No.C82 トリプル四重極型LC/MS/MSを用いた 杜仲茶中のゲニポシド酸

LAAN-A-LM054
C82
No.
トリプル四重極型LC/MS/MSを用いた
杜仲茶中のゲニポシド酸とクロロゲン酸の分析
Analysis of Geniposidic Acid and Chlorogenic Acid in Tochu Tea Using Triple
Quadrupole LC/MS/MS [LCMS-8030]
トチュウ（Eucommia ulmoides）の葉で作る杜仲茶は，五
ゲニポシド酸，クロロゲン酸（trans体）
標準品のMS/MS
大漢方薬の一つとして親しまれてきました。杜仲茶にはイリ
スペクトルをFig. 1に示します。エレクトロスプレーイオン化
ノイド類であるゲニポシド酸やクロロゲン酸（3-カフェオイル
法（ESI法）の負イオンモードで，各々プロトン脱離イオン
- m/z 373と353をプリカーサーイオンとしました。
［M-H］
キナ酸）
が豊富に含まれており，特にゲニポシド酸には血圧
降下作用が認められています。近年，これら植物抽出液中
MRM（Multiple Reaction Monitoring）
による定量分析で
のポリフェノール類の分析には，LC/MSが利用されていま
は，プロダクトイオンとしてゲニポシド酸はm/z 123を，クロ
す。今回は，トリプル四重極型質量分析計による杜仲茶中
ロゲン酸はm/z 191をモニターしました。Fig. 2には，標準
のゲニポシド酸，クロロゲン酸の分析をご紹介します。
品のMRMクロマトグラムとMRMの各種パラメータを表に示
しました。
M. Kobayashi
5.0
4.0
Inten.(×10,000)
m/z 211
O
3.0
1.0
0.0
211 HO
89
71
50
OH
179
193
113
100
150
250
C16H22O10
Exact Mass: 374.12
Mol. Wt.: 374.34
300
m/z
191
[M-H-caffeic acid] -
3.0
OH Geniposidic acid
[M-H-Glc]-
200
4.0
O
167
B
コリジョンエネルギー 20 V
5.0
OH
O
HO
2.0
Inten.(×100,000)
COOH
A
149
コリジョンエネルギー 25 V 123
2.0
HO
O
OH
O
HO
OH
m/z 191
1.0
0.0
50
100
150
200
250
Fig. 1　標準品のMS/MSスペクトル（A：ゲニポシド酸，B：クロロゲン酸）
MS/MS Spectra of the Standard Solution (A: Geniposidic Acid, B: Chlorogenic Acid)
(×100)
3.00
(×1,000)
5.0
373.00>123.30(-)
2.75
353.00>191.20(-)
4.5
2.50
4.0
2.25
100 ppb
1.75
100 ppb
3.5
2.00
3.0
Geniposidic acid
1.50
Chlorogenic acid
2.5
50 ppb
1.25
50 ppb
2.0
1.00
1.5
0.75
1.0
0.50
0.5
0.25
10 ppb
0.00
0.0
1.0
2.0
Compound
Polarity
ゲニポシド酸
クロロゲン酸
-
3.0
4.0
0.0
min
Transition
(m/z)
373.0>123.3
353.0>191.2
10 ppb
5.0
Q1 Pre Bias
(V)
13
12
7.5
10.0
CE
(V)
25
20
12.5
min
Q3 Pre Bias
(V)
13
21
Fig. 2　標準混合溶液のMRM クロマトグラムとMRM モードパラメータ
MRM Chromatograms of the Standard Solution and List of MRM Mode Parameter
OH
O
OH
Chlorogenic acid
C16H18O9
Exact Mass: 354.10
Mol. Wt.: 354.31
300
m/z
No.C82
Fig. 3には，ゲニポシド酸とクロロゲン酸の検量線を示します。検量線はダイナミックレンジも広く，直線性は良好で，両成
分ともに寄与率0.999以上でした（n=5）
。
面積
面積
Geniposidic acid
200000
2500000
5-10000 ppb
175000
5-5000 ppb
2250000
2000000
150000
1750000
125000
1500000
100000
1250000
75000
1000000
750000
50000
25000
0
Chlorogenic acid
2750000
500000
R2=0.9993038
0
2500
5000
7500
R2=0.9997826
250000
0
濃度
0
1000 2000
3000
4000
濃度
Fig. 3　ゲニポシド酸とクロロゲン酸の検量線（n=5）
Calibration Curves (n=5)
次に杜仲茶の分析例をご紹介します。杜仲茶は杜仲の葉
きな夾 雑 成 分 の 影 響もなく分析 することができました。
20 gを300 mLの熱湯で10分間抽出する操作を3回繰り返
1000倍希釈の杜仲茶中にゲニポシド酸とクロロゲン酸は約
し，水で1 Lになるように定容したものです。その杜仲茶を
600～700 ppb含まれていました。よって，希釈前の杜仲茶
水で1000倍に希釈後，0.2 μmのフィルターでろ過したもの
には約600～700 ppmのゲニポシド酸とクロロゲン酸が含ま
をLC/MS/MS分析しました。Fig. 4に，杜仲茶中のゲニポ
れていたことになります。
1500
1250
1000
30000
Geniposidic acid/3.451
2000 373.00>123.30(-)
A
1750
27500
353.00>191.20(-)
B
25000
22500
20000
17500
15000
Chlorogenic acid/7.622
シド酸とクロロゲン酸のMRMクロマトグラムを示します。大
12500
750
10000
7500
500
5000
250
2500
0
0
2.0
3.0
4.0
min
6.0
7.0
8.0
9.0 min
Fig. 4　杜仲茶中のゲニポシド酸（A）とクロロゲン酸（B）のMRMクロマトグラム
MRM Chromatograms of Geniposidic Acid (A) and Chlorogenic Acid (B) in Tochu Tea
Table 1　分析条件
Analytical Conditions
Column
Mobile Phase A
Mobile Phase B
Time Program
Flow Rate
Injection Volume
Probe Voltage
DL Temperature
DL Voltage/Q-array Voltage
: Shim-pack VP-ODS (150 mmL. × 2.0 mmI.D., 5 μm)
: 0.1 % Formic acid-water
: Acetonitrile with 0.1 % formic acid
: 10 %B (0 min) → 20 %B (10 min) → 10 %B (10.01-20 min)
: 0.2 mL/min
: 2 μL
: -3.5 kV (ESI-Negative mode)
: 300 °C
: Using default values
: 40 °C
Column Temperature
: 1.5 L/min
Nebulizing Gas Flow
Block Heater Temperature : 500 °C
: 20 L/min
Drying Gas Flow
2011年11月
島津コールセンター
0120-131691
TEL:075-813-1691
3100-09103-570-IK
2011.11