分離し，更に細胞や細胞破片を除去 濃度（×109 個 /ml） 研究用製品 miRNA る正確な miRNA プロファイリングに有用です。また，抽出したタ 60 10 ［FU］ 30 抗体結合磁気ビーズで濃縮 簡便かつ効率的に単離できます。 55 20 25 ◆ 超遠心，抗体結合磁気ビーズ，クロマトグラムを用いた従来法よりも， 50 30 特 長 を濃縮することが可能です。 45 40 0 ◆ ExoQuick は，わずか 250 μl の血清や腹水試料から，エキソソーム 40 small RNA: 5,297.3 pg/μl miRNA: 1,119.5 pg/μl Ratio: 21％ 60 未濃縮の腹水 エキソソームは生体内および培養細胞 から分泌される 40 ∼ 100 nm の膜小 胞で，血液，尿，羊水，腹水などの体液 や細胞培養液中に存在します。 エキソソーム中に含まれる miRNA や タンパク質は，分泌する細胞の種類や生 理条件により異なります。そのため，エ キソソーム中の miRNA やタンパク質の ExoQuick を用いて血清から単離し 分析は，各種疾患に関与する新たなバイ たエキソソームの電子顕微鏡写真。 オマーカーの探索に有用です。 エ キ ソ ソ ー ム 中 の miRNA や タ ン パ ク 質 の 詳 細 に つ い て は， ExoCarta データベース（http://exocarta.ludwig.edu.au/）をご覧 下さい（次ページ参照）。 small RNA 4.80×109 個 /ml 粒径（nm） 4. 1,500 × g で 30 分間遠心分離すると，エキソソームが薄黄色∼白 色のペレットとして沈殿する。上清を吸引除去する。 5. 再度，1,500 × g で 5 分間遠心分離後，残った上清を吸引除去する。 6. 滅菌蒸留水を加えて，エキソソームを溶解させる。 40 倍希釈 ExoQuick の添加量 掲載されている製品はすべて研究用です。 試料の種類 血 清 腹 水 試料量 250 μl 250 μl ExoQuick の添加量 63 μl 63 μl 静置時間 30 分間 一晩（12 時間以上） ※血漿を試料に用いることはお勧めしません。血漿では，フィブリン・ フィブリノーゲンにより沈殿の溶解が困難になります。 ExoQuick-TC の添加量 試料の種類 尿 髄 液 細胞培養液 24 試料量 5 ml 5 ml 5 ml ExoQuick-TC の添加量 1 ml 1 ml 1 ml 未希釈 品 名 メーカー 商品コード Exosome Precipitation Solution, ExoQuick SBI EXOQ5A-1 75 reactions SBI EXOQ20A-1 300 reactions 包装 / 価格（￥） 5 ml / 48,000 20 ml / 155,000 血清，腹水からエキソソームを濃縮する試薬。 静置時間 6 時間 ∼ 一晩 6 時間 ∼ 一晩 6 時間 ∼ 一晩 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P23-32_k.indd 24 未希釈 ExoQuick-TC を用いて，ヒト由来細胞の培養液およびヒト尿試料からエキソソームを濃 縮した。得られたエキソソームについて，NanoSight LM10（NanoSight 社）を用い て粒径の分布と濃度を測定した。 Exosome Precipitation Solution, ExoQuick-TC SBI EXOTC50A-1 50 reactions 50 ml / ご照会下さい 尿，髄液，細胞培養液からエキソソームを濃縮する試薬。 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:58:22 エキソソーム miRNA の精製・cDNA 合成キット キット内容 SeraMir Exosome RNA Amplification Kit ● ExoQuick ● PolyA polymerase ● Lysis buffer ● SeraMir 3' adaptor oligo ● Wash buffer ● 5' switch oligo 血清試料に含まれるエキソソーム中の miRNA から，定量的 RT-PCR 用の一本鎖 cDNA および T7 in vitro 転写用の二本 鎖 cDNA を合成できるキットです。血清試料からエキソソー ムを分離し，これよりエキソソーム RNA（exoRNA）をスピ ン カ ラ ム に よ り 精 製 し た 後， 両 端 に タ グ を 付 加 し， 定 量 的 PCR 用および in vitro 転写用の cDNA を合成します。 ● Elution buffer ● SeraMir RT mix ● SeraMir RNA column ● SeraMir reverse transcriptase ● PolyA buffer ● SeraMir Taq PCR mix ● MnCl2 solution ● SeraMir PCR amplification primer mix ● ATP solution ● 3' SeraMir reverse qPCR primer ※本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。 メーカー 商品コード Exosome RNA Amplification Kit, SeraMir (20 reactions) SBI RA800A-1 特 長 ◆ エキソソーム濃縮沈殿用試薬 ExoQuick（前ページ参照）を使用して， 血清から効率的かつ簡便にエキソソームを分離できます。 ◆ フェノールを含まない溶解バッファーとスピンカラムを使用した精 製法により，従来のフェノールを使用する方法よりも高純度の small RNA を単離することができます。 ◆ RNA リガーゼを使用しないため，アダプター配列の重複結合による アーティファクトが生じません。 1 kit / 127,000 ■ 関連製品 Exosome RNA Purification Kit, SeraMir (20 preps) SBI RA806A-1 1 kit / 75,000 血清試料よりエキソソームを濃縮沈殿し，エキソソーム RNA をスピンカラムで精製するキッ ト。キット内容：ExoQuick（5 ml），SeraMir RNA column（20 個） Control Spike-In Small RNA and qPCR Assay, SeraMir (100 assays) SBI RA805A-1 1 kit / 28,000 エキソソーム RNA を精製する際に試料中に加えることにより，エキソソーム RNA の回収率 キット内容：Control spike-in small RNA, Control spike-in small RNA qPCR assay, 3’SeraMir reverse qPCR primer 代シークエンスによる解析に使用できます。 ◆ 別売品として，exoRNA 回収率や cDNA 合成効率のコントロールに 使 用 で き る small RNA と プ ラ イ マ ー の セ ッ ト（#RA805A-1） ， 380 種類の miRNA の発現量をプロファイリングできるセット（ヒ ト用：#RA810A-1，マウス用：#RA811A-1）があります。また， すべてをセットにした Complete Kit（ヒト用：#RA820A-1，マ ウス用：#RA821A-1）もあります。 Exosome RNA 384 microRNA qPCR Profiler Assay Set, Human, SeraMir (20 profiles) SBI RA810A-1 1 kit / 71,000 SeraMir Exosome RNA Amplification Kit でタグを付加したエキソソーム RNA 試料に ついて，380 種類のヒト miRNA の発現量を定量的 PCR によりプロファイリングできるプ ライマーセット。キット内容：384 well SeraMir profiler, 3’SeraMir reverse qPCR primer Exosome RNA 384 microRNA qPCR Profiler Assay Set, Mouse, SeraMir (20 profiles) SBI RA811A-1 1 kit / 71,000 操作方法概略 SeraMir Exosome RNA Amplification Kit でタグを付加したエキソソーム RNA 試料に エキソソーム ついて，380 種類のマウス miRNA の発現量を定量的 PCR によりプロファイリングできる プライマーセット。キット内容：384 well SeraMir profiler, 3’SeraMir reverse qPCR 5’VVVVVVVVVVVVV3’ 5’VVVVVVVVVVVVV3’ primer 5’VVVVVVVVVVVVV3’ 5’switch アダプター 3’ ’アダプター #RA800A-1, #RA805A-1, #RA810A-1 をセットにした，定量的 RT-PCR によるヒト 5’ 5’VVVVVVVVVVVVV AAAAAAAAAA エキソソーム RNA のプロファイリングキット。 Exosome RNA Amplification and Profiling Complete Kit, Mouse, SeraMir (20 profiles) SBI RA821A-1 1 kit / 183,000 GGG3’ 5’switch + タグ 5’VVVVVVVVVVVVV AAAAAAAAAA G GG C CC 5’ 3’ CCC 3’ ’アダプター スエキソソーム RNA のプロファイリングキット。 逆転写酵素 5’ ExoCarta 5’ アダプター プライマー T7 3’ CCC T7 5’ 3’ 5’ 3’ ’アダプター プライマー polymerase 二本鎖cDNA （T7 転写へ） GGG CCC #RA800A-1, #RA805A-1, #RA811A-1 をセットにした，定量的 RT-PCR によるマウ 3’ 5’ エキソソーム中で存在が確認された miRNA，mRNA，タンパク質に ついてまとめたデータベースです。エキソソーム分泌細胞の種類，検出 方法などの情報とともに，記載された文献へのリンクが張られています。 目的物（miRNA，mRNA，タンパク質），動物種，試料名，遺伝子名 でブラウズすることができます。また，mRNA，タンパク質については， 遺伝子名，タンパク質名で検索することができます。 掲載されている製品はすべて研究用です。 血清試料から本製品（左）またはフェノールを使用した従来法（右）により RNA を調製し， 380 種類のヒト miRNA について発現プロファイリングを行った。本製品を使用した例 では，より理想的な結果が得られている。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P23-32_k.indd 25 研究用製品 miRNA poly（A）polymerase Exosome RNA Amplification and Profiling Complete Kit, Human, SeraMir (20 profiles) SBI RA820A-1 1 kit / 183,000 AAAAAAAAAA . poly（A）の付加 一本鎖cDNA （定量的PCRへ） 包装 / 価格（￥） や cDNA 合成効率のコントロールとして使用できる small RNA およびプライマーのセット。 ◆ T7 in vitro 転写により増幅した exoRNA はマイクロアレイや次世 . 逆転写 品 名 25 2011/09/07 15:58:32 small RNA の濃縮／クローニング miRNA 濃縮の原理 HA タグを付加したプロセシング因子を過剰発現させ，各プロセシン miRNA プロセシング因子発現ベクター グ段階の miRNA や標的 mRNA を選択的に濃縮できます。 miR-SNaREs . miR-SNaRE ベクターの導入 ※必要に応じて，miRNA 発現ベ クターの導入 HA タグを付加した各種 miRNA プロセシング因子の発現ベ クターです。本ベクターにより細胞内で miRNA プロセシング 因子を過剰発現させ，結合した miRNA や関連因子を抗 HA 抗 体を使用した共免疫沈降により，分離・濃縮することができま す。ヒトの AGO1，2，4，DGCR8，DICER，およびマウス の AGO1 ∼ 4 を発現するベクターがラインナップされていま す。 . miRNA プロセシング因子／ RNA 複合体の共免疫沈降 特 長 ◆ 発現量の少ない miRNA の探索，新規 miRNA プロセシング因子の 同定，miRNA の標的同定のための RISC 結合 mRNA の濃縮など， 各種 miRNA 解析に有用です。 ◆ N 末端に HA タグが付加された miRNA プロセシング因子を過剰発 現させ，miRNA との複合体を共免疫沈降できます。 ◆ 各因子は EF1 αプロモーターの制御下により，哺乳動物細胞内で安 新規 miRNA の探索 および miRNA 解析 定的に発現されます。 ◆ マーカー遺伝子は，蛍光タンパク質 RFP 遺伝子またはピューロマイ シン耐性遺伝子より選択できます。 子が発現されることが確かめられています。 ◆ レンチウイルスベースのベクターにより，導入が困難とされている 安定的に発現する細胞株の樹立も可能です。 Fluor pHA-hAGO2-RFP メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） pHA-hAGO1, Human, miR-SNaREs SBI RA704A-1 Puro SBI RA704B-1 RFP pHA-hAGO2, Human, miR-SNaREs SBI RA703A-1 Puro SBI RA703B-1 RFP pHA-hAGO4, Human, miR-SNaREs SBI RA705A-1 Puro SBI RA705B-1 RFP pHA-hDGCR8, Human, miR-SNaREs SBI RA701A-1 Puro SBI RA701B-1 RFP pHA-hDICER, Human, miR-SNaREs SBI RA702A-1 Puro SBI RA702B-1 RFP 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 品 名 メーカー 商品コード 掲載されている製品はすべて研究用です。 図中に示されている RFP 共発現ベクターを HEK293 細胞に導入し，48 時間後に蛍光 顕微鏡により観察し，各 miRNA プロセシング因子の発現を確認した。（上段）蛍光顕微 鏡像。（下段）同一視野の位相差像。 それぞれの miRNA プロセ シング因子発現ベクターを 導入した 293TN 細胞のラ イセートを用い，抗 HA タ グ抗体によるウエスタンブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り， miRNA プロセシング因子 の発現を確認した。Puro， RFP は，ベクター中のマー カーを示す。 26 ■ Human ■ Mouse Phase 研究用製品 miRNA 種の細胞にも確実に導入できます。 ◆ ピューロマイシン耐性遺伝子を含む発現ベクターにより，各因子を pHA-hDICER-RFP miRNA の標的の同定 および解析 品 名 ◆ 各因子の塩基配列は十分に確認されており，またベクターから各因 pHA-hDGCR8-RFP 新規 miRNA プロセシング因子の同定 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P23-32_k.indd 26 pHA-mAGO1, Mouse, SBI RA801A-1 SBI RA801B-1 pHA-mAGO2, Mouse, SBI RA802A-1 SBI RA802B-1 pHA-mAGO3, Mouse, SBI RA803A-1 SBI RA803B-1 pHA-mAGO4, Mouse, SBI RA804A-1 SBI RA804B-1 包装 / 価格（￥） miR-SNaREs Puro RFP miR-SNaREs Puro RFP miR-SNaREs Puro RFP miR-SNaREs Puro RFP 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:58:41 ■ miRNA プロセシング因子発現細胞（Human） 品 名 miRNA プロセシング因子を恒常的に発現する 293 細胞および，HA タグを恒常的に発現するコントロール用の 293 細胞です。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） AGO2, Human/HA-tag Expressing-293 Recombinant Cell Line, Puro Resistant SBI RA703C-1 1 vial / 347,000 E 6 細胞数：2 × 10 cells DGCR8, Human/HA-tag Expressing-293 Recombinant Cell Line, Puro Resistant SBI RA701C-1 1 vial / 347,000 E 細胞数：2 × 106 cells DICER, Human/HA-tag Expressing-293 Recombinant Cell Line, Puro Resistant SBI RA702C-1 1 vial / 347,000 E 6 メーカー 商品コード pHA-hPIWIL1, Human, SBI RA706A-1 SBI RA706B-1 pHA-hPIWIL2, Human, RA707A-1 SBI SBI RA707B-1 pHA-hPIWIL3, Human, SBI RA708A-1 SBI RA708B-1 pHA-hPIWIL4, Human, SBI RA709A-1 SBI RA709B-1 包装 / 価格（￥） PIWI-SNaREs Puro RFP PIWI-SNaREs Puro RFP PIWI-SNaREs Puro RFP PIWI-SNaREs Puro RFP 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 10μg / 122,000 細胞数：2 × 10 cells HA-tag Expressing-293 Recombinant Cell Line, SNaRE Control (EF1-HAGFP-T2A-RPF, Puro Resistant) SBI LV603C-1 1 vial / 160,000 E 細胞数：2 × 106 cells piRNA を濃縮できる発現ベクター PIWI-SNaREs HA タグを付加した PIWI タンパク質の発現ベクターです。 本ベクターにより細胞内で PIWI タンパク質を過剰発現させ， PIWI タンパク質と結合した piRNA（piwi interacting RNA） や関連因子を，抗 HA 抗体を使用した共免疫沈降により分離・ 濃縮することができます。ヒトの PIWIL1 ∼ 4 を発現するベ クターがラインナップされています。 small RNA の RT-PCR キット Global MicroRNA Amplification Kit 全 RNA から PCR のテンプレートに使用する small RNA の二本鎖 cDNA を増幅するキットです。逆転写反応のインキュ ベーション時間を通常よりも短くすることにより，20 ∼ 500 塩基の RNA に由来する cDNA を効率良く合成します。合成 した cDNA は定量的 PCR またはマイクロアレイ用増幅セン ス RNA の合成に使用できます。 特 長 ◆ 約 100 ng の全 RNA から増幅前の small RNA 集団の組成を忠実 特 長 に反映（＞ 95％）した cDNA を調製できます。 ◆ 新規 piRNA の探索，エピジェネティック制御を担う新しい RNA や 関連因子の同定，活性化されている PIWI 複合体結合 RNA の濃縮に ◆ わ ず か 5 ng の 全 RNA， ま た は 部 分 的 に 分 解 し た 全 RNA か ら cDNA を調製することも可能です。 ◆ アダプターライゲーションからテンプレート cDNA の合成まで，約 有用です。 ◆ N 末端に HA タグが付加された PIWI タンパク質を過剰発現させ， piRNA との複合体を共免疫沈降できます。 ◆ 各因子は EF1 αプロモーターの制御下により，哺乳動物細胞内で安 4 時間で終了します。 ◆ proof reading 活 性 を 有 す る DNA ポ リ メ ラ ー ゼ を 使 用 し て， fidelity の高い cDNA を増幅できます。 ◆ 増幅した cDNA は T7 プロモーター配列を含み，in vitro 転写反応に 定的に発現されます。 ◆ マーカー遺伝子は，蛍光タンパク質 RFP 遺伝子またはピューロマイ 操作方法概略 PIWI タンパク質が発現されることが確かめられています。 ◆ レンチウイルスベースのベクターにより，導入が困難とされている . ライゲーション（1 時間） 細胞種にも確実に導入できます。 ◆ ピューロマイシン耐性遺伝子を含む発現ベクターは，PIWI タンパク 質を安定的に発現する細胞株の樹立も可能です。 . 逆転写反応とアダプター連結（4 分） 研究用製品 miRNA シン耐性遺伝子より選択できます。 ◆ PIWI 遺伝子の塩基配列は十分に確認されており，またベクターから よるセンス RNA の合成に使用できます。 ※ベクターマップについては，miR-SNaREs（前項）をご覧下さい。 piRNA 濃縮の原理 . 変性と RNA の分解（95℃，10 分） HA タグを付加した PIWI タンパク質を過剰発現させ，DNA のメチ ル化やヒストン修飾などについてヘテロクロマチンに関係している piRNA を選択的に濃縮できます。 . PCR（1 時間） 4 (97kDa) (101kDa) 3 2 (109kDa) 1 (99kDa) コントロール 130KDa 70KDa コントロール 導入せず Ago2 を導入後，免疫沈降 総タンパク質 免疫沈降タンパク質 それぞれの PIWI タンパク質発現ベ クターを導入した 293TN 細胞の， 総ライセートおよび免疫沈降物を 用い，抗 HA タグ抗体によるウエ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り， PIWI タンパク質の発現を確認した。 ● RNase-free water ● Ligase cocktail ● Buffers ● Reverse transcriptase ● PCR polymerase ● Control RNA ● 5' adaptor primer ● 5' adaptor ● DTT ● 3' adaptor primer ● 3' adaptor ● dNTP mix 品 名 メーカー 商品コード Global MicroRNA Amplification Kit (10 reactions) SBI RA400A-1 包装 / 価格（￥） 1 kit / 150,000 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P23-32_k.indd 27 掲載されている製品はすべて研究用です。 キット内容 27 2011/09/07 15:58:50 ■ Multiple MicroRNAs Precursor Construct, Co-express in Cluster miRNA の過剰発現 2 ∼ 6 種類の miRNA の前駆体をクラスターとして発現するベクター miRNA 発現ベクター です。 Lentivector-Based MicroRNA Precursor Construct 製品例 miR-302abcd Cluster (#PMIRH302abcdPA-1) RSV 5'LTR レンチウイルスベクターにヒト miRNA 前駆体を挿入したコ レクションです。現在，650 種類を超えるラインナップを取 りそろえています。 Ψ AmpR ※各ベクターは E. coli に導入され，プレートに植菌した状態で納品されます。 製品到着後，E. coli を直ちに培養して下さい。 pUC ORI cPPT CMV PMIRH302abcdPA-2 dual promoter b ＊ miRNA 前駆体 RSV 5’LTR Drosha processing RRE env Dicer processing dsRNA（中間体） cPPT pMIRNA1 pUC ORI 5’ 3’ CMV 7,544 bp SV40 ORI SV40 poly-A 3'ΔLTR 5’ 3’ 3’ 5’ SV40 poly-A 3’ ΔLTR WPRE copGFP 3’ 5’ 5’ miR＊ WPRE copGFP c a d 35 EF1 SV40 ORI ＊ ＊ 40 miR : miR＊ microRNA precursor ＊ EF1 それぞれの成熟 miRNA のクラスターからの発現量 相対的発現量 gag AmpR 3’ 成熟 miRNA RISC 複合体 30 25 20 15 10 5 翻訳阻害／ mRNA 分解促進 0 特 長 302b 302c 302a 302b 品 名 ◆ miRNA の 配 列 は Sanger's miRBase（http://www.mirbase. org/）から選出され，miRNA とそれをはさむ前後 300 ∼ 500 塩 基のゲノム配列が隣接した断片がベクターに挿入されています。こ れにより，ベクターから転写された miRNA 前駆体が Drosha や メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Human Multiple MicroRNAs Precursor Construct, Co-express in Cluster, Lentivector-Based SBI PMIRHxxxPA-1 ＊ M 1 plate / ご照会下さい 複数の miRNA の前駆体をクラスターとして発現する。※ 受注発注品。 ＊ 製品ラインナップおよび各製品の商品コードは，フナコシホームペー Dicer などによる内在性制御を受けやすくなっています。 ◆ HIV をベースとしたベクターで，複製能力を有するウイルス粒子の ジ（http://www.funakoshi.co.jp/）の製品検索でご確認下さい（キー ワード：PMIRH） 。なお，各製品に挿入されている miRNA 前駆体 産生を防ぐための工夫がなされています。 ◆ ベクターのトランスフェクションまたはウイルス粒子を使用した形 質導入により，標的細胞で miRNA を発現できます。また，miRNA の詳細情報は，Sanger's miRBase（http://www.mirbase.org/） をご覧下さい（下記参照）。 ■ コントロールベクター を安定的に発現する細胞株を樹立することも可能です。 ◆ CMV プロモーターの制御下で miRNA が発現されるため，シングル 研究用製品 miRNA コピーからでも多量の miRNA の発現が期待できます。 ◆ 発現ベクターからは，miRNA 前駆体のほかに copGFP も発現され Scramble Control Hairpin in pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP (CD511B-1) SBI PMIRH000PA-1 10μg / 89,000 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP cDNA Cloning and Expression Lentivector SBI CD511B-1 10μg / 80,000 るため，miRNA 発現細胞を copGFP の蛍光で識別できます。 ※ 本 ベ ク タ ー を 使 用 し て 組 換 え 体 ウ イ ル ス を 作 製 す る 際 は， pPACKH1 Lentivector Packaging Kit（#LV500A-1：p.8 参照） Sanger's miRBase をご使用下さい。 位相差像 copGFP miR-205 発現量の比較 12 相対値 10 miRNA-205 8 6 4 2 0 miR-205 コントロール MCF-7 細胞に #PMIRH205PA-1（pre-mir-205）を用いて調製したウイルス粒子を感 染させ，48 時間後に miR-205 の発現量を測定した。 miRNA に関する様々な情報を掲載しているウェブサイトです。論文 公 開 さ れ た miRNA の 配 列 や ア ノ テ ー シ ョ ン 情 報 を 検 索 で き る “miRBase Sequence Database” ，新たに発見された miRNA に適 切な命名を行う“miRBase Registry” ，miRNA の標的遺伝子を予測す る“miRBase Target”で構成されています。 本 製 品 の miRNA 前 駆 体 の 詳 細 情 報 は，“miRBase Sequence Database”の「Search by miRNA name or keyword」に製品品名 中の Accession Number（MI000xxx）を入力し，検索して下さい。 品名中の Accession Number（MI000xxxx）を入力して検索 掲載されている製品はすべて研究用です。 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Human MicroRNA Precursor Construct, Lentivector-Based SBI PMIRHxxxPA-1 ＊ M 1 plate / 85,000 ※受注発注品 ＊ 製品ラインナップおよび各製品の商品コードは，フナコシホームペー ジ（http://www.funakoshi.co.jp/）の製品検索でご確認下さい（キー ワード：PMIRH） 。なお，各製品に挿入されている miRNA 前駆体 の詳細情報は，Sanger's miRBase（http://www.mirbase.org/） をご覧下さい（右記参照）。 28 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P23-32_k.indd 28 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:58:54 Module 2 に含まれる miRNA クローン ヒト miRNA 発現ベクターのセット hsa-miR-125b-2 hsa-miR-137 Human MicroRNA Precursor Clone Module レンチウイルスベクターにヒト miRNA 前駆体を挿入した発 現ベクター Lenti-miR microRNA コレクション（前ページ参 照）の中から，研究で多用される miRNA 発現ベクターを集め たセットです。あらかじめ用意されたセット製品のほかに， 500 種類を超える miRNA 発現ベクターのラインナップから ご自身で 50 種類を選択可能なカスタムサービスの My miRs もあります。 ※各ベクターは E. coli に導入された Bacterial Stock として，96 ウェル プレートで納品されます。 hsa-miR-151 hsa-miR-188 hsa-miR-200c hsa-miR-126 hsa-miR-138-1 hsa-miR-152 hsa-miR-190 hsa-miR-202 hsa-miR-127 hsa-miR-138-2 hsa-miR-153-1 hsa-miR-190b hsa-miR-203 hsa-miR-128-1 hsa-miR-139 hsa-miR-153-2 hsa-miR-191 hsa-miR-204 hsa-miR-128-2 hsa-miR-140 hsa-miR-154 hsa-miR-205 hsa-miR-129-2 hsa-miR-141 hsa-miR-155 hsa-miR-193a hsa-miR-206 hsa-miR-192 hsa-miR-130a hsa-miR-142 hsa-miR-181a-1 hsa-miR-193b hsa-miR-208a hsa-miR-130b hsa-miR-143 hsa-miR-181a-2 hsa-miR-194-1 hsa-miR-210 hsa-miR-132 hsa-miR-144 hsa-miR-181b-1 hsa-miR-194-2 hsa-miR-211 hsa-miR-133a-1 hsa-miR-145 hsa-miR-181b-2 hsa-miR-195 hsa-miR-212 hsa-miR-133a-2 hsa-miR-146a hsa-miR-181c hsa-miR-196a-1 hsa-miR-214 hsa-miR-133b hsa-miR-146b hsa-miR-181d hsa-miR-196a-2 hsa-miR-215 hsa-miR-134 hsa-miR-147 hsa-miR-182 hsa-miR-196b hsa-miR-216a hsa-miR-135a-1 hsa-miR-147b hsa-miR-183 hsa-miR-198 hsa-miR-216b hsa-miR-135a-2 hsa-miR-148a hsa-miR-184 hsa-miR-199a-2 hsa-miR-217 ■ OncoMirs Module Lenti-miR microRNA シリーズの中から，癌に関連した miRNA の hsa-miR-135b hsa-miR-148b hsa-miR-185 hsa-miR-200a hsa-miR-136 発現ベクター 50 種類をセットにした製品です。 セットに含まれる miRNA クローン hsa-miR-150 品 名 hsa-let-7a-1 hsa-miR-18b hsa-miR-27b hsa-miR-106a hsa-miR-199a-2 メーカー 商品コード hsa-miR-7-1 hsa-miR-19a hsa-miR-29a hsa-miR-106b hsa-miR-200a Human, SBI Human, SBI Human, SBI Human, SBI hsa-miR-9-1 hsa-miR-20a hsa-miR-29b-1 hsa-miR-125a hsa-miR-200b hsa-miR-10a hsa-miR-20b hsa-miR-29c hsa-miR-125b-1 hsa-miR-200c hsa-miR-10b hsa-miR-21 hsa-miR-30a hsa-miR-133a-1 hsa-miR-205 hsa-miR-15a hsa-miR-22 hsa-miR-15b hsa-miR-25 hsa-miR-30b hsa-miR-133b hsa-miR-210 hsa-miR-30c-1 hsa-miR-145 hsa-miR-16-1 hsa-miR-26a-1 hsa-miR-34a hsa-miR-155 hsa-miR-221 hsa-miR-222 hsa-miR-17 hsa-miR-26b hsa-miR-92a-1 hsa-miR-181a-1 hsa-miR-223 hsa-miR-18a hsa-miR-27a hsa-miR-101 hsa-miR-195 hsa-miR302b-367 hsa-miR-187 hsa-miR-200b hsa-miR-224 包装 / 価格（￥） MicroRNA, Precursor, Pre-formatted, Onco-miR PMIRH-OncoPA-1 −80℃ M 1 set / ご照会下さい MicroRNA, Precursor, Pre-formatted, Module 1, Lenti-miR PMIRH-Mod1PA-1 −80℃ M 1 set / ご照会下さい MicroRNA, Precursor, Pre-formatted, Module 2, Lenti-miR PMIRH-Mod2PA-1 −80℃ M 1 set / ご照会下さい MicroRNA, Precursor, Pre-formatted, Module 1+2, Lenti-miR PMIRH-Mod1+2PA-1 −80℃ M 1 set / ご照会下さい ■ カスタムモジュール My miRs 500 種類を超える miRNA 発現ベクターの中から，50 種類をご自 ■ Pre-formatted Lenti-miR Module 身でご選択いただけるカスタムサービスです。選択可能なベクターのリ Lenti-miR microRNA シ リ ー ズ の 中 か ら， 最 も 研 究 さ れ て い る miRNA の発現ベクターを 80 種類以上選びセットにした製品です。 Module 1 と 2，および両方のセット品があります。 ストについては，フナコシホームページをご覧下さい。 ※ My miRs に関する価格などの詳細は，当社受託・特注品業務担当（最 終ページ参照）までお問い合わせ下さい。 Module 1 に含まれる miRNA クローン hsa-miR-10b hsa-let-7a-2 hsa-miR-15a hsa-miR-26a-1 hsa-miR-25 hsa-miR-31 hsa-miR-101-1 hsa-miR-32 hsa-let-7a-3 hsa-miR-15b hsa-miR-26a-2 hsa-miR-33a hsa-miR-103-1 hsa-miR-101-2 hsa-let-7b hsa-miR-16-1 hsa-miR-26b hsa-miR-33b hsa-miR-105-1 hsa-let-7c hsa-miR-16-2 hsa-miR-27a hsa-miR-34a hsa-miR-105-2 hsa-let-7d hsa-miR-17 hsa-miR-27b hsa-miR-34b hsa-miR-106a hsa-let-7e hsa-miR-18a hsa-miR-28 hsa-miR-34c hsa-miR-106b hsa-let-7f-1 hsa-miR-18b hsa-miR-29a hsa-miR-92a-1 hsa-miR-107 hsa-let-7f-2 hsa-let-7g hsa-miR-19a hsa-miR-29b-1 hsa-miR-92a-2 hsa-miR-122 hsa-miR-19b-2 hsa-miR-29b-2 hsa-miR-93 hsa-miR-124-1 hsa-let-7i hsa-miR-20a hsa-miR-29c hsa-miR-95 hsa-miR-124-2 hsa-miR-1-1 hsa-miR-20b hsa-miR-30a hsa-miR-96 hsa-miR-124-3 hsa-miR-7-1 hsa-miR-21 hsa-miR-30b hsa-miR-98 hsa-miR-125a hsa-miR-7-2 hsa-miR-22 hsa-miR-7-3 hsa-miR-23a hsa-miR-30d hsa-miR-99b hsa-106a-363 hsa-miR-9-1 hsa-miR-23b hsa-miR-30e hsa-miR-100 hsa-miR-106b-25 パッケージング済みのヒト miRNA ライブラリー Pooled MicroRNA Precursor Library ヒト miRNA 前駆体を挿入したレンチウイルスのプールです。 導入により miRNA を高発現します。特定の形質発現に関与し ている miRNA を効率的にスクリーニングできます。 miRNA 前駆体 RSV 5’ LTR gag Drosha processing AmpR RRE hsa-miR-30c-1 hsa-miR-99a hsa-miR-125b-1 env 5’ 3’ Dicer processing cPPT pMIRNA1 pUC ORI 研究用製品 miRNA hsa-let-7a-1 CMV 7,544 bp dsRNA（中間体） 5’ 3’ 3’ 5’ ＊ hsa-miR-9-2 hsa-miR-34 b+c-1 hsa-miR-17-92 Cluster miR : miR microRNA precursor EF1 SV40 ORI SV40 poly-A 3’ ΔLTR WPRE copGFP 3’ 5’ miR＊ 5’ 3’ 成熟 miRNA RISC 複合体 翻訳阻害／ mRNA 分解促進 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P23-32_k.indd 29 掲載されている製品はすべて研究用です。 hsa-miR-24-1 hsa-miR-302 bcad hsa-miR-10a hsa-miR-24-2 29 2011/09/07 15:59:01 miRNA の抑制 特 長 ◆ 各種細胞にそのまま感染可能な，パッケージング済みのウイルスラ イブラリーです。 アンチセンス miRNA 発現ベクター ◆ 感染効率確認用ポジティブコントロールウイルスが含まれています。 ◆ 目的形質の発現に関与している miRNA は，キットに含まれるレン チウイルス用プライマーを用いた PCR などで簡便に同定できます。 ◆ copGFP 発現用配列が組み込まれているため，導入細胞のモニタリ ングや識別が容易です。 ◆ 導入の困難な哺乳動物細胞，初代培養細胞，非分裂細胞などにも導 入可能です。 ◆OncoMir microRNA Precursor Pooled Library （#PMIRHOPLVA-1）は，癌に関与する 140 種類の miRNA 前駆 体を挿入したレンチウイルスのプールです。腫瘍幹細胞研究や腫瘍 miRZip Lentivector-Based Anti-microRNA Construct アンチセンス miRNA を発現するレンチウイルスベースの発 現ベクターです。発現させたアンチセンス miRNA は細胞内で 内在性 miRNA と結合し，その機能を抑制することができます。 250 種類以上の miRNA に対するベクターがラインナップさ れています。 ※各ベクターは E. coli に導入され，プレートに植菌した状態で納品されます。 製品到着後，E. coli を直ちに培養して下さい。 関連メカニズムの解析に有用です。 アンチセンス miRNA の作用機序 操作方法概略 RSV 5'LTR 5 LTR . ウイルス粒子を感染させる cPPT c pUC ORI . 表現型を選択する ・腫瘍細胞浸潤 ・細胞分化 ・ストレス応答 Ψ AmpR ・培養細胞 ・幹細胞 ・動物組織 pmiRZip lentivector CMV copGFP c ・老化 ・アポトーシス SV40 ORI SV40 poly-A 3'ΔLTR T2A peptide H1 Puro WPRE . miRNAを同定する ・目的細胞の単離 ・ゲノムDNAの回収 ・miRNAクローンの増幅 ・シークエンシング MicroRNAs CMV copGFP miRZip Anti-microRNA 5' LVL Primer 3' LVL Primer キット内容 ● Pooled Lenti-miR virus library (#PMIRHPLVA-1， miRZip による miRNA 抑制 #PMIRHPLVAHT-1) ● Pooled OncoMir virus library (#PMIRHOPLVA-1) ● LVL PCR primer mix ● Positive infection control virus 細胞内 miRNA 研究用製品 miRNA 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） MicroRNA Precursor Pooled Library, Packaged, Human, Lenti-miR ＊ 1 SBI PMIRHPLVA-1 −80℃ M 1 kit / ご照会下さい 4 vials の Pooled Lenti-miR virus library を含む。 MicroRNA Precursor Pooled Library, HT, Packaged, Human, Lenti-miR ＊ 1 SBI PMIRHPLVAHT-1 −80℃ M 1 kit / ご照会下さい 本ベクターより発現されるヘアピン RNA は非対称構造で，上流鎖（図中灰色）は標的と なる miRNA 配列を含まず，下流鎖（図中緑色）は細胞内在性 miRNA と相補的な配列と してデザインされています。このヘアピン RNA より産生された一本鎖のアンチセンス miRNA が，細胞内でセンス miRNA と相補的に結合し，その機能を阻害します。結果と してセンス miRNA が標的とする mRNA より翻訳されるタンパク質の量が増大します。 特 長 10 vials の Pooled Lenti-miR virus library を含む。 MicroRNA Precursor, Pooled Library, OncoMir ＊ 1 SBI PMIRHOPLVA-1 −80℃ M ◆ 各アンチセンス miRNA は H1 プロモーターの制御下により安定的 1 kit / 160,000 に発現されます。 ◆ 非 対 称 的 ヘ ア ピ ン 構 造 を と っ た 発 現 ベ ク タ ー は， ア ン チ セ ン ス ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 miRNA の産生に最適化されたデザインです。 ◆ 産生されたアンチセンス miRNA は，細胞内の miRNA を特異的か ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 つ効率的に抑制します。 ◆ レンチウイルスベースのベクターにより，分裂細胞，非分裂細胞の いずれにも確実に導入できます。 掲載されている製品はすべて研究用です。 ◆ GFP の蛍光またはピューロマイシン耐性遺伝子を利用した薬剤選択 などにより，アンチセンス miRNA を安定的に発現する細胞株を樹 立できます。 30 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P23-32_k.indd 30 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:59:02 ラインナップされているアンチセンス miRNA の一例 miR-1 miR-16 miR-21 miR-29a miR-98 miR-122 miR-126 miR-134 miR-181a miR-199a-3p miR-204 miR-221 miR-296-5p miR-365 miR-373 miR-7 miR-17 miR-22 miR-30a miR-101 miR-124 miR-130b miR-141 miR-182 miR-199a-5p miR-205 miR-222 miR-302a miR-367 miR-520b miR-9 miR-18a miR-23a miR-31 miR-103 miR-125a-3p miR-132 miR-145 miR-192 miR-200a miR-206 miR-223 miR-302b miR-371-3p miR-616 miR-10b miR-19a miR-24 miR-34a miR-106a miR-125a-5p miR-133a miR-146a miR-193b miR-200c miR-210 miR-224 miR-302c miR-371-5p miR-663 miR-15a miR-20a miR-27 miR-92a miR-106b miR-125b miR-133b miR-155 miR-196a miR-203 miR-214 miR-296-3p miR-302d miR-372 miR-let7a パッケージング済みのアンチセンス miRNA ライブラリー miRZip Pooled Anti-microRNA Library アンチセンス miRNA 発現ベクターを挿入したレンチウイル スのプールです。各アンチセンス miRNA は H1 プロモーター の制御下により安定的に発現され，細胞内で内在性 miRNA と 結合し，その機能を特異的かつ効果的に抑制することができま す。miRNA シグナル経路の研究に有用です。 アンチセンス miRNA の作用機序 RSV 5 5'LTR LTR miR-29a ベクターを使用した解析例 過剰発現 Lenti-miR-29a コントロール miRZip Anti-microRNA Ψ AmpR cPPT c pmiRZip lentivector pUC ORI ノックダウン miRZip-29a CMV c copGFP SV40 ORI SV40 poly-A 3'ΔLTR Puro WPRE 標的タンパク質 1. 2. 標的 mRNA 定常状態 1. 標的 mRNA 抑制 2. 3. miRNA-29a 通常レベル AAAA 3' 特 長 miRNA-29a Lenti-miR-29a 5'm7GpppG 標的 mRNA 非抑制 細胞内 miRNA 本ベクターより発現されるヘアピン RNA は非対称構造で，上流鎖（図中灰色）は標的と なる miRNA 配列を含まず，下流鎖（図中緑色）は細胞内在性 miRNA と相補的な配列と してデザインされています。このヘアピン RNA より産生された一本鎖のアンチセンス miRNA が，細胞内でセンス miRNA と相補的に結合し，その機能を阻害します。結果と してセンス miRNA が標的とする mRNA より翻訳されるタンパク質の量が増大します。 3. 5'm7GpppG miRZip による miRNA 抑制 T2A peptide H1 ◆ 非 対 称 的 ヘ ア ピ ン 構 造 を と っ た 発 現 ベ ク タ ー は， ア ン チ セ ン ス AAAA 3' miRNA の産生に最適化されたデザインです。 ◆ 目的細胞への導入により産生されたアンチセンス miRNA は，細胞 miRNA-29a miRZip-29a 5'm7GpppG 内の miRNA を特異的かつ効率的に抑制します。 ◆ レンチウイルスベースのベクターにより，分裂細胞，非分裂細胞の AAAA 3' いずれにも確実に導入できます。 ◆ 目的形質の発現に関与しているアンチセンス miRNA は，キットに Anti-microRNA Construct, Lentivector-Based, miRZip SBI MZIPxxxPA-1 ＊ M 定できます。 ◆ GFP の蛍光またはピューロマイシン耐性遺伝子を利用した薬剤選択 などにより，アンチセンス miRNA を安定的に発現する細胞株を樹 立できます。 キット内容 品 名 メーカー 商品コード 含まれるレンチウイルス用プライマーを用いた PCR などで簡便に同 包装 / 価格（￥） ● Pooled miRZip virus library 1 plate / 89,000 ※受注発注品 ● GNH PCR primer mix ● Positive infection control virus ＊ 製品ラインナップおよび各製品の商品コードは，フナコシホームペー 品 名 ジの製品検索でご確認下さい（キーワード：MZIP） 。なお，各製品 メーカー 商品コード に挿入されているアンチセンスが標的とする miRNA の詳細情報は， Anti-microRNA, Pooled Library, miRZip ＊ 1 SBI MZIPPLVA-1 −80℃ M Sanger's miRBase（http://www.mirbase.org/） を ご 覧 下 さ い 研究用製品 miRNA 上段）ヒト単球性白血病細胞株 U937 に，コントロールレンチウイルス（Lane 1） ， miR-29a 過 剰 発 現 ベ ク タ ー（Lane 2，#PMIRH29aPA-1） ，ア ン チ セ ン ス miR-29a 発現ベクター（Lane 3，#MZIP29a-PA-1）を導入し，標的タンパク 質の発現量をウエスタンブロッティングにより比較した。miRNA を過剰発現した 細胞ではタンパク質産生量が抑えられているが，アンチセンス miRNA を導入した 細胞では，標的タンパク質量が顕著に増加している。 下段）上記解析における各因子の状態模式図。 包装 / 価格（￥） 1 kit / 160,000 （p.28 参照）。 ※ ご 希 望 の miRNA に 対 す る 製 品 が ラ イ ン ナ ッ プ に な い 場 合 は， ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 Sanger's miRBase に登録されている miRNA に限り，カスタムで ジ参照）までお問い合わせ下さい。 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 ■ コントロールベクター 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Scramble Hairpin Control Anti-MicroRNA Construct, Lentivector-Based, miRZip SBI MZIP000-PA-1 1 plate / 85,000 M ※受注発注品 pGreenPuro shRNA Cloning and Expression Vector (GFP + Puro) SBI SI505A-1 1 kit / 82,000 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P23-32_k.indd 31 掲載されている製品はすべて研究用です。 の作製を承ります。詳細は，当社受託・特注品業務担当（最終ペー 31 2011/09/07 15:59:05 mRNA と miRNA の相互作用解析 操作方法概略 1. 目的の mRNA の 3' UTR を，キットに含まれる miR-Selection FireCtx Lentivector に挿入し，レンチウイルスパッケージングを行う。 mRNA の 3' UTR と miRNA の相互作用をスクリーニングするキット miR-Selection 3' UTR Target Selection Kit mRNA の 3' UTR（非翻訳領域）と，miRNA の相互作用を 簡便にスクリーニングするシステムです。細胞の生死と，ルシ フェラーゼ発現の 2 種類のレポーターを用いています。 2. 3' UTR を挿入したベクターと未挿入のベクターそれぞれを，HEK 293 細胞 ＊ に導入する。ベクター中の EF1-Puro カセットを用い， 安定発現細胞株を樹立する。 3. 目的の miRNA を組み込んだレンチウイルスベクター＊を，樹立した 細胞株に導入する。 4. 培地に Ctx drug を添加して 4 日間培養する。mRNA の 3' UTR と miRNA の相互作用が無い場合，細胞は死滅する。 5. 生存した細胞について，ルシフェラーゼの発現を定量する。 特 長 ＊ キットには，レンチウイルスパッケージング試薬，miRNA 発現レン ◆ mRNA の 3' UTR と miRNA の相互作用の有無を，細胞の生死で簡 チウイルスベクター，HEK 293 細胞などは含まれていません。詳 便かつ確実にスクリーニングできます。また，スクリーニングした 細は製品添付のマニュアルをご確認下さい。 組み合わせについて，相互作用の強度をルシフェラーゼ（FIRE）の Ctx 処理 Ctx 処理（GFP） 発現で定量できます。 ◆ miRNA 発現レンチウイルスベクター ＊ は，System Biosciences 社の発現ベクター，配列組み込み済みベクター（Lentivector-Based （MicroRNA Precursor Pooled Library）などを使用できます。 ◆ 別売品で，mRNA の 3' UTR をあらかじめ組み込んであるレンチウ イルスベクターもあります（右記参照）。 細胞死 ＋c-Myc 3’UTR MicroRNA Precursor Construct） ，発現ベクターのプール 3’UTR なし Fire-Ctx-c-Myc UTR Fire-Ctx-Control 未処理 細胞生存 1.4 − ＋ miR-145 − RLU 1.0 ＋ 0.6 0.2 Fire-Ctx Fire-Ctx No UTR c-Myc UTR ルシフェラーゼアッセイ c-Myc の 3' UTR および UTR なし（コン ト ロ ー ル）を miR-Selection Fire-Ctx Lentivector により HEK 293 細胞に導 入して，安定発現細胞株を樹立した。それ ぞれの細胞に miR-145 発現レンチウイル スを導入した後，培地に Ctx drug を添加 した。 細胞の生存により，c-Myc の 3' UTR と miR-145に相互作用があることが分かった。 ルシフェラーゼアッセイでは，発現量が 63％減少している。 キット内容 ● miR-Selection Fire-Ctx lentivector plasmid (uncut) ● 1000 × Ctx drug powder 研究用製品 miRNA ● Ctx resuspension buffer 測定原理 品 名 メーカー 商品コード 3' UTR と miRNA の相互作用なし 3' UTR と miRNA の相互作用あり 包装 / 価格（￥） MicroRNA Target Selection Kit (miR-Selection Lentivector+Ctx Drug) SBI MS410A-1 1 kit / 90,000 ■ キット別売品 品 名 細胞死 Ctx drug 添加 ルシフェラーゼおよび Ctx の発現は抑制されない 細胞生存 Ctx drug 添加 ルシフェラーゼおよび Ctx の発現は抑制される メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Ctx Drug for MicroRNA Target Selection System, 1000× SBI MS040A-1 1 vial / 15,000 ■ 3' UTR 組み込み済みレンチウイルスベクター 品 名 メーカー 商品コード 左：細胞中で Cytotoxic Sensor（Ctx）が発現していると，培地中の Ctx drug により細胞が死滅する。 掲載されている製品はすべて研究用です。 右：挿入した mRNA の 3' UTR と miRNA に相互作用があると，Ctx およびルシフェラーゼ（FIRE）の発現が抑制される。 32 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P23-32_k.indd 32 miR-Selection Lentivector SBI MS431A-1 with ACHE 3'UTR Construct SBI MS430A-1 with EZH2 3'UTR Construct SBI MS422A-1 with HDAC1 3'UTR Construct SBI MS424A-1 with HER2 3'UTR Construct SBI MS420A-1 with c-Myc 3'UTR Construct SBI MS421A-1 with p53 3'UTR Construct SBI MS428A-1 with PDCD4 3'UTR Construct SBI MS429A-1 with Rad52 3'UTR Construct SBI MS426A-1 with SOC1 3'UTR Construct SBI MS427A-1 with SOC3 3'UTR Construct SBI MS425A-1 with TNC-Tenasin C 3'UTR Construct SBI MS423A-1 with VEGFB 3'UTR Construct SBI MS432A-1 with ZEB1 3'UTR Construct SBI MS433A-1 with ZEB2 3'UTR Construct 包装 / 価格（￥） 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 10μg / 84,000 80,000 80,000 80,000 80,000 80,000 80,000 80,000 80,000 80,000 80,000 80,000 84,000 84,000 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 15:59:08 RNAi ライブラリー製品 操作方法概略 siRNA ライブラリーで標 的細胞に形質導入する ライブラリー製品 RNAi shRNA 発現ベクターのプールライブラリー GeneNet siRNA Library 標的細胞 GeneNet siRNA Library ヒトまたはマウスの既知遺伝子に対する shRNA 発現ベク ターを混合したライブラリーです。本製品と GeneChip を用 いることにより，特定の細胞情報伝達経路や細胞応答などに関 与する遺伝子群についてハイスループットスクリーニングを行 えます。ゲノムワイドな解析が可能な製品と，アポトーシス関 連因子，キナーゼ，ホスファターゼに標的を絞った製品があり ます。 特 長 処理細胞 （アポトーシス誘導等） 未処理細胞 目的とする表現型を示し た細胞を選択する as s as s AAAA s as ◆ ライブラリーには，System Biosciences 社独自のアルゴリズムに Bio 全 RNA を単離する 逆転写および siRNA 標的 配列を増幅する AAAA s as Bio 基づいて配列設計された shRNA の発現ベクターが，1 つの転写産 s 物につき 3 ∼ 5 種類混合されています。 as ◆ shRNA 配列は FIV ベースまたは HIV ベースのレンチウイルス発現 Bio セ ン ス 鎖 を 除 去 後 GeneChip Array に よ り 解析を行う s as Bio ベクターにクローニングされており，ほぼすべての細胞種に高力価 で導入可能です。 ◆ キットには cDNA 合成やビオチン標識用のプライマーなどが含まれ ており，GeneChip を使用したハイスループットスクリーニングが 使用文献 行えます。 ◆ shRNA 発現ベクターがウイルス粒子にパッケージングされている製 Gumireddy, K., et al., Nature Cell Biol ., 11 (11), 1297 (2009). Yeung, M. L., et al., J. Biol. Chem ., 284 (29), 19463 (2009). 品と，プラスミド DNA として供給される製品があります。 ◆ ウイルス粒子にパッケージング済みの製品は Ready-to-use フォー Ossovskaya, V. S., et al., J. Neurosci. Methods , 177 (2), 322 ∼ 333 (2009). マットで，すぐに使用できます。 ◆ プラスミド DNA の製品は研究者自身でウイルス粒子を調製すること Hattori, H., et al., Blood , 110 (2), 640 ∼ 650 (2007). ＊2 ができ，よりラージスケールでの実験に適しています 。 ＊2 組 換 え 体 ウ イ ル ス を 作 製 す る 際 は，pPACK Lentivector Packaging Kit（#LV100A-1（FIV 用），#LV500A-1（HIV 用） ： キット内容 ● GeneNet siRNA library： Pre-packaged in pseudoviral particles（Packaged） p.8 参照）を併せてご使用下さい。 Plasmid DNA（Plasmid） RSV 5’ LTR gag CMV 5’ LTR AmpR pUC ORI pSIF1-H1-Puro shRNA Vector 6,261 bp EcoRI BamHI SV40 ORI SV40 Poly-A 3’ ΔLTR H1 gag RRE cPPT WPRE ● PCR primers AmpR CMV pUC ORI Puro ● cDNA synthesis primer RRE pSIH1-H1-Puro shRNA Vector 7,048 bp cPPT CMV EcoRI BamHI SV40 ORI Puro SV40 Poly-A WPRE 3’ ΔLTR H1 ● Positive control DNA ＊3 ● Packaged positive transduction control ＊3 ● CD with gene / siRNA list and data analysis program ＊3 Genome-wide siRNA Library のプラスミドとして供給される製 品（#SI ＊＊＊ PB-1）には含まれていません。 ■ GeneNet Genome-wide siRNA Library 品 名 ■ GeneNet Genome-wide siRNA Library ライブラリー 発現ベクターの種類 標的遺伝子 Human 50K pSIF1-H1-copGFP（FIV ベース） 47,400 種類 Human 50K pSIF1-H1-Puro（FIV ベース） 47,400 種類 Human 50K pSIH1-H1-Puro（HIV ベース） 47,400 種類 Mouse 40K pSIF1-H1-Puro（FIV ベース） 39,000 種類 Mouse 40K pSIH1-H1-Puro（HIV ベース） 39,000 種類 メーカー 商品コード shRNA 200,000 種類 200,000 種類 200,000 種類 150,000 種類 150,000 種類 ■ GeneNet Focused siRNA Library ※ 各ライブラリーに含まれる標的遺伝子の詳細については，System Biosciences 社 ホ ー ム ペ ー ジ（http://www.systembio.com/ 包装 / 価格（￥） 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい index.html）に掲載のリストをご覧下さい。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P33-34_k.indd 33 掲載されている製品はすべて研究用です。 ライブラリー 発現ベクターの種類 標的遺伝子 shRNA Human Apoptosis pSIH1-H1-Puro（HIV ベース） 579 種類 6,876 種類 Human Kinase pSIH1-H1-Puro（HIV ベース） 897 種類 10,453 種類 Human Phosphatase pSIH1-H1-Puro（HIV ベース） 244 種類 2,719 種類 50K siRNA Library in pSIF1-H1-copGFP, Human, GeneNet SBI SI205B-1 M Packaged ＊ 1 SBI SI205PB-1 Plasmid 50K siRNA Library in pSIF1-H1-Puro, Human, GeneNet SBI SI206B-1 −80℃ M Packaged ＊ 1 Plasmid SBI SI206PB-1 50K siRNA Library in pSIH1-H1-Puro, Human, GeneNet SBI SI606B-1 −80℃ M Packaged ＊ 1 Plasmid SBI SI606PB-1 40K siRNA Library in pSIF1-H1-Puro, Mouse, GeneNet SBI SI222B-1 −80℃ M Packaged ＊ 1 Plasmid SBI SI222PB-1 40K siRNA Library in pSIH1-H1-Puro, Mouse, GeneNet SBI SI622B-1 −80℃ M Packaged ＊ 1 SBI SI622PB-1 Plasmid 33 2011/09/07 9:34:01 ■ GeneNet Focused siRNA Library 品 名 メーカー 商品コード ライブラリー製品 RNAi Apoptosis Focused siRNA Library, Human, GeneNet SBI SI616A-1 M Packaged ＊ 1 SBI SI616PA-1 M Plasmid ＊ 1 Kinase Focused siRNA Library, Human, GeneNet SBI SI626A-1 M Packaged ＊ 1 SBI SI626PA-1 M Plasmid ＊ 1 Phosphatase Focused siRNA Library, Human, GeneNet SBI SI636A-1 M Packaged ＊ 1 SBI SI636PA-1 M Plasmid ＊ 1 包装 / 価格（￥） 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい 1 kit / ご照会下さい ■ PCR プライマー別売品 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Primer Set for GeneNet siRNA Libraries in pSIF1-H1 Vector (20 reactions) SBI SI291B-1 1 set / 47,000 Primer Set for siRNA Library in pSIH1-H1 Vector (20 reactions) SBI SI691B-1 1 set / 47,000 遺伝子工学関連製品 非特異的インターフェロン応答検出キット Interferon Response Detection Kit インターフェロン応答遺伝子（ISG）の発現量を定量的 RTPCR で 測 定 す る こ と に よ り， 細 胞 内 に 導 入 し た 化 学 合 成 siRNA やベクターから発現した siRNA が，インターフェロン 応答を誘導しているかどうかを検出するためのキットです。細 胞種や培養条件により，発現上昇が見られる ISG が異なること が知られていますが（MEMO 参照），本キットでは 5 種類の ヒト ISG の発現量を解析できるため，様々なヒト由来細胞に適 用できます。 遺伝子工学関連製品 ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 siRNA とインターフェロン応答 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 siRNA は標的遺伝子の発現抑制以外にも，インターフェロン応答に よる非特異的なタンパク質合成阻害や RNA 分解を誘導することが知ら れています。このため siRNA 導入実験結果の検証に，インターフェロ ン応答の有無を確認することは重要です。 細胞種による ISG の違い 二本鎖 RNA によって誘導されるインターフェロン応答遺伝子（ISG： Interferon Stimulated Gene）の感度と経路は，細胞種や培養条件に よって大きく異なります。また，siRNA の濃度やデザインによっても インターフェロン応答の感度，程度，持続時間が変化します。異なる情 報伝達経路によって誘導される，複数の ISG の発現量を解析することに より，より正確なインターフェロン応答の検出，さらには siRNA 実験 の検証を行うことができます。 特 長 System Biosciences 社ホームページのご案内 System Biosciences 社ホームページでは，最新の製品情報を ご紹介しています。 また，詳細な技術情報や，製品の引用文献も掲載されています。 ぜひご覧下さい。 ◆ インターフェロン刺激の情報伝達経路が異なる 5 種類のヒト ISG （OAS1, OAS2, MX1, IFITM1, ISGF3γ）の発現量を解析できま す。 ◆ 通常の PCR，および定量的 PCR のいずれでも解析できます。 http://www.systembio.com/ ◆ 全 RNA を抽出後，約 3 時間で解析できます。 ◆ キットには，インターフェロン刺激細胞から調製したコントロール 用の cDNA が含まれています。 ◆ 1 遺伝子当たり，50 μl の反応系で 20 反応分のプライマーが含まれ ています。 ◆ siRNA によるインターフェロン応答のほか，レンチウイルス感染の 検出や，トランスフェクション試薬などによるインターフェロン応 答の検出にも有用です。 キット内容 ● Primer mixture for OAS1, OAS2, MX1, IFITM1, ISGF3γ ● Control primer mixture for β-actin 掲載されている製品はすべて研究用です。 ● Control cDNA ※ キットには全 RNA 抽出試薬，逆転写酵素，PCR 酵素は含まれてい ません。 品 名 メーカー 商品コード Interferon Response Detection Kit (20 reactions each) SBI SI300A-1 34 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P33-34_k.indd 34 包装 / 価格（￥） 1 kit / 47,000 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 9:34:04 酵素処理不要の PCR クローニングキット 遺伝子の変異を一度に複数導入できるキット Cold Fusion Cloning Kit MetaMorph Mutagenesis Kit PCR 産物を任意のベクターの任意の領域に，簡便，迅速か つ高効率に挿入，クローニングできるキットです。PCR 産物 と線状化したベクターを，キットに含まれる Master mixture と混合して室温で 5 分間，氷上で 10 分間インキュベートする だけで，PCR 産物を迅速かつ正確にベクターにクローニング できます。 PCR ベースの遺伝子の変異導入キットです。MetaMorph Solution を使用して，ベクター上の目的の部位に点変異，複数 変異， または欠失， 挿入などの変異を 1 ステップで導入できます。 特 長 ◆ 遺伝子の変異を一度に複数導入できます。 ◆ 点変異，欠失，挿入などの変異を導入できます。 特 長 ◆ 欠失，挿入のサイズに制限はありません。 ◆ 制限酵素処理やリガーゼ処理が不要です。 ◆ ほとんどのベクターや E. coli コンピテントセルに適用できます。 ◆ 複数 DNA 断片の同時挿入などにも威力を発揮します。 ◆ 配列のメチル化状態に左右されません。 ◆ 変異の導入にも最適です。 ◆ 目的以外の領域に変異は導入されません。 ◆ ハイスループット化にも対応します。 シングルミュー ダブルミュー テーション マーカー 変異なし テーション ◆ 配列が組み込まれたクローンの割合は 95% 以上です。 3 kb 操作方法概略 2,452 1 kb ベクターを線状化する。 100 bp アプリケーションの例 Any Linearized Vector 1 箇所に変異を入れる場合 プライマーのデザイン 変異部位 ベクター PCR 産物，線状化ベクター， Master mixture を混合する。 遺伝子工学関連製品 ベクターの挿入部位と相同な配列を 15 塩基付加したプライマーを使用 して，PCR により挿入配列を増幅 する。 Ⅰおよび HⅠ認識配列を 1 箇 767 538 所ずつ持つクローンに，シングルミュー 427 テーションで Ⅰ，ダブルミューテー 232 ションで Ⅰおよび HⅠ認識配 113 列を追加し，これらの制限酵素で処理し (faint) た。 500 bp ベクター 標的遺伝子 PCR による変異導入断片の増幅 20 bp オーバーラップ PCR の反応 A PCR の反応 B Cold Fu reac sion tion 室温で 5 分間，氷上で 10 分間インキュベー トする。 制限酵素処理によるベクターからの標的遺伝子の除去 ベクター ベクター 標的遺伝子 MetaMorph solution による変異導入配列断片 A，B とベクターの結合 ベクター 形質転換を行う。 ベクター コンピテントセルへの形質転換 2 箇所に変異を入れる場合 キット内容 プライマーのデザイン ● Master mixture ● Competent cell ベクター ● Linearized vector, positive control ベクター 標的遺伝子 PCR による変異導入断片の増幅 ● 500 bp PCR insert, positive control PCR の反応 A PCR の反応 C 品 名 メーカー 商品コード Cold Fusion Cloning Kit SBI MC010A-1 −80℃ B SBI MC100A-1 −80℃ B SBI MC101A-1 −80℃ B 包装 / 価格（￥） 10 reactions 20 reactions 50 reactions 1 kit / 31,000 1 kit / 56,000 1 kit / 128,000 PCR の反応 B ※以降は上記 1 箇所変異の場合と同様です。 ● High fidelity DNA polymerase ● MetaMorph solution ● Control primer 1 ∼ 6 ● Competent cell ● Control plasmid ● PCR buffer ● dNTP mix ※ キットには PCR 断片の精製やゲルからの抽出に必要な試薬は含まれ ていません。また，プライマーは別途作製する必要があります。 品 名 メーカー 商品コード Mutagenesis Kit, MetaMorph (10 reactions) SBI MC200A-1 −80℃ B 包装 / 価格（￥） 1 kit / System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P35-38_k.indd 35 64,000 掲載されている製品はすべて研究用です。 キット内容 35 2011/09/07 16:00:08 細胞小器官用レポーターベクター ペルオキシソーム #CYTO113-PA-1 #CYTO105-PA-1 Cyto-Tracer 細胞内小器官または構造の可視化に最適な，GFP（または RFP）融合性のトレーサータンパク質を発現するベクターです。 各細胞内器官または構成要素に特異的に局在させるためのシグ ナルペプチドを GFP（または RFP）Luciferase 融合タンパ ク質として発現させます。化学染色を必要とせず，蛍光顕微鏡 によるリアルタイムな観察が可能です。 核 #CYTO108-PA-1 ゴルジ小胞 微小管 #CYTO111-PA-1 チューブリン #CYTO112-PA-1 #CYTO118-PA-1 #CYTO119-PA-1 細胞質（Green） 特 長 原形質膜 細胞質（Red） #CYTO100-PA-1 遺伝子工学関連製品 本製品を用いて得られた細胞解析像 ◆ 標的となる細胞小器官を正確に標識することができ，蛍光は長期間 維持されるため，局在性／共局在性解析や動態解析に適しています。 ◆ MSCV（Murine Stem Cell Virus）プロモーター型ベクターは幹 細胞および造血細胞に，CMV（Cytomegalovirus）プロモーター 型ベクターはその他の一般的な株化細胞に適しています。 ◆ トランスフェクションやウイルスへのパッケージングにも使用可能 ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 ＊1 印の製品のご購入時にはご使用者確認書が必要です。詳細は， 最終ページをご覧下さい。 なため，初代培養細胞，癌細胞，幹細胞などを用いてより安定的な 発現細胞株を構築することもできます。 ［メーカー：SBI］ 商品コード 包装 / 価格（￥） 品 名 標的器官または 部位 融合タグの種類 蛍光タグ の種類 ウイルス粒子＊ 1 −80℃ M プラスミド CMV プロモーター MSCV プロモーター CMV プロモーター MSCV プロモーター pCT-Mem-GFP 原形質膜 Neuromodulin GFP CYTO100-PA-1 10 μg / 89,000 CYTO100-PB-1 10 μg / 89,000 CYTO100-VA-1 1 vial / 103,000 CYTO100-VB-1 1 vial / 103,000 pCT-InnerMem-GFP 細胞膜内葉 Farnesylation signal GFP CYTO101-PA-1 10 μg / 89,000 CYTO101-PB-1 10 μg / 89,000 CYTO101-VA-1 1 vial / 103,000 CYTO101-VB-1 1 vial / 103,000 pCT-Mito-GFP ミトコンドリア Cytochrome C oxidase Ⅷ (COX8) GFP CYTO102-PA-1 10 μg / 89,000 CYTO102-PB-1 10 μg / 89,000 CYTO102-VA-1 1 vial / 103,000 CYTO102-VB-1 1 vial / 103,000 GFP CYTO103-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO103-VA-1 1 vial / 103,000 − 小胞体 ER targeting consensus RFP CYTO103R-PA-1 10 μg / 93,000 − CYTO103R-VA-1 1 vial / 109,000 − GFP CYTO104-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO104-VA-1 1 vial / 103,000 − RFP CYTO104R-PA-1 10 μg / 93,000 − CYTO104R-VA-1 1 vial / 109,000 − pCT-ER-GFP pCT-ER-RFP pCT-Golgi-GFP ゴルジ体 Galactosyltrasferase pCT-Golgi-RFP pCT-Secretory-GFP ゴルジ小胞 Secretory consensus peptide GFP CYTO105-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO105-VA-1 1 vial / 103,000 − pCT-Lyso-GFP リソソーム Cathepsin B GFP CYTO106-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO106-VA-1 1 vial / 103,000 − GFP CYTO107-VA-1 1 vial / 103,000 − RhoB CYTO107-PA-1 10 μg / 89,000 − エンドソーム RFP CYTO107R-PA-1 10 μg / 93,000 − CYTO107R-VA-1 1 vial / 109,000 − GFP CYTO108-PA-1 10 μg / 89,000 CYTO108-PB-1 10 μg / 89,000 CYTO108-VA-1 1 vial / 103,000 CYTO108-VB-1 1 vial / 103,000 GFP CYTO109-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO109-VA-1 1 vial / 103,000 − RFP CYTO109R-PA-1 10 μg / 93,000 − CYTO109R-VA-1 1 vial / 109,000 − GFP CYTO110-PA-1 10 μg / 89,000 CYTO110-PB-1 10 μg / 89,000 CYTO110-VA-1 1 vial / 103,000 CYTO110-VB-1 1 vial / 103,000 GFP CYTO111-PA-1 10 μg / 89,000 CYTO111-PB-1 10 μg / 89,000 CYTO111-VA-1 1 vial / 103,000 CYTO111-VB-1 1 vial / 103,000 RFP CYTO111R-PA-1 10 μg / 93,000 − CYTO111R-VA-1 1 vial / 109,000 − GFP CYTO112-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO112-VA-1 1 vial / 103,000 − pCT-Endo-GFP pCT-Endo-RFP 掲載されている製品はすべて研究用です。 pCT-Pero-GFP ペルオキシソーム Peroxisomal consensus signal オートファゴソーム LC3 pCT-Autophago-GFP pCT-Autophago-RFP pCT-Actin-GFP 細胞骨格 β -Actin 細胞骨格 α -Tublin pCT-Tubulin-GFP pCT-Tubulin-RFP pCT-MAP4-GFP 36 微小管 Microtubule associated protein 4 (MAP4) System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P35-38_k.indd 36 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 16:00:13 ［メーカー：SBI］ 商品コード 包装 / 価格（￥） 品 名 標的器官または 部位 融合タグの種類 蛍光タグ の種類 ウイルス粒子＊ 1 −80℃ M プラスミド CMV プロモーター MSCV プロモーター CMV プロモーター MSCV プロモーター 核 H2B GFP CYTO113-PA-1 10 μg / 89,000 CYTO113-PB-1 10 μg / 89,000 CYTO113-VA-1 1 vial / 103,000 CYTO113-VB-1 1 vial / 103,000 pCT-Apoptosis-Luc カスパーゼ 3/7 活性 Cyclic inactive luciferase GFP CYTO114-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO114-VA-1 1 vial / 103,000 − pCT-GFP-BAX 細胞質から ミトコンドリア BAX GFP CYTO115-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO115-VA-1 1 vial / 103,000 − pCT-Catenin-GFP 細胞質から核／ 細胞膜 β -Catenin activation GFP CYTO116-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO116-VA-1 1 vial / 103,000 − pCT-CMV-PSD95-GFP 樹状突起膜 （神経細胞） PSD-95 GFP CYTO117-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO117-VA-1 1 vial / 103,000 − GFP CYTO118-PA-1 10 μg / 89,000 CYTO118-PB-1 10 μg / 89,000 CYTO118-VA-1 1 vial / 103,000 CYTO118-VB-1 1 vial / 103,000 RFP CYTO119-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO119-VA-1 1 vial / 103,000 − GFP CYTO122-PA-1 10 μg / 93,000 − CYTO122-VA-1 1 vial / 108,000 − RFP CYTO123-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO123-VA-1 1 vial / 108,000 − GFP CYTO120-PA-1 10 μg / 89,000 − CYTO120-VA-1 1 vial / 103,000 − RFP CYTO120R-PA-1 10 μg / 93,000 − CYTO120R-VA-1 1 vial / 109,000 − GFP CYTO124-PA-1 10 μg / 93,000 − CYTO124-VA-1 1 vial / 108,000 − RFP CYTO125-PA-1 10 μg / 93,000 − CYTO125-VA-1 1 vial / 108,000 − GFP およびルシフェ GFP and Luciferase, ラーゼのコントロール Untagged GFP − CYTO121-PB-1 10 μg / 89,000 − CYTO121-VB-1 1 vial / 103,000 GFP の C 末端側に 融合 GFP CYTO800PA-1 10 μg / 93,000 − − − GFP の N 末端側に 融合 GFP CYTO801PA-1 10 μg / 93,000 − − − 細胞質構成成分 Untagged pCT-Cyto-RFP pCT-CD9-GFP pCT-CD9-RFP pCT-CD63-GFP pCT-CD63-RFP pCT-CD81-GFP pCT-CD81-RFP pCT-Cyto-GFpLuc エキソソーム／ 分泌腺（分泌小胞） エキソソーム／ 分泌腺（分泌小胞） エキソソーム／ 分泌腺（分泌小胞） pCT-CMV-GFP-MCS-EF1-Puro 自作用 pCT-CMV-MCS-GFP-EF1-Puro CD9 tetraspanin CD63 tetraspanin CD81 tetraspanin Full Spectrum Full Spectrum Complete Transcriptome RNA Amplification Kit M 少ないサイクル数の PCR で，mRNA のすべての領域から 均一に cDNA を合成できるキットです。一本鎖 cDNA の合成 にユニバーサルプライマーを使用することで，mRNA 上の多 数の領域から合成が開始され，試料 mRNA の相対的な量比を 維持した均一な cDNA 増幅を行うことができます。 5' Standard Oligo-dT/T7 Primed Methods AAAAAAAAAAA 3' TTTTTTT T7 AAAAAAAAAAA 3' TTTTTTT 5' T7 Full Spectrum MultiStart Method ◆ 分解の進んだ RNA 試料からも，cDNA を合成できます。 ◆ ホルマリン固定−パラフィン包埋試料からの増幅にも最適です。 ◆ mRNA 全体から均一に増幅するため，偏りのない cDNA が得られ ます。 ◆ 試料中に含まれる mRNA の相対量を正確に反映した結果が得られま す。 ◆ スプライシングバリアントの解析にも特に有用です。 TFR 5' Mid. 3' 他社製品 PLA 5' 3' M M TFR 5' Mid. 3' PLA 5' 3' M 本製品（左）および他社製品（右）を使用して未分解（上段）または部分的に分解の進ん だ mRNA より cDNA を合成し， transferrin（TFR）および phospholipase A1（PLA） 遺伝子の各領域に特異的なプライマーを使用して PCR を行った。本製品で合成した cDNA は，すべての領域で増幅が見られる。 キット内容 ● Universal primer mixture ● Reverse transcriptase ● Full Spectrum PCR primer ● Reverse transcriptase buffer ● Control RNA ● RNase-free water ● dNTP mix ● Dithiothreitol ● PCR polymerase ● PCR buffer 品 名 メーカー 商品コード 包装 / 価格（￥） Complete Transcriptome RNA Amplification Kit, Full Spectrum (10 reactions) SBI RA101A-1 1 kit / 75,000 ■ Full Spectrum MultiStart Primers for T7 IVT RNA Amplification T7 プロモーター配列が付加された，ユニバーサルプライマーおよび oligo-dT プライマーの混合物です。お手持ちのマイクロアレイ T7 IVT RNA 増幅キットによる RNA 増幅時に，キット付属のプライマーの代 わりに使用することで，より均一な転写産物集団を得ることができます。 MultiStart Primers for T7 IVT, Full Spectrum SBI RA300A-2 40 tests / 37,000 掲載されている製品はすべて研究用です。 特 長 β-actin mRNA のすべての領域から均一に cDNA を合成できるキット β-actin pCT-Cyto-GFP 遺伝子工学関連製品 pCT-H2B-GFP ◆ polyA tail を持たないウイルス RNA の増幅も可能です。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P35-38_k.indd 37 37 2011/09/07 16:00:18 3 時間以内で高感度にマイコプラズマを検出するキット マーカー Neg 1 2 5 102 103 104 105 106 107 108 109 10 MycoQuick Mycoplasma Detection Kit PCR およびゲル電気泳動により 3 時間以内で高感度に，細 胞ライセート中のマイコプラズマを検出できるキットです。 特 長 Neg：ネガティブコントロール それぞれのコピー数のマイコプラズマゲノム DNA を用いて検出を行った。検出感度が非 常に高いことがわかる。 キット内容 ◆ 検出感度が高く，10 ∼ 100 コピーのマイコプラズマ遺伝子を検出 できます。 ● 96-well plate with mycoplasma primers and UCE primers ＊ ● Cell lysis buffer ◆ 幅広いマイコプラズマとその類縁菌などの検出ができます。マイコ プラズマおよびアコレプラズマの中で最も一般的な 5 種であり，組 織培養における感染の 98％を占めるとされている，M. Hyorhinis ， M. Arginini ，M. Orale ，M. Fermentans ，A. Laidlawii の ほ か， ＊プレートの最終列（H 列，12 ウェル分）には，ポジティブコントロー ル用 DNA がコートされています。 ※ DNA ポリメラーゼは含まれていません。 品 名 Acholeplasma 属，Ureaplasma 属および Spiroplasma 属の検出が可 メーカー 商品コード 能です。 Mycoplasma Detection Kit, MycoQuick (96 reactions) SBI MQ100A-1 ◆ 操作が簡便です。96 ウェルプレートには，各ウェルの底にあらかじ 包装 / 価格（￥） 1 kit / 75,000 めマイコプラズマゲノム DNA 検出用プライマー，および PCR 操作 遺伝子工学関連製品 の成否確認用プライマー（UCE プライマー）がコートされています。 また，プレートの最終列（12 ウェル分）には，プライマーのほかに ポジティブコントロール用テンプレート DNA がコートされていま す。 ◆ 96 ウェルプレートは，必要な試料数に応じて切り離して使用できま す。 操作方法概略 簡便なレトロウイルス濃縮試薬 Retro-Concentin Virus Precipitation Solution レトロウイルスを簡単に濃縮できる試薬です。レトロウイル スへダメージを与えるような超遠心や複雑な手順を使用せず に，低速度の遠心を用いたシンプルな操作で，培養液から直接 ペレット化できます。 付着細胞の場合 1. 細胞培養上清を吸引し，DPBS で 2 回洗う。 特 長 2. Cell lysis buffer を加える。 ◆ 毒性がなく，本製品により濃縮したウイルスを導入した細胞は標準 3. 5 分間溶解し，細胞ライセートを回収する。 的な形態を示します。 4. 細胞ライセートを 95℃で 5 分間煮沸し，遠心する。 5. 上清を回収し，PCR のテンプレートとする。 ◆ iPS 細胞作製のための高力価ウイルスの調製にも最適です。 6. PCR，電気泳動を行い判定する。 ◆ 低速度（1,500 × g）の遠心分離で濃縮できます。 ◆ スケールアップが容易です。 ◆ 凍結保存におけるウイルスの安定化にも適しています。 浮遊細胞の場合 1. 1 ∼ 1.5 ml の細胞培養液を回収する。 2. 13,000 rpm で 5 分間遠心をする。 3. 上清を捨て，ペレットを DPBS で洗う。 4. Cell lysis buffer を加え，5 分間溶解する。 5. 細胞ライセートを 95℃で 5 分間煮沸し，遠心する。 6. 上清を回収し，PCR のテンプレートとする。 7. PCR，電気泳動を行い判定する。 ヒト包皮由来線維芽細胞 実 験 例 マーカー L1 M1 L2 M2 L3 M3 − HEK293 細胞 本製品を用いて濃縮した GFP 発現用レトロウイルスの導入実験を行った。初代培養細胞 （左）および細胞株（右），いずれにおいても毒性を示さず効率的に導入されている。 ＋ L ：付着細胞 M：浮遊細胞 操作方法概略 掲載されている製品はすべて研究用です。 280 bp 205 bp マイコプラズマ DNA の増幅産物が 280 bp，PCR 操作の成否確認用プライマー（UCE プライマー）の増幅産物が 205 bp のサイズとなる。 付着細胞（L1）と浮遊細胞（M1）試料において，マイコプラズマゲノム DNA のバンド が検出された。試料 L2，L3，M2，および M3 はマイコプラズマ陰性のため，205 bp の位置にのみバンドが検出された。＋，−はそれぞれ PCR のポジティブとネガティブコ ントロール。 レトロウイルス粒子を含 む培養上清に本製品を加 え，4℃でインキュベート する。 4℃，1,500 × g で 30 分間遠心する。 濃縮されたウイルスが 沈殿する。 品 名 メーカー 商品コード Virus Precipitation Solution, 5×, Retro-Concentin SBI RV100A-1 38 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P35-38_k.indd 38 包装 / 価格（￥） 100 ml / 48,000 品名，メーカー，商品コード，包装でご注文下さい 2011/09/07 16:00:21 受託サービス ■ shRNA 発現の場合 shRNA 配列は H1 プロモーターにより発現されます。マーカー 遺伝子および，そのプロモーターを選択できます。選択できるマー レンチウイルス関連受託サービス レンチウイルスベクター関連製品のリーディングカンパニー である System Biosciences 社では，レンチウイルスに関す る各種受託サービスを承っています。 カー遺伝子およびプロモーターの種類は，左記 cDNA 発現の場合 の項をご覧下さい。 RSV 5' LTR Ψ AmpR プロモーターの 選択 cPPT System Biosciences 社レンチウイルス ベクターの安全性について pSIH1-H1/ pSIF-H1 shRNA Vectors ・3'⊿LTR の U3 領域のエンハンサーを欠損させているため，標的細胞 への形質転換・ゲノム DNA への組み込み後に，偽ウイルス粒子は自 己不活性化します。 ・パッケージング，複製，形質転換に必要なレンチウイルス由来遺伝子 の数を 3 種類（ ）にまで減らし，それらのタンパク質は， packaging signal を欠損したそれぞれ異なる plasmid から発現しま す（HIV ベース packaging plasmid の場合）。またこれらのタンパク 質の発現ベクターは，レンチベクター，pVSV-G 発現ベクターを始め とするベクターと有意な相同配列を持たず，相同組換えによって自己 複製能を有するウイルスが産生することを防いでいます。 EcoRⅠ SV40 ORI rk e r pUC ORI BamHⅠ a M SV40 poly-A 3'ΔLTR H1 WPRE マーカー遺伝子の選択 +1 siRNA template insert H1 promoter sense loop antisense terminator 転写 sense UU shRNA antisense による切断 sense ■ レンチウイルス発現ベクタークローニング受託サービス UU 目的配列をレンチウイルス発現ベクターにクローニングする受託サー antisense UU siRNA ビスです。System Biosciences 社の有する幅広いレンチウイルス発 現ベクターのラインナップから，最適なベクターを選択することができ ます。 目的配列の種類：cDNA，shRNA，miRNA，アンチセンス miRNA， 転写応答配列 ベクターの選択項目：プロモーター，マーカー遺伝子，ベースとなるウ イルスの種類 など ■ miRNA，アンチセンス miRNA，転写応答配列発現の 場合 System Biosciences 社 で は， レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー に miRNA，アンチセンス miRNA，転写応答配列を組み込んだコレ クションをそれぞれ多数取りそろえています。ご希望の配列を発現 するベクターがカタログ製品として発売されていない場合，カスタ ム製品として作製いたします。製品の詳細は，それぞれ下記をご覧 下さい。 ■ cDNA 発現の場合 シングルおよびデュアルプロモーターのベクターを選択できま 目的配列の種類 す。シングルプロモーターの場合，マーカー遺伝子は T2A または miRNA IRES により発現します。 それぞれのベクターにおいて，プロモーター，マーカー遺伝子を アンチセンス miRNA 選択できます。 転写応答配列 シングルプロモーター 製品名 Lentivector-Based MicroRNA Precursor Construct miRZip Lentivector-Based Anti-microRNA Construct pGreenFire Transcriptional Reporter Lentivector 参照 p.28 p.30 p.19 Amp ■ 組換え体ウイルス粒子作製受託サービス Ψ 高品質かつ高力価の組換え体ウイルス粒子を作製する受託サービスで プロモーターの 選択 pCDH-MCS T2A or IRES pUC ORI す。 cPPT ◆ 第 2，第 3 世代 HIV ベースおよび，FIV ベースのレンチウイルス発 MCS SV40 ORI e rk Ma SV40 poly-A 3'ΔLTR r 現ベクターに対応しています。 T2A or IRES 受託サービス RSV 5' LTR R ◆ ご希望に応じて 3 種類の力価から選択することができます（下表参 WPRE マーカー遺伝子の選択 照）。なお FIV ベースは Regular Titer のみとなります。 ◆ Ultra-High Titer は，in vivo での導入や，幹細胞への導入に有用です。 デュアルプロモーター ◆ パッケージングしたウイルス粒子は， 25 μl ずつ分注して 6 本以上 （合 RSV 5' LTR Amp 計 150 μl 以上）納品いたします。 Ψ R プロモーターの 選択 pCDH-Dual Promoter Series pUC ORI cPPT MCS SV40 ORI Mar 3'ΔLTR r ke マーカー遺伝子の選択 選択マーカー Puro Neo Hygro Zeo IFUs 1.5 × 106 15 × 106 150 × 106 ※ プラスミド DNA の米国への送料を別途申し受けます。 マーカー遺伝子の選択 プロモーター CMV EF1 α PGK UbC MSCV 力 価 ＞ 107 IFU/ml ＞ 108 IFU/ml ＞ 109 IFU/ml ＊ HIV ベースベクターのみ WPRE プロモーターの選択 商品コード CS960A-1 CS965A-1 CS970A-1 蛍光マーカー GFP RFP GFP ＋ Puro RFP ＋ Puro ■ カスタム shRNA ライブラリー構築受託サービス GeneNet siRNA Library（p.33 参照）をベースとして，ご希望の 遺伝子に対する shRNA 発現ベクターを混合したライブラリーを作製 する受託サービスです。ウイルス粒子，プラスミドのいずれの形態でも 承ります。 ※ 詳細は当社受託・特注品業務担当（最終ページ参照）までお問い合 わせ下さい。 System Biosciences 社製品カタログ 2011 ∼ 2012 SBIカタログ_P39.indd 39 掲載されている製品はすべて研究用です。 SV40 poly-A サービスの種類 Regular Titer（RT） ＊ High Titer（HT） Ultra-High Titer（UHT）＊ 39 2011/09/07 9:35:29 miRNA 研究用製品 System Biosciences 社では，miRNA 研究に有用な製品を幅広く取りそろえています。 エキソソームの濃縮用試薬 エキソソーム miRNA の 精製・cDNA 合成キット リアルタイム PCR による miRNA のプロファイリング ExoQuick Exosome Precipitation Solution (p.24) SeraMir Exosome RNA Amplification Kit (p.25) MicroRNA qPCR Array with QuantiMir (p.23) miRNA の過剰発現ベクター アンチセンス miRNA 発現ベクター mRNA と miRNA の 相互作用解析 Lentivector-Based MicroRNA Precursor Construct (p.28) miRZip Lentivector-Based Anti-microRNA Construct (p.30) miR-Selection 3' UTR Target Selection Kit (p.32) 上清 電子顕微鏡写真 エキソソームのペレット 3' UTR と miRNA の相互作用あり miRNA 前駆体 Drosha processing 5’ 3’ miRZip Anti-microRNA Dicer processing dsRNA（中間体） 5’ 3’ 3’ 5’ miR : miR＊ A r 細胞生存 miRZip による miRNA 抑制 3’ 5’ miR＊ 5’ Ctx drug 添加 ルシフェラーゼおよび Ctx の発現は抑制される 3’ 成熟 miRNA RISC 複合体 細胞内 miRNA 翻訳阻害／ mRNA 分解促進 ウイルスベクター関連製品ご購入時のご注意 ＊1 印の製品はウイルスベクター関連製品のため，購入時にご使用 者 確 認 書 が 必 要 で す。ご 注 文 の 際 は，フ ナ コ シ ホ ー ム ペ ー ジ （http://www. funakoshi.co.jp/download/）に掲載の「ウイルスベ クター関連製品ご使用者確認書」に必要事項をご記入の上，販売店担 当者にお渡し下さい。 なお，製品をご使用の際には「遺伝子組換え生物等の使用等の規制 による生物の多様性の確保に関する法律（カルタヘナ法） 」および所属 組織における安全管理規定に従い，しかるべき施設で実験を行って下 さい。詳細は文部科学省ライフサイエンス課のホームページをご覧下 さい。 http://www.lifescience.mext.go.jp/bioethics/anzen.html N OT E ※本カタログに記載されている価格は，2011 年 8 月 25 日現在です。 ※ご使用前には必ず製品添付のデータシートをご確認下さい。 ※本カタログに掲載されている製品は，すべて研究目的用にのみ販売しています。医薬品，診断用医 薬品，食品，食品検査等の用途には使用できません。 ※M印の製品は，「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律 （通称：カルタヘナ法）」使用規制対象となりますので，ご使用に際しては規制に則し，適切にお取 り扱い下さい。詳細は当社テクニカルサポート（試薬担当：下記参照）までお問い合わせ下さい。 ※BC印の製品は,「毒物及び劇物取締法」に基づく医薬用外毒劇物です。法規制に従って，保管，廃 棄等して下さい。 ※E印は，液体窒素中での保存を要する製品です。ドライアイス包装で配送していますが，製品到 着後，直ちに液体窒素中で保存して下さい。 ※−80 ℃ 印は，−80 ℃ での保存を要する製品です。ドライアイス包装で配送していますが，製品 到着後，直ちに−80 ℃ のフリーザー等に保存して下さい。 ※本文中の“#”以下の英数字は商品コードを示しています。 ※外観・仕様は改善のため，予告なく変更することがあります。 ※記載されている会社および商品名は，System Biosciences 社の商標または登録商標です。 ※本紙には System Biosciences 社から提供された画像・図表が掲載されています。なお，画像・ 図表の著作権は System Biosciences 社が保有しています。 ® ※SYBR は Life Technologies 社の登録商標です。 ※GeneChip は Affymetrix 社の登録商標です。 ※ライフサイエンス関連分野における PCR 用酵素および PCR 用酵素を含む製品や TaqMan などの 検出用プローブは，Life Technologies 社が特許を有しています。使用に当たっては同社の許可が 必要な場合があります。 ※表示価格に，消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので， あらかじめご了承下さい。 ※ご注文の際は，［品名，メーカー（SBI） ，商品コード，包装，数量］をお知らせ下さい。 フナコシのライフサイエンス研究用試薬と機器 日本総代理店 販売店 印刷用の紙にリサイ クルできます 不要となった際は， 古紙回収・リサイク ルに出してください SBIカタログ_P40_i.indd 40 〒113-0033 東京都文京区本郷2丁目9番7号 http://www.funakoshi.co.jp/ e-mail : info＠funakoshi.co.jp 試薬に関して : Tel.03-5684-1620 Fax 03-5684-1775 e-mail : reagent＠funakoshi.co.jp 受託・特注品 : Tel.03-5684-1645 Fax 03-5684-6539 e-mail : jutaku＠funakoshi.co.jp 機器に関して : Tel.03-5684-1619 Fax 03-5684-5643 e-mail : kiki＠funakoshi.co.jp ZB-U09T-05 (2011.09) 2011/09/07 9:35:50