PDFを見る - 株式会社 REO研究所

各種耐性菌に対する
Bio Ozone
B
z n Nano
an Water
a ( BON
B
)
の殺菌効果
Moe Chou1, 伊藤輝代1, 平松啓一1,
○荒川真一2, 和泉雄一2, 眞野喜洋3
1順天堂大学
2東京医科歯科大学
3東京医科歯科大学
医学部 細菌学講座
歯学部附属病院 歯周病科
医学部附属病院 高気圧治療部
４オゾンナノバブル水協力
株式会社REO研究所
目的
的
各種耐性菌に対してのBio Ozone Nano
Water (BON)の殺菌効果を調べる．
材料と方法
細菌
‰Escherichia coli NIHJ JC2
‰Staphylococcus aureus N315 (MRSA)
‰Staphylococcus aureus: hetero VISA Mu3,
Mu3
VISA;Mu50, HIP PC, HIP NJ, HIP MI (MRSA)
‰Enterococcus faecalis NCTC12201, NCTC12203 (VRE)
‰Enterococcus faecium NCTC12202, NCTC12204 (VRE)
‰Pseudomonas aeruginosa JICC 3, 4, 5, 6 (MDRP)
Staphylococcus
p y
aureus
ATCC29213
N315
Mu3(hetero-VISA)
Mu50(VISA)
VISA HIP NJ
VISA HIP PC
VISA HIP MI
TEC VCM GM AMK CPFX LVFX
1
0.5 0.5
4
1
0.125
1
1
1
32
1
0.125
16
3
256 32
32 0.125
256
5
256 64
32
128
16
6
2
128
32
32
16
6
0.5
32
32
32
32
6
128 64
128
8
IPM
0.125
0.06
>256
32
8
2
16
CZX
2
2
>256
>256
>256
64
256
CEZ ABPC
1
0.5
128 16
>256 32
>256 16
128
8
128 16
>256 64
TC
1
0.25
16
32
0 25
0.25
0.25
0.25
EM
1
>256
>256
>256
>256
>256
>256
TEC,teicoplanin;VCM,
,
p
;
, vancomycin;
y ; GM,, ggentamicin;;
AMK, amikacin; CPFX, ciprofloxacin; LVFX, levofloxacin;
IPM,, imipenem;
pe e ; CZX,
C , ce
ceftizoxim;
o
; CEZ,
C , cefazolin;
ce o ; ABPC,
C, ampicillin;
pc
;
TC, tetracycline; EM, erythromycin
Enterococci
E.faecidis
f
E.faecium
E.faecalis
E.faecium
E.faecalis
E.faecium
ATCC 19433
ATCC 19434
NCTC 12201(VRE)
NCTC12202(VRE)
NCTC 12203(VRE)
NCTC 12204(VRE)
TEC
0.25
1
>256
128
>256
128
VCM GM AMK CPFX LVFX
1
32
256
1
2
1
32
128
16
32
>256 >256 >256
1
2
>256 16
64
4
8
>256 >256 >256
1
16
>256 32
64
4
8
IPM
1
4
4
64
1
64
CZX CEZ ABPC TC
EM
>256 128
1
0.5
2
>256 256
4
0.25
4
>256 128
2
32 >256
>256 >256 32
32 >256
>256 64
2
128 >256
>256 >256 32
32 >256
TEC,teicoplanin;VCM, vancomycin; GM, gentamicin;
AMK, amikacin; CPFX, ciprofloxacin; LVFX, levofloxacin;
IPM imipenem; CZX,
IPM,
CZX ceftizoxim; CEZ,
CEZ cefazolin; ABPC
ABPC, ampicillin;
TC, tetracycline; EM, erythromycin
Pseudomonas aeruginosa
TEC
VCM
GM
AMK
CPFX
LVFX
IPM
CZX
CEZ
ABPC
TC
EM
>256
>256
2
4
0.25
0.5
1
64
>256
>256
16
256
JICC3(MDRP)
>256
>256
>256
>256
64
128
128
>256
>256
>256
64
256
JICC4(MDRP)
>256
>256
>256
256
256
256
128
>256
>256
>256
64
256
JICC5(MDRP)
>256
>256
>256
>256
32
64
128
>256
>256
>256
64
256
JICC6(MDRP)
>256
>256
>256
128
32
64
128
>256
>256
>256
64
256
PAO1
32μg/ml 4μg/ml
16μg/ml
TEC,teicoplanin;VCM,
TEC
teicoplanin;VCM vancomycin; GM
GM, gentamicin;
AMK, amikacin; CPFX, ciprofloxacin; LVFX, levofloxacin;
IPM imipenem; CZX,
IPM,
CZX cefti
ceftizoxim;
o im; CEZ
CEZ, cefa
cefazolin;
olin; ABPC
ABPC, ampicillin;
TC, tetracycline; EM, erythromycin
殺菌効果の判定
1. 細菌のコロニーを生理的食塩水に懸濁
2 懸濁度を OD
2.
O 578 = 0.3に調製
0 3に調製
3. 2の懸濁液を 1/100,, 1/104, and 1/105に希釈
4. 50μl の 細菌懸濁液を培地に播種（コントロール）
5. 2の懸濁液を
の懸濁液を 1/20に希釈
に希釈
6-1. 5の懸濁液 0.1ml を0.9ml の
BONに加える
(最終
最終 BON 濃度:
濃度 90%)
(5x105/ml: S. aureus:based on the standard of CLSI )
6-2. . 5の懸濁液 0.1ml を0.9ml の蒸留水
または培地（HIB）で希釈したBONに
加える
(最終 BON 濃度: 40, 60, 80 %)
77．1,
1 5,
5 15，30
15 30 分間インキュベ
分間インキュベート
ト
8. 100μl を培地に播種
9 37oC 一晩培養
9.
晩培養
10. プレート上のコロニー数を計測
結果
Escherichia coli NIHJ JC2
Num. of bacteria
1000000
100000
10000
1000
BON
DDW
100
10
1
0.1
BON final 90%
0
5
15
Time (minutes)
Staphylococcus aureus N315
Num. of bacteria
1000000
100000
10000
1000
BON
DDW
100
10
1
0.1
BON final 90%
0
1
5
15
Time (minutes)
Multi-drug resistant Staphylococcus aureus
Num. of bacteria
1000000
100000
Mu3 in BON
Mu50 in BON
VISA HIP PC in BON
VISA HIP NJ in BON
VISA HIP MI in BON
Mu3 in DDW
Mu50 in DDW
VISA HIP PC in DDW
VISA HIP NJ in DDW
VISA HIP MI in DDW
10000
1000
100
10
1
BON final 90%
0.1
0
15
30
Time (minutes)
VCM resistant Enterococcus faecalis and
Enterococcus faecium
Num. of bacteria
1000000
100000
12201in
1124
12202in
1125
1126
12203in
12204in
1127
12201in
1124
12202in
1125
i
12203in
1126
11204in
1127
10000
1000
100
10
BON
BON
BON
BON
DDW
DDW
DDW
DDW
1
BON final 90%
0.1
0
15
30
Time (minutes)
Multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa
Num. of bacteria
1000000
100000
#3JICC3
in BON
#4JICC4
in BON
BON
#5JICC5
in BON
#6JICC6
in BON
#3JICC3
in DDW
#4JICC4
in DDW DW
#5JICC5
in DDW
#6JICC6
in DDW
10000
1000
100
10
1
BON final 90%
01
0.1
0
15
30
Time (minutes)
Effects of medium to bactericidal activity of BON
(E h i hi coli
(Escherichia
li NIHJ JC2)
Num. of bacteria
1000000
100000
0.1mlE.coli +0.1mlDDW+0.8mlBON
10000
0.1mlE.coli +0.3mlDDW+0.6mlBON
1000
0.1mlE.coli +0.5mlDDW+0.4mlBON
0.1mlE.coli +0.1mlHIB+0.8mlBON
100
0.1mlE.coli +0.3mlHIB+0.6mlBON
10
0.1mlE.coli +0.5mlHIB+0.4mlBON
1
BON final 40%
BON final 60%
0.1
0
15
30
BON final 80%
Time (minutes)
Effects of medium to bactericidal activity of BON
(Staphylococcus aureus N315)
Num. of bacteria
1000000
0.1mlS.aureus
+0.1mlDDW+0.8mlBON
0 1mlS aureus
0.1mlS.aureus
+0.3mlDDW+0.6mlBON
0.1mlS.aureus
+0.5mlDDW+0.4mlBON
0 1 lS
0.1mlS.aureus
+0.1mlHIB+0.8mlBON
0.1mlS.aureus
+0.3mlHIB+0.6mlBON
0.1mlS.aureus
+0.5mlHIB+0.4mlBON
100000
10000
1000
100
10
1
BON final 40%
01
0.1
0
BON final 60%
15
30
BON final 80%
Time (minutes)
結論
実験に供した耐性菌のすべては，BONに感受性
であった.
しかしながら BONを培地と混合すると上記の殺
しかしながら，BONを培地と混合すると上記の殺
菌効果は阻害されることが明らかとなった．
菌効果は阻害されることが明らかとなった